專利名稱：糖蛋白的甘露核心三糖、五糖的批量合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于有生物活性的寡糖的制備領(lǐng)域，特別是涉及能用于藥物篩選的寡糖的合成方法。
與天冬酰胺連接的寡糖鏈簡稱N-糖鏈，它通常具有一個含7-9個甘露糖基的甘露寡糖，而這個甘露寡糖總含有一個3，6支化的甘露核心三糖或五糖，如下結(jié)構(gòu)式所示 N-糖鏈的結(jié)構(gòu)特征為包含有至少一個在甘露糖上3，6支化的寡糖二天線，此外，帶有5-9個甘露糖的高甘露糖型N-糖鏈?zhǔn)菑?fù)雜型N-糖鏈合成的前身，故腫瘤糖蛋白中高甘露糖型糖鏈的出現(xiàn)或增多是提示由于細(xì)胞惡性增殖、糖蛋白合成速度增加的需要而致糖鏈加工不完全、不成熟。合成甘露核心三糖、五糖是制備相關(guān)抗原或診斷試劑的基礎(chǔ)，是糖生物學(xué)研究必備的基本原料。另外，甘露核心三糖、五糖與CoA的結(jié)合可應(yīng)用于該蛋白的分離提純，具有潛在的工業(yè)應(yīng)用前景。
本發(fā)明的目的在于將上述甘露核心三糖、五糖用簡明的方法合成，以1，2-乙叉基-4，6-O-芐叉基-β-D-甘露糖苷為受體，以甘露糖三氯乙酰亞胺酯為糖基供體，以路易斯酸為催化劑，簡易合成甘露三糖、四糖、五糖。此方法適于批量制備。
本發(fā)明的合成方法在于
由1，2-O-乙叉基-β-D-甘露糖(1)與苯甲醛、原甲酸三乙酯在對甲苯磺酸存在下反應(yīng)得到1，2-O-乙叉基-4，6-O-卞叉基-β-D-甘露糖(2)，將2作為受體與全苯甲?；娜纫阴啺孵?在TMSOTf催化下偶聯(lián)，高產(chǎn)率地得到雙糖4，在弱酸性條件下水解掉4的卞叉基，1，2位的乙叉基不受影響，得到的雙糖5含4，6位兩個羥基，作為受體再次與供體3偶聯(lián)，選擇性地得到在6位連接的三糖6。將6的保護(hù)基用通常的方法脫除，即得到甘露核心三糖8′。用90％三氟乙酸水解掉6的乙叉基、在吡啶中用乙酸酐乙酰化、用甲醇-氨溶液(1M)選擇性地水解掉1位的乙?；⒃谔妓徕洿嬖谙屡c三氯乙睛反應(yīng)得到三糖供體10。使10與雙糖受體5偶聯(lián)，得到所需的五糖11，11可脫除保護(hù)基得到甘露核心五糖13′。11也可再進(jìn)行其它的反應(yīng)。五糖異構(gòu)體也可用此方法方便地制備，即使三糖供體10與單糖受體2偶聯(lián)，得到四糖14，水解掉14的卞叉基，再與供體3偶聯(lián)，就得到了此五糖16，16可方便地轉(zhuǎn)化為18，18脫除?；蠹吹玫礁事逗诵奈逄堑漠悩?gòu)體18′。甘露四糖用同樣的方法制備，例如四糖20的制備，即用雙糖供體19代替單糖供體3與雙糖受體5偶聯(lián)來完成，脫除保護(hù)后即得到甘露四糖20′。。 α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯的糖基供體19由甘露糖原酸酯21縮合，得到α1→2連接的甘露雙糖22，脫掉烯丙基后再用三氯乙睛活化1位即得到19。 Bz＝苯甲?；?，Ac＝乙酰基 All＝烯丙基所述的縮合反應(yīng)需用有機(jī)溶劑鹵代烷烴，醚或酰胺類做溶劑，需用路易斯酸做催化劑。所用的有機(jī)溶劑最好是二氯甲烷，所用的路易斯酸最好是三甲基硅三氟甲磺酸酯或三氟化硼。
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。
4，6-O-卞叉基-1，2-O-乙叉基-β-D-甘露吡喃糖(2)于50ml無水DMF中加入2.06g(10mmol)1，3.0ml苯甲醛，4.0ml原甲酸三乙酯，及200mg對甲基苯磺酸，攪拌過夜。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)檢測反應(yīng)完全，加入碳酸氫鈉3g，繼續(xù)攪拌兩小時后，反應(yīng)混合液中加入二氯甲烷100ml，水洗，有機(jī)層經(jīng)無水Na2SO4干燥后，濃縮至粘稠液時趁熱加入1∶1石油醚-乙酸乙酯20毫升，冷卻即得白色晶體22.58g。產(chǎn)率87.8％，m.p139-141℃；[α]D-47.6°(c1.3，CHCl3)；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.37-1.38(d，J＝4.9Hz，0.6H，S-CH3CH)，1.53-1.54(d，J＝4.9Hz，2.4H，R-CH3CH)，5.32-5.35(q，J＝2.8Hz，0.8H，R-CH3CH)，5.39-5.40(d，J1，2＝1.6Hz，0.2H，S-H-1)，5.56-5.58(d，1H，R，S-PhCH)，5.64-5.68(q，J＝2.8Hz，0.2H，S-CH3CH)；Anal.calcd forC15H18O6C 61.21，H 6.16；found C 61.18，H 6.15。