專利名稱：作為胰島素樣生長因子－1受體(igf－1)調(diào)節(jié)劑的嘧啶衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及嘧啶衍生物、其制備方法、含有該化合物的藥物組合物、制備該藥物組合物的方法以及它們?cè)谥委熤械挠猛尽?br> 胰島素樣生長因子(IGF)軸由配體、受體、結(jié)合蛋白和蛋白酶組成。IGF-I和IGF-II兩種配體是通過與一種異型四聚(hetero-tetrameric)細(xì)胞表面受體，即1型胰島素樣生長因子受體(IGF-1R)的相互作用傳遞信號(hào)的促細(xì)胞分裂肽。任一配體的結(jié)合都會(huì)刺激β-鏈細(xì)胞內(nèi)區(qū)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的活化，使數(shù)種酪氨酸激酶殘基發(fā)生磷酸化作用，從而補(bǔ)充并活化各種信號(hào)分子。人們已證實(shí)細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域?yàn)榧?xì)胞內(nèi)有絲分裂發(fā)生、存活、轉(zhuǎn)化和分化傳送信號(hào)。Adams等人(Cellular and Molecular Life Sciences，57，1050-1093，2000)綜述了IGF-1R的結(jié)構(gòu)與功能。IGF-IIR(也即是所知的6-磷酸甘露糖酯受體)沒有這種激酶結(jié)構(gòu)域，并且不傳輸有絲分裂發(fā)生信號(hào)，但可以調(diào)節(jié)配體在細(xì)胞表面的有效性，抵消IGF-1R的作用。IGF結(jié)合蛋白(IGFBP)控制循環(huán)IGF的有效性，并且IGF從這些循環(huán)中的釋放可通過蛋白酶剪切進(jìn)行調(diào)解。Collett-Solberg和Cohen(Endocrine，12，121-136，2000)對(duì)IGF軸的這些其它組分進(jìn)行過綜述。
對(duì)IGF傳送信號(hào)與細(xì)胞轉(zhuǎn)化及腫瘤發(fā)生和發(fā)展之間的關(guān)聯(lián)有大量的證據(jù)。人們已將IGF視為防止致癌基因誘發(fā)細(xì)胞死亡的主要存活因素(Harrington等，EMBO J，13，3286-3295，1994)。已證實(shí)缺乏IGF-1R的細(xì)胞難以被幾種不同的能有效轉(zhuǎn)化相應(yīng)的野生型細(xì)胞的致癌基因(包括SV40T抗原和ras)所轉(zhuǎn)化(Sell等，Mol.Cell Biol.，14，3604-12，1994)。人們已描述了IGF軸的各種組分在各種腫瘤細(xì)胞系及組織中，尤其是在乳房腫瘤(Surmacz，Journal of MammaryGland Biology & Neoplasia，5，95-105，2000)、前列腺腫瘤(Djavan等，World J.Urol.，19，225-233，2001和O’Brien等，Urology，58，1-7，2001)和結(jié)腸腫瘤(Guo等，Gastroenterology，102，1101-1108，1992)中的正調(diào)節(jié)作用。相反，IGF-IIR被指為一種腫瘤抑制劑，并在一些癌癥中缺失(DaCosta等，Journal of Mammary Gland Biology &Neoplasia，5，85-94，2000)。近年來對(duì)增加循環(huán)IGF(或增加IGF-1與IGFBP3的比例)與致癌風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)所做的流行病學(xué)研究與日俱增(Yu和Rohan，J.Natl.Cancer Inst.，92，1472-1489，2000)。轉(zhuǎn)基因小鼠模型也揭示IGF在腫瘤細(xì)胞增殖開始時(shí)的信號(hào)傳輸作用(Lamm和Christofori，Cancer Res.，58，801-807，1998和Foster等，Cancer Metas.Rev.，17，317-324，1998及DiGiovanni等，Proc.Natl.Acad.Sci.，97，3455-3460，2000)。
一些體外和體內(nèi)對(duì)策提供了以下主要證據(jù)，即對(duì)IGF-1R傳輸信號(hào)的抑制使轉(zhuǎn)化表型反向，并抑制腫瘤細(xì)胞的生長。這包括中和抗體(Kalebic等，Cancer Res.，54，5531-5534，1994)、反義寡核苷酸(Resnicoff等，Cancer Res.，54，2218-2222，1994)、三重螺旋成形寡核苷酸(Rinninsland等，Proc.Natl.Acad.Sci.，94，5854-5859，1997)、反義mRNA(Nakamura等，Cancer Res.，60，760-765，2000)和顯性失活受體(D’Ambrosio等，Cancer Res.，56，4013-4020，1996)。反義寡核苷酸顯現(xiàn)出對(duì)IGF-1R表達(dá)的抑制，其結(jié)果是誘導(dǎo)體內(nèi)細(xì)胞發(fā)生編程性細(xì)胞死亡(Resnicoff等，Cancer Res，55，2463-2469，1995)，并且這些反義寡核苷酸已進(jìn)入人體(Resnicoff等，Proc.Amer.Assoc.Cancer Res.，40摘要4816，1999)。然而，對(duì)于治療主要的實(shí)體瘤疾病而言，這些方法中沒有一個(gè)是特別引人注目的。
由于增加的IGF信號(hào)傳輸意味著腫瘤細(xì)胞的生長及存活，而阻斷IGF-1R功能能夠改變這個(gè)過程，因此抑制IGF-1R酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域是一種治療癌癥的合適療法。采用各種顯性失活I(lǐng)GF-1R變體所進(jìn)行的體外及體內(nèi)研究支持了這一觀點(diǎn)。特別是，已被證實(shí)阻斷受體酪氨酸激酶活性的ATP結(jié)合位點(diǎn)上的點(diǎn)突變?cè)诜乐鼓[瘤細(xì)胞生長方面有效(Kulik等，Mol.Cell.Biol.，17，1595-1606，1997)。有一些證據(jù)暗示正常細(xì)胞對(duì)由于抑制IGF信號(hào)傳輸而引起的編程性細(xì)胞死亡不那么敏感，這表明采用這種治療的治療范圍是可能的(Baserga，Trends Biotechnol.，14，150-2，1996)。
對(duì)各種選擇性IGF-1R酪氨酸激酶抑制劑的報(bào)道為數(shù)不多。Parrizas等描述了在體外及體內(nèi)具有一些效力的酪氨酸磷酸化抑制劑(Parrizas等，Endocrinology，1381427-33(1997))。這些化合物的效能適中，并且對(duì)胰島素受體具有選擇性。Telik Inc.描述了對(duì)胰島素受體具有選擇性但在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞的效能仍然一般的雜芳基-芳基脲(公開的PCT專利申請(qǐng)WO 00/35455號(hào))。
本發(fā)明提供了下式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物 其中R1代表包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(各自均可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基(-NH2)、羥基和三氟甲基的取代基取代)、鹵素、硝基、氰基、-NR5R6、羧基、羥基、C2-C6烯基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷基羰基氨基、苯基羰基、-S(O)mC1-C6烷基、-C(O)NR7R8、-SO2NR7aR8a；和可包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的不飽和5至6元環(huán)，所述環(huán)本身任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(各自均可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基(-NH2)、羥基和三氟甲基的取代基取代)、鹵素、硝基、氰基、-NR9R10、羧基、羥基、C2-C6烯基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷基羰基氨基、苯基羰基、-S(O)nC1-C6烷基、-C(O)NR11R13和-SO2NR11aR12a；m為0、1或2；n為0、1或2；R2代表任選被至少一個(gè)選自鹵素、羥基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C4烷基；R3代表氫、鹵素或三氟甲基；R4代表包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(各自均可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基(-NH2)、羥基和三氟甲基的取代基取代)、鹵素、硝基、氰基、-NR13R14、羧基、羥基、C2-C6烯基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C4烷氧基羰基、C1-C4烷基羰基、C1-C4烷基羰基氨基、苯基羰基、-S(O)pC1-C4烷基、-C(O)NR15R16和-SO2NR15aR16a；p為0、1或2；R5和R6各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R5和R6與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R7和R8各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R7和R8與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R7a和R8a各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R7a和R8a與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R9和R10各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R9和R10與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R11和R12各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R11和R12與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R11a和R12a各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R11a和R12a與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；
R13和R14各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R13和R14與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R15和R16各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R15和R16與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；以及R15a和R16a各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R15a和R16a與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)。
在本說明書的上下文中，除非另有說明，否則烷基取代基或取代基中的烷基部分可以是直鏈，也可以是支鏈。當(dāng)R5和R6，或R7和R8，或R7a和R8a，或R9和R10，或R11和R12，或R11a和R12a，或R13和R14，或R15和R16，或R15a和R16a代表飽和的雜環(huán)時(shí)，應(yīng)清楚唯一存在的雜原子是R5和R6，或R7和R8，或R7a和R8a，或R9和R10，或R11和R12，或R11a和R12a，或R13和R14，或R15和R16，或R15a和R16a連接于其上的氮原子。在R1的定義中應(yīng)注意不飽和的5至6元環(huán)可以具有脂環(huán)族或芳族的各種特性。
“C1-C6烷基”和“C1-C4烷基”的例子包括甲基、乙基、異丙基和叔丁基。“C1-C6烷氧基羰基”的例子包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丁氧基羰基和叔丁氧基羰基。“C1-C6烷氧基”和“C1-C3烷氧基”的例子包括甲氧基、乙氧基和丙氧基?！癈1-C6烷基羰基氨基”的例子包括甲酰氨基、乙酰氨基和丙酰氨基?！癝(O)mC1-C6烷基”中m為0-2的例子包括甲硫基、乙硫基、甲基亞硫?；?、乙基亞硫?；?、甲磺?；鸵一酋；??！癈1-C6烷基羰基”的例子包括丙?；鸵阴；??！癈2-C6烯基”的例子有乙烯基、烯丙基和1-丙烯基。“C3-C6環(huán)烷基”的例子有環(huán)丙基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
“包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)”是完全不飽和的、含有5或6個(gè)原子的芳族單環(huán)(其中至少一個(gè)為選自氮、氧和硫的雜原子)，除非另有說明，否則可與碳或氮相連接。適宜的“包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)”有吡啶基、咪唑基、異噁唑基、吡唑基、呋喃基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、吡咯基或噻吩基；所述吡啶基、咪唑基、異噁唑基、吡唑基、呋喃基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、吡咯基或噻吩基。
“可包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的不飽和5至6元環(huán)”是完全或部分不飽和的、含有5或6個(gè)原子(其中任選至少一個(gè)為選自氮、氧和硫的雜原子)的單環(huán)，并且除非另有說明，否則可與碳或氮相連接。適宜的“可包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的不飽和5至6元環(huán)”有苯基或吡啶基。
“包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5元雜芳環(huán)”是完全不飽和的、含有5個(gè)原子(其中至少一個(gè)為選自氮、氧和硫的雜原子)的芳族單環(huán)，除非另有說明，否則可與碳或氮相連接。適宜的“包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5元雜芳環(huán)”有吡唑基。
R1代表包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子(如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)環(huán)雜原子)的任選取代的5或6元雜芳環(huán)。雜芳環(huán)的例子包括噻吩基(如3-噻吩基)、吡唑基(如4-吡唑基)、異噁唑基(如5-異噁唑基)、噻二唑基、吡咯基(如2-吡咯基)、呋喃基(如2-或3-呋喃基)、噻唑基、三唑基、四唑基、咪唑基(如4-咪唑基)、吡嗪基(如2-吡嗪基)、噠嗪基(如3-噠嗪基)、嘧啶基(如4-或5-嘧啶基)和吡啶基(2-、3-或4-吡啶基)。
