專利名稱：具有促進(jìn)3t3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的新的人蛋白及其編碼序列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及新的編碼具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸編碼的多肽。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的用途和制備。
背景技術(shù)：
人基因組學(xué)研究目前是國際上的熱點(diǎn)，除人染色體DNA大規(guī)模測(cè)序，表達(dá)序列測(cè)序(EST)的方法外，還缺少從功能開始的篩選具有功能基因的高通量的方法。
癌癥是危害人類健康的主要疾病之一。為了有效地治療和預(yù)防腫瘤，目前人們已越來越關(guān)注腫瘤的基因治療。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)研究與癌細(xì)胞生長相關(guān)的人蛋白及其激動(dòng)劑/抑制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類新的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白多肽以及其片段、類似物和衍生物。
本發(fā)明的另一目的是提供編碼這些多肽的多核苷酸。
本發(fā)明的另一目的是提供生產(chǎn)這些多肽的方法以及該多肽和編碼序列的用途。
在本發(fā)明的第一方面，提供新穎的分離出的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽，它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
較佳地，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種分離的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相同性(a)編碼上述的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。較佳地，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。更佳地，該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36的編碼區(qū)序列或全長序列。
在本發(fā)明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體，以及被該載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞或者被上述多核苷酸直接轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。
在本發(fā)明的第四方面，提供了制備具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白活性的多肽的制備方法，該方法包含(a)在適合表達(dá)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的條件下，培養(yǎng)上述被轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白活性的多肽。
在本發(fā)明的第五方面，提供了與上述的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽特異性結(jié)合的抗體。還提供了可用于檢測(cè)的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中連續(xù)10個(gè)核苷酸至全長核苷酸，較佳地它含有連續(xù)的約10-800個(gè)核苷酸。
在本發(fā)明的第六方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽以及藥學(xué)上可接受的載體。這些藥物組合物可用于促進(jìn)細(xì)胞的生長。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的針對(duì)本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽的拮抗劑(如抗體)以及藥學(xué)上可接受的載體。該藥物組合物可治療癌癥以及細(xì)胞異常增殖等病癥。
本發(fā)明的其它方面由于本文的技術(shù)的公開，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。
具體實(shí)施例方式
3T3細(xì)胞是一種小鼠成纖維細(xì)胞(J.Cell.Biol.，17299，1963)(也稱為NIH/3T3細(xì)胞)。在癌癥研究領(lǐng)域中，常將外源基因(尤其是人基因)引入3T3細(xì)胞，觀察其對(duì)3T3細(xì)胞生長的影響情況。通常認(rèn)為，對(duì)3T3細(xì)胞生長(或惡性轉(zhuǎn)化)有影響的基因是癌癥相關(guān)基因，其中對(duì)3T3細(xì)胞生長或轉(zhuǎn)化有抑制作用的基因大多是抑癌基因，而對(duì)3T3細(xì)胞生長或轉(zhuǎn)化有促進(jìn)作用的基因大多是(原)癌基因。
本發(fā)明采用大規(guī)模cDNA克隆轉(zhuǎn)染小鼠胚胎成纖維細(xì)胞3T3，在獲得具有促進(jìn)生長作用的基礎(chǔ)上，經(jīng)測(cè)序證明為新的基因，進(jìn)一步得到全長cDNA克隆。DNA轉(zhuǎn)染試驗(yàn)證明，本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白對(duì)3T3細(xì)胞具有促進(jìn)克隆形成的作用，其促進(jìn)率≥50％。
如本文所用，“分離的”是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細(xì)胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多聚核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開，則為分離純化的。
如本文所用，“分離的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白或多肽”是指具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白?；旧霞兊亩嚯脑诜沁€原聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。
本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優(yōu)選重組多肽。本發(fā)明的多肽可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學(xué)合成的產(chǎn)物，或使用重組技術(shù)從原核或真核宿主(例如，細(xì)菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)中產(chǎn)生。根據(jù)重組生產(chǎn)方案所用的宿主，本發(fā)明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本發(fā)明的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
本發(fā)明還包括具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的片段、衍生物和類似物。如本文所用，術(shù)語“片段”、“衍生物”和“類似物”是指基本上保持本發(fā)明的天然具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白相同的生物學(xué)功能或活性的多肽。本發(fā)明的多肽片段、衍生物或類似物可以是(i)有一個(gè)或多個(gè)保守或非保守性氨基酸殘基(優(yōu)選保守性氨基酸殘基)被取代的多肽，而這樣的取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的，或(ii)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基中具有取代基團(tuán)的多肽，或(iii)成熟多肽與另一個(gè)化合物(比如延長多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導(dǎo)序列或分泌序列或用來純化此多肽的序列或蛋白原序列)。根據(jù)本文的教導(dǎo)，這些片段、衍生物和類似物屬于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員公知的范圍。
本發(fā)明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。以PP2121蛋白(在本申請(qǐng)中，蛋白質(zhì)的命名采用其克隆編號(hào))為例，編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQID NO3所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡(jiǎn)并的變異體。如本文所用，“簡(jiǎn)并的變異體”對(duì)于PP2121而言是指編碼具有SEQ ID NO2的蛋白質(zhì)，但與SEQ ID NO3所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。再以PP7706蛋白(在本申請(qǐng)中，蛋白質(zhì)的命名采用其克隆編號(hào))為例，編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO6所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡(jiǎn)并的變異體。如本文所用，“簡(jiǎn)并的變異體”對(duì)于PP7706而言是指編碼具有SEQ ID NO5的蛋白質(zhì)，但與SEQ ID NO6所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。對(duì)于本發(fā)明其他具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白，依此類推。
編碼成熟多肽的多核苷酸包括只編碼成熟多肽的編碼序列；成熟多肽的編碼序列和各種附加編碼序列；成熟多肽的編碼序列(和任選的附加編碼序列)以及非編碼序列。
術(shù)語“編碼多肽的多核苷酸”可以是包括編碼此多肽的多核苷酸，也可以是還包括附加編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。
本發(fā)明還涉及上述多核苷酸的變異體，其編碼與本發(fā)明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。此多核苷酸的變異體可以是天然發(fā)生的等位變異體或非天然發(fā)生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如本領(lǐng)域所知的，等位變異體是一個(gè)多核苷酸的替換形式，它可能是一個(gè)或多個(gè)核苷酸的取代、缺失或插入，但不會(huì)從實(shí)質(zhì)上改變其編碼的多肽的功能。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交且兩個(gè)序列之間具有至少50％，較佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本發(fā)明特別涉及在嚴(yán)格條件下與本發(fā)明所述多核苷酸可雜交的多核苷酸。在本發(fā)明中，“嚴(yán)格條件”是指(1)在較低離子強(qiáng)度和較高溫度下的雜交和洗脫，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)雜交時(shí)加有變性劑，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)僅在兩條序列之間的相同性至少在95％以上，更好是97％以上時(shí)才發(fā)生雜交。并且，可雜交的多核苷酸編碼的多肽與SEQ IDNO2所示的成熟多肽(以PP2121蛋白為例)有相同的生物學(xué)功能和活性。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的長度至少含15個(gè)核苷酸，較好是至少30個(gè)核苷酸，更好是至少50個(gè)核苷酸，最好是至少100個(gè)核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的擴(kuò)增技術(shù)(如PCR)以確定和/或分離編碼具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的多聚核苷酸。
本發(fā)明中的多肽和多核苷酸優(yōu)選以分離的形式提供，更佳地被純化至均質(zhì)。
本發(fā)明的DNA序列能用幾種方法獲得。例如，用本領(lǐng)域熟知的雜交技術(shù)分離DNA。這些技術(shù)包括但不局限于1)用探針與基因組或cDNA文庫雜交以檢出同源性核苷酸序列，和2)表達(dá)文庫的抗體篩選以檢出具有共同結(jié)構(gòu)特征的克隆的DNA片段。
編碼具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的特異DNA片段序列產(chǎn)生也能用下列方法獲得1)從基因組DNA分離雙鏈DNA序列；2)化學(xué)合成DNA序列以獲得所需多肽的雙鏈DNA。
當(dāng)需要的多肽產(chǎn)物的整個(gè)氨基酸序列已知時(shí)，DNA序列的直接化學(xué)合成是經(jīng)常選用的方法。如果所需的氨基酸的整個(gè)序列不清楚時(shí)，DNA序列的直接化學(xué)合成是不可能的，選用的方法是cDNA序列的分離。分離感興趣的cDNA的標(biāo)準(zhǔn)方法是從高表達(dá)該基因的供體細(xì)胞分離mRNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，形成質(zhì)?；蚴删wcDNA文庫。提取mRNA的方法已有多種成熟的技術(shù)，試劑盒也可從商業(yè)途徑獲得(Qiagene)。而構(gòu)建cDNA文庫也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory.New York，1989)。還可得到商業(yè)供應(yīng)的cDNA文庫，如Clontech公司的不同cDNA文庫。當(dāng)結(jié)合使用聚合酶反應(yīng)技術(shù)時(shí)，即使極少的表達(dá)產(chǎn)物也能克隆。
可用常規(guī)方法從這些cDNA文庫中篩選本發(fā)明的基因。這些方法包括(但不限于)(1)DNA-DNA或DNA-RNA雜交；(2)標(biāo)志基因的功能出現(xiàn)或喪失；(3)測(cè)定具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的轉(zhuǎn)錄本的水平；(4)通過免疫學(xué)技術(shù)或測(cè)定生物學(xué)活性，來檢測(cè)基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物。上述方法可單用，也可多種方法聯(lián)合應(yīng)用。
在第(1)種方法中，雜交所用的探針是與本發(fā)明的多核苷酸的任何一部分同源，其長度至少15個(gè)核苷酸，較好是至少30個(gè)核苷酸，更好是至少50個(gè)核苷酸，最好是至少100個(gè)核苷酸。此外，探針的長度通常在2kb之內(nèi)，較佳地為1kb之內(nèi)。此處所用的探針通常是在本發(fā)明的基因DNA序列信息的基礎(chǔ)上化學(xué)合成的DNA序列。本發(fā)明的基因本身或者片段當(dāng)然可以用作探針。DNA探針的標(biāo)記可用放射性同位素，熒光素或酶(如堿性磷酸酶)等。
在第(4)種方法中，檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物可用免疫學(xué)技術(shù)如Western印跡法，放射免疫沉淀法，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。
應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA/RNA的方法(Saiki，et al. Science 1985；2301350-1354)被優(yōu)選用于獲得本發(fā)明的基因。特別是很難從文庫中得到全長的cDNA時(shí)，可優(yōu)選使用RACE法(RACE-cDNA末端快速擴(kuò)增法)，用于PCR的引物可根據(jù)本文所公開的本發(fā)明的序列信息適當(dāng)?shù)剡x擇，并可用常規(guī)方法合成。可用常規(guī)方法如通過凝膠電泳分離和純化擴(kuò)增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本發(fā)明的基因，或者各種DNA片段等的核苷酸序列的測(cè)定可用常規(guī)方法如雙脫氧鏈終止法(Sanger et al.PNAS，1977，745463-5467)。這類核苷酸序列測(cè)定也可用商業(yè)測(cè)序試劑盒等。為了獲得全長的cDNA序列，測(cè)序需反復(fù)進(jìn)行。有時(shí)需要測(cè)定多個(gè)克隆的cDNA序列，才能拼接成全長的cDNA序列。
本發(fā)明也涉及包含本發(fā)明多核苷酸的載體，以及用本發(fā)明的載體或具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白編碼序列經(jīng)基因工程產(chǎn)生的宿主細(xì)胞，以及經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明所述多肽的方法。
通過常規(guī)的重組DNA技術(shù)(Science，1984；2241431)，可利用本發(fā)明的多聚核苷酸序列可用來表達(dá)或生產(chǎn)重組的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白多肽。一般來說有以下步驟