2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→3-4，6-O-卞叉基-1，2-O-乙叉基-β-D-甘露吡喃糖(4)2.94g(10mmol)2及7.40g(10mmol)3混合干燥后，加入2g分子篩，30ml干燥的二氯甲烷，攪拌30分鐘后冰鹽浴冷卻下加入TMSOTf(25μl，0.15mmol)，攪拌下升至室溫，繼續(xù)反應(yīng)2小時。TLC檢測反應(yīng)完全(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)。過濾，濃縮，柱純化得44.72g。產(chǎn)率82.6％，[α]D-39.7°(c1.1，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.58-1.59(d，J＝4.8Hz，3H，CH3CH)，3.79-3.84(t，J3，4＝J4，5＝10.3Hz，1H，H-4)，4.42-4.49(dd，J2，3＝3.2Hz，J3，4＝10.3Hz，1H，H-3)，5.07-5.31(d，J1，2＝1.5Hz，1H，H-1)，5.40-5.45(q，J＝2.8Hz，1H，CH3CH)，5.48-5.49(d，J1，2＝1.6Hz，1H，H-1)，5.66(s，1H，PhCH)，5.86-5.87(dd，J1，2＝1.5Hz，J2，3＝3.2Hz，1H，H-2)，5.98-6.02(dd，J2，3＝3.2Hz，J3，4＝9.7Hz，1H，H-3)，6.05-6.09(t，J3，4＝J4，5＝9.7Hz，1H，H-4)；Anal.calcd for C49H44O15C 67.42，H 5.08；found C67.44，H 5.12。2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-甘露吡喃糖-1→3-1，2-O-乙叉基-β-D-甘露吡喃糖(5)8.72g(10mmol)4，溶于100ml無水甲醇中，滴加0.1ml氯乙酰，室溫下攪拌過夜。TLC檢測至反應(yīng)完全后，濃縮后過一短硅膠柱，(長度為4cm，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)，得白色固體56.9g。產(chǎn)率95.3％，m.p133-135℃；[α]D-49.7°(c1.3.CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.52-1.54(d，J＝4.6Hz，3H，CH3CH)，4.14-4.19(t，J3，4＝J4，5＝9.7Hz，1H，H-4)，4.37-4.39(dd，J1，2＝2.08Hz，J2，3＝3.1Hz，1H，H-2)，4.47-4.51(dd，J2，3＝3.1Hz，J3，4＝9.7Hz，1H，H-3)，5.22-5.23(d，J1，2＝2.08Hz，1H，H-1)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ21.3，62.0，62.5，65.8，66.4，69.0，69.8，69.9，74.8，78.9，81.0，96.4(C-1)，99.5(C-1)，103.9，164.9，165.1，165.3，165.7；Anal.calcd forC42H40O15C 64.28，H 5.14；found C 64.24，H 5.15。2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→6)-1，2-O-乙叉基-β-D-甘露吡喃糖(6)3.62g(5mmol)5及3.7g(5mmol)3混合干燥后，加入2g分子篩，30ml干燥的二氯甲烷，攪拌30分鐘后冰鹽浴冷卻下加入TMSOTf(18μl，0.10mmol)，攪拌下升至室溫，繼續(xù)反應(yīng)2小時。TLC檢測反應(yīng)完全(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)。過濾，濃縮，柱純化得65.92g。