在R1中，所述5或6元雜芳環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基(如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)取代基)所取代C1-C6烷基、特別是C1-C4烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基或正己基)；C1-C6烷氧基、特別是C1-C4烷氧基(如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基或正己氧基)(各C1-C6烷基和C1-C6烷氧基取代基任選被至少一個(gè)例如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)選自鹵素(如氟、氯、溴或碘)、氨基、羥基和三氟甲基的取代基所取代)；鹵素(如氟、氯、溴或碘)；硝基；氰基；-NR5R6；羧基；羥基；C2-C6烯基、特別是C2-C4烯基(如乙烯基)；C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；C1-C6烷氧基羰基、特別是C1-C4烷氧基羰基(如甲氧基羰基或乙氧基羰基)；C1-C6烷基羰基、特別是C1-C4烷基羰基(如甲基羰基、乙基羰基、正丙基羰基、異丙基羰基、正丁基羰基、正戊基羰基或正己基羰基)；C1-C6烷基羰基氨基、特別是C1-C4烷基羰基氨基(如甲基羰基氨基或乙基羰基氨基)；苯基羰基；-S(O)mC1-C6烷基、特別是-S(O)mC1-C4烷基；-C(O)NR7R8；-SO2NR7aR8a；以及可包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子(如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)環(huán)雜原子)的任選取代的不飽和5至6元環(huán)。
不飽和5至6元環(huán)的例子包括苯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、噻吩基(如3-噻吩基)、吡唑基(如4-吡唑基)、異噁唑基(如5-異噁唑基)、噻二唑基、吡咯基(如2-吡咯基)、呋喃基(如2-或3-呋喃基)、噻唑基、三唑基、四唑基、咪唑基(如4-咪唑基)、吡嗪基(如2-吡嗪基)、噠嗪基(如3-噠嗪基)、嘧啶基(如4-或5-嘧啶基)和吡啶基(2-、3-或4-吡啶基)。所述環(huán)本身可任選被至少一個(gè)選自以下的取代基(如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)取代基)所取代C1-C6烷基、特別是C1-C4烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基或正己基)；C1-C6烷氧基、特別是C1-C4烷氧基(如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基或正己氧基)(各C1-C6烷基和C1-C6烷氧基取代基任選被至少一個(gè)例如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)選自鹵素(如氟、氯、溴或碘)、氨基、羥基和三氟甲基的取代基所取代)；鹵素(如氟、氯、溴或碘)；硝基；氰基；-NR9R10；羧基；羥基；C2-C6烯基、特別是C2-C4了烯基(如乙烯基)；C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；C1-C6烷氧基羰基、特別是C1-C4烷氧基羰基(如甲氧基羰基或乙氧基羰基)；C1-C6烷基羰基、特別是C1-C4烷基羰基(如甲基羰基、乙基羰基、正丙基羰基、異丙基羰基、正丁基羰基、正戊基羰基或正己基羰基)；C1-C6烷基羰基氨基、特別是C1-C4烷基羰基氨基(如甲基羰基氨基或乙基羰基氨基)；苯基羰基；-S(O)nC1-C6烷基、特別是-S(O)nC1-C4烷基；-C(O)NR11R12和-SO2NR11aR12a。
可變基團(tuán)的具體數(shù)值如下?？刹捎门c本說明書前后所定義的任何定義、權(quán)利要求或?qū)嵤┓桨赶噙m應(yīng)的任何數(shù)值。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R1代表包含1個(gè)或2個(gè)選自氮和氧的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素、硝基、氰基、-NR5R6、羧基、羥基、C2-C6烯基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷基羰基氨基、苯基羰基、-S(O)mC1-C6烷基、-C(O)NR7R8、-SO2NR7aR8a；以及可包含1個(gè)環(huán)氮原子的不飽和6元環(huán)，所述環(huán)本身任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素、硝基、氰基、-NR9R10、羧基、羥基、C2-C6烯基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷基羰基氨基、苯基羰基、-S(O)nC1-C6烷基、-C(O)NR11R12和-SO2NR11aR12a。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，R1代表包含1個(gè)或2個(gè)選自氮和氧的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素、苯基和吡啶基，苯基和吡啶基取代基各自本身任選被至少一個(gè)選自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和鹵素的取代基所取代。
在另一方面，R1代表包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(各自可任選被至少一個(gè)選自羥基的取代基所取代)、鹵素、-C(O)NR7R8、C1-C6烷氧基羰基；以及可包含至少一個(gè)選自氮和氧的環(huán)雜原子的不飽和5至6元環(huán)，所述環(huán)本身任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(各自可任選被至少一個(gè)選自鹵素的取代基所取代)、鹵素和氰基；其中R7和R8兩者均為氫或R7和R8與其所連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)。
在另一方面，R1代表吡啶基、咪唑基、異噁唑基、吡唑基、呋喃基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、吡咯基或噻吩基；所述吡啶基、咪唑基、異噁唑基、吡唑基、呋喃基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、吡咯基和噻吩基任選被至少一個(gè)選自甲基、異丙基、羥甲基、甲氧基、氯、溴、氨基甲?；⒓籽趸驶?、吡咯烷-1-基羰基、苯基和吡啶基的取代基所取代；所述苯基或吡啶基任選被至少一個(gè)選自甲基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、氟、氯、溴和氰基的取代基所取代。
在另一方面，R1代表吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、2-甲氧基吡啶-5-基、2-氰基吡啶-5-基、3-溴代吡啶-5-基、3-(吡啶-2-基)吡啶-5-基、4-(吡啶-2-基)吡啶-2-基、3-氯代吡啶-2-基、3-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-2-基、5，6-二甲基吡啶-2-基、咪唑-4-基、咪唑-5-基、3-甲基異噁唑-5-基、5-甲基異噁唑-3-基、3-異丙基異噁唑-5-基、3-甲氧基羰基異噁唑-5-基、3-(羥甲基)異噁唑-5-基、3-氨基甲?；悋f唑-5-基、3-(吡咯烷-1-基羰基)異噁唑-5-基、3-苯基異噁唑-5-基、3-(吡啶-2-基)異噁唑-5-基、3-(2-甲氧基吡啶-3-基)異噁唑-5-基、3-(2-甲氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(3-甲氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-乙氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-三氟甲基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-三氟甲氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-氯代苯基)異噁唑-5-基、3-(2-溴代苯基)異噁唑-5-基、3-(2-甲基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-氟代苯基)異噁唑-5-基、3-(2-氰基苯基)異噁唑-5-基、5-甲基吡唑-4-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、5-甲基呋喃-2-基、吡嗪-2-基、2-甲基吡嗪-5-基、噠嗪-3-基、嘧啶-4-基、1-甲基吡咯-2-基和噻吩-3-基。
R2代表任選被至少一個(gè)選自鹵素(如氟、氯、溴或碘)、羥基和C1-C3烷氧基(如甲氧基、乙氧基和正丙氧基)的取代基(如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)取代基)所取代的C1-C4烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R2代表CH2或(CH2)2。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2代表C1-C4烷基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2代表甲基、乙基和丙基。
R3代表氫、鹵素(如氟、氯、溴或碘)或三氟甲基。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R3代表氯或溴。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3代表氫或鹵素。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3代表氫、氯或溴。
R4代表包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子(如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)環(huán)雜原子)的任選取代的5元雜芳環(huán)。所述環(huán)的例子包括噻吩基(如3-噻吩基)、吡唑基(如4-吡唑基)、異噁唑基(如5-異噁唑基)、噻二唑基、吡咯基(如2-吡咯基)、呋喃基(如2-或3-呋喃基)、噻唑基、三唑基、四唑基、咪唑基(如4-咪唑基)。
R4中的5元雜芳環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基(如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)取代基)所取代C1-C6烷基、特別是C1-C4烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基或正己基)；C1-C6烷氧基、特別是C1-C4烷氧基(如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基或正己氧基)(每一個(gè)C1-C6烷基和C1-C6烷氧基取代基任選被至少一個(gè)例如分別為1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)選自鹵素(如氟、氯、溴或碘)、氨基、羥基和三氟甲基的取代基所取代)；鹵素(如氟、氯、溴或碘)；硝基；氰基；-NR13R14；羧基；羥基；C2-C6烯基、特別是C2-C4烯基(如乙烯基)；C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；C1-C4烷氧基羰基、特別是C1-C3烷氧基羰基(如甲氧基羰基或乙氧基羰基)；C1-C4烷基羰基、特別是C1-C3烷基羰基(如甲基羰基、乙基羰基、正丙基羰基、異丙基羰基或正丁基羰基)；C1-C4烷基羰基氨基、特別是C1-C3烷基羰基氨基(如甲基羰基氨基或乙基羰基氨基)；苯基羰基；-S(O)pC1-C4烷基、特別是-S(O)pC1-C2烷基；-C(O)NR15R16和-SO2NR15aR16a。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R4代表包含1個(gè)或2個(gè)選自氮和氧的環(huán)雜原子的5元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素、硝基、氰基、-NR13R14、羧基、羥基、C2-C6烯基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C4烷氧基羰基、C1-C4烷基羰基、C1-C4烷基羰基氨基、苯基羰基、-S(O)pC1-C4烷基、-C(O)NR15R16和-SO2NR15aR16a。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，R4代表包含2個(gè)環(huán)氮原子的5元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵素和C3-C6環(huán)烷基的取代基所取代。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R4代表包含至少1個(gè)選自氮的環(huán)雜原子的5元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自C1-C6烷基和C3-C6環(huán)烷基的取代基所取代。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R4代表吡唑基，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自甲基、乙基、異丙基、丙基、叔丁基和環(huán)丙基的取代基所取代。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R4代表5-甲基吡唑-3-基、5-乙基吡唑-3-基、5-異丙基吡唑-3-基、5-丙基吡唑-3-基、5-叔丁基吡唑-3-基和5-環(huán)丙基吡唑-3-基。
R5和R6各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基，特別是C1-C2烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)或C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；或R5和R6與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)(如吡咯烷基或哌啶基)。
R7和R8各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基，特別是C1-C2烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)或C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；或R7和R8與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)(如吡咯烷基或哌啶基)。
R7a和R8a各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基，特別是C1-C2烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)或C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)已基)；或R7a和R8a與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)(如吡咯烷基或哌啶基)。
R9和R10各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基，特別是C1-C2烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)或C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；或R9和R10與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)(如吡咯烷基或哌啶基)。
