專利名稱：生產(chǎn)海鞘素化合物的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及合成的方法，特別是涉及生產(chǎn)海鞘素化合物的合成方法。
背景技術(shù)：
歐洲專利309477涉及海鞘素729，743，745，759A，759B和770。已公開海鞘素化合物具有抗菌的和其他的有用的性質(zhì)?，F(xiàn)在海鞘素743作為抗腫瘤劑正進行臨床試驗。
海鞘素743具有下式(I)的復(fù)合三(四氫異喹啉酚)[tris(tetrahydroisoquinolinephenol)]結(jié)構(gòu) 它目前是通過分離得自海洋無脊椎動物Ecteinascidin turbinata的提取物制備的。由于得率低，一直在尋找可替代的制備方法。
美國專利號5721362描述生產(chǎn)海鞘素化合物的合成方法，也可參見WO 9812198，該文全文通過引用結(jié)合到本文中。該要求保護的方法內(nèi)容很長且復(fù)雜，其中的38個實施例中的每一例都描述在得到海鞘素743的合成序列中的一個或多個步驟。
在已知的合成方法中，使用1-不穩(wěn)定的、10-羥基、18-保護的羥基、二-6，8-烯-5-酮的稠環(huán)化合物形成1，4橋鍵。如實施例33中所示，將化合物(13)轉(zhuǎn)變?yōu)榛衔?14) 然后根據(jù)已知的合成方法，通過實施例34至36的步驟在1，4橋鍵上形成螺喹啉(spiroquinoline)，及除去其18-MOM保護基團得到海鞘素770，然后可將其轉(zhuǎn)變?yōu)楹Ｇ仕?43。
美國專利號5721362的權(quán)利要求25涉及給定的式(11)的中間體酚化合物，我們也稱其為中間體11或Int-11。它具有以下雙(四氫異喹啉酚)的結(jié)構(gòu)(II) 其中MOM是甲氧基甲基取代基及TBDPS是叔-丁基二苯基甲硅烷基取代基。
由中間體11可以合成另一個令人感興趣的抗腫瘤制劑Phthalascidin，見Proc.Natl.Acad.Sci.USA，96，3496-3501，1999。Phthalascidin是式(III)的雙(四氫異喹啉酚)衍生物 在海鞘素743和770中，所述1，4橋鍵具有式(IV)的結(jié)構(gòu) 其它已知的海鞘素包括具有不同橋環(huán)的環(huán)系化合物，如在海鞘素722和736中所出現(xiàn)的，其中所述橋鍵具有式(V)的結(jié)構(gòu)
海鞘素583和597的橋具有式(VI)的結(jié)構(gòu) 及海鞘素594和596的橋具有式(VII)的結(jié)構(gòu) 這些化合物及相關(guān)化合物的完整結(jié)構(gòu)在J.Am.Chem.Soc.(1996)118，9017-9023中給出。該文通過引用結(jié)合到本文中。
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已知其它的化合物缺少橋環(huán)的環(huán)系。這些化合物包括雙(四氫異喹啉醌)抗腫瘤-抗微生物抗生素番紅菌素和番紅霉素，以及由培養(yǎng)的微生物或海綿分離的海洋天然產(chǎn)物磯海綿素(renieramicins)和銼海綿霉素(xestomycin)。它們都具有共同的二聚四氫異喹啉碳構(gòu)架。這些化合物根據(jù)芳環(huán)的氧化形式可以分為四種類型，類型I至IV。
I型，二聚異喹啉醌為在此類化合物中最常見的式(VIII)體系，見下述表I。
表II型番紅霉素抗生素的結(jié)構(gòu) 取代基化合物R14aR14bR21R25aR25bR25c番紅霉素A H HCN OOCH3番紅霉素B H HH OOCH3番紅霉素C H OCH3H OOCH3番紅霉素G H OH CN OOCH3番紅霉素H H HCN OH CH2COCH CH33番紅霉素S H HOH OOCH3番紅霉素Y3H HCN NH2HCH3番紅霉素Yd1H HCN NH2HC2H5番紅霉素Ad1H HCN OOC2H5番紅霉素Yd2H HCN NH2HH番紅霉素Y2bH Qb CN NH2HCH3番紅霉素Y2b-dH Qb CN NH2HC2H5番紅霉素AH2H HCN HaOHaCH3番紅霉素AH2AcH HCN HOAc CH3番紅霉素AH1H HCN OHaHaCH3番紅霉素AH1AcH HCN OAc HCH3番紅霉素AR3H HH HOH CH3a——排列為可互換的b——其中基團Q具有式(IX) I型芳環(huán)見于由淡紫灰鏈霉菌(Streptomyces lavendulae)分離的作為微量成分的番紅霉素A、B和C；G和H；以及S中。一種由日本公開特許公報(Japenese Kokai)JP-A2 59/225189和60/084288公知的番紅霉素A的氰基衍生物稱作氰基醌胺(cyanoquinonamine)。番紅霉素Y3、Yd1、Ad1和Yd2由淡紫灰鏈球菌在適當(dāng)補充的培養(yǎng)基中經(jīng)直接生物合成產(chǎn)生。由一個結(jié)構(gòu)單元中的C-25上的氮鏈連接至另一結(jié)構(gòu)單元中的C-14生成的番紅霉素Y2b和Y2b-d二聚體也已經(jīng)由淡紫灰鏈球菌在補充培養(yǎng)基中生成。由Rhodococcus amidophilus產(chǎn)生的番紅霉素A在C-25的微生物還原產(chǎn)物番紅霉素AR1(＝AH2)，也由番紅霉素A經(jīng)硼氫化鈉非立體選擇性化學(xué)還原反應(yīng)制備，為差向異構(gòu)體的1∶1混合物，接著經(jīng)層析分離(另一異構(gòu)體AH1極性較小)。通過相同的微生物轉(zhuǎn)化制得其它的還原產(chǎn)物番紅霉素AR3，即21-脫氰基-25-二氫-番紅霉素A(＝25-二氫番紅霉素B)。另一類型的番紅霉素A經(jīng)使用Nocardia株生物轉(zhuǎn)化生成番紅霉素B，并進一步經(jīng)分枝桿菌屬的一個菌株還原生成番紅霉素AH1Ac。用于生物學(xué)研究的番紅霉素AH2和AH1的25-O-乙酸酯也已化學(xué)制得。
已由海洋海綿動物中分離到式(X)I型化合物，見表II.
表II得自海洋海綿動物的I型化合物的結(jié)構(gòu)
取代基R14aR14bR21R磯海綿霉素A OH H H-C(CH3)＝CH-CH3磯海綿霉素B OC2H5H H-C(CH3)＝CH-CH3磯海綿霉素C OH O O-C(CH3)＝CH-CH3磯海綿霉素D OC2H5O O-C(CH3)＝CH-CH3磯海綿霉素E H H OH -C(CH3)＝CH-CH3磯海綿霉素F OCH3H OH -C(CH3)＝CH-CH3銼海綿霉素 OCH3H H-CH3由在墨西哥采集的Reniera種海綿的抗微生物提取物中分離到磯海綿霉素A-D以及與其生物學(xué)相關(guān)的單體異喹啉磯海綿酮(renierone)和相關(guān)化合物。磯海綿霉素A的結(jié)構(gòu)最初在C-3、C-11及C-13位確定為相反的立體化學(xué)。然而，仔細檢查在Palau采集的相同海綿分離的新的相關(guān)化合物磯海綿霉素E和F的1H NMR數(shù)據(jù)，揭示磯海綿霉素的環(huán)連接形式與番紅霉素的環(huán)連接相同。這一結(jié)果導(dǎo)致這樣的結(jié)論，即先前認(rèn)定的磯海綿霉素A至D的立體化學(xué)一定與番紅霉素的立體化學(xué)相同。
在采自斯里蘭卡水域的銼海綿屬(Xestospongia)的一個海綿種中發(fā)現(xiàn)銼海綿霉素。
具有還原的氫醌環(huán)的式(XI)的II型化合物包括由淡紫灰鏈霉菌分離的番紅霉素D和F以及由黃色粘球菌(Myxococcus xanthus)分離的番紅霉素Mx-1和Mx-2。見表III。
表IIIII型化合物 取代基化合物 R14aR14bR21R25aR25bR25c番紅霉素D O O H O O CH3番紅霉素F O O CN O O CH3番紅霉素Mx-1H OCH3OH H CH3NH2番紅霉素Mx-2H OCH3H H CH3NH2從培養(yǎng)的熒光假單胞菌(pseudomonas fluorescens)中分離的抗生素番紅菌素A和B中發(fā)現(xiàn)類型III構(gòu)架。這些式(XII)的抗生素由四氫異喹啉-醌亞單位和四氫異喹啉酚亞單位構(gòu)成。 其中R21在番紅菌素A中為-H及在番紅菌素B中為-OH。
由淡紫灰鏈霉菌也分離到番紅霉素R，它為分類為類型IV骨架的唯一的化合物。式(XIII)化合物由氫醌環(huán)和一個酚性氧原子(phenolicoxygens)上的乙醇酸酯側(cè)鏈構(gòu)成，由于它的適度的毒性，該化合物確信為番紅霉素A的一個前藥。 所有這些已知化合物具有如下式(XIV)結(jié)構(gòu)所示的五環(huán)(A)至(E)的稠環(huán)體系 在海鞘素和一些其他化合物中環(huán)A和E是酚性環(huán)，而在另外的化合物中，特別是在番紅霉素中，所述環(huán)A和E為醌性環(huán)。在已知化合物中，環(huán)B和D是四氫環(huán)，而環(huán)C是全氫環(huán)。
發(fā)明目的對于海鞘素化合物及相關(guān)化合物的替代合成方法的需求依然存在。這樣的合成路徑可以提供合成已知抗腫瘤劑的更經(jīng)濟的路線，同時可以制備新的活性化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于制備海鞘素或其他四氫異喹啉酚化合物的中間體、衍生物及相關(guān)結(jié)構(gòu)化合物的合成方法。
在一個方面，本發(fā)明提供制備帶有螺胺(spiroamine)-1，4-橋鍵的海鞘素產(chǎn)物的方法。所述方法包括使用1-不穩(wěn)定的、10-羥基、18-保護的羥基、二-6，8-烯-5-酮的稠環(huán)化合物形成1，4橋鍵，其中所述稠環(huán)為式(XIV)。在本發(fā)明中，所述C-18保護基在引入螺胺前除去。
適用于新的合成方法的起始原料包括涉及天然雙(四氫異喹啉)生物堿的化合物。這樣的起始原料可以或者由在WO 0069862中介紹的可由不同液體培養(yǎng)基培養(yǎng)得到的不同類的番紅霉素和番紅菌素抗生素制得，或者由其他合成的或生物化學(xué)的方法制得。在此方面，WO0069862通過全文引用結(jié)合在本文中。本發(fā)明的PCT申請要求作為WO 0069862公開的PCT/GB 00/01852申請的優(yōu)先權(quán)。其公開的而未出現(xiàn)在本說明書中的內(nèi)容通過引用結(jié)合在本文中。
本發(fā)明優(yōu)選的實施方案在一個特別的方面，本發(fā)明涉及化合物中間體21在制備海鞘素743和相關(guān)化合物的許多新的合成方法中的用途。 中間體21具有5-烯丙氧基，其中所述烯丙基起作保護5-羥基的作用?？梢岳斫猓渌Ｗo基可以易于應(yīng)用，以及本發(fā)明一般延及其他此類5-保護的羥基化合物的用途。海鞘素743和相關(guān)化合物的生成一般而言，中間體21或相關(guān)化合物轉(zhuǎn)變成海鞘素產(chǎn)物包括以下重要轉(zhuǎn)化(a)通過例如在乙酸中與亞硝酸鈉反應(yīng)使NH2轉(zhuǎn)變成OH。(b)E-環(huán)酚的保護。(c)通過使用保護的半胱氨酸側(cè)鏈保護一級1-羥基功能團進行酯化。(d)烯丙基基團的脫保護和氧化。(e)通過環(huán)化反應(yīng)建立橋環(huán)。(f)E-環(huán)酚和半胱氨酸部分的脫保護。(g)通過反式-胺化和Petter Spengler反應(yīng)引入喹啉。
所述中間體化合物的高官能度必需使用對E-環(huán)酚及對半胱氨酸側(cè)鏈的保護基團，以防止不需要的付反應(yīng)。
如此，根據(jù)保護基的具體選擇可以產(chǎn)生許多可供選擇的中間體。
用于結(jié)合這些主要取決于對于酚環(huán)及半胱氨酸側(cè)鏈胺所選保護基團的轉(zhuǎn)化的不同可能順序是可能的。
合成轉(zhuǎn)化的總數(shù)也隨著所選的保護基團的不同而改變。
通過圖示，如下介紹用于從中間體21制備ET-743的六類典型途徑的保護基團的不同組合的應(yīng)用，此處所述中間體21也稱作SF21。方法酚保護 半胱氨酸保護步驟數(shù)1 MOMBoc 122 MEMBoc 103 MEMCbz 114 MOMAllloc 135 MEMAlloc 136 MOMCbz 15作為熟練的技術(shù)人員將容易理解，此處所介紹的反應(yīng)流程可以以不同的方式修改和/或合并，并且可選的步驟順序及其產(chǎn)生的化合物是本發(fā)明的部分。
另外，使用沒有詳述的其他保護基團的策略，也是本發(fā)明的部分。六種典型的合成路徑的方法詳述各路徑的全部反應(yīng)流程見下述流程1至6。流程1-ET-743半合成替代路徑1 流程2-ET-743半合成替代路徑2 流程3-ET-743半合成替代路徑3 流程4-ET-743半合成替代路徑4 流程5-ET-743半合成替代路徑5 流程6-ET-743半合成替代路徑6
在路徑1中，通過包括用Troc使SF21胺被保護/脫保護的三個步驟完成E-環(huán)酚的保護。
對于路徑1和2，使用Boc保護半胱氨酸側(cè)鏈，使得酚和半胱氨酸基團在一步而不是兩個分開的步驟中脫保護。對于其他路徑，需要另外的脫保護步驟。
對于路徑2，通過使用直接酯化方法及接著用MEM基團保護所述酚而避免中間體25。
在路徑2和3中，E-環(huán)酚的保護推遲到重氮化和酯化步驟后進行，由此使所述酚不經(jīng)路徑1的三個步驟順序而在單一步驟中得到保護。
對于路徑1、2和3，用半胱氨酸衍生物直接酯化伯醇排除了使用甲硅烷基(路徑4和5)對伯醇的非生產(chǎn)性保護/脫保護步驟，因而縮短了原順序中的兩步。
路徑6僅在此設(shè)計了從中間體161起始的最后一步，該中間體可容易的由中間體21得到。
在路徑4和5中，通過先前重氮化步驟生成的伯醇用硅保護，允許選擇性的保護E-環(huán)酚并避免中間體25。在A-環(huán)修飾后(脫保護/氧化)除去該硅基團并且用半胱氨酸衍生物酯化所述伯醇。
這些變化是在WO 006982中給出路徑的放大中發(fā)現(xiàn)的問題的直接結(jié)果。作為這些變化的結(jié)果，整個路徑2縮短至三步并因而對于常規(guī)生產(chǎn)更適合和/或更便宜。方法總述因此，鑒于路徑1至6，本發(fā)明擴展至制備帶有螺胺-1，4-橋鍵的海鞘素產(chǎn)物的方法，該方法包括使用1-不穩(wěn)定的、10-羥基、18-保護的羥基、二-6，8-烯-5-酮稠環(huán)化合物形成1，4橋鍵，其中C-18保護在引入螺胺前除去。
在所述方法的一種修改中，海鞘素產(chǎn)物具有21-羥基，及所述方法包括轉(zhuǎn)變21-氰基成為21-羥基。
典型的螺胺為螺喹啉，特別是海鞘素743的螺喹啉。
在優(yōu)選的方法中，1-不穩(wěn)定的、10-羥基、18-保護的羥基、二-6，8-烯-5-酮稠環(huán)化合物的18-保護基團是用MOM，甲氧基甲基保護的；或用MEM，甲氧基乙氧基甲基保護的。
合適的1-不穩(wěn)定基團是下式的N-保護的半胱氨酰氧基亞甲基-CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-H。
在該式中Prot1典型為Boc，t-丁氧羰基；Troc，2，2，2-三氯乙氧羰基；Cbz，芐氧羰基；或Alloc，烯丙氧基羰基。
在所述方法的一些實施方案中，在C-18保護的同一步驟中除去Prot1。
所述1-不穩(wěn)定的基團可以由下式的1-取代基產(chǎn)生-CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2。
在本式中Prot2典型為Fm，9-芴基甲基。
下式中的1-取代基-CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2可由-CH2-O-H取代基的酯化生成。
所述酯化可以在生成10-羥基、二-6，8-烯-5-酮結(jié)構(gòu)之前或之后進行。
在一種變化中，要求保護的方法由1-氨基亞甲基、5-保護的羥基、 7，8-二氧基亞甲基、18-羥基、21-氰基稠環(huán)化合物起始。
所述1-氨基亞甲基可以暫時被保護以允許在18-羥基上保護，然后除去該暫時的保護。
或者，可在生成1-酯官能團后保護所述18-羥基。
在另一種變化中，所述1-氨基亞甲基被轉(zhuǎn)化成1-羥基亞甲基以及該1-羥基亞甲基被暫時保護以允許在18-羥基上保護，然后除去該暫時保護。
所述稠環(huán)結(jié)構(gòu)適合具有下式 特別是其中R15是H。余下取代基中的一個或多個或全部可以如同海鞘素743中的取代基。
半合成本發(fā)明允許在半合成的合成中使用已知化合物，番紅菌素B，也稱作醌胺(quinonamine)。
更通常地，本發(fā)明涉及由天然雙(四氫異喹啉)生物堿起始用于生成海鞘素或者其他四氫異喹啉酚化合物中間體、衍生物及相關(guān)結(jié)構(gòu)化合物的半合成方法。用于半合成方法的合適起始原料包括可得自不同液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的各種番紅霉素及番紅菌素類抗生素以及得自海洋海綿動物的各種礬海綿霉素和銼海綿霉素化合物。
起始化合物的通式(XV)如下 其中R1是酰胺基亞甲基基團如-CH2-NH-CO-CR25aR25bR25c，其中R25a和R25b形成酮基或者一個是-OH、-NH2或-OCOCH3而另一個是-CH2COCH3、-H、-OH或-OCOCH3，條件是當(dāng)R25a是-OH或-NH2時，則R25b不是-OH，及R25c是-H、-CH3或-CH2CH3，或者R1是酰氧基亞甲基基團如-CH2-O-CO-R，其中R是-C(CH3)＝CH-CH3或-CH3；R5和R8獨立選自-H、-OH或-OCOCH2OH，或者R5和R8都是酮基以及環(huán)A是對-苯并醌環(huán)；R14a和R14b都是-H或一個是-H而另一個是-OH、-OCH3或-OCH2CH3，或者R14a和R14b一起形成酮基；R15和R18獨立選自-H或-OH，或者R5和R8都是酮基以及環(huán)A是對-苯并醌環(huán)；和R21是-OH或-CN。
此類化合物更常規(guī)的通式提供如下 其中，由R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10定義的取代基分別獨立選自H、OH、OCH3、CN、＝O、CH3；其中X是包含在所述天然產(chǎn)物中的不同酰胺或酯官能團；其中每個點劃線的環(huán)表示一個、兩個或三個任選的雙鍵。
因此，根據(jù)本發(fā)明，我們現(xiàn)在提供用于生產(chǎn)包括中間體11或21的中間體的半合成路徑和因此用于生產(chǎn)海鞘素化合物以及phthalascidin和另外的化合物的半合成路徑。本發(fā)明的半合成路徑各自包含許多達到所需化合物的轉(zhuǎn)化步驟。各步驟本身即是按照本發(fā)明的方法。本發(fā)明不限于所舉例的路徑，在適宜時，例如通過改變轉(zhuǎn)化步驟的順序，或者通過改變所用的保護基團，可以提供其他的路徑。
特別是，本發(fā)明涉及提供通式(XVI)的21-氰基起始原料 其中R1、R5、R8、R14a、R14b、R15和R18如本文所定義。
其他在21位帶有不同取代基的式(XVI)化合物也可作為可能的起始原料。一般來說，經(jīng)式(XV)化合物的21-羥基的親核置換能夠生成任一衍生物，其中R21是一與所選化合物順位的(cis a candidate)羥基。合適的21-取代基的實例包括但不限于巰基基團；烷硫基基團(具有1到6個碳原子的烷基基團)；芳硫基基團(具有6到10個碳原子并且是未取代的或由1到5個取代基取代的芳基基團，所述取代基選自例如具有1到6個碳原子的烷基基團、具有1到6個碳原子的烷氧基基團、鹵原子、巰基基團及硝基基團)；氨基基團；一或二烷基氨基(所述烷基或每個烷基具有1到6個碳原子)；一或二芳基氨基基團(所述芳基或每個芳基如上述涉及芳硫基基團的定義)；式-C(Ra)(Rb)-C(＝O)Rc的a-羰基烷基基團，其中Ra和Rb選自氫原子、具有從1到20個碳原子的烷基基團、芳基基團(如上述涉及芳硫基基團的定義)和芳烷基基團(其中具有1到4個碳原子的烷基基團由如上述涉及芳硫基基團的定義的芳基基團取代)，前提是Ra和Rb之一是氫原子；
Rc選自氫原子、具有從1到20個碳原子的烷基基團、芳基基團(如上述涉及芳硫基基團的定義)、芳烷基基團(其中具有1到4個碳原子的烷基基團由如上述涉及芳硫基基團的定義的芳基基團取代)、具有1到6個碳原子的烷氧基基團、氨基基團或者如上定義的一或二烷基氨基基團。
這樣，在更常規(guī)的方面，本發(fā)明涉及其中第一步是用一種親核試劑生成21-衍生物的方法。我們把這種化合物稱作21-Nuc化合物。
21-氰基的存在對于一些終產(chǎn)物，尤其是海鞘素770和phthalascidin是必需的，而對于其他終產(chǎn)物，21-氰基起著可易于轉(zhuǎn)化成另一取代基如海鞘素743的21-羥基或21-羥基phthalascidin的保護基的作用。使用21-氰基化合物作為起始原料有效地穩(wěn)定了后續(xù)的合成步驟過程中產(chǎn)生的分子，直至它任選被除去。其他21-Nuc化合物可以提供此種益處及其他益處。
在一個重要的方面，本發(fā)明包括通式(XVI)的21-氰基化合物在制備雙-或三-(四氫異喹啉酚)化合物中的用途?？梢灾苽涞漠a(chǎn)物包括諸如中間體11或21，及海鞘素，以及新的和已知的相關(guān)結(jié)構(gòu)的化合物。
優(yōu)選的起始原料包括式(XV)或(XVI)化合物，其中R14a和R14b均為氫。優(yōu)選的起始原料也包括式(XV)或(XVI)化合物，其中R15為氫。而且，優(yōu)選的起始原料還包括式(XV)或(XVI)化合物，其中環(huán)E是一酚環(huán)。優(yōu)選的起始原料還包括式(XV)或(XVI)化合物，其中R5、R8、R15和R18中的至少一個，最好至少兩個或三個不為氫。
本發(fā)明合適的起始原料的實例包括番紅霉素A、番紅霉素B、番紅霉素C、番紅霉素G、番紅霉素H、番紅霉素S、番紅霉素Y3、番紅霉素Yd1、番紅霉素Ad1、番紅霉素Yd2、番紅霉素AH2、番紅霉素AH2Ac、番紅霉素AH1、番紅霉素AH1Ac、番紅霉素AR3、礬海綿霉素A、礬海綿霉素B、礬海綿霉素C、礬海綿霉素D、礬海綿霉素E、礬海綿霉素F、銼海綿霉素、番紅霉素D、番紅霉素F、番紅霉素Mx-1、番紅霉素Mx-2、番紅菌素A、番紅菌素B和番紅霉素R。對于基團R21，優(yōu)選起始原料在21位置具有氰基。
在一個特別優(yōu)選的方面，本發(fā)明包括一個半合成方法，其中對番紅菌素B使用轉(zhuǎn)化的步驟 番紅菌素B番紅菌素B有一個與海鞘素密切相關(guān)的環(huán)系。該化合物具有相同的五環(huán)結(jié)構(gòu)及在右旋芳環(huán)，環(huán)E上具有相同的取代形式。番紅菌素B對于一些在ET-743的全合成的合成中間體，特別是中間體11或21也有非常密切的相似性。使用已完好建立的方法可將此種中間體轉(zhuǎn)化成ET-743。因此番紅菌素B向中間體11或21的合成轉(zhuǎn)化將提供一種得到ET-743的半合成方法。
因此，我們提供由這種化合物番紅菌素B制得的中間體11或21，以及由中間體11或21衍生的化合物，特別是海鞘素化合物。我們進一步提供由番紅菌素B制得的phthalascidin。本發(fā)明也涉及番紅菌素B在生產(chǎn)中間體11或21、海鞘素化合物和本發(fā)明的其他中間體中的用途。本發(fā)明也涉及本文中描述的衍生自其他提及的起始原料的化合物以及那些化合物在此類化合物的生產(chǎn)中的用途。
本發(fā)明更優(yōu)選的起始原料具有21-氰基基團。目前本發(fā)明最優(yōu)選的化合物是式2化合物。該化合物直接得自番紅菌素B并被認(rèn)為是半合成方法的關(guān)鍵中間體。 化合物2在相關(guān)的方面，我們提供經(jīng)熒光假單胞菌的(Pseudomonasfluorescens)番紅菌素B-產(chǎn)生株發(fā)酵，并用氰化物離子處理液體培養(yǎng)基得到的氰基番紅菌素B。優(yōu)選的熒光假單胞菌株是A2-2菌株，F(xiàn)ERMBP-14，在EP 055299的方法中使用了該菌株。氰化物離子的合適來源是氰化鉀。在通常處理中，過濾所述液體培養(yǎng)基并加入過量的氰化物離子。在攪拌適當(dāng)時間，如攪拌1小時后，pH呈堿性，如pH9.5，接著從有機提取物得到粗提物，它可經(jīng)進一步純化得到氰基番紅菌素B。
為了避免疑義，在本發(fā)明說明書中指出的立體化學(xué)是基于我們對于天然產(chǎn)物正確立體化學(xué)的理解。對于在已指定的立體化學(xué)中發(fā)現(xiàn)的某種程度的錯誤，需要對在本專利說明書全文中給出的結(jié)構(gòu)式中進行適當(dāng)改正。而且在某種程度上說，可以對于所述合成進行修飾，本發(fā)明擴展至立體異構(gòu)體。
本發(fā)明典型的產(chǎn)物具有式(XVIIb)以及衍生物，包括其酰基衍生物，特別是其中R5是乙酰氧基或其它最多可達4個碳原子的酰氧基的衍生物， 其中R1和R4一起形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)基團 R5是-H或-OH；R7和R8一起形成基團-O-CH2-O-；R14a和R14b均為-H或一個為-H而另一個為-OH、-OCH3或-OCH2CH3，或者R14a和R14b一起形成酮基；及R15是-H或-OH；R21是-H、-OH或-CN。
在式(XVIIb)中，R1典型地與R4一起形成式(IV)或(V)基團。所述基團R18通常是被保護的。通常R21是氰基。
優(yōu)選R14a和R14b為氫。優(yōu)選R15為氫。O-?；苌锖线m為脂族O-?；苌铮貏e是1至4個碳原子的?；苌铮约暗湫蜑镺-乙?；苌?，特別是在5-位的O-乙?；苌?。
合適的酚基和羥基的保護基包括醚和酯，例如烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、烷氧基甲硅烷基烷氧基烷基、烷硫基烷基、芳硫基烷基、疊氮基烷基、氰基烷基、氯代烷基、雜環(huán)基、芳酰基、鹵代芳?；?、環(huán)烷基烷基、鏈烯基、環(huán)烷基、烷基芳烷基、烷氧基芳烷基、硝基芳烷基、鹵代芳烷基、烷基胺基羰基芳烷基、烷基亞磺?；纪榛⑼榛坠柰榛拿鸭捌渌?，及芳基?；?、芳烷基碳酸酯、脂族碳酸酯、烷基亞磺?；纪榛妓狨?、烷基碳酸酯、芳基鹵代烷基碳酸酯、芳基鏈烯基碳酸酯、芳基氨基甲酸酯、烷基氧膦基、烷基硫膦基、芳基硫膦基、芳烷基的磺酸酯及其他酯。此類基團可以任選由先前提及的在R1中的基團取代。
對于胺的合適的保護基包括氨基甲酸酯，酰胺和其他保護基團，例如烷基、芳烷基、磺基或鹵代芳烷基、鹵代烷基、烷基甲硅烷基烷基、芳烷基、環(huán)烷基烷基、烷基芳烷基、雜環(huán)基烷基、硝基芳烷基、酰氨基烷基、硝基芳基二硫代芳烷基、二環(huán)烷基羧酰胺基烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、芳基鏈烯基、硝基芳基鏈烯基、雜環(huán)基鏈烯基、雜環(huán)基、羥基雜環(huán)基、烷基二硫代、烷氧基-或鹵代-或烷基亞磺?；纪榛?、雜環(huán)基?；?，及其他氨基甲酸酯，以及鏈烷?；Ⅺu代鏈烷?；?、芳基鏈烷?；?、鏈烯?；?、雜環(huán)基酰基、芳?；?、芳基芳?；?、鹵代芳?；?、硝基芳?；捌渌０?，以及烷基、鏈烯基、烷基甲硅烷基烷氧基烷基、烷氧基烷基、氰基烷基、雜環(huán)基、烷氧基芳烷基、環(huán)烷基、硝基芳基、芳烷基、烷氧基-或羥基-芳烷基，及許多其他基團。這些基團可以任選由先前提及的R1中的基團取代。
此類保護基團的例子于下表中給出-OH基團的保護醚縮寫甲基甲氧甲基 MOM芐氧甲基 BOM甲氧基乙氧甲基MEM
2-(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基 SEM甲硫基甲基 MTM苯硫基甲基 PTM疊氮基甲基氰基甲基2，2-二氯-1，1-二氟乙基2-氯乙基2-溴乙基四氫吡喃基 THP1-乙氧基乙基 EE苯甲酰甲基4-溴苯甲酰甲基環(huán)丙基甲基烯丙基炔丙基異丙基環(huán)己基寂丁基芐基2，6-二甲基芐基4-甲氧基芐基 MPM或PMB鄰-硝基芐基2，6-二氯芐基3，4-二氯芐基4-(二甲基氨基)羰基芐基4-甲基亞磺酰基芐基 Msib9-蒽基甲基4-吡啶甲基七氟-對甲苯基四氟-4-吡啶基三甲基甲硅烷基 TMS叔丁基二甲基甲硅烷基TBDMS叔丁基二苯基甲硅烷基TBDPS三異丙基甲硅烷基TIPS酯甲酸芳基酯乙酸芳基酯乙酰丙酸芳基酯新戊酸芳基酯ArOPv苯甲酸芳基酯9-氟羧酸芳基酯碳酸芳基甲基酯碳酸1-金剛烷基酯碳酸叔丁基酯BOC-OAr4-甲基亞磺?；S基碳酸酯Msz-Oar2，4-二甲基戊-3-基碳酸酯Doc-Oar2，2，2-三氯乙基碳酸芳基酯芳基乙烯基碳酸酯碳酸芳基芐酯氨基甲酸芳基酯二甲基氧膦基Dmp-OAr二甲基硫膦基Mpt-OAr二苯基硫膦基Dpt-Oar甲磺酸芳基酯甲苯磺酸芳基酯
2-甲?；交撬岱蓟?NH2基團的保護氨基甲酸酯 縮寫甲基乙基9-芴基甲基 Fmoc9-(2-硫代)芴基甲基9-(2，7-二溴代)芴基甲基17-四苯并[a，c，g，i]芴基甲基Tbfmoc2-氯-3-茚基甲基 Climoc苯并[f]茚-3-基甲基 Bimoc2，7-二-叔丁基[9-(10，10-二氧代-10，10，10，10-四氫硫代呫噸基)]甲基 DBD-Tmoc2，2，2-三氯乙基 Troc2-三甲基甲硅烷基乙基 Teoc2-苯乙基 hZ1-(1-金剛烷基)-1-甲基乙基Adpoc2-氯乙基1，1-二甲基-2-氯乙基1，1-二甲基-2-溴乙基1，1-二甲基-2，2-二溴乙基DB-t-BOC1，1-二甲基-2，2，2-三氯乙基 TCBOC1-甲基-1-(4-聯(lián)苯基)乙基 Bpoc1-(3，5-二叔丁基苯基)-1-1-甲基乙基 t-Burmeoc2-(2’-和4’-吡啶基)乙基 Pyoc2，2-雙(4’-硝基苯基)乙基Bnpeocn-(2-新戊酰氨基)-1，1-二甲基乙基
2-[(2-硝基苯基)二硫代]-1-苯乙基 NpSSPeoc2-(n，n-二環(huán)己基甲酰胺基)乙基叔丁基BOC1-金剛烷基1-Adoc2-金剛烷基2-Adoc乙烯基Voc烯丙基Aloc或Alloc1-異丙基烯丙基Ipaoc肉桂基Coc4-硝基肉桂基 Noc3-(3’-吡啶基)丙-2-烯基 Paloc8-喹啉基n-羥基哌啶基烷基二硫代芐基 Cbz或Z對-甲氧基芐基 Moz對-硝基芐基 PNZ對-溴芐基對-氯芐基2，4-二氯芐基4-甲基亞磺?；S基Msz9-蒽基甲基二苯基甲基吩噻嗪基-(10)-羰基n’-對-甲苯磺?；被驶鵱’-苯基氨基硫代羰基酰胺甲酰胺乙酰胺氯乙酰胺三氟乙酰胺 TFA苯基乙酰胺3-苯基丙酰胺戊-4-烯酰胺吡啶酰胺3-吡啶基甲酰胺苯甲酰胺對-苯基苯甲酰胺n-苯鄰二甲酰亞胺n-四氯苯鄰二甲酰亞胺TCP4-硝基-n-苯鄰二甲酰亞胺n-二硫代琥珀酰亞胺 Dtsn-2，3-二苯基馬來酰亞胺n-2，5-二甲基吡咯n-2，5-雙(三異丙基甲硅烷氧基)吡咯 BIPSOPn-1，1，4，4-四甲基二硅氮雜環(huán)戊烷加合物(disiliazacyclopentante adduct) STABASE1，1，3，3-四甲基-1，3-二硅雜異二氫吲哚 BSB特殊的-NH保護基團n-甲基胺n-叔丁基胺n-烯丙基胺n-[2-三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基胺 SEMn-3-乙酰氧基丙基胺
n-氰基甲基胺n-(1-異丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)胺n-2，4-二甲氧基芐基胺Dmb2-氮雜降冰片烯n-2，4-二硝基苯基胺n-芐基胺 Bnn-4-甲氧基芐基胺 MPMn-2，4-二甲氧基芐基胺DMPMn-2-羥基芐基胺 Hbnn-(二苯基甲基)氨基 DPMn-雙(4-甲氧基苯基)甲基胺n-5-二苯并環(huán)庚基胺 DBSn-三苯基甲基胺 Trn-[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基]氨基 MMTrn-9-苯基芴基胺(flurenyl) Pfn-二茂鐵基甲基胺 Fcmn-2-吡啶甲基胺n’-氧化物n-1，1-二甲硫基亞甲基胺n-亞芐基胺(benzylideneamine)n-對-甲氧基亞芐基胺n-二苯基亞甲基胺n-(5，5-二甲基-3-氧代-1-環(huán)己烯基)胺n-硝基胺n-亞硝基胺二苯基磷酰胺(-phosphinamide) Dpp二甲硫基磷酰胺 Mpt二苯硫基磷酰胺 Ppt二芐基氨基磷酸酯
2-硝基苯基亞磺酰胺 Npsn-1-(2，2，2-三氟-1，1-二苯基)乙基亞磺酰胺 TDE3-硝基-2-吡啶亞磺酰胺Npys對-甲苯氨磺酰Ts苯氨磺酰本發(fā)明特別的海鞘素產(chǎn)物包括式(XVIII)的化合物和其?；苌铮鼉?yōu)選包括5-乙?；苌锏?-?；苌铩Ｋ鍪?XVIII)如下 其中，R1和R4形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基團 更特別為(IV)或(V)基團；R21是-H、-OH或-CN，特別是-OH或-CN。
通常，由21-氰基起始化合物轉(zhuǎn)化成例如，式(XVIII)的海鞘素產(chǎn)物的步驟包括
a)如果需要，將環(huán)E的醌體系轉(zhuǎn)化成酚體系；b)如果需要，將環(huán)A的醌體系轉(zhuǎn)化成酚體系；c)將環(huán)A的酚體系轉(zhuǎn)化成亞甲基二氧基苯酚環(huán)；d)在環(huán)B上形成跨過1-位和4-位的式(IV)、(VI)或(VII)的橋接螺環(huán)系；及e)適當(dāng)時衍化，如?；?br>
步驟(a)，如果需要，將環(huán)E的醌體系轉(zhuǎn)化成酚體系，可以通過常規(guī)的還原方法實現(xiàn)。盡管可以使用其他的還原體系，合適的試劑體系是氫與鈀-碳催化劑。
步驟(b)，如果需要，類似于步驟(a)，將環(huán)A的醌體系轉(zhuǎn)化成酚體系，不需要更詳細敘述。
步驟(c)，將環(huán)A的酚體系轉(zhuǎn)化成亞甲基二氧基苯酚環(huán)，可以通過幾種方法實現(xiàn)，很可能包括步驟(b)。例如，可以將醌環(huán)A在7-位的甲氧基取代基脫甲基，并還原成二氫醌，接著用合適的親電試劑諸如CH2Br2、BrCH2Cl，或類似的二價試劑捕捉而直接生成亞甲基二氧基環(huán)系；或者使用二價試劑如硫代羰基二咪唑捕捉，使產(chǎn)生可轉(zhuǎn)化成所需環(huán)的取代的亞甲基二氧基環(huán)系。
步驟(d)典型地通過用可幫助生成所需橋鍵的橋鍵形成劑在1-位適當(dāng)取代來實現(xiàn)，在4-位形成一個exendo醌的甲基化物(methide)，并使該甲基化物與1-取代基反應(yīng)得到橋鍵結(jié)構(gòu)。優(yōu)選的橋鍵形成劑具有式(XIX) 其中，F(xiàn)u表示保護官能團，諸如基團-NHProt4a，Prot3是保護基，以及虛線顯示任選的雙鍵。
合適地，通過首先在環(huán)A和B的結(jié)合部位10-位引入羥基，生成所述甲基化物，得到式(XX)的部分結(jié)構(gòu) 或更優(yōu)選式(XⅪ)的部分結(jié)構(gòu) 其中，基團R”是為所需的式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基團進行選擇的。對于前兩個此類基團，基團R”一般取-CHFu-CH2-SProt3的形式。然后可以除去保護基并且適宜時可加以修飾得到所需的化合物。
在通過引用結(jié)合到本文中的美國專利5721362中提供了用于步驟(d)的典型方法。具體的參考見該美國專利中的欄目8、步驟(1)及實施例33以及相關(guān)內(nèi)容。
在步驟(e)的衍生化可以包括例如使用Ra-CO-基團?；?，其中Ra可以是各種基團，諸如烷基、烷氧基、鏈烯基、芳烷基、芳基亞烷基、氨基酸?；螂s環(huán)基，各基團任選由鹵代基、氰基、硝基、羧基烷基、烷氧基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、烷基、氨基或取代的氨基取代。其它?；瘎┌ó惲蚯杷狨?，例如異硫氰酸芳酯，特別是異硫氰酸苯酯。Ra的烷基、烷氧基或亞烷基基團具有1至6或12個碳原子并可以是線性的、分支的或環(huán)狀的。芳基典型為苯基、聯(lián)苯基或萘基。雜環(huán)基團可以是芳族的或部分未飽和的或完全未飽和的并適合具有4至8個環(huán)原子，更優(yōu)選具有5或6個環(huán)原子及一個或多個選自氮、硫和氧的雜原子。
并非窮舉，典型的Ra基團包括烷基、鹵代烷基、烷氧基烷基、鹵代烷氧基烷基、芳基亞烷基、鹵代烷基芳基亞烷基、?；?、鹵代酰基、芳烷基、鏈烯基及氨基酸。例如，Ra-CO-可以是乙酰基、三氟乙?；?、2，2，2-三氯乙氧基羰基、異戊酰羰基、反式-3-(三氟甲基)肉桂酰基羰基、七氟丁酰羰基、癸酰羰基、反式-肉桂酰羰基、丁酰羰基、3-氯丙酰羰基、肉桂酰羰基、4-甲基肉桂酰羰基、氫化肉桂酰(hydrocinnamoyl)羰基，或反式-己烯酰羰基，或者丙氨?；?、精氨?；?、天冬氨?；?、天冬?；㈦装滨；?、谷氨?；?、谷氨酰胺?；?、甘氨酰基、組氨?；?、羥脯氨?；?、異亮氨酰基、亮氨?；?、賴氨?；⒓琢虬滨；?、苯丙氨?；?、脯氨?；?、絲氨?；?、蘇氨酰基、甲狀腺原氨酰基、色氨酰基、酪氨酰基、纈氨?；约捌渌浅Ｉ僖姷陌被狨；鶊F，還有苯二酰亞氨基及其它環(huán)酰胺。在所列的保護基團中可發(fā)現(xiàn)其它例子。其中-CO-Ra衍生自氨基酸及包括氨基的化合物可以自身形成酰基衍生物。合適的N-?；衔锇梢砸来涡纬蒒-?；苌锏亩念?。
