專利名稱:干細(xì)胞增強(qiáng)材料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及具備增強(qiáng)人類含動物干細(xì)胞機(jī)能的干細(xì)胞增強(qiáng)材料。
作為體性干細(xì)胞一種的造血干細(xì)胞是血液的干細(xì)胞,在維持造血機(jī)能上是最重要的物質(zhì)。這種造血是由骨髓進(jìn)行,另外,在胎生期,進(jìn)行造血的器官隨胎生月齡的增加而發(fā)生變化,還已知在出生前骨髓發(fā)揮造血作用。骨髓造血,最初生成造血干細(xì)胞,其后,該造血干細(xì)胞增殖、分化成紅血球和白血球供給體內(nèi)。所以,作為骨髓造血作用的造血干細(xì)胞的生成通常正常地進(jìn)行,而且是維持人和家畜等其它動物健康不可缺少的。
一方面,受大量放射線照射和受抗癌劑施用,不會因這些急性病癥死亡,但是其副作用使骨髓的造血機(jī)能,即造血干細(xì)胞的生成機(jī)能受到損壞而降低,其結(jié)果使紅血球和白血球等造成的血球的生成降低,造成死亡。
這種血球的生產(chǎn)機(jī)能損壞發(fā)生時,實現(xiàn)了由癌治療造成癌細(xì)胞的減少或消滅,與由血液不足造成生命的死亡沒有關(guān)系。換言之,如果正常維持骨髓的造干血細(xì)胞,發(fā)揮癌治療效果,是可以戰(zhàn)勝癌癥的,但是目前這是不可能的。
而且,為了提高癌癥治療等的治療效果,也希望開發(fā)骨髓干細(xì)胞的增強(qiáng)材料。
再者,為了使健康體的體力增強(qiáng),提高抵抗力,也要求開發(fā)骨髓干細(xì)胞增強(qiáng)材料。
另外,如果除造血干細(xì)胞外其它的體性干細(xì)胞也能夠增強(qiáng)的話,可以進(jìn)行各種疾病的預(yù)防或治療。例如,如果神經(jīng)干細(xì)胞可以增強(qiáng),就可以實施阿爾察默病的預(yù)防或治療;如果骨髓干細(xì)胞可以增強(qiáng),就可以實施骨質(zhì)疏松病等的預(yù)防或治療;如果肝臟干細(xì)胞可以增強(qiáng),就可以實施肝臟疾病的預(yù)防或治;如果腎臟干細(xì)胞可以增強(qiáng),就可以實施腎臟疾病的預(yù)防或治療。
再者,如果胚性干細(xì)胞可以增強(qiáng),可以促進(jìn)胚性干細(xì)胞的細(xì)胞分化。在該胚性干細(xì)胞中,預(yù)先含作為信號傳達(dá)物質(zhì)的斯坦脫(STAT)3,仍然維持胚性干細(xì)胞不分化,隨著該STAT3與女性荷爾蒙容易反應(yīng),胚性干細(xì)胞開始增殖。所以,研究它莫西分(tamoxifen)那樣選擇性的雌激素受容體調(diào)節(jié)劑(SERMs)代替女性的荷爾蒙。但是,SERMs的作用機(jī)理不十分清楚,有毒性等的副作用,希望SERMs對人具有有效機(jī)能性。按此觀點,期待異黃酮甙元具有SERMs作用機(jī)能的有效性。
本發(fā)明的第二目的是提供可以不阻礙細(xì)胞增殖因子作用的酶的酶活性,保持雌激素那樣的作用,使用異黃酮甙元可增強(qiáng)干細(xì)胞的干細(xì)胞增強(qiáng)材料。
本發(fā)明者進(jìn)行深入研究,發(fā)現(xiàn)對大白鼠照射放射線,在異黃酮甙元和谷類用曲菌發(fā)酵使蛋白質(zhì)分解的生成物再加水分解時,當(dāng)該生成物中含乳酸菌和/或向上述生成物添加乳酸菌增殖促進(jìn)生成物,上述兩方面經(jīng)口攝取時,其后移植健康大白鼠的骨髓,發(fā)現(xiàn)脾臟的機(jī)能大大恢復(fù),這些異黃酮甙元或谷類由曲菌發(fā)酵使蛋白質(zhì)分解的生成物再添加水分解時,當(dāng)該生成物中含乳酸菌和/或向上述的生成物添加乳酸菌增殖促進(jìn)生成物的體內(nèi)吸收,可以增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞,從而完成了本發(fā)明。
再者,根據(jù)本發(fā)明人的深入研究,發(fā)現(xiàn)當(dāng)異黃酮甙元和谷類由曲菌發(fā)酵使蛋白質(zhì)分解的生成物再添加水分解時,當(dāng)該生成物中含乳酸菌和/或向上述的生成物添加乳酸菌增殖促進(jìn)生成物,無論如何由于含有異黃酮甙元的一種即大豆甙元的作用(雌激素樣的作用),一次能夠增強(qiáng)干細(xì)胞,從而完成了本發(fā)明。
說明該干細(xì)胞的作用,按照本發(fā)明制備的異黃酮甙元增強(qiáng)的干細(xì)胞具有自己復(fù)制、分化增殖的性質(zhì),該細(xì)胞增殖與酪氨酸激酶等的增殖因子作用的酶有關(guān)。但是,由于異黃酮甙元的一種即染料木黃酮有阻礙該酪氨酸激酶活性的作用,因此不可能期待用染料木黃酮增殖干細(xì)胞。為此,按照本發(fā)明制備的異黃酮甙元,特別是在用溶劑提取濃縮的異黃酮甙元的組分中,由于大量含有大豆甙元,染料木黃酮的含量少,所以,推測含有大量的大豆甙元的雌激素的作用主要機(jī)能是增強(qiáng)干細(xì)胞。
更詳細(xì)地說,胚性干細(xì)胞不但存在體性干細(xì)胞信號傳達(dá)物質(zhì),而且特別可分出重要承擔(dān)細(xì)胞分化的STAT3。考慮STAT3的活性化有維持干細(xì)胞未分化狀態(tài)的作用,但是,在STAT3與雌激素受容體(ER)的配位體結(jié)合領(lǐng)域和融合蛋白質(zhì)(STAT3ER)的情況下,形成未分化的菌落,更引起分化增殖。所以,認(rèn)為按照本發(fā)明制備的異黃酮甙元的一種即大豆甙元對雌激素的作用,與ER的結(jié)合,是STAT3ER所起的作用,可以增強(qiáng)骨髓干細(xì)胞。據(jù)此,按照本發(fā)明制備的異黃酮甙元也可以增強(qiáng)STAT3作信號傳達(dá)物質(zhì)的胚性干細(xì)胞。
這樣制備的本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是有具備干細(xì)胞增強(qiáng)作用的異黃酮甙元。該干細(xì)胞是形成各臟器或形成各組織來源的含造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞的體性干細(xì)胞或胚性干細(xì)胞。該異黃酮甙元增強(qiáng)干細(xì)胞的作用,可列舉出不阻礙細(xì)胞增殖因子作用的酶活性的雌激素作用。
按照本發(fā)明的具有具備增強(qiáng)干細(xì)胞作用的異黃酮甙元的干細(xì)胞增強(qiáng)材料在體內(nèi)被吸收,可以增強(qiáng)體性干細(xì)胞。
再者,本發(fā)明的含有具備增強(qiáng)干細(xì)胞作用的異黃酮甙元的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,當(dāng)具有另外的胚性干細(xì)胞的信號傳達(dá)物質(zhì)作用時,可以增強(qiáng)該胚性干細(xì)胞。