R11和R12各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基，特別是C1-C2烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)或C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；或R11和R12與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)(如吡咯烷基或哌啶基)。
R11a和R12a各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基，特別是C1-C2烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)或C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；或R11a和R12a與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)(如吡咯烷基或哌啶基)。
R13和R14各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基，特別是C1-C2烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)或C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；或R13和R14與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)(如吡咯烷基或哌啶基)。
R15和R16各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基，特別是C1-C2烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)或C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；或R15和R16與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)(如吡咯烷基或哌啶基)。
R15a和R16a各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基，特別是C1-C2烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基)或C3-C6環(huán)烷基(環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基)；或R15a和R16a與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)(如吡咯烷基或哌啶基)。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供了式(I)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物的子集，其中
R1代表包含1個(gè)或2個(gè)選自氮和氧的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自C1-C3烷基、吡啶基和任選被甲氧基取代的苯基的取代基所取代；R2代表C1-C2烷基；R3代表氯或溴；和R4代表被至少一個(gè)選自C1-C4烷基和環(huán)丙基的取代基所取代的吡唑基。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)(如上所述)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R1代表包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(各自可任選被至少一個(gè)選自羥基的取代基所取代)、鹵素、-C(O)NR7R8、C1-C6烷氧基羰基；以及可包含至少一個(gè)選自氮和氧的環(huán)雜原子的不飽和5至6元環(huán)，所述環(huán)本身任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(各自可任選被至少一個(gè)選自鹵素的取代基所取代)、鹵素和氰基；其中R7和R8兩者均為氫或R7和R8與其所連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R2代表C1-C4烷基；R3代表氫或鹵素；和R4代表包含至少一個(gè)選自氮的環(huán)雜原子的5元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自C1-C6烷基和C3-C6環(huán)烷基的取代基所取代。
本發(fā)明的另一方面提供了式(I)(如上所述)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R1代表吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、2-甲氧基吡啶-5-基、2-氰基吡啶-5-基、3-溴代吡啶-5-基、3-(吡啶-2-基)吡啶-5-基、4-(吡啶-2-基)吡啶-2-基、3-氯代吡啶-2-基、3-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-2-基、5，6-二甲基吡啶-2-基、咪唑-4-基、咪唑-5-基、3-甲基異噁唑-5-基、5-甲基異噁唑-3-基、3-異丙基異噁唑-5-基、3-甲氧基羰基異噁唑-5-基、3-(羥甲基)異噁唑-5-基、3-氨基甲?；悋f唑-5-基、3-(吡咯烷-1-基羰基)異噁唑-5-基、3-苯基異噁唑-5-基、3-(吡啶-2-基)異噁唑-5-基、3-(2-甲氧基吡啶-3-基)異噁唑-5-基、3-(2-甲氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(3-甲氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-乙氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-三氟甲基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-三氟甲氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-氯代苯基)異噁唑-5-基、3-(2-溴代苯基)異噁唑-5-基、3-(2-甲基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-氟代苯基)異噁唑-5-基、3-(2-氰基苯基)異噁唑-5-基、5-甲基吡唑-4-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、5-甲基呋喃-2-基、吡嗪-2-基、2-甲基吡嗪-5-基、噠嗪-3-基、嘧啶-4-基、1-甲基吡咯-2-基和噻吩-3-基；R2代表甲基、乙基和丙基；R3代表氫、氯或溴；和R4代表5-甲基吡唑-3-基、5-乙基吡唑-3-基、5-異丙基吡唑-3-基、5-丙基吡唑-3-基、5-叔丁基吡唑-3-基和5-環(huán)丙基吡唑-3-基。
本發(fā)明化合物的例子包括5-溴-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-環(huán)丙基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(3-異丙基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(3-苯基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-[3-(2-甲氧基苯基)異噁唑-5-基甲基氨基]-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-[3-(2-甲氧基苯基)異噁唑-5-基甲基氨基]-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(3-吡啶-2-基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(3-吡啶-2-基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(2-呋喃-2-基乙基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(吡啶-3-基甲基氨基)-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(吡啶-3-基甲基氨基)-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(吡啶-2-基甲基氨基)-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(吡啶-3-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-[2-(咪唑-4-基乙基)氨基]-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(吡啶-2-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-[2-(吡啶-2-基)乙基氨基]-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-[2-(吡啶-3-基)乙基氨基]-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(5-甲基吡嗪-2-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(吡啶-3-基甲基氨基)-4-(5-環(huán)丙基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；以及任何上述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物。
在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的具體化合物為實(shí)施例3、5、8、9、11、12、34、39、40、41、47、48、68、70和79中的任何一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物。
在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的具體化合物為各實(shí)施例中的任何一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物。
本發(fā)明還提供一種制備如上所定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物的方法，所述方法包括(i)使下式的化合物 [其中L1代表離去基團(tuán)(例如鹵素或磺酰氧基，如甲磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基)，R3和R4如式(I)所定義]與式(III)H2N-R2-R1[其中R1和R2如式(I)所定義]的化合物進(jìn)行反應(yīng)；或(ii)使下式的化合物 [其中L2代表離去基團(tuán)(例如鹵素或磺酰氧基，如甲磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基)，R1、R2和R3如式(I)所定義]與式(V)H2N-R4[其中R4如式(I)所定義]的化合物進(jìn)行反應(yīng)；或
(iii)使下式的化合物 [其中R1和R2如式(I)所定義]與下式的化合物進(jìn)行反應(yīng) [其中X代表氧原子，q為1，或者X代表氮原子，q為2，每一個(gè)R20各自代表C1-C6烷基，R3和R4如式(I)所定義]；或(iv)當(dāng)R4代表取代的吡唑基時(shí)，使下式的化合物 [其中R21代表C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基，R1、R2和R3如式(I)所定義]與肼進(jìn)行反應(yīng)；并且任選在(i)、(ii)、(iii)或(iv)之后進(jìn)行以下步驟的一個(gè)或多個(gè)●將所得的化合物轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的其它化合物●形成所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
可方便地如下進(jìn)行方法(i)和(ii)a)在適宜的溶劑，例如丙酮等酮或者乙醇或丁醇等醇或者甲苯或N-甲基吡咯烷-2-酮等芳烴存在下，任選在適宜的酸例如鹽酸或硫酸等無機(jī)酸或者乙酸或甲酸等有機(jī)酸(或適合的路易斯酸)存在下，并且在0℃至回流，特別是回流的溫度范圍內(nèi)；或b)在標(biāo)準(zhǔn)Buchwald條件下(例如參見J.Am.Chem.Soc.，118，7215；J.Am.Chem.Soc.，119，8451；J.Org.Chem.，62，1568和6066)，例如在乙酸鈀的存在下，在具有適宜的堿如碳酸銫等無機(jī)堿或叔丁醇鉀等有機(jī)堿的適宜溶劑例如甲苯、苯或二甲苯等芳族溶劑中，在適宜的配體如2，2’-雙(二苯膦基)-1，1’-聯(lián)萘存在下以及在25-80℃的溫度范圍內(nèi)。
方法(iii)可方便地在適宜的溶劑如N-甲基吡咯烷酮或丁醇中，在100-200℃、特別是150-170℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。反應(yīng)優(yōu)選在適宜的堿如甲醇鈉或碳酸鉀的存在下進(jìn)行。
方法(iv)可在適宜的溶劑例如乙醇或丁醇等醇中，在50-120℃、特別是70-100℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)和(VIII)的化合物可以是市場上買得到的，在文獻(xiàn)中已知的，也可以采用已知的技術(shù)進(jìn)行制備。
采用標(biāo)準(zhǔn)方法可將式(I)的化合物轉(zhuǎn)化為式(I)的其它化合物。可采用的轉(zhuǎn)化反應(yīng)類型的例子包括通過芳族取代反應(yīng)引入取代基、取代基的還原反應(yīng)、取代基的烷基化反應(yīng)和取代基的氧化反應(yīng)。這些方法的試劑和反應(yīng)條件在化學(xué)領(lǐng)域中是眾所周知的。芳族取代反應(yīng)的具體例子包括采用濃硝酸引入硝基；在弗瑞德-克來福特條件下采用例如酰鹵和路易斯酸(如三氯化鋁)引入?；?；在弗瑞德-克來福特條件下采用烷基鹵和路易斯酸(如三氯化鋁)引入烷基；以及引入鹵代基團(tuán)。還原反應(yīng)的具體例子包括通過采用鎳催化劑進(jìn)行催化氫化或在鹽酸存在和加熱條件下用鐵進(jìn)行處理將硝基還原為氨基；氧化反應(yīng)的具體例子包括將烷硫基氧化為烷基亞硫酰基或烷基磺?；?br> 本領(lǐng)域的技術(shù)人員將意識(shí)到在本發(fā)明的方法中，原料試劑或中間化合物中的一些官能團(tuán)如羥基或氨基需要得到保護(hù)基的保護(hù)。因此，式(I)化合物的制備在不同的階段中將包括一個(gè)或多個(gè)保護(hù)基的添加和去除。
有關(guān)官能團(tuán)的保護(hù)與脫保護(hù)見述于“Protective Groups in OrganicChemistry”，J.W.F.McOmie編輯，Plenum Press(1973)和“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”，第二版，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience(1991)。
可將上述式(I)化合物轉(zhuǎn)化為其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，優(yōu)選為酸加成鹽，如氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、延胡索酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、甲磺酸鹽或?qū)妆交撬猁}；或堿金屬鹽，如鈉鹽或鉀鹽。
