專利名稱：皮膚藥用和化妝品用的活性寡肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用、皮膚藥用和化妝品用活性寡肽及其衍生物、肽類似物及其衍生物及其在皮膚藥用和化妝品用活性組合物中的應(yīng)用。
已知皮膚衰老的基本機(jī)制發(fā)生在細(xì)胞外基質(zhì)，即位于上皮細(xì)胞和結(jié)締組織之間交叉點(diǎn)的所謂的基礎(chǔ)薄層中。細(xì)胞外基質(zhì)的再生是非常重要的，因?yàn)檫@將顯著影響與其接觸的細(xì)胞的行為，特別是那些細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移、增殖、形態(tài)和功能。在細(xì)胞外基質(zhì)中的成纖維細(xì)胞合成的膠原與衰老相關(guān)性減少，結(jié)果導(dǎo)致由這些細(xì)胞所分泌的化學(xué)物質(zhì)的量減少。由于皮膚蛋白含有約80％的膠原，在組織中膠原濃度少量的自然減少會(huì)對(duì)皮膚的物理和生理特性產(chǎn)生明顯的影響。
Katayama等人(The Journal of Biological Chemistry，第268卷，第14期，9941-9944頁，1993)發(fā)現(xiàn)刺激膠原和纖連蛋白的最低亞片段序列由五肽Lys-Thr-Thr-Lys-Ser表示。四個(gè)或更少氨基酸的序列具有更輕微的刺激效果或者不具有刺激效果。
歐洲專利申請(qǐng)WO 00/15188描述了棕櫚酰化的五肽，棕櫚酰-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser作為治療皮膚衰老、加速傷口愈合和增加皮膚水分的成分的效果。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)經(jīng)選擇的新寡肽及其衍生物以及肽類似物及其衍生物(下文稱作“本發(fā)明的化合物”)具有特別高的藥用和/或化妝品用效果，因此特別適合用于皮膚藥用和/或化妝品用有效的組合物。本發(fā)明的化合物擴(kuò)散迅速，并以足夠的濃度通過細(xì)胞膜到達(dá)細(xì)胞內(nèi)的作用位點(diǎn)，在此他們能顯著提高膠原和纖連蛋白的量。因此，本發(fā)明的化合物對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)施加了令人驚奇的積極的和刺激性效果，而細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)皮膚的物理和生理外觀具有決定性的影響。尤其是，與現(xiàn)有技術(shù)已知的其他化合物相比，本發(fā)明的化合物誘導(dǎo)對(duì)膠原的合成更快速和更強(qiáng)烈的刺激。所述本發(fā)明化合物對(duì)膠原合成更快速和更強(qiáng)烈的刺激可能是通過分子量減少、氨基酸中N-甲基基團(tuán)的引入以及用例如脂肪酸酯對(duì)氨基酸的修飾所獲得的協(xié)同作用的結(jié)果。但是，本發(fā)明不受此種解釋的限制。
本發(fā)明被限定在權(quán)利要求書中并且特別涉及經(jīng)過選擇的、新的寡肽及其衍生物、肽類似物及其衍生物以及這些化合物的藥用鹽，因此，本發(fā)明的特征在于這些化合物由下列通式(I)表示 其中R1表示H，-C(O)-R7，-SO2-R7，-C(O)-OR7或-C(O)-N(R7)2，R2彼此獨(dú)立地表示H或C1-C4烷基，R3和R6彼此獨(dú)立地表示-(CH2)q-N(R1)R8，R4和R5彼此獨(dú)立地表示-CH2-OR2，-CH(CH3)OR8或-CH2-CH2-OR8，R7表示氫原子、任選由鹵素、羥基、羧基、氨基、巰基、1，2-二硫代戊基(dithiolanyl)和/或磺鹽獨(dú)立地一取代或多取代的(C1-C19)-烷基；任選取代的(C1-C19)-烯基；苯基-(C1-C4)-烷基，其中的苯基在對(duì)位由氨基任選取代；或R8表示H，-(C1-C4)-烷基，-C(O)-R7，-C(O)-OR7，-C(O)-N(R7)2或-SO2-R7X表示氧(-O-)或-NH-；或當(dāng)X＝O，XR7也表示α-生育酚、生育三烯酚或視黃醇的酯或羧酸(R7＝H)，
m，n，p彼此獨(dú)立地表示0或1，而R3和R6中的q彼此獨(dú)立地表示1-4的整數(shù)，條件是下列條件不同時(shí)成立R4＝-CH(CH3)-OH和R5＝-CH(CH3)-OH和R6＝-(CH2)4-NH2。
優(yōu)選地，下列條件不同時(shí)成立R4＝-CH2-OH或-CH(CH3)-OH和R5＝-CH(CH3)-OH和R6＝-(CH2)4-NH2。優(yōu)選地，下列條件不同時(shí)成立R2＝H和R4＝-CH2-OH或-CH(CH3)-OH和R5＝-CH(CH3)-OH和R6＝-(CH2)4-NH2。