(1).用本發(fā)明的編碼具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的多核苷酸(或變異體)，或用含有該多核苷酸的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)合適的宿主細(xì)胞；(2).在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的宿主細(xì)胞；(3).從培養(yǎng)基或細(xì)胞中分離、純化蛋白質(zhì)。
本發(fā)明中，具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重組表達(dá)載體中。術(shù)語“重組表達(dá)載體”指本領(lǐng)域熟知的細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體、酵母質(zhì)粒、植物細(xì)胞病毒、哺乳動(dòng)物細(xì)胞病毒如腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒或其他載體。在本發(fā)明中適用的載體包括但不限于在細(xì)菌中表達(dá)的基于T7的表達(dá)載體(Rosenberg，et al.Gene，1987，56125)；在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的pMSXND表達(dá)載體(Lee and Nathans，J Bio Chem.2633521，1988)和在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的來源于桿狀病毒的載體?？傊?，只要能在宿主體內(nèi)復(fù)制和穩(wěn)定，任何質(zhì)粒和載體都可以用。表達(dá)載體的一個(gè)重要特征是通常含有復(fù)制起點(diǎn)、啟動(dòng)子、標(biāo)記基因和翻譯控制元件。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法能用于構(gòu)建含具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白編碼DNA序列和合適的轉(zhuǎn)錄/翻譯控制信號(hào)的表達(dá)載體。這些方法包括體外重組DNA技術(shù)、DNA合成技術(shù)、體內(nèi)重組技術(shù)等(Sambroook，et al)。所述的DNA序列可有效連接到表達(dá)載體中的適當(dāng)啟動(dòng)子上，以指導(dǎo)mRNA合成。這些啟動(dòng)子的代表性例子有大腸桿菌的1ac或trp啟動(dòng)子；λ噬菌體PL啟動(dòng)子；真核啟動(dòng)子包括CMV立即早期啟動(dòng)子、早期和晚期SV40啟動(dòng)子和其他一些已知的可控制基因在原核或真核細(xì)胞或其病毒中表達(dá)的啟動(dòng)子。表達(dá)載體還包括翻譯起始用的核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止子。
此外，表達(dá)載體優(yōu)選地包含一個(gè)或多個(gè)選擇性標(biāo)記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的表型性狀，如真核細(xì)胞培養(yǎng)用的二氫葉酸還原酶、新霉素抗性以及綠色熒光蛋白(GFP)，或用于大腸桿菌的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性。
包含上述的適當(dāng)DNA序列以及適當(dāng)啟動(dòng)子或者控制序列的載體，可以用于轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞，以使其能夠表達(dá)蛋白質(zhì)。
宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，如細(xì)菌細(xì)胞；或是低等真核細(xì)胞，如酵母細(xì)胞；或是高等真核細(xì)胞，如哺乳動(dòng)物細(xì)胞。代表性例子有大腸桿菌，鏈霉菌屬；鼠傷寒沙門氏菌的細(xì)菌細(xì)胞；真菌細(xì)胞如酵母；植物細(xì)胞；果蠅S2或Sf9的昆蟲細(xì)胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤細(xì)胞的動(dòng)物細(xì)胞等。
本發(fā)明的多核苷酸在高等真核細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，如果在載體中插入增強(qiáng)子序列時(shí)將會(huì)使轉(zhuǎn)錄得到增強(qiáng)。增強(qiáng)子是DNA的順式作用因子，通常大約有10到300個(gè)堿基對(duì)，作用于啟動(dòng)子以增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄。可舉的例子包括在復(fù)制起始點(diǎn)晚期一側(cè)的100到270個(gè)堿基對(duì)的SV40增強(qiáng)子、在復(fù)制起始點(diǎn)晚期一側(cè)的多瘤增強(qiáng)子以及腺病毒增強(qiáng)子等。
本領(lǐng)域一般技術(shù)人員都清楚如何選擇適當(dāng)?shù)妮d體、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和宿主細(xì)胞。
用重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。當(dāng)宿主為原核生物如大腸桿菌時(shí)，能吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞可在指數(shù)生長期后收獲，用CaCl2法處理，所用的步驟在本領(lǐng)域眾所周知?？晒┻x擇的是用MgCl2。如果需要，轉(zhuǎn)化也可用電穿孔的方法進(jìn)行。當(dāng)宿主是真核生物，可選用如下的DNA轉(zhuǎn)染方法磷酸鈣共沉淀法，常規(guī)機(jī)械方法如顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體包裝等。
獲得的轉(zhuǎn)化子可以用常規(guī)方法培養(yǎng)，表達(dá)本發(fā)明的基因所編碼的多肽。根據(jù)所用的宿主細(xì)胞，培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基可選自各種常規(guī)培養(yǎng)基。在適于宿主細(xì)胞生長的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)宿主細(xì)胞生長到適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度后，用合適的方法(如溫度轉(zhuǎn)換或化學(xué)誘導(dǎo))誘導(dǎo)選擇的啟動(dòng)子，將細(xì)胞再培養(yǎng)一段時(shí)間。
在上面的方法中的重組多肽可包被于細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞外或在細(xì)胞膜上表達(dá)或分泌到細(xì)胞外。如果需要，可利用其物理的、化學(xué)的和其它特性通過各種分離方法分離和純化重組的蛋白。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些方法的例子包括但并不限于常規(guī)的復(fù)性處理、用蛋白沉淀劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超處理、超離心、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析(HPLC)和其它各種液相層析技術(shù)及這些方法的結(jié)合。
重組的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。這些用途包括(但不限于)直接做為藥物治療具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白功能低下或喪失所致的疾病，和用于篩選促進(jìn)或?qū)咕哂写龠M(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白功能的抗體、多肽或其它配體。例如，該抗體可用于治療癌癥或細(xì)胞異常增殖。用重組表達(dá)的本發(fā)明蛋白篩選多肽庫可用于尋找有治療價(jià)值的能抑制或刺激具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白功能的多肽分子。
本發(fā)明也提供了篩選藥物以鑒定提高(激動(dòng)劑)或阻遏(拮抗劑)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的藥劑的方法。激動(dòng)劑提高具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白刺激細(xì)胞增殖等生物功能，而拮抗劑阻止和治療與細(xì)胞過度增殖有關(guān)的紊亂如各種癌癥。
具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的拮抗劑包括篩選出的抗體、化合物、受體缺失物和類似物等。具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的拮抗劑可以與具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白結(jié)合并消除其功能，或是抑制具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的產(chǎn)生，或是與多肽的活性位點(diǎn)結(jié)合使多肽不能發(fā)揮生物學(xué)功能。具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的拮抗劑可用于治療用途。
在篩選作為拮抗劑的化合物時(shí)，可以將具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白加入生物分析測(cè)定中，通過測(cè)定化合物影響具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白和其受體之間的相互作用來確定化合物是否是拮抗劑。用上述篩選化合物的同樣方法，可以篩選出起拮抗劑作用的受體缺失物和類似物。
本發(fā)明蛋白的拮抗劑可直接用于疾病治療，例如，各種惡性腫瘤、和細(xì)胞異常增殖等。
本發(fā)明的多肽，及其片段、衍生物、類似物或它們的細(xì)胞可以用來作為抗原以生產(chǎn)抗體。這些抗體可以是多克隆或單克隆抗體。多克隆抗體可以通過將此多肽直接注射動(dòng)物的方法得到。制備單克隆抗體的技術(shù)包括雜交瘤技術(shù)，三瘤技術(shù)，人B-細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，EBV-雜交瘤技術(shù)等。
可以將本發(fā)明的多肽和拮抗劑與合適的藥物載體組合后使用。這些載體可以是水、葡萄糖、乙醇、鹽類、緩沖液、甘油以及它們的組合。組合物包含安全有效量的多肽或拮抗劑以及不影響藥物效果的載體和賦形劑。這些組合物可以作為藥物用于疾病治療。
本發(fā)明還提供含有一種或多種容器的藥盒或試劑盒，容器中裝有一種或多種本發(fā)明的藥用組合物成分。與這些容器一起，可以有由制造、使用或銷售藥品或生物制品的政府管理機(jī)構(gòu)所給出的指示性提示，該提示反映出生產(chǎn)、使用或銷售的政府管理機(jī)構(gòu)許可其在人體上施用。此外，本發(fā)明的多肽可以與其它的治療化合物結(jié)合使用。
藥物組合物可以以方便的方式給藥，如通過局部、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)或皮內(nèi)的給藥途徑。具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白或其特異性抗體，可按有效地治療和/或預(yù)防具體的適應(yīng)癥的量來給藥。施用于患者的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的量和劑量范圍將取決于許多因素，如給藥方式、待治療者的健康條件和診斷醫(yī)生的判斷。
具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多種治療目的。基因治療技術(shù)可用于治療由于具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的無表達(dá)或異常/無活性的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的表達(dá)所致的細(xì)胞發(fā)育或代謝異常。重組的基因治療載體(如病毒載體)可設(shè)計(jì)成表達(dá)變異的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白，以抑制內(nèi)源性的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白活性。例如，一種變異的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白可以是縮短的、缺失了信號(hào)傳導(dǎo)功能域的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白，雖可與下游的底物結(jié)合，但缺乏信號(hào)傳導(dǎo)活性。因此重組的基因治療載體可用于治療具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白表達(dá)或活性異常所致的疾病。來源于病毒的表達(dá)載體如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺病毒相關(guān)病毒、單純皰疹病毒、細(xì)小病毒等可用于將具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白基因轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)。構(gòu)建攜帶具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白基因的重組病毒載體的方法可見于已有文獻(xiàn)(Sambrook，et al.)。另外重組具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白基因可包裝到脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)。
抑制具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反義RNA和DNA)以及核酶也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。核酶是一種能特異性分解特定RNA的酶樣RNA分子，其作用機(jī)制是核酶分子與互補(bǔ)的靶RNA特異性雜交后進(jìn)行核酸內(nèi)切作用。反義的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技術(shù)獲得，如固相磷酸酰胺化學(xué)合成法合成寡核苷酸的技術(shù)已廣泛應(yīng)用。反義RNA分子可通過編碼該RNA的DNA序列在體外或體內(nèi)轉(zhuǎn)錄獲得。這種DNA序列已整合到載體的RNA聚合酶啟動(dòng)子的下游。為了增加核酸分子的穩(wěn)定性，可用多種方法對(duì)其進(jìn)行修飾，如增加兩側(cè)的序列長度，核糖核苷之間的連接應(yīng)用磷酸硫酯鍵或肽鍵而非磷酸二酯鍵。
多聚核苷酸導(dǎo)入組織或細(xì)胞內(nèi)的方法包括將多聚核苷酸直接注入到體內(nèi)組織中；或在體外通過載體(如病毒、噬菌體或質(zhì)粒等)先將多聚核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞中，再將細(xì)胞移植到體內(nèi)等。由于本發(fā)明蛋白具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化的功能，因此本發(fā)明蛋白編碼序列的反義序列，可被引入細(xì)胞以抑制細(xì)胞的異常增殖(如癌變)。
本發(fā)明還提供了針對(duì)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白抗原決定簇的抗體。這些抗體包括(但不限于)多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和Fab表達(dá)文庫產(chǎn)生的片段。
抗具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的抗體可用于免疫組織化學(xué)技術(shù)中，檢測(cè)活檢標(biāo)本中的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白。
與具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白結(jié)合的單克隆抗體也可用放射性同位素標(biāo)記，注入體內(nèi)可跟蹤其位置和分布。這種放射性標(biāo)記的抗體可作為一種非創(chuàng)傷性診斷方法用于腫瘤細(xì)胞的定位和判斷是否有轉(zhuǎn)移。
本發(fā)明中的抗體可用于治療或預(yù)防與具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白相關(guān)的疾病。給予適當(dāng)劑量的抗體可以阻斷具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的產(chǎn)生或活性，從而抑制癌細(xì)胞的生長和/或細(xì)胞的異常增殖。
抗體也可用于設(shè)計(jì)針對(duì)體內(nèi)某一特殊部位的免疫毒素。如具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白高親和性的單克隆抗體可與細(xì)菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，紅豆堿等)共價(jià)結(jié)合。一種通常的方法是用巰基交聯(lián)劑如SPDP，攻擊抗體的氨基，通過二硫鍵的交換，將毒素結(jié)合于抗體上，這種雜交抗體可用于殺滅有關(guān)的陽性細(xì)胞(如癌細(xì)胞)。
多克隆抗體的生產(chǎn)可用具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白或多肽免疫動(dòng)物，如家兔，小鼠，大鼠等。多種佐劑可用于增強(qiáng)免疫反應(yīng)，包括但不限于弗氏佐劑等。