某些式(I)化合物能夠以立體異構(gòu)體的形式存在。應(yīng)認(rèn)識(shí)到本發(fā)明包括式(I)化合物及其混合物(包括外消旋物)的所有幾何異構(gòu)體和旋光異構(gòu)體(包括阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體)的用途?；プ儺悩?gòu)體及其混合物的用途也構(gòu)成了本發(fā)明的一個(gè)方面。例如，當(dāng)R4為吡唑基時(shí)，吡唑基-5-基和吡唑基-3-基是同一化合物的互變異構(gòu)體。
式(I)化合物具有作為藥物的活性，特別是作為胰島素樣生長因子-1受體(IGF-1R)活性調(diào)節(jié)劑或抑制劑，可用于治療各種增殖和超增殖疾病/癥狀，其例子包括以下癌癥(1)各種惡性腫瘤，包括膀胱癌、腦癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、子宮頸癌、結(jié)腸癌、甲狀腺癌和皮膚癌；(2)淋巴系統(tǒng)的各種造血腫瘤，包括急性淋巴細(xì)胞白血病、B細(xì)胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤；(3)骨髓系統(tǒng)的各種造血腫瘤，包括急性與慢性骨髓性白血病和前骨髓細(xì)胞白血??；(4)間充質(zhì)原點(diǎn)的各種腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；和
(5)其它腫瘤，包括黑瘤、精原細(xì)胞瘤、tetratocarcinoma、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)膠質(zhì)瘤。
本發(fā)明化合物特別可用于治療乳房和前列腺的腫瘤。
因此，本發(fā)明提供了如此前所定義的用于治療的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
本發(fā)明在另一方面提供了如前所定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物在生產(chǎn)用于治療的藥物中的用途。
在本說明書的上下文中，除非具體指明有相反意思，否則術(shù)語“治療”也包括“預(yù)防”。相應(yīng)地，術(shù)語“治療的”和“治療地”情況也一樣。
本發(fā)明也提供了一種治療癌癥的方法，該方法包括給予有此需要的患者治療有效量的如前所定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
本發(fā)明還提供了一種調(diào)節(jié)胰島素樣生長因子-1受體(IGF-1R)活性的方法，該方法包括給予有此需要的患者治療有效量的如前所定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物可單獨(dú)使用，但通常以藥物組合物的形式給藥，其中式(I)化合物/鹽/溶劑合物(活性成分)與藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體結(jié)合。根據(jù)給藥的模式，所述藥物組合物優(yōu)選包含0.05-99％w(重量百分?jǐn)?shù))、更優(yōu)選0.05-80％w、還更優(yōu)選0.10-70％w，甚至更優(yōu)選0.10-50％w的活性成分，所有的重量百分?jǐn)?shù)均基于總的組合物重量計(jì)。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，該組合物包含如前所定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，以及包含藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體。
本發(fā)明還提供了一種制備本發(fā)明藥物組合物的方法，該方法包括將如前所定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物與藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體進(jìn)行混合。
所述藥物組合物可以如下形式給予以例如乳膏劑、溶液、混懸劑、七氟烷烴氣霧劑和干粉制劑的形式進(jìn)行局部給藥(如施用于皮膚或肺部和/或氣管)；例如通過以片劑、膠囊劑、糖漿劑、散劑或顆粒劑的形式經(jīng)口服進(jìn)行全身給藥；或以溶液或混懸劑的形式進(jìn)行胃腸外給藥；或進(jìn)行皮下給藥；或以栓劑的形式進(jìn)行直腸給藥；或進(jìn)行透皮給藥。
本發(fā)明組合物可以采用本領(lǐng)域眾所周知的各種常見藥物賦形劑通過常規(guī)方法得到。因此，用于口服的組合物可以含有例如一種或多種著色劑、甜味劑、矯味劑和/或防腐劑。
用于片劑的適宜的藥學(xué)上可接受的各種賦形劑包括例如各種惰性稀釋劑如乳糖、碳酸鈉、磷酸鈣或碳酸鈣、成粒劑和崩解劑如玉米淀粉或algenic酸；粘合劑如淀粉；潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石；防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或丙酯和抗氧化劑如抗壞血酸。片劑可以不進(jìn)行包衣或包衣以便改善其崩解及其后活性成分在胃腸道內(nèi)的吸收，或改進(jìn)其穩(wěn)定性和/或外觀，各種情況下均采用本領(lǐng)域眾所周知的常見包衣材料及方法。
用于口服的組合物可以是硬明膠膠囊的形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合；或?yàn)檐浢髂z膠囊的形式，其中活性成分與水或油如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。
含水混懸劑一般可含有細(xì)粉狀活性成分及一種或多種懸浮劑如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍樹膠和阿拉伯樹膠；分散劑或濕潤劑如卵磷脂或烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)或環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物(如十七乙烯氧基鯨蠟醇)或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯山梨糖醇一油酸酯)或環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物(如十七乙烯氧基鯨蠟醇)或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯山梨糖醇一油酸酯)或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物(如聚乙烯脫水山梨醇一油酸酯)。含水懸混劑還可含有一種或多種防腐劑(如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化劑(如抗壞血酸)、著色劑、矯味劑和/或甜味劑(如蔗糖、糖精或天冬甜精)。
油性懸混劑可通過將活性成分懸浮于植物油(如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油(如液體石蠟)進(jìn)行配制。油性懸混劑也可含有增稠劑，如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可加入如上所述的甜味劑和矯味劑以得到可口的口服制劑?？赏ㄟ^加入抗氧化劑如抗壞血酸保存這些組合物。
適用于通過加入水制備含水懸混劑的可分散粉末及顆粒一般含有活性成分和分散劑或濕潤劑、懸浮劑及一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或濕潤劑及懸浮劑為上述已列舉的那些。還可存在其它的賦形劑如甜味劑、矯味劑和著色劑。
本發(fā)明的藥物組合物也可以是水包油型乳液。油相可以是例如橄欖油或花生油等植物油或例如液體石蠟等礦物油或其混合物。適宜的乳化劑可以是例如各種天然形成的樹膠，如阿拉伯樹膠或黃蓍樹膠；各種天然形成的磷脂，如大豆、卵磷脂、衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(如失水山梨糖醇單油酸酯)和所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯失水山梨糖醇單油酸酯)。乳劑也可含有甜味劑、矯味劑和防腐劑。
糖漿劑和酏劑可用各種甜味劑(如甘油、丙二醇、山梨糖醇、天冬甜精或蔗糖)進(jìn)行配制，它們也可含有緩和劑、防腐劑、矯味劑和/或著色劑。
根據(jù)已知方法，采用上述一種或多種適當(dāng)?shù)姆稚┗驖駶檮┖蛻腋┛蓪⑺幬锝M合物配制成無菌可注射水性或油性混懸劑的形式。無菌可注射制劑也可以是無毒的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或混懸劑，例如在1，3-丁二醇中的溶液。
通過將活性成分與適宜的沒有刺激性的賦形劑一起混合可制備栓劑制劑，所述適宜的賦形劑在常溫下為固體但在直腸溫度下為液體因此可以在直腸內(nèi)熔化從而釋放出藥物。適宜的賦形劑包括例如可可油和聚乙二醇。
局部用制劑如乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑和水性或油性溶液或混懸劑一般可采用本領(lǐng)域眾所周知的常用方法，通過使活性成分與常見的可局部施用的載體或稀釋劑進(jìn)行配制而獲得。
通過吹入給藥的組合物可以是含有平均粒徑為例如30μ或更小的顆粒的微細(xì)粉碎粉末的形式，粉末本身可單獨(dú)包含活性成分，也可被一種或多種生理學(xué)可接受的載體如乳糖所稀釋。然后將用于吹入的粉末方便地保留在裝有例如1-50mg活性成分的膠囊內(nèi)，與渦輪吹入器裝置，例如用于吹入已知藥劑色甘酸鈉的裝置一起使用。
通過吸入給藥的組合物可以是常見加壓氣霧劑的形式，以含有微細(xì)固體或液滴的氣霧劑的形式分配活性成分?？墒褂贸Ｒ?guī)的氣溶膠推進(jìn)劑，如揮發(fā)性的氟化烴或烴，并且適宜地安排氣霧劑裝置以便分配計(jì)量的活性成分。
有關(guān)制劑方面的進(jìn)一步信息，建議讀者參見ComprehensiveMedicinal Chemistry，第5卷，25.2章(Corwin Hansch；編輯委員會(huì)主席)，Pergamon Press 1990。
根據(jù)眾所周知的藥理，用于治療目的的本發(fā)明化合物的劑量大小自然隨癥狀的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、動(dòng)物或患者的年齡和性別以及給藥途徑的不同而異。
一般而言，如果需要以分劑量給藥，則給予本發(fā)明化合物應(yīng)使每日劑量范圍達(dá)到例如0.5-75mg活性成分/kg體重。當(dāng)采用胃腸外途徑時(shí)，通常給予較低的劑量。因此，例如對(duì)靜脈給藥而言，通常采用0.5-30mg活性成分/kg體重的劑量范圍。類似地，對(duì)吸入給藥而言，通常采用0.5-25mg活性成分/kg體重的劑量范圍。然而，優(yōu)選經(jīng)口給藥。例如，用于人類經(jīng)口給藥的制劑通常含有例如0.5mg-2g的活性成分。
有關(guān)給藥途徑及劑量方案方面的進(jìn)一步信息，建議讀者參見Comprehensive Medicinal Chemistry，第5卷，25.3章(Corwin Hansch；編輯委員會(huì)主席)，Pergamon Press 1990。
實(shí)施例本發(fā)明現(xiàn)將參照以下示例性的實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步的描述，在實(shí)施例中，除非另有說明，否則(i)溫度為攝氏度(℃)；操作在室溫或環(huán)境溫度下，即18-25℃的溫度下進(jìn)行；(ii)有機(jī)溶液用無水硫酸鎂進(jìn)行干燥；溶劑的蒸發(fā)采用旋轉(zhuǎn)式汽化器，在減壓(600-4000帕；4.5-30mmHg)和最高達(dá)60℃的浴溫下進(jìn)行；(iii)層析指的是在硅膠上進(jìn)行的快速層析；薄層色譜(TLC)在硅膠板上進(jìn)行；(iv)一般來說，反應(yīng)過程后進(jìn)行TCL，且給出的反應(yīng)時(shí)間僅作為舉例說明之用；(v)最終的產(chǎn)物具有令人滿意的質(zhì)子核磁共振(NMR)譜和/或質(zhì)譜數(shù)據(jù)；(vi)給出的收率僅作為舉例說明之用，而且不一定是通過努力開發(fā)工藝才能獲得的那些收率；如需要多種材料，可重復(fù)制備過程；(vii)除非另有說明，否則給出的NMR數(shù)據(jù)是在300MHz、DMSO-d6+CD3COOD中測得的主要鑒定質(zhì)子的δ值，為相對(duì)于內(nèi)標(biāo)四甲基硅烷(TMS)的百萬分率(ppm)；(viii)各化學(xué)符號(hào)具有其通常的意義；使用SI單位及符號(hào)；(ix)給出的溶劑比為體積∶體積(v∶v)；和(x)采用70電子伏特的電子能量，以化學(xué)電離(CI)模式，采用直接曝光探頭進(jìn)行質(zhì)譜分析；其中所述電離受電子碰撞(EI)、快速原子轟擊(FAB)或電霧化(ESP)的影響；給出了m/z值；一般情況下僅記錄表示起始質(zhì)量(parent mass)的離子；并且除非另有說明，否則所列出的質(zhì)量離子為(MH)+；(xii)使用了以下各縮寫THF四氫呋喃DMFN，N-二甲基甲酰胺EtOAc 乙酸乙酯DCM二氯甲烷；和DMSO 二甲基亞砜實(shí)施例15-溴-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶在120℃下，將5-氨基甲基-3-甲基異噁唑鹽酸鹽(890mg，6.0毫摩爾)、5-溴-2-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶(方法1；578mg，2.0毫摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(1.4ml，8.0毫摩爾)在1-丁醇(10ml)中的混合物加熱18小時(shí)。將混合物冷卻至環(huán)境溫度并通過蒸發(fā)去除揮發(fā)物。剩余物用醚研制，過濾收集產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(225mg，31％)。1H NMR(DMSO)δ2.15(s，3H)，2.2(s，3H)，4.5(m，2H)，6.1(br s，2H)，7.6(br s，1H)，8.0(br s，2H)，12.05(br s，1H)；MSm/z 366。
實(shí)施例2-12根據(jù)與實(shí)施例1類似的方法，用適宜的嘧啶(SM1)和胺(SM2)替代后合成以下的各種化合物(在DMSO-d6中記錄NMR)。未標(biāo)明原材料之處，該化合物為可從市面購得的商品。

1需要進(jìn)行含水后處理2通過用DCM/甲醇(95∶5)洗脫的硅膠柱層析進(jìn)行純化實(shí)施例135-溴-2-(2-呋喃-2-基乙基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶在120℃下，將5-溴-2-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶(方法1；290mg，1.0毫摩爾)、2-(2-氨基乙基)呋喃(330mg，3.0毫摩爾)和1-丁醇(5ml)的混合物加熱5小時(shí)。將混合物冷卻至環(huán)境溫度并通過蒸發(fā)去除揮發(fā)物。將剩余物溶解于DCM中，用水及鹽水洗滌。分離出有機(jī)物，干燥(MgSO4)，并通過蒸發(fā)去除溶劑。剩余物用醚研制，收集固體產(chǎn)物，并通過硅膠柱層析進(jìn)行純化，用DCM/甲醇(95∶5)洗脫，得到標(biāo)題化合物(80mg，22％)。1H NMR(DMSO)δ2.1(s，3H)，2.85(m，2H)，3.45(m，2H)，6.10(m，1H)，6.35(m，1H)，6.4(brs，1H)，7.15(br s，1H)，7.5(s，1H)，8.0(br s，2H)，12.05(br s，1H)；MSm/z 363。