按照對(duì)R1，R2，R7和R8的定義，通式(I)化合物包括相應(yīng)氨基酸的二肽、三肽、四肽和五肽及其衍生物以及相應(yīng)的肽類似物。
含有取代基R3或R6的通式(I)的氨基酸殘基來自賴氨酸(Lys)、鳥氨酸(Orn)、2，4-二氨基丁酸(Dab)或2，3-二氨基丙酸(Dap)以及這些氨基酸或氨基酸衍生物的殘基。
含有取代基R4或R5的通式(I)的氨基酸殘基來自絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)、高絲氨酸[H2N-CH((CH2)2-OH)COOH，(HSe)]以及這些氨基酸或氨基酸衍生物的殘基。
下表顯示了衍生上述通式(I)化合物的氨基酸
殘基[R1(N(R2)CH(R3)C(O)-]優(yōu)選來自賴氨酸。
在[-N(R2)CH(R4)C(O)-N(R2)CH(R5)C(O)-]位的殘基[-N(R2)CH(R4)C(O)-]優(yōu)選來自蘇氨酸。
殘基[-N(R2)CH(R5)C(O)-]優(yōu)選來自蘇氨酸。
殘基[-N(R2)CH(R6)C(O)-]優(yōu)選來自鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸(Dab)和2，3-二氨基丙酸(Dap)。
末端殘基[-(N(R2)CH(R4)C(O)-XR7]優(yōu)選來自絲氨酸。
通式(I)化合物優(yōu)選含有下列序列序列1-Ser-Ser-Orn-序列2-Thr-Thr-Orn-序列3-Thr-Thr-Dab-序列4-Thr-Thr-Dap-含有序列-Ser-Ser-Orn-，Lys-Thr-Thr-Orn-Ser，Lys-Thr-Thr-Dab-Ser和Lys-Thr-Thr-Dab-Ser以及帶有取代基R1、R2、R7和R8的衍生序列的化合物是特別優(yōu)選的。
通式(I)所包括的進(jìn)一步優(yōu)選的多肽將在下文中論述。
優(yōu)選的通式(I)化合物還包括其中當(dāng)n或p＝0時(shí)，m＝0的那些化合物。
術(shù)語“肽”和“寡肽”尤其分別包括天然的氨基酸、肽和寡肽。肽類似物分別指通過合成修飾的氨基酸、肽和寡肽，例如，氮原子上連接甲基(CH3-N＝)。本發(fā)明的衍生物尤其指的是末端氨基或羧基被轉(zhuǎn)化的氨基酸、肽和寡肽，例如，其中的末端羧基被酯化。
通式(I)的化合物特別適合作為藥用、皮膚藥用和/或化妝品用的活性成分，用于制備藥用、皮膚藥用和/或化妝品用的活性組合物，特別是用于增加人皮膚中的膠原和纖連蛋白的量。
此外，本發(fā)明涉及本發(fā)明化合物及其鹽的制備方法及其作為藥用、皮膚藥用和/或化妝品用的活性成分的應(yīng)用，以及含有至少一種本發(fā)明化合物的藥用、皮膚藥用和/或化妝品用的活性組合物。
而且，本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物用于制備促進(jìn)傷口愈合和刺激皮膚保濕藥物的應(yīng)用，以及延緩或治療皮膚衰老，特別是皺紋的形成的方法，所述方法包括在皮膚上施用本發(fā)明的化合物和/或本發(fā)明的組合物。
上文所使用的概括性術(shù)語的定義如下鹵素指氯、溴或碘，優(yōu)選氟。
烷基作為基團(tuán)本身或作為烷氧基官能團(tuán)的結(jié)構(gòu)元素包括直鏈和支鏈烷基。例如，作為直鏈殘基的甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正十一烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十六烷基、正十七烷基、正十八烷基或正十九烷基以及作為支鏈殘基的異丙基、叔丁基、異丁基、仲丁基、異戊基。作為烷基的R2和/或R8優(yōu)選是指甲基、乙基和丙基，優(yōu)選甲基。如果作為R1一部分的R7指或含有烷基殘基，其優(yōu)選表示8-22個(gè)碳原子，優(yōu)選14-17個(gè)碳原子的烷基。如果XR7含有烷基殘基，優(yōu)選其表示1-22個(gè)碳原子，優(yōu)選1-4個(gè)碳原子的烷基。
鏈烯基指單或多不飽和、任選取代的烷基，例如8(Z)-十七碳烯基、8(Z)，11(Z)-十七碳二烯基、4(Z)，7(Z)，10(Z)，13(Z)-十九碳四烯基、8(Z)-11-羥基十八碳烯基。
α-生育酚基指(D)-，(L)-或(DL)-2，5，7，8-四甲基-2-(4′，8′，12′-三甲基十三烷基)-6-苯并二氫吡喃基。生育三烯基(Tocotrienyl)指2，5，7，8-四甲基-2-(4′，8′，12′-三甲基-3′，7′，11′-十三碳三烯)-6-苯并二氫吡喃基的任何異構(gòu)體。視黃基指3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯基)-2，4，6，8-壬四烯-1-基。