下面,具體說明造血干細(xì)胞,含有具備干細(xì)胞增強(qiáng)作用的異黃酮甙元的干細(xì)胞增強(qiáng)材料在體內(nèi)吸收,可增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞。
即,在該異黃酮甙元中含有能夠增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞機(jī)能的雌激素作用那樣的大豆甙元。因此,異黃酮甙元在體內(nèi)被吸收時,大豆甙元與雌激素按相同的作用與造血干細(xì)胞的ER結(jié)合,起STAT3ER的作用,增強(qiáng)了骨髓的造血作用,造血干細(xì)胞增殖,分化成紅血球和白血球向體內(nèi)供給合適量血球等成分的血液。
據(jù)此,本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)原材料經(jīng)口攝取或點滴在體內(nèi)被吸收時,可以使作為骨髓的造血作用的造血干細(xì)胞的生成正常地進(jìn)行,向體內(nèi)供給有合適量的血球等的成分的血液,例如,可以防止受大量放射線照射,受癌治療法的放射線照射,受投予的抗癌劑的情況下引起的骨髓造血機(jī)能降低,可以期待降低的造血機(jī)能大大恢復(fù)。據(jù)此,由于本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料經(jīng)口攝取或點滴等在體內(nèi)被吸收,沒有副作用的實施癌治療,可以期待可能戰(zhàn)勝癌癥。
再者,本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料經(jīng)口攝取或點滴在體內(nèi)被吸收時,增強(qiáng)骨髓的造血干細(xì)胞,發(fā)揮向體內(nèi)供給有合適量的血球等成分的血液的機(jī)能,進(jìn)行預(yù)防各種疾病,可期待維持健康。
另外,本發(fā)明的異黃酮甙元在體內(nèi)被吸收時,該造血干細(xì)胞以外其它的體性干細(xì)胞也同樣的被增強(qiáng)。
再者,在胚性干細(xì)胞中,相對作為其信號傳達(dá)物質(zhì)的大豆甙元STAT3,以和雌激素同樣的作用與ER結(jié)合,形成ER配位體結(jié)合領(lǐng)域和STAT3ER,形成未分化的菌落,而且可以進(jìn)行分化增殖。
來自谷物的原材料能夠保有異黃酮甙元這樣的作用。而作為來自谷物原材料優(yōu)選豆類,異黃酮甙元優(yōu)選用曲菌使豆類發(fā)酵,用曲菌酶加水分解豆類成分制成。再者,這樣得到的異黃酮甙元優(yōu)選用溶劑提取濃縮。這種情況下的異黃酮甙元含大豆甙元至少70重量%。
這樣制備的本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,用曲菌使豆類發(fā)酵制曲處理后,將其進(jìn)行加水分解處理,大豆粕中的蛋白質(zhì)和/或糖質(zhì)完全分解成含大量異黃酮甙元的生成物,可以達(dá)到含前述骨髓造血干細(xì)胞的體性干細(xì)胞和胚性干細(xì)胞增強(qiáng)作用的更好效果。
再者,本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是用曲菌使豆類發(fā)酵,讓蛋白質(zhì)分解的生成物再加水分解,該生成物中含乳酸菌和/或向上述生成物中添加乳酸菌增殖促進(jìn)生成物(下文,<稱曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物>)。
這種曲菌大豆培養(yǎng)物,與前述的異黃酮甙元同樣,具有增強(qiáng)含骨髓造血干細(xì)胞的體性干細(xì)胞和胚性干細(xì)胞的機(jī)能,也發(fā)揮同樣優(yōu)良的作用。
圖2表示實施例1中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等,在放射線照射后脾臟重量變化圖。
圖3表示在實施例1中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等每100克體重放射線照射后脾臟重量變化圖。
圖4表示實施例1中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等用放射線照射后骨髓移植后脾菌落形成數(shù)圖。
圖5表示在實施例1中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等的體重變化圖。
圖6表示實施例2中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等的每10克體重放射線照射后脾臟重量變化圖。
圖7表示實施例2中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等用放射線照射后骨髓移植后脾茵落形成數(shù)圖。
圖8表示實施例2中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等的每10克體重放射線照射后睪丸重量變化圖。
圖9表示在實施例2中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等的體重變化圖。
圖10表示在實施例3中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等每10克體重放射線照射后脾臟重量變化圖。
圖11表示實施例3中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等用放射線照射后骨髓移植后脾菌落形成數(shù)圖。
圖12表示實施例3中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等的每10克體重放射線照射后睪丸重量變化圖。
圖13表示在實施例3中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等的體重變化圖。
圖14表示實施例4中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等的每10克體重放射線照射后脾臟重量變化圖。
圖15表示實施例4中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等用放射線照射后骨髓移植后脾菌落形成數(shù)圖。
圖16表示在實施例4中攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的大白鼠等的體重變化圖。
本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料是含有造血干細(xì)胞增強(qiáng)材料的體性干細(xì)胞和胚性干細(xì)胞的增強(qiáng)干細(xì)胞的材料,其特征是含有異黃酮甙元和/或曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物。具體地說,是含有具備增強(qiáng)干細(xì)胞作用的異黃酮甙元和/或曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物的固體狀(包括粉狀、粒狀等一切形狀)或液體狀材料,可用作食物或藥物。