通過圖示方法，目前將式2氰基番紅菌素B化合物轉(zhuǎn)化成ET-743是可行的，結(jié)果產(chǎn)生了比先前介紹的制備ET-743的方法更短及更直接的方法。
使用化合物29制備ET-743的逆合成分析在流程I中描述。流程I 按照上述流程I，可以按21的線性步驟得到ET-743。該方法經(jīng)一系列反應(yīng)將氰基番紅菌素B轉(zhuǎn)化成中間體25，所述反應(yīng)主要包括(1)除去置于環(huán)A上的甲氧基，(2)還原環(huán)A并經(jīng)一釜法形成亞甲基二氧基，(3)水解位于碳1上的酰胺官能團，(4)將所得胺基轉(zhuǎn)化成為羥基。而且，所述方法直接使用半胱氨酸殘基29生成中間體27，避免在化合物25的環(huán)B的1位的伯醇官能團的保護和脫保護。為了具有與已存在的烯丙基和MOM基團相容的能力，用β-β-β-三氯乙氧基羰基保護基基團在半胱氨酸衍生物Int-29的氨基上進行保護。中間體27被直接氧化及環(huán)化。這些情況與在合成的后面階段使用的不同脫保護策略一起形成新的路徑，并且該路徑比US 5721362中的方法更易于修改以適于工業(yè)化生產(chǎn)。
2-氰基化合物轉(zhuǎn)化成中間體25通常包括下述步驟(見流程II)通過使2與叔丁氧羰基酸酐反應(yīng)生成式14保護的化合物；通過在乙腈中的溴甲基甲基醚與二異丙基乙胺反應(yīng)將14轉(zhuǎn)變?yōu)槭?5的二-保護的化合物；通過與氫氧化鈉的甲醇溶液反應(yīng)選擇性地消除15中醌系統(tǒng)的甲氧基，得到式16化合物；接著通過采用下面的優(yōu)選程序?qū)?6轉(zhuǎn)化為式18的亞甲基-二氧基化合物(1)在氫氣壓下用10％Pd/C還原16化合物的醌基；(2)通過與溴代氯甲烷和碳酸銫在氫氣壓下反應(yīng)使氫醌中間體轉(zhuǎn)化成式17的亞甲基二氧基化合物；(3)通過將自由羥基保護為OCH2R基團，將17轉(zhuǎn)變成式18化合物。此反應(yīng)使用BrCH2R和碳酸銫進行，其中R可以是芳基、CH＝CH2、OR’等；通過與HCl的二氧六環(huán)的溶液反應(yīng)消除18的叔丁氧基羰基和甲氧基甲基保護基得到式19化合物。該反應(yīng)通過使18與三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液混合也可以完成；通過19與異硫氰酸苯酯反應(yīng)生成式20的硫脲化合物；通過與HCl的二氧六環(huán)的溶液反應(yīng)將式20化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槭?1的胺化合物；通過與氯甲酸三氯乙基酯和吡啶反應(yīng)將式21化合物轉(zhuǎn)變?yōu)镹-Troc衍生物22；通過22與溴甲基甲基醚和二異丙基乙胺反應(yīng)生成式23的保護的羥基化合物；通過與乙酸和鋅反應(yīng)將式23化合物轉(zhuǎn)變?yōu)镹-H衍生物24；通過與在乙酸中的亞硝酸鈉反應(yīng)將式24化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槭?5的羥基化合物?；蛘撸梢允褂迷谝宜岷鸵译婊旌衔镏械乃难趸?，接著用氫氧化鈉處理。也可以在乙酸酐-乙酸混合物中使用亞硝酸鈉，然后用氫氧化鈉處理。流程II
使用半胱氨酸衍生物29使中間體25化合物轉(zhuǎn)化為ET-743，通常包括下述步驟(見流程III)流程III
通過用(S)-N-2，2，2-三氯乙氧羰基-S-(9H-芴-9基甲基)半胱氨酸29保護伯羥基官能團將式24化合物轉(zhuǎn)變?yōu)檠苌?0；經(jīng)用氫化三丁基錫和二氯化鈀-雙(三苯基膦)裂解烯丙基將式30的保護的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)榉友苌?1；經(jīng)在低溫下用苯亞硒酸酐氧化將式31酚化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槭?2化合物；通過下述順序?qū)⑹?2羥基化合物轉(zhuǎn)變?yōu)閮?nèi)酯33(1)使式32化合物與2當(dāng)量的三氯甲磺酸(triflic)酐和5當(dāng)量DMSO反應(yīng)；(2)接著與8當(dāng)量二異丙基乙胺反應(yīng)；(3)然后與4當(dāng)量叔丁基醇反應(yīng)；(4)接著與7當(dāng)量2-叔-丁基-1，1，3，3-四甲基胍反應(yīng)；(5)然后與10當(dāng)量乙酸酐反應(yīng)；通過用TMSI除去MOM保護基將33內(nèi)酯化合物轉(zhuǎn)變?yōu)榱u基化合物34；通過與Zn/AcOH反應(yīng)消去式34化合物的N-三氯乙氧羰基基團生成化合物35；經(jīng)與N-甲基吡啶鎓甲醛(carboxaldehyde)氯化物反應(yīng)，然后與DBU反應(yīng)將氨基化合物35轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的式36的a-酮基內(nèi)酯化合物；通過將式36化合物與3-羥基-4-甲氧基苯基乙胺反應(yīng)生成ET-770；通過與AcN/H2O混合物中的硝酸銀反應(yīng)，將ET-770轉(zhuǎn)化為ET-743。
中間體11和相關(guān)中間體的生成所述逆合成分析在下述順序中描述。
在本發(fā)明中，關(guān)鍵的一類中間體包括中間體11和具有通式(XXI)的化合物 其中Prot1和Prot2是羥基保護基，優(yōu)選為不同的保護基。對于中間體11自身，基團Prot1是甲氧基甲基，而基團Prot2是叔丁基二苯基甲硅烷基團。
將21-氰基化合物轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g體11或式(XXI)的相關(guān)中間體通常包括下述步驟a)如果需要，將環(huán)E的醌體系轉(zhuǎn)變成酚體系；b)在E環(huán)的18-位形成-OProt1基團；c)在B環(huán)的1-位形成-CH2-OProt2基團；及d)如果需要，將環(huán)A的醌體系轉(zhuǎn)變成酚體系；e)將環(huán)A的酚體系轉(zhuǎn)變成亞甲基二氧基酚環(huán)。
無須特殊說明，步驟(b)，在E環(huán)的18-位形成-OProt1基團，是對于酚基團的典型保護反應(yīng)。根據(jù)保護基團的性質(zhì)選擇合適的條件。其他步驟類似其他的反應(yīng)。
步驟(b)，在B環(huán)的1-位形成-CH2-OProt2基團，通常是通過在1-位形成-CH2NH2基團并接著將胺官能團轉(zhuǎn)化成羥基官能團并加以保護而完成。因此當(dāng)所述起始原料的R1基團是-CH2NH-CO-CR25aR25bR25c時，則可除去N-?；鶊F。當(dāng)起始原料的R1基團是-CH2-O-CO-R時，則其中取代基R1相同的海鞘素產(chǎn)物無需任何變化。對于其他產(chǎn)物，需除去O-?；鶊F。多種方法可以用于進行此種脫酰作用。在一種變化中，所述脫酰作用和轉(zhuǎn)化成羥基官能團可一步完成。此后，可以將該羥基?；蛘吡硗廪D(zhuǎn)化得到適當(dāng)?shù)腞1基團。
美國專利號5721362描述通過一個長且多步驟的合成方法制備ET-743的合成方法。該合成的中間體之一是中間體11。使用氰基番紅菌素B作為起始原料能夠得到中間體11，同時提供更短的路徑制備此種化合物并因而改進制備ET-743的方法。
經(jīng)上述方法可以將氰基番紅菌素B轉(zhuǎn)化成中間體25。使用下述見于流程VII的步驟可以由中間體25得到中間體11。
在堿存在下，通過使25與叔-丁基二苯基甲硅烷基氯反應(yīng)生成式26的保護的羥基化合物；最后用氫化三丁基錫和二氯化鈀-雙(三苯基膦)分解26的烯丙基基團，導(dǎo)致生成中間體11。流程VII 本發(fā)明將番紅菌素B轉(zhuǎn)化為中間體11的合成方法的一個實施方案是修改和擴展流程VIII并包括以下的系列步驟通過與KCN在酸性介質(zhì)中反應(yīng)由CN選擇性替換OH，將番紅菌素B化合物立體選擇性地轉(zhuǎn)化為式2化合物；
通過式2化合物與異氰酸苯酯反應(yīng)生成式3硫脲化合物；通過經(jīng)在酸性介質(zhì)中水解，接著加入乙酸酐將式3的硫脲化合物轉(zhuǎn)化成式5的乙酰胺；經(jīng)在酸介質(zhì)中用碳酸氫鈉猝滅所述水解，可以分離式4的中間體胺化合物，但該中間體是高度不穩(wěn)定的，并迅速轉(zhuǎn)化成稱作化合物6的五元環(huán)亞胺；經(jīng)與溴代甲基甲基醚和二異丙基乙胺在二氯甲烷中反應(yīng)生成保護的式7化合物；經(jīng)與氫氧化鈉的甲醇溶液反應(yīng)，對式7化合物的醌體系的甲氧基選擇性脫去甲基成為式8化合物；經(jīng)優(yōu)選的下述順序?qū)⑹?化合物轉(zhuǎn)化為式9亞甲基二氧基化合物(1)在氫氣壓下用10％Pd/C還原化合物8的醌基團；(2)在氫氣壓下與溴代氯甲烷和碳酸銫反應(yīng)將所述氫醌中間體轉(zhuǎn)化成式9的亞甲基二氧基化合物；(3)經(jīng)與BrCH2R和碳酸銫反應(yīng)將自由羥基保護為OCH2R基團，使式9化合物轉(zhuǎn)化成式10化合物，其中R可以是芳基、CH＝CH2、OR’等；通過與氮的四氧化物在乙酸和乙酸的乙酸乙酯(乙酸酐)的混合物中反應(yīng)，接著用氫氧化鈉處理將式10化合物的乙酰胺基團轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的式25的羥基；或者可以使用亞硝酸鈉在乙酸酐乙酸的混合物中反應(yīng)，接著用氫氧化鈉處理；或者經(jīng)與肼反應(yīng)或者與Boc2O、DMAP反應(yīng)，接著經(jīng)肼處理可以將式10化合物的乙酰胺基轉(zhuǎn)化成伯胺基團；可以將此伯胺轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的羥基(式25化合物)，即通過用苯磺酸4-甲?；?1-甲基吡啶鎓或其他吡啶鎓離子將該伯胺經(jīng)氧化轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的醛，接著經(jīng)DBU或其他堿處理并進一步水解，并接著用氫化鋰鋁或其他還原劑將該醛還原為相應(yīng)的羥基；通過與叔-丁基二苯基甲硅烷基氯和二甲基氨基吡啶在二氯甲烷中反應(yīng)生成式26的保護的化合物(流程VII)；經(jīng)在還原性條件或酸性條件下反應(yīng)的OCH2R保護基團的脫保護，將式26的甲硅烷基化化合物轉(zhuǎn)化成為中間體11。典型的方法是在氫氣氛下使用鈀黑，或TFA水溶液或者氫化三丁基錫和二氯雙(三苯基膦鈀)。流程VIII
在另外的優(yōu)選的修飾方案中，使用擴展的流程II的方法可以將式2氰基化合物轉(zhuǎn)化為中間體11，該方法包括進一步的步驟通過25與叔-丁基二苯基甲硅烷基氯在堿存在下反應(yīng)生成式26的保護的羥基化合物；最后用氫化三丁基錫和二氯化鈀-雙(三苯基膦)分解26上的烯丙基基團導(dǎo)致生成中間體11。
因此，經(jīng)這些或其他路徑，有可能將氰基番紅菌素B轉(zhuǎn)化成許多具有強效抗腫瘤治療活性的中間體和衍生物。這些中間體可以由已經(jīng)介紹的化合物起始制備或者使用其它的路徑制備。新的中間體化合物按照前述解釋，可以看到本發(fā)明提供新的中間體化合物。根據(jù)環(huán)A，所述中間體具有式(XXIIa) 或具有式(XXIIb) 其中R1是-CH2NH2或-CH2OH，或者是此基團的保護的或衍生的形式以及R4是-H；或R1a和R4一起形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基團 R5是-OH，或者是此基團的保護的或衍生的形式；R14a和R14b都是-H或一個是-H而另一個是-OH，或者是此基團的保護的或衍生的形式、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基基團；R12是-H、-CH3、-CH2CH3；R15是-H、-OH，或此基團的保護的或衍生的形式；以及R18是-OH，或此基團的保護的或衍生的形式。
在一個實施方案中，優(yōu)選至少R1、R5、R14a、R14b、R15或R18是保護的或衍生的基團。
在本發(fā)明的一個不同方案中，基團R1不是叔-丁基二苯基甲硅烷基取代基和/或基團R18不是甲氧基甲基。
優(yōu)選R1是-CH2NH2或-CH2OH，或者是此基團的保護的或衍生的形式以及R4是-H；或R1a和R4一起形成下式基團 優(yōu)選R14a和R14b均為-H。一類優(yōu)選的中間體包括確定為化合物25的下式化合物 因此該類優(yōu)選的化合物具有所述通式，其中基團MOM由任一其他保護基團替換。
其他優(yōu)選的中間體包括確定為化合物45和43的化合物(流程IX)。流程(IX) 其他N-?；苌锟梢匀菀椎赜苫衔?5制得并是本發(fā)明的重要部分。合適的酰基包括前述的?；Ｏ鄳?yīng)的21-羥基化合物也是有用的并且是在我們發(fā)現(xiàn)的活性化合物之中的化合物。新的活性化合物我們另外發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中我們最初制備用作中間體的一些的化合物具有另外的治療癌癥，諸如白血病、肺癌、結(jié)腸癌、腎癌和黑色素瘤的活性。
因此，本發(fā)明提供治療任何哺乳動物，特別是治療患有癌癥的人類的方法，該方法包括給予患病的個體治療有效量的本發(fā)明的化合物，或其藥用組合物。
本發(fā)明也涉及藥物制劑，所述制劑包含作為活性成分的本發(fā)明的一種或多種化合物及其制備方法。
藥用組合物的實例包括任何固體(片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑等)或液體(溶液劑，懸浮劑或乳劑)與合適的組分，或口服、局部或胃腸外給藥，并且它們可以含有純的化合物或與任何載體或其他藥理學(xué)活性化合物聯(lián)合給予。當(dāng)胃腸外給藥時，這些組合物可能需要滅菌。
本發(fā)明的化合物或組合物的給藥可以是任何適宜的方法，例如靜脈輸注、口服制劑、腹腔及靜脈制劑。我們優(yōu)選使用輸注時間多達24小時，更優(yōu)選2至12小時，最優(yōu)選2至6小時。在醫(yī)院不經(jīng)過夜住院即允許治療的短時間輸注是特別優(yōu)選的。然而如果需要，輸注可能長達12至24小時或甚至更長時間。輸注可以在適當(dāng)?shù)拈g隔，例如2-4周時進行。含有本發(fā)明的化合物的藥用組合物可以通過脂質(zhì)體或微球(nanosphere)包囊、以緩釋制劑或其他標(biāo)準(zhǔn)傳遞方式傳遞。
正確的化合物劑量將根據(jù)具體的劑型、應(yīng)用的方法、特定的位置、治療的對象和治療的腫瘤而變化。其他因素如年齡、體重、性別、飲食、給藥時間、排泄速率、宿主的狀態(tài)、聯(lián)合用藥的情況、反應(yīng)敏感性和疾病的嚴(yán)重程度都應(yīng)予以考慮?？梢栽谧畲竽褪軇┝糠秶鷥?nèi)連續(xù)進行或者周期性進行給藥。
本發(fā)明的化合物和組合物可以與其他藥物合用以提供聯(lián)合治療。其他藥物可以成為同一組合物的部分，或者作為分開的組合物提供以便在相同時間或不同時間給藥。所述其他藥物的特性并未特殊限定，合適的備選藥物包括a)具有抗有絲分裂作用的藥物，特別是靶向細胞骨架成分的藥物，包括微血管調(diào)節(jié)劑諸如紫杉烷藥物(例如紫杉醇、紅豆杉醇(paclitaxel)、紫杉替勒(Taxotere)、多西紫杉醇(docetaxel)、鬼臼毒素(podophylotoxins)或長春花生物堿(長春堿、長春新堿)；b)抗代謝藥物諸如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、嘌呤類似物如噴司他丁、甲氨碟呤；c)烷化劑諸如氮芥(例如環(huán)磷酰胺或異環(huán)磷酰胺)；d)靶向DNA的藥物諸如蒽環(huán)霉素類(antracycline)藥物阿霉素、多柔比星、表阿霉素(Pharmorubicin)或表柔比星；e)靶向拓?fù)洚悩?gòu)酶的藥物諸如依托泊苷；f)激素或激素激動劑或拮抗劑諸如雌激素、雌激素拮抗劑(他莫昔芬及相關(guān)化合物)和雄激素、氟他胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、環(huán)丙孕酮或奧曲肽；g)靶向腫瘤細胞中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的藥物包括抗體衍生物例如赫賽汀(herceptin)；h)烷基化藥物諸如鉑制劑(順鉑、碳鉑(carbonplatin)、奧沙利鉑、伯爾定(paraplatin))或亞硝基脲(nitrosoureas)；i)有效影響腫瘤代謝的藥物諸如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；j)基因治療和反義藥物；k)抗體治療；1)海洋來源的其他生物活性化合物，特別是didemnins諸如aplidine；m)類固醇類似物，特別是地塞米松；n)抗炎藥物。特別是地塞米松；以及o)抗催吐藥物，特別是地塞米松。
本發(fā)明也擴展至本發(fā)明的化合物在治療方法中的用途，及所述化合物在制備治療癌癥的組合物中的用途。細胞毒活性細胞培養(yǎng)。使細胞在伊格爾極限必需培養(yǎng)基(Eagle’s MinimumEssential Medium)中保持對數(shù)期增長，該培養(yǎng)基加有Earle’s平衡鹽、2.0mM L-谷氨酸、非必需氨基酸，但不加碳酸氫鈉(EMEM/neaa)；補充10％胎牛血清(FCS)、10-2M碳酸鈉和0.1g/l青霉素G+硫酸鏈霉素。
為確定和比較這些化合物的抗腫瘤活性，已經(jīng)使用Bergeron(1984)等介紹的已采用的方法進行樣品篩選步驟。使用的腫瘤細胞系是P-388(得自DBA/2小鼠淋巴瘤的懸浮培養(yǎng)物)、A-549(人肺癌的單細胞層培養(yǎng)物)、HT-29(人結(jié)腸癌的單細胞層培養(yǎng)物)和MEL-28(人黑色素瘤的單細胞層培養(yǎng)物)。
將P-388細胞用1ml含有指定濃度藥物的MEM 5FCS的等分試樣以1×104個細胞/孔接種在16mm孔板上。另一份不含藥物的培養(yǎng)物作為確保細胞保持指數(shù)生長期的對照生長接種。全部測定都重復(fù)進行。在37℃、10％CO2及在98％濕度氣氛下培養(yǎng)三天，通過比較含有藥物的孔中的生長情況和對照孔中的生長情況確定近似IC50。
將A-549、HT-29和MEL-28用1ml含有指定濃度藥物的MEM10FCS的等分試樣，以2×104個細胞/孔接種在16mm孔板上。另一份不含藥物的培養(yǎng)物作為確保細胞保持指數(shù)期生長的對照生長接種。全部測定都重復(fù)進行。在37℃、10％CO2及在98％濕度氣氛下培養(yǎng)三天后，用0.1％結(jié)晶紫對孔中內(nèi)容物染色。通過比較含有藥物的孔中的生長情況和對照孔中的生長情況確定近似的IC50。
1.Raymond J.Bergeron，Paul F.Cavanaugh，Jr.，Steven J.Kline.RobertG.Hughes，Jr.，Gary T.Elliot和Carl W.Porter.亞精氨兒茶酚酰胺鐵螯合物的抗腫瘤和抗皰疹活性(Antineoplastic and antiherpetic activityof spermidine catecholamide iron chelators)。Biochem.Bioph.Res.Comm.1984，121(3)，848-854。
2.Alan C.Schroeder，Robert G.Hughes，Jr.和Alexander Bloch。無環(huán)嘧啶核苷類似物的作用(Effects of Acyclic Pyrimidine NucleosideAnaloges)。J.Med.Chem.1981，241078-1083。細胞毒活性 因此本發(fā)明的活性化合物包括具有10-羥基和1-不穩(wěn)定基團的化合物。
本發(fā)明的一個重要方法包括下面的反應(yīng) 本發(fā)明的另一個重要方法包括下面的反應(yīng) 本發(fā)明的又一個重要方法包括其中R1基團是氨基亞甲基，被轉(zhuǎn)化成羥基亞甲基的反應(yīng)。
本發(fā)明的再一個重要方法包括其中帶有是羥基亞甲基的R1基團的化合物與式(XIX)試劑反應(yīng) 其中Fu是指保護的官能團，Prot3是保護基，及點劃線表示任選的雙鍵。
本發(fā)明的又一個重要方法包括用于制備式(XVI)的21-氰基化合物的反應(yīng)，該方法包括使式(XV)化合物 其中，R1、R5、R8、R14a、R14b、R15及R18如本文所定義以及R21是羥基，與氰離子源反應(yīng)，得到所需的21-氰基化合物。
另外，也應(yīng)該理解，使用其他含有親核基團的化合物，生產(chǎn)其中21-位由另一個親核基團，即21-Nuc基團保護的式(XVI)的相似的化合物。例如，在21-位有烷基氨基取代基的式(XVI)的21-Nuc化合物可以通過由R21為羥基的式(XV)化合物與合適的烷基胺反應(yīng)來制備。在21-位有烷硫基取代基的式(XVI)的21-Nuc化合物也可以通過其中R21為羥基的式(XV)化合物與合適的烷硫醇反應(yīng)來制備?；蛘撸?1-位有□-羰基烷基取代基的式(XVI)的21-Nuc化合物可以通過其中R21為羥基的式(XV)化合物與合適的羰基化合物(通常在堿存在下)反應(yīng)來制備。用于其他21-Nuc化合物的其他合成路徑是可以利用的。
本發(fā)明另外的另一個重要反應(yīng)包括處理本發(fā)明的21-氰基產(chǎn)物生成21-羥基化合物。此種化合物具有重要體內(nèi)活性。
實施例本發(fā)明通過以下實施例加以說明。
實施例1 向在乙醇(200ml)中的2(21.53g，39.17mmol)的溶液中加入叔-丁氧羰基酸酐(butoxycarbonyl anhydride)(7.7g，35.25mmol)并將該混合物在23℃攪拌7小時。然后將所得反應(yīng)物真空濃縮并將殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯6∶4)純化得到14(20.6g，81％)，為黃色固體。Rf0.52(乙酸乙酯CHCl35∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.49(s，1H)，6.32(bs，1H)，5.26(bs，1H)，4.60(bs，1H)，4.14(d，J＝2.4Hz，1H)，4.05，(d，J＝2.4Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.81(d，J＝4.8Hz，1H)，3.7(s，3H)，3.34(br d，J＝7.2Hz，1H)，3.18-3.00(m，5H)，2.44(d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.24(s，3H)，1.82(s，3H)，1.80-1.65(m，1H)，1.48(s，9H)，0.86(d，J＝5.7Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.5，180.8，172.7，155.9，154.5，147.3，143.3，141.5，135.3，130.4，129.2，127.5，120.2，117.4，116.9，80.2，60.7，60.3，58.5，55.9，55.8，54.9，54.4，50.0，41.6，40.3，28.0，25.3，24.0，18.1，15.6，8.5.ESI-MS m/z計算值C34H43N5O8649.7。實測值(M+H)+650.3。實施例2 于0℃攪拌下，向在CH3CN(159ml)中的14(20.6g，31.75mmol)的溶液中加入二異丙基乙胺(82.96ml，476.2mmol)、甲氧基亞甲基溴(25.9ml，317.5mmol)和二甲基氨基吡啶(155mg，1.27mmol)。于23℃攪拌該混合物24小時。所得反應(yīng)物于0℃用0.1N HCl(750ml)(pH＝5)猝滅，并用CH2Cl2(2×400ml)提取。干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮。所得殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯4∶1至己烷/乙酸乙酯3∶2梯度液)純化得到15(17.6g，83％)，為黃色固體。Rf0.38(己烷∶乙酸乙酯3∶7)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.73(s，1H)，5.35(bs，1H)，5.13(s，2H)，4.50(bs，1H)，4.25(d，J＝2.7Hz，1H)，4.03(d，J＝2.7Hz，1H)，3.97(s，3H)，3.84(bs，1H)，3.82-3.65(m，1H)，3.69(s，3H)，3.56(s，3H)，3.39-3.37(m，1H)，3.20-3.00(m，5H)，2.46(d，J＝18Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.23(s，3H)，1.85(s，3H)，1.73-1.63(m，1H)，1.29(s，9H)，0.93(d，J＝5.1Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.4，180.9，172.4，155.9，154.5，149.0，148.4，141.6，135.1，131.0，129.9，127.6，124.4，123.7，117.3，99.1，79.3，60.7，59.7，58.4，57.5，56.2，55.9，55.0，54.2，50.0，41.5，39.9，28.0，25.2，24.0，18.1，15.6，8.5。ESI-MS m/z計算值C36H47N5O9693.8。實測值(M+H)+694.3。
實施例3 于0℃向含有在甲醇(1.6L)中的15(8g，1.5ml)的燒瓶中加入1M氫氧化鈉(3.21)水溶液。在此溫度下攪拌該反應(yīng)物2小時，然后用6MHCl猝滅至pH＝5?；旌衔镉靡宜嵋阴?3×1L)提取并將合并的有機層用硫酸鈉干燥及真空濃縮。所得殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，CHCl3至CHCl3/乙酸乙酯2∶1梯度液)純化得到16(5.3mg，68％)。Rf:0.48(CH3CN∶H2O 7∶3，RP-C18)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.73(s，1H)，5.43(bs，1H)，5.16(s，2H)，4.54(bs，1H)，4.26(d，J＝1.8Hz，1H)，4.04(d，J＝2.7Hz 1H)，3.84(bs，1H)，3.80-3.64(m，1H)，3.58(s，3H)，3.41-3.39(m，1H)，3.22-3.06(m，5H)，2.49(d，J＝18.6Hz 1H)，2.35(s，3H)，2.30-2.25(m，1H)，2.24(s，3H)，1.87(s，3H)，1.45-1.33(m，1H)，1.19(s，9H)，1.00(br d，J＝6.6Hz3H)13C NMR(75MHz，□CDCl3)δ184.9，180.9，172.6，154.7，151.3，149.1，148.6，144.7，132.9，131.3，129.8，124.5，123.7，117.3，116.8，99.1，79.4，59.8，58.6，57.7，56.2，55.6，54.9，54.5，50.1，41.6，40.1，28.0，25.3，24.4，18.1，15.7，8.0ESI-MS m/z計算值C35H45N5O9679.7。實測值(M+H)+680.3實施例4 向在DMF(221ml)中的化合物16(1.8g，2.64mmol)的脫氣溶液中加入10％Pd/C(360mg)并在H2(大氣壓)攪拌45分鐘。在氬氣下將反應(yīng)物用硅藻土過濾至含有無水Cs2CO3(2.58g，7.92mmol)的燒瓶中。然后加入溴代氯甲烷(3.40ml，52.8mmol)并封閉瓶口及于100℃攪拌2小時。冷卻反應(yīng)物，通過硅藻土墊過濾并用CH2Cl2洗滌。將有機層濃縮及干燥(硫酸鈉)得到17，為棕色油狀物，該油狀物可不經(jīng)進一步純化直接用于下一步反應(yīng)。Rf0.36(己烷∶乙酸乙酯1∶5，SiO2).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.68(s，1H)，6.05(bs，1H)，5.90(s，1H)，5.79(s，1H)，5.40(bs，1H)，5.31-5.24(m，2H)，4.67(d，J＝8.1Hz，1H)，4.19(d，J＝2.7Hz，1H)，4.07(bs，1H)，4.01(bs，1H)，3.70(s，3H)，3.67(s，3H)，3.64-2.96(m，5H)，2.65(d，J＝18.3Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.21(s，3H)，2.04(s，3H)，2.01-1.95(m，1H)，1.28(s，9H)，0.87(d，J＝6.3Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ172.1，162.6，154.9，149.1，145.7，135.9，130.8，130.7，125.1，123.1，117.8，100.8，99.8，76.6，59.8，59.2，57.7，57.0，56.7，55.8，55.2，49.5，41.6，40.1，36.5，31.9，31.6，29.7，28.2，26.3，25.0，22.6，18.2，15.8，14.1，8.8。ESI-MS m/z計算值C36H47N5O9693.34。實測值(M+H)+694.3。實施例5 于0℃向含有在DMF(13ml)中的17(1.83g，2.65mmol)溶液的燒瓶中加入Cs2CO3(2.6g，7.97mmol)和烯丙基溴(1.15ml，13.28mmol)。所得混合物在23℃攪拌1小時。使反應(yīng)物通過硅藻土墊過濾并用CH2Cl2洗滌。干燥及濃縮(硫酸鈉)有機層。所得殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，CHCl3乙酸乙酯1∶4)純化得到18(1.08mg，56％)，為白色固體。Rf:0.36(CHCl3乙酸乙酯1∶3)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.70(s，1H)，6.27-6.02(m，1H)，5.94(s，lH)，5.83(s，1H)，5.37(dd，J1＝1.01Hz，J2＝16.8Hz，1H)，5.40(bs，1H)，5.25(dd，J1＝1.0Hz，J2＝10.5Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.91(bs，1H)，4.25-4.22(m，1H)，4.21(d，J＝2.4Hz，1H)，4.14-4.10(m，1H)，4.08(d，J＝2.4Hz，1H)，4.00(bs，1H)，3.70(s，3H)，3.59(s，3H)，3.56-3.35(m，2H)，3.26-3.20(m，2H)，3.05-2.96(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.63(d，J＝18Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.21(s，3H)，2.09(s，3H)，1.91-1.80(m，1H)，1.24(s，9H)，0.94(d，J＝6.6Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ172.0，154.8，148.8，148.6，148.4，144.4，138.8，133.7，130.9，130.3，125.1，124.0，120.9，117.8，117.4，112.8，112.6，101.1，99.2，73.9，59.7，59.3，57.7，56.9，56.8，56.2，55.2，40.1，34.6，31.5，28.1，26.4，25.1，22.6，18.5，15.7，14.0，9.2ESI-MS m/z計算值C39H51N5O9733.4。實測值(M+H)+734.4。實施例6 向在二氧六環(huán)(2ml)中的18(0.1g，0.137mmol)的溶液中加入4.2M HCl/二氧六環(huán)(1.46ml)并將該混合物在23℃攪拌1.2小時。所得反應(yīng)物于0℃用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)猝滅并用乙酸乙酯(2×70ml)提取。干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮。得到19(267mg，95％)，為白色固體，該固體可不經(jīng)進一步純化直接用于下一步反應(yīng)。Rf0.17(乙酸乙酯∶甲醇10∶1，SiO2).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.49(s，1H)，6.12-6.00(m，1H)，5.94(s，1H)，5.86(s，1H)，5.34(dd，J＝1.0Hz，J＝17.4Hz，1H)，5.25(dd，J＝1.0Hz，J＝10.2Hz，1H)，4.18-3.76(m，5H)，3.74(s，3H)，3.71-3.59(m，1H)，3.36-3.20(m，4H)，3.01-2.90(m，1H)，2.60(d，J＝18.0Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.24(s，3H)，2.11(s，3H)，1.97-1.86(m，1H)，0.93(d，J＝8.7Hz，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ175.5，148.4，146.7，144.4，142.4，138.9，133.7，131.3，128.3，120.8，117.9，117.4，113.8，112.4，101.1，74.2，60.5，59.1，56.5，56.1，56.3，56.0，55.0，50.5，41.6，39.5，29.5，26.4，24.9，21.1，15.5，9.33。ESI-MS m/z計算值C32H39N5O6589。實測值(M+H)+590。實施例7 向在CH2Cl2(1.5mmol)中的19(250mg，0.42mmol)的溶液中加入異硫氰酸苯酯(0.3ml，2.51mmol)并將該混合物在23℃攪拌1小時。將反應(yīng)物真空濃縮并將殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷至5∶1的己烷/乙酸乙酯梯度液)純化得到20(270mg，87％)，為白色固體。Rf:0.56(CHCl3∶乙酸乙酯1∶4).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.00(bs，1H)，7.45-6.97(m，4H)，6.10(s，1H)，6.08-6.00(m，1H)，5.92(s，1H)，5.89(s，1H)，5.82(s，1H)，5.40(dd，J＝1.5Hz，J＝17.1Hz，1H)，3.38(bs，1H)，5.23(dd，J＝1.5Hz，J＝10.5Hz，1H)，4.42-4.36(m，1H)，4.19-4.03(m，5H)，3.71(s，3H)，3.68-3.17(m，4H)，2.90(dd，J＝7.8Hz，J＝18.3Hz，1H)，2.57(d，J＝18.3Hz，1H)，2.25(s，3H)，2.12(s，3H)，2.10(s，3H)，1.90(dd，J＝12.3Hz，J＝16.5Hz，1H)，0.81(d，J＝6.9Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ178.4，171.6，148.6，146.8，144.3，142.7，138.7，136.2，133.6，130.7，129.8，126.6，124.2，124.1，120.9，120.5，117.7，117.4，116.7，112.6，112.5，101.0，74.0，60.6，59.0，57.0，56.2，56.1，55.0，53.3，41.4，39.7，26.3，24.8，18.3，15.5，9.2ESI-MS m/z計算值C39H44N6O6S724.8。