通式(I)化合物可以和酸形成單價(jià)或多價(jià)、均一或混合鹽，例如，與無機(jī)酸，如鹽酸、溴酸、硫酸或磷酸；或與適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)脂肪族飽和或不飽和羧酸，如脂肪族單或二羧酸，如甲酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、乙二醇酸、琥珀酸、富馬酸、丙二酸、馬來酸、草酸、鄰苯二甲酸、檸檬酸、乳酸或酒石酸；或者與芳香羧酸，如苯甲酸或水楊酸；或與芳香族-脂肪族羧酸，如扁桃酸、肉桂酸；或者與芳香雜環(huán)羧酸，如煙酸；或者與脂肪族或芳香族磺酸，如甲磺酸或甲苯磺酸形成鹽。優(yōu)選皮膚醫(yī)用鹽，特別是與乙酸和/或乳酸形成的鹽。
通式(I)化合物還包括可能的異構(gòu)體形式及其混合物，例如，外消旋混合物和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物。
通式(I)中所提到的氨基酸可以具有L或D構(gòu)型，或者表示二種構(gòu)型的混合物。
尤其是，Thr也表示異構(gòu)體形式，同分異構(gòu)的別蘇氨酸(allo-Thr)、D-Thr或D-allo-Thr或者是在序列中各自位置的Thr與D-Thr或allo-Thr與D-allo-Thr的混合物。
在通式(I)的化合物中，優(yōu)選化合物的下列標(biāo)識(shí)或下列基團(tuán)，其中R1是氫、-C(O)-R7、-SO2-R7、-C(O)-OR7或-C(O)-N(R7)2，優(yōu)選其中的R1是氫、-C(O)-R7或-SO2-R7，優(yōu)選氫或-C(O)-R7；R2彼此獨(dú)立地表示氫或甲基；
R3，R6彼此獨(dú)立地表示-(CH2)q-N(R1)R8，優(yōu)選彼此獨(dú)立地是(CH2)q-NH2；R4，R5彼此獨(dú)立地是-CH2-OR8，-CH(CH3)OR8或-CH2-CH2-OR8，優(yōu)選彼此獨(dú)立地表示-CH2-OH、-CH(CH3)OH或-CH2-CH2-OH；R7優(yōu)選表示氫、甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正十一烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十四烷基、正十五烷基、正十六烷基、正十七烷基、正十八烷基或正十九烷基、異丙基、叔丁基、異丁基、仲丁基、異戊基、苯基、叔丁基苯基、甲苯基、1-或2-萘基、全氟丁基、十五碳氟庚基、(+)-或(-)-莰烷(bornan)-2-onyl、8(Z)-十七碳烯基、8(Z)，11(Z)-十七碳二烯基、4(Z)，7(Z)，10(Z)，13(Z)-十九碳四烯基或8(Z)-11-羥基十八碳烯基、在ω位用氨基取代的1，2-二硫代戊基或C1-C19烷基或由甲基、氨基或鹵素在鄰-和/或?qū)ξ蝗芜x取代的苯基，優(yōu)選作為XR7一部分的R7表示鹵素、甲基、乙基和/或作為R1一部分的R7表示含有14-17個(gè)碳原子的烷基殘基。
R8表示氫、C1-C4-烷基或-C(O)-R7，優(yōu)選氫或甲基。
X表示氧、-NH-，優(yōu)選氧。
當(dāng)X＝O時(shí)，XR7也表示α-生育酚、生育三烯酚或視黃醇的酯或羧酸(R7＝H)，優(yōu)選羧酸；m，n，p彼此獨(dú)立地表示0或1，和R3和R6中的q彼此獨(dú)立地表示整數(shù)1，2，3或4。
R7-C(O)-最優(yōu)選表示帶有6，8，10，12，14，16或18個(gè)碳原子的飽和或不飽和脂肪酸殘基，優(yōu)選飽和脂肪酸對(duì)應(yīng)的殘基，優(yōu)選辛酸對(duì)應(yīng)的殘基[CH3-(CH2)6-C(O)-]、月桂酸對(duì)應(yīng)的殘基[CH3-(CH2)10-C(O)-]、十四烷酸對(duì)應(yīng)的殘基[CH3-(CH2)12-C(O)-]、棕櫚酸對(duì)應(yīng)的殘基[CH3-(CH2)14-C(O)-]和/或硬脂酸對(duì)應(yīng)的殘基[CH3-(CH2)16-C(O)-]。
通式(I)化合物的代表性示例列在表5中(實(shí)施例7之后)。
可以按照肽化學(xué)中已知的方法制備本發(fā)明的化合物。優(yōu)選的步驟包括完全合成本發(fā)明的化合物，例如通式(I)的化合物，任選裂解掉殘余的保護(hù)基團(tuán)和任選酰化自由氨基和/或?qū)⑺@得的化合物轉(zhuǎn)化為酸加成鹽和/或?qū)⑺@得的酸加成鹽轉(zhuǎn)化為對(duì)應(yīng)的共軛堿或另一種鹽。
本發(fā)明的化合物可以用于制備皮膚藥用和/或化妝品用的活性組合物。此類組合物含有有效量的至少一種本發(fā)明化合物或其鹽，以本發(fā)明的化合物和填充劑的重量為基礎(chǔ)計(jì)算，本發(fā)明化合物的用量范圍是從0.5ppm至5,000ppp(重量/重量)，優(yōu)選在1ppm至1000ppm(重量/重量)之間。本發(fā)明的化合物可以作為溶液、分散體、乳劑或包膠在載體中使用，例如在大、微或納米膠囊中，在脂質(zhì)體或乳糜微粒中，或包封在大、微或納米微粒中或在微真菌中或吸附在粉末化的有機(jī)聚合物、滑石粉、膨潤(rùn)土和其他無機(jī)載體中。