具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白單克隆抗體可用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)(Kohler andMilstein.Nature，1975，256495-497)。將人恒定區(qū)和非人源的可變區(qū)結(jié)合的嵌合抗體可用已有的技術(shù)生產(chǎn)(Morrison et al，PNAS，1985，816851)。而已有的生產(chǎn)單鏈抗體的技術(shù)(U.S.Pat No.4946778)也可用于生產(chǎn)抗具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的單鏈抗體。
能與具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白結(jié)合的多肽分子可通過篩選由各種可能組合的氨基酸結(jié)合于固相物組成的隨機(jī)多肽庫而獲得。篩選時(shí)，必須對(duì)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白分子進(jìn)行標(biāo)記。
本發(fā)明還涉及定量和定位檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白水平的診斷試驗(yàn)方法。這些試驗(yàn)為本領(lǐng)域所熟知，且包括FISH測(cè)定和放射免疫測(cè)定。試驗(yàn)中所檢測(cè)的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白水平，可以用作解釋具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白在各種疾病中的重要性和用于診斷具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白起作用的疾病。
具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白相關(guān)疾病的診斷和治療。在診斷方面，具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的多聚核苷酸可用于檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的表達(dá)與否或在疾病狀態(tài)下具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的異常表達(dá)。如具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白DNA序列可用于對(duì)活檢標(biāo)本的雜交以判斷具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的表達(dá)異常。雜交技術(shù)包括Southern印跡法，Northern印跡法、原位雜交等。這些技術(shù)方法都是公開的成熟技術(shù)，相關(guān)的試劑盒都可從商業(yè)途徑得到。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列(Microarray)或DNA芯片(即基因芯片)上，用于分析組織中基因的差異表達(dá)分析和基因診斷。用具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白特異的引物進(jìn)行RNA-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)體外擴(kuò)增也可檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。
檢測(cè)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白基因的突變也可用于診斷具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白相關(guān)的疾病。具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白突變的形式包括與正常野生型具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白DNA序列相比的點(diǎn)突變、易位、缺失、重組和其它任何異常等?？捎靡延械募夹g(shù)如Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測(cè)突變。另外，突變有可能影響蛋白的表達(dá)，因此用Northern印跡法、Western印跡法可間接判斷基因有無突變。
本發(fā)明的序列對(duì)染色體鑒定也是有價(jià)值的。這些序列會(huì)特異性地針對(duì)某條人染色體具體位置且并可以與其雜交。目前，需要鑒定染色體上的各基因的具體位點(diǎn)。然而現(xiàn)在只有很少的基于實(shí)際序列數(shù)據(jù)(重復(fù)多態(tài)性)的染色體標(biāo)記物可用于標(biāo)記染色體位置。為了將這些序列與疾病相關(guān)基因相關(guān)聯(lián)。第一步就是將本發(fā)明DNA序列定位于染色體上。
簡(jiǎn)而言之，根據(jù)cDNA制備PCR引物(優(yōu)選15-35bp)，可以將序列定位于染色體上。然后，將這些引物用于PCR篩選含各條人染色體的體細(xì)胞雜合細(xì)胞。只有那些含有相應(yīng)于引物的人基因的雜合細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生擴(kuò)增的片段。
體細(xì)胞雜合細(xì)胞的PCR定位法，是將DNA定位到具體染色體的快捷方法。使用本發(fā)明的的寡核苷酸引物，通過類似方法，可利用一組來自特定染色體的片段或大量基因組克隆而實(shí)現(xiàn)亞定位?？捎糜谌旧w定位的其它類似策略包括原位雜交、用標(biāo)記的流式分選的染色體預(yù)篩選和雜交預(yù)選，從而構(gòu)建染色體特異的cDNA庫。
將cDNA克隆與中期染色體進(jìn)行熒光原位雜交(FISH)，可以在一個(gè)步驟中精確地進(jìn)行染色體定位。此技術(shù)的綜述，參見Verma等，Human Chromosomesa Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。
一旦序列被定位到準(zhǔn)確的染色體位置，此序列在染色體上的物理位置就可以與基因圖數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)。這些數(shù)據(jù)可見于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通過與Johns Hopkins University Welch Medical Library聯(lián)機(jī)獲得)。然后可通過連鎖分析，確定基因與業(yè)已定位到染色體區(qū)域上的疾病之間的關(guān)系。
接著，需要測(cè)定患病和未患病個(gè)體間的cDNA或基因組序列差異。如果在一些或所有的患病個(gè)體中觀察到某突變，而該突變?cè)谌魏握€(gè)體中未觀察到，則該突變可能是疾病的病因。比較患病和未患病個(gè)體，通常涉及首先尋找染色體中結(jié)構(gòu)的變化，如從染色體水平可見的或用基于cDNA序列的PCR可檢測(cè)的缺失或易位。
本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白核苷酸全長序列或其片段通?？梢杂肞CR擴(kuò)增法、重組法或人工合成的方法獲得。對(duì)于PCR擴(kuò)增法，可根據(jù)本發(fā)明所公開的有關(guān)核苷酸序列，尤其是開放閱讀框序列來設(shè)計(jì)引物，并用市售的cDNA庫或按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法所制備的cDNA庫作為模板，擴(kuò)增而得有關(guān)序列。當(dāng)序列較長時(shí)，常常需要進(jìn)行兩次或多次PCR擴(kuò)增，然后再將各次擴(kuò)增出的片段按正確次序拼接在一起。
一旦獲得了有關(guān)的序列，就可以用重組法來大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細(xì)胞，然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細(xì)胞中分離得到有關(guān)序列。
此外，還可用人工合成的方法來合成有關(guān)序列，尤其是片段長度較短時(shí)。通常，通過先合成多個(gè)小片段，然后再進(jìn)行連接可獲得序列很長的片段。
目前，已經(jīng)可以完全通過化學(xué)合成來編碼本發(fā)明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可將該DNA序列引入本領(lǐng)域中的各種DNA分子(如載體)和細(xì)胞中。此外，還可通過化學(xué)合成將突變引入本發(fā)明蛋白序列中。
此外，由于本發(fā)明的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，與來源于其他物種的同族蛋白相比，預(yù)計(jì)在施用于人時(shí)將具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人體內(nèi)的免疫原性更低或沒有)。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New YorkCold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。注意，在核苷酸和氨基酸組合序列中，(1)給出的是起始和終止編碼子第一個(gè)核苷酸的位置，(2)分子量單位是道爾頓。
實(shí)施例1cDNA基因的獲得及對(duì)小鼠NIH/3T3細(xì)胞克隆形成的促進(jìn)作用PP2121、PP7706、PP10484、PP10566、PP10631、PP10752、PP10881、PP10897、PP10933、PP11246、PP11347和PP11517是通過用常規(guī)方法構(gòu)建人胎盤cDNA文庫獲得的。取3、6、9月齡的胎盤組織，用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說明書提取總RNA，用mRNA提純?cè)噭┖?Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-scriptTMXR cDNA文庫構(gòu)建試劑盒(Stratagene公司)構(gòu)建上述mRNA的cDNA文庫。其中反轉(zhuǎn)錄酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)在42℃進(jìn)行。轉(zhuǎn)化XL 10-Gold感受細(xì)胞，獲得了1×106cfu/μg滴度的cDNA文庫。第一輪隨機(jī)挑取cDNA克隆，其后以高豐度cDNA克隆和已證明有抑癌細(xì)胞生長功能的cDNA克隆為探針，雜交篩選cDNA文庫，挑取弱陽性及陰性克隆。用Qiagen 96孔板質(zhì)粒抽提試劑盒，按廠家說明書進(jìn)行質(zhì)粒DNA的提取。質(zhì)粒DNA和空載體同時(shí)轉(zhuǎn)染小鼠NIH/3T3細(xì)胞。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H2O溶解，待轉(zhuǎn)染。每份DNA樣品中加0.74μl脂質(zhì)體及9.3μl無血清培液，混勻后，室溫放置10分鐘。每管中加150μl無血清培液，均分加入3孔生長于96孔板的小鼠NIH/3T3細(xì)胞中，37℃放置2小時(shí)，每孔再加50μl無血清培液，37℃24小時(shí)。每孔換100μl全培液，37℃24小時(shí)，換含G418的全培液100μl，37℃24-48小時(shí)，邊觀察，邊換G418濃度不等的培液。約2-3次后，直到鏡檢細(xì)胞有克隆形成，計(jì)數(shù)。發(fā)現(xiàn)上述克隆有促進(jìn)細(xì)胞克隆形成作用，結(jié)果如下表所示。
cDNA克隆轉(zhuǎn)染細(xì)胞(3T3)克隆形成情況

對(duì)cDNA克隆采用雙脫氧終止法，在ABI377 DNA自動(dòng)測(cè)序儀上測(cè)定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，確定為新基因克隆，進(jìn)行另一端測(cè)序，仍未獲得全長cDNA序列，設(shè)計(jì)引物，再次進(jìn)行測(cè)序，直到獲得全長序列(SEQ ID NO1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34)。
實(shí)施例2從胎盤cDNA中PCR獲得全長基因和重組蛋白表達(dá)取3、6、9月齡的胎盤組織，用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說明書提取總RNA，用mRNA提純?cè)噭┖?Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptII(GIBCO BRL)，反轉(zhuǎn)錄酶在42℃進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得胎盤cDNA。利用各個(gè)基因的特異引物(如下表所示)，按97℃3’1個(gè)循環(huán)。94℃30″60℃30″72℃1’35個(gè)循環(huán)，72℃10’1個(gè)循環(huán)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得含有完整開放閱讀框序列的各蛋白基因的擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證，與實(shí)施例1測(cè)得的序列相符，隨后用常規(guī)技術(shù)將擴(kuò)增產(chǎn)物轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，獲得重組蛋白(SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35)。
基因特異引物

實(shí)施例3cDNA克隆序列分析1.PP2121A核苷酸序列(SEQ ID NO1)長度2244個(gè)堿基1 CTTGGGGACC CAGGGCCGGC TGAGCCGCAC GCTGCCAGCC AGCGCGGAGG AGCGCGATCG61 GCTGCTGCGC CGCATGGAGA GCATGCGCAA GGAGAAGCGC GTGTACAGCC GCTTCGAGGT121 CTTCTGCAAG AAAGAGGAGG CCAGCAGCCC TGGGGCAGGG GAAGGCCCCG CGGAGGAGGG181 CACCAGGGAC AGCAAGGTGG GCAAGTTCGT GCCCAAGATC CTGGGCACGT TCAAAAGCAA241 GAAGTGAGTC TTCTGGCCTG GCAACCCAGG CCAGGGTGCC CGCATCGCTG CCCCGGTCAT301 CCAGAAGCCC CGCGGAACAG AGAGCCCTGC TCATGTGCTT GAGCAGCGGC TGTCAGGCCA361 CGGCCGCTTG GGGCTTGGCT GAGTGCGCCA GACCTCGGCT CCACTGGAGG CTCACCTGGC421 AGCTGCCGTC TCTGCCCCCT GGCCTCCCCA ACGCTGGGGC TGCACCCCTC GCCACCAGTG481 CCTTTCTCCC CTCAGCACCT TCATCTCTGC ACCGTCAGCC TTGCGTGGCG CAGCGTCTGG541 CTCCGCCATC TCTTTGTGCC TCAGTCCCCC CGGCCCCCTT TATTTTTTTG AGACCTAGGG601 CTGGAGTGCA GTTGAGCGGT CTGGGCTCAC TGCAACCTCT GCCTCCCGGG TTCCAGCGAT661 TCTCCTGCCT CAGCCTCCTG AGTAGCTGGG ATTACAGATG TATGCTACCA CGCCCAGGTA721 GTTTTTGTAT TTTTAGTAGA GACAGGGTTT CACTATGTTG GCCAGGCTGG TCTCCAACTC781 CTGGCCTCAA ATGATCAGCC CGCTTCAGCC TCCCAAAGTG GGGGGATTAC AGGCGTGAGC841 CTTGCACCCC GCTAAGTCCC CTATCCTCTT GCAAGGGTCT CGCCTCTGTG CCTCAATTCC901 TCATTCTCTG GGCCCTTCTC CTCCTCAGGG CCTCCTGTTC TCAGGGCCTC CCCCCTCCCC961 GCTCCCTCCC TCTCTCAAGG TCTCCTCCTT CCCTCCCCCC CCCGTCTCCC CCCTCCCCCG1021 CCTGGGCTTC ACTTCCTTTC CTACTTGGAT TCTCCTGCTC GCTGCCTCCC AGCATCTTTT1081 TTGGAGGCCC GTCTCTTGCT GTGGGGAAGA CTGGGCTGGC TGCGGGCAGT TTGCAAGGGG1141 TGGGTGGGGC GGGGGGGGGA GCTGGACCAG AAGATGCCCC TTGGAGTGGC AAGGAAGCTG1201 GACAGGGCAG GCCTCTGGGG ACGGGACACA GGGAAGCCCG AAGGGGCGCC TTGGCCAGGT1261 CTGCCATCTC CTCCAGCGAG GCTCTGGCCA GCACTGGGTG AGAGTGGGGA GGGGGCACTG1321 GCCTTTGCAG CACAGTAAAA CATGGTCCAG ACAACCTGTG GCCCCGGCCT CATGAGCACC1381 CCCTGCACAG GCCCGGCCCA AGCCAGGCGC TAGAAGGGCT GGTTGTGGAG TGCTTATCCT1441 TGACAGGTAT GGGGCCAGGT GAGGGCAGGG GACAAGGTGC AGCTGAGGCC GAGCCCAACT1501 AGGTCCTGGG CACCCCTGCA GGTGGGAGTG GTCCTTGTCC TCCTGGTATC CAGCAGACAC1561 CCCCCTCTCC CCACCAGCCC CATTCTCAGG TCCTTTCCTC TTTGTCACCA ACACCAAGAA1621 TCTGTCCAGG GTTCTTGGCT TATCTTTTAT CTCTTTTCAC TCCTAGAGAG GAATTGCAAT1681 TGACTCAGAA TGACACATTT TTGGCACCAC GTGTGTAGAA AGCCCCCACT GTTAGATGAT1741 AGCCTCGTGA