實測值(M+H)+725.3。實施例8 向在二氧六環(huán)(1ml)中的20(270mg，0.37mmol)的溶液中加入4.2N HCl/二氧六環(huán)(3.5ml)并將該反應(yīng)物在23℃攪拌30分鐘。然后加入乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)并將有機層傾出。所得水相于0℃用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)(pH＝8)堿化，然后用CH2Cl2(2×50ml)提取。將合并的有機提取物干燥(硫酸鈉)及真空濃縮。將所得殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇5∶1)純化得到化合物21(158mg，82％)，為白色固體。Rf0.3(乙酸乙酯∶甲醇1∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.45(s，1H)，6.12-6.03(m，1H)，5.91(s，1H)，5.85(s，1H)，5.38(dd，J1＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.24(dd，J1＝1.2Hz，J2＝10.5Hz，1H)，4.23-4.09(m，4H)，3.98(d，J＝2.1Hz，1H)，3.90(bs，1H)，3.72(s，3H)，3.36-3.02(m，5H)，2.72-2.71(m，2H)，2.48(d，J＝18.0Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.22(s，3H)，2.11(s，3H)，1.85(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.4，146.7，144.4，142.8，138.8，133.8，130.5，128.8，121.5，120.8，118.0，117.5，116.9，113.6，112.2，101.1，74.3，60.7，59.9，58.8，56.6，56.5，55.3，44.2，41.8，29.7，26.5，25.7，15.7，9.4。ESI-MSm/z計算值C29H34N4O5518.3。實測值(M+H)+519.2。實施例9 于-10℃向在CH2Cl2(6.13ml)中的21(0.64g，1.22mmol)的溶液中加入吡啶(0.104ml，1.28mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(0.177ml，1.28mmol)。將該混合物于此溫度攪拌1小時，然后反應(yīng)物通過加入0.1N HCl(10ml)猝滅，并用CH2Cl2(2×10ml)提取。將有機層用硫酸鈉干燥并真空濃縮。所得殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化得到22(0.84g，98％)，為白色泡沫狀固體。Rf0.57(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，6.10-6.00(m，1H)，6.94(d，J＝1.5Hz，1H)，5.87(d，J＝1.5Hz，1H)，5.73(bs，1H)，5.37(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dq，J1＝1.8Hz，J2＝10.2Hz，1H)，4.60(d，J＝12Hz，1H)，4.22-4.10(m，4H)，4.19(d，J＝12Hz，1H)，4.02(m，2H)，3.75(s，3H)，3.37-3.18(m，5H)，3.04(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.63(d，J＝18Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.26(s，3H)，2.11(s，3H)，1.85(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ154.3，148.5，146.7，144.5，142.8，139.0，133.8，130.7，128.7，121.3，120.8，117.8，117.7，116.8，112.7，101.2，77.2，74.3，60.7，59.9，57.0，56.4，55.3，43.3，41.7，31.6，26.4，25.3，22.6，15.9，14.1，9.4。ESI-MS m/z計算值C32H35Cl3N4O7694.17。實測值(M+H)+695.2。實施例10 于0℃向在CH3CN(2.33ml)中的22(0.32g，0.46mmol)的溶液中加入二異丙基乙胺(1.62ml，9.34mmol)、溴甲基甲醚(0.57ml，7.0mmol)和二甲基氨基吡啶(6mg，0.046mmol)。該混合物于30℃加熱10小時。然后用二氯甲烷(30ml)稀釋該反應(yīng)物并倒至pH＝5的HCl水溶液(10ml)中。將有機層用硫酸鈉干燥并減壓除去溶劑得到殘留物，該殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯2∶1)純化得到23(0.304g，88％)，為白色泡沫狀固體。Rf0.62(己烷∶乙酸乙酯1∶3).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.73(s，1H)，6.10(m，1H)，5.94(d，J＝1.5Hz，1H)，5.88(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dq，J1＝1.8Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.12(s，2H)，4.61(d，J＝12Hz，1H)，4.55(t，J＝6.6Hz，1H)，4.25(d，J＝12Hz，1H)，4.22-4.11(m，4H)，4.03(m，2H)，3.72(s，3H)，3.58(s，3H)，3.38-3.21(m，5H)，3.05(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.65(d，J＝18Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.23(s，3H)，2.12(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ154.3，148.6，148.4，144.5，139.0，133.6，130.6，130.1，125.07，124.7，124.0，121.1，117.7，112.6，101.2，99.2，77.2，74.4，74.1，59.8，59.8，57.7，57.0，56.8，56.68，55.3，43.2，41.5，26.4，25.2，15.9，9.3.ESI-MS m/z計算值C34H39Cl3N4O8738.20.實測值(M+H)+739.0.實施例11 向在90％乙酸水溶液(4ml)中的23(0.304g，0.41mmol)的懸浮液中加入鋅粉(0.2g，6.17mmol)，并于23℃將該反應(yīng)物攪拌7小時。所得混合物通過硅藻土墊過濾并用CH2Cl2洗滌。將有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液(pH＝9)(15ml))洗滌并用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑得到24(0.191g，83％)，為白色固體。Rf:0.3(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.68(s，1H)，6.09(m，1H)，5.90(d，J＝1.5Hz，1H)，5.83(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.25(dq，J1＝1.5Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.22-4.09(m，3H)，3.98(d，J＝2.4Hz，1H)，3.89(m，1H)，3.69(s，3H)，3.57(s，3H)，3.37-3.17(m，3H)，3.07(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.71(m，2H)，2.48(d，J＝18Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.19(s，3H)，2.17(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.5，148.2，144.3，138.7，133.7，130.7，129.9，125.0，123.9，121.3，117.9，117.5，113.6，112.0，101.0，99.2，74.0，59.8，59.7，58.8，57.6，57.0，56.2，55.2，44.2，41.5，31.5，26.4，25.6，22.5，16.7，14.0，9.2。ESI-MS m/z計算值C31H38N4O6562.66。實測值(M+H)+563.1。實施例12 于0℃向在水(0.7mmol)和THF(0.7mmol)中的24(20mg，0.035mmol)的溶液中加入NaNO2(12mg，0.17mmol)和90％AcOH水溶液(0.06ml)并將該混合物于0℃攪拌3小時。用CH2Cl2(5ml)稀釋后。將有機層用水(1ml)洗滌，用硫酸鈉干燥并真空濃縮。所得殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯2∶1)純化得到25(9.8mg，50％)，為白色固體。Rf:0.34(己烷∶乙酸乙酯1∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.71(s，1H)，6.11(m，1H)，5.92□(d，J＝1.5Hz，1H)，5.87(d，J＝1.5Hz，1H)，5.42(dq，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.28(dq，J1＝1.5Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.12(s，2H)，4.26-4.09(m，3H)，4.05(d，J＝2.4Hz，1H)，3.97(t，J＝3.0Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.67-3.32(m，4H)，3.58(s，3H)，3.24(dd，J1＝2.7Hz，J2＝15.9Hz，1H)，3.12(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.51(d，J＝18Hz，1H)，2.36(s，3H)，2.21(s，3H)，2.12(s，3H)，1.83(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.9Hz，1H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.7，148.4，138.9，133.7，131.1，129.4，125.1，123.9，120.7，117.6，117.5，113.2，112.3，101.1，99.2，74.0，63.2，59.8，59.7，57.9，57.7，57.0，56.5，55.2，41.6，29.6，26.1，25.6，22.6，15.7，9.2。ESI-MS m/z計算值C31H37N3O7563.64。實測值(M+H)+564.1。實施例13 于23℃將起始物質(zhì)(2.0g，5.90mmol)加至在THF(40ml)中的氫化鈉(354mg，8.86mmol)的懸浮液中，并于23℃將此懸浮液用氯甲酸烯丙基酯(1.135ml，8.25mmol)處理，然后回流3小時。冷卻所得懸浮液，過濾，所得固體用乙酸乙酯(100ml)洗滌，并濃縮濾液。用己烷(100ml)碾磨所得油狀粗產(chǎn)物并在于4℃保持過夜。然后，傾除溶劑并用CH2Cl2(20ml)處理所得的淺黃色漿狀物，并用己烷(100ml)沉淀。10分鐘后，再次傾除溶劑。重復(fù)操作直至出現(xiàn)白色固體。濾出該白色固體并干燥得到化合物29(1.80g，65％)，為白色固體。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.74(d，J＝7.5Hz，2H)，7.62(d，J＝6.9Hz，2H)，7.33(t，J＝7.5Hz，2H)，7.30(t，J＝6.3Hz，2H)，5.71(d，J＝7.8Hz，1H)，4.73(d，J＝7.8Hz，2H)，4.59(m，1H)，4.11(t，J＝6.0Hz，1H)，3.17(dd，J＝6.0Hz，J＝2.7Hz，2H)，3.20(dd，J＝5.4Hz，J＝2.1Hz，2H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ173.6，152.7，144.0，139.7，137.8，126.0，125.6，123.4，118.3，73.4，52.4，45.5，35.8，33.7.ESI-MS m/z計算值C20H18Cl3NO4S474.8。實測值(M+Na)+497.8。實施例14 將化合物25(585mg，1.03mmol)與化合物29(1.47mg，3.11mmol)的混合物與無水甲苯(3×10ml)共沸。于23℃向在無水CH2Cl2(40ml)中的25和29的溶液中加入DMAP(633mg，5.18mmol)和EDC.HCl(994mg，5.18mmol)。于23℃攪拌反應(yīng)混合物3小時。所得混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)分配并分層。所得水層用CH2Cl2(50ml)洗滌。合并有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。將所得粗品經(jīng)快速柱層析(乙酸乙酯/己烷1∶3)純化得到30(1.00g，95％)，為淡乳黃色固體。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(m，2H)，7.52(m，2H)，7.38(m，2H)，7.28(m，2H)，6.65(s，1H)，6.03(m，1H)，5.92(d，J＝1.5Hz，1H)，5.79(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(m，1H)，5.29(dq，J＝10.3Hz，J＝1.5Hz，1H)，5.10(s，2H)，4.73(d，J＝11.9Hz，1H)，4.66(d，J＝11.9Hz，1H)，4.53(m，1H)，4.36-3.96(m，9H)，3.89(t，J＝6.4Hz，1H)，3.71(s，3H)，3.55(s，3H)，3.33(m，1H)，3.20(m，2H)，2.94(m，3H)，2.59(m，1H)，2.29(s，3H)，2.23(s，3H)，2.02(s，3H)，1.83(dd，J＝16.0Hz，J＝11.9Hz，1H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ169.7，154.0，148.8，148.4，145.7，144.5，140.9，139.0，133.7，130.9，130.6，127.6，127.0，124.8，124.6，124.1，120.8，119.9，118.2，117.7，117.3，112.7，112.1，101.3，99.2，74.7，73.9，64.4，59.8，57.7，57.0，56.8，55.4，53.3，46.7，41.4，36.5，34.7，31.5，26.4，24.9，22.6，15.7，14.0，9.1。ESI-MS m/z計算值C51H53Cl3N4O10S1020.4。實測值(M+H)+1021.2。實施例15 于23℃向在無水CH2Cl2(20ml)中的30(845mg，0.82mmol)、乙酸(500mg，8.28mmol)和(PPh3)2PdCl2(29mg，0.04mmol)的溶液中滴加Bu3SnH(650mg，2.23mmol)。于該溫度攪拌該反應(yīng)混合物15分鐘，鼓泡。粗產(chǎn)物用水(50ml)猝滅并用CH2Cl2(3×50ml)提取。將有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。所得粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析(乙酸乙酯/己烷的1∶5至1∶3梯度液)純化得到化合物31，為淡乳黃色固體(730mg，90％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(m，2H)，7.56(m，2H)，7.37(m，2H)，7.30(m，2H)，6.65(s，1H)，5.89(s，1H)，5.77(s，1H)，5.74(s，1H)，5.36(d，J＝5.9Hz，1H)，5.32(d，J＝5.9Hz，1H)，5.20(d，J＝9.0，1H)，4.75(d，J＝12.0Hz，1H)，4.73(m，1H)，4.48(d，J＝11.9Hz，1H)，4.08(m，4H)，3.89(m，1H)，3.86，(t，J＝6.2Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.69(s，3H)，3.38(m，1H)，3.25(m，1H)，3.02-2.89(m，4H)，2.67(s，1H)，2.61(s，1H)，2.51(dd，J＝14.3Hz，J＝4.5Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.23(s，3H)，1.95(s，3H)，1.83(m，1H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ168.2，152.5，148.1，146.2，144.4，144.3，143.3，139.6，134.6，129.7，129.6，126.2，125.6，123.4，123.3，121.6，118.5，116.3，110.7，110.2，105.1，99.4，98.5，75.2，73.3，61.7，58.4，57.9，56.3，56.1，55.1，54.7，53.9，51.9，45.2，40.1，35.6，33.3，24.8，23.3.，14.5，7.3ESI-MS m/z計算值C48H49Cl3N4O10S980.3；實測值(M+H)+981.2。
實施例16 于-10℃向在無水CH2Cl2(15ml)中的31(310mg，0.32mmol)的溶液中經(jīng)套管加入在無水CH2Cl2(7ml)中的70％苯亞硒酸酐(165mg，0.32mmol)的溶液，保持溫度在-10℃。于-10℃攪拌該反應(yīng)混合物5分鐘。在此溫度加入飽和碳酸氫鈉水溶液(30ml)。所得水層再用CH2Cl2(40ml)洗滌。將所得有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。所得粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析(乙酸乙酯/己烷的1∶5至1∶1梯度液)純化得到32淡乳黃色固體(287mg，91％，HPLC91.3％)，為用于下一步驟的兩個異構(gòu)體的混合物(65∶35)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(異構(gòu)體混合物)7.76(m，4H)，7.65(m，4H)，7.39(m，4H)，7.29(m，4H)，6.62(S，1H)，6.55(s，1H)，5.79-5.63(m，6H)，5.09(s，1H)，5.02(d，J＝6.0Hz，1H)，4.99(d，J＝6.0Hz，1H)，4.80-4.63(m，6H)，4.60(m，1H)，4.50(m，1H)，4.38(d，J＝12.8Hz，J＝7.5Hz，1H)，4.27(dd，J＝12.8Hz，J＝7.5Hz，1H)，4.16-3.90(m，10H)，3.84(s，3H)，3.62(s，3H)，3.50(s，3H)，3.49 (s，3H)，3.33-2.83(m，14H)，2.45-2.18(m，2H)，2.21(s，6H)，2.17(s，6H)，1.77(s，6H)，1.67(m，2H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ(異構(gòu)體混合物)168.6，168.4，158.6，154.8，152.8，152.5，147.3，147.2，146.8，144.1，144.0，140.8，139.7，137.1，129.8，129.3，128.4，128.7，126.5，125.5，123.7，123.6，123.5，123.4，122.2，121.3，118.3，115.8，115.5，110.2，106.9，103.5，103.2，100.1，99.6，97.9，97.7，93.8，73.4，70.9，69.2，64.9，62.5，59.3，58.9，58.4，56.7，56.3，56.2，55.4，55.2，55.1，54.9，54.7，54.3，54.1，53.8，52.8，45.5，40.5，40.0，39.8，35.8，35.5，33.9，33.7，30.1，28.8，24.2，24.1，21.2，14.5，14.4，12.7，6.0，5.7。ESI-MS m/z計算值C48H49Cl3N4O11S996.3。實測值(M+H)+997.2。
實施例17 將反應(yīng)燒瓶火焰加熱兩次，真空/氬氣排空數(shù)次并維持在氬氣下以備反應(yīng)。于-78℃向在無水CH2Cl2(4.5ml)中的DMSO(39.1ml，0.55mmol，5當(dāng)量)的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(37.3ml，0.22mmol，2當(dāng)量)。于-78℃攪拌反應(yīng)混合物20分鐘，然后于-78℃經(jīng)套管加入在無水CH2Cl2(1ml用于主要滴加，0.5ml用于洗滌)中的32(110mg，0.11mmol，HPLC91.3％)的溶液。在滴加過程中該溶液溫度通過外浴保持在-78℃，顏色由黃色變成棕色。于-40℃攪拌該反應(yīng)混合物35分鐘。在此時間內(nèi)該溶液從黃色變成暗綠色。然后，滴加iPr2NEt(153ml，0.88mmol，8當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物保持在0℃45分鐘，在此期間該溶液的顏色變成棕色。然后滴加叔丁醇(41.6ml，0.44mmol，4當(dāng)量)和2-叔丁基-1，1，3，3-四甲基胍(132.8ml，0.77mmol，7當(dāng)量)并將該反應(yīng)混合物于23℃攪拌40分鐘。然后滴加入乙酸酐(104.3ml，1.10mmol，10當(dāng)量)并保持該反應(yīng)混合物在23℃1小時。然后將該反應(yīng)混合物用CH2Cl2(20ml)稀釋并用飽和NH4Cl(50ml)、碳酸氫鈉(50ml)和氯化鈉(50ml)水溶液洗滌。合并的有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(洗脫液乙酸乙酯/己烷的1∶3至1∶2梯度液)純化得到化合物33淡黃色固體(54mg，58％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ6.85(s，1H)，6.09(s，1H)，5.99(s，1H)，5.20(d，J＝5.8Hz，1H)，5.14(d，J＝5.3Hz，1H)，5.03(m，1H)，4.82(d，J＝12.2，1H)，4.63(d，J＝12.0Hz，1H)，4.52(m，1H)，4.35-4.17(m，4H)，3.76(s，3H)，3.56(s，3H)，3.45(m，2H)，2.91(m，2H)，2.32(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.12(m，2H)，2.03(s，3H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ168.5，167.2，152.7，148.1，147.1，144.5，139.6，139.1，130.5，129.0，123.7，123.5，123.3，118.8，116.5，112.1，100.6，97.8，73.3，60.5，59.4，59.2，58.3，57.6，57.4，56.1，53.3，53.1，40.6，40.0，31.0，22.2，18.9，14.4，8.1；ESI-MS m/z計算值C36H39Cl3N4O11S842.1；實測值(M+H)+843.1。
實施例18 于23℃向在干燥的二氯甲烷(1.2ml)和HPLC級的乙腈(1.2ml)中的33(12mg，0.014mmol)的溶液中加入碘化鈉(21mg，0.14mmol)和新蒸餾(經(jīng)氫化鈣，常壓)的三甲基甲硅烷基氯(15.4mg，0.14mmol)。所得反應(yīng)混合物變成桔黃色。15分鐘后用二氯甲烷(10ml)稀釋該溶液并用新制備的飽和Na2S2O4水溶液(3×10ml)洗滌。將有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。得到化合物34淡黃色固體(13mg，定量)，該固體可不經(jīng)進一步純化直接使用。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ6.85(s，1H)，6.09(s，1H)，5.99(s，1H)，5.27(d，J＝5.8Hz，1H)，5.14(d，J＝5.3Hz，1H)，5.03(d，J＝11.9Hz，1H)，4.82(d，J＝12.2，1H)，4.63(d，J＝13.0Hz，1H)，4.52(m，1H)，4.34(m，1H)，4.27(bs，1H)，4.18(m，2H)，3.76(s，3H)，3.56(s，3H)，3.44(m，1H)，3.42(m，1H)，2.91(m，2H)，2.32(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.03(s，3H).ESI-MS m/z計算值C34H35N4O10S798.1；實測值(M+H)+799.1。實施例19 于23℃向在乙酸/水(90∶10，1ml)混合物中的34(13mg，0.016mmol)的溶液中加入鋅粉(5.3mg，0.081mmol)。在70℃加熱該反應(yīng)混合物6小時。然后，冷至23℃，用CH2Cl2(20ml)稀釋并用飽和碳酸氫鈉水溶液(15ml)和Et3N水溶液(15ml)洗滌。所得有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。殘留物經(jīng)使用Silica-NH2的快速柱層析(洗脫液∶乙酸乙酯/己烷的0∶100至50∶50梯度液)純化得到化合物35淡黃色固體(6.8mg，兩步驟77％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ6.51(s，1H)，6.03(dd，J＝1.3Hz，J＝26.5Hz，2H)，5.75(bs，1H)，5.02(d，J＝11.6Hz，1H)，4.52(m，1H)，4.25(m，2H)，4.18(d，J＝2.5Hz，1H)，4.12(dd，J＝1.9Hz，J＝11.5Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.40(m，2H)，3.26(t，J＝6.4Hz，1H)，2.88(m，2H)，2.30-2.10(m，2H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.18(s，3H)，2.02(s，3H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ174.1，168.4，147.8，145.4，142.9，140.8，140.1，131.7，130.2，129.1，128.3，120.4，118.3，117.9，113.8，111.7，101.7，61.2，59.8，59.2，58.9，54.4，53.8，54.4，41.3，41.5，34.1，23.6，20.3，15.5，9.4；ESI-MS m/z計算值C31H34N4O8S622.7；實測值(M+H)+623.2。實施例20 用無水甲苯(2×10ml)處理在無水DMF(5.8ml)中的碘化N-甲基吡啶-4-甲醛(378mg，1.5mmol)的溶液，通過共沸帶走甲苯除去相當(dāng)量的水。于23℃經(jīng)套管向該橙色溶液中加入在無水CH2Cl2(經(jīng)氫化鈣蒸餾，7.2ml)中預(yù)先經(jīng)無水甲苯(2×10ml)處理的35(134mg，0.21mmol)的溶液。于23℃攪拌反應(yīng)混合物4小時。然后于23℃滴加入DBU(32.2□L，0.21mmol)并于23℃攪拌15分鐘。將新制備的飽和草酸水溶液(5.8ml)加至將該反應(yīng)混合物中并在23℃攪拌30分鐘。然后將該反應(yīng)混合物冷至0℃并分次加入NaHCO3，接著加入NaHCO3的飽和水溶液。該混合物用Et2O提取。將K2CO3加至水層并用Et2O提取。合并的有機層用MgSO4干燥并減壓除去溶劑。將所得粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析(乙酸乙酯/己烷從1∶3至1∶1)純化得到化合物36淡黃色固體(77mg，57％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ6.48(s，1H)，6.11(d，J＝1.3Hz，1H)，6.02(d，J＝1.3Hz，1H)，5.70(bs，1H)，5.09(d，J＝11.3Hz，1H)，4.66(bs，1H)，4.39(m，1H)，4.27(d，J＝5.6Hz，1H)，4.21(d，J＝10.5Hz，1H)，4.16(d，J＝2.6Hz，1H)，3.76(s，3H)，3.54(d，J＝5.1Hz，1H)，3.42(d，J＝8.5Hz，1H)，2.88-2.54(m，3H)，2.32(s，3H)，2.24(s，3H)，2.14(s，3H)，2.04(s，3H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ186.7，168.5，160.5，147.1，146.4，142.9，141.6，140.7，130.4，129.8，121.7(2C)，120.0，117.8，117.1，113.5，102.2，61.7，61.4，60.3，59.8，58.9，54.6，41.6，36.9，29.7，24.1，20.3，15.8，14.1，9.6。ESI-MS m/z計算值C31H31N3O9S621.7；實測值(M+H)+622.2。
實施例21 于23℃向在乙醇(2.5ml)中的36(49mg，0.08mmol)和2-[3-羥基-4-甲氧基苯基]乙胺(46.2mg，0.27mmol)的溶液中加入硅膠(105mg)。在23℃攪拌反應(yīng)混合物14小時。用己烷稀釋該反應(yīng)混合物并倒入層析柱(乙酸乙酯/己烷從1/3至1/1)中得到Et-770淡黃色固體(55mg，90％)。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ6.60(s，1H)，6.47(s，1H)，6.45(s，1H)，6.05(s，1H)，5.98(s，1H)，5.02(d，J＝11.4Hz，1H)，4.57(bs，1H)，4.32(bs，1H)，4.28(d，J＝5.3Hz，1H)，4.18(d，J＝2.5Hz，1H)，4.12(dd，J＝2.1Hz，J＝11.5Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.62(s，3H)，3.50(d，J＝5.0Hz，1H)，3.42(m，1H)，3.10(ddd，J1＝4.0Hz，J2＝10.0Hz，J3＝11.0Hz，1H)，2.94(m，2H)，2.79(m，1H)，2.61(m，1H)，2.47(m，1H)，2.35(m，1H)，2.32(s，3H)，2.27(s，3H)，2.20(s，3H)，2.09(m，1H)，2.04(s，3H)。ESI-MS m/z計算值C40H42N4O10S770.7；實測值(M+H)+771.2。實施例22 向在CH2Cl2(0.8ml)中的21(22mg，0.042mmol)的溶液中加入鄰苯二甲酸酐(6.44mg，0.042mmol)并將該反應(yīng)混合物在23℃攪拌2小時。然后加入羰基二咪唑(1mg，0.006mmol)并將該混合物在23℃攪拌7小時。然后加入羰基二咪唑(5.86mg，0.035ml)并將該反應(yīng)物于23℃再攪拌17小時。所得溶液用CH2Cl2(15ml)稀釋并用0.1NHCl(15ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷/乙酸乙酯2∶1)純化得到27(26.4mg，96％)，為白色固體。Rf:0.58(乙酸乙酯).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.73-7.64(m，4H)，6.40(s，1H)，6.12-6.01(m，1H)，5.63(s，1H)，5.58(d，J＝1.5Hz，1H)，5.37(dd，J1＝1.8Hz，J2＝17.4Hz)，5.23(dd，J1＝1.8Hz，J2＝10.5Hz，1H)，5.12(d，J＝1.5Hz，1H)，4.22-4.15(m，3H)，4.08(d，J＝1.8Hz，1H)，3.68(s，3H)，3.59-3.55(m2H)，3.35(d，J＝8.1Hz，1H)，3.27-3.16(m，2H)，3.05(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.64(d，J＝18.0Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.24(s，3H)，2.09(s，3H)，1.80(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ167.7，148.9，146.4，144.2，142.6，139.5，134.0，133.5，132.0，131.0，128.3，123.0，121.3，120.9，118.1，117.5，116.8，113.6，112.4，100.8，74.5，60.6，60.5，57.7，56.6，55.6，55.5，42.3，41.7，26.6，25.5，15.9，9.46.ESI-MS m/z計算值C37H35N4O7648.79；實測值(M+H)+649.3。 實施例23于23℃向在CH2Cl2(11ml)中的27(26mg，0.041mmol)的溶液中加入乙酸(11ml)、(PPh3)2PdCl2(2.36mg)和Bu3SnH(28ml，0.10mmol)。于該溫度攪拌該反應(yīng)混合物2小時后，將反應(yīng)混合物倒入快速柱的墊中。(SiO2，己烷至己烷乙酸乙酯2∶1的梯度液)得到28(24.7mg，99％)，為白色固體。Rf0.33(己烷∶乙酸乙酯2∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.75-7.70(m，2H)，7.69-7.65(m，2H)，6.39(s，1H)，5.82(bs，1H)，5.50(d，J＝1.5Hz，1H)，5.0(d，J＝1.5Hz，1H)，4.45(bs，1H)，4.23-4.19(m，2H)，4.10-4.09(m，1H)，3.73(s，3H)，3.60-3.48(m，2H)，3.36-3.33(m，1H)，3.26-3.20(m，1H)，3.14-3.08(m，1H)，3.98(d，J＝14.4Hz，1H)，2.61(d，J＝18.3Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.23(s，3H)，2.06(s，3H)，1.85(dd，J1＝12Hz，J2＝15.3Hz)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ167.8，146.4，145.1，143.9，142.7，137.1，133.5，131.9，130.8，128.4，122.9，120.8，118.0，116.8，114.0，113.4，106.4，100.4，60.6，60.5，57.8，56.6，55.5，55.2，42.6，41.5，25.6，25.5，15.8，8.9。ESI-MS m/z計算值C34H32N4O7608.6；實測值(M+H)+609.2。實施例24 于0℃向在CH2Cl2(3ml)中的28(357mg，0.058mmol)的溶液中加入乙酰氯(41.58ml，0.58mmol)和吡啶(47.3ml，0.58ml)，并將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后用CH2Cl2(15ml)稀釋該反應(yīng)溶液并用0.1NHCl(15ml)洗滌。將所得有機層用硫酸鈉干燥，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(RP-18，CH3CN∶H2O 60∶40)純化得到phthalascidin(354mg，94％)，為白色固體。Rf0.37(CH3CNH2O 7∶3，RP-18)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72-7.68(m，2H)，7.67-7.63(m，2H)，6.38(s，1H)，5.69(d，J＝1.2Hz，1H)，5.64(d，J＝1.2Hz，1H)，5.30(bs，1H)，4.25-4.21(m，2H)，4.02(d，J＝2.1Hz，1H)，3.64-3.62(m，5H)，3.33(d，J＝8.4Hz，1H)，3.21-3.16(m，1H)，3.02(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.76(dd，J1＝1.8Hz，J2＝15.6Hz，1H)，2.63(d，J＝17.7Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.0(s，3H)，1.73(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.3Hz，1H))13C NMR(75MHz，CDCl3))δ168.5，167.6，146.2，144.2，142.5，141.0，140.5，133.4，131.8，130.7，128.2，120.9，120.8，117.9，116.4，113.6，101.1，60.4，60.0，57.0，56.3，55.6，55.4，41.6，41.5，26.5，25.2，20.2，15.7，9.4。ESI-MS m/z計算值C36H34N4O8650；實測值(M+H)+651.2。實施例25 于0℃向在CH2Cl2(2ml)中的17(300mg，0.432mmol)的溶液中加入乙酰氯(30.7ml，0.432mmol)和吡啶(34.9ml，0.432mmol)，并在此溫度下將該反應(yīng)混合物攪拌2小時，然后用CH2Cl2(15ml)稀釋溶液并用0.1N HCl(15ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。得到42(318mg，100％)，為白色固體，該固體可不經(jīng)進一步純化用于隨后的反應(yīng)。Rf0.5(乙酸乙酯∶甲醇51).1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.66(s，1H)，5.93(d，J＝1.2Hz，1H)，5.83(d，J＝1.2Hz，1H)，5.42(t，J＝6.6Hz，1H)，5.07(d，J＝5.7Hz，1H)，4.98(d，J＝5.7Hz，1H)，4.16(d，J＝1.8Hz，1H)，4.11(d，J＝2.7Hz，1H)，3.98(bs，1H)，3.73-3.61(m，2H)，3.64(s，3H)，3.52-3.48(m，1H)，3.50(s，3H)，3.33(d，J＝9.6Hz，1H)，3.17-3.14(m，1H)，2.97-2.87(m，1H)，2.75-2.70(d，J＝16.8Hz，1H)，2.26(s，6H)，2.16(s，3H)，1.96(s，3H)，1.70(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)，1.33(s，9H)，0.59(d，J＝6.0Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3))δ172.0，168.3，162.3，148.2，144.4，140.4，140.2，130.9，130.5，125.3，123.4，120.8，117.6，112.7，111.7，101.4，99.1，79.2，59.5，58.8，57.5，57.4，56.4，55.5，55.0，41.3，39.0，28.2，26.4，24.6，19.9，18.4，15.4，9.1.ESI-MS m/z計算值C38H49N5O10735.82.實測值(M+H)+736.3.
