專利名稱：高純度血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種博落回中血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝。
背景技術(shù)：
博落回系罌粟科植物[Macleaya cordata(Willd)R.Br.]，為我國廣泛野生的有毒植物，具有消腫、解毒、殺蟲等功能，是傳統(tǒng)的中藥。血根堿和白屈菜紅堿為博落回的主要有效成分，屬苯并菲啶生物堿類。經(jīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和藥理研究證明能治療哮喘、支氣管炎、痢疾等疾病，新近研究還表明白屈菜紅堿具有抗腫瘤的藥效。
目前，隨著人們對血根堿和白屈菜紅堿藥理活性的更深層次的認識，工業(yè)化地制備這些高純度的生物堿勢在必行。分離制備血根堿和白屈菜紅堿的文獻較少，胡之璧等在《博落回果實中有效成份的研究》(《藥學(xué)學(xué)報》1979，14(9)，535-539)中通過硅膠柱層析來制備博落回果實中血根堿和白屈菜紅堿，其成本高，產(chǎn)率低，只適合于少量生產(chǎn)，不適合于工業(yè)化生產(chǎn)。有人利用氧化鋁作吸附劑分離血根堿、白屈彩紅堿等生物堿，但所使用洗脫劑毒性大，且生產(chǎn)量少，也不適于工業(yè)化生產(chǎn)。還有人利用硅膠或氧化鋁薄層層析來分離這兩個生物堿，該方法也只適合用于制備少量的純品，達不到工業(yè)制備的要求。美國專利5133981號提到了通過調(diào)節(jié)溶液的PH值來分離血根堿和白屈菜紅堿，但所使用的原料中只有這兩種組份，且含量很高。美國專利4818533通過調(diào)節(jié)溶液的pH值來制備高純度的苯并菲啶生物總堿，美國專利4767861號及4769452號公開的方法也都是只能制備這些生物總堿，達不到分離純化的目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種收率高、成本低，產(chǎn)品純度高，適于工業(yè)化生產(chǎn)的血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝。
本發(fā)明包括以下步驟(1)樹脂預(yù)處理、裝柱將大孔吸附樹脂置于甲醇中浸泡，浸泡時間以2-6小時為宜，濕法裝入層析柱中，用水沖洗至無甲醇氣味；為保證柱效，在裝柱時應(yīng)當裝填均勻，柱床中無氣泡；樹脂上端宜用棉花壓平，棉花厚度約為1-3cm；(2)原料預(yù)處理、裝柱將生物堿質(zhì)量百分含量達30％以上的博落回提取物或其他含血根堿和白屈菜紅堿的植物生物堿提取物用水超聲提取，提取次數(shù)以2-3次為宜，每次提取時間以10-60min為宜，過濾，濾液裝入裝好的層析柱中，裝入速度最好在0.5-1.5BV/h之間進行選擇，裝好柱后，靜置2-6h；(3)沖洗、分離①用含甲醇10-30％的甲醇水溶液沖洗，流速以1-3BV/h為宜，至有黃色液體流出后，再沖洗2-7BV甲醇水溶液；②用含甲醇50-70％的甲醇水溶液沖洗，流速以1-3BV/h為宜，沖洗量以2-7BV為宜，前1BV的洗脫液收集到一起(此段洗脫液中主要含原阿片堿和別隱品堿)，剩下的洗脫液收集到一起(此段洗脫液主要含白屈菜紅堿)；③用含甲醇80-95％的甲醇水溶液(并加微量濃鹽酸，比例約為甲醇溶液的0.005-0.015％)沖洗，流速以1-3BV/h為宜，沖洗量以3-5BV為宜，此段洗脫液中只含有白屈菜紅堿和血根堿，白屈菜紅堿占主要；④用100％乙醇進行沖洗，流速以1-3BV/h為宜，沖洗量為3-5BV，此段洗脫液中主要含血根堿；⑤用2-3％的鹽酸溶液浸泡3-6小時，用量為1-2BV，然后用水以1-3BV/h的流速沖洗至柱子幾乎無色，此段洗脫液中血根堿占多數(shù)；進行上述各步?jīng)_洗操作時，宜同步用紫外檢測器于250-290nm監(jiān)測分離純化情況。