一方面,異黃酮甙元,不論由哪種原料制備的異黃酮甙元,優(yōu)選谷類作為原料得到的谷物原材料。另外,谷類作為原材料,特別是用曲菌使豆類發(fā)酵,其后加水分解,用曲菌酶分解的豆類成分制成。而且優(yōu)選按上述的加水分解生成的原材料,再用溶劑提取濃縮,制成異黃酮甙元。
這樣制成的具有本發(fā)明的異黃酮甙元的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,在規(guī)定的期間內(nèi)經(jīng)投予或點滴在體內(nèi)連續(xù)地吸收后,可以增強(qiáng)含骨髓造血干細(xì)胞的體性干細(xì)胞。
再者,有具備本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)作用的異黃酮甙元的干細(xì)胞增強(qiáng)材料與胚性干細(xì)胞信號傳達(dá)物質(zhì)作用,可以增強(qiáng)該胚性干細(xì)胞。
下面,根據(jù)圖1說明增強(qiáng)含有異黃酮甙元的本發(fā)明的造血干細(xì)胞增強(qiáng)材料的體性干細(xì)胞和胚性干細(xì)胞的干細(xì)胞增強(qiáng)材料用曲菌發(fā)酵制備的情況。
圖1的實線部分,示出了按照本發(fā)明從豆類的一種即大豆粕制備干圖1的實線部分,示出了按照本發(fā)明從豆類的一種即大豆粕制備干細(xì)胞增強(qiáng)材料的制備方法的一個實施方案,同一圖的虛線部分更進(jìn)一步示出了本發(fā)明的曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物的制備方法的實施方案。
按圖1的實線部分示出的方法說明制備本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料的情況。首先蒸煮大豆粕,與不進(jìn)行蒸煮的情況相比,曲菌容易增殖。另外,根據(jù)制造的目的等,這種大豆粕的蒸煮和其蒸煮后的制曲處理可以以間歇方式分批進(jìn)行,或者,蒸煮與其后的制曲處理可以連續(xù)方式連續(xù)地進(jìn)行,優(yōu)選用制曲裝置連續(xù)地進(jìn)行。
而且,這種蒸煮結(jié)束后大豆粕一旦冷卻,大豆粕中的水分量使曲菌增殖的可能量為例如約36重量%。
調(diào)整大豆粕的水分量,因而本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)原材料按如下方法制備。
即,蒸煮結(jié)束后的大豆粕單體在不死滅曲菌的溫度40℃以下溫度冷卻時,按規(guī)定的重量比接種曲菌種曲,將兩者混合均勻。
此后,由于接種的種曲的增殖作用,在制曲裝置內(nèi)混合物的溫度上升,控制混合物的物品溫度,一旦低于約32℃,放置曲菌使大豆粕發(fā)酵,即進(jìn)行制曲處理直到溫度上升到約38℃,同時伴隨增殖的曲菌的成長生成物緊密成塊狀。此后,在進(jìn)行制曲的制曲裝置內(nèi),旋轉(zhuǎn)攪拌緊密結(jié)塊的生成物,使其分散開,在內(nèi)部進(jìn)行通氣,均勻地供給空氣,控制物品溫度下降到33-35℃為止,進(jìn)一步通氣的同時進(jìn)行制曲處理。在該過程中要確實防止曲菌的死滅,曲菌增殖可以充分進(jìn)行。此后,根據(jù)制曲裝置內(nèi)生成物的結(jié)塊情況,進(jìn)行必要次數(shù)的旋轉(zhuǎn)攪拌,并繼續(xù)通氣。
用于制曲的曲菌,是從古代的日本獨特的發(fā)酵食品或在發(fā)酵(テンペ)中使用的曲菌,使用作為食品安全的宇佐美氏曲霉、川地曲霉、泡盛曲霉、沙都(サイトイ)曲霉、米曲霉、黑曲霉等的曲霉屬和根霉屬的曲菌。
這種發(fā)酵的時間,根據(jù)所使用的曲菌的種類,至少24小時以上,曲菌充分增殖,使大豆中的蛋白質(zhì)和/或糖質(zhì)按規(guī)定量分解,發(fā)酵時間充分。
在本實施方案中,對制曲處理的生成物中的蛋白質(zhì)和/或糖質(zhì)更進(jìn)一步進(jìn)行加水分解。其中含糖質(zhì)是含寡糖類等的糖類或淀粉等。
這樣制曲處理后加水分解的基質(zhì)仍然保持薄片狀。即,在本實施方案中,制曲結(jié)束后的生成物,例如,加水使其水分量為50重量%,加熱30-45℃,保溫同時保持規(guī)定的時間,通過制曲處理進(jìn)行加水分解生成物內(nèi)的蛋白質(zhì)和/或糖質(zhì)。由于加水分解的這樣的蛋白質(zhì)和/或糖質(zhì),大量生成具有增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞的機(jī)能的異黃酮甙元。
下面,說明含本發(fā)明造血干細(xì)胞增強(qiáng)材料的增強(qiáng)體性干細(xì)胞和胚性干細(xì)胞的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的具體實例。
使用米曲霉作上述那樣的曲菌,按照本發(fā)明生成的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,發(fā)酵大豆粕,使其良好地分解為異黃酮化合物。即,未處理的大豆粕中,因為糖甙即大豆黃甙和金雀異黃甙與甙元即大豆甙元和染料木黃酮相比非常多,所以,按照本發(fā)明生成的發(fā)酵大豆粕中,糖甙即大豆黃甙和金雀異黃甙分解非常少,分解生成的甙元即大豆甙元和染料木黃酮非常多。即,通風(fēng)調(diào)節(jié)無處理的大豆粕的溫度為35℃,進(jìn)行48小時的制曲,加水使水分含量為約50%,在45℃溫度24小時以上用曲菌酶加水分解大豆成分或曲菌成分,大豆粕中的異黃酮化合物含量列如表1,大量得到異黃酮化合物的甙元體即大豆甙元或染料木黃酮。
表1
(單位毫克/100克)下面,就大豆胚牙進(jìn)行說明,預(yù)先蒸煮后的大豆胚牙加水使水分含量為約37%后,蒸煮、殺菌、冷卻后,大豆胚牙和曲菌按配合比例,400公斤大豆胚牙配8×107個/克的曲菌胞子200克調(diào)整種曲(精白米調(diào)整),混合。更進(jìn)一步,在32℃溫度冷卻后,制曲開始,直到物品溫度為40℃不通風(fēng),但是,在40℃時開始通風(fēng),抑制溫度上升。從開始約17小時后開始進(jìn)行攪拌(第一工序)。冷卻大豆胚牙,攪拌后物品溫度為35℃左右開始通風(fēng),控制溫度。接著,在約8小時后,進(jìn)行2次攪拌(第二工序),冷卻??刂莆锲窚囟葹?5℃左右再通風(fēng),在約16小時后,與前回同樣的進(jìn)行3次的攪拌(最后工序)。此后,通風(fēng)使物品溫度在約38℃,控制溫度,從開始48小時后,制曲結(jié)束。制曲結(jié)束后,邊攪拌邊調(diào)節(jié)水含量達(dá)50%,加熱使物品溫度達(dá)約50℃后,用曲菌酶加水分解大豆胚牙中的異黃酮化合物48小時以上,直到其中的大部分異黃酮化合物分解成為甙元體。表2列出了按本發(fā)明處理的大豆胚牙的異黃酮化合物大量得到主體為甙元體的大豆甙元。