產(chǎn)率86.9％，[α]D-42.2°(c1.0，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ5.21-5.23(d，J1，2＝1.5Hz，1H，H-1)，5.28-5.29(d，J1，2＝3.5Hz，1H，H-1)，5.34-5.38(q，J＝3.1Hz，1H，CH3CH)，5.43-5.44(d，J1，2＝1.5Hz，1H，H-1)，5.76-5.77(dd，J1，2＝1.5Hz，J2，3＝3.4Hz，1H，H-2)，5.88-5.89(dd，J1，2＝1.5Hz，J2，3＝3.1Hz，1H，H-2)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ13.7，62.5，65.2，65.5，66.1，66.3，66.4，66.6，66.7，68.2，69.1，69.8，70.0，73.8，78.9，81.8，96.4(C-1)，97.3(C-1)，99.6(C-1)，104.2，164.8，165.0，165.1，165.1，165.2，165.3，165.7，165.8；Anal.calcd for C76H66O24C 66.95，H 4.88；found C 66.98，H 4.85。2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-甘露吡喃糖-1→6)-1，2，4-三-O-乙?；?α，β-D-甘露吡喃糖(8)將5.45g(4mmol)6溶于50ml 90％的三氟乙酸中，室溫下攪拌1.5小時，反應(yīng)混合液倒入150ml甲苯中，減壓濃縮后得淺黃色固體7。往干燥后的7中加入無水吡啶10ml及乙酸酐2.2ml，40℃攪拌過夜，反應(yīng)混合液經(jīng)稀鹽酸、水洗后，有機(jī)層減壓濃縮后過一長度為6cm的短硅膠柱，(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得8 5.13g。產(chǎn)率87.7％，m.p122-124℃；[α]D-38.9°(c1.3，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.05-2.56(m，9H，3CH3CO)，6.08-6.28(m，3H)，7.17-8.01(m，40H，Bz-H)；13CNMR(CDCl3，100MHz)δ90.1(α-C-1)，90.2(β-C-1)，96.9(α-C-1)，97.2(β-C-1)，98.3(β-C-1)，98.7(α-C-1)，104.2(CH3CHO2)，164.8，164.9，165.0，165.0，165.1，165.6，165.7，165.8，167.7，169.7，170.1；Anal.calcd forC80H70O27C 65.66，H 4.82；found C 65.65，H 4.82。α-D-甘露吡喃糖-1→3(-α-D-甘露吡喃糖-1→6)-α，β-D-甘露吡喃糖(8′)將化合物85克溶于氨-甲醇的飽和溶液中，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行2天后完成，將反應(yīng)物濃縮至干，用乙酸乙酯洗滌，得到獎狀的甘露核心三糖，產(chǎn)率89.7％；[α]D+38.9°(c1.3，H2O)；2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→6)-2，4-二-O-乙?；?α-D-甘露吡喃糖(9)
100ml甲醇-氨溶液(1M)中加入7.30g(5mmol)8，室溫下反應(yīng)12小時，TLC檢測反應(yīng)完全(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，反應(yīng)混合液濃縮后過一短硅膠柱，(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得9為純α體，6.25g。產(chǎn)率88.0％，m.p145-147℃；[α]D-36.1°(c1.5，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.27(s，3H，CH3CO)，2.32(s，3H，CH3CO)，4.80-4.84(dd，J2，3＝3.0Hz，J3，4＝12.5Hz，1H，H-3)，5.15-5.16(d，J1，2＝1.5Hz，1H，H-1)，5.71-5.72(dd，J1，2＝1.5Hz，J2，3＝3.0Hz，1H，H-2)，5.80-5.82(dd，J2，3＝3.0Hz，J3，4＝10.0Hz，1H，H-3)，5.93-5.95(dd，J2，3＝2.0Hz，J3，4＝10.0Hz，1H，H-3)；13CNMR(CDCl3，100MHz)δ92.4(C-1)，97.7(C-1)，98.6(C-1)，165.2，165.4，165.4，165.5，165.5，165.6，166.2，166.4，170.4，170.6；Anal.calcd forC78H68O26C 65.91，H 4.82；found C 65.89，H 4.84。