實(shí)施例14-106根據(jù)與實(shí)施例13類似的方法，用適宜的嘧啶(SM1)和胺(SM2)原材料替代后合成以下的各種化合物。未標(biāo)明原材料之處，該化合物為可從市面購得的商品。
1加熱12小時(shí)。
2加熱24小時(shí)。
3用2M NH3/MeOH將反應(yīng)液處理至pH9。過濾沉淀物并用蒸餾水及二乙醚洗滌。
4不進(jìn)行含水后處理，從DCM中沉淀出產(chǎn)物。
5不必進(jìn)行色譜分析。
6500MHz(393K)。
7不采用d4乙酸進(jìn)行NMR。
8在373K/400MHz處進(jìn)行NMR。
9在343K時(shí)不采用d4乙酸進(jìn)行NMR。
10NMR使用三氟氘化的乙酸-d1代替乙酸-d4。
11在CD3OD中進(jìn)行NMR。
12通過本文中所述方法可制備出化合物。
13采用色譜分析中所用的甲醇進(jìn)行酯交換。
實(shí)施例1075-溴-2-(3-氨基甲?；悋f唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶將5-溴-2-[3-(甲氧基羰基)異噁唑-5-基甲基氨基]-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶(實(shí)施例10450mg，0.11毫摩爾)懸浮于7N的甲醇氨(5ml)中，并在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。通過蒸發(fā)去除揮發(fā)物，剩余物用DCM/二乙醚(50∶50)研制，過濾收集產(chǎn)物得到標(biāo)題化合物(35mg，76％)。NMR(DMSO)2.18(s，3H)，4.57(d，2H)，6.28(br s，1H)，6.50(s，1H)，7.72(s，2H)，8.01(s，1H)，8.05(s，1H)，12.06(s，1H)；m/z 393(MH)+。
原材料的制備用于上述各實(shí)施例中的各種原材料可以是從市面上購得的商品，也可以通過標(biāo)準(zhǔn)方法從已知的材料容易地制備得到。例如，以下的反應(yīng)是用于上述反應(yīng)中的部分原材料的非限制性的例證。
方法15-溴-2-氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶將5-溴-2，4-二氯嘧啶(10.0g，44毫摩爾)、3-氨基-5-甲基-1H-吡唑(6.0g，62毫摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(9.20ml，53毫摩爾)的1-丁醇(80ml)溶液在85℃加熱12小時(shí)。使混合物冷卻至環(huán)境溫度，過濾收集所得沉淀物。用乙醇洗滌固體產(chǎn)物并進(jìn)行干燥，得到小標(biāo)題化合物(10.8g，85％)。1H NMR(DMSO)δ2.23(s，3H)，6.23(s，1H)，8.39(s，1H)，9.21(s，1H)，12.27(s，1H)；MSm/z 290(MH)+。
方法22-氧代丁腈在環(huán)境溫度下，將乙腈(13.7ml，260毫摩爾)加入到氫化鈉(10.4g在礦物油中的60％懸浮液，260毫摩爾)在丙酸乙酯(22.3g，220毫摩爾)中的懸浮液和無水1，4-二噁烷(200ml)中。在100℃下加熱混合物12小時(shí)，然后冷卻。加入水，用濃鹽酸將混合物的pH調(diào)節(jié)至2.0，并用DCM進(jìn)行萃取。將萃取液合并干燥(MgSO4)，通過蒸發(fā)去除揮發(fā)物。通過硅膠柱層析，用DCM洗脫純化剩余物，得到油狀的標(biāo)題化合物(20g，94％)。NMR(CDCl3)1.10(t，3H)，2.65(q，2H)，3.50(s，2H)。
方法3-5通過方法2的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
方法63-氨基-5-乙基-1H-吡唑?qū)⒁凰想?11.3g，230毫摩爾)加入到3-氧代丁腈(方法2；20.0g，210毫摩爾)的乙醇(50ml)溶液中，將混合物在70℃下加熱12小時(shí)。蒸發(fā)去除揮發(fā)物，通過硅膠柱層析，用DCM/甲醇(90∶10)洗脫純化剩余物，得到油狀的標(biāo)題化合物(10.2g，44％)。NMR(DMSO)1.10(t，3H)，2.40(q，2H)，5.15(s，1H)；m/z 112(MH)+。
方法7-9通過方法6的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
方法102，5-二氯-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶將2，4，5-三氯嘧啶(6.0g，32.6毫摩爾)、3-氨基-5-甲基-1H-吡唑(3.18g，32.7毫摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(6.30ml，36.2毫摩爾)的1-丁醇(50ml)溶液在100℃加熱2小時(shí)。蒸發(fā)去除揮發(fā)物，剩余物用DCM研制，得到白色固體狀的標(biāo)題化合物(5.7g，72％)。NMR(DMSO)2.23(s，3H)，6.23(s，1H)，8.39(s，1H)，9.21(s，1H)，12.27(s，1H)；m/z 290(MH)+。
方法11-21通過方法10的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
方法22α-氯苯甲醛肟分次將N-氯代琥珀酰亞胺(5.50g，41.3毫摩爾)加入到苯甲醛肟(5.0g，41.3毫摩爾)的DMF(34ml)溶液中，使溫度不超過35℃。環(huán)境溫度下攪拌混合物2小時(shí)，然后用冰浴冷卻。加入水，用醚萃取含水混合物。合并有機(jī)物，用水及鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)去除溶劑，得到油狀的標(biāo)題化合物(6.43g，100％)。NMR(CDCl3)7.4(m，3H)，7.8(d，2H)，8.9(bs，1H)。
方法23-33通過方法22的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
方法34根據(jù)在Tetrahedron 2000，56，1057-1064中所述的方法制備α-氯-吡啶-3-基甲醛肟。
方法353-甲氧基苯甲醛肟將鹽酸羥胺(10g，0.144摩爾)的蒸餾水(20ml)溶液加入到20％(w/v)的氫氧化鈉水溶液(28ml)中。一次性加入3-甲氧基苯甲醛(14ml，0.12摩爾)，將混合物在0-5℃下攪拌2小時(shí)。將混合物調(diào)節(jié)至pH7，并用二氯甲烷萃取。合并萃取液，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)去除溶劑，得到無色油狀的標(biāo)題化合物(18.7g，100％)。NMR(CDCl3)3.8(s，3H)，6.9(m，1H)，7.1(m，2H)，7.15(m，1H)，8.1(s，1H)，8.6(br s，1H)。
方法36-42通過方法35的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
方法435-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-3-苯基異噁唑?qū)ⅵ?氯代苯甲醛肟(方法22；1g，6.4毫摩爾)的THF(13ml)溶液滴加到周冰浴冷卻的N-叔丁氧基羰基-炔丙胺(0.5g，3.2毫摩爾)和三乙胺(0.9ml，6.4毫摩爾)的THF(25ml)溶液中。使混合物加熱至環(huán)境溫度，并攪拌2天。蒸發(fā)去除揮發(fā)物，將剩余物溶解于DCM中。用水及鹽水洗滌溶液，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)去除溶劑。剩余物用異己烷/乙醚(9∶1)研制并通過過濾進(jìn)行收集，得到標(biāo)題化合物(473mg，54％)。NMR(CDCl3)1.45(s，9H)，4.45(d，2H)，5.10(bs，1H)，6.5(s，1H)，7.42(m，3H)，7.8(m，2H)。
方法44-55通過方法43的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
方法565-氨基甲基-3-苯基異噁唑?qū)⑷宜?1.7ml，2.6毫摩爾)滴加到在冰浴中冷卻的5-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-3-苯基異噁唑(方法43；473mg，1.73毫摩爾)的DCM(8ml)溶液中。使混合物加熱至環(huán)境溫度，并攪拌18小時(shí)，蒸發(fā)去除揮發(fā)物。剩余物用乙醚研制，得到標(biāo)題化合物(427mg，86％)。NMR(DMSO)4.33(s，2H)，7.1(s，1H)，7.5(m，3H)，7.8(m，2H)，8.6(br s，3H)。
方法57-68通過方法56的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
方法695-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-3-(吡啶-2-基)異噁唑?qū)⒋温人徕c(16ml的14％w/v水溶液，29.5毫摩爾)滴加至在冰浴中冷卻的2-吡啶醛肟(2g，16.4毫摩爾)和N-叔丁氧基羰基-炔丙胺(5.6g，36.1毫摩爾)的DCM(30ml)溶液中。劇烈攪拌混合物，加熱至環(huán)境溫度，并攪拌18小時(shí)。分離出水層并用DCM萃取。合并有機(jī)萃取液，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)去除溶劑。通過硅膠柱層析，用二乙醚/異己烷(1∶1)洗脫純化剩余物，得到標(biāo)題化合物(1.93g，43％)。NMR(CDCl3)1.45(s，9H)，4.5(m，2H)，5.03(bs，1H)，6.8(s，1H)，7.35(m，1H)，7.8(m，1H)，8.05(d，1H)，8.67(m，1H)。
方法705-氨基甲基-3-(吡啶-2-基)異噁唑如方法56所述處理5-(叔丁氧基羰基氨基甲基)-3-(吡啶-2-基)異噁唑(方法69)，得到5-氨基甲基-3-(2-吡啶基)異噁唑。NMR(DMSO)4.38(s，2H)，7.1(s，1H)，7.5(m，1H)，7.95(m，2H)，8.65(brs，3H)，8.7(m，1H)。
方法713-甲基-5-(1-鄰苯二酰氨基乙基)異噁唑在環(huán)境溫度下，將三乙胺(0.35ml，2.5毫摩爾)的甲苯(15ml)溶液滴加至異氰酸苯酯(5.43ml，50毫摩爾)、硝基乙烷(2.15ml，30毫摩爾)和N-(丁-1-炔-3-基)鄰苯二酰胺(5.0g，25毫摩爾)的甲苯(65ml)溶液中。將混合物攪拌18小時(shí)，過濾并蒸發(fā)去除揮發(fā)物。用乙醚研制剩余物，過濾收集產(chǎn)物得到標(biāo)題化合物(5.35g，89％)。NMR(CDCl3)1.88(d，3H)，2.27(s，3H)，5.60(q，H)，6.11(s，H)，7.69-7.75(m，2H)，7.79-7.85(m，2H)；m/z 257(MH)+。
方法725-(1-氨基乙基)-3-甲基異噁唑?qū)?-甲基-5-(1-鄰苯二酰氨基乙基)異噁唑(方法71；3.55g，13.9毫摩爾)、一水合肼(0.75ml，15.3毫摩爾)和乙醇(50ml)的混合物在回流下加熱4小時(shí)。使混合物冷卻至環(huán)境溫度，加入冰醋酸(8.8ml，153毫摩爾)，然后將混合物在回流下加熱2小時(shí)。使混合物冷卻至環(huán)境溫度，用50％的氫氧化鈉水溶液中和混合物，用水稀釋并用DCM萃取，用水及鹽水洗滌合并的萃取液。分離出有機(jī)物，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)去除溶劑。將剩余物溶解于乙醇中，用過量的1N含醚氯化氫進(jìn)行處理，蒸發(fā)去除揮發(fā)物，得到標(biāo)題化合物(1.52g，87％)。NMR(DMSO)1.46(dd，3H)，2.20(m，3H)，4.39(q，H)，6.38(s，1H)，6.60(br s，3H)；m/z 127(MH)+。
方法733-乙氧基羰基-5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]異噁唑在3小時(shí)內(nèi)將氯代肟基乙酸乙酯(10g，66毫摩爾)的THF(200ml)溶液滴加至N-(叔丁氧基羰基)炔丙胺(20.5g，131毫摩爾)和三乙胺(11.2ml，80毫摩爾)的四氫呋喃(100ml)溶液混合物中。在環(huán)境溫度下攪拌混合物18小時(shí)，然后蒸發(fā)去除揮發(fā)物。將剩余物溶解于DCM中，并用水及鹽水洗滌。分離出有機(jī)物，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)去除溶劑。通過硅膠柱層析，用異己烷/乙醚(先用80∶20，再用50∶50)洗脫純化剩余物，得到標(biāo)題化合物(10.6g，60％)。NMR(DMSO)1.3(t，3H)，1.38(s，9H)，4.35(m，2H)，6.62(s，1H)，7.55(s，1H)；m/z 269(M-H)-。
方法743-乙氧基羰基-5-氨基甲基異噁唑?qū)⑷宜?2.1ml，29毫摩爾)加入到3-乙氧基羰基-5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]異噁唑(方法73；790mg，2.9毫摩爾)的DCM(15ml)溶液中。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌4小時(shí)，然后蒸發(fā)去除揮發(fā)物。剩余物用二乙醚研制得到標(biāo)題化合物(763g，93％)。NMR(DMSO)1.31(t，3H)，4.37(m，2H)，6.97(s，1H)，8.64(s，3H)；m/z171(MH)+。
方法753-羥基甲基-5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]異噁唑在0℃及氮?dú)夥障?，將氫硼化鈉(610mg，16毫摩爾)分次加入到3-乙氧基羰基-5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]異噁唑(方法73；1.62g，6毫摩爾)的乙醇(15ml)溶液中。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌4小時(shí)，然后用飽和的碳酸氫鈉水溶液驟冷。將混合物用EtOAc萃取，有機(jī)物用鹽水洗滌，然后進(jìn)行干燥(MgSO4)。蒸發(fā)去除溶劑得到標(biāo)題化合物(1.25g，91％)。NMR(DMSO)1.38(s，9H)，4.21(d，2H)，4.44(s，2H)，5.40(br s，1H)，6.21(s，1H)，7.49(br s，1H)；m/z229(MH)+。
方法763-羥基甲基-5-氨基甲基異噁唑?qū)⑷宜?4ml，54毫摩爾)加入到3-羥基甲基-5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]異噁唑(方法75；1.25g，5.4毫摩爾)的DCM(40ml)溶液中。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)，然后蒸發(fā)去除揮發(fā)物。通過在SCX-2柱(50g)上進(jìn)行層析，先用甲醇，再用7N氨的甲醇溶液洗脫純化剩余物，得到標(biāo)題化合物(676mg，96％)。NMR(DMSO)1.97(br s，2H)，3.76(s，2H)，4.44(s，2H)，5.38(s，1H)，6.26(s，1H)。
方法773-(吡咯烷-1-基羰基)-5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]異噁唑?qū)?-乙氧基羰基-5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]異噁唑(方法73；500mg，1.85毫摩爾)溶解于吡咯烷(4ml)中，將混合物在85℃下加熱3小時(shí)。蒸發(fā)去除揮發(fā)物，剩余物用二乙醚研制，得到白色固體狀的標(biāo)題化合物(432mg，79％)。NMR(DMSO)1.38(s，9H)，1.85(m，4H)，3.50(t，2H)，3.62(t，2H)，4.29(d，2H)，6.47(1H)，7.53(s，1H)；m/z 240(M-C4H8)+。