表2
單位毫克/100克另外,在本實施方案中,使用溶劑進(jìn)一步提取濃縮加水分解得到的生成物,表3列出得到異黃酮甙元為30重量%以上的濃縮物。這種情況下的異黃酮甙元含有約70重量%大豆甙元。
表3本發(fā)明原材料的組成
這樣制備的本實施方案的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,經(jīng)制曲處理和其后的加水處理,完全分解大豆粕中的蛋白質(zhì)和糖質(zhì),得到了大量含異黃酮甙元的生成物。
這種異黃酮苷元具有可增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞機(jī)能等的增強(qiáng)體性干細(xì)胞的機(jī)能,在體內(nèi)被吸收時,例如,增強(qiáng)骨髓的造血作用,增殖造血干細(xì)胞,分化成紅血球和白血球,向體內(nèi)供給合適量的血球等成分的血液。
因此,本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料經(jīng)口攝取或點滴等在體內(nèi)被吸收時,正常地進(jìn)行生成作為骨髓造血作用的造血干細(xì)胞,向體內(nèi)供給合適量的血球等成分的血液,例如,防止受大量放射線照射、受癌治療法的放射線照射和受抗癌劑投予時引起的骨髓造血機(jī)能降低,可期望降低的造血機(jī)能大大地恢復(fù)。因此,本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料經(jīng)口攝取或點滴等在體內(nèi)被吸收,實施癌治療時沒有副作用,可期待戰(zhàn)勝癌癥。
另外,本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料經(jīng)口攝取或點滴等在體內(nèi)被吸收,增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞,發(fā)揮向體內(nèi)供給合適量的血球等成分的血液,進(jìn)行預(yù)防各種病癥,可期待維持健康。特別是在原子能設(shè)備中工作的人員,或受X光線等的放射線照射的人員,攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,可以得到維持健康的效果。
因此,這樣制成的本發(fā)明的含有異黃酮甙元的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,經(jīng)口攝取或點滴,在規(guī)定的期間內(nèi)持續(xù)在體內(nèi)被吸收,可增強(qiáng)含骨髓造血干細(xì)胞的體性干細(xì)胞。
另外,有具備本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)作用的異黃酮甙元的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,對胚性干細(xì)胞的信號傳達(dá)物質(zhì)作用,可增強(qiáng)該胚性干細(xì)胞。
下面,說明圖1虛線所示部分的本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料即曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物的制備方法。
這種曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物與上述異黃酮甙元的制備方法的不同之處在于,豆類用曲菌發(fā)酵使蛋白質(zhì)分解的生成物進(jìn)一步加水分解時,在該生成物中含的乳酸菌和/或向上述生成物添加乳酸菌增殖促進(jìn)生成物,加水分解時也使用乳酸菌。
在這個實施方案中,相對制曲處理生成的生成物,在加水分解工序中,曲菌和乳酸菌共存促進(jìn)增殖生成曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物。
使用這種乳酸菌的方法有兩種。
說明使用乳酸菌的一種方法的實施方案,即加水分解直到乳酸菌的菌數(shù)為108cfu/g以上,保持必要的時間制備生成物。其它的與上述實施方案同樣的進(jìn)行。在這樣的實施方案中,利用制曲處理生成物中天然含有的乳酸菌進(jìn)行。而且,在本實施方案中,利用提供纖維板(プロバイオテックス),乳酸菌和曲菌和原料即豆類生成物在同一基質(zhì)上共存共榮一起活潑增殖。
在本實施方案中,作為曲菌用豆?jié){用曲菌的米曲霉,按本發(fā)明制備方法制備的從發(fā)酵大豆粕分離的乳酸菌,進(jìn)行表4中試驗項目的試驗,進(jìn)行乳酸菌的鑒別。
表4分離菌a的性狀試驗項目 試驗結(jié)果形態(tài)球菌*1格拉姆染色性+*1胞子-*1運動性 -*1對氧的態(tài)度 通性嫌氣性*1過氧化氫酶 -*1生成乳酸L(+)*1葡萄糖生成的氣體-*110℃下的生育+45℃下的生育+50℃下的生育+6.5%氯化鈉下的生育 +在pH9.6時的生育 +在40%膽汁存在下的生育 +黃色素的生成-溶血性(羊血液) α溶血精氨酸二水解酶 +馬尿酸加水分解 +預(yù)栗樹皮甙加水分解 +在0.1%甲叉ブル一ミルク生育+酸的生成D-木糖 -L-鼠李糖 +*2*3蔗糖 +乳糖 +蜜二糖 +棉籽糖 +*2松三糖 -甘油糖 -*2*3核糖醇 -山梨糖醇 +*2甘露糖醇 +L-阿戊糖 +菌體內(nèi)DNA的GC含量(摩爾%)*440*1表示前報(試驗報告書第5980212-001號)的結(jié)果。
*2表示非典型性狀*3表示屎腸球菌JCM 5804T(基準(zhǔn)菌株)和分離菌a同樣的反應(yīng)。
*4表示用HPLC法。
從表4所示的性質(zhì)分離的乳酸菌,與腸球菌屬(Enterococcus)的屎腸球菌(Enterococcus faecium)相同。這種乳酸菌確認(rèn)是稱為腸球菌的消化管道內(nèi)的常在菌。
本實施例中的上述發(fā)酵時間和加水分解時間及加水分解溫度應(yīng)根據(jù)豆類的種類、狀態(tài)、特性、分量;曲菌的種類、狀態(tài)、特性、分量;乳酸菌的種類、狀態(tài)、特性、分量;生成物即干細(xì)胞增強(qiáng)材料的種類、特性等調(diào)整。
下面,根據(jù)圖1的虛線部分說明生成曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物時使用乳酸菌的其它方法的實施方案。
在本實施方案中,加水分解時把乳酸菌添加在曲菌處理的生成物中。
該乳酸菌與上述實施方案的相同,是腸球菌屬,特別是屎腸球菌。