實施例26 向在CH2Cl2(2.16mmol)中的42(318mg，0.432mmol)的溶液中加入三氟乙酸(1.33ml，17.30mmol)并將該反應(yīng)混合物在23℃攪拌3.5小時。所得反應(yīng)物于0℃用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)猝滅，并用CH2Cl2(2×70ml)提取。干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇20∶1)純化得到43(154mg，60％)，為白色固體。Rf0.22(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.47(s，1H)，6.22(bs，1H)，5.95(d，J＝1.2Hz，1H)，5.88(d，J＝1.2Hz，1H)，4.08-4.06(m，2H)，4.01(bs，1H)，3.69(s，3H)，3.49(d，J＝3.6Hz，1H)，3.33(d，J＝8.1Hz，1H)，3.26-3.22(m，1H)，2.95(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.80-2.76(m，2H)，2.58(d，J＝18Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.27(s，3H)，2.21(s，3H)，1.96(s，3H)，1.77(dd，J1＝12.3Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.90(d，J＝6.9Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3))δ174.8，169.0，146.8，144.4，142.8，140.5，140.2，131.1，128.8，120.8，120.5，117.1，112.9，111.6，101.5，60.3，59.0，56.5，56.3，55.6，55.1，50.2，41.6，39.5，26.8，26.3，24.9，20.2，15.4，9.2。ESI-MS m/z計算值C31H37N5O7591.65；實測值(M+H)+592.3。
實施例27 向在CH2Cl2(1.3ml)中的43(154mg，0.26mmol)的溶液中加入異硫氰酸苯酯(186ml，1.56mmol)并將該混合物在23℃攪拌2小時。將所得反應(yīng)物真空濃縮，殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷至己烷∶乙酸乙酯1∶1梯度液)純化得到44(120mg，63％)，為白色固體。Rf0.41(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3).δ8.17(s，1H)，7.49-7.44(m，3H)，7.31-7.24(m，3H)，7.05(d，J＝6.9Hz，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.87(d，J＝1.2Hz，1H)，5.52(bs，1H)，4.54(t，J＝6.6Hz，1H)，4.15(d，J＝2.1Hz，1H)，4.03(d，J＝2.7Hz，2H)，3.80(bs，1H)，3.66(s，3H)，3.40(bs，1H)，3.32(d，J＝7.8Hz，1H)，3.16(d，J＝11.7Hz，1H)，2.82-2.61(m，3H)，2.29(s，3H)，2.20(s，3H)，2.01(s，3H)，1.99(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，0.62(d，J＝6.0Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ178.5，171.9，168.7，146.7，144.5，142.6，140.6，140.3，136.3，131.0，129.9，128.9，126.7，124.4，120.9，120.6，117.7，116.6，112.7，111.9，101.4，60.4，58.7，57.5，56.1，55.7，55.1，53.3，41.4，38.8，26.3，24.4，20.2，18.1，15.3，9.2。ESI-MS m/z計算值C38H42N6O7S726.3；實測值(M+H)+；727.3。
實施例28 向在二氧六環(huán)(0.9ml)中44(120mg，0.165mmol)的溶液中加入5.3N HCl/二氧六環(huán)(1.8ml)，在23℃攪拌該反應(yīng)物2.5小時。然后將CH2Cl2(10ml)和H2O(5ml)加至該反應(yīng)物中并將有機層傾出。將水相在0℃用飽和碳酸氫鈉水溶液(20ml)堿化(pH＝8)，然后用CH2Cl2(2×15ml)提取。干燥(硫酸鈉)合并的有機提取物，并真空濃縮得到無需進一步純化即可以用于后續(xù)反應(yīng)的45(75mg，87％)的白色固體。Rf0.23(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.43(s，1H)，5.94(d，J＝1.2Hz，1H)，5.87(d，J＝1.2Hz，1H)，4.10(d，J＝2.1Hz，1H)，3.98(d，J＝2.4Hz，1H)，3.91(bs，1H)，3.69(s，3H)，3.34-3.25(m，2H)，3.05(dd，J1＝1.8Hz，J2＝8.1Hz，1H)，2.80-2.73(m，3H)，2.46(d，J＝18Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.20(s，3H)，1.98(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.6Hz，J2＝16.2Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3))δ168.7，146.7，144.4，142.9，140.4，130.4，128.9，121.1，120.8，117.8，116.8，113.6，111.5，101.4，67.6，60.5，59.8，58.4，56.6，55.8，55.3，43.6，41.8，31.3，25.6，20.2，15.6，9.2。ESI-MS m/z計算值C28H32N4O6520.58；實測值(M+H)+521.3。
實施例29 向在CH2Cl2(0.4ml)中的45(10mg，0.02mmol)的溶液中加入鄰苯二甲酸酐(2.84mg，0.02mmol)，并將該反應(yīng)混合物在23℃攪拌2小時，然后加入羰基二咪唑(0.5mg，0.003mmol)并將該混合物在23℃攪拌7小時。然后加入羰基二咪唑(2.61mg，0.016mmol)并將該反應(yīng)物在23℃再攪拌17小時。然后用CH2Cl2(10ml)稀釋該溶液并用0.1N HCl(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(RP-18，CH3CN∶H2O 60∶40)純化得到phthalascidin白色固體(11.7mg，93％)。Rf:0.37(CH3CNH2O 7∶3，RP-18)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72-7.68(m，2H)，7.67-7.63(m，2H)，6.38(s，1H)，5.69(d，J＝1.2Hz，1H)，5.64(d，J＝1.2Hz，1H)，5.30(bs，1H)，4.25-4.21(m，2h)，4.02(d，J＝2.1Hz，1H)，3.64-3.62(m，5H)，3.33(d，J＝8.4Hz，1H)，3.21-3.16(m，1H)，3.02(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.76(dd，J1＝1.8Hz，J2＝15.6Hz，1H)，2.63(d，J＝17.7Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.0(s，3H)，1.73(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.3Hz，1H))。13C NMR(75 MHz，CDCl3))δ168.5，167.6，146.2，144.2，142.5，141.0，140.5，133.4，131.8，130.7，128.2，120.9，120.8，117.9，116.4，113.6，101.1，60.4，60.0，57.0，56.3，55.6，55.4，41.6，41.5，26.5，25.2，20.2，15.7，9.4。ESI-MS m/z計算值C36H34N4O8650；實測值(M+H)+651.2。
實施例30 于0℃向在DMF(0.05ml)中的25(18mg，0.032mmol)的溶液中加入催化量的DMAP(0.5mg，0.004mmol)、咪唑(5mg，0.08mmol)和叔-丁基二苯基甲硅烷基氯(12.5ml，0.048mmol)，所得反應(yīng)混合物在23℃攪拌6小時。于0℃加入水(10ml)，水相用己烷∶乙酸乙酯1∶10(2×10mmol)提取。將有機層干燥(硫酸鈉)、過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯3∶1)純化得到26白色固體(27mg，88％)。Rf0.29(己烷∶乙酸乙酯3∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.61-7.58(m，2h)，7.42-7.28(m，8H)，6.71(s，1H)，6.19-6.02(m，1H)，5.78(d，J＝1.2Hz，1H)，5.64(d，J＝1.2Hz，1H)，5.40(dd，J1＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.27(dd，J1＝1.2Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.13(s，2h)，4.45(d，J＝2.4Hz，1H)，4.24(d，J＝2.1Hz，1H)，4.17-4.06(m，3H)，3.75(s，3H)，3.64(dd，J1＝2.4Hz，J2＝9.9Hz，1H)，3.59(s，3H)，3.42-3.21(m，4H)，3.10(dd，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.70(d，J＝17.7Hz，1H)，2.33(s，3H)，2，26(s，3H)，2.11(s，3H)，2.08-1.89(m，1H)，0.87(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.5，148.3，148.1，144.0，139.0，135.6，135.4，133.8，133.1，132.6，130.5，130.3，129.6，129.4，127.5，127.4，125.1，124.3，121.6，118.5，117.5，112.9，111.7，100.8，99.2，74.0，67.7，61.5，59.6，59.0，57.7，57.1，55.4，41.6，29.6，26.6，25.5，18.8，15.8，9.2。ESI-MS m/z計算值C47H55N3O7Si801.3；實測值(M+H)+802.3。
實施例31
于23℃向在CH2Cl2(0.15ml)中的26(7mg，0.0087mmol)的溶液中加入乙酸(2.5ml，0.044mmol)、(PPh3)2PdCl2(0.5 mg，6.96×10-4mmol)和Bu3SnH(3.5ml，0.013mmol)。于該溫度攪拌該反應(yīng)混合物1小時，所得溶液用己烷∶乙酸乙酯5∶1(0.5ml)的混合物稀釋并倒入快速柱的墊中(SiO2，5∶1至1∶1己烷∶乙酸乙酯梯度液)得到ET-11(5mg，75％)，為白色固體。Rf:0.36(己烷∶乙酸乙酯1∶5，硅膠)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.56(m，2h)，7.41-7.25(m，8H)，6.67(s，1H)，5.72(d，J＝1.0Hz，1H)，5.58(d，J＝1.0Hz，1H)，5.51(s，1H)，5.38(d，J＝5.75Hz，1H)，5.16(d，J＝5.7Hz，1H)，4.57(d，J＝2.9Hz，1H)，4.21(m，1H)，4.09(m，1H)，3.72(s，3H)，3.71(s，3H)，3.68(dd，J1＝2.1Hz，J2＝10.4Hz，1H)，3.38-3.26(m，3H)，3.11(dd，J1＝2.5Hz，J2＝15.7Hz，1H)，3.01(dd，J1＝8.9Hz，J2-17.9Hz，1H)，2.70(d，J＝17.9Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.25(s，3H)，2.06(s，3H)，1.89(dd，J1＝12.1Hz，J2＝15.7Hz，1H)，0.9(s，9H).)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ149.0，147.4，145.3，144.3，136.3，135.7，135.4，133.2，130.9，130.5，129.6，129.5，127.5，125.0，118.6，112.5，112.1，105.7，100.5，99.8，68.5，61.5，59.7，58.8，57.7，56.9，56.5，55.4，41.7，26.6，26.2，25.5，18.9，15.8，14.2，8.7。ESI-MS m/z計算值C44H51N3O7Si761；實測值(M+H)+762。
實施例32
于23℃攪拌在CH2Cl2(27ml)中的2(3.0g，5.46mmol)和異硫氰酸苯酯(3.92ml，32.76mmol)的溶液1.5小時。使該反應(yīng)混合物在CH2Cl2(10ml)和水(5ml)之間分配。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷至2∶3己烷∶乙酸乙酯梯度液)純化得到3(3.29g，88％)，為黃色固體。Rf:0.27(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.77(bs，1H)，7.42-7.11(m，5H)，6.65(d，1H)，6.29(s，1H)，5.6-5.5(m，1H)，4.19-4.14(m，2h)，4.08(d，1H)，3.92(s，3H)，3.87-3.65(m，6H)，3.77(s，3H)，3.37-2.98(m，8H)，2.50(d，1H)，2.31(s，3H)，2.20(s，3H)，1.96(d，1H)，1.87(s，3H)，1.81-l.75(m，1H)，0.96(d，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.7，180.9，178.9，172.0，155.7，147.1，143.2，142.4，136.0，135.1，130.5，129.9，129.3，128.5，126.9，124.4，120.2，117.4，116.3，77.1，60.9，58.6，56.2，55.8，55.0，54.6，53.5，41.7，40.3，25.1，24.5，18.4，15.8，8.7ESI-MS m/z計算值C36H40N6O6S684.8；實測值(M+H)+685.2。
實施例33 于23℃攪拌在6.5M HCl/二氧六環(huán)(150ml)中的3(0.143g，0.208mmol)的溶液6小時。然后，向該反應(yīng)物中加入甲苯(3ml)及傾出有機層。所得殘留物在飽和的碳酸氫鈉水溶液(3ml)和CHCl3(3×3ml)之間分配。將所得有機層用干燥并濃縮，得到標(biāo)題化合物4和6的混合物(4∶6 90∶10)，該混合物靜置緩慢環(huán)化成6。Rf0.4(乙酸乙酯∶甲醇5∶1，硅膠).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.45(s，1H)，4.16(m，1H)，4.02(d，1H)，3.96(s，3H)，3.79(m，2h)，3.75(s，3H)，3.35(m，1H)，3.20-3.00(m，3H)，2.87(d，1H)，2.75(d，1H)，2.43(d，1H)，2.34(s，3H)，2.30(s，3H)，1.93(s，3H)，1.72-1.5(m，3H)。ESI-MS m/z計算值C26H30N4O5478.5；實測值(M+H)+479.2。
實施例34 于23℃攪拌在6.5M HCl/二氧六環(huán)(150ml)中的3(0.143g，0.208mmol)的溶液1小時。溶劑蒸發(fā)得到殘留物，該殘留物經(jīng)快速柱層析(乙酸乙酯/甲醇/三乙胺100∶25∶0.1)純化得到6(80mg，83％)，為黃色固體。Rf0.26(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.46(s，1H)，5.9(bs，1H)4.67(dd，J＝18.3Hz，J＝7.8Hz，1H)，4.24(d，1H)，4.16(s，3H)，3.93(d，J＝2.7Hz，1H)，3.8(m，2h)，3.77(s，3H)，3.45(m，2h)，3.08(dd，J＝17.9Hz，J＝3.6Hz，1H)，2.78(m，1H)，2.55(d，1H)，2.3(m，1H)，2.3(s，3H)，2.28(s，3H)，1.90(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ186.2，162.1，154.9，146.9，145.3，143.0，130.1，129.4，128.1，125.0，121.4，116.4，116.2，66.6，60.7，60.7，60.1，59.6，58.8，55.6，54.9，41.9，25.3，24.7，15.7，8.9。ESI-MS m/z計算值C26H28N4O4460.5；實測值(M+H)+461.1。
實施例35 向在二氧六環(huán)(5ml)中的3(2.38g，3.47mmol)的溶液中加入在二氧六環(huán)(34ml)中的5.3M HCl，在23℃攪拌該反應(yīng)物45分鐘。然后加入Ac2O(51ml，539.5mmol)并將該混合物攪拌4小時。將反應(yīng)物冷至0℃并于此溫度下在飽和碳酸鈉水溶液(300ml)和乙酸乙酯(300ml)之間分配。用硫酸鈉干燥有機相，過濾并濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，CH2Cl2至CH2Cl2∶乙酸乙酯1∶2梯度液)純化得到5(1.75g，97％)，為黃色固體。Rf0.53(ACN∶H2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.51(s，1H)，5.98(bs，1H)，4.84(dd，1H)，4.17(d，1H)，4.00(d，1H)，3.99(s，3H)，3.85(bs，1H)，3.81(m，1H)，3.74(s，3H)，3.70(d，1H)，3.23(m，1H)，3.11(dd，1H)，3.09(m，1H)，2.93(m，2 h)，2.44(d，1H)，3.67(s，3H)，2.25(s，3H)，1.70(s，3H)，1.60-1.50(m，2 h)，1.29(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.9，180.8，169.9，160.2，156.2，147.0，143.1，140.4，136.1，130.6，129.6，127.9，120.4，117.2，61.0，60.7，58.6，56.1，55.7，55.1，54.3，41.8，41.1，25.7，23.9，22.2，15.7，8.7。ESI-MS m/z計算值C28H32N4O6520.6；實測值(M+H)+521.1。
實施例36 于0℃向在CH2Cl2(17ml)中的5(1.75g，3.36mmol)的溶液中加入二異丙基乙胺(11.71ml，67.23mmol)、DMAP(20mg，0.17mmol)和溴甲基甲醚(4.11ml，50.42mmol)。在23℃6小時后，使該反應(yīng)物在CH2Cl2(50ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(25ml)之間分配。用硫酸鈉干燥有機層，并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(RP-18，CH3CN/H2O1/1)純化得到7黃色固體(1.32g，70％)。Rf0.34(ACNH2O 2∶3，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.74(s，1H)，5.14(s，2h)，4.82(m，1H)，4.22(d，1H)，4.00(s，3H)，4.0(m，1H)，3.83(m，2h)，3.7(s，3H)，3.58(s，3H)，3.4(m，1H)，3.2-2.95(m，6H)，2.43(d，1H)，2.37(s，3H)，2.22(s，3H)，1.89(s，3H)，1.5-1.4(m，2h)，1.31(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ185.9，180.7，169.6，156.2，148.9，148.5，140.3，136.2，131.3，130.1，127.7，124.6，123.7，117.3，99.5，99.2，60.9，59.7，58.8，57.7，56.4，55.7，55.0，54.2，51.0，41.6，41.0，40.5，25.5，23.9，22.3，19.3，15.6，14.6，8.6。ESI-MS m/z計算值C30H36N4O7564.6；實測值(M+H)+565.3。
實施例37 于0℃向在甲醇(74ml)中的7(0.37g，0.65mmol)的溶液中加入1M氫氧化鈉(130ml)。攪拌該反應(yīng)物15分鐘后，在0℃用6M HCl猝滅至pH＝5。將所得混合物用乙酸乙酯(3×50ml)提取并將合并的有機層用硫酸鈉干燥及真空濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(RP-C18，CH3CN/H2O 1/∶1)純化得到8的黃色油狀物(232mg，65％)。Rf0.5(ACNH2O 3∶2，RP-C18)；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.75(s，1H)，5.15(s，2h)，4.86(m，1H)，4.96(d，1H)，)，4.01(d，1H)，3.88-3.81(m，2h)，3.70(s，3H)，3.58(s，3H)，3.39(m，1H)，3.27-3.21(m，1H)，3.18-3.08(m，2 h)，3.03-2.97(m，1H)2.47(d，1H)，2.37(s，3H)，2.22(s，3H)，1.90(s，3H)，1.57-1.46(m，2h)，1.33(s，3H)；13C NMR(75 MHz，□CDCl3)δ185.3，180.6，175.9，170.1，151.5，148.9，148.6，143.3，133.7，131.5，129.9，124.7，123.5，117.1，117.0，99.2，59.8，58.7，57.8，56.3，55.3，54.9，54.3，41.5，40.7，29.6，25.5，24.4，22.2，20.7，15.7，8.0。ESI-MS m/z計算值C29H34N4O7550.6；實測值(M+H)+551.2。
實施例38 向在DMF(30ml)中的化合物8(240mg，0.435mmol)的脫氣溶液中加入10％Pd/C(48mg)并在H2(大氣壓)攪拌反應(yīng)物1小時。在氬氣下該反應(yīng)物以無色溶液通過硅藻土墊過濾至含有無水Cs2CO3(240mg，0.739mmol)的Schlenk管中。然后加入溴代氯甲烷(0.566ml，8.71mmol)。封閉管口，于90℃攪拌3小時。冷卻反應(yīng)物，通過硅藻土過濾并用CH2Cl2洗滌。將有機層濃縮及干燥(硫酸鈉)得到9，為棕色油狀物，該油狀物可不經(jīng)進一步純化直接用于下一步反應(yīng)。Rf0.36(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶5).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.71(s，3H)，5.89(d，1H)，5.81(d，1H)，5.63(bs，1H)，5.33(d，1H)，5.17(d，1H)，4.97(m，1H)，4.20(d，1H)，4.09(m，1H)，3.99(m，1H)，3.68(m，1H)，3.65(s，6H)，3.59-3.47(m，4H)，3.37-3.27(m，2h)，3.14-2.97(m，2h)，2.62(d，1H)，2.32(s，3H)，2.20(s，3H)，2.08(s，3H)，1.72(m，1H)，1.36(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ169.8，149.1，147.4，145.5，136.2，130.9，130.8，125.0，122.9，117.7，112.6，111.8，106.4，100.8，99.8，59.8，58.9，57.7，56.6，56.4，55.5，55.2，41.6，40.1，29.6，25.9，25.0，22.6，15.6，8.8。ESI-MS m/z計算值C30H36SiN4O7564.6；實測值(M+H)+565.3。
實施例39 于0℃向含有在DMF(4ml)中的9(245mg，0.435mmol)的溶液的燒瓶中加入碳酸銫(425mg，1.30mmol)和烯丙基溴(376ml，4.35mmol)，在23℃攪拌混合物1小時。所得反應(yīng)物通過硅藻土墊過濾并在CH2Cl2(25ml)和水(10ml)之間分配。將有機相干燥(硫酸鈉)并減壓濃縮，得到殘留物，使其經(jīng)快速柱層析(SiO2，CHCl3∶乙酸乙酯1∶2)純化得到10的黃色油狀物(113mg，43％)。Rf0.36(己烷∶乙酸乙酯1∶5)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.74(s，1H)，6.3-6.0(m，1H)，5.94(d，1H)，5.87(d，1H)，5.43-5.36(m，2h)，5.22(s，2h)，5.00(m，1H)，4.22(m，1H)，4.17-4.01(m，1H)，3.98(m，2h)，3.71-3.67(m，1H)，3.69(s，3H)，3.62-3.51(m，3H)，3.58(s，3H)，3.39-3.37(m，1H)，3.31-3.26(m，3H)，3.09(dd，1H)，2.56(d，1H)，2.36(s，3H)，2.21(s，3H)，2.11(s，3H)，2.24-2.10(m，1H)，1.82-1.73(m，1H)，1.24(bs，3H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ169.4，148.8，148.3，139.1，133.7，130.9，130.3，125.2，120.2，117.7，113.1，112.6，101.3，99.3，74.1，59.7，59.3，57.8，57.0，56.1，56.1，55.2，41.6，41.0，40.9，29.7，26.3，22.5，15.6，9.3ESI-MS m/z計算值C33H40N4O7604.7；實測值(M+H)+605.3。
實施例40 于0℃向在CH2Cl2(0.2ml)中的9(22mg，0.039mmol)的溶液中加入乙酰氯(2.79ml，0.039mmol)和吡啶(3.2ml，0.039mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后該反應(yīng)液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1NHCl(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑得到46(22mg，93％)，為白色固體。Rf0.4(己烷∶乙酸乙酯1∶5)。1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.74(s，1H)，5.97(d，J＝0.9Hz，1H)，5.91(d，J＝0.9Hz，1H)，5.12(d，J＝5.7Hz，2 h)，5.04(d，J＝5.7Hz，1H)4.90(t，J＝6Hz，1H)，4.17(d，J＝2.7Hz，1H)，4.05(d，J＝2.7Hz，1H)，4.01(bs，1H)，3.71(s，3H)，3.57(s，3H)，3.50-3.44(m，2h)，3.38-3.36(m，1H)，3.30-3.26(m，1H)，3.00(dd，J1＝7.8Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.79(d，J＝12.9Hz，1H)，2.60(d，J＝18.0Hz，1H)，2.35(s，3H)，2.32(s，3H)，2.21(s，3H)，2.00(s，3H)，1.68(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)。ESI-MS m/z計算值C32H38N4O8606.67；實測值(M+H)+607.3。
實施例41 向在二氧六環(huán)(0.1ml)中的46(8mg，0.013mmol)的溶液中加入5.3N HCl/二氧六環(huán)(0.5ml)。將該反應(yīng)物在23℃攪拌1小時。然后，該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1N HCl(3ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑得到47(5mg，70％)，為白色固體。Rf0.4(己烷∶乙酸乙酯1∶5)。1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.51(s，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，4.97(bs，1H)，4.11(bs，1H)，4.04-4.02(m，2h)，3.75(s，3H)，)，3.65(d，J＝2.1Hz，2h)，3.56-3.30(m，2h)，3.04(dd，J1＝7.5Hz，J2＝18Hz，1H)，2.80(d，J＝14.4Hz，1H)，2.59(d，J＝18.3Hz，1H)，2.33(s，3H)，2.24(s，3H)，2.00(s，3H)，1.76(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.33(s，3H)，1.25(s，3H)。ESI-MS m/z計算值C30H34N4O7562.61。實測值(M+H)+563.3。
實施例42 于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的45(10mg，0.0192mmol)的溶液中加入異戊酰氯(2.34ml，0.0192mmol)和吡啶(1.55ml，0.0192mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1N HCl(3ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化得到48(11mg，95％)，為白色固體。Rf0.12(己烷∶乙酸乙酯1∶2).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.75(s，1H)，5.02(t，J＝5.4Hz，1H)，4.10(d，J＝1.5Hz，1H)，4.06(d，J＝2.7Hz，1H)，4.02(d，J＝2.7Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.76-3.71(m，1H)，3.86-3.28(m，3H)，3.04(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.78(d，J＝15.9Hz，1H)，2.55(d，J＝18Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.26(s，3H)，1.98(s，3H)，1.84-1.68(m，2h)，1.36(d，J＝7.2Hz，2h)，0.69(d，J＝6.6Hz，3H)，0.62(d，J＝6.6Hz，3H).ESI-MS m/z計算值C33H40N4O7604.69.實測值(M+H)+605.3.