2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-甘露吡喃糖-1→6)-2，4-二-O-乙酰基-α-D-甘露吡喃糖三氯乙酰亞胺酯(10)于50ml無水二氯甲烷中加入7.1g 9、10g無水碳酸鉀、3ml三氯乙氰，室溫下攪拌過夜。TLC檢測(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)反應(yīng)完全，過濾除去碳酸鉀，濃縮過柱(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)，得10 6.41g。產(chǎn)率82.0％，m.p135-136℃；[α]D-33.9°(c1.4，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.29(s，3H，CH3CO)，2.38(s，3H，CH3CO)，5.42-5.43(d，J1，2＝1.6Hz，1H，H-1)，5.87-5.90(dd，J2，3＝3.2Hz，J3，4＝9.8Hz，1H，H-3)，6.10-6.13(t，J3，4＝J4，5＝9.8Hz，1H，H-4)，6.21-6.22(t，J3，4＝J4，5＝9.7Hz，1H，H-4)，6.35-6.36(d，J1，2＝1.4Hz，1H，H-1)，7.25-8.06(m，40H，Bz-H)，8.97(s，1H，CNHCCl3)；Anal.calcd for C80H68O26NCl3C 61.36，H 4.38；found C61.39，H 4.40。2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→3-[2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→6)-2，4-二-O-乙?；?α-D-甘露吡喃糖1→6]-1，2-O-乙叉基-β-D-甘露吡喃糖(11)1.45g(2mmol)5及3.13g(2mmol)10混合干燥后，加入2g分子篩，3ml干燥的二氯甲烷，攪拌30分鐘后冰鹽浴冷卻下加入TMSOTf(18μl，0.1mmol)，攪拌下升至室溫，繼續(xù)反應(yīng)2小時。TLC檢測反應(yīng)完全(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)。過濾，濃縮，柱純化得11 3.72g。產(chǎn)率85.3％，[α]D-44.3°(c1.2，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.20(s，3H，CH3CO)，2.22(s，3H，CH3CO)，4.90-4.91(d，J1，2＝1.5Hz，1H，H-1)，5.10-5.11(d，J1，2＝1.0Hz，1H，H-1)，5.13-5.14(d，J1，2＝1.4Hz，1H，H-1)，5.21-5.22(d，J1，2＝1.5Hz，1H，H-1)，5.25-5.28(m，1H)，5.29-5.34(t，J3，4＝J4，5＝10.5Hz，1H，H-4)，5.72-5.75(m，3H)，5.85-5.89(dd，J2，3＝3.2Hz，J3，4＝9.8Hz，1H，H-3)，5.81-5.94(dd，J2，3＝3.1Hz，J3，4＝10.0Hz，1H，H-3)；13CNMR(CDCl3，100MHz)δ96.6(C-1)，96.9(C-1)，97.2(C-1)，98.7(C-1)，100.1(C-1)，104.6(CH3CH)；Anal.calcd for C120H106O40C 65.86，H 4.88；found C 65.86，H 4.85。2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→3-[2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-甘露吡喃糖-1→6)-2，4-二-O-乙酰基-α-D-甘露吡喃糖1→6]-1，2，4-三-O-乙酰基-α-D-甘露吡喃糖(13)將3.50g(1.6mmol)11溶于40ml 90％的三氟乙酸中，室溫下攪拌2.0小時，反應(yīng)混合液倒入150ml甲苯中，減壓濃縮后得淺黃色固體12。