在生成物中加入這樣的乳酸菌進(jìn)行制曲處理開始加水分解工序,在加水分解工序中,制曲處理增殖的曲菌和乳酸菌在同一基質(zhì)上即在前述的生成物上共存共生,乳酸菌由生成物供給營養(yǎng)促進(jìn)增殖,在生成物中曲菌和乳酸菌一起培養(yǎng)。特別是,在制曲處理生成物中生成維生素B類,由于生成的乳酸菌也易吸收營養(yǎng)價值高的成分,所以維生素B類作為營養(yǎng)源促進(jìn)了乳酸菌的增殖。而且,在本實施方案的生成物內(nèi),用曲菌酶加水分解各種成分,由于相當(dāng)于用消化酶分解大豆粕,消化物和未消化物是分離的狀態(tài)。用曲菌酶加水分解的分解物(消化物)被人或家畜攝取并直接吸收,而常在腸內(nèi)不被吸收的未分解物成為有用的乳酸菌的營養(yǎng)源,增加人或家畜有用的短鏈脂肪酸的生成。
但是,上述的生成物是可活潑增殖的乳酸菌的培養(yǎng)基,在人或家畜的腸內(nèi)增殖的該乳酸菌是可以將含在上述生成物中的酶未分解物的生成物作為營養(yǎng)源的。而且,最終生成曲菌和有用的微生物是在同一基質(zhì)的生成物中被培養(yǎng)的,利用提供的纖維板,保有乳酸菌增殖促進(jìn)機(jī)能的豆類作原料可以生成干細(xì)胞增強(qiáng)材料。
這樣制備的本實施方案的干細(xì)胞增強(qiáng)材料與上述實施方案的異黃酮甙元相同,同樣能夠發(fā)揮含優(yōu)良的骨髓造血干細(xì)胞的體性干細(xì)胞和胚性干細(xì)胞的增強(qiáng)干細(xì)胞機(jī)能。
下面,說明本發(fā)明的實施例。
實施例1在本實施例中,為了確認(rèn)增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞機(jī)能進(jìn)行實驗,對大白鼠實施放射線照射和骨髓移植,用鼠脾菌落法測定。
試驗方法1.育成健康各區(qū)體重一致的試樣雌性大白鼠(雌ICR)(8周齡)
2.準(zhǔn)備大白鼠的投予物,普通食物、相對該普通食物的異黃酮甙元的濃縮材料及作為曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物的原料的豆類,實施制曲處理,在對生成的生成物在加水分解工序中,得到曲菌和乳酸菌共存共生的促進(jìn)增殖的生成物的混合餌料。
3.比較區(qū)1和2與試驗區(qū)1和2各5只大白鼠,如表5所示,比較區(qū)1和2投予普通食物,試驗區(qū)1按體重投予在普通食物中添加異黃酮甙元比例為30毫克/公斤的餌料,試驗區(qū)2投予普通食物中添加1重量%的上述曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物的餌料,各飼育三周。
表5
※表中(毫克/公斤)是每公斤體重的投予量。
4.放射線照射在三周飼育后,對比較區(qū)2、試驗區(qū)1和試驗區(qū)2的大白鼠全身照射一次,照射劑量為8GY。
5.骨髓移植放射線照射24小時后,對全區(qū)的大白鼠進(jìn)行骨髓移植。此時,供體是切取同類的大白鼠的大腿骨,在凈化臺上切短大腿骨的兩端,其中的一端,試驗員用1毫升的注射器一次將含10%抗霉菌素的RPMI Medium1640培養(yǎng)基注入骨髓腔中。調(diào)整骨髓細(xì)胞數(shù)為105/毫升,從尾靜脈注射0.5毫升,供體大白鼠用2GY放射線全身照射,用在普通食物中添加1重量%的前述曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物餌料飼育4周。
6.脾臟的測定骨髓移植7日后目視測定體重,屠殺全部大白鼠,取出脾臟,測定脾臟的重量和脾菌落形成數(shù)。
7.體重測定目視測定全部大白鼠在骨髓移植前和移植7日后的體重。
試驗結(jié)果1.放射線照射后的脾臟重量變化示于圖2,每100克體重的放射線照射后的脾臟重量變化示于圖3,在放射線照射后和骨髓移植后的脾菌落形成數(shù)示于圖4。
2.體重測定結(jié)果示于圖5。
圖2至圖4示出了關(guān)于脾臟的試驗結(jié)果,參見比較區(qū)1沒有受放射線照射的大白鼠,并與比較區(qū)2及試驗區(qū)1和試驗區(qū)2進(jìn)行比較,沒有攝取本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料的比較區(qū)2脾臟的重量沒有增加,而且,由于脾菌落形成數(shù)量少,骨髓的造血機(jī)能大大降低。根據(jù)該比較區(qū)2的結(jié)果,受8GY照射量的強(qiáng)放射線照射,在只攝取普通食物的大白鼠中,接受骨髓移植,沒有發(fā)揮什么效果,大約是脾菌落數(shù)極低抑制造成的。
因此,在攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的試驗區(qū)1和2中,脾臟的重量增加很多,而且由于脾菌落數(shù)也非常高,大大提高了增強(qiáng)骨髓的造血干細(xì)胞的機(jī)能。
即,在體內(nèi)吸收了含有本發(fā)明的異黃酮甙元和曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,即使受8GY照射量的放射線照射,只攝取普通食物的比較區(qū)2的大白鼠也不相同,發(fā)揮了接受骨髓移植的效果,脾菌落數(shù)的形成數(shù)也增加非常多。所以,在體內(nèi)吸收含有本發(fā)明的異黃酮甙元和曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,由于放射線照射而降低的骨髓造血機(jī)能可以大大恢復(fù)。因此,當(dāng)受照射量為6GY、4GY等弱放射線照射時,在體內(nèi)吸收含有本發(fā)明的異黃酮甙元和曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,即使不進(jìn)行骨髓移植,也和實施骨髓移植的情況相同,可以期待脾菌落形成數(shù)增多,由放射線照射降低的骨髓造血機(jī)能可以大大恢復(fù)。
由于這種造血機(jī)能實質(zhì)性地恢復(fù),可知本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料有增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞的機(jī)能。
而且,在體內(nèi)吸收異黃酮甙元和曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,能夠增強(qiáng)骨髓的造血干細(xì)胞,增殖的造血干細(xì)胞,分化成紅血球和白血球,向體內(nèi)供給合適量的血球等成分的血液。
因此,經(jīng)口攝取或點滴在體內(nèi)被吸收本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,使作為骨髓造血作用的造血干細(xì)胞的生成正常地進(jìn)行,向體內(nèi)供給合適量的血液,例如,可以防止受大量放射線的照射、受癌癥治療法的放射線照射、受抗癌劑的投予時引起的骨髓造血機(jī)能的降低,可以期待降低的造血機(jī)能大大恢復(fù)。所以,經(jīng)口攝取或點滴在體內(nèi)被吸收的本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料,進(jìn)行癌癥治療時沒有副作用發(fā)生,可以期等戰(zhàn)勝癌癥。