實施例43 于0℃向在CH2C12(0.3ml)中的45(10mg，0.0192mmol)的溶液中加入異戊酰氯(3.98ml，0.0192mmol)和吡啶(1.55ml，0.0192mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1N HCl(3ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化得到49(12.4mg，96％)，為白色固體。Rf:0.7(乙酸乙酯∶甲醇10∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.73(s，1H)，5.08(t，J＝5.4Hz，1H1，4.10(d，J＝1.5Hz，1H)，4.05(m.，1H)，4.01(m，1H)，3.76(s，3H)，3.65-3.61(m，1H)，3.40-3.27(m，3H)，3.03(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.6Hz，1H)，2.78(d，J＝13.2Hz，1H)，2.57(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.31(s，3H)，2.25(s，3H)，1.99(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.0Hz，J2＝16.5Hz，1H)，1.73-1.42(m，4H)，1.33-1.18(m，10H)，1.03(m，2h)，0.87(t，J＝6.6Hz，3H)。ESI-MS m/z計算值C38H50N4O7674.83；實測值(M+H)+675.5。
實施例44 于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的45(14.5mg，0.0278mmol)的溶液中加入反式-3-三氟甲基肉桂酰氯(4.76ml，0.0278mmol)和吡啶(2.25ml，0.0278mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該反應(yīng)液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1N HCl(3ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶1)純化得到50(18.7mg，94％)，為白色固體。Rf0.64(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CH3OD).δ7.74-7.55(m，4H)，7.23(d，J＝16.0Hz，1H)，6.34(s，1H)，6.12(d，J＝16.0Hz，1H)，6.07(d，J＝0.9Hz，1H)，5.96(d，J＝0.9Hz，1H)，4.39(d，J＝2.4Hz，1H)，4.07-4.05(m，1H)，3.81(bs，1H)，3.46-3.51(m，3H)，3.42(s，3H)，3.09(br d，J＝12.0Hz，1H)，2.94-2.85(m，2h)，2.74(d，J＝18.3Hz，1H)，2.38(s，3H)，2.23(s，3H)，2.02(s，3H)，1.80(s，3H)，1.84-1.75(m，1H)。13C NMR(75MHz，CDCl3))δ168.7，165.3，146.5，144.7，142.6，140.6，138.0，135.9，131.0，130.9，129.1，128.6，125.8，125.7，124.5，124.4，122.7，121.2，117.8，116.5，113.0，112.0，101.7，60.4，59.1，56.5，56.4，55.6，55.3，41.8，40.3，26.6，25.1，20.3，15.4，9.3。ESI-MS m/z計算值C38H37F3N4O7718.72；實測值(M+H)+719.3。
實施例45 于0℃向在CH2Cl2(0.4ml)中的43(33mg，0.0557mmol)的溶液中加入異戊酰氯(6.79ml，0.0557mmol)和吡啶(4.5ml，0.0557mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1N HCl(3ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化得到51(34mg，91％)，為白色固體。Rf0.09(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.46(s，1H)，6.10(bs，1H)，5.99(d，J＝0.9Hz，1H)，5.90(d，J＝0.9Hz，1H)，5.30(t，J＝6.0Hz，1H)，4.10-4.05(m，3H)，3.81(bs，1H)，3.74(s，3H)，3.54(bs，1H)，3.38-3.36(m，1H)，3.29-3.21(m，1H)，3.00(dd，J1＝8.0Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.25(s，3H)，2.20(s，3H)，2.00(s，3H)，1.95-1.90(m，3H)，0.87(d，J＝6.6Hz，6H)，0.76(d，J＝6.0Hz，3H).ESI-MS m/z計算值C36H45N5O8675.77.實測值(M+H)+676.3.
實施例46 于0℃向在CH2Cl2(0.4ml)中的43(33mg，0.0557mmol)的溶液中加入反式-3-三氟甲基肉桂酰氯(9.52ml，0.0557mmol)和吡啶(4.5ml，0.0557mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1N HCl(3ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯1∶2)純化得到52(40mg，92％)，為白色固體。Rf0.21(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CD3OD).δ7.74-7.47(m，4H)，6.49(s，1H)，6.40(d，J＝15.6Hz，1H)，6.00(d，J＝1.5Hz，1H)，5.90(d，J＝1.5Hz，1H)，5.47(t，J＝6Hz，1H)，4.12-4.09(m，3H)，3.93(bs，1H)，3.71(s，3H)，3.59-3.58(m，1H)，3.38(d，J＝7.8Hz，1H)，3.29(d，J＝12.0Hz，1H)，3.00(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.79-2.78(m，1H)，2.65(d，J＝18.3Hz，1H)2.29(s，6H)，2.28(s，3H)，2.22(s，3H)，1.84-1.80(m，1H)，0.85-0.84(m，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ171.9，168.8，164.4，146.9，144.6，143.0，140.5，140.5，139.3，135.7，131.1，131.0，129.4，129.1，126.0，124.1，124.0，122.4，121.1，120.7，120.6，117.7，116.9，112.8，112.0，101.6，60.6，59.3，57.1，56.3，55.9，55.2，49.0，41.7，49.9，26.5，25.1，20.2，18.4，15.7，9.3ESI-MS m/z計算值C41H42F3N5O8789.8；實測值(M+H)+790.3。
實施例47 于23℃向在CH2Cl2(0.2ml)中的43(10mg，0.0169mmol)的溶液中加入三氟乙酸酐(2.38μl，0.0169mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌5小時，然后，該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1N HCl(3ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯3∶2)純化得到53(10.7mg，93％)，為白色固體。Rf0.57(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.45(s，1H)，6.00(d，J＝1.2Hz，1H)，5.90(d，J＝1.2Hz，1H)，5.87(bs，1H)，5.32(bs，1H)，4.12(d，J＝2.1Hz，1H)，4.08(d，J＝1.8Hz，1H)，3.78-3.56(m，3H)，3.72(s，3H)，3.40(d，J＝8.1Hz，1H)，3.25(d，J＝9.3Hz，1H)，3.00(dd，J1＝8.4Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.77(dd，J1＝2.1Hz，J2＝15.9Hz，1H)，2.68(d，J＝18.6Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.22(s，3H)，2.00(s，3H)，1.75(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.9Hz，1H)，0.69(d，J＝6.3Hz，3H)，13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.1，168.6，156.0，147.0，144.6，143.0，140.6，140.4，131.0，129.4，120.9，120.7，117.6，116.8，112.4，112.1，101.6，60.5，59.0，57.1，56.3，55.6，55.2，48.7，41.6，39.4，26.5，24.9，20.2，17.8，15.4，9.2；ESI-MS m/z計算值C33H36F3N5O8687.63；實測值(M+H)+688.66。
實施例48 于23℃向在CH2Cl2(0.2ml)中的19(11mg，0.0169mmol)的溶液中加入三氟乙酸酐(2.38ml，0.0169mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌5小時，然后，該溶液用CH2Cl2(5ml)稀釋并用0.1N HCl(3ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷∶乙酸乙酯3∶2)純化得到54(10.7mg，93％)，為白色固體。Rf:0.6(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.33(d，J＝6.3Hz，1H)，6.45(s，1H)，6.04(m，1H)，5.95(d，J＝1.5Hz，1H)，5.84(d，J＝1.5Hz，1H)，5.32(m，2h)，5.21(m，1H)，4.11(m，4H)，3.73(s，3H)，3.64(m，2 h)，3.51(m，1H)，3.37(d，J＝7.8Hz，1H)，3.22(m，2 h)，3.03(dd，1H，J1＝8.1Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.60 (d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.24(s，3H)，2.08(s，3H)，1.86(dd，J1＝12Hz，J2＝16.2Hz，1H)，0.82 (d，J＝7.2Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.0，156.0，148.4，147.1，144.3，143.0，138.7，133.8，130.5，129.4，120.6，120.4，117.6，117.5，117.0，113.5，112.5，112.4，101.1，74.1，66.8，60.4，59.3，56.9，56.6，56.3，55.4，48.7，41.6，40.1，26.2，25.0，17.6，15.4，9.1.ESI-MS m/z計算值C35H39F3N5O7685.69；實測值(M+H)+686.3。
實施例49 于23℃向在CH2Cl2(4ml)中的54(100mg，0.415mmol)的溶液中加入乙酸(40ml)、(PPh3)2PdCl2(8.4mg，0.012mmol)和Bu3SnH(157ml，0.56mmol)。于此溫度攪拌2小時后，將反應(yīng)物倒入快速柱的墊中(SiO2，己烷至己烷∶乙酸乙酯2∶1梯度液)得到55(90mg，96％)，為白色固體。Rf0.6(己烷∶乙酸乙酯1∶2)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.55(d，J＝7.2Hz，1H)，6.45(s，1H)，5.90(d，J＝1.2Hz，1H)，5.82(d，J＝1.2Hz，1H)，5.37(t，J＝6.0Hz，1H)，4.15(d，J＝2.1Hz，1H)，4.04(d，J＝1.8Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.66-3.53(m，2h)，3.37-3.31(m，2h)，3.19-3.15(d，J＝11.7Hz，1H)，3.08-3.00(m，2h)，2.56(d，J＝18.3Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.24(s，3H)，2.04(s，3H)，1.91(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.84(d，J＝6.9Hz，3H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.1，156.3，147.3，144.9，144.4，143.3，136.7，130.7，129.3，120.6，117.6，117.4，114.4，112.1，107.7，101.0，85.8，60.5，59.3，56.5，56.4，56.2，55.2，48.9，41.6，40.9，25.7，25.3，18.0，15.6，8.7。ESI-MS m/z計算值C32H35F3N5O7645.63；實測值(M+H)+646.2。
實施例50 向在CH2Cl2(1.44ml)中的17(200mg，0.288mmol)的溶液中加入三氟乙酸(888ml，11.53mmol)，并將該反應(yīng)混合物在23℃攪拌4小時，所得反應(yīng)物于0℃用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)猝滅，并用乙酸乙酯(2×70ml)提取。干燥(硫酸鈉)有機層并真空濃縮，得到56(147mg，93％)，該白色固體可不經(jīng)進一步純化直接用于下一步的反應(yīng)。Rf0.19(乙酸乙酯∶甲醇5∶1).1H NMR(300MHz，CD3OD).δ 6.48(s，1H)，5.88，d，J＝0.9Hz，1H)，5.81(d，J＝0.9Hz，1H)，4.35(d，J＝2.4Hz，1H)，4.15(d，J＝1.8Hz，1H)，3.99-3.98(m，1H)，3.70(s，3H)，3.52-2.96(m，7H)，2.68(d，J＝18.3Hz，1H)，2.24(s，3H)，2.23(s，3H)，2.06(s，3H)，1.85(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.91(d，J＝6.6Hz，3H).13C NMR(75MHz，CD3OD)δ173.2，149.1，145.6，144.9，138.0，132.2，130.6，121.4，119.6，117.4，114.3，109.2，102.5，82.3，60.4，58.4，58.3，57.8，56.6，50.1，42.3，41.6，27.8，26.2，19.5，15.5，9.8。ESI-MS m/z計算值C29H35N5O6549.62；實測值(M+H)+550.3。
實施例51 向在CH2Cl2(0.4ml)中的56(10mg，0.018mmol)的溶液中加入異硫氰酸苯酯(13ml，0.109mmol)，并將該反應(yīng)物在23℃攪拌1.5小時，真空濃縮該混合物，殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，己烷至1∶1己烷∶乙酸乙酯梯度液)純化得到57(8mg，65％)，為白色固體。Rf0.57(乙酸乙酯∶甲醇10∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.88(bs，1H)，7.41-7.36(m，2h)，7.27-7.22(m，1H)，7.02-7.00(d，J＝7.8Hz，2h)，6.71(d，J＝7.2Hz，1H)，6.31(s，1H)，6.17(bs，1H)，5.93 (d，J＝1.2Hz，1H)，5.83(d，J＝1.2Hz，1H)，5.55(bs，1H)，5.20-5.17(m，1H)，4.16(d，J＝1.8Hz，1H)，4.05(bs，1H)，4.02(d，J＝2.4Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.75-3.71(m，1H)，3.35(d，J＝7.8Hz，1H)，3.28-3.19(m，2h)，3.12-2.97(m，2h)，2.50(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.21(s，3H)，2.15-2.09(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.95(s，3H)，0.88(d，J＝6.9Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ178.5，171.7，147.2，145.0，144.3，143.3，137.0，135.7，130.6，130.4，129.6，127.5，124.3，120.6，117.7，117.2，115.3，112.1，108.3，100.9，60.9，59.5，56.7，56.5，56.2，55.2，54.1，41.7，41.1，26.3，25.4，18.5，15.8，9.0.ESI-MS m/z計算值C36H40N6O6S684.81.實測值(M+H)+685.3.
實施例52 于0℃向在CH2Cl2(0.5ml)中的57(45mg，0.065mmol)的溶液中加入乙酰氯(4.67ml，0.065mmol)和吡啶(5.3ml，0.065mmol)。攪拌該反應(yīng)混合物3小時后，該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1N HCl(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(RP-18，CH3CN∶H2O 40∶60)純化得到58(14mg，28％)，為白色固體。Rf0.34(CH3CN∶H2O 7∶15).1H NMR(300MHz，CDCl3).δ11.90(d，J＝6.6Hz，1H)，7.45-7.40(m，3H)，7.18-7.15(m，2h)，6.58(s，1H)，6.00(d，J＝1.2Hz，1H)，5.89(d，J＝1.2Hz，1H)，5.70(s，1H)，5.37(t，J＝4.8Hz，1H)，4.48(m，1H)，4.23(bs，1H)，4.07(bs，2h)，3.85-3.75(m，1H)，3.70(s，3H)，3.46-3.41(m，2h)，3.24-3.20(m，1H)，3.00-2.95(m，1H)，2.87-2.75(m，1H)，2.31(s，3H)，2.28(s，3H)，2.24(s，3H)，2.00(s，3H)，1.85(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.6Hz，1H)，1.66(s，3H)，0.82(d，J＝6.0Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3))δ182.6，174.3，171.0，146.6，144.6，142.7，142.3，140.7，140.2，131.3，129.8，129.3，128.9，128.8，121.5，120.4，117.3，116.6，112.8，112.0，111.3，101.5，60.5，59.0，57.6，56.2，55.9，55.3，55.1，41.6，39.4，27.8，26.5，24.8，20.2，17.1，15.5，9.3.ESI-MS m/z計算值C40H44N6O8S768.88實測值(M+H)+769.2。
實施例53 向在二氧六環(huán)(1ml)中57(130mg，0.189mmol)的溶液中加入5.3N HCl/二氧六環(huán)(1.87ml)，在23℃攪拌該反應(yīng)物4小時。然后將CH2Cl2(15ml)和H2O(10ml)加至該反應(yīng)物中并將有機層傾出。所得水相在0℃用飽和碳酸氫鈉水溶液(60ml)堿化(pH＝8)，然后用乙酸乙酯(2×50ml)提取。將合并的有機提取物干燥(硫酸鈉)，并真空濃縮得到59(63mg，70％)，為白色固體。Rf0.15(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3).δ6.67(s，1H)，5.99(d，J＝0.9Hz，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，5.10(bs，1H)，4.32(d，J＝7.2Hz，1H)，4.25(dd，J1＝3.6Hz，J2＝9.3Hz，1H)，3.7(s，3H)，3.71-3.64(m，2h)，3.50(dd，J1＝2.4Hz，J2＝15.9Hz，1H)，3.42-3.37(m，2h)，3.16(dd，J1＝3.6Hz，J2＝12.9Hz，1H)，2.57(dd，J1＝9.3Hz，J2＝12.9Hz，1H)，2.27(s，3H)，2.11(s，3H)，1.91(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H).ESI-MS m/z計算值C26H30N4O5478.5；實測值(M+H)+479.3。
實施例54 于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(20mg，0.0338mmol)的溶液中加入肉桂酰氯(5.63mg，0.0338mmol)和吡啶(2.73ml，0.0338mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1N HCl(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化得到60(22mg，90％)，為白色固體。Rf0.56(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3).δ7.51(s，1H)，7.50-7.47(m，2H)，7.36-7.35(m，2H)，6.43(s，1H)，6.36(brd，J＝15.9Hz，2H)，6.01(d，J＝1.5Hz，1H)，5.90(brd，J＝1.5Hz，2H)，5.42(t，J＝6.0Hz 1H)，4.12-4.07(m，3H)，3.96-3.95(m，1H)，3.73(bs，3H)，3.58(bs，2H)，3.39(d，J＝8.7Hz，1H)，3.25(d，J＝11.7Hz，1H)，3.0(dd，J1＝7.5Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.78(d，J＝15.9Hz，1H)，2.67(d，J＝16.5Hz，1H)，2.29(s，6H)，2.23(s，3H)，1.99(s，3H)，1.82(dd，J1＝11.4Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.83(d，J＝6.0Hz，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3))δ172.0，165.0，146.9，144.6，143.1，141.0，140.5，134.8，131.0，129.7，129.1，128.8，127.8，125.5，123.8，123.0，121.1，120.5，117.7，116.9，112.8，112.0，101.9，60.6，59.2，57.1，56.4，55.9，55.3，48.8，41.7，40.0，26.5，25.1，20.3，18.5，15.7，9.3.ESI-MS m/z計算值C40H43N5O8721.8.實測值(M+H)+722.3。
實施例55 于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的45(19mg，0.0364mmol)的溶液中加入七氟丁酰氯(5.44ml，0.0364mmol)和吡啶(2.95ml，0.0364mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1N HCl(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化得到61(11.7mg，45％)，為白色固體。Rf0.76(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.46(s，1H)，6.12(bs，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.93(d，J＝1.2Hz，1H)，5.72(bs，1H)，4.13-4.11(m，2H)，4.0(d，J＝2.4Hz，1H)，3.98-3.96(m，1H)，3.73(s，3H)，3.39(d，J＝7.5Hz，1H)，3.39-3.28(m，2H)，3.09(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.80(d，J＝16.2Hz，1H)，2.46(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.21(s，3H)，1.99(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.0Hz，J2＝16.2Hz，1H).ESI-MS m/z計算值C32H31F7N4O7716.6實測值(M+H)+717.2。
實施例56 于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(24mg，0.04mmol)的溶液中加入丁酰氯(4.15ml，0.04mmol)和吡啶(3.28ml，0.04mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1NHCl(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAcMeOH 20∶1)純化得到62(24mg，90％)，為白色固體。Rf0.35(EtOAc∶MeOH 5∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.47(s，1H)，6.10(d，J＝6.5Hz，1H)，6.0(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.86(bs，1H)，5.31(d，J＝6.9Hz，1H)，4.11-4.06(m，3H)，3.85-3.81(m，1H)，3.75(s，3H)，3.59-3.53(m，2H)，3.38(d，J＝7.5Hz，1H)，3.27-3.22(m，1H)，3.0(dd，J1＝7.8Hz，J2＝17.4Hz，1H)，2.79(d，J＝15.3Hz，1H)，2.63(d，J＝17.7Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.0(s，3H)，1.80(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.58(q，J＝7.2Hz，2H)，0.89(t，J＝7.2Hz，3H)，0.76(d，J＝6.6Hz，3H).ESI-MS m/z計算值C35H43N5O8661.64；實測值(M+H)+662.3。
實施例57 于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(19mg，0.0364mmol)的溶液中加入肉桂酰氯(6.06mg，0.0364mmol)和吡啶(2.95ml，0.0364mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1N HCl(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化得到63(20.1mg，85％)，為白色固體。Rf0.65(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.39-7.29(m，5H)，6.42，(s，1H)，6.01(d，J＝1.5Hz，1H)，5.92(d，J＝1.5Hz，1H)，5.73(bs，1H)，5.24(t，J＝6.8Hz，1H)，4.12-4.08(m，3H)，3.66-3.64(m，2H)，3.58(bs，3H)，3.36(d，J＝8.7Hz，1H)，3.29(d，J＝12.0Hz，1H)，2.98 (dd，J1＝8.1Hz，J2＝18Hz，1H)，2.33(s，6H)，2.29(s，3H)，2.01(s，3H)，1.84(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H).ESI-MS m/z計算值C37H38N4O7650.72；實測值(M+H)+651.2。
實施例58 于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(20mg，0.0338mmol)的溶液中加入3-氯丙酰氯(3.22ml，0.0338mmol)和吡啶(2.73ml，0.0338mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1N HCl(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化得到64(20.5mg，89％)，為白色固體。Rf:0.32(EtOAc∶己烷5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.48(s，3H)，6.28(m，1H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，5.86(bs，1H)，5.31(m，1H)，4.08-4.07(m，3H)，3.75(s，3H)，3.72-3.53(m，5H)，3.39(d，J＝8.1Hz，1H)，3.24(d，J＝12.0Hz，1H)，3.00(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.79(d，J＝13.5Hz，1H)，2.50(t，J＝6.3Hz，2H)，2.32(s，3H)，2.28(s，3H)，2.25(s，3H)，2.0(s，3H)，1.79(dd，J1＝12.3Hz，J2＝14.8Hz，1H)，0.81(d，J＝6.3Hz，3H)。
實施例59 于0℃向在CH2Cl2(0.3ml)中的43(19mg，0.0364mmol)的溶液中加入丁酰氯(3.78ml，0.0364mmol)和吡啶(2.95ml，0.0364mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后，該溶液用CH2Cl2(10ml)稀釋并用0.1N HCl(5ml)洗滌。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 20∶1)純化得到64(19mg，87％)，為白色固體。Rf0.60(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.75(s，1H)，5.01(t，J＝6.4Hz，1H)，4.10-4.09(m，1H)，4.06(d，J＝2.1Hz，1H)，4.03-4.02(m，1H)，3.76(s，3H)，3.67-3.60(m，1H)，3.42-3.35(m，2H)，3.29(d，J＝12.0Hz，1H)，3.02(dd，J1＝7.8Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.79(d，J＝14.1Hz，1H)，2.56(d，J＝18.3Hz，1H)，2.32(s，3H)，2.31(s，3H)，2.25(s，3H)，1.78(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.63(s，3H)，1.53-1.46(m，2H)，1.28-1.16(m，2H)，0.68(t，J＝7.2Hz，3H).ESI-MS m/z計算值C32H38N4O7590.67；實測值(M+H)+591.2。
實施例60 向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的50(31.7mg，0.044mmol)的溶液中加入AgNO3(225mg，1.32mmol)，并將該反應(yīng)物在23℃攪拌17小時，然后，于0℃加入鹽水(10ml)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(10ml)，并將混合物攪拌15分鐘，通過硅藻土墊過濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌，傾出溶液，干燥有機層并真空濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶1)純化得到66(16mg，51％)，為白色固體。Rf0.26(EtOAcMeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.66-7.42(m，4H)，7.20(bs，1H)，6.44(s，1H)，5.97(b，J＝1.2Hz，1H)，5.90(d，J＝1.2Hz，1H)，5.76(bs，1H)，5.28(bs，1H)，4.54(bs，1H)，4.43(bs，1H)，4.00(bs，1H)，3.68-3.57(m，4H)，3.47(d，J＝3.3Hz，1H)，3.40(d，J＝11.7Hz，1H)，3.17(d，J＝6.9Hz，1H)，2.92(dd，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.74(d，J＝17.1Hz，1H)，2.48(d，J＝18.6Hz，1H)，2.32(s，6H)，2.28(s，3H)，1.99(s，3H)，1.76(dd，J1＝12.0Hz，J2＝16.2Hz，1H).ESI-MS m/z計算值C37H38F3N3O8709；實測值(M+H)+692.3。
實施例61 向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的53(57mg，0.0828mmol)的溶液中加入AgNO3(650mg，3.81mmol)，并將該反應(yīng)物在23℃攪拌24小時，然后，于0℃加入鹽水(10ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)，并將混合物攪拌15分鐘，通過硅藻土墊過濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌，傾出溶液，干燥有機層并真空濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAcMeOH 5∶1)純化得到67(28mg，50％)，為白色固體。Rf0.28(EtOAcMeOH 10∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.47(s，1H)，5.97(s，1H)，5.88(s，1H)，5.35(bs，1H)，4.51(bs，1H)，4.41(bs，1H)，4.12-4.05(m，1H)，4.00(d，J＝2.7Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.64(bs，1H)，3.46(d，J＝3.3Hz，1H)，3.34(d，J＝11.4Hz，1H)，3.18(d，J＝7.5Hz，1H)，2.95(dd，J1＝8.4Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.70(d，J＝15.6Hz，1H)，2.48(d，J＝17.7Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.27(s，3H)，2.26(s，3H)，1.98(s，3H)，1.68(dd，J1＝12Hz，J2＝15.6Hz，1H)，0.86(d，J＝6.3Hz，3H)；ESI-MS m/z計算值C32H37F3N4O9678.66；實測值(M+-17)661.2。
實施例62 向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的48(32mg，0.0529mmol)的溶液中加入AgNO3(270mg，1.58mmol)，并將該反應(yīng)物在23℃攪拌24小時，然后，于0℃加入鹽水(10ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)，并將混合物攪拌15分鐘，通過硅藻土墊過濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌，傾出溶液，干燥有機層并真空濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAcMeOH 5∶1)純化得到68(18mg，56％)，為白色固體。Rf:0.40(EtOAcMeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.95(d，J＝1.2Hz，1H)，5.88(d，J＝1.2Hz，1H)，5.23(d，J＝6.9Hz，1H)，4.45(d，J＝3.3Hz，1H)，4.38(s，1H)，4.01(d，J＝2.4Hz，1H)，3.78(m，1H)，3.77(s，3H)，3.41-3.37(m，1H)，3.17-3.15(m，1H)，2.96(dd，J1＝7.8Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.70(d，J＝15.3Hz，1H)，2.40(d，J＝18.0Hz，1H)，2.30(s，6H)，2.27(s，3H)，1.76-1.65(m，1H)，1.35-1.25(m，2H)，0.89-0.82(m，1H)，0.69(d，J＝6.6Hz，3H)，0.58(d，J＝6.6Hz，3H)實施例63 向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的51(27mg，0.04mmol)的溶液中加入AgNO3(204mg，1.19mmol)，并將該反應(yīng)物在23℃攪拌24小時，然后，于0℃加入鹽水(10ml)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(10ml)，并將混合物攪拌15分鐘，通過硅藻土墊過濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌，傾出溶液，干燥有機層并真空濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶1)純化得到69(10mg，38％)，為白色固體。Rf0.38(EtOAcMeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.48s，1H)，6.16(bs，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.89(d，J＝1.5Hz，1H)，5.33(t，J＝6.0Hz，1H)，4.50(m，1H)，4.40(m，1H)，4.11-4.09(m，1H)，4.00(d，J＝2.6Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.41-3.32(m，3H)，3.18(d，J＝8.4Hz，1H)，2.94(dd，J1＝8.4Hz，J2＝18.3Hz，1H)，2.70(d，J＝14.4Hz，1H)，4.45(d，J＝18.3Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.28(s，3H)，2.27(s，3H)，2.04(s，3H)，2.00-1.86(m，3H)，1.73(m，1H)，0.87(d，J＝6.3Hz，6H).