方法783-(吡咯烷-1-基羰基)-5-氨基甲基]異噁唑如方法74所述使3-(吡咯烷-1-基羰基)-5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]異噁唑(方法77)脫保護(hù)，得到其三氟乙酸鹽形式的標(biāo)題化合物(428mg，95％)。NMR(DMSO)1.88(m，4H)，3.49(t，2H)，3.63(t，2H)，4.35(s，2H)，6.83(s，1H)，8.58(s，3H)；m/z 196(MH)+。
方法795-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]-3-(2-碘苯基)異噁唑如方法22和43所述處理2-碘代苯甲醛肟(方法42)，得到標(biāo)題化合物。
方法805-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]-3-(2-氰基苯基)異噁唑在氮?dú)庀聦⑶杌~(I)(2.49g，27.8毫摩爾)、氰化四正丁基銨(1.87g，6.95毫摩爾)、三(二亞芐基丙酮)合二鈀(O)(0.247g，0.28毫摩爾)和二苯膦基二茂鐵(0.619g，1.12毫摩爾)加入到5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]-3-(2-碘苯基)異噁唑(方法79；2.78g，6.95毫摩爾)的1，4-二噁烷(35ml)脫氣溶液中。將混合物在回流下加熱3小時(shí)，冷卻至環(huán)境溫度，用EtOAc稀釋并經(jīng)硅藻土過濾。濾液用飽和的碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，蒸發(fā)去除溶劑。通過硅膠柱層析，用EtOAc/異己烷(極性從15∶85增加至25∶75)洗脫純化剩余物，得到標(biāo)題化合物(1.29g，62％)。NMR(CDCl3)1.49(s，9H)，4.52(d，2H)，5.09(br s，H)，6.81(s，H)，7.55(t，H)，7.70(t，H)，7.79(d，H)，7.95(d，H)；m/z 300(MH)+。
方法815-氨基甲基-3-(2-氰基苯基)異噁唑如方法56所述處理5-[N-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]-3-(2-氰基苯基)異噁唑(方法80；1.28g，4.28毫摩爾)，得到標(biāo)題化合物(1.34g，100％)。NMR(DMSO)4.45(s，2H)，7.17(s，H)，7.73(dd，H)，7.85-7.95(m，2H)，8.62(br s，3H)；m/z 200(MH)+。
方法82
3-甲基-5-{2-[二-(N-叔丁氧基羰基)氨基]乙基}異噁唑如方法71所述處理如在J.Am.Chem.Soc.1987(109)，2765中合成的二-N-叔丁氧基羰基-3-丁炔(2.2g，8.2毫摩爾)，得到標(biāo)題化合物(0.59g，22％)。NMR(CDCl3)1.49(s，18H)，2.24(s，3H)，3.00(t，2H)，3.88(t，2H)，5.85(s，H)。
方法833-甲基-5-(2-氨基乙基)異噁唑?qū)⑷宜?2.5ml，3.8毫摩爾)滴加到在0℃下冷卻的3-甲基-5-{2-[二-(N-叔丁氧基羰基)氨基]乙基}異噁唑(方法82；0.589g，1.8毫摩爾)的DCM(10ml)溶液中。將混合物加熱至環(huán)境溫度，并攪拌48小時(shí)。蒸發(fā)去除揮發(fā)物，通過在SCX-2離子交換柱上進(jìn)行層析，先用甲醇，再用7N氨的甲醇溶液洗脫純化。純化后的產(chǎn)物用過量的1.0M含醚氯化氫(3.5ml)進(jìn)行處理，得到其鹽酸鹽形式的標(biāo)題化合物(0.24g，82％)。NMR(DMSO)游離堿2.18(s，3H)，2.71-2.79(m，2H)，2.80-2.88(m，2H)，6.10(s，H)。
方法843-疊氮甲基-5-甲基異噁唑在60℃下，將3-氯甲基-5-甲基異噁唑(500mg，3.8毫摩爾)和疊氮化鈉(494mg，7.6毫摩爾)在DCM(10ml)中加熱6小時(shí)。反應(yīng)混合物用水稀釋，然后用EtOAc萃取。干燥(MgSO4)有機(jī)萃取液并蒸發(fā)去除揮發(fā)物，得到油狀的標(biāo)題化合物(387mg，73％)。NMR(DMSO)2.40(s，3H)，4.48(s，2H)，6.28(s，1H)。
方法853-氨基甲基-5-甲基異噁唑?qū)?-疊氮甲基-5-甲基異噁唑(方法84；384mg，2.8毫摩爾)和聚苯乙烯聚合物載體上的三苯基膦(4.2g，4.2毫摩爾)一起在THF(17ml)和蒸餾水(0.58ml)的混合物中攪拌24小時(shí)。過濾反應(yīng)混合物，先用二乙醚，再用DCM洗滌樹脂。蒸發(fā)合并的濾液，在SCX-2柱上先用甲醇，再用7N氨的甲醇溶液洗脫純化剩余物，得到油狀的標(biāo)題化合物(211mg，67％)。NMR(DMSO)1.93(br s，2H)，2.34(s，3H)，3.63(s，2H)，6.17(s，1H)。
方法86α-甲基-吡啶-3-基甲醛肟將鹽酸羥胺(9.46g，136.2毫摩爾)加入到3-乙?；拎?11.02g，90.7毫摩爾)的甲醇(100ml)溶液中，將反應(yīng)混合物在回流下加熱30分鐘。蒸發(fā)去除揮發(fā)物，將剩余物溶解于水中。將溶液冷卻至0℃，用2N的氫氧化鈉水溶液堿化至pH12，然后混合物用EtOAc萃取。合并萃取液，用飽和的鹽水洗滌并干燥(硫酸鈉)。蒸發(fā)去除溶劑，得到固態(tài)的標(biāo)題產(chǎn)物(11.6g，94％)。NMR(DMSO)2.20(s，3H)，7.40(m，1H)，8.00(m，1H)，8.55(d，1H)，8.85(s，1H)，11.43(s，1H)。m/z 137(MH)+。
方法87-89通過方法86的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
方法903-(1-氨基乙基)吡啶將阮內(nèi)鎳在水(1.1g)中的50％懸浮液加入到α-甲基-吡啶-3-基甲醛肟(方法86；10.6g，77.9毫摩爾)和20％乙醇銨(500ml)的溶液中，將反應(yīng)混合物用氫氣在40psi和40℃下進(jìn)行氫化，直至消耗理論體積的氣體為止。經(jīng)硅藻土層過濾反應(yīng)混合物，用水和乙醇洗滌過濾墊。蒸發(fā)去除濾液得到油狀標(biāo)題產(chǎn)物(8.05g，85％)。NMR(DMSO)1.28(d，3H)，4.05(m，1H)，7.33(t，1H)，7.75(d，1H)，8.40(d，1H)，8.55(s，1H)。m/z123(MH)+。
方法91-93通過方法90的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
方法942-氨基甲基-6-氯代吡啶在-5℃及氮?dú)夥障?，?M氫化鋰鋁的THF(2.88ml，2.88毫摩爾)溶液滴加至6-氯-2-氰基吡啶(532mg，3.84毫摩爾)的THF(10ml)溶液中。將混合物在-5℃下攪拌2小時(shí)，小心按順序加入水(0.1ml)、15％的氫氧化鈉水溶液(0.1ml)和水(0.3ml)使反應(yīng)猝滅。將混合物在0℃下攪拌1小時(shí)，過濾去除不溶物，用甲醇徹底洗滌過濾墊。蒸發(fā)所得溶液，通過硅膠柱層析，用DCM/甲醇/氨(極性從95∶5∶0增加至90∶10∶1)洗脫純化剩余物，得到油狀的標(biāo)題化合物(215mg，40％)。NMR(DMSO)2.10(br s，2H)，3.75(s，2H)，7.30(d，1H)，7.55(d，1H)，7.80(t，1H)。
方法95-97通過方法94的方法，采用適當(dāng)?shù)脑牧现苽湟韵赂鞣N化合物。
1SM Bioorg.Med.Chem.Lett.1998，453-8方法982-(N-氧代吡啶-4-基)吡啶在0℃下將3-氯代過苯甲酸(活性濃度57％-86％)(7.5g，43毫摩爾)分次加入到2-(吡啶-4-基)吡啶(4.78g，30.6毫摩爾)的DCM(50ml)溶液中。攪拌2小時(shí)后，分次加入焦亞硫酸鈉直至消滅所有過量的過氧化物。過濾去除固體，濾液用碳酸鉀固體堿化。過濾混合物，蒸發(fā)濾液，通過硅膠柱層析，用甲醇/丙酮(10∶90)洗脫純化剩余物，得到白色固態(tài)的標(biāo)題化合物(4.2g，80％)。NMR(DMSO)7.41(t，1H)，7.92(t，1H)，8.10(m，3H)，8.30(d，2H)，8.70(d，1H)；m/z173(MH)+。
方法992-(2-氰基吡啶-4-基)吡啶將氰化三甲基硅烷(1.9ml，14.5毫摩爾)滴加到2-(N-氧代吡啶-4-基)吡啶(方法98；1g，5.8毫摩爾)和三乙胺(1.2ml，8.7毫摩爾)的乙腈(5ml)懸浮液中。將混合物在110℃下加熱18小時(shí)，冷卻至環(huán)境溫度后用飽和的碳酸氫鈉水溶液稀釋。用DCM萃取混合物，干燥(MgSO4)萃取液，蒸發(fā)去除揮發(fā)物。將剩余物預(yù)先吸附到二氧化硅上，并通過硅膠柱層析，用己烷∶EtOAc(1∶1)洗脫純化。純化后的產(chǎn)物用二乙醚研制，得到白色固態(tài)的標(biāo)題化合物(627mg，60％)。NMR(DMSO)7.54(t，1H)，8.01(t，1H)，8.25(d，1H)，8.40(d，1H)，8.66(s，1H)，8.77(d，1H)，8.87(d，1H)。
方法1002-(2-氨基甲基吡啶-4-基)吡啶在氮?dú)夥障聦?-(2-氰基吡啶-4-基)吡啶(方法99；563mg，3.11毫摩爾)溶解于無水THF(10ml)中，并冷卻至0℃。滴加LiAlH4(2.3ml的THF 1M溶液，2.3毫摩爾)，將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌3小時(shí)。用水(0.1ml)、15％的氫氧化鈉溶液(0.1ml)和水(0.3ml)使反應(yīng)猝滅。過濾混合物，用甲醇洗滌過濾墊。通過蒸發(fā)將揮發(fā)物從濾液中除去，得到樹膠狀的標(biāo)題化合物(570mg，99％)。M/z186(MH)+。
方法1012-(3-氰基吡啶-5-基)吡啶在氮?dú)夥障?，?-(3-溴代吡啶-5-基)吡啶(2g，10.9毫摩爾)的THF(10ml)溶液滴加至2-吡啶基溴化鋅(22ml的THF 0.5M溶液，11毫摩爾)的THF(10ml)溶液中。加入四(三苯基膦)合鈀(O)(630mg，0.54毫摩爾)，將反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌18小時(shí)。用飽和的氯化銨水溶液使反應(yīng)猝滅，然后蒸發(fā)去除揮發(fā)物。將剩余物懸浮于水中，然后用DCM萃取。合并有機(jī)萃取液，用水洗滌，然后經(jīng)相分離紙過濾，蒸發(fā)去除揮發(fā)物。通過硅膠柱層析，用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脫純化剩余物。純化后的產(chǎn)物用二乙醚研制，得到白色固態(tài)的標(biāo)題化合物(0.98g，50％)。NMR(DMSO)7.47(t，1H)，7.97(t，1H)，8.15(d，1H)，8.75(d，1H)，8.90(d，1H)，9.07(s，1H)，9.53(s，1H)；m/z182(MH)+。
方法1022-(3-氨基甲基吡啶-5-基)吡啶將2-(3-氰基吡啶-5-基)吡啶(方法101；0.98g，5.4毫摩爾)溶解于乙醇(45ml)和甲醇(30ml)的混合物中。加入濃鹽酸(1.2ml)和10％的披鈀碳催化劑(575mg)，將混合物在氫氣氛下攪拌4小時(shí)。混合物經(jīng)硅藻土過濾，用乙醇洗滌過濾墊，通過蒸發(fā)將揮發(fā)物從濾液中除去。將粗制固體懸浮于少量甲醇中并過濾，得到橙色固態(tài)的標(biāo)題化合物(794mg，66％)。NMR(DMSO)4.31(m，2H)，7.58(t，1H)，8.09(t，1H)，8.24(d，1H)，8.78(d，1H)，8.89(bs，2H)，9.03(s，1H)，9.26(s，1H)，9.43(s，1H)；m/z 186(MH)+。
藥理學(xué)分析用于檢測Igf-1r激酶活性的抑制和下游信號(hào)傳輸以及對(duì)胰島素受體激酶和Egfr信號(hào)傳輸?shù)倪x擇性的方法所采用的縮寫PBS(PBS/T)為磷酸緩沖鹽水，pH7.4(具有0.05％的吐溫20)HEPES為N-[2-羥基乙基]哌嗪-N’-[2-乙磺酸]DTT為二硫蘇糖醇TMB為N-四甲基聯(lián)苯胺DMSO為二甲基亞砜BSA為牛血清白蛋白ATP為腺苷三磷酸DMEM為Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基FBS/FCS為胎牛/小牛血清HBSS為Hanks平衡鹽溶液HRP為辣根過氧化物酶SDS為十二烷基硫酸鈉IGF-I(IGF-1R)為胰島素樣生長因子-I(IGF-1受體)EGF為表皮生長因子IGF-1R激酶分析a)蛋白質(zhì)的克隆、表達(dá)和純化采用標(biāo)準(zhǔn)分子生物技術(shù)(Molecular Cloning-A LaboratoryManual，1989年第2版；Sambrook，F(xiàn)ritsch和Maniatis；Cold SpringHarbour Laboratory Press)構(gòu)建編碼含有谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、凝血酶切割位點(diǎn)和IGF-1R細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(氨基酸930-1367)(此后稱之為GST-IGFR)的融合蛋白質(zhì)的DNA分子并克隆到pFastBac 1中(Life Technologies Ltd，UK)。
按照制造商方案進(jìn)行重組病毒的生產(chǎn)。簡言之，將含有GST-IGFR的pFastBac-1載體轉(zhuǎn)化到含有桿狀病毒基因組(桿粒DNA)的大腸桿菌DH10Bac細(xì)胞中，并經(jīng)由細(xì)胞中的轉(zhuǎn)座事件，將一個(gè)含有慶大霉素抗性基因和GST-IGFR表達(dá)盒的pFastBac載體的區(qū)域直接轉(zhuǎn)座進(jìn)桿粒DNA中，所述GST-IGFR表達(dá)盒包括桿狀病毒多角體蛋白啟動(dòng)子。通過選擇慶大霉素、卡那霉素、四環(huán)素和X-半乳糖，所得的白色集落應(yīng)含有編碼GST-IGFR的重組桿粒DNA。按照制造商的說明，從幾種BH10Bac白色集落的小規(guī)模培養(yǎng)物中提取桿粒DNA，并采用CellFECTIN試劑(Life Technologies Ltd，UK)將其轉(zhuǎn)染進(jìn)在含有10％血清的TC100培養(yǎng)基(Life Technologies Ltd，UK)中生長的草地夜蛾Sf21細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染72小時(shí)后通過收集細(xì)胞培養(yǎng)基收獲病毒顆粒。用0.5ml培養(yǎng)基感染含有1×107個(gè)細(xì)胞/ml的100ml Sf21懸浮培養(yǎng)物。感染48小時(shí)后收獲細(xì)胞培養(yǎng)液并采用標(biāo)準(zhǔn)空斑測定方法確定病毒效價(jià)。采用病毒原種以3的感染復(fù)數(shù)(MOI)感染Sf9和“高5”細(xì)胞以便確定重組GST-IGFR的表達(dá)。
通過在谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠上進(jìn)行親合層析，接著用谷胱甘肽洗脫來純化GST-IGFR蛋白質(zhì)。簡言之，將細(xì)胞溶解于50mM的HEPES pH7.5(Sigma，H3375)、200mM的NaCl(Sigma，S7653)、完全蛋白酶抑制劑混合物(Roche，1 873 580)和1mM的DTT(Sigma，D9779)中，這種溶液此后稱之為溶胞緩沖液。使澄清后的溶胞產(chǎn)物上清液通過裝有谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠的層析柱(Amersham PharmaciaBiotech UK Ltd.)。用溶胞緩沖液將各種污染物從基質(zhì)中洗出直至在280nm處的UV吸光度返回到基線為止。采用含有20mM還原谷胱甘肽(Sigma，D2804)的溶胞緩沖液進(jìn)行洗脫，匯集含有GST融合蛋白質(zhì)的部分并透析至含有甘油的緩沖液中，該緩沖液包含pH7.5的50mM HEPES、200mM NaCl、10％甘油(v/v)、3mM還原谷胱甘肽和1mM的DTT。