而且,經(jīng)口或點滴在體內(nèi)被吸收的本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料,增強(qiáng)骨髓的造血機(jī)能,發(fā)揮向體內(nèi)供給有合適量血球等成分的血液的機(jī)能,進(jìn)行預(yù)防各種疾病,可期待維持身體健康。
實施例2在本實施例中,為確認(rèn)雄性受試物增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞的機(jī)能,增強(qiáng)生殖細(xì)胞的干細(xì)胞的機(jī)能與異黃酮甙元的投予量的依存性,進(jìn)行試驗,對大白鼠進(jìn)行放射線照射和骨髓移植,用鼠脾菌落法測定。
試驗方法1.育成健康各區(qū)體重一致的試樣雄性大白鼠(雄ICR)(6周齡)。比較區(qū)3、4和5及試驗區(qū)4各飼育10只大白鼠,試驗區(qū)3飼育5只大白鼠。
2.準(zhǔn)備大白鼠的投予物,有普通食物、普通食物這的異黃酮甙元的濃縮原材料或選擇的雌激素受容體調(diào)節(jié)劑(SERMs),即混合比它莫西分毒性低的誘導(dǎo)體toremifen制成的混合餌料。
3.如表6所示,比較區(qū)3和4各投予普通食物,試驗區(qū)3按體重投予在普通食物這添加異黃酮甙元濃縮材料比例為30毫克/公斤的餌料,試驗區(qū)4按體重投予在普通食物中添加異黃酮甙元濃縮材料的比例為100毫克/公斤餌料,比較區(qū)5按體重投予在普通食物中添加トレミフェン(toremifen)的比例為30毫克/公斤的餌料,各個飼育。
表6
※表中(毫克/公斤)表示每公斤體重的投予量。
4.放射線照射3周飼育后,比較區(qū)4和5及試驗區(qū)3和4的大白鼠用8GY照射量全身只照射一次。
5.骨髓移植放射線照射24小時后,對全區(qū)的大白鼠進(jìn)行骨髓移植。此時,供體是切取同類的大白鼠的大腿骨,在凈化臺上切短大腿骨的兩端,其中的一端,試驗員用1毫升的注射器一次將含10%抗霉菌素的RPMI Medium1640培養(yǎng)基注入骨髓腔中。調(diào)整骨髓細(xì)胞數(shù)為105/毫升,從尾靜脈注射0.5毫升,供體大白鼠用2GY放射線全身照射,用在普通食物中添加1重量%的前述曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物餌料飼育3周。
6.脾臟和睪丸的測定骨髓移植7日后目視測定體重后,大白鼠全部屠殺,取出脾臟,測定脾臟的重量和脾菌落形成數(shù),同時取出睪丸,測定睪丸的重量。
7.體重測定目視測定全部大白鼠在骨髓移植前和移植7日后的體重。
試驗結(jié)果1.每10克體重放射線照射后的脾臟重量變化示于圖6,用放射線照射后骨髓移植后的脾菌落形成數(shù)示于圖7。
2.每10克體重放射線照射后的睪丸重量變化示于圖8。
3.體重測定結(jié)果示于圖9。
圖6和圖7示出了關(guān)于雄性大白鼠脾臟的試驗結(jié)果,比較區(qū)3沒有受放射線照射的雄性大白鼠,與比較區(qū)4和5及試驗區(qū)3和試驗區(qū)4進(jìn)行比較,相對比較3區(qū),其它各區(qū)中脾臟的重量同樣降低,但是,在這些區(qū)中,比較區(qū)5相對于其它區(qū)顯示出脾臟的重量低一些。脾菌落的形成數(shù),在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對于體重按100毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)4比比較區(qū)4、5和試驗區(qū)3顯著的高。相對于比較區(qū)3的其它各區(qū)中,睪丸的重量相同的降低,但是,在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對于體重,按100毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)4比比較區(qū)4、5和試驗區(qū)3睪丸的重量明顯高。相對于比較區(qū)3,比較區(qū)4、5和試驗區(qū)3、4的體重變化不大,但是,比較區(qū)5與其它區(qū)相比,體重顯著降低。
根據(jù)這些試驗結(jié)果,一方面,在受試雄性大白鼠中,在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對于體重按100毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)4中,脾菌落形成數(shù)和睪丸重量比其它區(qū)顯著地增加,而另一方面,相對于體重按30毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)3中,沒有得到相對比較例的有效的增強(qiáng)結(jié)果。因此,對雄性大白鼠,為了發(fā)揮本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)原材料的干細(xì)胞增強(qiáng)作用,對攝取量有容量依存性,即攝取容量多時干細(xì)胞的作用狀況增強(qiáng)。而且,攝取足夠容量的本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料,確實發(fā)揮了與實施例1雌性大白鼠同樣的肝細(xì)胞增強(qiáng)作用。
另外,在比較區(qū)5中,脾臟重量和體重比其它的比較區(qū)4和試驗區(qū)3和4的低。因此,認(rèn)為比較區(qū)5投予的toremifen和異黃酮甙元有同等的干細(xì)胞增強(qiáng)作用,但是,毒性比異黃酮甙元強(qiáng)得多。所以,本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料的異黃酮甙元按相當(dāng)于體重100毫克/公斤投予,抑制體重的毒性比toremifen小,異黃酮甙元有效地增強(qiáng)干細(xì)胞。即異黃酮甙元攝取量多,增強(qiáng)干細(xì)胞的作用高,而且在安全性方面也有效。
而且,在本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對體重按100毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)4比其它的比較區(qū)4、5和試驗區(qū)3睪丸重量非常顯著地增加,本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料這的異黃酮甙元有來自睪丸和雌性卵巢生殖器的精子和卵子的生殖細(xì)胞的干細(xì)胞增強(qiáng)作用。