實施例64 向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的63(15mg，0.023mmol)的溶液中加入AgNO3(118mg，0.691mmol)，并將該反應(yīng)物在23℃攪拌24小時，然后，于0℃加入鹽水(10ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)，并將混合物攪拌15分鐘，通過硅藻土墊過濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌，傾出溶液，干燥有機層并真空濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAcMeOH 5∶1)純化得到70(20.1mg，85％)，為白色固體。Rf0.43(EtOAc∶MeOH 5∶1).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38-7.28(m，5H)，6.48(s，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.75(bs，1H)，5.38(brd，1H)，5.30(bs，1H)，4.53(m，1H)，4.42(m，1H)，4.02(d，J＝2.7Hz，1H)，3.78-3.65(m，5H)，3.46-3.40(m，2H)，3.17(d，J＝7.8Hz，1H)，2.94(dd，J1＝7.8Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.73 (d，J＝16.8Hz，1H)，2.45(d，J＝18.0Hz，1H)，2.31(s，6H)，2.28(s，3H)，1.97(s，3H)，1.77(dd，J1＝12.0Hz，J2＝15.3Hz，1H).
實施例65 向在CH3CN/H2O(1.5ml/0.5ml)中的65(25mg，0.042mmol)的溶液中加入AgNO3(215.56mg，1.269mmol)，在23℃攪拌該反應(yīng)物24小時。然后在0℃加入鹽水(10ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)，將反應(yīng)混合物攪拌15分鐘，通過硅藻土墊過濾并用CH2Cl2(20ml)洗滌。傾出該溶液并干燥有機層，真空濃縮。將殘留物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，EtOAc∶MeOH 5∶2)得到71(16mg，65％)，為白色固體。Rf0.0.5(EtOAcMeOH 5∶2).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.50(s，1H)，5.95(d，J＝1.5Hz，1H)，5.78(s，1H)，5.19(bs，1H)，4.45(d，J＝3.3Hz，1H)，4.37(bs，1H)，4.11(brd，J＝4.8Hz，1H)，4.01(d，J＝2.1Hz，1H)，3.76(s，1H)，3.71-3.69(m，1H)，3.49-3.35(m，1H)，3.24(d，J＝13.5Hz，1H)，3.15(d，J＝9.3Hz，1H)，2.95(dd，J1＝8.1Hz，J2＝17.7Hz，1H)，2.70(d，J＝15.6Hz，1H)，2.40(d，J＝18.0Hz，1H)，2.31(s，3H)，2.29(s，3H)，2.26 (s，3H)，1.96(s，3H)，1.75-1.66(m，1H)，1.52-1.17(m，2H)，0.66(t，J＝7.2Hz，3H).
發(fā)酵方法實施例A將含有1％葡萄糖、0.25％牛肉膏、0.5％細菌培養(yǎng)蛋白胨(bacto-peptone)、0.25％NaCl、0.8％CaCO3的接種培養(yǎng)基(Seed medium)YMP3與0.1％的微生物，熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)的A2-2菌株的冷凍營養(yǎng)原液接種，并于27℃在旋轉(zhuǎn)搖瓶(250rpm)中培養(yǎng)。培養(yǎng)30小時后，將接種的培養(yǎng)物加至裝有包括2％葡萄糖；4％甘露醇、2％干釀造酵母(brewer’s yeast)(VitalevorBiolux，Belgium)；1％(NH4)2SO4；0.04％K2HPO4；0.8％KCl；0.001％FeCl3；0.1％L-Tyr；0.8％CaCO3；0.05％PPG-2000；0.2％消泡劑硅氧烷(anti-foam silicone)(ASSAF-100，RHODIA UK)的生產(chǎn)培養(yǎng)基的帶攪拌器的發(fā)酵容器中。于122℃滅菌30分鐘。培養(yǎng)體積是2％(v/v)。溫度為27℃(0至16h)和從16h至最后步驟(41小時)為24℃。溶解氧壓高達25％。從28小時至最后步驟其pH用稀硫酸控制在6.0。過壓為0.5巴。從16小時至最后步驟(進行兩天時間)加入1％甘露醇或山梨醇并在三天的發(fā)酵過程中達2％。
41或64小時后，必須提取發(fā)酵的液體培養(yǎng)物回收番紅菌素B或者用KCN處理所述凈化的液體培養(yǎng)液回收氰基-番紅菌素B(safracin B-cyano)。
實施例B從粗提物中獲得氰基-番紅菌素B于pH6凈化或過濾所得發(fā)酵液體培養(yǎng)液以除去固體。將凈化的液體培養(yǎng)液用稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH9.5并用2∶1(v/v)乙酸乙酯、二氯甲烷或乙酸丁酯提取兩次。所得提取物在20分鐘時間加至攪拌容器中，保持該混合物的溫度在8-10℃。經(jīng)液-液離心分離兩相。將有機層用無水硫酸鈉干燥，或冷凍干燥然后過濾除去冰。將此有機層(乙酸乙酯層)蒸發(fā)直至獲得油狀粗提物。
實施例C由所得凈化的液體培養(yǎng)液獲得氰基番紅菌素B于pH6凈化或過濾所得發(fā)酵液體培養(yǎng)液以除去固體。將凈化的液體培養(yǎng)液用濃乙酸調(diào)節(jié)至pH3.9。將每升0.5克的KCN加至凈化的液體培養(yǎng)液并在攪拌下于20℃培養(yǎng)1小時。然后將溫度降至15℃，用稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至9.5并用2∶1.5(v/v)乙酸乙酯提取。將提取物在20分鐘時間加至攪拌容器中，保持該混合物的溫度在8-10℃。經(jīng)液-液離心分離兩相。有機層用無水硫酸鈉干燥。將該有機層(乙酸乙酯層)蒸發(fā)直至獲得油狀粗提物。該提取物經(jīng)快速柱層析(SiO2，20∶1至10∶至5∶1，乙酸乙酯∶甲醇梯度液)純化定量得到化合物2，為淺黃色固體。Rf0.55(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)；.tR＝19.9min[HPLC，Delta PackC4，5μm，300A，150×3mm，λ＝215nm，flow＝0.7ml/min，temp＝50℃，grad.CH3CN-aq.NaOAc(10mM) 85％-70％(20′)]；1H NMR(300Mhz，CDCl3)δ6.54(dd，J1＝4.4Hz，J2＝8.4Hz，1H)，6.44(s，1H)，4.12(d，J＝2.4Hz，1H)，4.04(d，J＝2.4Hz，1H)，4.00(s，3H)，3.87(bs，1H)，3.65(ddd，J1＝1.5Hz，J2＝8.7Hz，J3＝9.9Hz，1H)，3.35(br.D，J＝8.4Hz，1H)，3.15-2.96(m，4H)，2.92(q，J＝7.2Hz，1H)，2.47(d，J＝18.3Hz，1H)，2.29(s，3H)，2.18(s，3H)1.83(s，3H)，1.64(ddd，J1＝2.7Hz，J2＝11.1Hz，J3＝14.1Hz，1H)，0.79(d，J＝7.2Hz，3H)；13C NMR(75Mhz，CDCl3)δ186.0(q)，175.9(q)，156.2(q)，146.8(q)，142.8(q)，140.7(q)，136.6(q)，130.5(q)，128.8(q)，127.0(q)，120.5(s)，117.4(q)，116.5(q)，60.8(t)，60.4(s)，58.7(t)，56.2(s)，55.7(s)，54.8(s)，54.8(s)，54.4(s)，50.0(s)，41.6(t)，39.8(d)，25.2(d)，24.4(d)，21.2(t)，15.5(t)，8.4(t).ESI-MS m/z計算值C29H35N5O6549.6實測值(M+Na)+572.3.
實施例D將包括葡萄糖(2％)、甘露醇(4％)、干釀造酵母(2％)、硫酸銨(1％)；磷酸氫鉀(potassium secondary phosphate)(0.04％)、氯化鉀(0.8％)；氯化鐵(III)-六水合物(0.001％)、L-酪氨酸(0.1％)、碳酸鈣(0.8％)、聚-(丙二醇)2000(0.05％)和消泡劑ASSAF 1000(0.2％)的培養(yǎng)基(501)加至75升總體積容量的罐式-發(fā)酵容器中，滅菌后用A2-2菌株(FERM BP-14)接種的培養(yǎng)物(2％)培養(yǎng)，在攪拌下于27℃至24℃進行通氣培養(yǎng)64小時(每分鐘通氣75L并以350至500rpm攪拌)。其pH通過從27小時至最終步驟自動加稀硫酸控制。從16小時至最終步驟加入2％的甘露醇。這樣得到培養(yǎng)基(451)，經(jīng)離心分離除去細胞后，用稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH至9.5，用251乙酸乙酯提取兩次。將混合物于8℃用20分鐘加至攪拌容器中。經(jīng)液-液離心分離兩相。將所得有機層在-20℃冷凍并過濾除去冰，蒸掉冰并蒸發(fā)直至得到40g深色油狀-粗提物。引入氰化物基團后純化，得到3.0克氰基番紅菌素B。
實施例E將包括葡萄糖(2％)、甘露醇(4％)、干釀造酵母(2％)、硫酸銨(1％)；磷酸氫鉀(0.02％)、氯化鉀(0.2％)；氯化鐵(III)-六水合物(0.00 1％)、L-酪氨酸(0.1％)、碳酸鈣(0.8％)、聚(丙二醇)2000(0.05％)和抗泡沫(antifoam)ASSAF 1000(0.2％)的培養(yǎng)基(501)加至75升總體積容量的罐式-發(fā)酵容器中，滅菌后用A2-2菌株(FERM BP-14)的接種培養(yǎng)物(2％)培養(yǎng)，并在攪拌下于27℃至24℃進行通氣培養(yǎng)41小時(每分鐘通氣75L并以350至500rpm攪拌)。其pH通過從28小時至最終步驟自動加入稀硫酸控制。從16小時至最終步驟加入1％的甘露醇。這樣得到培養(yǎng)基(451)，經(jīng)離心除去細胞后，用200ml濃乙酸調(diào)節(jié)至pH3.9。加入25克97％的氰化鉀，于20℃攪拌1小時后，用1500ml的10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9.5。然后用35升乙酸乙酯提取。將混合物于8℃用20分鐘加至攪拌容器中。經(jīng)液-液離心分離兩相。將有機層用無水硫酸鈉干燥并蒸發(fā)直至獲得60g深色油狀粗提物。
層析后，得到4.9克氰基番紅菌素B。
實施例66 于23℃，在氬氣下向攪拌的在二氯甲烷(535ml)中的25(7.83g，0.0139mol)和商業(yè)可得到的Boc-Cys(Fm)衍生物(Bachem)(8.33g，35.04mmol)的溶液中加入二甲基氨基吡啶(4.28g，35.04mmol)和1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(6.66g，35.04mmol)。然后于23℃攪拌混合物2.5小時。通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液(500ml)猝滅反應(yīng)，分離有機層并用二氯甲烷(250ml)回提水層。將合并的有機提取物用硫酸鈉干燥，過濾并減壓下蒸發(fā)至干。所得粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析純化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以從1∶4至2∶1梯度方式洗脫，得到142(12.21g，93％)，為淺黃色固體。Rf＝0.35 HexEtOAc1∶1。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(d，J＝7.3，2.7Hz 2H)，7.55(dd，J1＝14.6，J2＝7.62H)，7.40-7.34(m，2H)，7.30-7.24(m，2H)，6.63(s，1H)，6.08-5.99(m，1H)，5.91(d，J＝1.5Hz，1H)，5.80(d，J＝1.5Hz，1H)，5.39(dd，J1＝17.3，J2＝1.7Hz 1H)，5.24(dd，J1＝10.5，J2＝1.7Hz，1H)，5.09(AB，J＝4.48Hz，2H)，5.07(t，J＝7.8Hz，1H)，4.34-4.29(m，2H)，4.17(d，J＝1.9Hz，1H)，4.16-4.04(m，4H)，4.02-3.96(m，2H)，3.93(t，J＝5.3Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.56(s，3H)，3.32(d，J＝8.0，1H)，3.23-3.17(m，2H)，3.0-2.89(m，3H)，2.65-2.57(m，2H)，2.29(s，3H)，2.20(s，3H)，2.03(s，3H)，1.76(dd，J1＝16.3，J2＝12.7Hz，1H)，1.45，1.44(s，9H).13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ170.9，155.3，148.9，148.6，146.1，146.0，144.7，141.2，141.1，139.4，134.0，131.0，130.1，127.8，127.2，125.2，125.0，124.3，121.3，121.2，120.1，118.1，117.6，112.9，101.4，99.5，80.3，74.2，65.6，60.4，60.1，57.9，57.4，57.2，57.1，56.9，55.6，53.2，47.0，41.8，41.7，36.7，35.3，28.5，26.6，25.3，15.9，9.4。ESI-MS m/z計算值C53H60N4O10S945.13 ；實測值(M+H)+946.3。
實施例67 于23℃，在氬氣下向攪拌的在二氯甲烷(318ml)中142(12.01g，0.0127mol)的溶液中加入二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(0.71g，1.015mmol)和乙酸(3.6ml，0.176mol)。然后攪拌下滴加入氫化三丁基錫(10.27ml，0.037mol)。將所得混合物于23℃攪拌10分鐘。然后所得反應(yīng)物經(jīng)用己烷壓積(compacted)的硅膠柱過濾。經(jīng)用乙酸乙酯和己烷的混合物以1∶4、1∶1至7∶3的梯度方式隨后洗脫得到143(10.89g，95％)黃色固體。Rf＝0.25 Hex∶EtOAc 2∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(d，J＝7.6Hz，2H)，7.61(d，J＝6.6Hz，1H)，7.52(d，J＝7.3Hz，1H)，7.37(t，J＝7.8Hz，2H)，7.28(m，2H)，6.63(s，1H)，5.87(d，J＝1.5Hz，1H)，5.76(d，J＝1.5Hz，1H)，5.58(bs，1H)，5.31(d，J＝5.8Hz，1H)，5.17(d，J＝5.6Hz，1H)，4.91(d，J＝8.3Hz，1H)，4.17-4.06(m，4-6H)，3.85(t，J＝5.7Hz，1H)，3.70(s，3H)，3.68(s，3H)，3.34(brd，J＝6.6Hz，1H)，3.23(brd，J＝11.2Hz，1H)，3.06(brd，J＝12.9Hz，1H)，3.04-2.86(m，3H)，2.65-2.54(m，2H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，1.94(s，3H)，1.80(dd，J1＝11.5Hz，J2＝15.8Hz，1H)，1.45(s，9H)。13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ175.3，170.5，154.9，149.1，147.6，145.9，145.8，145.7，144.5，140.9，140.8，136.1，130.9，127.4，126.9，124.3，124.7，122.9，119.7，117.6，112.3，111.4，106.6，100.7，99.7，80.0，64.2，60.3，59.8，57.6，57.0，56.5，56.4，55.2，52.7，46.7，46.5，41.4，41.3，36.9，36.6，34.9，28.2，26.0，24.9，20.9，20.7，15.7，14.1，8.5。ESI-MS m/z計算值C50H56N4O10S905.5；實測值(M+H)+906.3。
實施例68 于-10℃(浴溫-15℃)，向在無水二氯甲烷(185ml)中的143(10g，0.011mol)的溶液中加入在無水二氯甲烷(185ml)中的苯亞硒酸酐(5.7g，0.011mol)的溶液，棄掉溶液中的任何白色固體。于相同溫度下攪拌混合物10分鐘。該反應(yīng)物用二氯甲烷(200ml)稀釋并于-10℃加入飽和碳酸氫鈉水溶液(500ml)。分離有機層，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮至干。所得殘留物經(jīng)快速柱層析純化，用乙酸乙酯和己烷的混合物梯度方式(從1∶1，3∶2，7.3至4∶1)洗脫，得到144(9.34g，92％)黃色固體。將層析純化得到固體溶于二氯甲烷(250ml)，加入木炭(3.3g)并將所得懸浮液于23℃攪拌1小時。將所得混合物經(jīng)硅藻土過濾并用二氯甲烷(80ml)洗滌該硅藻土。保持溫度在25-30℃，減壓蒸發(fā)溶劑得到144(8.96g，88％)黃色固體。Rf＝0.30和0.25(異構(gòu)體混合物) HexEtOAc 1∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(異構(gòu)體混合物)7.73-7.61(m，4H)，7.37-7.30(m，4H)，6.62(s，1H)，6.59(s，1H)，6.53(s，1H)，5.72(s，1H)，5.70(s，1H)，5.61(s，1H)，5.55(bs，1H)，5.34(m，2H)，5.08(AB sist.，JAB＝6.7Hz，1H)，5.00(AB sist.，JAB＝5.9Hz，1H)，4.67(m，1H)，4.50(m，1H)，4.38(dd，J1＝4.9Hz，J2＝12.9Hz，1H)，4.21(dd，J1＝6.3Hz，J2＝12.9Hz，1H)，4.11(t，J＝5.9Hz，1H)，4.02(m，3H)，3.87(m，1H)，3.83(s，3H)，3.72(m，1H)，3.61(s，3H)，3.49(s，3H)，3.27(m，1H)，3.1 5(dd，J1＝1.8Hz，J2＝6.2Hz，2H)，3.07(d，J＝6.3Hz，1H)，2.94(m，4H)，2.86(m，2H)，2.42(m，2H)，2.25(s，3H)，2.20(s，3H)，2.15 (s，3H)，2.08(dd，J1＝2.4Hz，J2＝13.9Hz，1H)，1.77(s，3H)，1.76(s，3H)，1.43(s，9H).13C NMR(75MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ200.6，171.2，160.4，155.6，148.9，148.8，148.3，145.9，145.8，141.3，141.2，138.7，130.9，127.9，127.4，127.3，127.3，125.3，125.1，124.2，120.1，117.1，111.9，108.5，105.0，104.7，101.7，101.3，99.5，99.4，80.5，72.5，70.8，60.5，60.1，58.4，58.0，57.9，56.9，56.8，56.3，55.9，55.5，55.4，53.8，53.7，47.1，42.0，41.8，41.5，37.4，37.3，35.6，35.5，28.5，25.8，25.7，16.1，16.0，7.7，7.3.ESI-MS m/z計算值C50H56N4O11S921.3；實測值(M+1)+922.3。
實施例69 于-78℃，在氬氣下向在無水二氯甲烷(396ml)中的DMSO(3.44ml)的溶液中加入三氟甲磺酸酐(3.27ml，19.45mmol)并將該混合物于該溫度下攪拌20分鐘。然后于-78℃加入在無水二氯甲烷(124ml)中的144(8.92g，9.6mmol)的溶液并在氬氣下于-40℃攪拌該混合物35分鐘。加入二異丙基乙胺(13.5ml，73.43mmol)并在氬氣下于0℃攪拌該混合物45分鐘。加入叔丁醇(3.65ml，38.6mmol)和叔丁基三甲基胍(11.6ml，67.46mmol)并在氬氣下于23℃攪拌該混合物40分鐘。然后加入乙酸酐(9.15ml，96.78mmol)并將該反應(yīng)物于23℃再攪拌1小時。然后該反應(yīng)物用二氯甲烷(250ml)稀釋并加入飽和氯化銨水溶液(500ml)。分離有機層并用飽和碳酸氫鈉水溶液(500ml)和飽和氯化鈉水溶液(500ml)順序洗滌。分離有機層，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮至干，保持溫度在25-30℃。然后將粗品固體經(jīng)快速柱層析純化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(從1∶4至2∶3)洗脫，得到145(4.99g，68％)黃色固體。Rf＝0.44HexEtOAc 3∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ6.79(s，1H)，6.09(s，1H)，6.00(s，1H)，5.20(d，J＝5.4Hz，1H)，5.14(d，J＝5.6Hz，1H)，5.02(d，J＝11.7Hz，1H)，4.63(d，J＝9.0Hz，1H)，4.50(m，1H)，4.33(d，J＝5.4Hz，1H)，4.30(m，1H)，4.25(bs，1H)，4.18(d，J＝2.4Hz，1H)，4.17(dd，J1＝1.3Hz，J2＝11.7Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.57(s，3H)，3.42(m，2H)，2.93(m，2H)，2.35(m，1H)，2.31(s，3H)，2.29(s，3H)，2.22(s，3H)，2.09(m，1H)，2.05(s，3H)，1.45(s，9H).)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ207.3，170.9，68.8，155.4，149.8，148.6，146.0，141.1，140.7，131.7，130.6，125.1，120.6，118.3，113.7，102.2，99.4，80.0，61.6，60.4，59.8，59.4，59.2，57.7，55.0，54.7，54.0，41.9，41.6，33.1，31.8，28.7，23.9，20.6，16.1，14.3，9.8；ESI-MS m/z計算值C38H46N4O11S766.86；實測值(M+1)+767.3。
實施例70 于23℃，向在乙腈(50ml)和二氯甲烷(25ml)中的145(1.0g，1.3mmol)的溶液中加入碘化鈉(1.52g，10.01mmol)。然后將該混合物冷至0℃，分次加入三氯化鋁(1.33g，10.01mmol)并保持溫度在0℃。然后于0℃攪拌該混合物2.5小時。該反應(yīng)物用二氯甲烷(25ml)稀釋并加入飽和酒石酸鈉鉀水溶液(100ml)。分離所得水相并用二氯甲烷(2×75ml)提取。然后將飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)加至該水層并用二氯甲烷(2×50ml)進一步提取。合并的有機提取物經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮至干，保持溫度低于25℃。然后將粗品固體經(jīng)在氨基-硅膠柱上層析純化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式洗脫，得到35(487mg，60％)黃色固體。35的實驗數(shù)據(jù)先前已在PCT/GB00/01852中介紹。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介紹的相同的方法制備36，ET-770和ET-743。
路徑2實施例71 將在THF(569ml)和水(285ml)中的21(9.84g，18.97mmol)的溶液用冰浴冷至0℃。然后于0℃加入NaNO2(1.96g，28.45mmol)和90％AcOH水溶液(18.97ml，0.33mol)并于23℃攪拌該混合物18小時。在將該反應(yīng)物冷至0℃后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(300ml，堿性pH)和二氯甲烷(500ml)。提取后，水相進一步用二氯甲烷(2×300ml)提取。合并的有機提取物經(jīng)硫酸鈉干燥并減壓蒸發(fā)至干。然后，使所得粗品固體溶于甲醇(379ml)，并于0℃加入1M NaOH(38ml)。于23℃攪拌混合物4小時。于0℃用EtOAC(600ml)稀釋后，有機層用水(400ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml，堿性pH)的混合物洗滌。提取后，該水相進一步用EtOAC(3×300ml)提取。將合并的有機提取物用Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，Hex∶EtOAc從3∶1至2∶1的梯度液)純化得到146(4.55g，46％)，為白色固體。Rf0.33(Hex∶EtOAc 1∶1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.48(s，1H)，6.15-6.02(m，1H)，5.92(d，J＝1.5Hz，1H)，5.86(d，J＝1.5Hz，1H)，5.77(s，1H)，5.39(dd，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dd，J1＝1.5Hz，J2＝10.5Hz，1H)，4.24-4.15(m，3H)，4.04(d，J＝2.4Hz，1H)，3.97(t，J＝3.3Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.64(dt，，J1＝3.3Hz，，J2＝11.1Hz，1H)，3.43(dd，J1＝3.3Hz，J2＝10.5Hz，1H)，3.38-3.34(m，2H)，3.31(t，J＝2.7Hz，1H)，3.22(dd，J1＝2.4Hz，J2＝15.6Hz，1H)，3.10(dd，J1＝8.1Hz，，J2＝18.3Hz，1H)，2.49(d，J＝18.3Hz，1H)，2.34(s，3H)，2.24(s，3H)，2.11(s，3H)，1.88(dd，J1＝12Hz，J2＝15.9Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.6，146.7，144.4，143.0，138.9，133.9，130.2，129.1，121.1，120.9，117.7，117.4，116.8，113.3，112.3，101.1，74.3，63.7，60.6，60.1，58.1，56.9，56.7，55.4，41.7，26.2，25.7，15.7，9.3；ESI-MS m/z計算值C29H33N3O6519.59；實測值(M+1)+520.5。
實施例72 在氬氣下，于23℃向攪拌的在二氯甲烷(2.8L)中的146(47.35g，0.091mol)和商業(yè)可得到的Boc-Cys(Fm)衍生物(54.6g，0.137mol)的溶液中用1.5小時的時間滴加入二甲基氨基吡啶(5.6g，0.046mol)和1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(43.6g，0.227mol)。然后將混合物于23℃再攪拌1小時。通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液(1L)猝滅反應(yīng)并分離有機層。用二氯甲烷(2×500ml)回提水層。將合并的有機提取物用硫酸鈉干燥，并減壓下蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析純化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(從1∶4至3∶1)洗脫，得到147(74.3g，93％)，為白色固體。Rf＝0.5Hex∶EtOAc 1∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.73(d，J＝7.8Hz，2H)，7.63-7.55(m，2H)，7.39-7.35(m，2H)，7.29-7.25(m，2H)，6.41(s，1H)，6.07-5.97(m，1H)，5.92(d，J＝1.2Hz，1H)，5.80(d，J＝1.2Hz，1H)，5.67(s，1H)，5.34(dd，J1＝1.8Hz，J2＝17.4Hz，1H)，5.23(dd，J1＝1.8Hz，J2＝10.5Hz，1H)，5.04(d，J＝9.3Hz，1H)，4.32-4.29(m，1H)，4.13-3.91(m，9H)，3.72(s，3H)，3.31(d，J＝7.2Hz，1H)，3.26-3.17(m，2H)，2.96-2.87(m，3H)，2.68-2.54(m，2H)，2.27(s，3H)，2.24(s，3H)，2.05(s，3H)，1.83(dd，J1＝12.6Hz，J2＝15.9Hz，1H)，1.45(s，9H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.9，155.4，149.0，147.1，146.2，146.0，144.7，143.0，141.1，139.4，134.1，131.5，129.1，127.8，127.2，125.0，121.3，120.9，120.1，118.2，117.6，117.2，112.9，112.4，101.4，80.3，76.6，74.4，65.3，61.0，60.4，57.4，56.9，56.7，55.6，53.0，46.9，41.8，36.7，35.3，31.8，28.5，26.6，25.2，22.9，16.0，14.4，9.5.ESI-MS m/z計算值C51H56N4O9S900.3；實測值(M+1)+901.3。
實施例73 于0℃，向在CH3CN(3.12ml)中的147(0.562g，0.624mol)溶液中加入MEMCl(1.07ml，9.36mmol)、DIPEA(2.17ml，12.48mmol)和DMAP(0.0076g，0.06mmol)。將該混合物于23℃攪拌5.5小時。該反應(yīng)物用二氯甲烷(50ml)稀釋并用0.1N HCl(50ml)提取。將水相再用二氯甲烷(50ml)提取。用硫酸鈉干燥合并的有機層，過濾并真空濃縮得到殘留物，經(jīng)快速柱層析純化(CH2Cl2∶EtOAc 10∶1，5∶1)得到148(539mg，87％)，為白色固體。Rf＝0.50 CH2Cl2∶AcOEt 6∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.73-7.71(m，2H)，7.57(dd，J1＝7.2Hz，J2＝15.3Hz，2H)，7.40-7.34(m，2H)，7.29-7.26(m，2H)，6.62(s，1H)，6.08-5.99(m，1H)，5.91(d，J＝1.2Hz，1H)，5.79(d，J＝1.2Hz，1H)，5.35(dd，J1＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.23(d，J＝6.3Hz，1H)，5.21(bs，1H)，5.13(d，J＝6.3Hz，1H)，5.04(brd，J＝9Hz，1H)，4.33-4.29(m，2H)，4.16-3.90(m，8H)，3.85-3.78(m，1H)，3.69(s，3H)，3.60-3.55(m，2H)，3.38(s，3H)，3.31(brd，J＝8.1Hz，1H)，3.21-3.17(m，2H)，2.98-2.88(m，3H)，2.64-2.56(m，2H)，2.29(s，3H)，2.20(s，3H)，2.02(s，3H)，1.75(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.6Hz，1H)，1.47(s，9H).13C NMR(75 MHz，CDCl3)δ170.5，155.0，148.6，148.5，148.2，145.77，145.6，144.4，140.8，140.7，139.0，133.6，130.7，130.5，127.4，126.9，124.8，124.6，123.8，120.8，119.7，117.8，117.2，122.5，111.9，101.0，98.1，80.0，77.4，77.0，76.6，73.8，71.6，69.2，65.0，60.2，60.0，59.8，59.0，56.8，56.7，56.6，552，52.7，46.6，41.3，36.2，34.9，29.6，28.2，26.3，24.9，15.6，14.1，9.0.ESI-MS m/z計算值C55H64N4O11S988.4；實測值(M+1)+989.3。
實施例74
