專利名稱：溶菌酶的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于溶菌酶的制備方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種溶菌酶的制備方法，它采用以下步驟制得(1)預(yù)處理取蛋清用試紙檢查PH值在8.0左右，然后過(guò)銅篩除雜物。
(2)吸附將經(jīng)預(yù)處理過(guò)的蛋清放在非金屬容器中，在攪拌下按每0.5kg加入75g的724樹脂，攪拌吸附6小時(shí)左右，然后靜置20小時(shí)以上，分層后棄去上層清液，下層樹脂用清水反復(fù)洗幾次，以除去雜蛋白，最后濾干樹脂，移入另一非金屬容器中。
(3)洗脫在上述樹脂中加入PH值為6.5、濃度為0.15mol/l的等體積磷酸緩沖液，最后將除去雜物的樹脂，加入等量濃度為10％的硫酸銨溶液，攪拌洗脫30分鐘，濾去洗脫液，重復(fù)洗脫樹脂3次，濾出洗脫液，一起將洗脫液倒入沉淀缸中。
(4)沉淀在沉淀缸中按洗脫液體積加32％的固體硫酸銨粉末，攪拌使其完全溶解，在4～10℃處放置過(guò)夜，除去上清液，用離心機(jī)分離出沉淀物。
(5)透析將沉淀物用蒸餾水全部溶解，然后裝入透析袋中在10℃水中透析過(guò)夜，除去硫酸銨，收集透析液。
(6)鹽析將透析液移入非金屬容器中，用4％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至8.5～9.0，如有白色沉淀，應(yīng)立即于離心機(jī)上離心除去，然后用1∶5的鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3.5，最后加入5％的固體氯化鈉，攪拌均勻，置冷處48小時(shí)左右，于離心機(jī)收取溶菌酶鹽析物。
(7)干燥將沉淀的鹽析物倒入丙酮中不斷攪拌，放置2小時(shí)左右，濾除丙酮沉淀物干燥得溶菌酶產(chǎn)品。
本發(fā)明直接用蛋清加樹脂吸附，因此用這種方法提取溶菌酶具有工藝操作簡(jiǎn)便，原料易得，收率高，產(chǎn)量大，生產(chǎn)成本低的優(yōu)點(diǎn)。制備出的溶菌酶為白色無(wú)定型粉末，無(wú)臭，味甜，易溶于水，不溶于丙酮、乙醚，在酸性溶液中十分穩(wěn)定，耐熱55℃以上，水溶液遇堿易被破壞，最適PH值為6.6，等電點(diǎn)PI為10.5～11。
2、吸附將經(jīng)處理過(guò)的蛋清放在非金屬容器中，在攪拌下加入724樹脂作吸附劑，每0.5kg加入75g攪拌吸附6小時(shí)左右，然后靜置20小時(shí)以上，分層后棄去上層清液，下層樹脂用清水反復(fù)洗幾次，以除去雜蛋白，最后濾干樹脂，移入另一非金屬容器中。
3、洗脫在上述樹脂中加入等體積PH值6.5，0.15mol/l磷酸鈉緩沖液，最后將除去雜物的樹脂，加入等量濃度為10％的硫酸銨溶液，攪拌洗脫30分鐘，濾去洗脫液，重復(fù)洗脫樹脂3次，濾出洗脫液，一起將洗脫液倒沉淀缸中。
4、沉淀在沉淀缸中按洗脫液體積加32％的固體硫酸銨粉末，攪拌使其完全溶解在4～10℃處放置過(guò)夜，除去上清液，用離心機(jī)分離出沉淀物。
5、透析將沉淀物用蒸餾水全部溶解，然后裝入透析袋中在10℃水中，透析過(guò)夜除去硫酸銨，收集透析液。
6、鹽析將透析液移入非金屬容器中，用4％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至8.5～9.0，如有白色沉淀，應(yīng)立即于離心機(jī)上離心除去，然后用1∶5的鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3.5，最后加入5％的固體氯化鈉，攪拌均勻，置冷處48小時(shí)左右，于離心機(jī)收取溶菌酶鹽析物。
7、干燥將沉淀的鹽析物倒入丙酮中不斷攪拌，放置2小時(shí)左右，濾除丙酮沉淀物干燥得溶菌酶產(chǎn)品。
權(quán)利要求
一種溶菌酶的制備方法，其特征在于，它采用以下步驟制得(1)預(yù)處理取蛋清用試紙檢查PH值在8.0，然后過(guò)銅篩除雜物。
(2)吸附將經(jīng)預(yù)處理過(guò)的蛋清放在非金屬容器中，在攪拌下按每0.5kg加入75g的724樹脂，攪拌吸附6小時(shí)，然后靜置20小時(shí)以上，分層后棄去上層清液，下層樹脂用清水反復(fù)洗幾次，以除去雜蛋白，最后濾干樹脂，移入另一非金屬容器中。
(3)洗脫在上述樹脂中加入PH值為6.5、濃度為0.15mol/l的等體積磷酸緩沖液，攪拌洗脫20分鐘，濾除洗脫液，按同法處理兩次，最后將除去雜物的樹脂，加入等量濃度為10％的硫酸銨溶液，攪拌洗脫30分鐘，濾去洗脫液，重復(fù)洗脫樹脂3次，濾出洗脫液，一起將洗脫液倒入沉淀缸中。
(4)沉淀在沉淀缸中按洗脫液體積加32％的固體硫酸銨粉末，攪拌使其完全溶解，在4～10℃處放置過(guò)夜，除去上清液，用離心機(jī)分離出沉淀物。
(5)透析將沉淀物用蒸餾水全部溶解，然后裝入透析袋中在10℃水中透析過(guò)夜，除去硫酸銨，收集透析液。
(6)鹽析將透析液移入非金屬容器中，用4％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至8.5～9.0，如有白色沉淀，應(yīng)立即于離心機(jī)上離心除去，然后用1∶5的鹽酸調(diào)節(jié)PH值至3.5，最后加入5％的固體氯化鈉，攪拌均勻，置冷處48小時(shí)左右，于離心機(jī)收取溶菌酶鹽析物。
(7)干燥將沉淀的鹽析物倒入丙酮中不斷攪拌，放置2小時(shí)左右，濾除丙酮沉淀物干燥得溶菌酶產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種溶菌酶的制備方法，它經(jīng)過(guò)預(yù)處理、吸附、洗脫、沉淀、透析、鹽析、干燥等步驟制得。用這種方法提取溶菌酶工藝操作簡(jiǎn)便，原料易得，收率高，產(chǎn)量大，生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)C07K1/00GK1475567SQ02135369
公開日2004年2月18日 申請(qǐng)日期2002年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月13日
發(fā)明者閻洪世 申請(qǐng)人:閻洪世