本發(fā)明的化合物可以用于任何制劑形式，例如乳液、乳劑、洗劑、藥膏、凝膠狀和粘性、騰升(lifting)和乳化的聚合物、香脂、香波、肥皂、凝膠、粉劑、栓劑(stick)、噴劑、潤(rùn)膚油、面膜或用于透皮涂敷的泥膏劑。
本發(fā)明的化合物可以與任何其他常用的成分一起使用，例如提取的脂類和/或合成的脂類、凝膠性和粘性、騰升和乳化的聚合物、水或脂溶的活性劑、植物提取物、組織提取物、海洋提取物、防曬劑、抗氧化劑、水分保持和阻隔物質(zhì)以及皮膚再生劑。
本發(fā)明的化合物用于化妝品，以促進(jìn)傷口愈合和水合作用以及用于所有的皮膚護(hù)理品中，特別是抗皺紋的形成和加重以及抗所有自然或加速(太陽光線、污染)的皮膚衰老的皮膚護(hù)理品。
本發(fā)明的化合物以及含有該化合物的化妝品和皮膚藥物組合物可以用于制備促進(jìn)傷口愈合和水合作用的藥物以及用于所有的皮膚護(hù)理品，特別是抗皺紋的形成和加重以及抗所有自然或加速(太陽光線、污染)的皮膚衰老的皮膚護(hù)理品。
本發(fā)明還涉及用于延緩或治療皮膚衰老，特別是皺紋的形成的方法，所述方法包括在皮膚上施用本發(fā)明的化合物。類似地，本發(fā)明還涉及用于加速傷口愈合和/或改進(jìn)皮膚水合作用的方法，所述方法包括在皮膚上施用本發(fā)明的化合物。
下列實(shí)施例用于說明本發(fā)明，而不限制其范圍。本說明書和實(shí)施例1-7中使用了下列簡(jiǎn)寫AcOH乙酸Boc叔丁氧羰基Dab2，4-二氨基丁酸Dap2，3-二氨基丙酸DBU1，8-二氮雜二環(huán)[5，4，0]十一碳-7-烯(1，5-5)DIPEA二異丙基乙基胺DMEMDulbecco′s Modified Eagle MediumEt乙基FCS胎牛血清HSe高絲氨酸Hyp羥脯氨酸Gly甘氨酸Lipoylα-D，L-硫辛酸Me甲基MEM極限必需培養(yǎng)基N-Me-Ser N-甲基-絲氨酸N-Me-ThrN-甲基-蘇氨酸
NMMN-甲基嗎啉Orn鳥氨酸Palm棕櫚酰PBS磷酸緩沖液Pr丙基RT室溫TBTUO-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四氟硼酸-四甲基脲鹽tBu叔丁基TFA三氟乙酸TGF-β1轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β實(shí)施例1通過用本發(fā)明的寡肽衍生物處理，測(cè)定對(duì)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物(ATCC CCL110)中I和III型膠原合成的刺激作用。
方法使用天狼星紅微量分析法(Sirius Red microassay)測(cè)量成纖維細(xì)胞中I和III型膠原的含量。在用相應(yīng)的寡肽衍生物溫育24小時(shí)后進(jìn)行膠原的定量測(cè)定。確定細(xì)胞外累積的膠原。使用維生素C和TGF-β-1作為陽性對(duì)照。
方法以約125,000細(xì)胞/孔的密度在6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基中溫育ATCC CCL110成纖維細(xì)胞2天(37℃/5％CO2)。此后，丟棄培養(yǎng)基并用PBS沖洗2次，加入1ml含有相應(yīng)的測(cè)試物質(zhì)的測(cè)試培養(yǎng)基。在37℃/5％CO2的培養(yǎng)條件下與測(cè)試物質(zhì)一起再溫育24小時(shí)后，用天狼星紅分析法測(cè)定細(xì)胞外膠原。
細(xì)胞外天狼星紅分析溫育后，將測(cè)試培養(yǎng)基的總量(1ml)轉(zhuǎn)移至平底24孔板中并在55℃干燥過夜。在室溫下用1ml/孔的Bouin’s固定液固定樣品。丟棄固定溶液并用水沖洗板2-3次。在干燥板以后，加入1ml天狼星紅染色試劑。
在室溫下，以中等強(qiáng)度在微板攪拌器上震蕩樣品1小時(shí)。此后，丟棄天狼星紅染色試劑并用0.01N的鹽酸沖洗板。將染色的物質(zhì)溶解在0.3ml的0.1N NaOH溶液中并在室溫下在微板攪拌器上震蕩1小時(shí)。
將200μl的溶液轉(zhuǎn)移至平底96孔板中，以0.1N的NaOH溶液作為空白，在540nm測(cè)量光密度。
材料培養(yǎng)基MEM+10％FCS+100 IU/ml青霉素+0.1mg/ml鏈霉素+1mM非必需氨基酸+1mM丙酮酸鈉+2mM L-谷氨酰胺。
測(cè)試介質(zhì)不含酚紅(AMIMED)的DMEM+100 IU/ml的青霉素+0.1mg/ml的鏈霉素+80μg/ml的(β)-氨基丙腈。
物質(zhì)的稀釋將維生素C 100mM(SIGMA A4034)在測(cè)試介質(zhì)中稀釋至50μg/ml。
將轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGFβ1 1μg/ml(SIGMA T1654)在測(cè)試介質(zhì)中稀釋至0.1ng/ml。