往干燥后的12中加入無水吡啶10ml及乙酸酐2.2ml，40℃攪拌過夜，反應(yīng)混合液經(jīng)稀鹽酸、水洗后，有機(jī)層減壓濃縮后過柱，(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得13 3.12g。產(chǎn)率85.3％，m.p153-155℃；[α]D-10.2°(c1.0，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.93(s，3H，COCH3)，2.21(s，3H，COCH3)，2.29(s，3H，COCH3)，2.31(s，3H，COCH3)，2.37(s，3H，COCH3)，4.98-4.99(d，J1，2＝1.5Hz，1H，H-1)，5.21-5.22(d，J1，2＝1.4Hz，1H，H-1)，5.34-5.35(d，J1，2＝1.5Hz，1H，H-1)，5.41-5.42(m，2H，H-1)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ90.3(C-1)，97.0(C-1)，97.3(C-1)，98.6(C-1)，98.7(C-1)，164.7，164.8，164.8，164.9，164.9，164.9，165.0，165.1，165.2，165.6，165.7，165.8，167.7，169.5，169.9，170.1，170.3；Anal.calcd for C124H110O43C 65.08，H 4.85；found C 65.10，H 4.86。α-D-甘露吡喃糖-1→3-[α-D-甘露吡喃糖-1→3-(α-D-甘露吡喃糖-1→6)-α-D-甘露吡喃糖1→6]-α-D-甘露吡喃糖(13′)將化合物13 3克溶于20毫升氨-甲醇的飽和溶液中，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行3天后完成，將反應(yīng)物濃縮至干，用乙酸乙酯洗滌，得到獎狀的甘露核心五糖，產(chǎn)率92.7％；[α]D+42.7°(c1.8，H2O)；2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→6)-2，4-二-O-乙?；?α-D-甘露吡喃糖1→3-4，6-O-卞叉基-1，2-O-乙叉基-β-D-甘露吡喃糖(14)1.47g(5mmol)2及7.82g(5mmol)10混合干燥后，加入4g分子篩，40ml干燥的二氯甲烷，攪拌30分鐘后冰鹽浴冷卻下加入TMSOTf(25μl，0.15mmol)，攪拌下升至室溫，繼續(xù)反應(yīng)2小時。TLC檢測反應(yīng)完全(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶2)。過濾，濃縮，柱純化得14 7.20g。產(chǎn)率84.9％，[α]D-14.8°(c1.0，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.57-1.58(d，J＝4.9Hz，3H，CH3CH)，2.21(s，3H，CH3CO)，2.26(s，3H，CH3CO)，5.15(d，J1，2＝1.2Hz，1H，H-1)，5.51-5.53(dd，J1，2＝1.2Hz，J2，3＝3.2Hz，1H，H-2)，5.63-5.55(m，4H)，5.78-5.82(dd，J2，3＝3.2Hz，J3，4＝9.8Hz，1H，H-3)，5.91-5.95(dd，J2，3＝3.1Hz，J3，4＝9.7Hz，1H，H-3)，6.14-6.17(t，J3，4＝J4，5＝9.8Hz，1H，H-4)，6.23-6.28(t，J3，4＝J4，5＝10.0Hz，1H，H-4)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ97.1(C-1)，97.3(C-1)，99.1(C-1)，99.1(C-1)，101.2(CH3CHO2)，104.8(PhCHO2)；Anal.calcd for C93H84O31C 65.79，H 4.99；found C65.80，H 4.97。2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→6)-2，4-二-O-乙?；?