專利名稱：光穩(wěn)定的體內(nèi)染色組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及光穩(wěn)定的噻嗪染料生物染色組合物，例如，本申請(qǐng)人的美國(guó)專利第6,086,852號(hào)公開的氯化甲苯胺藍(lán)(“TC”)染料組合物。另一方面，本發(fā)明還涉及這些組合物的制備方法。本發(fā)明特別涉及光穩(wěn)定的氯化甲苯胺藍(lán)(“TC”)染料組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
據(jù)報(bào)道，過去的工作者如Mashberg(美國(guó)專利4,321,251)提出將TC用于體內(nèi)異常結(jié)構(gòu)的識(shí)別，他采用了現(xiàn)有技術(shù)中的染料產(chǎn)品，在該染料產(chǎn)品中，TC的構(gòu)象異構(gòu)體與該構(gòu)象異構(gòu)體的N-脫甲基化和N，N-脫甲基化衍生物之和少于80％，而且在該染料產(chǎn)品中，所述構(gòu)象異構(gòu)體的這兩種N-脫甲基化衍生物超過了該染料組合物的約20％％。因此，以前的工作者并不知道他們的“TC”產(chǎn)品的確切組成，現(xiàn)有“TC”產(chǎn)品的制造商也無(wú)法重復(fù)制備這些產(chǎn)品。實(shí)際上，文獻(xiàn)中普遍將TC的性質(zhì)簡(jiǎn)單地稱為它有“良好的色值”。生物染色劑委員會(huì)(Biological Stain Commission)指定了一種僅用于確定TC物質(zhì)的“有機(jī)染料含量”的分析性滴定方法。現(xiàn)有技術(shù)中采用這種被籠統(tǒng)地稱作“TC”的物質(zhì)，導(dǎo)致了臨床觀察不能正常進(jìn)行，而且在對(duì)這種用于人體診斷的產(chǎn)品的制售進(jìn)行必要的規(guī)范時(shí)也存在嚴(yán)重的問題。
除了初始組成不確定的問題之外，現(xiàn)有TC和其他噻嗪生物染色劑的組成還會(huì)隨時(shí)間而變化。例如，Dean等在《染色技術(shù)(StainsTechnology)》第32卷第1期第35頁(yè)等(1977)中建議，應(yīng)將甲醇溶液中的噻嗪染料冷凍，以防止進(jìn)一步發(fā)生氧化性的N-脫甲基化。Liao等在《染色技術(shù)》第57卷第1期第23頁(yè)等(1982)中報(bào)道，通過同時(shí)加入鹽酸二乙胺和鹽酸二甲胺，可以顯著抑制甲醇性的賴特白細(xì)胞染色劑(Wright′s stain)溶液中的亞甲藍(lán)含量因沉淀而減少。
在本申請(qǐng)人的美國(guó)專利第6,086,852中，介紹了一種可重復(fù)制備高品質(zhì)TC產(chǎn)品的方法，相對(duì)于構(gòu)象異構(gòu)體的N-脫甲基化產(chǎn)物，這些TC產(chǎn)品最初具有高比例的構(gòu)象異構(gòu)體。盡管不接觸空氣且避開高溫可阻礙構(gòu)象異構(gòu)體的氧化性N-脫甲基化，但是可以看到，在沒有自由基清除劑如金屬離子的情況下，這種TC產(chǎn)品的醇溶液會(huì)經(jīng)歷光引發(fā)的或光化學(xué)的N-脫甲基化。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)在，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了改進(jìn)噻嗪染料溶液的方法，其中，該染料分子同時(shí)作為光化學(xué)氧化性N-脫甲基化反應(yīng)的感光劑和底物，在這類反應(yīng)中，部分所述染料分子吸收光轉(zhuǎn)變成單重態(tài)，部分所述單重態(tài)染料分子與未活化的底物染料分子反應(yīng)，通過系統(tǒng)間過渡形成三重態(tài)分子，部分所述三重態(tài)分子與周圍環(huán)境中的基態(tài)氧反應(yīng)生成單重態(tài)氧分子，以及部分所述單重態(tài)氧分子使基態(tài)染料分子脫甲基化。本發(fā)明的改進(jìn)方法大大減少了所述脫甲基化反應(yīng)，該方法包括優(yōu)選通過向所述溶液中加入自由基清除劑，例如金屬離子，從而使至少部分三重態(tài)染料淬滅，于是使三重態(tài)染料分子返回到無(wú)活性的基態(tài)。
具體實(shí)施例方式
據(jù)猜測(cè)，噻嗪染料的氧化性N-脫甲基化反應(yīng)的過程如下，以TC的脫甲基化為例
在步驟A和B中，TC失去電子產(chǎn)生陽(yáng)離子基團(tuán)，接著該基團(tuán)再次被氧化，失去一個(gè)質(zhì)子成為亞銨根離子。隨后，該亞銨根離子受到水的親核進(jìn)攻(步驟C)生成甲醇胺中間體，該甲醇胺中間體中有一個(gè)羥基和一個(gè)氨基連接到同一個(gè)碳原子上。甲醇胺不穩(wěn)定，胺的失去(步驟D)釋放出甲醛和單脫甲基化的TC。亞甲藍(lán)的脫甲基化相當(dāng)于從天藍(lán)A(Azure A)形成天藍(lán)C(Azure C)。