b)激酶活性分析采用96孔格式的ELISA檢測系統(tǒng)，通過合成聚合GluAlaTyr(EAY)6∶3∶1肽(Sigma-Aldrich Company Ltd，UK，P3899)的磷酸化作用測定純化后的酶的活性。
b.i)所用的試劑母液200mM HEPES，Ph7.4 在4℃下儲(chǔ)存 (Sigma，H3375)1MDTT 在-20℃下儲(chǔ)存 (Sigma，D9779)100mM Na3VO4在4℃下儲(chǔ)存 (Sigma，S6508)1MMnCl2在4℃下儲(chǔ)存 (Sigma，M3634)1mM ATP 在-20℃下儲(chǔ)存 (Sigma，A3377)純凈 Triton X-100 在室溫下儲(chǔ)存(Sigma，T9284)10mg/ml BSA 在4℃下儲(chǔ)存 (Sigma，A7888)酶溶液新鮮制備的75ng/ml的在pH7.4的100mM HEPES、5mM DTT、0.25mM Na3VO4、0.25％ Triton X-100、0.25mg/ml BSA中的GST-IGF-1R融合蛋白質(zhì)。
輔因子溶液pH7.4的100mM的HEPES、60mM的MnCl2、5mM的ATP聚合EAY底物Sigma底物聚合(Glu，Ala，Tyr)6∶3∶1(P3899)制成1mg/ml PBS溶液的形式并在-20℃下儲(chǔ)存檢測板Nunc Maxisorp 96孔免疫板(Life Technologies Ltd，UK)抗體美國紐約Upstate Biotechnology公司的單克隆的抗磷酸酪氨酸抗體(UBI 05-321)。每個(gè)檢測板上將3μl稀釋于11ml的PBS/T+0.5％的BSA中。
Amersham Pharmacia Biotech UK Ltd.的綿羊-抗小鼠IgG HRP-接合二級(jí)抗體(NXA931)。每個(gè)檢測板上將20μl的母液稀釋于11ml的PBS/T+0.5％的BSA中。
TMB溶液在室溫下、1小時(shí)內(nèi)、于黑暗中，將1mg的TMB片(Sigma，T5525)溶解于1ml的DMSO(Sigma，D8779)中。將該溶液加入到9ml新鮮制備的50mM磷酸鹽-檸檬酸鹽緩沖液pH5.0+0.03％過硼酸鈉中[1個(gè)緩沖液膠囊(Sigma P4922)/100ml蒸餾水]。
終止溶液為1M的H2SO4(Fisher Scientific UK.目錄號(hào)S/9200/PB08)。
測試化合物溶解于DMSO至10mM，然后稀釋在蒸餾水中，得到檢測孔中在1-2％ DMSO中的200-0.0026μM的最終濃度范圍。
b.ii)分析方案將聚合EAY底物在PBS中稀釋至1μg/ml，然后以100μl/孔的量分配于96孔板中。將板密封并在4℃下培養(yǎng)過夜。廢棄過量的聚合EAY溶液，將板洗滌(2×PBS/T；250μl PBS/孔)，洗滌之間進(jìn)行吸干。然后再次洗滌板(1×50mM的HEPES，pH7.4；250μl/孔)并吸干(為了除去磷酸鹽的本底含量，這一點(diǎn)很重要)。向各孔中加入10μl的試驗(yàn)化合物溶液及40μl的激酶溶液。然后再向各孔中加入50μl的輔因子溶液，板在室溫下培養(yǎng)60分鐘。
將板清空(即廢棄其內(nèi)容物)并用PBS/T洗滌2次(250μl/孔)，各次洗滌之間進(jìn)行吸干。每個(gè)孔加入100μl的稀釋抗磷酸酪氨酸抗體，將板在室溫下培養(yǎng)60分鐘。
再次將板清空并用PBS/T洗滌2次(250μl/孔)，各次洗滌之間進(jìn)行吸干。每個(gè)孔加入100μl的稀釋綿羊-抗小鼠IgG抗體，將板在室溫下培養(yǎng)60分鐘。廢棄其內(nèi)容物，將板用PBS/T洗滌2次(250μl/孔)，各次洗滌之間進(jìn)行吸干。每個(gè)孔中加入100μl TMB溶液，將板在室溫下培養(yǎng)5-10分鐘(在辣根過氧化物酶的存在下溶液變藍(lán))。
每個(gè)孔用50μl的H2SO4終止反應(yīng)(溶液由藍(lán)變黃)，在450nm用Versamax板式讀數(shù)器(Molecular Devices Corporation，CA，USA)或類似的裝置對(duì)板進(jìn)行讀數(shù)。
我們發(fā)現(xiàn)各實(shí)施例的化合物在上述試驗(yàn)中的IC50均小于100μM。
對(duì)IGF-受激細(xì)胞增殖的抑制Lammers等(EMBO J，8，1369-1375，1989)描述了鼠成纖維細(xì)胞(NIH3T3)過量表達(dá)人類IGF-1受體的結(jié)構(gòu)。這些細(xì)胞對(duì)IGF-I顯示出增殖響應(yīng)，可通過BrdU結(jié)合進(jìn)新合成的DNA加以測量。在以下測試中確定使IGF-受激增殖得到抑制的化合物效能a.i)所用的試劑細(xì)胞增殖ELISA，BrdU(比色法)[Boehringer Mannheim(Diagnostics and Biochemicals)Ltd，UK.目錄號(hào)1 647 229]。
DMEM、FCS、谷氨酰胺、HBSS(均來自Life Technologies Ltd，UK)。
木炭/葡聚糖氣提的FBS(HyClone SH30068.02，Perbio Science UKLtd)。
BSA(Sigma，A7888)。
人類重組體IGF-1動(dòng)物/培養(yǎng)基級(jí)(GroPep Limited ABN 78 008176 298，澳大利亞，目錄號(hào)IU 100)。
IGF的制備及儲(chǔ)存將100μg的凍干IGF在100μl的10mM HCl中進(jìn)行重新構(gòu)建。
加入400μl的1mg/ml BSA的PBS溶液25μl等分試樣@200μg/ml IGF-1在-20℃下儲(chǔ)存用于分析10μl原液IGF+12.5ml生長培養(yǎng)基得到160ng/ml的8X原液。
完全生長培養(yǎng)基DMEM、10％的FCS、2mM的谷氨酰胺饑餓培養(yǎng)基DMEM、1％的木炭/葡聚糖氣提的FCS、2mM的谷氨酰胺測試化合物先將化合物溶解于DMSO至10mM，然后稀釋于DMEM+1％的FCS+谷氨酰胺中，得到分析孔中在1-0.00045％DMSO中為100-0.0.45μM的最終濃度范圍。
a.ii)測試方案第一天收獲正以指數(shù)生長的NIH3T3/IGFR細(xì)胞，并以100μl的體積按照1.2×104個(gè)細(xì)胞/孔在完全生長培養(yǎng)基中接種至平底的96孔組織培養(yǎng)等級(jí)板(Costar 3525)中。
第二天采用多道移液器小心將生長培養(yǎng)基從每個(gè)孔中取出。用200μlHBSS仔細(xì)將孔漂洗3次。將100μl饑餓培養(yǎng)基加入到每個(gè)孔中，將板再培養(yǎng)24小時(shí)。
第三天將50μl 4X濃度的試驗(yàn)化合物加入到適當(dāng)?shù)目變?nèi)。在添加IGF之前單獨(dú)用化合物將細(xì)胞培養(yǎng)30分鐘。對(duì)于經(jīng)IGF處理的細(xì)胞，則加入適當(dāng)體積(即25μl)的饑餓培養(yǎng)基使每個(gè)孔中的最終體積最多達(dá)到200μl，接著以160ng/ml加入25μl的IGF-1(使最終的濃度為20ng/ml)。未采用IGF刺激的對(duì)照細(xì)胞也添加適當(dāng)體積(即50μl)的饑餓培養(yǎng)基，使每個(gè)孔的最終體積達(dá)到最多200μl。將板再次培養(yǎng)20小時(shí)。
第四天根據(jù)制造商方案，采用BrdU細(xì)胞增殖酶聯(lián)免疫吸附測定評(píng)估BrdU在細(xì)胞中的摻入情況(摻入4小時(shí)后)。
我們發(fā)現(xiàn)各實(shí)施例的化合物在上述試驗(yàn)中的IC50小于50μM。
作用機(jī)理分析通過測量響應(yīng)MCF-7細(xì)胞(ATCC No.HTB-22)的IGF-I刺激所導(dǎo)致的IGF-IR、Akt和MAPK(ERK 1和2)磷酸化作用的變化來確定對(duì)IGF-IR媒介信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制情況。通過相同細(xì)胞系中響應(yīng)EGF的對(duì)MAPK磷酸化作用的影響測量選擇性。
a.i)所用的試劑RPMI 1640培養(yǎng)基、沒有酚紅的RPMI 1640培養(yǎng)基、FCS、谷氨酰胺(均來自Life Technologies Ltd.，UK)
木炭/葡聚糖氣提的FBS(HyClone SH30068.02，Perbio Science UKLtd)SDS(Sigma，L4390)2-巰基乙醇(Sigma，M6250)溴酚藍(lán)(Sigma，B5525)麗春紅S(Sigma，P3504)Tris base(TRIZMATM堿，Sigma，T1503)甘氨酸(Sigma，G7403)甲醇(Fisher Scientific UK.目錄號(hào)M/3950/21)干奶粉(MarvelTM，Premier Brands UK Ltd.)人重組體IGF-1動(dòng)物/培養(yǎng)基等級(jí)(GroPep Limited ABN 78 008176 298，澳大利亞。目錄號(hào)IU 100)人重組體EGF(Promega Corporation，WI，USA.目錄號(hào)G5021)完全生長培養(yǎng)基RPMI 1640、10％的FCS、2mM的谷氨酰胺饑餓培養(yǎng)基沒有酚紅的RPMI 1640培養(yǎng)基、1％的木炭/葡聚糖氣提的FCS、2mM的谷氨酰胺測試化合物先將化合物溶解于DMSO至10mM，然后稀釋在沒有酚紅的RPMI 1640+1％的FCS+2mM的谷氨酰胺中，得到分析孔內(nèi)在1-0.00045％DMSO中為100-0.0.45μM的最終濃度范圍。
Western轉(zhuǎn)移緩沖液50mM的Tris base、40mM的甘氨酸、0.04％的SDS、20％的甲醇
Laemmli緩沖液x2100mM Tris-HCl pH6.8，20％的甘油、4％的SDS樣品緩沖液x4在蒸餾水中的200mM的2-巰基乙醇、0.2％的溴酚藍(lán)初級(jí)抗體兔抗人IGF-1Rβ(Santa Cruz Biotechnology Inc.，美國，目錄號(hào)sc-713)兔抗胰島素/IGF-1R[pYpY1162/1163]Dual Phosphospecific(BioSourceInternational Inc.，CA，美國。Cat No.44-8041)小鼠抗PKBα/Akt(Transduction Laboratories，KY，美國。目錄號(hào)P67220)兔抗Phospho-Akt(Ser473)(Cell Signalling Technology Inc.，MA，美國。目錄號(hào)#9271)兔抗-p44/p42 MAP激酶(Cell Signalling Technology Inc.，MA，美國。目錄號(hào)#9102)兔抗-Phospho p44/p42 MAP激酶(Cell Signalling TechnologyInc.，MA，美國。目錄號(hào)#9101)小鼠抗肌動(dòng)蛋白克隆AC-40(Sigma-Aldrich Company Ltd，UK，A4700)抗體稀度
二級(jí)抗體山羊抗兔，HRP連接(Cell Signalling Technology Inc.，MA，美國。目錄號(hào)#7074)綿羊-抗小鼠IgG HRP-結(jié)合(Amersham Pharmacia Biotech UK Ltd.目錄號(hào)NXA931)在PBST+5％的牛奶中將抗兔稀釋至1∶2000在PBST+5％的牛奶中將抗小鼠稀釋至1∶5000a.ii)分析方案細(xì)胞處理將MCF-7細(xì)胞在1ml完全生長培養(yǎng)基中以1×105個(gè)細(xì)胞/孔接種于24孔板上。將板培養(yǎng)24小時(shí)以使細(xì)胞沉降。取出培養(yǎng)基，用PBS2ml/孔輕柔地洗滌板3次。每個(gè)孔加入1ml的饑餓培養(yǎng)基，將板培養(yǎng)24小時(shí)，使細(xì)胞缺乏血清。
然后加入25μl各化合物的稀釋液，使細(xì)胞和化合物在37℃下培養(yǎng)30分鐘?；衔锱囵B(yǎng)30分鐘后，每個(gè)孔適當(dāng)加入25μl的IGF(最終濃度為20ng/ml)或EGF(最終濃度為0.1ng/ml)，將細(xì)胞和IGF或EGF在37℃下培養(yǎng)5分鐘。取出培養(yǎng)基(通過移液)，然后加入100μl的2x Laemmli緩沖液。將板在4℃下儲(chǔ)存直至細(xì)胞收獲為止(應(yīng)在將Laemmli緩沖液加入到細(xì)胞后的2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行收獲)。
為收獲細(xì)胞，采用移液管重復(fù)地吸上和排出Laemmli緩沖液/細(xì)胞混合物并將其轉(zhuǎn)移至1.5ml的微量離心管內(nèi)。使用前將所收獲的細(xì)胞溶胞產(chǎn)物保存在-20℃下。采用DC蛋白質(zhì)分析試劑盒(Bio-RadLaboratories，美國，按照生產(chǎn)商的說明書)可確定每一種溶胞產(chǎn)物的蛋白質(zhì)濃度。
蛋白質(zhì)印跡技術(shù)用4x樣品緩沖液制作細(xì)胞樣品，用21號(hào)針注射并煮沸5分鐘。將樣品以相同的體積及分子量梯度置于4-12％的Bis-Tris凝膠(Invitrogen BV，The Netherlands)上，采用所提供的溶液并按照廠商的說明書使這些凝膠在Xcell SureLockTMMini-Cell裝置(Invitrogen)上進(jìn)行試驗(yàn)。采用Western轉(zhuǎn)移緩沖液，在XcellSureLockTMMini-Cell裝置中以30伏特使凝膠滲開在Hybond C ExtraTM膜(Amersham Pharmacia Biotech UK Ltd.)上1小時(shí)。被遮蔽的膜用0.1％的麗春紅S染色以顯影轉(zhuǎn)移的蛋白質(zhì)，然后水平切割成帶狀物根據(jù)分子量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行多種抗體培養(yǎng)。采用單獨(dú)的帶狀物檢測IGF-1R、Akt、MAPK和肌動(dòng)蛋白對(duì)照品。
室溫下將膜在PBST+5％牛奶溶液中封閉1小時(shí)。然后將膜置于4孔板內(nèi)的3ml初級(jí)抗體溶液內(nèi)，將板在4℃下培養(yǎng)過夜。將膜在5ml的PBST中洗滌3次，每次洗滌5分鐘。制備HRP-結(jié)合的二級(jí)抗體溶液，每個(gè)膜加入5ml。在室溫及攪拌下將膜培養(yǎng)1小時(shí)。將膜在5ml的PBST中洗滌3次，每次洗滌5分鐘。制備ECL溶液(SuperSignalECL，Pierce，Perbio Science UK Ltd)并與膜一起培養(yǎng)1分鐘(按照生產(chǎn)商的說明書)，然后暴露于光敏薄膜上并進(jìn)行顯影。
我們發(fā)現(xiàn)各實(shí)施例的化合物在上述試驗(yàn)中的IC50小于20μM。
權(quán)利要求