α-D-甘露吡喃糖1→3-1，2-O-乙叉基-β-D-甘露吡喃糖(15)6.80g(4mmol)14，溶于100ml無水甲醇中，滴加0.1ml乙酰氯，室溫下攪拌過夜。TLC檢測至反應(yīng)完全，濃縮后過一短硅膠柱，(長度為4cm，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶4)，得白色固體15 6.0g。產(chǎn)率93.8％，m.p144-145℃；[α]D-41.6°(c1.2，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.55-1.57(d，J＝4.8Hz，3H，CH3CH)，5.18-5.19(d，J1，2＝1.5Hz，1H，H-1)，5.28-5.30(d，J1，2＝1.6Hz，1H，H-1)，5.78-5.83(dd，J2，3＝3.1Hz，J3，4＝9.7Hz，1H，H-3)，5.94-5.97(dd，J2，3＝3.0Hz，J3，4＝10.0Hz，1H，H-3)，6.11-6.18(t，2H，H-4，H-4)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ96.6(C-1)，97.3(C-1)，98.3(C-1)，99.6(C-1)，103.6；Anal.calcd for C86H80O31；C 64.17，H 5.01；foundC 64.19，H 5.00。2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲酰基-α-D-甘露吡喃糖-1→6)-2，4-二-O-乙酰基-α-D-甘露吡喃糖1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→6)-1，2-O-乙叉基-β-D-甘露吡喃糖(16)4.82g(3mmol)15及2.22g(3mmol)3混合干燥后，加入2g分子篩，3ml干燥的二氯甲烷，攪拌30分鐘后冰鹽浴冷卻下加入TMSOTf(18μl，0.1mmol)，攪拌下升至室溫，繼續(xù)反應(yīng)2小時。TLC檢測反應(yīng)完全(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)。過濾，濃縮，柱純化得16 5.36g。產(chǎn)率81.7％，m.p139-141℃；[α]D-47.6°(c1.3，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.55-1.57(d，J＝4.8Hz，3H，CH3CH)，5.27-5.29(d，J1，2＝1.6Hz，1H，H-1)，5.44-5.48(m，3H)，5.48-5.57(m，2H)，5.65-5.83(m，4H)，5.92-6.02(m，2H)，6.08-6.16(m，3H)，7.17-8.20(m，60H，12BZ-H)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ96.6(C-1)，97.4(C-1)，97.6(C-1)，98.2(C-1)，99.9(C-1)，103.9；Anal.calcd for C120H106O40C 65.86，H 4.88；found C 65.85，H 4.90。2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→6)-2，4-二-O-乙?；?α-D-甘露吡喃糖1→3-(2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露吡喃糖-1→6)-1，2，3-三-O-乙酰基-α，β-D-甘露吡喃糖(18)將4.37g(2mmol)16溶于50ml 90％的三氟乙酸中，室溫下攪拌2.0小時，反應(yīng)混合液倒入150ml甲苯中，減壓濃縮后得淺黃色固體17。往干燥后的17中加入無水吡啶20ml及乙酸酐1.0ml，40℃攪拌過夜，反應(yīng)混合液經(jīng)稀鹽酸、水洗后，有機(jī)層減壓濃縮后過柱，(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得18 3.81g。