AATTCATGTT TCTGTATTCT CCTATTTCTT TTCAAAAACT AATTTTTTTT1801 TTAGTGTAAT AAATCCTAAG AGGGAACTGA TTTAAGAAAC AAGGCCGCCA AACAAAGGCA1861 GCAGTTCCGA CTCCAGCAGC TGGGAAAGGA AGGAAAGTGA CCCCACTTTC ACTCCTGCAC1921 AGCCCACTGG TTACCAAAAC CACCGTGCAA GTCGGGATGA CAGCAGGGAC TTCTGGCCAG1981 GTGGGAAAAG GTGCCTGGAA GCGGGATGCG CCTGTGCGTC TCTTGGCCAT GATGTTCTTG2041 TGGGCATGTT ATTCTTGGTG CTGCCTGGGG TGTTGCTGAG CGGACAGGCT CTCCAGCTGG2101 AGTCCATGGA GAGGCCAGAG GCTGGCGGCC CTGCCTGGGC CTTCGGAGCC TCCTGCCTGC2161 ACCCTCCACC TCTTCTAAAC CATGATGTGG CACATTTTGG TGTTAATAAA ACACAACACA2221 CAAAGTAAAA AAAAAAAAAA AAAAB核苷酸序列(SEQ ID NO2)長度153個(gè)氨基酸1 MCLSSGCQAT AAWGLAECAR PRLHWRLTWQ LPSLPPGLPN AGAAPLATSA FLPSAPSSLH61 RQPCVAQRLA PPSLCASVPP APFIFLRPRA GVQLSGLGSL QPLPPGFQRF SCLSLLSSWD121 YRCMLPRPGS FCIFSRDRVS LCWPGWSPTP GLKC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO3)克隆號(hào)PP2121起始編碼子333 ATG 終止編碼子792 TGA 蛋白質(zhì)分子量16448.31(注(1)給出的是起始和終止編碼子第一個(gè)核苷酸的位置，(2)分子量單位是道爾頓)1CT TGG GGA CCC AGG GCC GGC TGA GCC GCA CGC TGC CAG CCA GCG CGG 4748 AGG AGC GCG ATC GGC TGC TGC GCC GCA TGG AGA GCA TGC GCA AGG AGA 9596 AGC GCG TGT ACA GCC GCT TCG AGG TCT TCT GCA AGA AAG AGG AGG CCA143144 GCA GCC CTG GGG CAG GGG AAG GCC CCG CGG AGG AGG GCA CCA GGG ACA191192 GCA AGG TGG GCA AGT TCG TGC CCA AGA TCC TGG GCA CGT TCA AAA GCA239240 AGA AGT GAG TCT TCT GGC CTG GCA ACC CAG GCC AGG GTG CCC GCA TCG287288 CTG CCC CGG TCA TCC AGA AGC CCC GCG GAA CAG AGA GCC CTG CTC ATG3351 Met 1336 TGC TTG AGC AGC GGC TGT CAG GCC ACG GCC GCT TGG GGC TTG GCT GAG3832 Cys Leu Ser Ser Gly Cys Gln Ala Thr Ala Ala Trp Gly Leu Ala Glu 17384 TGC GCC AGA CCT CGG CTC CAC TGG AGG CTC ACC TGG CAG CTG CCG TCT43118 Cys Ala Arg Pro Arg Leu His Trp Arg Leu Thr Trp Gln Leu Pro Ser 33432 CTG CCC CCT GGC CTC CCC AAC GCT GGG GCT GCA CCC CTC GCC ACC AGT47934 Leu Pro Pro Gly Leu Pro Asn Ala Gly Ala Ala Pro Leu Ala Thr Ser 49480 GCC TTT CTC CCC TCA GCA CCT TCA TCT CTG CAC CGT CAG CCT TGC GTG52750 Ala Phe Leu Pro Ser Ala Pro Ser Ser Leu His Arg Gln Pro Cys Val 65528 GCG CAG CGT CTG GCT CCG CCA TCT CTT TGT GCC TCA GTC CCC CCG GCC 57566 Ala Gln Arg Leu Ala Pro Pro Ser Leu Cys Ala Ser Val Pro Pro Ala 81576 CCC TTT ATT TTT TTG AGA CCT AGG GCT GGA GTG CAG TTG AGC GGT CTG 62382 Pro Phe Ile Phe Leu Arg Pro Arg Ala Gly Val Gln Leu Ser Gly Leu 97624 GGC TCA CTG CAA CCT CTG CCT CCC GGG TTC CAG CGA TTC TCC TGC CTC 67198 Gly Ser Leu Gln Pro Leu Pro Pro Gly Phe Gln Arg Phe Ser Cys Leu 113672 AGC CTC CTG AGT AGC TGG GAT TAC AGA TGT ATG CTA CCA CGC CCA GGT 719114 Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Cys Met Leu Pro Arg Pro Gly 129720 AGT TTT TGT ATT TTT AGT AGA GAC AGG GTT TCA CTA TGT TGG CCA GGC 767130 Ser Phe Cys Ile Phe Ser Arg Asp Arg Val Ser Leu Cys Trp Pro Gly 145768 TGG TCT CCA ACT CCT GGC CTC AAA TGA TCA GCC CGC TTC AGC CTC CCA 815146 Trp Ser Pro Thr Pro Gly Leu Lys *** 154816 AAG TGG GGG GAT TAC AGG CGT GAG CCT TGC ACC CCG CTA AGT CCC CTA 863864 TCC TCT TGC AAG GGT CTC GCC TCT GTG CCT CAA TTC CTC ATT CTC TGG 911912 GCC CTT CTC CTC CTC AGG GCC TCC TGT TCT CAG GGC CTC CCC CCT CCC 959960 CGC TCC CTC CCT CTC TCA AGG TCT CCT CCT TCC CTC CCC CCC CCG TCT10071008 CCC CCC TCC CCC GCC TGG GCT TCA CTT CCT TTC CTA CTT GGA TTC TCC10551056 TGC TCG CTG CCT CCC AGC ATC TTT TTT GGA GGC CCG TCT CTT GCT GTG11031104 GGG AAG ACT GGG CTG GCT GCG GGC AGT TTG CAA GGG GTG GGT GGG GCG11511152 GGG GGG GGA GCT GGA CCA GAA GAT GCC CCT TGG AGT GGC AAG GAA GCT11991200 GGA CAG GGC AGG CCT CTG GGG ACG GGA CAC AGG GAA GCC CGA AGG GGC12471248 GCC TTG GCC AGG TCT GCC ATC TCC TCC AGC GAG GCT CTG GCC AGC ACT12951296 GGG TGA GAG TGG GGA GGG GGC ACT GGC CTT TGC AGC ACA GTA AAA CAT13431344 GGT CCA GAC AAC CTG TGG CCC CGG CCT CAT GAG CAC CCC CTG CAC AGG13911392 CCC GGC CCA AGC CAG GCG CTA GAA GGG CTG GTT GTG GAG TGC TTA TCC14391440 TTG ACA GGT ATG GGG CCA GGT GAG GGC AGG GGA CAA GGT GCA GCT GAG14871488 GCC GAG CCC AAC TAG GTC CTG GGC ACC CCT GCA GGT GGG AGT GGT CCT15351536 TGT CCT CCT GGT ATC CAG CAG ACA CCC CCC TCT CCC CAC CAG CCC CAT15831584 TCT CAG GTC CTT TCC TCT TTG TCA CCA ACA CCA AGA ATC TGT CCA GGG16311632 TTC TTG GCT TAT CTT TTA TCT CTT TTC ACT CCT AGA GAG GAA TTG CAA16791680 TTG ACT CAG AAT GAC ACA TTT TTG GCA CCA CGT GTG TAG AAA GCC CCC17271728 ACT GTT AGA TGA TAG CCT CGT GAA ATT CAT GTT TCT GTA TTC TCC TAT17751776 TTC TTT TCA AAA ACT AAT TTT TTT TTT AGT GTA ATA AAT CCT AAG AGG18231824 GAA CTG ATT TAA GAA ACA AGG CCG CCA AAC AAA GGC AGC AGT TCC GAC18711872 TCC AGC AGC TGG GAA AGG AAG GAA AGT GAC CCC ACT TTC ACT CCT GCA19191920 CAG CCC ACT GGT TAC CAA AAC CAC CGT GCA AGT CGG GAT GAC AGC AGG19671968 GAC TTC TGG CCA GGT GGG AAA AGG TGC CTG GAA GCG GGA TGC GCC TGT20152016 GCG TCT CTT GGC CAT GAT GTT CTT GTG GGC ATG TTA TTC TTG GTG CTG20632064 CCT GGG GTG TTG CTG AGC GGA CAG GCT CTC CAG CTG GAG TCC ATG GAG21112112 AGG CCA GAG GCT GGC GGC CCT GCC TGG GCC TTC GGA GCC TCC TGC CTG21592160 CAC CCT CCA CCT CTT CTA AAC CAT GAT GTG GCA CAT TTT GGT GTT AAT22072208 AAA ACA CAA CAC ACA AAG TAA AAA AAA AAA AAA AAA A 22442.PP7706A核苷酸序列(SEQ ID NO4)長度2929個(gè)堿基1 GGAGAGAGAG AGCACTAGTC TCGCGTTTTT TTTTTTTTTT TTTGACAACT TGCTCTTTTA61 ATGTGGAATG GATGACCCTC CAATATTTCC CCAGAGCACC CCATGCTCTT CTATCAGGGA121 ACTTATTAAA ATCATGTAAC ATGTTTCTTG GTGACAAGAT TTAGGTCTTT TGTTTCTGTA181 ACACATGCCA GATACTTAGC CCGGTATCTG GCATGTGGCA TGCCCAGTAA ATGTTTGCTG241 AATAAGTGAA TCTATGTCTC TTGCTTGCCG CTATTTGCCC ACTGAATCCA TGAAGTGAGT301 TTTCATAATG ATTACCACTG AAAATTCAAC CCTGAAAAGA ATGTCTTCGG TTGTGGGCCC361 ATAAAGTCTT AGAAATAGTG AAGCTCCTAC TGTCAGTCCT TGAAAGGGAA CAGGACAGCT421 GCTGTATGCC TTGAGAATGG GCAAAAGACA AGCGACAAAA AGAGCAGCGA AGGCACCTAC481 TTGTCCCTCT GGGCCAGGGC CTCAGTGTAT TGGTCGGGCT TGACCTGGTC TCCTGGTACA541 TCTTCCCAGT TTTTGGTGAC TCCCTTCAGT TTCTCTGAGA GCTCCAGGTT ACACTCCTTC601 TCTGCTTCCA CCAGAGCTGC CATCCGCGCA GCTTCATTCT TTGCTAGCCT GGATTCCTCC661 TGCAGAAGCT GGATCTTATT CTCCAAGAGC TCATAAACAT GCTCCGTCTC CTGCTGTCGC721 TCCTCAAACT GGCGTCGGAG CTCAGCTTCA TTCTGACTGT TGAGATTCTC CACATCAGCC781 CATGTTTTAT CCAGATGCTG TTTCTTGTCC TGGAGTTCTC GTTTCAAGCT CTCCACTTCA841 ACCTTCAGCT CAGTGTTCCG CTTGTAGATG TCCTCCCGGC TGGCCTCATA CTTCTGTTGC901 ATGCGCTCCT CCAGGAAGTA GATGAGCAGC TTGAGGCTGA AGTTCTCCTT CTTCAGGTCA961 TTGAGGTGCT TCTCAAAGTC TCGAAGAGCC TGGGTCTGTA CCTGAGGGGG TTTCTCAAAT1021 GCTCTCAAGG AATATGTCTG CACAAACGGG ACCTTTTCAC CACTTCTCCA GATCTGTGAC1081 TGCACTGGAG GGCCTCGATC TTTAGTGTCA CTAAGAAAAG CTGCTGTGTG ACTCGTTCTG1141 GGTACCATCT CCCCATCATC CTCTGCAAAA TAATCTCTCG TCCAGGTCTG CTCCATTTTC1201 CAGGCTCTTT CCTTAGTCTC AGGACGCTCC TCACCCGGGA GGGGAAGCAG CCTGGGAAAA1261 TGAGAAGCCT TGCCCACGAA TCTCCAGCGC AAAAGGCAGC AGCTTTTTCC TCCCCAGCTC1321 CTTTCTGCGT CGGCGGCGAA GAGAGAGCTC TGCTCCCTCG GGAAAGTTTC TTTGGAGGTC1381 CGGCCCGGAG CGGCCATGTC CCACGGCCCC AAGCAGCCCG GCGCGGCCGC CGCGCCGGCG1441 GGCGGCAAGG CTCCGGGCCA GCATGGGGGC TTCGTGGTGA CTGTCAAGCA AGAGCGCGGC1501 GAGGGTCCAC GCGCGGGCGA GAAGGGGTCC CACGAGGAGG AGCCGGTGAA GAAACGCGGC1561 TGGCCCAAGG GCAAGAAGCG GAAGAAGATT CTGCCGAATG GGCCCAAGGC ACCGGTCACG1621 GGCTACGTGC GCTTCCTGAA CGAGCGGCGC GAGCAGATCC GCACGCGCCA CCCGGATCTG1681 CCCTTTCCCG AGATCACCAA GATGCTGGGC GCCGAGTGGA GCAAGCTGCA GCCAACGGAA1741 AAGCAGCGGT ACCTGGATGA GGCCGAGAGA GAGAAGCAGC AGTACATGAA GGAGCTGCGG1801 GCGTACCAGC AGTCTGAAGC CTATAAGATG TGCACGGAGA AGATCCAGGA GAAGAAGATC1861 AAGAAAGAAG ACTCGAGCTC TGGGCTCATG AACACTCTCC TGAATGGACA CAAGGGTGGG1921 GACTGCGATG GCTTCTCCAC CTTCGATGTT CCCATCTTCA CTGAAGAGTT CTTGGACCAA1981 AACAAAGCGC GTGAGGCGGA GCTTCGGCGC TTCGGAAGAT GAATGTGGCC TTCGAGGAGC2041 AGAACGCGGT ACTGCAGAGG CACACGCAGA GCATGAGCAG CGCGCGCGAG CGTCTGGAGC2101 AGGACGTGGC GCTGGAGGAG CGGAGGACGC TGGCGCTGCA GCAGCAGCTC CAGGCCGTGC2161 GCCAGGCGCT CACCGCCAGC TTCGCCTCAC TGCCGGTGCC GGGCACGGGC GAAACGCCCA2221 CGCTGGGCAC TCTGGACTTC TACATGGCCC GGCTTCACGG AGCCATCGAG CGCGACCCCG2281 CCCAGCACGA GAAGCTCATC GTCCGCATCA AGGAAATCCT GGCCCAGGTC GCCAGCGAGC2341 ACCTGTGAGG AGTGGGCGGG CCCACGATGC AGAGGAGAAG CTGTGGGCGC GGCCCTGCCA2401 CACCCCACCC CGTGGACGAG AGGCTGGGGG TCCACCTTTG GGGCCTGGTC CCATCCTGCA2461 CCTTGGGGGC TCCAGCCCCC CTAAAATTAA ATTTCTGCAG CATCCCTTTA GCTTTCAATC2521 TCCCCAGCCC CCTGAACCCG GAAAAAGCAC CGTGCGCGAT ACACCCAGAA GAACCTCACA2581 GCCGAGGGTG CCCCTCCTCG GAGGACAAGC CACGCGCTAC ACTGGCTCTC CGGGCCACCC2641 CCAGGACACA GGGCAGACGA AACCCACCCC CAGCACACGG CAGGACCCCC CAAATTACTC2701 ACTACGGGGG GCTGTGCCAT AGGCCACACA GGAAGCTGCC TTGTGGGGAC TTACCTGGGG2761 TGTCCCCCGC ATGCCTGTAC CCCAGATGGG TGGGGGCCGG CTTTGCCCAT CCTGCTCTCC2821 TCCAGCCGAG GGACCCTGGT GGGGGTGGCT CCTTCTCACT GCTGGATCCG GACTTTTTAA2881 ATAAAAACAA GTAAAATTTG TGTTTTAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAB核苷酸序列(SEQ ID NO5)長度272個(gè)氨基酸1 MDTRVGTAMA SPPSMFPSSL KSSWTKTKRV RRSFGASEDE CGLRGAERGT AEAHAEHEQR61 ARASGAGRGA GGAEDAGAAA AAPGRAPGAH RQLRLTAGAG HGRNAHAGHS GLLHGPASRS121 HRARPRPARE AHRPHQGNPG PGRQRAPVRS GRAHDAEEKL WARPCHTPPR GREAGGPPLG181 PGPILHLGGS SPPKIKFLQH PFSFQSPQPP EPGKSTVRDT PRRTSQPRVP LLGGQATRYT