在光化學(xué)脫甲基化反應(yīng)中，顯然TC既是光化學(xué)反應(yīng)的感光劑，又是底物，即在沒有自由基清除劑的情況下，它自身可發(fā)生光解。這樣，TC吸收光而成為“光敏劑”，使單激發(fā)態(tài)的TC和另一個(gè)TC分子的“底物”發(fā)生直接反應(yīng)。該底物分子和經(jīng)系統(tǒng)間過渡(isc)形成的染料的三重態(tài)發(fā)生反應(yīng)?；鶓B(tài)氧與染料的三重態(tài)反應(yīng)生成單重態(tài)氧，接著單重態(tài)氧和底物發(fā)生反應(yīng)。
在金屬離子例如鋅、鈉等的“重原子”的作用下，染料的三重態(tài)淬滅而返回到無(wú)活性的基態(tài)單重態(tài)，從而防止了三重態(tài)參與降解反應(yīng)。
對(duì)于達(dá)到高的光化學(xué)穩(wěn)定性所需金屬離子的數(shù)量不是很苛刻，參照本公開采用常規(guī)實(shí)驗(yàn)就可確定該數(shù)量。雖然該數(shù)量更大時(shí)無(wú)害處，更小時(shí)也至少會(huì)有部分作用，但大體而言，染料溶液中優(yōu)選含有大于約4重量％的鋅和/或9重量％的鈉。為達(dá)到至少部分的有效性，金屬成分的最小值應(yīng)取大于2重量％。
實(shí)施例下面的例子解釋了本發(fā)明優(yōu)選方案的實(shí)施，但這并不意味著限制了本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍僅在所附的權(quán)利要求中作了規(guī)定。
實(shí)施例1這個(gè)實(shí)施例解釋了含有很少量金屬離子的TC產(chǎn)品的光不穩(wěn)定性。
根據(jù)本申請(qǐng)人的美國(guó)專利6,086,852(此以參考的方式引用該專利)中的實(shí)施例1制備TC產(chǎn)品的樣品，然后用制備高效液相色譜法進(jìn)一步純化。該樣品總的金屬含量小于0.2重量％。
試樣量的這種純化后的TC產(chǎn)物的樣品是深藍(lán)色的。試驗(yàn)室靜置過夜后，在白熾燈環(huán)境下暴露，該溶液變成無(wú)色。
實(shí)施例2采用實(shí)施例1中的樣品，不同之處在于，在溶液中含有大約4重量％的鋅(以氯化鋅形式)和9％的鈉(以氯化鈉形式)，該樣品在白熾燈環(huán)境下實(shí)際上是絕對(duì)穩(wěn)定的。
實(shí)施例3用亞甲藍(lán)、天藍(lán)A和天藍(lán)C代替TC重復(fù)實(shí)施例1和2的過程，可得到類似結(jié)果。
實(shí)施例4重復(fù)實(shí)施例1-3的過程，不同之處在于在溶液中僅采用氯化鋅以及在溶液中僅采用氯化鈉。得到了相同的結(jié)果。
實(shí)施例5重復(fù)實(shí)施例1-4的過程，不同之處在于沒有采用鋅鹽和鈉鹽，而是采用了鎂、鉻和硅的可溶性鹽得到了類似的結(jié)果。
為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員理解并實(shí)施這項(xiàng)發(fā)明，申請(qǐng)人就以上方面描述了本發(fā)明，并提供了目前優(yōu)選的實(shí)施方式。
權(quán)利要求
1.顯著減少溶液中噻嗪染料的脫甲基化反應(yīng)的方法，其中，該染料的分子同時(shí)作為光化學(xué)氧化性脫甲基化反應(yīng)的感光劑和底物，在這類反應(yīng)中，部分所述染料分子吸收光轉(zhuǎn)變成單重態(tài)，部分所述單重態(tài)染料分子與未活化的底物染料分子反應(yīng)，通過系統(tǒng)間過渡形成三重態(tài)分子，部分所述三重態(tài)分子與周圍環(huán)境中的基態(tài)氧反應(yīng)生成單重態(tài)氧分子，以及部分所述單重態(tài)氧分子使基態(tài)染料分子脫甲基化，所述方法包括淬滅部分所述三重態(tài)染料分子，使其返回到無(wú)活性的基態(tài)。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中三重態(tài)的淬滅是由向所述溶液中加入金屬離子所致。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述金屬離子是鋅離子。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述金屬離子是鈉離子。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述金屬離子同時(shí)為鋅離子和鈉離子。
全文摘要
通過淬滅三重態(tài)的染料分子，使其返回到無(wú)活性的基態(tài)，從而減少噻嗪染料溶液的光化學(xué)脫甲基化反應(yīng)，在該反應(yīng)中，所述染料分子同時(shí)作為感光劑和底物。
文檔編號(hào)C07D279/18GK1545425SQ01823584
公開日2004年11月10日 申請(qǐng)日期2001年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月28日
發(fā)明者道格拉斯·D·伯克特, 道格拉斯 D 伯克特 申請(qǐng)人:日拉生物技術(shù)公司