以10mM的常規(guī)濃度制備本發(fā)明的寡肽衍生物并在測(cè)試介質(zhì)中稀釋至50μM。
用于天狼星紅微量分析法的試劑天狼星紅F3BA染色試劑作為母液，在飽和苦味酸水溶液中的濃度是1mg/ml。Bouin’s固定液15ml飽和苦味酸水溶液+5ml甲醛+1ml乙酸。結(jié)果示于下表1中。
表124小時(shí)后，I和III型膠原的定量測(cè)定
實(shí)施例2用本發(fā)明的寡肽衍生物處理后，纖連蛋白含量的測(cè)定方法通過免疫斑點(diǎn)印跡法測(cè)定成纖維細(xì)胞中纖連蛋白(層粘連蛋白或膠原VII)的含量。按照與實(shí)施例1所描述的相同方法進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)和溫育。此后，裂解細(xì)胞并將裂解產(chǎn)物(0.5ml)印跡在點(diǎn)膜儀(bio-dot)的硝酸纖維素膜上。然后按照蛋白質(zhì)印跡法用人纖連蛋白的特異性初級(jí)抗體溫育膜。使用堿性磷酸酯酶的共軛物作為第二抗體。染色和終止反應(yīng)后，通過半定量目測(cè)條帶的強(qiáng)度。結(jié)果示于表2。
表2溫育24小時(shí)后，纖連蛋白(或?qū)诱尺B蛋白V或VII型膠原)的定量測(cè)定結(jié)果
實(shí)施例3軟膏制劑方法將組分1-5(A)加熱至70℃。將組分6-7(B)加熱至75℃。在攪拌下，將B加入A中，冷卻至50℃，攪勻并冷卻至30℃。此后，依次加入組分8-9(C)和組分10(D)并攪拌冷卻。制劑配方如表3所示。
表3
實(shí)施例4凝膠制劑方法將組分2-6(A)依次溶解在去離子水中。在用組分7(B)調(diào)節(jié)pH至6.0以后，加入組分8(C)。制劑配方示于表4中。
表4
實(shí)施例5-7下列實(shí)施例5-7描述了本發(fā)明的通式(I)化合物以及此類化合物的鹽的合成。使用質(zhì)子核磁共振(NMR)、高效液相色譜(HPLC)-電噴霧質(zhì)譜(MS)或元素分析方法分析按照實(shí)施例所獲得的洗脫液和產(chǎn)物?？梢园凑障挛乃枋龅囊阎姆椒?M.Bodanszky″肽合成的實(shí)施(ThePractice of Peptide Synthesis)″，Springer，第二版，1994的通用指南)制備化合物。因此，在固相合成中，氨基酸，例如絲氨酸的羧基末端與樹脂結(jié)合，而其氨基由保護(hù)基保護(hù)，例如由Fmoc保護(hù)基保護(hù)。例如用Boc或叔丁基保護(hù)側(cè)鏈。如果需要，選擇性地去掉保護(hù)基，以使利用在肽合成中常用的試劑連接更多的氨基酸衍生物，直至完全合成所需要的鏈。此后，從樹脂上分別去掉肽或肽類似物的羧基末端并將該羧基末端與不同的殘基C(O)-R7，SO2-R7，C(O)-OR7或C(O)-N(R7)2相連，由此去掉保護(hù)基。
實(shí)施例5H-Lys-Thr-Ser-Orn-Ser x 3 TFAH-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Orn(Boc)-Ser(tBu)-OH x TFA(5a)的合成在典型的固相合成方案中，通過重復(fù)連接18.7g(14.0mmol，電荷0.75mmol/g)的市售的H-Ser(tBu)-三苯甲基氯樹脂和16.8mmol的氨基酸Fmoc-Orn(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Thr(tBu)-OH(2x)，F(xiàn)moc-Lys(Boc)-OH，18mmol的TBTU，33.6mmol的三甲基吡啶(collidin)，用溶于二甲基甲酰胺(DMF)的1％的DBU(2 x 5min)脫保護(hù)，用溶于二氯甲烷1％的TFA溶液從樹脂上剝離并在Sephadex LH20上純化制備五肽，產(chǎn)率9.3g(64％)。
H-Lys-Thr-Ser-Orn-Ser-OH x 3TFA(5b)的合成在室溫，在由59ml的TFA、1.25ml的水和1.25ml的三異丙基硅烷(triisopropylsilan)組成的混合物中攪拌9.3g的5a 1小時(shí)。在體積減少至1/3后，用二乙基醚沉淀，產(chǎn)率6.0g(76％)。
實(shí)施例6CH3-(CH2)7-SO2-Lys-Thr-Ser-Orn-Ser x 2 TFA(6)的合成將2g(2.2mmol)的5a溶解在DMF(20ml)中并在室溫下用0.48g(2.3mmol)1-辛烷磺酰氯(1-octanesulfochloride)和0.48g(4.0mmol)DIPEA攪拌10小時(shí)。在溶劑蒸發(fā)以后，用59mlTFA、1.25ml水和1.25ml三異丙基硅烷(triisopropylsilan)在室溫?cái)嚢璐之a(chǎn)物1小時(shí)。在減到1/3體積后，用二乙基醚沉淀并在Sephadex LH20上純化，產(chǎn)率1.4g(70％)。