241 GSPGHPQDTG QTKPTPSTRQ DPPNYSLRGA VPC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO6)克隆號(hào)PP7706起始編碼子1904 ATG 終止編碼子2720 TAG 蛋白質(zhì)分子量28556.181G GAG AGA GAG AGC ACT AGT CTC GCG TTT TTT TTT TTT TTT TTT GAC 4647 AAC TTG CTC TTT TAA TGT GGA ATG GAT GAC CCT CCA ATA TTT CCC CAG 9495 AGC ACC CCA TGC TCT TCT ATC AGG GAA CTT ATT AAA ATC ATG TAA CAT 142143 GTT TCT TGG TGA CAA GAT TTA GGT CTT TTG TTT CTG TAA CAC ATG CCA 190191 GAT ACT TAG CCC GGT ATC TGG CAT GTG GCA TGC CCA GTA AAT GTT TGC 238239 TGA ATA AGT GAA TCT ATG TCT CTT GCT TGC CGC TAT TTG CCC ACT GAA 286287 TCC ATG AAG TGA GTT TTC ATA ATG ATT ACC ACT GAA AAT TCA ACC CTG 334335 AAA AGA ATG TCT TCG GTT GTG GGC CCA TAA AGT CTT AGA AAT AGT GAA 382383 GCT CCT ACT GTC AGT CCT TGA AAG GGA ACA GGA CAG CTG CTG TAT GCC 430431 TTG AGA ATG GGC AAA AGA CAA GCG ACA AAA AGA GCA GCG AAG GCA CCT 478479 ACT TGT CCC TCT GGG CCA GGG CCT CAG TGT ATT GGT CGG GCT TGA CCT 526527 GGT CTC CTG GTA CAT CTT CCC AGT TTT TGG TGA CTC CCT TCA GTT TCT 574575 CTG AGA GCT CCA GGT TAC ACT CCT TCT CTG CTT CCA CCA GAG CTG CCA 622623 TCC GCG CAG CTT CAT TCT TTG CTA GCC TGG ATT CCT CCT GCA GAA GCT 670671 GGA TCT TAT TCT CCA AGA GCT CAT AAA CAT GCT CCG TCT CCT GCT GTC 718719 GCT CCT CAA ACT GGC GTC GGA GCT CAG CTT CAT TCT GAC TGT TGA GAT 766767 TCT CCA CAT CAG CCC ATG TTT TAT CCA GAT GCT GTT TCT TGT CCT GGA 814815 GTT CTC GTT TCA AGC TCT CCA CTT CAA CCT TCA GCT CAG TGT TCC GCT 862863 TGT AGA TGT CCT CCC GGC TGG CCT CAT ACT TCT GTT GCA TGC GCT CCT 910911 CCA GGA AGT AGA TGA GCA GCT TGA GGC TGA AGT TCT CCT TCT TCA GGT 958959 CAT TGA GGT GCT TCT CAA AGT CTC GAA GAG CCT GGG TCT GTA CCT GAG10061007 GGG GTT TCT CAA ATG CTC TCA AGG AAT ATG TCT GCA CAA ACG GGA CCT10541055 TTT CAC CAC TTC TCC AGA TCT GTG ACT GCA CTG GAG GGC CTC GAT CTT11021103 TAG TGT CAC TAA GAA AAG CTG CTG TGT GAC TCG TTC TGG GTA CCA TCT11501151 CCC CAT CAT CCT CTG CAA AAT AAT CTC TCG TCC AGG TCT GCT CCA TTT11981199 TCC AGG CTC TTT CCT TAG TCT CAG GAC GCT CCT CAC CCG GGA GGG GAA12461247 GCA GCC TGG GAA AAT GAG AAG CCT TGC CCA CGA ATC TCC AGC GCA AAA12941295 GGC AGC AGC TTT TTC CTC CCC AGC TCC TTT CTG CGT CGG CGG CGA AGA13421343 GAG AGC TCT GCT CCC TCG GGA AAG TTT CTT TGG AGG TCC GGC CCG GAG13901391 CGG CCA TGT CCC ACG GCC CCA AGC AGC CCG GCG CGG CCG CCG CGC CGG14381439 CGG GCG GCA AGG CTC CGG GCC AGC ATG GGG GCT TCG TGG TGA CTG TCA14861487 AGC AAG AGC GCG GCG AGG GTC CAC GCG CGG GCG AGA AGG GGT CCC ACG15341535 AGG AGG AGC CGG TGA AGA AAC GCG GCT GGC CCA AGG GCA AGA AGC GGA15821583 AGA AGA TTC TGC CGA ATG GGC CCA AGG CAC CGG TCA CGG GCT ACG TGC16301631 GCT TCC TGA ACG AGC GGC GCG AGC AGA TCC GCA CGC GCC ACC CGG ATC16781679 TGC CCT TTC CCG AGA TCA CCA AGA TGC TGG GCG CCG AGT GGA GCA AGC17261727 TGC AGC CAA CGG AAA AGC AGC GGT ACC TGG ATG AGG CCG AGA GAG AGA17741775 AGC AGC AGT ACA TGA AGG AGC TGC GGG CGT ACC AGC AGT CTG AAG CCT18221823 ATA AGA TGT GCA CGG AGA AGA TCC AGG AGA AGA AGA TCA AGA AAG AAG18701871 ACT CGA GCT CTG GGC TCA TGA ACA CTC TCC TGA ATG GAC ACA AGG GTG19181 Met Asp Thr Arg Val 51919 GGG ACT GCG ATG GCT TCT CCA CCT TCG ATG TTC CCA TCT TCA CTG AAG19666 Gly Thr Ala Met Ala Ser Pro Pro Ser Met Phe Pro Ser Ser Leu Lys 211967 AGT TCT TGG ACC AAA ACA AAG CGC GTG AGG CGG AGC TTC GGC GCT TCG201422 Ser Ser Trp Thr Lys Thr Lys Arg Val Arg Arg Ser Phe Gly Ala Ser 372015 GAA GAT GAA TGT GGC CTT CGA GGA GCA GAA CGC GGT ACT GCA GAG GCA206238 Glu Asp Glu Cys Gly Leu Arg Gly Ala Glu Arg Gly Thr Ala Glu Ala 532063 CAC GCA GAG CAT GAG CAG CGC GCG CGA GCG TCT GGA GCA GGA CGT GGC211054 His Ala Glu His Glu Gln Arg Ala Arg Ala Ser Gly Ala Gly Arg Gly 692111 GCT GGA GGA GCG GAG GAC GCT GGC GCT GCA GCA GCA GCT CCA GGC CGT215870 Ala Gly Gly Ala Glu Asp Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Gly Arg 852159 GCG CCA GGC GCT CAC CGC CAG CTT CGC CTC ACT GCC GGT GCC GGG CAC220686 Ala Pro Gly Ala His Arg Gln Leu Arg Leu Thr Ala Gly Ala Gly His 1012207 GGG CGA AAC GCC CAC GCT GGG CAC TCT GGA CTT CTA CAT GGC CCG GCT2254102 Gly Arg Asn Ala His Ala Gly His Ser Gly Leu Leu His Gly Pro Ala 1172255 TCA CGG AGC CAT CGA GCG CGA CCC CGC CCA GCA CGA GAA GCT CAT CGT2302118 Ser Arg Ser His Arg Ala Arg Pro Arg Pro Ala Arg Glu Ala His Arg 1332303 CCG CAT CAA GGA AAT CCT GGC CCA GGT CGC CAG CGA GCA CCT GTG AGG2350134 Pro His Gln Gly Asn Pro Gly Pro Gly Arg Gln Arg Ala Pro Val Arg 1492351 AGT GGG CGG GCC CAC GAT GCA GAG GAG AAG CTG TGG GCG CGG CCC TGC2398150 Ser Gly Arg Ala His Asp Ala Glu Glu Lys Leu Trp Ala Arg Pro Cys 1652399 CAC ACC CCA CCC CGT GGA CGA GAG GCT GGG GGT CCA CCT TTG GGG CCT2446166 His Thr Pro Pro Arg Gly Arg Glu Ala Gly Gly Pro Pro Leu Gly Pro 1812447 GGT CCC ATC CTG CAC CTT GGG GGC TCC AGC CCC CCT AAA ATT AAA TTT2494182 Gly Pro Ile Leu His Leu Gly Gly Ser Ser Pro Pro Lys Ile Lys Phe 1972495 CTG CAG CAT CCC TTT AGC TTT CAA TCT CCC CAG CCC CCT GAA CCC GGA2542198 Leu Gln His Pro Phe Ser Phe Gln Ser Pro Gln Pro Pro Glu Pro Gly 2132543 AAA AGC ACC GTG CGC GAT ACA CCC AGA AGA ACC TCA CAG CCG AGG GTG2590214 Lys Ser Thr Val Arg Asp Thr Pro Arg Arg Thr Ser Gln Pro Arg Val 2292591 CCC CTC CTC GGA GGA CAA GCC ACG CGC TAC ACT GGC TCT CCG GGC CAC2638230 Pro Leu Leu Gly Gly Gln Ala Thr Arg Tyr Thr Gly Ser Pro Gly His 2452639 CCC CAG GAC ACA GGG CAG ACG AAA CCC ACC CCC AGC ACA CGG CAG GAC2686246 Pro Gln Asp Thr Gly Gln Thr Lys Pro Thr Pro Ser Thr Arg Gln Asp 2612687 CCC CCA AAT TAC TCA CTA CGG GGG GCT GTG CCA TAG GCC ACA CAG GAA2734262 Pro Pro Asn Tyr Ser Leu Arg Gly Ala Val Pro *** 2732735 GCT GCC TTG TGG GGA CTT ACC TGG GGT GTC CCC CGC ATG CCT GTA CCC27822783 CAG ATG GGT GGG GGC CGG CTT TGC CCA TCC TGC TCT CCT CCA GCC GAG28302831 GGA CCC TGG TGG GGG TGG CTC CTT CTC ACT GCT GGA TCC GGA CTT TTT28782879 AAA TAAAAA CAA GTA AAA TTT GTG TTT TAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 29262927 AAA29293.PPl0484A核苷酸序列(SEQ ID NO7)長度1788個(gè)堿基1 GGCTAAATCA TATAACAGGG TCACAGTAAT GGGGGGTTTC AAAGTGGAGA ACCACACGGC61 GTGCCACTGC AGTACTTGGT AAAACATTTA AGATTTGTGA TAATAACAAG TACTGCAGTG121 GCACGCCGGG CCCCCAGAAC CCTATGAAGC CCAGCAGTCT GAGCCAATCG CCTACTTCCG181 GGGCCTACGG CTGGTCATGA GCCACGGCCC ATACATCAAA CTTATTACTG GCTTCCTCTT241 CACCTCCTTG GCTTTCATGC TGGTGGAGGG GAACTTTGTC TTGTTTTGCA CCTACACCTT301 GGGCTTCCGC AATGAATTCC AGAATCTACT CCTGGCCATC ATGGTGAGTG GGACCTGAGC361 AGGGGCGGGC AGCCTGGGCT GAGGTGACAT AGGCTGTGGA ATGGTTCTTG GAATAGGCAG421 AGGATGTTTC TCAGGCTGGC CCAAGGTCAT GAAAGGATGA GGGAGGCTTC TCAGGGTATT481 TGGTTGGACC TTGCGAAGGT AGGACTGTGA AAGAAAGAGT TTGAGGTTAG ATGTTTGAGT541 AGTGAGCACA GCAAAAGCAA GGGCGAGGAC ACCAGGAACT TGGCTCAGAG GTTTGAGAGG601 GCAGCAGACA AGGTGGGCCT GGACCAGCTC TGAGCTCCCC TGGGGAGCCG TCAAAGGTGC661 CTGTCATCTT CGTTGCTGCC CACATGATGT CATCTGGCTG CTCTTGGGCA GGGCTGGGAG721 CCACTTTGGG GTTCTGGGAA GGGCAGGAGG GGCTCTGTGG CTCTAAAGCA CCTCCCTTTA781 ACCCCCTTTG TCCATCCACA GCTCTCGGCC ACTTTAACCA TTCCCATCTG GCAGTGGTTC841 TTGACCCGGT TTGGCAAGAA GACAGCTGTA TATGTTGGGA TCTCATCAGC AGTGCCATTT901 CTCATCTTGG TGGCCCTCAT GGAGAGTAAC CTCATCATTA CATATGCGGT AGCTGTGGCA961 GCTGGCATCA GTGTGGCAGC TGCCTTCTTA CTACCCTGGT CCATGCTGCC TGATGTCATT1021 GACGACTTCC ATCTGAAGCA GCCCCACTTC CATGGAACCG AGCCCATCTT CTTCTCCTTC1081 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TAT TTG GAG AAA GGG CAA20152016 GGA ATT GGG TCT GCT TTA TTT TTG GGG GTA TTT TGT TTT TGT TCT CAC20632064 CTG CTG CCC CCC CAC CCC ACC ACC CCA GGG ATA AAT TGG ATA TAA ACA21112112 CTA AAT ACT AAT CAG TTG AAC TTA ACA TTT AAT AAA AAG AAA GGG TGA21592160 AAT AAA CTG AAG ACC ATT TTA GAA CTA GTC AGT TCT CTG CAG CAA AGG22072208 GAA CAG GAG CCA TTT GAA CCC TCT GGG ACC CCT CAC CCC ACT GCT TCA22552256 GGG TGC TAG GCT GAG GGA TGT TTT TCC TCC CCC TTA CCG CCC ATG CCC23032304 TTG AAA GAA AAG TCA CTT TTT GTG GAG GGC ATC ATT CAT TCC TGA TTC23512352 ACA AAC CCC AAA AAC CTC TGG TGG GAG ATA GGA AGA TAG GGC GTG GGC23992400 CTG GGC CTT AAC CTC AAT CTT GTG TCT GCC TCA GTC TTT TCT GAC TGG24472448 CCC TGA AGT TGT CAG TGG CTC TTT CTG TCC TTC AGC CCC TGG AAG GTG24952496 CTC CAG GAT AAC AAA GAA GGG CAG GTT GAA GCC CCT CAT GGA AGG AGC25432544 TGG CTT TGT GGG GCT GCA AAG GAC TTT TAA GTC CTG CCT GTA CTG AAG25912592 TTC ACA GCC CAC CTG ACT GAG CAG ACT CTT CCT GTT CCT TTC TCT ACC26392640 ACC CTT GCC TTC CCA GGA CTG CAC 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TCCCTCTCAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAAB核苷酸序列(SEQ ID NO20)長度128個(gè)氨基酸1 MFFRNPMNTS SQGKITPSHI TPASSTVLVL SPTIWTMFLV VKGHRYTVCF FQHNFPLGLS61 WRLTAIAQAN QNPSFLSIRI SLTLSLTFIL AVLKYSRLGQ AQWLTLVIPV RWEAKSGRSL121 EARSLRPAC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO21)克隆號(hào)PPl0881起始編碼子1502 