專利名稱：抗腫瘤活性化合物曲霉菌素p的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說它是以稻瘟霉分生孢子生長抑制和菌絲體形態(tài)變化為指標(biāo)，對土壤真菌泡盛曲霉(Aspergillusawamori Nakazawa)的無性世代代謝產(chǎn)物進(jìn)行活性追蹤分離，從中提取具有新骨架的抗真菌、抗腫瘤活性化合物曲霉菌素P(AspergillinP)。
背景技術(shù)：
近年來研究表明，化合物引起稻瘟霉分生孢子和菌絲體形態(tài)上的變化與其抗真菌、抗腫瘤活性之間存在很好的相關(guān)性[1.HisayoshiKobayashi，Michio Namikoshi，Takeshi Yoshimoto.A screening method forantimitotic and antifungal substances using conidia of Pyricularia oryzaeand application to tropical marine fungal.J Antibiot，1996，49(9)873～879]，可以以其形態(tài)上的特征變化來篩選有特定活性類型的化合物。
土壤真菌次級代謝產(chǎn)物的研究一直是藥物開發(fā)的一個熱點(diǎn)，并從中開發(fā)出很多抗真菌、抗腫瘤藥物。有文獻(xiàn)報(bào)道從曲霉屬真菌次級代謝產(chǎn)物中分離得到了一系列與化合物曲霉菌素P結(jié)構(gòu)類似的化合物AspochalasinA-H，其中化合物Aspochalasin F和Aspochalasin G具有對抗HL-60和MH-60癌細(xì)胞株活性[2.Fang Fang，Hideaki Ui，Kazuro Shiomi，et al.Twonew components of the aspochalasins produced by Aspergillus sp.JAntibiot，1997，50(11)919～925]，而且均能使稻瘟霉菌絲體發(fā)生中等強(qiáng)度的變形，進(jìn)一步說明化合物致稻瘟霉菌絲體形態(tài)變化和抗癌活性之間存在一定的相關(guān)性。文獻(xiàn)報(bào)道的Aspochalasin F和Aspochalasin G僅占粗提物的0.13‰和0.14‰，而化合物曲霉菌素P占粗提物的8.33‰。因此，可以考慮從菌種改造方面入手對其進(jìn)行大量的制備，為進(jìn)一步的活性研究提供物質(zhì)保障。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于利用中國廣闊的土壤真菌資源，提出一種以人工發(fā)酵生產(chǎn)泡盛曲霉的發(fā)酵液為原料，提取分離具有新骨架抗真菌、抗腫瘤活性化合物曲霉菌素P的提取分離方法。
本發(fā)明以中國河北省武安市上團(tuán)城鄉(xiāng)采集的土樣樣品中分離得到的0288-1號菌株為生產(chǎn)菌[經(jīng)中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所王書錦研究員鑒定為泡盛曲霉(Aspergillus awamori Nakazawa)]進(jìn)行大批發(fā)酵，發(fā)酵液用乙酸乙酯萃取，減壓回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸膏。經(jīng)過硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，合并100∶2洗脫部分，用氯仿-甲醇(1∶10)進(jìn)行重結(jié)晶，得到一無色透明方晶，命名為曲霉菌素P。該化合物難溶于甲醇中，易溶于氯仿。分子量EI-MS m/z401(M+)。分子式C24H35NO4。核磁共振光譜數(shù)據(jù)見附圖1。結(jié)合EI-MS、1H-NMR(300MHz，DMSO)、13C-NMR(75MHz，DMSO)、1H-1H COSY、HMQC和HMBC圖譜鑒定了其結(jié)構(gòu)，并用X-ray單晶衍射進(jìn)行了證實(shí)見附圖2、3、4。
體外抗稻瘟霉實(shí)驗(yàn)表明，該化合物在8.90×10-5mol/L濃度下能誘導(dǎo)稻瘟霉分生孢子發(fā)生嚴(yán)重變形，推測可能具有抗癌活性。本發(fā)明提供了一種以發(fā)酵生產(chǎn)泡盛曲霉的發(fā)酵液為原料，提取分離具有新骨架抗真菌、抗腫瘤活性化合物曲霉菌素P的提取分離方法，為將來開發(fā)新的抗真菌藥物提供天然藥物化學(xué)研究基礎(chǔ)。


圖1是化合物曲霉菌素P的核磁共振圖譜數(shù)據(jù)。
圖2是化合物曲霉菌素P的分子相對構(gòu)型圖。
圖3是化合物曲霉菌素P的分子立體結(jié)構(gòu)投影圖。
圖4是晶胞沿A軸方向的投影圖。
圖1中aC-2’-Me和C-3’碳譜數(shù)據(jù)可以相互交換
具體實(shí)施例方式實(shí)施例人工方法生產(chǎn)的泡盛曲霉(Aspergillus awamori Nakazawa)過濾發(fā)酵液7L過濾，上清液用乙酸乙酯萃取，減壓回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯層浸膏15g，經(jīng)過硅膠柱色譜(300g)，氯仿-甲醇梯度洗脫，合并100∶2部分，氯仿∶甲醇(1∶10)重結(jié)晶，得化合物曲霉菌素P100mg。
權(quán)利要求
1.抗腫瘤活性化合物曲霉菌素P，其特征在于曲霉菌素P(AspergillinP)具有如下結(jié)構(gòu)
2.一種如權(quán)利要求1所述的抗腫瘤活性化合物曲霉菌素P的制備方法，其特征在于提取分離該化合物所采用的方法是以人工發(fā)酵生產(chǎn)的泡盛曲霉(Aspergillus awamori Nakazawa)的發(fā)酵液為原料，用乙酸乙酯萃取，萃取物經(jīng)硅膠柱層析、再經(jīng)重結(jié)晶分離而得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗腫瘤活性化合物曲霉菌素P的制備方法，其特征在于經(jīng)過硅膠柱層析后，還應(yīng)進(jìn)行氯仿-甲醇梯度洗脫，合并1002洗脫部分。
全文摘要
本發(fā)明是一種抗腫瘤活性化合物曲霉菌素P,它利用廣闊的土壤真菌資源提取,它是以人工發(fā)酵生產(chǎn)的泡盛曲霉的發(fā)酵液為原料,用乙酸乙酯萃取,萃取物經(jīng)硅膠柱層析、再經(jīng)重結(jié)晶分離而得,結(jié)構(gòu)式如上，本發(fā)明為將來開發(fā)新的抗真菌藥物提供了天然藥物化學(xué)研究基礎(chǔ)。
文檔編號C07D491/00GK1349991SQ0113348
公開日2002年5月22日 申請日期2001年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月22日
發(fā)明者裴月湖, 張祎 申請人:沈陽藥科大學(xué)