1.一種下式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物 其中R1代表包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(這些基團(tuán)各自可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基、羥基和三氟甲基的取代基取代)、鹵素、硝基、氰基、-NR5R6、羧基、羥基、C2-C6烯基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷基羰基氨基、苯基羰基、-S(O)mC1-C6烷基、-C(O)NR7R8、-SO2NR7aR8a；和可包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的不飽和5至6元環(huán)，所述環(huán)本身任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(這些基團(tuán)各自可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基、羥基和三氟甲基的取代基取代)、鹵素、硝基、氰基、-NR9R10、羧基、羥基、C2-C6烯基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基羰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷基羰基氨基、苯基羰基、-S(O)nC1-C6烷基、-C(O)NR11R12和-SO2NR11aR12a；m為0、1或2；n為0、1或2；R2代表任選被至少一個(gè)選自鹵素、羥基和C1-C3烷氧基的取代基取代的C1-C4烷基；R3代表氫、鹵素或三氟甲基；R4代表包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(這些基團(tuán)各自可任選被至少一個(gè)選自鹵素、氨基、羥基和三氟甲基的取代基取代)、鹵素、硝基、氰基、-NR13R14、羧基、羥基、C2-C6烯基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C4烷氧基羰基、C1-C4烷基羰基、C1-C4烷基羰基氨基、苯基羰基、-S(O)pC1-C4烷基、-C(O)NR15R16和-SO2NR15aR16a；p為0、1或2；R5和R6各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R5和R6與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R7和R8各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R7和R8與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R7a和R8a各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R7a和R8a與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R9和R10各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R9和R10與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R11和R12各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R11和R12與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R11a和R12a各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R11a和R12a與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R13和R14各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R13和R14與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；R15和R16各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R15和R16與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)；和R15a和R16a各獨(dú)立代表氫、C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基，或R15a和R16a與其相連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R1代表包含至少一個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子的5或6元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(這些基團(tuán)各自可任選被至少一個(gè)選自羥基的取代基所取代)、鹵素、-C(O)NR7R8、C1-C6烷氧基羰基；以及可包含至少一個(gè)選自氮和氧的環(huán)雜原子的不飽和5至6元環(huán)，所述環(huán)本身任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基(這些基團(tuán)各自可任選被至少一個(gè)選自鹵素的取代基所取代)、鹵素和氰基；其中R7和R8兩者均為氫或R7和R8與其所連接的氮原子一起形成4至6元飽和雜環(huán)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，R1代表吡啶基、咪唑基、異噁唑基、吡唑基、呋喃基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、吡咯基或噻吩基；所述吡啶基、咪唑基、異噁唑基、吡唑基、呋喃基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、吡咯基和噻吩基任選被至少一個(gè)選自甲基、異丙基、羥甲基、甲氧基、氯、溴、氨基甲?；?、甲氧基羰基、吡咯烷-1-基羰基、苯基和吡啶基的取代基所取代；所述苯基或吡啶基任選被至少一個(gè)選自甲基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、氟、氯、溴和氰基的取代基所取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R2代表C1-C4烷基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R3代表氫或鹵素。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R4代表包含至少1個(gè)選自氮的環(huán)雜原子的5元雜芳環(huán)，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自C1-C6烷基和C3-C6環(huán)烷基的取代基所取代。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中，R4中的5元雜芳環(huán)為吡唑基，所述環(huán)任選被至少一個(gè)選自以下的取代基所取代甲基、乙基、異丙基、丙基、叔丁基和環(huán)丙基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R1代表吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、2-甲氧基吡啶-5-基、2-氰基吡啶-5-基、3-溴代吡啶-5-基、3-(吡啶-2-基)吡啶-5-基、4-(吡啶-2-基)吡啶-2-基、3-氯代吡啶-2-基、3-甲基吡啶-2-基、6-甲基吡啶-2-基、5，6-二甲基吡啶-2-基、咪唑-4-基、咪唑-5-基、3-甲基異噁唑-5-基、5-甲基異噁唑-3-基、3-異丙基異噁唑-5-基、3-甲氧基羰基異噁唑-5-基、3-(羥甲基)異噁唑-5-基、3-氨基甲?；悋f唑-5-基、3-(吡咯烷-1-基羰基)異噁唑-5-基、3-苯基異噁唑-5-基、3-(吡啶-2-基)異噁唑-5-基、3-(2-甲氧基吡啶-3-基)異噁唑-5-基、3-(2-甲氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(3-甲氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-乙氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-三氟甲基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-三氟甲氧基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-氯代苯基)異噁唑-5-基、3-(2-溴代苯基)異噁唑-5-基、3-(2-甲基苯基)異噁唑-5-基、3-(2-氟代苯基)異噁唑-5-基、3-(2-氰基苯基)異噁唑-5-基、5-甲基吡唑-4-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、5-甲基呋喃-2-基、吡嗪-2-基、2-甲基吡嗪-5-基、噠嗪-3-基、嘧啶-4-基、1-甲基吡咯-2-基和噻吩-3-基；R2代表甲基、乙基和丙基；R3代表氫、氯或溴；和R4代表5-甲基吡唑-3-基、5-乙基吡唑-3-基、5-異丙基吡唑-3-基、5-丙基吡唑-3-基、5-叔丁基吡唑-3-基和5-環(huán)丙基吡唑-3-基。
9.一種選自下列的化合物5-溴-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-環(huán)丙基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(3-苯基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(3-吡啶-2-基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(3-吡啶-2-基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-乙基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-[3-(2-氟代苯基)異噁唑-5-基甲基氨基]-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-[3-(2-氟代苯基)異噁唑-5-基甲基氨基]-4-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-[3-(2-氟代苯基)異噁唑-5-基甲基氨基]-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-4-(5-異丙基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-(吡啶-2-基甲基氨基)嘧啶；5-溴-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-丙基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-(3-甲基異噁唑-5-基甲基氨基)-4-(5-異丙基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-氯-2-[3-(吡啶-2-基)異噁唑-5-基甲基氨基]-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；5-溴-2-[3-(吡啶-2-基)異噁唑-5-基甲基氨基]-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；和5-溴-2-(3-溴代吡啶-5-基甲基氨基)-4-(5-叔丁基-1H-吡唑-3-基氨基)嘧啶；及以上任何一種化合物的藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物。
10.一種制備權(quán)利要求1的化合物的方法，該方法包括(i)使下式(II)的化合物與其中R1和R2如式(I)所定義的式(III)H2N-R2-R1化合物進(jìn)行反應(yīng) 其中L1代表離去基團(tuán)，R3和R4如式(I)所定義；或(ii)使下式(IV)的化合物與其中R4如式(I)所定義的式(V)H2N-R4化合物進(jìn)行反應(yīng) 其中L2代表離去基團(tuán)，R1、R2和R3如式(I)所定義；或(iii)使下式(VI)的化合物與下式(VII)的化合物進(jìn)行反應(yīng) 其中R1和R2如式(I)所定義， 其中X代表氧原子，q為1，或者X代表氮原子，q為2，每一個(gè)R20各自代表C1-C6烷基，R3和R4如式(I)所定義；或(iv)當(dāng)R4代表被取代的吡唑基時(shí)，使下式(VIII)的化合物與肼進(jìn)行反應(yīng) 其中R21代表C1-C6烷基或C3-C6環(huán)烷基，R1、R2和R3如式(I)所定義；并且任選在(i)、(ii)、(iii)或(iv)之后進(jìn)行以下步驟的一個(gè)或多個(gè)·將所得的化合物轉(zhuǎn)化為權(quán)利要求1的其它化合物·形成所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
11.一種藥物組合物，該組合物包含權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，以及藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體。
12.一種制備權(quán)利要求11的藥物組合物的方法，該方法包括將權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所定義的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物與藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體進(jìn)行混合。
13.用于治療的權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
14.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。
15.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物在制備用于調(diào)節(jié)胰島素樣生長因子-1受體活性的藥物中的用途。
16.一種治療癌癥的方法，該方法包括給予患者治療有效量的權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
17.一種調(diào)節(jié)胰島素樣生長因子-1受體活性的方法，該方法包括給予有此需要的患者治療有效量的權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R1中的5或6元雜芳環(huán)選自噻吩基、吡唑基、異噁唑基、噻二唑基、吡咯基、呋喃基、噻唑基、三唑基、四唑基、咪唑基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基和吡啶基。
19.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R1中的5或6元雜芳環(huán)選自噻吩基、吡唑基、異噁唑基、噻二唑基、吡咯基、呋喃基、噻唑基、三唑基、四唑基、咪唑基、吡嗪基和吡啶基。
20.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R1中的不飽和5至6元環(huán)選自苯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、噻吩基、吡唑基、異噁唑基、噻二唑基、吡咯基、呋喃基、噻唑基、三唑基、四唑基、咪唑基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基和吡啶基。
21.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R1中的不飽和5至6元環(huán)選自苯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、噻吩基、吡唑基、異噁唑基、噻二唑基、吡咯基、呋喃基、噻唑基、三唑基、四唑基、咪唑基、吡嗪基和吡啶基。
22.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R3代表鹵素原子。
23.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R4中的5元雜芳環(huán)選自噻吩基、吡唑基、異噁唑基、噻二唑基、吡咯基、呋喃基、噻唑基、三唑基、四唑基和咪唑基。
24.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R4中的5元雜芳環(huán)為吡唑基。
全文摘要
本發(fā)明提供了其中R
文檔編號(hào)C07D239/48GK1617858SQ02827802
公開日2005年5月18日 申請(qǐng)日期2002年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月7日
發(fā)明者B·巴拉姆, A·帕佩, A·托馬斯 申請(qǐng)人:阿斯特拉曾尼卡有限公司