ATG 終止編碼子1886 TGA 蛋白質(zhì)分子量14432.151G CCA CTA TGT CTG GCT GAG TAT GTC TCT TTT AGA TTG TTT TAT TTT 4647 GAG AAC TTC TGA AAC CAT GTC AGA GAC TGC TGA TGC TGT AGA TGA TAC 9495 TAT ATT ATT CAA GTC TTG ATT ATC TGC TGT GAG TTT TCA TGA ATA ATT 142143 CAC CTT TTT CAT GCA CGA CAC AGA ACT TGT TGG TAA CAG CAC TCC AGT 190191 GTC GAA CAT GTC ATT AAT TCA TGT GCT AAA TCT CTT TTG GTC CAC CAT 238239 GAT ACT GTT TCA AAT TAA CAA CCT ATG TGA GCT GGG GAA GTT GCA CAG 286287 ATT CTC ATT TAG CCT GTT CTG ACT GAA GGG AAA ACT AAC AAG CTT TCT 334335 GCA GTA TAG TAG CTG AAG TTT TCC CTG GTC AAA CAT CAT ATC CTT CCC 382383 CAA AAC ATA TTC AGG TAA TGT GGA TGC AAG TAC TTC CAA GAT TCA TTC 430431 AAA CAT ACT AAT TTT CAT CCA AAT TTT AAT TTA ATC CTA TCA GCC ATT 478479 TCA TCC TCA TAT CCT GTC TTT CTA GTT ATT GCC TCT GCT AGG ATT TTA 526527 CCA ATA GGT TTT GGA ATC AGA GGC ACT GAA TTC TAT GTC AGG AAC CCC 574575 TGG AAG GTT TCT TTT TTA CCT TCT ATT GTA CCT ACA GGT GTG CAT ATG 622623 GCC TTC AGT CCC TAC TAG GAG ATT AGT TAA AAG AAA GCC CTG GTT CTG 670671 TGT CAG TCC TCA TCC TGA TTA ATT TGG TAG CCC ATC ACC TCT GAT GAT 718719 TTG AAC TGA GGT TCT TCA TTG TCA TTT TTG CTT CCC AGC TTG GTG CAT 766767 TCT TTG AAA TTA GGG TGC ATA GAG TGT TTG TTT AGG GCC CTT CAG TGT 814815 TGG GGG ACT AAG AGG CGC TCC CAT TGG TAA ACC TAA CTT CTG ATA GTG 862863 CAG CAT TAA GAC CTT TGT GTT AAC ATC AGT GTC CAT TTT ATT CAT CCC 910911 ATC TCT TAG TAA CCG TTT AAA ACT TCA TCC TGC TTG GGA CTT CGT TGA 958959 CTA TCT GTT TTG TGT TAC CCA TTC ACT TGT GAT TCA GTC TTA TTT TCT10061007 TAG CAT CTG TAA GAC CCA TAT TAA GAA GCT GAG ACA ACA AAT CTG ACA10541055 CAT TTC TTG GAC CAT TGA TAG ATT TTG CAG CAG TTA TAT CAG ATG CCT11021103 GCC TAG CGG GGC CCC TTC AGT CAC AGT ATT TAC CAT GAT TTA AAG GGC11501151 ATA TTA AGG ATG AAC AAA CAT CCT GAT GAC CAT GAA GTT AAT CCA GCA11981199 TGG TTT GCA TAT GCA GCT TAC CAG CTT TGT CAT CTA TGG AGG AGT GCC12461247 ACT TGG CAT TTA AAG GAG GGG AAG GAC CAT TTC CCT TTT CAG GGT AAA12941295 CAA ATT TTA CAG TGG CTT TTA CCC AGT CCA CCA GAC TAG CTG TCC CTT13421343 TAG GAA CAA TCT ATT GTG TGT TTG GAT CAT GTA CAA CAA TCC ATG ATT13901391 GTT CAG TAA TAA GGT TCC TGC ATC AAC CCC AAG CAG ACT TCT TCA TTC14381439 TGC AAC ATT CAG AAT CAA AGA TAC TGC TCC CAA GTT AGT CAC TCT CAC14861487 AAT CTA TTT TCT TAA ATG TTT TTC AGG AAC CCG ATG AAT ACC AGT TCA15341 Met Phe Phe Arg Asn Pro Met Asn Thr Ser Ser 111535 CAA GGC AAG ATA ACT CCT TCA CAC ATA ACC CCT GCT TCC AGT ACT GTC158212 Gln Gly Lys Ile Thr Pro Ser His Ile Thr Pro Ala Ser Ser Thr Val 271583 TTG GTT TTG TCA CCC ACC ATT TGG ACA ATG TTC CTG GTG GTC AAA GGC163028 Leu Val Leu Ser Pro Thr Ile Trp Thr Met Phe Leu Val Val Lys Gly 431631 CAT AGA TAT ACT GTC TGT TTT TTT CAG CAT AAT TTT CCA TTG GGT TTA167844 His Arg Tyr Thr Val Cys Phe Phe Gln His Asn Phe Pro Leu Gly Leu 591679 TCC TGG AGG CTA ACA GCC ATA GCT CAA GCT AAC CAA AAT CCA AGC TTT172660 Ser Trp Arg Leu Thr Ala Ile Ala Gln Ala Asn Gln Asn Pro Ser Phe 751727 TTG AGC ATC AGG ATT TCC TTA ACA CTC TCT CTT ACT TTC ATT TTA GCT177476 Leu Ser Ile Arg Ile Ser Leu Thr Leu Ser Leu Thr Phe Ile Leu Ala 911775 GTT TTA AAA TAC AGC AGA CTG GGC CAG GCG CAG TGG CTC ACA TTG GTA182292 Val Leu Lys Tyr Ser Arg Leu Gly Gln Ala Gln Trp Leu Thr Leu Val 1071823 ATC CCA GTA CGT TGG GAG GCC AAG TCG GGC AGA TCA CTT GAG GCC AGG1870108 Ile Pro Val Arg Trp Glu Ala Lys Ser Gly Arg Ser Leu Glu Ala Arg 1231871 AGT TTG AGA CCA GCC TGA CCA ACA TGG TGA AAC CCT GTC TCC ACT AAA1918124 Ser Leu Arg Pro Ala *** 1291919 AAT ACA AAA AAT TAG CTT GGC TTG GTG GCA TGC GCC TGT AAT CCC AGC19661967 TAC TTG AGG GGC TGA GGC AGG AGA ATC ACT GGA ACC CAG GAG GCA GAG20142015 GTT GCA GTG ATC TGA GAT CAT GCC ACT GTA CTC CAG CCT GGG AGA CAC20622063 AGC GAG ACT CCC TCT CAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 21008. PP10897A核苷酸序列(SEQ ID NO22)長度2362個(gè)堿基1 GCATGAATCA GGTAAGAAGC CAGACTGCTG AGGCAGAGTA GGGGGGAAGG AGGCACAAGG61 GCCTTGCACT CCAGCAAAGA TGGTAGAGAT GGGGAAGCAT TCGGGCTGGA CAGGAGAGAC121 CCAGGTTCCA GGCGCAGTGT GAAGCCTCAG CAGACCCCAG TTTCAGAGGT TTGAGGAAGG181 AAAATCAACA GACACCCCGG GTATGAAGTA GGGGCCAGGT TGTGGGCTCT GCCTCTGGGG241 ACAGGGCAGA TCCCTTCCTG CTTTATTTGT GAGCCACCTC AACAGGACCC AGGCCATCTG301 CAGGTACTAG TGGCCTAGCT GGGTAGTCTT TCCTGAGGTC TCACCTCAGG CCTTTGTGCT361 GCTGCTGTTG CTTCTGGCCT TGAGCCTGAG AGAGAGGTGA GAGGAAGGAT GCTTTCTCTA421 ACTTGGGCTC CTCCAATCTC TGGTTGCAAA GCTGGGGTTG GGGGAGAGAG GACCACCCAA481 CCTGCCCTGT ACAAGCATCA GTAAGACTCC AAGTTTCCCA GGGCCCGAAC ACTTGGGGGT541 TGTCTCTCAA CACCCGGCTG GAAGACAAGT AGGTAACCAG GTTCAGCCCC ACCTGCCAAG601 AACACTGTGT TTTGGGCCTG GCAGAGCTGC TACTCCCCCT CTCCCTCCTA AGAATGCCCA661 GAGAATCACT TGCCAAGGCT ACTCCTGGAG CTCAGCTGTG GGATCAGGGT TTGGGCTGAG721 GATCAGGTGC CTGTGTGCAC ACATGTGCAC ATTGTGTGTG CCAATGGGTG GTAGGGATTG781 AGCCCGTTGT GAGAACATCC AGCCAGGTTG GAAGTGTGTA CAGGTATCTG AGGGTGTGCA841 CGTGAGCAAG AGGGTGTGCA AGATGTGGGT GACTGTTGGG ACCACAGAGC TGAGGCCTGT901 GGTCAGCTCA GGTCAGAACT GGGAGGTCTG TTTCCCTTGG GAGGACCTGT CTGCTCTGAG961 GGGGACCCGG ACAAGTGCAC ATATGCATGT GTGTGTCTAC ACACACACAC ACACACACAC1021 ACACACACAC ACACACATAT GCTTGCCTCC CTCTCCAAGG CAGACTTGCC TGGGAAGTAC1081 CCCTCCTCAG CAGGAGCTCG AAGACCCCTG CCCAGTGCTG TTTTCAGTAG AGGGAGTGGA1141 GCTGAGATGG GGAGACCGTA CTGAGCGGTC CAGGAGTAGG GAAACAGAGC TGCTTTGCAG1201 CTTCTGTTCC AGAAGATGGG GGTTGGGGGG CGGGGTTGAG GGCCAGGGGT GGGAGCAGGA1261 GCAGAACAGA AAGCCTCCCT GCTCACTGGC CTTTCCCCTT CCCTCACTGG CTGCCCATGG1321 AGCCAGGATC AGCATGGGAA CAATCAAGGA GGCAGGGGCT TATCAGTACT ATGGACCCCT1381 ACACTGCTCT GCCTGGTGGT TCTTCTCTTC GCATACCAAA GACAGAAATT AAGCCTCCAA1441 GAGTGGTAAC TGACCTCGGT CACACTTGGT GGGTGTGGGA AAGGATTCAA ATGTAGGTCT1501 GTTCTCTTCT TCATCTATCA TGGTCCCTGT CCTGGAGGCA AGTCGTCTGG GGCTCAGAAA1561 ACACCCCTGT TGCCACTGAT TGGAATTCCA AGGGTCTGGG TGAAGTGGGG ATGGGCCTCC1621 AGCTTGCCTC CAGCCTGAAA AAATAGTAGA GGGTGTTGAG GCTGGGAAGG GAGGTGGGGC1681 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AHGARISMGT IKEAGAYQYY GPLHCSAWWF181 FSSHTKDRNC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO24)克隆號(hào)PP10897起始編碼子863 ATG 終止編碼子1430 TAA 蛋白質(zhì)分子量21317.911G CAT GAA TCA GGT AAG AAG CCA GAC TGC TGA GGC AGA GTA GGG GGG4647 AAG GAG GCA CAA GGG CCT TGC ACT CCA GCA AAG ATG GTA GAG ATG GGG9495 AAG CAT TCG GGC TGG ACA GGA GAG ACC CAG GTT CCA GGC GCA GTG TGA142143 AGC CTC AGC AGA CCC CAG TTT CAG AGG TTT GAG GAA GGA AAA TCA ACA190191 GAC ACC CCG GGT ATG AAG TAG GGG CCA GGT TGT GGG CTC TGC CTC TGG238239 GGA CAG GGC AGA TCC CTT CCT GCT TTA TTT GTG AGC CAC CTC AAC AGG286287 ACC CAG GCC ATC TGC AGG TAC TAG TGG CCT AGC TGG GTA GTC TTT CCT 334335 GAG GTC TCA CCT CAG GCC TTT GTG CTG CTG CTG TTG CTT CTG GCC TTG 382383 AGC CTG AGA GAG AGG TGA GAG GAA GGA TGC TTT CTC TAA CTT GGG CTC 430431 CTC CAA TCT CTG GTT GCA AAG CTG GGG TTG GGG GAG AGA GGA CCA CCC 478479 AAC CTG CCC TGT ACA AGC ATC AGT AAG ACT CCA AGT TTC CCA GGG CCC 526527 GAA CAC TTG GGG GTT GTC TCT CAA CAC CCG GCT GGA AGA CAA GTA GGT 574575 AAC CAG GTT CAG CCC CAC CTG CCA AGA ACA CTG TGT TTT GGG CCT GGC 622623 AGA GCT GCT ACT CCC CCT CTC CCT CCT AAG AAT GCC CAG AGA ATC ACT 670671 TGC CAA GGC TAC TCC TGG AGC TCA GCT GTG GGA TCA GGG TTT GGG CTG 718719 AGG ATC AGG TGC CTG TGT GCA CAC ATG TGC ACA TTG TGT GTG CCA ATG 766767 GGT GGT AGG GAT TGA GCC CGT TGT GAG AAC ATC CAG CCA GGT TGG AAG 814815 TGT GTA CAG GTA TCT GAG GGT GTG CAC GTG AGC AAG AGG GTG TGC AAG 862863 ATG TGG GTG ACT GTT GGG ACC ACA GAG CTG AGG CCT GTG GTC AGC TCA 9101 Met Trp Val Thr Val Gly Thr Thr Glu Leu Arg Pro Val Val Ser Ser 16911 GGT CAG AAC TGG GAG GTC TGT TTC CCT TGG GAG GAC CTG TCT GCT CTG 95817 Gly Gln Asn Trp Glu Val Cys Phe Pro Trp Glu Asp Leu Ser Ala Leu 32959 AGG GGG ACC CGG ACA AGT GCA CAT ATG CAT GTG TGT GTC TAC ACA CAC100633 Arg Gly Thr Arg Thr Ser Ala His Met His Val Cys Val Tyr Thr His 481007 ACA CAC ACA CAC ACA CAC ACA CAC ACA CAC ATA TGC TTG CCT CCC TCT105449 Thr His Thr His Thr His Thr His Thr His Ile Cys Leu Pro Pro Ser 641055 CCA AGG CAG ACT TGC CTG GGA AGT ACC CCT CCT CAG CAG GAG CTC GAA110265 Pro Arg Gln Thr Cys Leu Gly Ser Thr Pro Pro Gln Gln Glu Leu Glu 801103 GAC CCC TGC CCA GTG CTG TTT TCA GTA GAG GGA GTG GAG CTG AGA TGG115081 Asp Pro Cys Pro Val Leu Phe Ser Val Glu Gly Val Glu Leu Arg Trp 961151 GGA GAC CGT ACT GAG CGG TCC AGG AGT AGG GAA ACA GAG CTG CTT TGC119897 Gly Asp Arg Thr Glu Arg Ser Arg Ser Arg Glu Thr Glu Leu Leu Cys 1121199 AGC TTC TGT TCC AGA AGA TGG GGG TTG GGG GGC GGG GTT GAG GGC CAG1246113 Ser Phe Cys Ser Arg Arg Trp Gly Leu Gly Gly Gly Val Glu Gly Gln 1281247 GGG TGG GAG CAG GAG CAG AAC AGA AAG CCT CCC TGC TCA CTG GCC TTT1294129 Gly Trp Glu Gln Glu Gln Asn Arg Lys Pro Pro Cys Ser Leu Ala Phe 1441295 CCC CTT CCC TCA CTG GCT GCC CAT GGA GCC AGG ATC AGC ATG