實施例3在本實施例中,為了確認(rèn)在雄性供體的增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞的機(jī)能、增強(qiáng)生殖細(xì)胞的干細(xì)胞的機(jī)能和異黃酮甙元投予量的依存性,對雄性大白鼠進(jìn)行放射線照射試驗。
試驗方法1.育成健康各區(qū)體重一致的受試的雄性大白鼠(雄ICR)(6周齡)。比較區(qū)6和7及試驗區(qū)5和6分別飼育10只大白鼠。
2.大白鼠的投予物,準(zhǔn)備普通食物、該普通食物與異黃酮甙元濃縮物的混合餌料。
3.如表7所示,比較區(qū)6和7投予普通食物,試驗區(qū)5投予添加相對于體重按30毫克/公斤比例的異黃酮甙元的濃縮原材料的普通食物,試驗區(qū)6投予添加相對于體重按100毫克/公斤比例的異黃酮甙元的濃縮原材料的普通食物,分別飼育。
表7
※表中(毫克/公斤)表示每公斤體重的投予量。
4.放射線照射對比較區(qū)7和試驗區(qū)5及6各區(qū)的大白鼠,飼育開始時,用2GY照射量一次全身照射,飼育3周時間。
5.脾臟的測定在三周飼育后測定體重,屠殺全部大白鼠,取出脾臟,測定脾臟的重量和脾菌落形成數(shù),同時取出睪丸,測定睪丸的重量。
6.體重測定在飼育前和三周飼育后,測定全部大白鼠的體重。
試驗結(jié)果1.圖10示出了每10克體重放射線照射后脾臟重量的變化,圖11示出了放射線照射后骨髓移植后的脾菌落形成數(shù)。
2.圖12示出每10克體重放射線照射后睪丸重量的變化。
3.圖13示出了體重的測定結(jié)果。
圖10和圖11示出了雄性大白鼠脾臟的試驗結(jié)果,參見比較區(qū)6沒有受放射線照射的雄性大白鼠與比較區(qū)7和試驗區(qū)5和6的比較,相對于比較區(qū)6的其它各區(qū)中,脾臟的重量一樣降低,而在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對體重按100毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)6比比較區(qū)7和試驗區(qū)5顯著高。在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對體重,按100毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)6比比較區(qū)7和試驗區(qū)5脾菌落形成數(shù)顯著高,在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對體重按30毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)5比比較區(qū)7脾菌落形成數(shù)沒有明顯升高。睪丸重量相對比較區(qū)6其它各區(qū)一樣的降低,而在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對體重按100毫克/公斤比例經(jīng)口投予異黃酮甙元的試驗區(qū)6比比較區(qū)7和試驗區(qū)5睪丸的重量升高。相對比較區(qū)6,比較區(qū)7和試驗區(qū)5和6體重低一些。
根據(jù)這些試驗結(jié)果,在受試的供體雄性大白鼠中,一方面,在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對體重按100毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)6中,脾菌落形成數(shù)和睪丸重量比其它的有顯著地增加,但是,另一方面,相對于體重按30毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)5中,雖然比試驗區(qū)6低,但是相對于比較區(qū)7得到了增強(qiáng)的結(jié)果。所以,在受試的供體雄性大白鼠中,為了發(fā)揮本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料的干細(xì)胞增強(qiáng)作用,對攝取容量有依存性,即攝取容量多,干細(xì)胞狀況作用大。而且,攝取足夠容量的本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料,確實發(fā)揮了與實施例1的雌性大白鼠同樣的干細(xì)胞增強(qiáng)作用。
另外,在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對體重按100毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)6睪丸重量顯示了比比較區(qū)7和試驗區(qū)5高的傾向,本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中的異黃酮甙元具有來自睪丸和卵巢生殖器的精子與卵子的生殖細(xì)胞的干細(xì)胞增強(qiáng)作用。
根據(jù)實施例2和3,在受試體和供體中,一同攝取本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料即異黃酮甙元,由干細(xì)胞的增強(qiáng)作用體內(nèi)的干細(xì)胞受到增強(qiáng),從供體得到骨髓移植的受試體可以發(fā)揮高的移植效果,供體可提供移植效果高的骨髓等。
試驗方法1.育成健康各區(qū)體重一致的受試雌性大白鼠(雌ICR)(6周齡)。在每區(qū)飼育5只大白鼠。
2.準(zhǔn)備大白鼠投予物,普通食物,在該普通食物中添加異黃酮甙元的濃縮材料或作為異黃酮甙元的單體的染料木黃酮或具有最強(qiáng)雌激素作用的17β雌二醇的混合餌料。
3.如表8所示,比較區(qū)8、9和10投予普通食物,試驗區(qū)7相對體重按100毫克/公斤比例投予添加異黃酮甙元濃縮材料的普通食物,試驗區(qū)8相對體重按30毫克/公斤比例投予添加異黃酮甙元濃縮原材料的普通食物,試驗區(qū)9相對體重按30毫克/公斤比例投予添加異黃酮單體的普通食物,比較區(qū)11相對體重按10微克/公斤比例投予添加17β雌二醇的普通食物,分別飼育。
表8
※表中(毫克/公斤)微克/公斤)表示每公斤體重的投予量。
4.放射線照射飼育3周后,除8區(qū)外,對比較區(qū)9、10、11和試驗區(qū)7、8、9的大白鼠用8GY照射量進(jìn)行一次全身照射。
5.骨髓移植放射線照射24小時后,除比較區(qū)8和9外,對比較區(qū)10、11和試驗區(qū)7、8和9進(jìn)行骨髓移植。這種情況下,切取供體同類大白鼠的大腿骨,在凈化臺上切短大腿骨的兩端,從其中的一端,試驗員用1毫升的注射器一次將含10%抗霉菌素的RPMI Medium 1640培養(yǎng)基注入骨髓腔中。調(diào)整骨髓細(xì)胞數(shù)為105/毫升,從尾靜脈注射0.5毫升,供體大白鼠用2GY放射線全身照射,用在普通食物中添加1重量%的前述曲菌大豆發(fā)酵培養(yǎng)物餌料飼育3周。