于23℃，在氬氣下向攪拌的在二氯甲烷(1L)中的148(38.32g，0.039mol)的溶液中加入二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(2.17g，0.0031mol)和乙酸(11.1ml，0.195mol)。然后滴加入氫化三丁基錫(36.5ml，0.136mol)。將混合物于23℃攪拌15分鐘。然后將反應(yīng)物經(jīng)用己烷壓積的硅膠柱過濾。經(jīng)用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(從0∶100，1∶4，1∶3，2∶5，2∶3，1∶1，2∶1，3∶1至100∶0)洗脫得到149(35.07 g，95％)，為白色固體。Rf＝0.25 Hex∶EtOAc 2∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.74(d，J＝7.2Hz，2H)，7.63-7.53(m，2H)，7.39-7.34(m，2H)，7.30-7.27(m，2H)，6.62 (s，1H)，5.87(m，1H)，5.75(s，1H)，5.69(bs，1H)，5.37(d，J＝6Hz，1H)，5.23(d，J＝5.7Hz，1H)，4.96(d，J＝8.1Hz，1H)，4.44(brd，J＝8.7Hz，1H)，4.18-3.70(m，11H)，3.69(s，3H)，3.38(s，3H)，3.34-3.18(m，3H)，2.99-2.88(m，3H)，2.63-2.58(m，2H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.05(s，3H)，1.78(dd，J1＝12.9 Hz，J2＝15.6.3Hz，1H)，1.41(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.8，155.2，149.0，148.0，146.2，146.0，144.8，141.1，136.4，131.3，131.2，127.8，127.2，125.1，125.0，123.2，120.0，118.1，112.6，111.6，107.2，101.0，98.9，98.8，80.3，71.8，69.8，64.9，60.6，60.2，59.2，57.1，56.9，55.5，53.0，47.0，46.9，41.8，37.0，35.3，28.5，26.2，25.2，21.9，21.3，16.1，14.4，9.0.ESI-MS m/z計算值C52H60N4O11S948.4；實測值(M+1)+949.3。
實施例75 于-10℃(浴溫-15℃)，向在無水二氯甲烷(265ml)中的149(15g，0.0158mol)的溶液中在30分鐘時間內(nèi)滴加入在無水二氯甲烷(265ml)中的苯亞硒酸酐(7.4g，0.0143mol)的溶液，棄掉溶液中存在的任何白色固體。于相同溫度下攪拌混合物10分鐘。該反應(yīng)物用二氯甲烷(200ml)稀釋并于-10℃加入飽和碳酸氫鈉水溶液(500ml)。分離有機層，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮至干。所得殘留物經(jīng)快速柱層析純化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(從1∶2至100∶0)洗脫，得到150(14.20g，89％)黃色固體。將層析純化得到固體溶于二氯甲烷(250ml)，加入木炭(4.95g)。然后于23℃攪拌所得懸浮液1小時。將混合物經(jīng)硅藻土墊過濾并用二氯甲烷(80ml)洗滌該硅藻土。減壓蒸發(fā)溶劑得到150(13.72g，86％)，為白色固體。Rf＝0.37 Hex∶EtOAc1∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ7.73(t，J＝6.7Hz，4H)，7.63(m，2H)，7.54(d，J＝7.6Hz，2H)，7.40-7.34(m，4H)，7.31-7.27(m，4H)，6.62(s，2H)，5.86(s，1H)，5.81(s，1H)，5.75(s，1H)，5.72(s，1H)，5.70(s，1H)，5.35(d，J＝5.9Hz，1H)，5.30(d，J＝8.4Hz，1H)，5.23(d，J＝5.9Hz，1H)，5.22(d，J＝5.9Hz，1H)，5.13(d，J＝5.9Hz，1H)，4.97(d，J＝8.8Hz，1H)，4.43(m，2H)，4.20-4.01(m，8H)，3.97-3.86(m，4H)，3.82(s，3H)，3.80-3.74(m，1H)，3.69(s，3H)，3.66-3.64(m，4H)，3.54(m，2H)，3.38(s，3H)，3.35(s，3H)，3.34-2.90(m，8H)，2.60-2.31(m，4H)，2.27(s，3H)，2.25(s，3H)，2.21(s，3H)，1.97(s，3H)，1.94-1.81(m，2H)，1.77(s，3H)，1.43(s，9H)，1.41(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ200.2，198.3，170.7，170.5，160.0，155.2，154.9，148.5，148.4，145.5，142.1，140.9，138.3，130.9，130.5，130.0，129.8，127.5，126.9，125.0，124.9，124.7，123.8，122.5，119.8，117.2，116.7，111.5，108.1，104.6，104.3，101.3，100.9，98.0，80.1，72.1，71.5，70.5，69.2，69.0，66.4，63.5，60.7，60.1，59.6，58.9，58.8，58.0，56.7，56.4，56.2，55.9，55.5，55.0，53.5，46.7，41.7，41.3，41.1，36.9，35.2，35.1，31.4，28.1，25.4，25.3，22.5，15.7，15.6，14.0，7.2；ESI-MS m/z計算值C52H60N4O12S964.4；實測值965.3(M+1)+，987.3(M+23)+。
實施例76
將反應(yīng)燒瓶火焰加熱兩次，真空/氬氣排空數(shù)次并維持在氬氣氛下以備反應(yīng)。于-78℃向在無水CH2Cl2(42ml)中的DMSO(385.0ul)的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(366.5ul，2.16mmol)。于-78℃攪拌反應(yīng)混合物20分鐘，然后于-78℃經(jīng)套管加入(滴加時間5分鐘)在無水CH2Cl2(10ml用于主要滴加，5ml用于洗滌)中的150(1g，1.03mmol)的溶液。在滴加過程中，將該溶液溫度通過外浴保持在-78℃，顏色由黃色變成棕色。于-40℃攪拌該反應(yīng)混合物35分鐘。在此時間內(nèi)該溶液從黃色變成暗綠色。然后，滴加iPr2NEt(1.51ml，9.55mmol)并將該反應(yīng)混合物保持在0℃45分鐘，在此期間該溶液的顏色變成棕色。然后滴加tBuOH(409.5μl，4.33mmol)和叔丁基四甲基胍(1.31ml，7.61mmol)并將該反應(yīng)混合物于23℃攪拌40分鐘。然后滴加乙酸酐(1.03ml，10.89mmol)并再保持該反應(yīng)混合物在23℃1小時。然后將該反應(yīng)混合物用CH2Cl2(25ml)稀釋并用飽和NH4Cl(50ml)、碳酸氫鈉(50ml)和氯化鈉(50ml)水溶液洗滌。將合并的有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(柱內(nèi)徑2.0cm，硅膠柱高度9cm，洗脫液乙酸乙酯/己烷的梯度液，從20∶80，30∶70至40∶60)純化得到151(832.6mg，99％)，為白色固體。Rf＝0.48 Hex∶EtOAc 3∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.78(s，1H)，6.09(d，J＝1.2Hz，1H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.32(d，J＝5.8Hz，1H)，5.19(d，J＝5.6Hz，1H)，5.01(d，J＝11.7Hz，1H)，4.62(d，J＝9.8Hz，1H)，4.50(bs，1H)，4.34(d，J＝5.1Hz，1H)，4.28(dd，J1＝2.4Hz，J2＝6.8Hz，1H)，4.24(s，1H)，4.17(m，2H)，3.90(m，2H)，3.76(s，3H)，3.58(t，J＝4.8Hz，2H)，3.42-3.37(m，2H)，3.37(s，3H)，2.91(m，2H)，2.36-2.08(m，2H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21(s，3H)，2.04(s，3H)，1.44(s，9H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.9，168.9，168.0，155.4，149.8，148.6，146.0，141.1，140.6，131.6，131.1，130.6，129.0，125.1，120.6，118.3，102.2，98.4，79.9，71.9，69.4，61.6，60.4，59.8，59.4，59.2，54.9，54.7，54.0，41.6，30.6，29.1，28.7，23.9，23.2，20.6，16.1，14.2，11.2，9.8.ESI-MS m/z計算值C40H50N4O12S810.91.實測值(M+1)+811.3。
實施例77 于23℃，向在CH2Cl2(120ml)中的151(2.9g，3.57mmol)的溶液中加入MeSO3H(1.4ml，21.46mmol)。于23℃攪拌該反應(yīng)物30分鐘后，于0℃加入飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)。分離有機層，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮至干。所得殘留物經(jīng)快速柱層析純化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(從0∶1至1∶0)洗脫，得到35(1.43g，64％)淡黃色固體。
35的實驗數(shù)據(jù)先前已在PCT/GB00/01852中介紹。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介紹的相同的方法制備36，ET-770和ET-743。
路徑3本路徑的第一步(21轉(zhuǎn)化成146)已在上述實施例71中介紹。
實施例78 于0℃向在丙酮(500ml)和水(500ml)中的商業(yè)可得到的HO.Cys(Fm)-HHCl(Bachem)(40g，0.119mol)的溶液中加入1MNa2CO3溶液(238ml)和BnCO2Cl(18.7ml，0.131mol)。于60℃攪拌反應(yīng)物30分鐘后，該混合物用1N HCl(pH01)猝滅，用乙醚(3×400ml)提取。分離有機層，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓下濃縮至于。將粗產(chǎn)物溶于EtOAc/CH2Cl21∶1的混合物中，用己烷沉淀并保持于4℃放置過夜。然后，濾去懸浮液，所得固體用己烷洗滌(200ml)，真空干燥濾液，得到152(50.16g，97％)，為白色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.66(bs，1H)，7.74(d，J＝7.5Hz，2H)，7.69-7.64(m，2H)，7.62-7.29(m，9H)，5.67(d，J＝7.5Hz，1H)，5.14(bs，2H)，4.70-4.64(m，1H)，4.09-4.05(m，1H)，3.12-3.09(m，2H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ175.2，155.9，145.5，141.0，135.8，128.5，128.2，128.1，127.5，127.0，124.7，119.8，84.8，67.3，46.8，37.0.ESI-MS m/z計算值C25H23NO4S433.52；實測值(M+1)+434.4。
實施例79 在氬氣下，于0℃向攪拌的在二氯甲烷(800ml)中的146(10g，19.2mmol)和152(12.5g，28.8mmol)的溶液中在1小時的時間內(nèi)滴加入二甲基氨基吡啶(705mg，5.77mmol)、1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(9.2g，48.1mmol)和二異丙基乙胺(7.4ml，42.3mmol)。然后于23℃再攪拌混合物1.5小時。通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液(600ml)猝滅反應(yīng)。分離有機層并再用飽和氯化銨水溶液(500ml)和飽和氯化鈉溶液(500ml)洗滌。將有機提取物用硫酸鈉干燥，過濾并減壓下蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物經(jīng)快速柱層析純化(RP18，CH3CN∶H2O 4∶1)得到153(13.89g，77％)淡黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.74-7.72(m，2H)，7.61-7.53(m，2H)，7.37-7.24(m，9H)，6.39(s，1H)，6.09-5.96(m，1H)，5.90(s，1H)，5.84(s，1H)，5.78(s，1H)，5.34(dd，J1＝1.5Hz，J2＝17.4Hz，1H)，5.32(bs，1H)，5.24(dd，J1＝1.5Hz，J2＝10.2Hz，1H)，5.17-5.07(m，2H)，4.40(dd，J1＝3.6Hz，J2＝10.8Hz，1H)，4.30(m，1H)，4.18-4.01(m，6H)，3.92 (brt，J＝6.3Hz，1H)，3.71(s，3H)，3.30-3.19(m，3H)，2.99-2.85(m，3H)，2.65(dd，J1＝4.5Hz，J2＝14.4Hz，1H)，2.55(d，J＝18.3Hz，1H)，2.26(s，3H)，2.21(s，3H)，2.06(s，3H)，1.86(dd，J1＝11.7Hz，J2＝15.9Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.2，155.6，148.6，146.8，145.7，145.6，144.3，142.6，140.7，139.0，133.7，131.1，128.8，128.4，128.1，128.0，127.4，126.9，124.7，124.6，121.0，120.5，119.7，117.8，117.3，116.8，112.5，112.0，101.0，74.1，67.0，64.7，60.7，59.9，57.0，56.6，56.3，55.2，53.1，46.5，41.4，36.4，34.8，26.2，24.8，15.6，9.2；ESI-MS m/z計算值C54H54N4O9S934.36；實測值(M+1)+935.4。
實施例80 于0℃，向在CH3CN(74.3ml)中的153(13.89g，14.85mmol)溶液中加入MEMCl(25.4ml，223mmol)、DIPEA(52ml，297mmol)和DMAP(0.181g，0.15mmol)。將該反應(yīng)物于23℃攪拌5小時。該反應(yīng)物用二氯甲烷(400ml)稀釋并用0.1N HCl(300ml)和3N HCl(pH＝3)提取。將所得水相再用二氯甲烷(2×50ml)提取。合并有機層，用硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮得到殘留物，經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，CH2Cl2∶EtOAc10∶1，5∶1)得到154(13.47g，88％)，為白色固體。Rf＝0.27 CH2Cl2∶AcOEt 6∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.73-7.70(m，2H)，7.58-7.50(m，2H)，7.38-7.22(m，9H)，6.59(s，1H)，6.08-5.98(m，1H)，5.89(s，1H)，5.77(s，1H)，5.35(d，J＝17.1Hz，1H)，5.31-5.28(m，1H)，5.23(d，J＝6.9Hz，1H)，5.13(d，J＝6.9Hz，1H)，5.12-5.05(m，2H)，4.37-4.29(m，2H)，4.15-3.77(m，9H)，3.68(s，3H)，3.58-3.55(m，2H)，3.37(s，3H)，3.30-3.27(m，1H)，3.21-3.16(m，2H)，2.96-2.84(m，4H)，2.64-2.58(m，1H)，2.55(d，J＝18Hz，1H)，2.27(s，3H)，2.16(s，3H)，2.02(s，3H)，1.75(dd，J1＝12.3Hz，J2＝16.2Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ171.9，170.2，155.5，148.7，148.6，148.3，145.8，145.7，144.5，142.1，140.9，139.1，136.1，133.8，130.8，130.5，128.5，128.3，128.1，127.6，127.0，124.9，124.7，123.9，122.2，120.9，119.8，117.8，117.3，112.6，112.0，101.1，98.2，74.0，71.7，69.3，67.1，65.1，60.1，59.8，59.0，56.9，56.8，56.7，55.3，53.3，46.7，41.4，36.5，35.0，31.6，29.7，26.4，25.0，22.6，15.7，14.1，9.2.ESI-MS m/z計算值C58H62N4O11S1023.2；實測值(M+23)+1046.3。
實施例81 于23℃，在氬氣下向在二氯甲烷(530ml)中的154(20.84g，0.02mol)的攪拌溶液中加入二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(1.14g，1.63mmol)和乙酸(11.64ml，0.2mol)。然后滴加入氫化三丁基錫(27.44ml，0.1mol)。于23℃攪拌混合物15分鐘。然后將反應(yīng)物經(jīng)用己烷壓積的硅膠柱過濾。經(jīng)用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(從1∶4，1∶1，3∶2至7∶3)順序洗脫得到155(18.78g，94％)淡黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.71(d，J＝7.2Hz，2H)，7.59(d，J＝7.5Hz，1H)，7.53(d，J＝7.5Hz，1H)，7.41-7，23(m，9H)，6.60(s，1H)，5.87(bs，2H)，5.74(s，1H)，5.40(d，J＝6.3Hz，1H)，5.33(d，J＝5.8Hz，1H)，5.18(d，J＝9Hz，1H)，5.09(d，J＝12Hz，1H)，4.97(d，J＝12Hz，1H)，4.56(dd，J1＝3Hz，J2＝11.1Hz，1H)4.19(d，J＝2.1Hz，1H)，4.16-3.87(m，9H)，3.66(s，3H)，3.38(s，3H)，3.32-3.20(m，3H)，2.96-2.87(m，3H)，2.62-2.54(m，2H)，2.28(s，3H)，2.19(s，3H)，1.97(s，3H)，1.82(dd，J1＝13.2Hz，J2＝15.6Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.0，155.4，149.0，147.5，145.7，145.6，144.4，140.8，135.9，130.9，128.4，128.1，128.0，127.4，126.9，124.7，124.6，122.7，119.7，117.7，112.4，111.4，100.6，98.7，71.5，69.4，67.0，64.9，63.9，59.7，59.6，58.8，57.0，56.5，56.4，55.1，54.9，53.1，52.5，46.5，41.4，36.8，34.9，25.8，24.7，15.7，8.7。
實施例82 于-10℃(浴溫-15℃)，向在無水二氯甲烷(530ml)中的155(18.5g，18.82mmol)的溶液中滴加入在無水二氯甲烷(290ml)中的苯亞硒酸酐(9.68g，18.82mmol)的溶液，棄掉溶液中的任何白色固體。所得混合物于相同溫度下攪拌10分鐘。然后用飽和碳酸氫鈉水溶液(600ml)猝滅該反應(yīng)。分離有機層，將所得水相用二氯甲烷(2×300ml)提取。用硫酸鈉干燥合并的有機提取物，過濾并減壓濃縮至干。殘留物經(jīng)快速柱層析純化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(從1∶1，3∶2，7∶3至4∶1)洗脫，得到156(17.62g，88％)淡黃色固體。1H NMR(300VHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ7.73(d，J＝7.5Hz，2H)，7.63(d，J＝7.5Hz，2H)，7.40-7.29(m，9H)，6.59(s，1H)，6.52(s，1H)，5.68(s，1H)，5.66(s，1H)，5.58(s，1H)，5.56(s，1H)，5.23(d，J＝6Hz，1H)，5.15-5.05(m，4H)，4.76-4.68(m，1H)，4.64-4.55(m，1H)，4.40-4.37(m，1H)，4.15-3.68(m，8H)，3.60(s，3H)，3.57(s，3H)，3.39(s，3H)，3.36(s，3H)，3.25-2.78(m，7H)，2.38-2.24(m，2H)，2.20(s，3H)，2.18(s，3H)，2.15(s，3H)，2.09(m，1H)，2.04(s，3H)，1.77(s，3H)，1.58(s，3H)；ESI-MS m/z計算值C55H58N4O12S999.13；實測值(M+1)+1000.0。
實施例83 在氬氣氛下，將反應(yīng)燒瓶火焰加熱兩次，真空/氬氣排空數(shù)次以備反應(yīng)。于-78℃向在無水CH2Cl2(20ml)中的DMSO(178μl)的溶液中滴加三氟乙磺酸酐(169μl，1mmol)。于-78℃攪拌反應(yīng)混合物20分鐘，然后于-78℃經(jīng)套管加入(滴加時間5分鐘)在無水CH2Cl2(4ml用于主要滴加，1.5ml用于洗滌)中的156(0.5g，0.5mmol)的溶液。在滴加過程中通過外浴保持溫度在-78℃，顏色由黃色變成棕色。于-40℃攪拌該反應(yīng)混合物35分鐘。在此時間內(nèi)該溶液從黃色變成暗綠色。然后，滴加iPr2NEt(0.7ml，4.42mmol)并將該反應(yīng)混合物保持在0℃45分鐘，在此期間該溶液的顏色變成棕色。然后滴加tBuOH(189μl，2mmol)和叔丁基四甲基胍(0.6ml，3.49mmol)并將該反應(yīng)混合物于23℃攪拌40分鐘。然后滴加乙酸酐(0.47ml，4.97mmol)并再保持該反應(yīng)混合物在23℃1小時。然后將該反應(yīng)混合物用CH2Cl2(15ml)稀釋并用飽和NH4Cl(25ml)、碳酸氫鈉(25ml)和氯化鈉(25ml)水溶液洗滌。將合并的有機層用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(柱內(nèi)徑2.0cm，硅膠柱高度9cm，洗脫乙酸乙酯/己烷的梯度液(從1∶4，1∶3，1∶2至1∶1))純化得到化合物157(128mg，30％)，為淡黃色固體。Rf＝0.37 Hex∶EtOAc 3∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37(bs，5H)，6.66(s，1H)，6.09(s，1H)，5.99(s，1H)，5.30(d，J＝5.4Hz，1H1，5.17(d，J＝6Hz，1H)，5.06(d，J＝7.8Hz，1H)，5.00(s，1H)，4.83(d，J＝9.3Hz，1H)，4.50(s，1H)，4.34-4.17(m，7H)，3.90-3.87(m，2H)，3.66(s，3H)，3.65-3.56(m，2H)，3.37(s，3H)，2.89-2.90(m，2H)，2.28(s，3H)，2.18(s，3H)，2.15-2.04(m，2H)，2.03(s，3H)，1.99(s，3H).ESI-MS m/z計算值C43H48N4O12S844.93；實測值(M+1)+845.8。
實施例84 在0℃向在CH2Cl2(2ml)和CH3CN(2ml)中157(100mg，0.118mmol)的溶液中加入Nal(71mg，0.472mmol)和TMSCl(60μl，0.472mmol)。所得反應(yīng)物于23℃攪拌50分鐘，用水(30ml)猝滅反應(yīng)混合物并用CH2Cl2(2×20ml)提取。將合并的有機層順序用飽和NaCl水溶液(20ml)和飽和連二亞硫酸鈉(sodium ditionite)溶液(20ml)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(洗脫乙酸乙酯/己烷的1∶4，1∶2至1∶1梯度液)得到化合物158(62mg，70％)，為白色固體。Rf＝0.21 Hex∶EtOAc 1∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36(bs，5H)，6.44(s，1H)，6.07(d，J＝1.2Hz，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.81(bs，1H)，5.10-5.00(m，3H)，4.82(d，J＝9.3Hz，1H)，4.49(bs，1H)，4.35-4.30(m，1H)，4.21-4.17(m，2H)，4.16-4.14(m，2H)，3.65(s，3H)，3.41-3.36(m，2H)，2.88-2.85(m，2H)，2.28(s，3H)，2.24-2.03(m，2H)，2.17(s，3H)，2.02(s，3H)，2.00(s，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.5，168.8，155.9，148.3，146.0，143.1，141.2，140.6，136.6，130.6，130.0，128.8，128.7，128.5，121.0，120.3，118.3，118.2，113.7，113.6，102.2，67.2，61.5，60.8，60.3，59.6，59.5，54.8，54.7，54.1，41.9，41.6，32.9，23.9，20.8，15.5，9.8；ESI-MS m/z計算值C39H40N4O10S756.82；實測值(M+1)+757.3。
實施例85 于23℃向在MeOH(6.8ml)中的158(100mg，0.132mmol)的溶液中加入HCO2H(360μl)和10％Pd/C(140mg，0.132mmol)，攪拌該混合物15分鐘。向該反應(yīng)物中加入甲苯(7ml)并減壓蒸除溶劑。與甲苯的共沸蒸餾重復(fù)三次。然后殘留物用二氯甲烷(15ml)稀釋并加入飽和碳酸氫鈉水溶液(15ml)。分離水相并用二氯甲烷(2×10ml)提取。用硫酸鈉干燥合并的有機提取物，過濾并減壓蒸發(fā)至干。然后將所得殘留物經(jīng)在氨基-硅膠柱上快速柱層析純化，用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式(從1∶2，1∶1至2∶1)洗脫，得到35(57mg，70％)，為黃色固體。35的實驗數(shù)據(jù)先前已在PCT/GB00/01852中介紹。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介紹的相同方法制備36，ET-770和ET-743。
路徑4本路徑的第一步(21轉(zhuǎn)化成146)已在上述實施例71中介紹實施例86 于0℃，向在DMF(0.05ml)中的146(18mg，0.032mmol)、催化量的(cat.)DMAP和咪唑(5mg，0.08mmol)的溶液中加入叔丁基二苯基甲硅烷基氯(12.5μl，0.048mmol)并將該反應(yīng)物于23℃攪拌4小時。然后于0℃加入水(30ml)并將該混合物用Hex∶EtOAc 1∶10(2×40ml)提取。將合并的有機層用硫酸鈉干燥，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，Hex∶EtOAc 3∶1)得到159(27mg，88％)，為白色固體。Rf＝0.29 Hex∶EtOAc 3∶1.1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72-7.41(m，2H)，7.40-7.20(m，8H)，6.46(s，1H)，6.16-6.00(m，1H)，5.77(d，J＝1.5Hz，1H)，5.71(s，1H)，5.63(d，J＝1.5Hz，1H)，5.24(dd，J2＝1.2Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.23(dd，J1＝1.2Hz，J2＝10.2Hz，1H)，4.18(d，J＝2.4Hz，1H)，4.13-4.00(m，4H)，3.77(s，3H)，3.63(dd，J1＝2.4Hz，J2＝7.5Hz，1H)，3.39-3.19(m，4H)，2.99(dd，J1＝8.1Hz，J2＝18.0Hz，1H)，2.68(d，J＝17.7Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.28(s，3H)，2.08(s，3H)，1.99(dd，J1＝12.6Hz，J2＝16.3Hz，1H)，0.89(s，9H)。13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.3，146.6，144.0，142.5，139.0，135.7，135.4，133.9，133.6，132.2，131.2，129.5，129.4，128.3，127.5，127.4，121.8，120.9，118.7，117.3，117.2，112.9，111.7，100.8，74.2，68.0，61.6，60.6，60.3，59.0，57.4，56.7，55.4，41.7，29.6，26.6，26.5，25.5，18.9，15.8，9.3。ESI-MS m/z計算值C45H51N3O6Si757.9；實測值(M+1)+758.4。
實施例87 于0℃，向在CH3CN(16ml)中159(2.4g，3.17mmol)溶液中加入MOMBr(2.6ml，31.75mmol)、DIPEA(8.3ml，47.6mmol)和DMAP(16mg，0.127mmol)。將該混合物于23℃攪拌6小時。該反應(yīng)物用CH2Cl2(50ml)稀釋并用0.1N HCl(50ml)提取。將水相再用CH2Cl2(50ml)提取。用Na2SO4干燥合并的有機層，過濾并真空濃縮得到殘留物，經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，CH2Cl2∶EtOAc 15∶1，5∶1)得到26(1.78g，70％)，為白色固體。26的實驗數(shù)據(jù)先前已在PCT/GB00/01852中介紹。
對于Int.11，160，161，162和163的實驗方法先前已在美國專利號5721362中介紹。
實施例88 于23℃，在氬氣氛下向在無水CH2Cl2(250ml)和乙腈(300ml)中的163(15.8g，O.02mol)的溶液中加入NaI(31.5g，0.21mol)和ClTMS(經(jīng)CaH2新蒸餾的26.7ml，0.21mol)。于23℃攪拌反應(yīng)物40分鐘。然后使反應(yīng)物在CH2Cl2(200ml)和水(300ml)之間分配。將所得有機層用飽和NaCl水溶液(2×300ml)洗滌。用Na2SO4干燥有機相，過濾并減壓除去溶劑。將所得粗品經(jīng)快速柱層析純化，使用乙酸乙酯/己烷2∶3作為洗脫劑，得到淡黃色固體化合物164(10.74g，76％)。Rf＝0.25 Hex∶EtOAc 3∶2。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.57(s，1H)，6.08(d，J＝1.5Hz，1H)，5.98(d，J＝1.5Hz，1H)，5.96-5.85(m，1H)，5.76(bs，1H)，5.30(dd，J1＝1.5，J2＝17.3Hz，1H)，5.23(dd，J1＝1.5，J2＝10.2Hz，1H)，5.00(d，J＝12.1Hz，1H)，4.81(d，J＝9.8Hz，1H)，4.58-4.45(m，3H)，4.34-4.28(m，1H)，4.23(m，2H)，4.17-4.00(m，2H)，3.76(s，3H)，3.40-3.38(m，2H)，2.91-2.85(m，2H)，2.30(s，3H)，2.29(s，3H)，2.24-2.23(m，2H)，2.19(s，3H)，2.02(s，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ170.1，168.4，155.2，148.0，145.5，142.8，140.7，140.1，132.7，130.2，129.6，120.7，119.9，117.8，113.3，101.9，65.6，61.0，60.4，59.9，59.2，59.0，54.3，53.6，41.5，41.2，32.6，29.5，23.5，20.4，15.6，9.4。ESI-MS m/z計算值C35H38N4O10S706.76；實測值(M+1)+707.2。
實施例89 于23℃，在氬氣下向在二氯甲烷(142ml)中的164(2g，2.85mmol)的攪拌溶液中加入二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(0.2g，0.28mmol)和乙酸(0.65ml，11.4mmol)。然后在25分鐘時間內(nèi)滴加入氫化三丁基錫(4.51ml，17.02mmol)。加入HsnBu3后，將混合物于23℃再攪拌20分鐘。將反應(yīng)物經(jīng)用己烷壓積的硅膠柱過濾。經(jīng)用乙酸乙酯和己烷的混合物以梯度方式從1∶2至15∶1順序洗脫得到35(1.38g，78％)，為白色固體。35的實驗數(shù)據(jù)先前已在PCT/GB00/01852中介紹。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介紹的相同方法制備36，ET-770和ET-743。