GGA ACA1342145 Pro Leu Pro Ser Leu Ala Ala His Gly Ala Arg Ile Ser Met Gly Thr 1601343 ATC AAG GAG GCA GGG GCT TAT CAG TAC TAT GGA CCC CTA CAC TGC TCT1390161 Ile Lys Glu Ala Gly Ala Tyr Gln Tyr Tyr Gly Pro Leu His Cys Ser 1761391 GCC TGG TGG TTC TTC TCT TCG CAT ACC AAA GAC AGA AAT TAA GCC TCC1438177 Ala Trp Trp Phe Phe Ser Ser His Thr Lys Asp Arg Asn *** 1901439 AAG AGT GGT AAC TGA CCT CGG TCA CAC TTG GTG GGT GTG GGA AAG GAT14861487 TCA AAT GTA GGT CTG TTC TCT TCT TCA TCT ATC ATG GTC CCT GTC CTG15341535 GAG GCA AGT CGT CTG GGG CTC AGA AAA CAC CCC TGT TGC CAC TGA TTG15821583 GAA TTC CAA GGG TCT GGG TGA AGT GGG GAT GGG CCT CCA GCT TGC CTC16301631 CAG CCT GAA AAA ATA GTA GAG GGT GTT GAG GCT GGG AAG GGA GGT GGG16781679 GCT CAT GTT GTA CAG GGC CTG AGC CAG GGA GCT TGG GCT TCA TTC TGA17261727 GTA CTG TGG CAG CCC TGG GAA GGT TTG TAG CAC AGA GGG ATA TTG TCA17741775 TTT TTG GAA AGA TCC CTT TGG CTG CTT AGG TAG AGA AGG GCT TCA AGA18221823 GGG CAG GAA GGG ACA GGA CTA CAG AAG GGG CTG CTT CAG AGT CCA GAT18701871 TAA GGA AGG AGA GGC CTG GGC AGT CAG AAA GGA AGA GAA GCC GGA TGT19181919 GGT GGC TTG TAT CTT CAA TCC CAG CAC TTT GAG AGG CCA AGG TGG GAG 19661967 GAT CAC TTG AGC CCA GGA GTT CAA AAC CAG CTT GGG CAA CAT AGT GAG20142015 ACT CCC ATC TCT CCA AAA AAA TTT AAA AAC CAG CCA GGT AGA CTG GGC20622063 GCA GTG GCT CAC GCC TGT AAT CCC AGA ACT TTG GGA GGC CGA GGC AGG21102111 CAG ATC ACG AGG TCA AGA GTT AGA GAC CAG CCT GAC CAA CAT GGT GAA21582159 ACC CCG TCT CTA CTA AAA ATA CAA AAC TTA GCC AGG CCT GTG GTG ATG22062207 CGC ACC TGT AGT CTC AGC TAC TCA GGA GGC TGA GGC AGG AGA ATC GCT22542255 TGA ACC CGG GAG GCA GAG GTT GCA CTG AGC TGA GAT CAC GCC ACT GCA23022303 CTC CAG CCT GGG CAA CAG AGT GAG ACT CCG TCT CAA ACA AAA AAA AAA23502351 AAA AAA AAA AAA23629.PP10933A核苷酸序列(SEQ ID NO25)長度1680個(gè)堿基1 GGGCGGGCGG AGCGCGGGCG CGGCGGGGGC GGGCGGCCAG GCTAGTCGGG CGGGTGCGCG61 GGGCGCTCGG GGCCCGGGGC CAGAGCTGGA GCCGGAGCCG GGCGGGCGCC ATGGAGGGGC121 TGCGGCGGGG GCTGTCGCGC TGGAAGCGCT ACCACATCAA GGTGCACCTG GCGGACGAGG181 CGCTGCTGCT ACCGCTGACC GTGCGGCCGC GGGACACGCT CAGCGACCTG CGCGCCCAGC241 TGGTGGGCCA GGGCGTGAGC TCCTGGAAGC GCGCCTTCTA CTACAACGCG CGGCGGCTGG301 ACGACCACCA GACGGTGCGC GACGCGCGCC TGCAGGACGG CTCGGTGCTG CTGCTCGTCA361 GCGACCCCAG GTAGTCTGGG TTGGAGGAGG CAGAGCCATG ACCAAGGGGA CCTGGGTACT421 GGCTGAAGGA ATAGGCTGGG GTAGAGGGCA CTTTTGGAAG GCACTTCTCC TGCCTCCTGG481 GAGCCTAGAT CTCACTCCAG GGTCTGGGCT CCCAGGTGGA CCATGAAACC CTGGCCTGAC541 CAGCTGATGC ACACTGCTTC AGACACTCCT GCTGGAGCCC CAGTCCCTGA CAAGGACCTA601 GGACATTTTT GCTCCTGCCC AGCCTATCGG GAGGGAGCCT TGAGCCTTTC AGCTCTGCTG661 TGTGACTTTG AGGTTGTTGC TCCCCTCTTG GGGCCCTGGG TGCCCTGTCT TCAGTGGAAA721 GCACTGTGCC ACCTTGGAAA GCTCCCATGG GCAGCCAGAG GGCATCGCAA GAAGAGAAGC781 ACAGAAGGGG CAGGAGAGAC ACTCAGAGGC ACTTCCGCTC TTGCCCAGGA CATTCTCCCA841 GCCACACCTT TGCCCAAGCC GTGCCCCCTG CCTGGAGCAC TTTTCAACCT CTTCTCTGCA901 GCTCCAATAC ACCTGGGATT GCAGTCTCCT CCAGGAAGTC TTCTCAGATT CCCTCCTTCC961 CAGCCAGAGA GCACCTAGCC TTCTTTGGGG CCCCCACAGG CCCTTTGTGC AGTGAACAGC1021 CCTGGCTGGG GGTGCAGCCA GTCGTGTCCG AACTCTCCAA TGACTAAGCG GGGAGATGCG1081 GACATCCTAG CTCCTTCTCA GGCCTCCAAC TGTGCCCCAT TTCCACCCCC AAATACCTCC1141 CCAGGAGGCA CCTGTGCCCA CCCCCTGGGC TGTTTCCCCC TTCCCCTTAA ATCCGGATGC1201 CTCGTCTTGC ATAGGGTCTT GGGGCAGCGG GGAAGGGGTT CTGAAGAACT CTGGCCAAGA1261 GGACGAGGAT CTGGGGGTGG GGAACTGGGC CTAGCTGTGG GAGGTCATCG CGGGGCATTG1321 CAGGGAGTGC GTTGTGGGAA TTCCGGGTGG AGACCCTCAG GGCAGTGTGC CGGGCCTCCG1381 TTGCACCTCT GACCTGCAGC CACGTCATCG TTGCGCAGCC CCTGGGGAGG GTCTTTGGGG1441 AGGGGGTGCC GAGGCTACGC ATGTCCTCGA GGGCCGTGTA CACTCTCCAG GCACCATGGG1501 CGGAGGCGCC AGAGGCTGGG AAGAAATAAT GTTTTAGTTA AGAGTCCTGT TGGCTGCAGG1561 ACTCAGAGCA TGGACAGGTG GATAGTAAAT CACCACCACG GGGAAAAAAA AAAAAAAAAA1621 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAAB核苷酸序列(SEQ ID NO26)長度151個(gè)氨基酸1 MKPWPDQLMH TASDTPAGAP VPDKDLGHFC SCPAYREGAL SLSALLCDFE VVAPLLGPWV61 PCLQWKALCH LGKLPWAARG HRKKRSTEGA GETLRGTSAL AQDILPATPL PKPCPLPGAL121 FNLFSAAPIH LGLQSPPGSL LRFPPSQPES TC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO27)克隆號(hào)PP10933起始編碼子523 ATG 終止編碼子976 TAG 蛋白質(zhì)分子量16073.761 GGG CGG GCG GAG CGC GGG CGC GGC GGG GGC GGG CGG CCA GGC TAG TCG4849 GGC GGG TGC GCG GGG CGC TCG GGG CCC GGG GCC AGA GCT GGA GCC GGA9697 GCC GGG CGG GCG CCA TGG AGG GGC TGC GGC GGG GGC TGT CGC GCT GGA 144145 AGC GCT ACC ACA TCA AGG TGC ACC TGG CGG ACG AGG CGC TGC TGC TAC 192193 CGC TGA CCG TGC GGC CGC GGG ACA CGC TCA GCG ACC TGC GCG CCC AGC 240241 TGG TGG GCC AGG GCG TGA GCT CCT GGA AGC GCG CCT TCT ACT ACA ACG 288289 CGC GGC GGC TGG ACG ACC ACC AGA CGG TGC GCG ACG CGC GCC TGC AGG 336337 ACG GCT CGG TGC TGC TGC TCG TCA GCG ACC CCA GGT AGT CTG GGT TGG 384385 AGG AGG CAG AGC CAT GAC CAA GGG GAC CTG GGT ACT GGC TGA AGG AAT 432433 AGG CTG GGG TAG AGG GCA CTT TTG GAA GGC ACT TCT CCT GCC TCC TGG 480481 GAG CCT AGA TCT CAC TCC AGG GTC TGG GCT CCC AGG TGG ACC ATG AAA 5281 Met Lys 2529 CCC TGG CCT GAC CAG CTG ATG CAC ACT GCT TCA GAC ACT CCT GCT GGA 5763 Pro Trp Pro Asp Gln Leu Met His Thr Ala Ser Asp Thr Pro Ala Gly 18577 GCC CCA GTC CCT GAC AAG GAC CTA GGA CAT TTT TGC TCC TGC CCA GCC 62419 Ala Pro Val Pro Asp Lys Asp Leu Gly His Phe Cys Ser Cys Pro Ala 34625 TAT CGG GAG GGA GCC TTG AGC CTT TCA GCT CTG CTG TGT GAG TTT GAG 67235 Tyr Arg Glu Gly Ala Leu Ser Leu Ser Ala Leu Leu Cys Asp Phe Glu 50673 GTT GTT GCT CCC CTC TTG 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ATG ACT AAG CGG GGA GAT GCG GAC ATC CTA GCT CCT TCT CAG GCC11041105 TCC AAC TGT GCC CCA TTT CCA CCC CCA AAT ACC TCC CCA GGA GGC ACC11521153 TGT GCC CAC CCC CTG GGC TGT TTC CCC CTT CCC CTT AAA TCC GGA TGC12001201 CTC GTC TTG CAT AGG GTC TTG GGG CAG CGG GGA AGG GGT TCT GAA GAA12481249 CTC TGG CCA AGA GGA CGA GGA TCT GGG GGT GGG GAA CTG GGC CTA GCT12961297 GTG GGA GGT CAT CGC GGG GCA TTG CAG GGA GTG CGT TGT GGG AAT TCC13441345 GGG TGG AGA CCC TCA GGG CAG TGT GCC GGG CCT CCG TTG CAC CTC TGA13921393 CCT GCA GCC ACG TCA TCG TTG CGC AGC CCC TGG GGA GGG TCT TTG GGG14401441 AGG GGG TGC CGA GGC TAC GCA TGT CCT CGA GGG CCG TGT ACA CTC TCC14881489 AGG CAC CAT GGG CGG AGG CGC CAG AGG CTG GGA AGA AAT AAT GTT TTA15361537 GTT AAG AGT CCT GTT GGC TGC AGG ACT CAG AGC ATG GAC AGG TGG ATA15841585 GTA AAT CAC CAC CAC GGG GAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA16321633 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA168010. PP11246A核苷酸序列(SEQ ID NO28)長度2059個(gè)堿基1 GAGCCTGAGG GACCCGGCGG CTGGTGAGCG CCCGCTGGAG GCTGGAGCTT CCGGGCCCTG61 GAAAGGGGTC CCCGCGCGCC CCGGGTCGGA GGCAGACCCC TGGGTTTGGG GGACATGGGC121 ATTTGGGGCG CCTGAACCCA AGACCTCTGG ATGGTAGGGA TGCCCGGGCG TCCTGGATAC181 CCTGCGGGAC TCGGGGCTCC TGCGGGGAAG ATGGCACGTT TTACTGCCCA AGGAGTGGTC241 AGGGGGGTGG AGAAGCGCTG CGGATACCCT CAGGAGGTCT GCGACAGAGG GGGCTAGCTG301 CGCAGCCCAG GAGTGGTAGT GGCCCCCCTG GATGACAGGC CTGCCCGTAT CCTCCCCCAG361 AGCTGCCCCG TTCAGACCAT GGATCCTGAG GTGACCTTGC TTGTGCAGTG CCCTGGCGGG421 GGCCTGCCCC AGGAGCAGAT ACAGGCCGAG CTGAGCCCCG CCCATGACCG TCGCCCACTG481 CCAGGTGGGG ACGAGGCCAT CACTGCCATC TGGGAGACCC GGCTAAAGGC CCAACCCTGG541 CTCTTCGACG CCCCCAAGTT CCGCCTGCAC TCAGCCACCC TGGCGCCTAT TGGCTCTCGG601 GGGCCACAGC TGCTCCTGCG CCTGGGCCTT ACTTCCTACC GAGACTTCCT GGGCACCAAC661 TGGTCCAGCT CAGCTGCCTG GCTGCGACAG CAGGGTGCCA CCGACTGGGG TGACACGCAG721 GCCTATCTGG CGGACCCACT GGGGGTGGGC GCTGCACTAG CCACAGCCGA TGACTTCCTT781 GTCTTCCTGC GCCGCTCCCG GCAGGTGGCT GAGGCCCCTG GGCTGGTGGA 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Leu Pro Ala Leu Val Ser Pro Ser Leu Lys Gly194961 AAA TTG GCC TGG TAT TTC TCT GGA AGT TTG CTC AGG GCA GTC CAC CTG 1008195 Lys Leu Ala Trp Tyr Phe Ser Gly Ser Leu Leu Arg Ala Val His Leu2101009 CCT CCC CAC TGA CCC CTG CCC CAG TCC TGT GAG AAA CTA GAA AAC ACG 1056211 Pro Pro His ***2141057 GGA GGA AAG ATT GGG CAC AGG AAG AAG ATG CCC TAC TCC ACC CCT GCC 11041105 CCC TGT GTA TCT CCT TTG AAG CTG GAC CTC TGG TTG TCT GTC AGG GAA 11521153 AGG ACA CCA GAC TCA GGA TCA CTA ACT CTC TTA CAC TGT GCC ACA TCA 12001201 GAC CCT CAA GGC CAG CAG GTA TAG GCT TGC TGG TCC TGA GAT GGG GCA 12481249 GGG GGA AGA GGT GGG GAG CAG GGG CTG AGC CTG ACC TCT CAC AGG CCC 12961297 TGT GCC CTG GTG GCA GCC CCC AGC ACC AGG ACC TCG CTG GGC AGC TGG 13441345 TGG TAC ATG AAC TCT TTT CCA GTG TCC TTC AGG AGA TCT GTG ATG AGG 13921393 TGA GTG AGG TTG ACC TGG ACA GGG TGG TAG ACA TGA AGG GAG GGG GTA 14401441 GGA CTT GCC AGA ATT CTA CAG GTC TGG GCT GGC AGG AGG CCT GCA GGC 14881489 ATC TGG CCA GCA ATG AGG GAA GAA GTT GGC TTT GCA GCT ATA 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AGGGTGAGTG TCCTAACTGC ATGCCCAACT CATCTCCTGC ACTCTGCATG181 CCGAGGTGCC CCCCGAATGC CAGGAAGGCA TCTGTGGCTG GGCATGGTGG AGCCACCTTG241 ACAGAGCGCA GAGAGCCGTT TCCACTAACG CCTCCCGGTG CTGTCCTGGT CGGCCTGCGA301 TGGGGGTCCT GGCTGAGCCC AAGCAAGGGG