也可以用無機(jī)酸，例如HCl、HBr、H2SO4或H3PO4或有機(jī)酸，例如甲酸、草酸或酒石酸質(zhì)子化肽或共軛體，獲得6的對(duì)應(yīng)鹽。
實(shí)施例7H-Dab-Ser-OH x 2AcOH按照實(shí)施例5a描述的固相方案，將所獲得的H-Dab-Ser-OH x 2TFA(3.0g，6.90mmol)在乙酸鹽中類似的轉(zhuǎn)化到離子交換器上，產(chǎn)率2.0g(90.0％)。
按照實(shí)施例5-7所描述的方法也可以合成下列化合物
表權(quán)利要求
1.寡肽及其衍生物，肽類似物及其衍生物以及這些化合物的藥用鹽，其特征在于這些化合物符合下列通式(I) 其中R1表示H，-C(O)-R7，-SO2-R7，-C(O)-OR7或-C(O)-N(R7)2，R2彼此獨(dú)立地表示H或-(C1-C4)烷基，R3和R6彼此獨(dú)立地表示-(CH2)q-N(R1)R8，R4和R5彼此獨(dú)立地表示-CH2-OR2，-CH(CH3)OR8或-CH2-CH2-OR8，R7表示氫原子、任選由鹵素、羥基、羧基、氨基、巰基、1，2-二硫代戊基和/或磺基獨(dú)立地一取代或多取代的(C1-C19)-烷基；任選取代的(C1-C19)-烯基；苯基-(C1-C4)-烷基，其中的苯基在對(duì)位由氨基任選取代；或R8表示H，-(C1-C4)-烷基，-C(O)-R7，-C(O)-OR7，-C(O)-N(R7)2或-SO2-R7X表示氧(-O-)或-NH-；或當(dāng)X＝O時(shí)，XR7也表示α-生育酚、生育三烯酚或視黃醇的酯或羧酸(R7＝H)，m，n，p彼此獨(dú)立地表示0或1，而R3和R6中的q彼此獨(dú)立地表示1-4的整數(shù)，條件是下列條件不同時(shí)成立R4＝-CH(CH3)-OH和R5＝-CH(CH3)-OH和R6＝-(CH2)4-NH2。
2.權(quán)利要求1的化合物，其特征在于下列條件不同時(shí)成立R4＝-CH2-OH或-CH(CH3)-OH和R5＝-CH(CH3)-OH和R6＝-(CH2)4-NH2；優(yōu)選地是下列條件不同時(shí)成立R2＝H和R4＝-CH2-OH或-CH(CH3)-OH和R5＝-CH(CH3)-OH和R6＝-(CH2)4-NH2。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于[R1(N(R2)CH(R3)C(O)-]殘基衍生自賴氨酸。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的化合物，其特征在于[-N(R2)CH(R4)C(O)-N(R2)CH(R5)C(O)-]中的殘基[-N(R2)CH(R4)C(O)-]衍生自蘇氨酸。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物，其特征在于[-N(R2)CH(R5)C(O)-]殘基衍生自蘇氨酸。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物，其特征在于[-N(R2)CH(R6)C(O)-]殘基來自鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸和2，3-二氨基丙酸。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的化合物，其特征在于[-(N(R2)CH(R4)C(O)-XR7]殘基衍生自絲氨酸。
8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的化合物，其特征在于所述化合物含有下列序列之一列1-Ser-Ser-Orn-序列2-Thr-Thr-Orn-序列3-Thr-Thr-Dab-序列4-Thr-Thr-Dap-
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的化合物，其特征在于所述化合物含有下列序列之一-Ser-Ser-Orn-、Lys-Thr-Thr-Orn-Ser、Lys-Thr-Thr-Dab-Ser或Lys-Thr-Thr-Dab-Ser以及用取代基R1、R2、R7和R8相應(yīng)衍生的序列。
10.權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的化合物，其特征在于在R2和/或R8中的烷基彼此獨(dú)立地表示甲基、乙基和丙基，優(yōu)選甲基；以及在R1和/或R7中的烷基分別含有1-4或8-22個(gè)碳原子，優(yōu)選1或2或14-17個(gè)碳原子。
11.權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)的化合物，其特征在于通式(I)的化合物與酸形成單價(jià)或多價(jià)、均一或混合的鹽，優(yōu)選與無機(jī)酸或適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)脂肪族飽和或不飽和羧酸，或者與芳香族羧酸，或者與芳香族-脂肪族羧酸，或者與雜環(huán)芳香族羧酸，或者與脂肪族或芳香族磺酸，優(yōu)選與乙酸和/或乳酸形成所述鹽。