路徑5本路徑的第一步(21轉(zhuǎn)化成146)已在上述實施例71中介紹實施例90 于0℃，向在DMF(20.1ml)中的146(8.72g，16.78mmol)的溶液中加入咪唑(3.43g，50.34mmol)、叔丁基二甲基氯代硅烷(7.58ml，50.34mmol)和DMAP(0.2g，1.7mmol)。于23℃攪拌3.5小時后，將反應(yīng)混合物用水(100ml)猝滅并用EtOAc/Hex 1∶3(2×75ml)提取。合并的有機層用0.1M HCl(50ml)洗滌，水相再用EtOAc/Hex 1∶3(40ml)提取。將合并的有機層用硫酸鈉干燥，過濾并真空濃縮。所得到殘留物經(jīng)快速柱層析純化(Hex∶EtOAc 10∶1，3∶1)得到165(9.85g，93％)，為白色固體。Rf＝0.39 Hex∶AcOEt 2∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)□6.43(s，1H)，6.15-6.03(m，1H)，5.92(d，J＝1.2Hz，1H)，5.84(d，J＝1.2Hz，1H)，5.67(s，1H)，5.41(dd，J1＝1.5，J2＝17.1Hz，1H)，5.26(dd，J1＝1.5，J2＝10.5Hz，1H)，4.44(d，J＝2.7Hz，1H)，4.20-4.08(m，3H)，3.97(dd，J1＝2.7，J2＝8.1Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.61(dd，J1＝2.71，J2＝9.9Hz，1H)，3.18(brd，J＝8.7Hz，1H)，3.22-3.16(m，2H)，2.99(dd，J1＝8.1，J2＝17.4Hz，1H)，2.65(d，J＝17.4Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.25(s，3H)，2.11(s，3H)，1.89(dd，J1＝12，J2＝15.6Hz，1H)，0.8(s，9H)，-0.05(s，3H)，-0.09(s.3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)□148.2，146.5，143.8，142.4，138.9，133.8，131.0，128.0，121.5，120.4，118.4，117.1，112.8，111.6，100.7，74.0，68.2，61.5，60.2，58.6，57.1，56.5，55.2，41.3，26.2，25.4，25.2，20.6，17.8，15.3，13.8，9.0，-3.9，-6.0；ESI-MS m/z計算值C35H47N30O6Si633.85；實測值(M+1)+634.2。
實施例91 于-6℃，向在THF(87.64ml)和水(0.24ml)中的165(7.62g，12.02mmol)的溶液中加入MEMCl(2.33ml，20.43mmol)。用45分鐘分次加入60％NaH(0.72g，18.03mmol)后，于該溫度下攪拌反應(yīng)物1.5小時。將該反應(yīng)物用水(150ml)猝滅并用CH2Cl2(2×100ml)提取。合并的有機層用Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮得到166(8.69g，100％)，為白色固體，該固體可不經(jīng)進一步純化用于其后的步驟。Rf＝0.24Hex∶AcOEt 2∶1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.64(s，1H)，6.16-6.05(m，1H)，5.92(d，J＝1.2Hz，1H)，5.85(d，J＝1.2Hz，1H)，5.4 1(dd，J1＝1.51，J2＝17.1Hz，1H)，5.29-5.24(m，2H)，5.14(d，J＝6Hz，1H)，4.42(d，J＝2.7Hz，1H)，4.21-4.06(m，3H)，4.01-3.95(m，2H)，3.88-3.82(m，1H)，3.72(s，3H)，3.64-3.57(m，3H)，3.39(s，3H)， 3.29(brd J＝7.5Hz，1H)，3.25-3.15(m，2H)，3.00(dd，J1＝8.1，J2＝17.4Hz，1H)，2.65(d，J＝18Hz，1H)，2.30(s，3H)，2.21(s，3H)，2.11(s，3H)，1.82(dd J1＝12，J2＝15.6Hz，1H)，0.79(s，9H)，-0.06(s，3H)，-0.11(s，3H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ148.4，148.1，144.1，139.2，133.9，130.9，130.8，130.2，128.8，125.1，124.2，121.5，118.8，117.45，113.0，111.9，101.0，98.2，74.1，71.7，69.3，68.3，61.7，59.6，59.0，58.9，57.3，57.1，55.5，41.6，29.7，26.4，25.8，25.5，25.4，15.7，9.2，-5.6，-5.6；ESI-MS m/z計算值C39H55N3O8Si721.3；實測值(M+1)+722.3。
實施例92 于23℃，在氬氣下向在無水二氯甲烷(275ml)中的166(10.76g，14.90mmol)的溶液中加入Pd(PPh3P)2Cl2(837mg，1.19mmol)、乙酸(4.26ml，74.5mmol)和氫化三丁基錫(11.85ml，44.7mmol)。將所得反應(yīng)混合物于23℃攪拌15分鐘(TLC AcOEt/己烷1∶1顯示沒有起始原料)。加入己烷(100ml)并將該混合物傾入快速柱中層析純化(SiO2，EtOAc/己烷梯度液方式(0∶100，1∶4，2∶3至1∶1))得到167(9.95 g，98％)，為黃色固體。Rf＝0.42 Hex∶EtOAc 3∶7。1H-RMN(300MHz，CDCl3)δ6.63(s，1H)，5.89(d，J＝1.4Hz，1H)，5.79(d，J＝1.4Hz，1H)，5.76(m，1H)，5.38(d，J＝5.6Hz，1H)，5.23(d，J＝5.9Hz，1H)，4.53(d，J＝2.7Hz，1H)，4.17(dd，J1＝1.95Hz，J2＝6.05Hz，1H)，4.11(dd，J1＝7.0Hz，J2＝12.5Hz，1H)，4.01-3.92(m，2H)，3.70(s，3H)，3.67(m，3H)，3.40(s，3H)，3.29(m，1H)，3.24-3.13(m，3H)，2.99(dd，J1＝8.0Hz J2＝17.5Hz，1H)，2.67(d，J＝17.5Hz，1H)，2.28(s，3H)，2.09(s，3H)，2.05(s，3H)，1.80(dd，J1＝11.2Hz，J2＝14.9Hz，1H)，0.82(s，9H)，-0.03(s，3H)，-0.07(s，3H).13C-RMN(75MHz，CDCl3)δ148.4，147.3，145.5，144.1，136.2，134.9，134.8，130.9，130.2，124.8，123.1，118.6，112.8，112.1，106.2，100.4，98.4，71.5，69.2，68.9，61.7，59.6，58.7，58.6，56.9，56.6，55.3，41.5，29.5，25.7，25.3，17.9，15.5，8.7，-5.7，-5.8.ESI-MS m/z計算值C36H51N3O8Si681.89；實測值(M+1)+682.3。
HPLC條件柱Symmetry C18；流動相AcN-磷酸鹽緩沖液25mM，pH＝5，AcN(65％)的等度洗脫5分鐘及在AcN中的65-92％梯度洗脫31分鐘，Φ0.6ml/分鐘，ta40℃。保留時間27.89分鐘。HPLC以面積計純度89.62％。
實施例93 于-15℃，氬氣下向在無水CH2Cl2(300ml)中的167(9.95g，14.6mmol)的溶液中滴加入在無水CH2Cl2(120ml)中的苯亞硒酸酐(7.51g，14.6mmol，試劑純度70％)的溶液(棄掉溶液中剩余的白色固體)。然后于-15℃攪拌溶液15分鐘(TLC EtOAc/己烷2∶3，顯示沒有起始原料)。于此溫度下向該反應(yīng)混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(500ml)。分離有機層，水相用CH2Cl2(500ml)提取。將合并的有機提取物用硫酸鈉干燥，過濾并減壓除去溶劑。反應(yīng)物經(jīng)快速硅膠柱層析純化(SiO2，EtOAc∶己烷2∶3至3∶1梯度液)得到168(9.86g，97％)，為黃色固體。Rf＝0.33 Hex∶EtOAc 3∶7。1H-RMN(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體比率≈3∶2)δ6.59(s，1H)，6.57(s，1H)，5.77(s，1H)，5.76(s，1H)，5.68(s，1H)，5.63(s，1H)，5.19(d，J＝6.0Hz，1H)，5.09(d，J＝6.0Hz，1H)，5.07(d，J＝6.1Hz，1H)，5.00(d，J＝6.1Hz，1H)，4.40(d，J＝2.7Hz，1H)，4.27(d，J＝2.44Hz，1H)，4.22(d，J＝10.5Hz，1H)，3.95(d，J＝1.7Hz，1H)，3.86-3.75(m，2H)，3.81(s，3H)，3.72-3.68(m，2H)，3.65(m，2H)，3.54(s，3H)，3.50(m，3H)，3.31(s，3H)，3.29(s，3H)；3.24(m，1H)，3.09(dt，J＝3.2Hz，J＝7.6Hz，1H)，3.02(d，J＝11.2Hz，1H)，2.92(m，2H)，2.48(d，J＝9.5Hz，1H)，2.43 (d，J＝9.3Hz，1H)，2.21(s，3H)，2.14(s，3H)，2.13(s，3H)，2.03(m，2H)，1.73(s，3H)，1.71(s，3H)，0.86(s，9H)，0.77(s，9H)，0.04(s，3H)，0.02(s，3H).13C-RMN(75MHz，CDCl3)200.5，197.2，159.8，157.7，148.4，148.2，147.7，140.0，137.6，130.5，130.2，129.9，129.4，124.9，124.7，124.0，122.7，117.1，116.9，113.4，110.8，103.9，103.8，101.0，100.4，97.8，72.8，71.3，69.7，68.9，68.8，65.4，64.1，60.2，59.9，59.3，59.1，59.0，58.6，58.5，56.8，56.5，56.2，55.5，54.9，54.8，42.5，41.1，40.9，35.8，25.6，25.5，25.4，25.3，20.6，17.9，17.8，15.5，15.3，13.8，7.0，6.7，-5.7，-6.0，-6.1。ESI-MS m/z計算值C36H51N3O9Si697.89；實測值(M+1)+698.8。
HPLC條件柱Symmetry C18；流動相can，磷酸鹽緩沖液25mM，pH＝5，在AcN中的30-100％梯度50分鐘，Φ1.2ml/分鐘，ta40℃。保留時間30.70和30.95分鐘(兩個異構(gòu)體)。HPLC以面積計純度60.77％和31.99％。
實施例94 于23℃向在無水THF(727ml(0.03M))中的168(16.38g，23.47mmol)的溶液中滴加入TBAF在1M THF(59ml，59mmol)中的溶液。將該反應(yīng)混合物于23℃攪拌45分鐘。然后再將該混合物在飽和NaCl水溶液(850ml)和CH2Cl2(950ml)之間分配。分離兩相并將有機層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾并減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，EtOAc己烷以梯度方式(從40∶60，50∶50，70∶30，90∶10至100∶0)洗脫)得到169(12.17g，89％)，為淺黃色固體。Rf＝0.1 Hex∶EtOAc 3∶7。1H-RMN(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體比率3∶2)δ6.63(s，1H)，6.57(s，1H)，5.79(s，1H)，5.77(s，1H)，5.75(s，1H)，5.62(s，1H)，5.23(s，1H)，5.18(d，J＝6.1Hz，1H)，5.08(d，J＝6.1Hz，1H)，5.01(d，J＝6.1Hz，1H)，4.22(d，J＝2.7Hz，1H)，4.09(d，J＝2.4Hz，1H)，4.00(m，4H)，3.82(s，3H)，3.87-3.64(m，6H)，3.55(s，3H)，3.51-3.44(m，2H)，3.30(s，3H)，3.29(s，3H)，3.26(m，1H)，3.18(dt，J1＝2.9Hz，J2＝7.3Hz，1H)，2.94(m，4H)2.50(m，4H)，2.22(s，3H)，2.16(s，3H)，2.15(s，3H)，2.11(s，3H)，2.02(d，J＝7.3Hz，2H)，1.72(s，3H)，1.69(s，3H).13C-RMN(75MHz，CDCl3)200.2，200.1，159.6，158.5，148.5，148.4，148.1，147.9，140.5，137.4，130.9，130.4，130.1，130.0，125.1，124.9，123.8，122.7，116.9，116.6，113.3，110.7，104.5，103.9，101.4，100.7，98.1，97.9，71.9，71.5，71.4，70.1，69.0，69.0，62.0，60.1，59.5，58.7，58.5，58.1，57.4，56.9，56.8，56.4，55.9，55.1，55.0，41.3，41.0，36.1，31.3，25.3，25.2，22.4，15.6，15.5，13.8，7.0，6.8.ESI-MS m/z計算值C30H37N3O9583.63；實測值(M+1)+584.2。
實施例95 于23℃，向在無水CH2Cl2(688ml)中的169(11.49g，19.69mmol)和Alloc-Cys-(Fm)(11.32g，29.53mmol)(其制備見Kruse，C.H；Holden，K.G.，J.Org.Chem，1985，50，pp.2792-2794)的溶液中加入DMAP(2.4g，19.69mmol)和EDC.HCl(9.44g，49.22mmol)。然后于0℃加入DIPEA(5.14ml，29.53mmol)并將該反應(yīng)物于23℃攪拌3小時。該混合物順序用飽和的NaHCO3(500ml)、NaCl(400ml)和NH4Cl(2×300ml)水溶液洗滌。用Na2SO4干燥有機層，過濾并減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析純化(SiO2，EtOAc∶Hex的從1∶1，6∶4至7∶3的梯度液)得到170(14.76g，79％)，為淺黃色固體。Rf＝0.31和0.40 Hex∶EtOc 3∶7(異構(gòu)體的混合物)。1H-RMN(300MHz，CDCl3)7.74(d，J＝7.6Hz，4H)，7.63(dd，J＝7.0Hz，J＝15.3Hz，4H)，7.38(t，J＝7.3Hz，4H)，7.29(m，4H)，6.61(s，1H)，6.54(s，1H)，5.89(m，2H)；5.73(s，1H)，5.70(s，1H)，5.69(s，1H)，5.62(s，1H)，5.55(m，1H)，5.32(d，J＝15.1Hz，1H)，5.23(d，J＝6.1Hz，1H)，5.22(d，J＝10.6Hz，1H)，5.14(d，J＝5.9Hz，1H)，5.13(d，J＝6.0Hz，1H)，5.07(d，J＝6.3Hz，1H)，4.68(m，1H)，4.56(m，4H)，4.51(m，2H)，4.38(dd，J1＝4.5Hz，J2＝12.6Hz，1H)，4.22(dd，J1＝6.2Hz，J2＝11.1Hz，1H)，4.14-3.88(m，12H)，3.83(s，3H)，3.79-3.69(m，4H)，3.61(s，3H)，3.56(m，4H)，3.39(s，3H)，3.36(s，3H)，3.23(m，2H)，3.16(d，J＝6.0Hz，2H)，3.07(d，J＝6.1Hz，2H)，3.00-2.81(m，6H)，2.46-2.34(m，4H)，2.25(s，3H)，2.20(s，3H)，2.16(s，3H)，2.07(m，1H)，1.83(dd，J1＝9.5Hz，J2＝15.1Hz，1H)，1.78(s，3H)，1.77(s，3H)。13C-RMN(75MHz，CDCl3)δ200.3，198.4，170.3，160.0，158.1，148.7，148.7，148.5，148.2，145.6，145.6，145.5，142.2，141.1，141.0，141.0，138.5，132.4，132.3，131.1，130.6，130.1，129.8，128.8，127.6，127.1，127.1，125.1，125.0，124.8，124.7，124.7，124.0，122.7，119.9，118.1，118.0，117.2，116.8，111.6，108.3，104.8，104.5，101.5，101.0，98.2，98.2，72.3，71.7，71.7，70.6，69.3，69.2，66.4，66.0，66.0，65.5，63.8，60.8，60.2，59.8，59.0，58.9，58.1，56.8.56.6，56.5，56.3，56.1，55.7，55.3，55.2，53.9，46.9，41.9，41.4，41.2，37.2，36.9，35.4，31.5，29.6，25.6，25.4，22.6，1 5.8，15.7，14.1，7.3，7.0。ESI-MS m/z計算值C51H56N4O12S948.36；實測值(M+1)+949.3。
實施例96 將反應(yīng)燒瓶火焰加熱兩次，真空/氬氣排空數(shù)次并置于氬氣下以備反應(yīng)。于-78℃向在無水CH2Cl2(554ml)中的DMSO(5.4ml)的溶液中滴加三氟乙磺酸酐(5.11ml，30.4mmol)。所得反應(yīng)混合物于-78℃攪拌20分鐘，然后于-78℃經(jīng)套管加入在無水CH2Cl2(188ml)中的170(14.43g，15.2mmol)的溶液。在滴加過程中通過外浴保持溫度在-78℃，反應(yīng)物的顏色為黃色。于-40℃攪拌該反應(yīng)混合物35分鐘。在此時間該溶液從黃色變成暗綠色。然后，滴加iPr2NEt(21.2ml，121.6mmol)并將該反應(yīng)混合物保持在0℃45分鐘。在此期間該溶液的顏色變成淡棕色。然后滴加tBuOH(5.8ml，60.8mmol)和叔丁基四甲基胍(18.3ml，106.4mmol)并將該反應(yīng)混合物于23℃攪拌40分鐘。然后滴加乙酸酐(14.34ml，152mmol)并再保持該反應(yīng)混合物在23℃1小時。然后將該反應(yīng)混合物用CH2Cl2(38ml)稀釋并用飽和的NH4Cl(500ml)、NaHCO3(500ml)和NaCl(500ml)水溶液洗滌。將合并的有機層用Na2SO4干燥，過濾并濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶Hex的梯度液，從3∶7至4∶6)純化得到171(6.24g，52％)，為淺黃色固體。Rf＝0.38 Hex∶EtOAc1∶1。1H-RMN(CDCl3)6.78(s，1H)，6.07(d，J＝1.2Hz，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.92(m，1H)，5.32(d，J＝5.9Hz，1H)，5.31(dd，J1＝1.5Hz，J2＝17.1Hz，1H)，5.23(dd，J1＝1.5Hz，J2＝10.4Hz，1H)，5.19(d，J＝5.6Hz，1H)，5.01(d，J＝11.5Hz，1H)，4.81(d，J＝9.8Hz，1H)，4.53-4.51(m，3H)，4.35-4.27(m，2H)，4.24(s，1H)，4.18-4.13(m，2H)，3.94-3.84(m，2H)，3.73(s，3H)，3.58(t，J＝4.7Hz，2H)，3.43-3.37(m，2H)，3.36(s，3H)，2.91(m，2H)，2.27(s，3H)，2.26(s，3H)，2.20(s，3H)，2.36-2.06(m，2H)，2.02(s，3H)。13C-RMN(CDCl3)170.23，168.49，155.26，149.62，148.26，145.63，140.85，140.24，132.74，131.60，130.11，124.89，124.70，120.14，117.89，117.84，113.21，101.89，98.03，92.67，71.60，69.04，65.70，61.20，60.35，59.36，59.01，58.89，54.7 1，54.42，53.79，41.53，41.19，32.68，29.53，23.57，20.26，15.62，9.45。ESI-MS m/z計算值C39H46N4O12S794.87；實測值796(M+1)+817(M+23)+。HPLC條件柱Simmetry C18，流動相AcN/磷酸緩沖液(pH5)在15分鐘內(nèi)梯度從45-65％，在36分鐘內(nèi)梯度在65-90％?，?.8亳升/分鐘，ta＝40℃。保留時間19.734分鐘。HPLC純度的面積83.17％。
實施例97 在0℃向在無水CH2Cl2(74ml)和乙腈(74ml)中的171(2.26g，2.85mmol)的溶液中加入NaI(3.42g，22.8mmol)和TMSCl(經(jīng)CaH2新蒸餾)(2.6ml，22.8mmol)并攪拌所得反應(yīng)物35分鐘。于此溫度向該反應(yīng)混合物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液150ml)。分離有機層并用CH2Cl2(2×100ml)提取水相。將合并的有機提取物用硫酸鈉干燥，過濾并減壓除去溶劑。得到淡黃色固體164(2.4g，100％)。該固體不經(jīng)進一步純化可用于后續(xù)的反應(yīng)。164的實驗數(shù)據(jù)先前已在實施例88中介紹。
164向35的轉(zhuǎn)化先前已在實施例89中介紹。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介紹的相同的方法制備中間體35，36，ET-770和ET-743。
路徑6實施例98 向在MeOH(140ml)中的144(7g，7.6mmol)的溶液中加入1MNaOH(15.1ml)，將反應(yīng)物于23℃攪拌10分鐘。將飽和NH4Cl水溶液(100ml)加至該反應(yīng)混合物中。分離有機相并用5％HCl洗滌直至顏色轉(zhuǎn)成黃色。將所得有機提取物用硫酸鈉干燥，過濾并減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶己烷的梯度液，從0∶1，1∶3，1∶21∶1，1∶1至3∶1)得到161(3.76g，85％)。161的實驗數(shù)據(jù)先前已在美國專利號5721362中介紹。
實施例99 于23℃，向在無水CH2Cl2(20ml)中的161(200mg，0.37mmol)和半胱氨酸152(240mg，0.55mmol)的溶液中加入DMAP(110mg，0.925mmol)和EDC.HCl(170mg，0.925mmol)，將該反應(yīng)物于該溫度下攪拌1.5小時。然后順序用飽和的NaHCO3(15ml)、NaCl(15ml)和NH4Cl(2×10ml)水溶液洗滌混合物。用硫酸鈉干燥有機層，過濾并減壓濃縮。殘留物經(jīng)硅膠快速柱層析純化(SiO2，EtOAc己烷1∶4至1∶2)得到172(285mg，80％)，為白色固體。Rf＝0.3 Hex∶EtOAc 2∶1。1H RMN(CDCl3)δ7.73(d，J＝7.5Hz，2H)，7.59-7.57(m，2H)，7.40-7.28(m，9H)，6.60(s，1H)，5.69(s，1H)，5.65(s，1H)，5.54(d，J＝7.8Hz，1H)，5.11-5.08(m，4H)，4.52-4.49(m，1H)，4.21-3.90(m，6H)，3.83(s，3H)，3.49(s，3H)，3.21(d，J＝6.6Hz，1H)，3.09-2.90(m，6H)，2.41(d，J＝18Hz，1H)，2.34-2.31(m，1H)，2.25(s，3H)，2.19(s，3H)，1.88-1.83(m，1H)，1.77(s，3H)。13C-RMN(CDCl3)δ198.7，170.5，158.4，155.9，148.9，148.8，145.8，142.5，141.3，136.2，131.4，130.0，128.8，128.6，128.4，127.9，127.3，125.3，125.0，124.9，123.0，120.1，117.5，108.5，104.8，101.7，99.5，70.8，67.4，60.5，57.8，57.0，56.5，56.0，55.5，47.1，41.6，37.4，37.1，31.8，25.8，22.8，15.9，14.3，7.6。ESI-MS m/z計算值C53H54N4O11S954.35；實測值(M+23)+977.8。
實施例100 將反應(yīng)燒瓶火焰加熱兩次，真空/氬氣排空數(shù)次并置于氬氣下以備反應(yīng)。于-78℃向在無水CH2Cl2(118ml)中的DMSO(977μl)的溶液中滴加三氟乙磺酸酐(930μl，5.5mmol)。于-78℃攪拌反應(yīng)混合物20分鐘，然后于-78℃經(jīng)套管加入(滴加時間5分鐘)在無水CH2Cl2(26ml用于主要滴加，13ml用于洗滌)中的172(2.63g，2.75mmol)的溶液。在滴加過程中通過外浴保持溫度在-78℃，溶液的顏色由黃色變?yōu)樽厣Ｓ?40℃攪拌該反應(yīng)混合物35分鐘。在此時間內(nèi)該溶液從黃色變成暗綠色。然后，滴加iPr2NEt(3.48ml，22mmol)并將該反應(yīng)混合物保持在0℃ 45分鐘。在此期間該溶液的顏色變成棕色。然后滴加tBuOH(1.04ml，11mmol)和叔丁基四甲基胍(3.31ml，19.25mmol)并將該反應(yīng)混合物于23℃攪拌40分鐘。然后滴加乙酸酐(2.6ml，27.5mmol)并再保持該反應(yīng)混合物在23℃1小時。然后將該反應(yīng)混合物用CH2Cl2(70ml)稀釋并順序用飽和的NH4Cl(180ml)、NaHCO3(180ml)和NaCl(180ml)水溶液洗滌。將合并的有機層用Na2SO4干燥，過濾并減壓濃縮。殘留物經(jīng)快速柱層析(SiO2，EtOAc∶Hex的梯度液，從4∶1，3∶1至2∶1)得到173(1.145g，52％)，為白色固體。Rf＝0.31 Hex∶EtOAc 3∶2。1H RMN(CDCl3)δ7.37(bs，5H)，6.67(s，1H)，6.08(d，J＝1.2Hz，1H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.19-5.00(m，4H)，4.82(d，J＝9.3Hz，1H)，4.49(bs，1H)，4.32-4.15(m，5H)，3.67(s，3H1，3.55(s，3H)，3.44(d，J＝4.8Hz，1H)，3.39(d，J＝6Hz，1H)，2.90-2.87(m，2H)，2.28(s，3H)，2.19(s，3H)，2.15-2.07(m，2H)，2.03(s，3H)，2.00(s，3H)；13C-RMN(CDCl3)δ170.6，168.8，155.8，149.9，148.5，146.0，141.2，140.6，136.6，132.0，130.4，128.8，128.7，128.5，125.2，124.9，120.5，118.2，113.7，113.6，102.2，99.4，67.2，61.6，60.7，59.7，59.3，57.6，55.1，54.8，54.2，41.9，41.6，33.0，29.9，23.9，20.6，15.6，9.8.ESI-MS m/z計算值C41H44N4O11S800.87；實測值(M+23)+823.7。
實施例101 在0℃向在CH2Cl2(2ml)和CH3CN(2ml)中的173(100mg，0.125mmol)的溶液中加入NaI(75mg，0.5mmol)和TMSCl(63μl,0.5mmol)。將該反應(yīng)物于23℃攪拌50分鐘后，用水(30ml)猝滅混合物并用CH2Cl2(2×20ml)提取。將合并的有機層順序用飽和NaCl水溶液(20ml)和飽和連二亞硫酸鈉溶液(20ml)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并真空濃縮。將殘留物經(jīng)快速柱層析純化((SiO2，EtOAc∶己烷的梯度液，從1∶4，1∶2至1∶1)得到化合物158(66mg，70％)，為白色固體。Rf＝0.21 Hex∶EtOAc 1∶1。158的實驗數(shù)據(jù)已在上面的實施例19中介紹。
158向35的轉(zhuǎn)化已在上面的實施例85中介紹。
按照先前已在PCT/GB00/01852中介紹的相同的方法制備中間體36，ET-770和ET-743。
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權(quán)利要求
1.一種制備具有螺胺-1，4-橋鍵的海鞘素產(chǎn)物的方法，該方法包括使用1-不穩(wěn)定的、10-羥基、18-保護的羥基、二-6，8-烯-5-酮的稠環(huán)化合物形成1，4橋鍵，其中C-18保護在引入螺胺前脫去。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述海鞘素產(chǎn)物具有21-羥基，所述方法包括將21-氰基轉(zhuǎn)化為21-羥基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述螺胺是螺喹啉。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述1-不穩(wěn)定的、10-羥基、18-保護的羥基、二-6，8-烯-5-酮的稠環(huán)化合物的C-18保護基是用以下基團保護MOM，甲氧基甲基；或MEM，甲氧基乙氧基甲基。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述1-不穩(wěn)定的基團是下式的N-保護的半胱氨酰氧基亞甲基-CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-H。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中Prot1是Boc，叔丁氧基羰基；Troc，2，2，2，-三氯乙氧基羰基；Cbz，芐氧基羰基；或Alloc，烷氧基羰基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6的方法，其中Prot1是在C-18保護的相同步驟中除去的。
8.根據(jù)權(quán)利要求5、6或7的方法，其中所述1-不穩(wěn)定的基團是由下式的1-取代基產(chǎn)生的-CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中Prot2是Fm，9-芴基甲基。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其中所述下式的1-取代基團-CH2-O-CO-CNHProt1-CH2-S-Prot2是由-CH2-O-H取代基酯化形成的。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述酯化是在形成10-羥基、二-6，8-烯-5-酮結(jié)構(gòu)之前進行的。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述酯化是在引入10-羥基、二-6，8-烯-5-酮結(jié)構(gòu)之后進行的。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，該方法是由一種1-氨基亞甲基、5-保護的羥基、7，8-二氧基亞甲基、18-氫基、21氰基的稠環(huán)化合物作為起始原料的。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述1-氨基亞甲基被暫時保護，以使18-羥基得到保護，并除去所述暫時保護。
15.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述C-18羥基是在形成1-酯官能團之后保護的。
16.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述1-氨基亞甲基被轉(zhuǎn)變成1-羥基亞甲基以及所述1-羥基亞甲基被暫時保護，以使18-羥基得到保護，并除去所述暫時保護。
17.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述1-不穩(wěn)定的、10-羥基、18-保護的羥基、二-6，8-烯-5-酮的稠環(huán)化合物是由具有式(XIV)結(jié)構(gòu)的21-Nuc化合物 起始經(jīng)多步驟制備的，其中至少環(huán)A或環(huán)E之一是醌性的，及其中Nuc指親核試劑的殘基。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述式(XIV)化合物是氰基番紅菌素B。
19.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述產(chǎn)物具有式(XXIIb) 其中R1和R4一起形成式(IV)、(V)、(VI)或(VII)的基團 R5是-OH，或者是此基團的保護的或衍生的形式；R14a和R14b都是-H或一個是-H而另一個是-OH，或者是此基團的保護的或衍生的形式、-OCH3或-OCH2CH3，或R14a和R14b一起形成酮基基團；R12是-NCH3；R15是-OH或此基團的保護的或衍生的形式；及R18是-OH，或此基團的保護的或衍生的形式。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中R5是1至5個碳原子的鏈烷酰氧基。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中R5是乙酰氧基。
22.根據(jù)權(quán)利要求19、20或21的方法，其中R14a和R14b是氫。
23.根據(jù)權(quán)利要求19至22中任一項的方法，其中R15是氫。
24.根據(jù)權(quán)利要求19至23的方法，其中R21是-OH或-CN。
25.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中R7和R8一起形成-O-CH2-O-基團。
26.根據(jù)權(quán)利要求19至25中任一項的方法，其中R1和R4一起形成式(IV)的基團
27.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述海鞘素產(chǎn)物是海鞘素743。
28.一種生產(chǎn)海鞘素化合物的方法步驟，該步驟包括在一個步驟中，按照下述流程除去兩種保護基 其中ProtNH是氨基保護基，而ProtOH是羥基保護基。
29.根據(jù)權(quán)利要求1至27中任一項的方法，該方法包括根據(jù)權(quán)利要求28的方法步驟。
全文摘要
提供制備具有式(XIV)稠環(huán)結(jié)構(gòu)化合物的方法。此類產(chǎn)物包括海鞘素及具有螺胺－1，4－橋。該方法包括使用一種1－不穩(wěn)定的、10－羥基、18－保護的羥基、二－6，8－烯－5－酮的稠環(huán)化合物生成1，4橋鍵。生成所述1，4橋鍵后，在引入螺胺前脫去C－18保護。
文檔編號C07DGK1440414SQ0181204
公開日2003年9月3日 申請日期2001年5月15日 優(yōu)先權(quán)日1999年5月14日
發(fā)明者C·丘瓦斯, M·佩雷滋, A·弗蘭塞斯奇, C·費爾南德斯, J·L·奇查爾羅, P·加勒戈, M·扎祖義洛, I·曼扎納雷斯, M·J·馬丁, S·芒特 申請人:法馬馬有限公司