AGGGAGCTCA GGGCTGACCC CTCTGCCAGA361 GATCGGCTCT GTGCTTGGAA TATGGAACCC AAAGACCTTA ACACTGCCCT TCTCTCTGCC421 TTCACCACTC CAGGAGCCCG GTGGGCACCT ACCACATCTC TAGTCTAGCC AGCACGCGAG481 TCCCGAGGGT GGGCCTGAAT TCCTGAGCTT GCTCTCGCGT GCCTTTCAGG CGATGAGAAT541 GATTTATTTG TTTGTGATGC ATGTTTGCTG AAAGATTAAT AAATCATTTC TGTGCCTTTA601 GCAAACTTCC TGTGTTGCTC TTAAAAAGGG ATCATCCACC TTCCCGGACC ACAAGGTTAA661 GGTAACCCCG CTAGGTAACC CTGATAGGCC TGCTGCGGGG CAGACCGACA GAGAGAGAGA721 GAGTGAGGGC GAGGGTGAGG TAAGCAACGC CCCGGGAACC CCGGGGTCCC TGGCTCACAT781 CTCCTCGCCA GCTCAGGCGC CTTCTGGGAA AATGAATCCT TGCATTTTTC TGTTCTCTAA841 TATGGCTTTT GAGGTCTTAA ATTTGAGGAG CCGGAATCAT GCCTTCCTCC TAATCTGCAG901 GGCCTCTTTG GAGCTGCCCC CGCCAGCAGT GAAGGGTGCT TGTCGGCCAG GGCGCCTCTC961 CCCGGGCGCC TGGCTGGAGG TGGCTGGAGC TGGGACGGGC 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971103 GAG CTC GGG GCT CTT GCT CCA AGA CTC TTG AGC TCC CAG GAA GAC CTG115098 Glu Leu Gly Ala Leu Ala Pro Arg Leu Leu Ser Ser Gln Glu Asp Leu 1131151 CCA CAC CGG CAT CAG TGG CTG CTG CTG TGG CCA CGT GAG GTG GGG CTG1198114 Pro His Arg His Gln Trp Leu Leu Leu Trp Pro Arg Glu Val Gly Leu 1291199 TGA GGG GAG GCG GCT GCT GTG GAT GAT GCC AGG ACC CTG GGG GCA GAG1246130 *** 1301247 CCT CTG AGA AGG TGG GCT CCC TGG CTG CAC AGT GTC AGG CAG AAC CCC12941295 TGG CTG CCT GCT GAA AGC CCC AAG GTC AGG GGC TGC CCA GCT CCC CGC13421343 GCT GCG GTC TGT GGT GGC CCC GTG CAT GCA CCG GGT GGC TGG CCC GCT13901391 GAG CTT CCC CGG CAC CAG GTG CCC TGG ACC TCG AGG TCC TGA GCC TGA14381439 CCC AGG GCT GGT CTG ACC GAC TCT CTG CTT CTG GCT CCT GGG CAC TTC14861487 TTC TCA GCT CAG GGC GTG CTC TGT CAA AAC CAA GTC CTT TCT TGG CTC15341535 TGT GTC AGG CGG GGT GTT CAG CAG GGG TCA CCT GGC TCT TCT GTC TTT15821583 GCA GGG CCC CCT CGT GCG CTG GCT CAA GGT GAA CTT CAG TGA AGC CTT16301631 CAT TGC CTG GAT CCA CAT CAA GGC CCT GAG AGT GTT TGT GGA GTC CGT16781679 GCT CAG GTG CGT GGC AGT GAT GCC CCG GCT GGG ACT GTC CTG AGG ATG17261727 GGC AGG GTC TGG GGG AGC TAT CGG GGC ACC CCA GCT CCT GCC TTC TCT17741775 CCA TCC TCC ACC CGT CTC CTT TCT GAG ACT GTG GCT GTT GGC AAC ACG18221823 CTC AAT TCC GAG TCA AGT ACA CCC TCC CCT CAG CCC TGT GTC CCC TGC18701871 TGT CTG CTC CCT CCG TTC CTG CTA CAC TTG GGG CAA GTG TCA CCT GGG19181919 TTC TCC CCA GCT GCC CTA CCT GCA TGC CCT TGT GGA CCC TCT GGC TGG19661967 CTC CTG TCC CCA CCC TCG TGA AGC CGC AGG GCC GAG TGG CTC CTG GAA20142015 GGC GCT CTC GGG CTG CCT CCG TCC TCA GCC TGG AAG CCG CAC CCC TCA20622063 AGG CAG TCC AGA GAG AAA ACC AAA ACC ACA CCA ACA ACA ACA AAG CTT21102111 ATT TTG CCT TTT TTT TTT TTA TTT GAG ATG GAG TTT CAC TCT TGT CGC21582159 CCA GGC TAG AGT GCA ATG GCA TGT TCC TGG CTC ACT GAA ACC TCC ACC22062207 TCT CAG GTT CAG GAG ATT CTC CTG TCT CAG CCC ACC TCT ACT AAA AAT22542255 ACA GAA ATT AGC CGG GTG TGG TGG CAT GGG CCT GTA GTA CTG GCT ACT23022303 TGG GAG GCT GAG GTG GGA GGA TCA CTT GAG 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NO36)克隆號(hào)PP11517起始編碼子512 ATG 終止編碼子1115 TAG 蛋白質(zhì)分子量22212.071G CCA GTG GGA GCA GGC GCC CCG GCC AGC GCA GAC CTG GAG GCG CAC 4647 GGG CGC CGC ACC GCA CGA TTC GGC TCG GGG TAG AGC GGA GCC GCA GCC 9495 CCA CGC GCA GCC CAG GAC CCA CTC GCC ACC GCC GCT TCC TCA GCA CCC 142143 ATG GGG ACC AGG AGA CTT TAA AGG AGT TTG GGG TTT CGG GAG CAG GGA 190191 AAT CAC GGA TCC CCG CTC CTG GCC CTC GCC TCG CCA CCT CAT TGA TGG 238239 GCA ACC AAC TGG ACC GCA TCA CCC ACC TCA ACT ACA GCG AGT TGC CCA 286287 CAG GGG ACC CGT CGG GGA TTG AAA AGG ACG AAC TGC GGG TCG GGG TTG 334335 CCT ACT TCT TCT CGG ATG ATG AGG AAG ACC TGG ACG AAC GCG GGC AGC 382383 CCG ACA AGT TTG GCG TGA AGG CCC CCC CGG TTG CAC CCC CTG CCC GGA 430431 GAG CCC CAG CCG CCA CCA CCA CCA CCT GCT GCA CCA GCT GGT CCT CAA 478479 CGA GAC TCA GTT TTC CGC CTT TCG GGG CCA GGA ATG CAT CTT TTC CAA 5261 Met His Leu Phe Gln 5527 AGT GAG CGG TGG CCC TCA GGG CGC CGA CCT AAG CGT CTA CGC GGT CAC 5746 Ser Glu Arg Trp Pro Ser Gly Arg Arg Pro Lys Arg Leu Arg Gly His 21575 CGC GCT GCC AGC CGT CTG CGA ACC CGG CGA CCT GCT GGA GCT GCT GTG 62222 Arg Ala Ala Ser Arg Leu Arg Thr Arg Arg Pro Ala Gly Ala Ala Val 37623 GCT GCA GCC CGC GCC GGA GCC GCC CGC GCC CGC CCC GCA CTG GGC CGT 67038 Ala Ala Ala Arg Ala Gly Ala Ala Arg Ala Arg Pro Ala Leu Gly Arg 53671 CTA CGT GGG CGG CGG GCA GAT CAT CCA CCT GCA CCA AGG CGA GAT CCG 71854 Leu Arg Gly Arg Arg Ala Asp His Pro Pro Ala Pro Arg Arg Asp Pro 69719 CCA GAC AAG CCG GAT GAG GCG GGC GCG GCC AAC GTG GGC CGG GTG GTG 76670 Pro Asp Lys Pro Asp Glu Ala Gly Ala Ala Asn Val Gly Arg Val Val 85767 AAT AGC TGG TAC CGC TAC CGC CCG CTG GTG GCC GAG CTG GTG GTG CAG 81486 Asn Ser Trp Tyr Arg Tyr Arg Pro Leu Val Ala Glu Leu Val Val Gln 101815 AAC GCC TGC GGC CAC CTG GGC CTC AAG AGC GAG GAG ATC TGC TGG ACG 862102 Asn Ala Cys Gly His Leu Gly Leu Lys Ser Glu Glu Ile Cys Trp Thr 117863 AAC TCG GAG AGC TTC GCC GCC TGG TGC CGC TTT GGC AAG CGG GAG TTC 910118 Asn Ser Glu Ser Phe Ala Ala Trp Cys Arg Phe Gly Lys Arg Glu Phe 133911 AAG GCG GGA GGG GAG GTG CCG GCA CGG CTA GCC CCC GCA GCA GCA GTA 958134 Lys Ala Gly Gly Glu Val Pro Ala Arg Leu Ala Pro Ala Ala Ala Val 149959 CTA TCT CAA GGT GCA CCT GGG AGA GAA CAA GGT CCA CAC CGC CAG TTT1006150 Leu Ser Gln Gly Ala Pro Gly Arg Glu Gln Gly Pro His Arg Gln Phe 1651007 CAC AGC CTG GAA GAC CTC ATC CGC GAG AAG CGC CTG TAT CGA CGC CAG1054166 His Ser Leu Glu Asp Leu Ile Arg Glu Lys Arg Leu Tyr Arg Arg Gln 1811055 CGG CCG CCT GCG AGT GCT CCA GGA GCT CGC CGA CCT CGT GGA CGA CAA1102182 Arg Pro Pro Ala Ser Ala Pro Gly Ala Arg Arg Pro Arg Gly Arg Gln 1971103 GGA GTA GCC GCC TAG GGG CTG CCG GCC CCT CTG CCT CCC CCG CAC CTC1150198 Gly Val Ala Ala *** 2021151 GCT CCC TTC CCT TCC CCG CAC CCG GAC TTC GCA GTC AGC GGT TCT AAA11981199 CCT CTG CCC CGC CCC GCC ACG CGC GTC CGC CGC CGG TGG CCC GGG CCC12461247 GGG CTT GCA CCC CCG CAT CCC CAA GCC AGC GGC AGG GAA GTC TCA GGA12941295 ACT GCC CCA GGC CGA AAG GCG CCG CTG CGA GCG CCT GGC TGA CAG CCA13421343 CAG CGG TGG TGA CGG TGC TGG GAG ACC CCG CGT GCG CTT TCC CCT TGA13901391 GAT GTA AAC CGG GAA CGG GGA AGG GGC TGA GGG GAG AAA GGA CAT GGC14381439 CTT CCC CGC GAG TCC ATG GCC AGT GAC TGT GGC CCG ACT CGA AAA CAA14861487 CCC TCT TCT CAA AAG GGA CCA TCA CCG CCC CGA GCG TGC GCA CAC AGA15341535 CCG GTC GGA GGC GAG AAC TGG TCT CTA CAG GGC ACA GTT CAG CTC CTC15821583 TGT GGA TGC GTC CCC AGA TCG CAG GAT TTC CAA GAA ATC GAG CCT GTC16301631 CCT TGT GCA CTT GGG AAT AAT TCC CCA AGA CAG CAC TTC GGG ATT CCG16781679 GGT TAT CCT GAG GCT GCC CGG GAC TTT TCC AGC TCT CCA GCC CCA GGT17261727 CTC CTG ACA TTG TGT TCC AGG CTG CGG GCT AAG CCA GAC AGT GTT TGC17741775 CTC CGG TTC TTT CCA CCG TGG GAA GCG AAC GCC ACC CCC ACC CGC CTT18221823 TGC CTG CGA GTC TCC CTC GCT GGC AGA AGG GAA GCC GGC CCG GTC CCG18701871 GGA GGA AGA TGG CCG CTG CGA ATT CGG TGA GGA CAG CCG GCC CCG CCC19181919 CCG ACA AGG AGC TCG CTC GTT CAC CTG GTG TCT GGG AAC TTG AAT GTG19661967 TGA AGG GCG CTT ATT GTT CTG AAC CCT TGA TTG CTC CCT CCT CGG GCT20142015 GCA TTT CAA AAA TAG TCA TAT TTT TAA AGG AGT TGG AGG AGA GGG AGG20622063 GGG AGG ACA TGG CAC CAT TCC AGA AAC CAG CAT TGC TAC AAC ACC ATA21102111 GCC AGT ATA TTT AGC TTT GGC TTT TCC TAA CAT AGA AAT CTT CAA AGC21582159 TGG GGA AGT GG 2169
權(quán)利要求
1.一種分離的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白，其特征在于，它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2.如權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
3.一種分離的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相同性(a)編碼如權(quán)利要求1和2所述多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。
4.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
5.如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36的編碼區(qū)序列或全長序列。
6.一種載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求3所述的多核苷酸。
7.一種遺傳工程化的宿主細(xì)胞，其特征在于，它是選自下組的一種宿主細(xì)胞(a)用權(quán)利要求6所述的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞；(b)用權(quán)利要求3所述的多核苷酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。
8.一種具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白活性的多肽的制備方法，其特征在于，該方法包含(a)在適合表達(dá)具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的條件下，培養(yǎng)權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白活性的多肽。
9.一種能與權(quán)利要求1所述的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白特異性結(jié)合的抗體。
10.一種核酸分子，它含有權(quán)利要求3所述的多核苷酸中連續(xù)的10-800個(gè)核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白，編碼此多肽的多核苷酸和經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生該多肽的方法。本發(fā)明還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明還公開了編碼這類新的具有促進(jìn)3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
文檔編號(hào)C07K14/435GK1403476SQ0112672
公開日2003年3月19日 申請(qǐng)日期2001年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月12日
發(fā)明者顧健人, 楊勝利 申請(qǐng)人:上海新世界基因技術(shù)開發(fā)有限公司