12.權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的化合物，其特征在于所述化合物代表異構(gòu)體形式及其混合物以及旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物。
13.權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的化合物，其特征在于R1表示氫、-C(O)-R7或-SO2-R7，優(yōu)選-C(O)-R7或氫；R2彼此獨(dú)立地表示氫或甲基；R3和R6彼此獨(dú)立地表示-(CH2)q-NH2；R4和R5彼此獨(dú)立地表示-CH2-OH、-CH(CH3)OH或-CH2-CH2-OH；R7表示氫、甲基、乙基、丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正十一烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十四烷基、正十五烷基、正十六烷基、正十七烷基、正十八烷基、正十九烷基、異丙基、叔丁基、異丁基、仲丁基、異戊基、苯基、叔丁基苯基、甲苯基、1-或2-萘基、全氟丁基、十五碳氟庚基、(+)-或(-)-莰烷-2-基、8(Z)-十七碳烯基、8(Z)，11(Z)-十七碳二烯基、4(Z)，7(Z)，10(Z)，13(Z)-十九碳四烯基或8(Z)-11-羥基十八碳烯基、在ω位用氨基取代的1，2-二硫代戊基或(C1-C19)烷基或由甲基、氨基或鹵素在鄰位和/或?qū)ξ蝗芜x取代的苯基，優(yōu)選R7作為XR7一部分表示氫、甲基、乙基和/或R7作為R1一部分表示含有14-17個(gè)碳原子的烷基殘基；R8表示氫或甲基；X表示氧或-NH-，優(yōu)選氧；當(dāng)X＝O時(shí)，XR7表示α-生育酚、生育三烯酚或視黃醇的酯或羧酸(R7＝H)，優(yōu)選羧酸；m，n，p彼此獨(dú)立地表示0或1，和R3和R6中的q彼此獨(dú)立地表示整數(shù)1，2，3或4。
14.權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的化合物，其特征在于R7-C(O)-表示含有6，8，10，12，14，16或18個(gè)碳原子的飽和或不飽和脂肪酸殘基，優(yōu)選飽和脂肪酸的對(duì)應(yīng)殘基，優(yōu)選辛酸、月桂酸、十四烷酸、棕櫚酸和/或硬脂酸的對(duì)應(yīng)殘基。
15.下式化合物H-Dap-Ser-OH x 2TFA棕櫚酰-Orn-Ser-OH x TFA棕櫚酰-Orn-N-Me-Ser-OH x TFA棕櫚酰-Dab-Ser-OH x TFA月桂酰-Lys-Ser-OH x TFA棕櫚酰-Lys-Ser-OH x TFA油酰-Lys-Ser-OH x TFA十八烷基-NH-C(O)-Lys-Ser-Ser-Orn-Ser-OH x 2AcOH十六烷基-NH-C(O)-Lys-Ser-Ser-Orn-Ser-OH x 2AcOH十四烷基-NH-C(O)-Lys-Ser-Ser-Orn-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-Ser-Ser-Orn-Ser-OH x 2AcOH
16.通式(I)化合物棕櫚酰-Lys-Thr-Thr-Dap-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-Thr-Thr-Dab-Ser-OH x 2AcOH
17.通式(I)化合物月桂酰-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH十四碳酰-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH硬脂酰-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH棕櫚油酰-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH油酰-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH二十碳烯酰-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-Thr-Thr-Orn-Thr-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-Thr-Thr-Orn-N-Me-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-Thr-Thr-N-Me-Orn-