產(chǎn)率83.4％)，m.p149-152℃；[α]D-13.8°(c1.3，CHCl3)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.15-2.17(d，3H，α，β-COCH3)，2.22-2.26(m，6H，2α，β-COCH3)，2.27-2.29(d，3H，α，β-COCH3)，2.32-2.36(d，3H，α，β-COCH3)，6.24-6.29(t，J3，4＝J4，5＝9.8Hz，1H，H-4)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ90.1(α-C-1)，90.4(β-C-1)，97.0(α，β-C-1)，97.3(α-C-1)，97.4(β-C-1)，98.5(β-C-1)，98.6(α-C-1)，99.3(β-C-1)，99.8(α-C-1)，164.7-165.8(m，Bz-CO)，167.7-170.3(Ac-CO)；Anal.calcd for C124H110O43C 65.08，H 4.85；found C 65.11，H 4.82。
α-D-甘露吡喃糖-1→3-(α-D-甘露吡喃糖-1→6)-α-D-甘露吡喃糖1→3-(α-D-甘露吡喃糖-1→6)-α，β-D-甘露吡喃糖(18′)將化合物18 3克溶于20毫升氨-甲醇的飽和溶液中，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行3天后完成，將反應(yīng)物濃縮至干，用乙酸乙酯洗滌，得到獎狀的甘露核心五糖的異構(gòu)體，產(chǎn)率94.5％；[α]D+46.5°(c2.4，H2O)。
2-O-乙?；?3，4，6-三-O-苯甲?；?α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲?；?α-D-甘露糖烯丙基苷(22)將2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-甘露糖溴(8.22克，20毫摩爾)加入到烯丙醇(40mL)中，在攪拌下加入2，4-二甲基吡啶(2.3mL，20mmol)，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行，用TLC檢測(1∶1石油醚/乙酸乙酯)反應(yīng)完成后，減壓下濃縮，殘余物懸浮于無水甲醇中MeOH(20mL)，加入甲醇鈉的甲醇溶液(2M，0.4mL)，混合物攪拌過夜，反應(yīng)完成將反應(yīng)液減壓濃縮，殘余物用柱層析分離，得到粉末狀中間體(4.72g，90％)將該中間體溶于吡啶(30mL)中，在攪拌下滴加苯甲酰氯(8.2mL，70mmol)三小時后反應(yīng)完成，用常規(guī)方法對反應(yīng)液進(jìn)行后處理，用柱層析(3/1石油醚/乙酸乙酯)精制，得到結(jié)晶的化合物21(10.33g，～100％)。
化合物21在高真空下干燥二小時，然后溶于二氯甲烷(80mL)中，在-42℃氮?dú)獗Ｗo(hù)下滴加TMSOTf(100微升)，2小時后，TLC(3/1石油醚/乙酸乙酯)指示反應(yīng)完成。用三乙胺中和，減壓濃縮，柱層析精制得到固體的22(6.72g，66％)m.p148-150℃；[α]D+30°(c1.3，CHCl3)；1H NMRδ8.07-7.33，5.99，5.90-5.85，5.70，5.28-5.18，5.16，5.11，4.61-4.47，4.39-4.36，4.15-4.13，3.95-3.92，2.03。計(jì)算值C59H52O18C，67.56；H，4.96.實(shí)測值C，67.60；H，4.92。
2-O-乙?；?3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲?；?α-D-甘露糖三氯乙酰亞胺酯(19)將化合物22(524mg，0.5mmol)加入到含乙酸鈉(293毫克，3毫摩爾)的90％乙酸(10毫升)中，再加入PdCl2(89毫克，0.5毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌12小時，TLC(2/1石油醚/乙酸乙酯)指示反應(yīng)完成，用二氯甲烷(30mL)稀釋，用水、飽和碳酸氫納溶液洗滌，減壓濃縮有機(jī)相，用柱層析精制，得到2-O-乙酰基-3，4，6-三-O-苯甲?；?α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖(456mg)，將其溶于二氯甲烷(20mL)中，加入CCl3CN(0.1毫升，2毫摩爾)及DBU(14微升，0.18毫摩爾)，反應(yīng)6小時后完成，減壓下濃縮反應(yīng)液，柱層析精制得到結(jié)晶的化合物2(473毫克，兩步收率90％)，m.p139-142℃；[α]D-15°(c1.1，CHCl3)；1HNMRδ8.64，8.02-7.26，6.59，6.09，5.95-5.87，5.70，5.20，4.68-4.48，2.03。計(jì)算值C58H48O18Cl3NC，60.31，H，4.16.實(shí)測值C，60.34；H，4.15。