6.脾臟的測定骨髓移植10日后,屠殺全部大白鼠,取出脾臟,測定脾臟的重量和脾菌落形成數(shù)。
7.體重測定飼育開始時、1周后、2周后、骨髓移植前、移植5日目、7日、和10日,目視測定全部大白鼠的體重。
試驗結(jié)果1.圖14示出了每10克體重放射線照射后脾臟重量的變化,圖15示出了放射線照射后骨髓移植后的脾胃菌落形成數(shù)。
2.圖16示出了體重的測定結(jié)果。
根據(jù)圖14和圖15示出的雄性大白鼠脾臟的試驗結(jié)果,參見比較區(qū)8沒有受放射線照射的雄性大白鼠與比較區(qū)9、10和11及試驗區(qū)7、8和9的比較,相對比較區(qū)8其它各區(qū)中脾臟的重量一樣降低,而其中的比較區(qū)9、10和11顯示出了比試驗區(qū)7、8和9低的值。一方面,受放射線照射的試驗區(qū)7、8和9比比較區(qū)9和10脾臟重量顯著升高,其中在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對體重按100毫克/公斤比例投予異黃酮甙元的試驗區(qū)7相對試驗區(qū)8和9脾臟重量顯著升高。脾菌落形成數(shù),試驗區(qū)7、8和9比受放射線照射后移植的比較區(qū)10和11脾臟重量顯著升高,其中在投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中,相對體重對按100毫克/公斤比例和30毫克/公斤比例投予添加異黃酮甙元的試驗區(qū)7和8、對按30毫克/公斤比例投予添加作為異黃酮單體的染料木黃酮的試驗區(qū)9顯著升高。放射線照射7日后目視測定休重,比較區(qū)9、10和11顯示減少的傾向,試驗區(qū)7和8顯示沒有變化的傾向,試驗區(qū)9顯示增加的傾向。
根據(jù)這些試驗結(jié)果,在受試體的大白鼠中,投予了本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料中的異黃酮甙元混合物和單體的試驗區(qū)7、8和9中,受放射線照射移植后,脾臟重量和脾菌落數(shù)比比較區(qū)10和11有明顯地增強(qiáng)。而且,在投予本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料的試驗區(qū)7、8和9中,投予異黃酮甙元混合物的試驗區(qū)7和8比投予異黃酮甙元單體的試驗區(qū)9明顯升高,而且,在投予本發(fā)明增強(qiáng)朱材料的試驗區(qū)7和8中,異黃酮甙元混合物投予量多的試驗區(qū)7與投予少的試驗區(qū)8相比沒有明顯升高。因此,在雌性大白鼠的受試體中,為了發(fā)揮本發(fā)明干細(xì)胞增強(qiáng)材料的干細(xì)胞增強(qiáng)作用,對異黃酮甙元存在容量有依存性,即攝取的容量多,干細(xì)胞的狀況作用大。而且,表3示出了異黃酮甙元的混合物比作為單體的染料木黃酮發(fā)揮了更強(qiáng)的干細(xì)胞增強(qiáng)作用。特別是,由于表3所示的異黃酮甙元的混合物比作為單體的染料木黃酮的制造成本低,所以成本是非常有優(yōu)勢的。另外,具有最強(qiáng)雌激素作用的17β雌二醇顯著地抑制體重的增加,至今不認(rèn)為增加脾菌落形成數(shù)。在本試驗中,對異黃酮甙元設(shè)定投予量小于1/1000,不能確認(rèn)干細(xì)胞增強(qiáng),但是有體重抑制等副作用的問題。
另外,本發(fā)明的上述實施方案和實施例并不是限制本發(fā)明,可以進(jìn)行必要的變更。本明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料經(jīng)口投予或點滴,在體內(nèi)吸收良好。
權(quán)利要求
1.干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是有具備增強(qiáng)干細(xì)胞作用的異黃酮甙元。
2.按權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是干細(xì)胞是由含造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞等的各個臟器形成或組織形成的根源的干細(xì)胞而形成的體性干細(xì)胞或胚性干細(xì)胞。
3.按權(quán)利要求1或2所述的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征上述異黃酮甙元是保有不阻害在細(xì)胞增殖因子中起作用的酶的酶活性的雌激素的作用。
4.按權(quán)利要求1-3中任一項所述的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是異黃酮甙元是來自谷類的原材料。
5.按權(quán)利要求4所述的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是來自谷類的原料是谷類經(jīng)曲菌發(fā)酵分解蛋白質(zhì),其后加水分解而生成的生成物。
6.按權(quán)利要求5所述的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是谷類是豆類。
7.按權(quán)利要求5或6所述的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是異黃酮甙元是將加水分解生成的材料進(jìn)一步濃縮生成的生成物。
8.按權(quán)利7所述的提高性機(jī)能的干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是異黃酮甙元含有至少70重量%的大豆甙元。
9.干細(xì)胞增強(qiáng)材料,其特征是豆類經(jīng)曲菌發(fā)酵分解蛋白質(zhì)的生成物進(jìn)一步加水分解時,該生成物中含促進(jìn)增殖的乳酸菌和/或向上述的生成物中添加促進(jìn)增殖的乳酸菌的生成物。
全文摘要
本發(fā)明涉及肥胖抑制材料,該材料經(jīng)口攝取或點滴等在體內(nèi)被吸收,能增強(qiáng)體性干細(xì)胞,特別是能增強(qiáng)骨髓造血干細(xì)胞或形成胚性干細(xì)胞的干細(xì)胞。本發(fā)明提供的增強(qiáng)干細(xì)胞的干細(xì)胞增強(qiáng)材料含有異黃酮甙元,后者具有不阻害在細(xì)胞增殖中起作用的酶的酶活性的雌激素作用。本發(fā)明的干細(xì)胞增強(qiáng)材料是從前完全沒有的。本發(fā)明的基本特征是由于含有增強(qiáng)干細(xì)胞作用的異黃酮甙元,從而得到了上述的有優(yōu)良作用的干細(xì)胞增強(qiáng)材料。
文檔編號C07D311/36GK1383380SQ01801908
公開日2002年12月4日 申請日期2001年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月18日
發(fā)明者武部實, 潘偉軍 申請人:尼基摩株式會社