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-Thr-N-Me-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-N-Me-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-N-Me-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-N-Et-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOH棕櫚酰-Lys-N-Pr-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOHC8H15-SO2-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOHC16H33-SO2-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOHC8F15-C(O)-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-OH x 2AcOHH-Lys-Thr-Thr-Orn-Ser-ORetinyl x 3AcOH
18.權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的化合物的合成方法，所述方法包括使用肽化學(xué)中已知的方法完全合成通式(I)的化合物，任選去掉剩余的保護(hù)基團(tuán)和任選酰化自由氨基和/或?qū)⑺@得的化合物轉(zhuǎn)化為酸加成鹽和/或?qū)⑺@得的酸加成鹽轉(zhuǎn)化為對(duì)應(yīng)的共軛堿或另一種鹽。
19.權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的化合物作為藥物的應(yīng)用，優(yōu)選作為皮膚藥用和/或化妝品用的活性成分，特別是用于提高人皮膚中的膠原和纖連蛋白的量。
20.權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)的化合物在用于制備皮膚藥用和/或化妝品用活性組合物中的應(yīng)用，尤其用于促進(jìn)傷口愈合和水合作用，作為皮膚護(hù)理品，尤其是防止皺紋的形成和加重以及抗所有自然或加速(太陽光線、污染)的皮膚衰老。
21.含有至少一種權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)中所述的化合物的皮膚藥用和/或化妝品用的活性組合物，以本發(fā)明的化合物和填充劑的重量為基礎(chǔ)計(jì)算，優(yōu)選的用量范圍是0.5ppm至5,000ppm(重量/重量)，優(yōu)選在1ppm至1000ppm(重量/重量)之間。
22.權(quán)利要求21的組合物，其特征在于所述組合物可以是溶液、分散體、乳劑或包膠在載體中的形式，優(yōu)選包膠在大膠囊、微膠囊或納米膠囊中，在脂質(zhì)體或乳糜微粒中，或包封在大、微或納米微粒中或在微真菌中或吸附在粉末化的有機(jī)聚合物、滑石粉、膨潤(rùn)土和其他無機(jī)載體上。
23.權(quán)利要求21的組合物，其特征在于所述組合物可以是乳化液、乳劑、洗劑、軟膏、凝膠狀和粘性、騰升和乳化的聚合物、香脂、香波、肥皂、凝膠、粉劑、栓劑、噴劑、潤(rùn)膚油、面膜或用于透皮涂敷的泥膏劑的形式。
24.權(quán)利要求21-23任一項(xiàng)的組合物，其特征在于所述組合物含有選自下列的常用成分提取的脂類和/或合成的脂類、凝膠狀和粘性、騰升和乳化的聚合物、水溶或脂溶的活性劑、植物提取物、組織提取物、海洋提取物、防曬劑、抗氧化劑、水分保持和阻隔劑和/或皮膚再生劑。
25.權(quán)利要求21-24任一項(xiàng)的組合物，作為皮膚藥用和/或化妝品用活性劑，尤其用于增加人皮膚中的膠原和纖連蛋白的量，用于促進(jìn)傷口愈合和水合作用，作為皮膚護(hù)理品，尤其用于防止皺紋的形成和加重和抗所有自然或加速(太陽光線、污染)的皮膚衰老。
26.增加人皮膚中的膠原和/或纖連蛋白的量和/或促進(jìn)傷口愈合和水合作用和/或延緩或治療皮膚衰老的方法，其特征在于在皮膚上施用權(quán)利要求1-17的化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了寡肽及其衍生物，肽類似物及其衍生物以及這些化合物的藥用鹽，這些化合物符合下列通式(I)如上式其中R
文檔編號(hào)C07K14/435GK1582302SQ02821861
公開日2005年2月16日 申請(qǐng)日期2002年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月30日
發(fā)明者克里斯蒂安·盧丁, 馬克·海德爾, 胡戈·齊格勒 申請(qǐng)人:彭特法姆股份公司