2-O-乙?；?3，4，6-三-O-苯甲酰基-α-D-甘露糖-(1→2)-3，4，6-三-O-苯甲?；?α-D-甘露糖-(1→6)-[2，3，4，6-四-O-苯甲?；?α-D-甘露糖(1→3)]-1，2-O-乙叉基-β-D-甘露糖(20)將1，2乙叉基甘露雙糖受體5(2.33克，5毫摩爾)，α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯的糖基供體19(5.7克，5毫摩爾)溶于50毫升二氯甲烷中，冷卻至-10℃，在攪拌下加入三甲基硅三氟甲磺酸酯100微升，然后使反應(yīng)物自然升溫到室溫，五小時后加200微升三乙胺結(jié)束反應(yīng)，減壓下蒸掉溶劑，柱層析分離后得四糖20(6.5克，77％)。m.p141-144℃；[α]D-11.5°(c1.1，CHCl3)；1H NMRδ7.98-7.25(m，60H，Bz-H)，2.00(s，3H，CH3CO)，1.50(d，3H，CH3-CH)。
將20的乙叉基脫除，再用氨-甲醇溶液脫除酰基，得到游離的四糖20′，為獎狀物，[α]D+39.5°(c1.4，H2O)；兩步反應(yīng)的產(chǎn)率為76％。
權(quán)利要求
1.一種以1，2-O-乙叉基-4，6-O-芐叉基-β-D-甘露糖苷為受體，以甘露糖三氯乙酰亞胺酯為糖基供體，以路易斯酸為催化劑的批量制備甘露三、四、五糖合成法。其特征在于由1，2-O-乙叉基-β-D-甘露糖(1)與苯甲醛、原甲酸三乙酯在對甲苯磺酸存在下反應(yīng)得到1，2-O-乙叉基-4，6-O-卞叉基-β-D-甘露糖(2)，將2作為受體與全苯甲酰化的三氯乙酰亞胺酯3在TMSOTf催化下偶聯(lián)，高產(chǎn)率地得到雙糖4，在弱酸性條件下水解掉4的卞叉基，1，2位的乙叉基不受影響，得到的雙糖5含4，6位兩個羥基，作為受體再次與供體3偶聯(lián)，選擇性地得到在6位連接的三糖6。將6的保護(hù)基用通常的方法脫除，即得到甘露核心三糖8′。用90％三氟乙酸水解掉6的乙叉基、在吡啶中用乙酸酐乙酰化、用甲醇-氨溶液(1M)選擇性地水解掉1位的乙?；⒃谔妓徕洿嬖谙屡c三氯乙睛反應(yīng)得到三糖供體10。使10與雙糖受體5偶聯(lián)，得到所需的五糖11，11可脫除保護(hù)基得到甘露核心五糖13′。11也可再進(jìn)行其它的反應(yīng)。五糖異構(gòu)體也可用此方法方便地制備，即使三糖供體10與單糖受體2偶聯(lián)，得到四糖14，水解掉14的卞叉基，再與供體3偶聯(lián)，就得到了此五糖16，16可方便地轉(zhuǎn)化為18，18脫除保護(hù)后即得到甘露五糖的異構(gòu)體18′。甘露四糖用同樣的方法制備，例如四糖20的制備，即用雙糖供體19代替單糖供體3與雙糖受體5偶聯(lián)來完成。脫除保護(hù)后即得到甘露四糖20′。
2.一種以1，2-O-乙叉基-4，6-O-芐叉基-β-D-甘露糖苷為受體，以甘露糖三氯乙酰亞胺酯為糖基供體，以路易斯酸為催化劑的批量制備甘露三、四、五糖合成法。其特征在于α1→2連接的甘露雙糖三氯乙酰亞胺酯的糖基供體19由甘露糖原酸酯21縮合，得到α1→2連接的甘露雙糖22，脫掉烯丙基后再用三氯乙睛活化1位即得到19。 Bz＝苯甲?；?，Ac＝乙?；? All＝烯丙基
3.權(quán)利1，2中所述的縮合反應(yīng)需用有機(jī)溶劑鹵代烷烴，醚或酰胺類做溶劑，需用路易斯酸做催化劑。
4.權(quán)利3中所用的有機(jī)溶劑最好是二氯甲烷，所用的路易斯酸最好是三甲基硅三氟甲磺酸酯或三氟化硼。
全文摘要
本發(fā)明涉及哺乳動物和寄生蟲體內(nèi)起重要生物學(xué)作用的甘露核心三糖α－甘露糖1→3－(α－甘露糖1→6)－甘露糖及甘露核心五糖α－甘露糖1→3－(α－甘露糖1→6)－α－甘露糖1→6－(α－甘露糖1→3)－甘露糖及其異構(gòu)體的簡便化學(xué)合成法。
文檔編號C07H3/00GK1396171SQ01120300
公開日2003年2月12日 申請日期2001年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月17日
發(fā)明者孔繁祚, 張建軍 申請人:中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心