上述百分比均為體積百分比。
(4)重結(jié)晶①將主要含血根堿的洗脫液加入適量甲醇(按每克溶質(zhì)加甲醇30-50毫升的比例添加)和微量濃鹽酸(加入量為甲醇體積的0.3-0.6％)后，置于50-70℃水浴上加熱10-40min，趁熱過濾，濾液再加適量的濃鹽酸(加入量相當于濾液體積的2-10％)，再置于50-70℃水浴上加熱10-40min，冷卻，結(jié)晶，得到高純度的血根堿的鹽酸鹽；濾渣還可用甲醇按照前述操作步驟進行重結(jié)晶，也得到高純度的血根堿的鹽酸鹽；②在主要含白屈菜紅堿的洗脫液中加入適量甲醇(按每克溶質(zhì)加甲醇10-30ml的比例添加)，置于50-70℃水浴上加熱10-40min，趁熱過濾，濾液再加入適量濃鹽酸(加入量相當于濾液體積的2-10％)，置于50-70℃水浴上加熱10-40min，冷卻，結(jié)晶，得到高純度白屈菜紅堿的鹽酸鹽；濾渣還可再加適量的甲醇(添加比例同前)，置于50-70℃水浴上加熱10-40min，冷卻過夜，過濾；濾渣宜再按上述步驟重復(fù)操作一次，兩次所得的濾液按照前述操作步驟進行重結(jié)晶，也得到高純度的白屈菜紅堿的鹽酸鹽。
將上述第(3)步所得主要含血根堿和白屈菜紅堿的洗脫液的pH值分別調(diào)節(jié)至8-9時，則可分別得到單體血根堿和白屈菜紅堿。
樹脂再生用水沖洗至中性，再用1-2BV5％的氫氧化鈉溶液浸泡3-6小時，用水沖至中性，接著用甲醇浸泡2-3小時，然后再用水沖洗至無醇味，這樣樹脂就可以重復(fù)利用。
最終單體產(chǎn)品用紫外、紅外及高效液相色譜鑒定其純度并進行產(chǎn)品質(zhì)量控制。
本發(fā)明方法回收率可達50％以上，對環(huán)境污染少，制造成本低，產(chǎn)品純度高達98％以上(HPLC)。


圖1為白屈菜紅堿紅外譜圖；圖2為血根堿紅外譜圖；
圖3為血根堿紫外譜圖；圖4為白屈菜紅堿紫外譜圖；圖5為制備的血根堿液相色譜圖；圖6為制備的白屈菜紅堿液相色譜圖。
具體實施例方式
以下通過一實施例對本發(fā)明作進一步說明。
實施例(1)樹脂預(yù)處理、裝柱將HPD-100大孔吸附樹脂用甲醇浸泡4小時，用蒸餾水洗至無醇味，然后裝入玻璃層析柱中，裝柱的長度為45cm，靜置1小時，樹脂上端用1cm厚的棉花壓平(以免沖洗時把柱床沖動)；(2)原料預(yù)處理、裝柱準確稱取生物堿含量為50％(w/w)的博落回提取物5g，用蒸餾水150ml超聲提取20min，再抽濾得濾液，濾渣用蒸餾水150ml再超聲，這樣超聲提取三次，合并三次濾液約450ml。
將原料預(yù)處理所得的濾液以3mL/min的速度裝入玻璃層析柱中，靜置2小時。
(3)沖洗、分離(A)用含甲醇20％的甲醇溶液沖洗，速度為6mL/min，直到有黃色液體流出才開始接收，大約接收800mL；(B)用1000mL含甲醇60％的甲醇溶液沖洗，速度為6mL/min，到有紅黃色的液體流出時，才開始接收，開始200mL用一個燒杯接收(此段洗脫液主要含原阿片堿和別隱品堿)，其余的用另一個燒杯接收(此段洗脫液主要含白屈菜紅堿)；(C)用550mL含甲醇90％的甲醇溶液(加入4滴濃鹽酸)沖洗，速度為6mL/min(此段洗脫液主要含白屈菜紅堿，也含有血根堿)；(D)用500mL 100％的乙醇沖洗，速度為6mL/min，直到流出無色液體(此段洗脫液主要含血根堿)；(E)用3％的鹽酸水溶液150mL浸泡2h，再用水沖洗至幾近無色，所得紅色洗脫液，蒸干，即為血根堿的鹽酸鹽。
上述百分比均為體積百分比。
(4)重結(jié)晶(A)將主要含血根堿的洗脫液加適量的甲醇和濃鹽酸(按每克溶質(zhì)加40ml甲醇的比例添加，添加的濃鹽酸為甲醇體積的0.4％)，置于60℃水浴上加熱15min，趁熱過濾，濾液再加相當于濾液體積3％的濃鹽酸，置于60℃水浴上加熱15min，冷卻，結(jié)晶，得到高純度的血根堿的鹽酸鹽；濾渣用甲醇(按每克溶質(zhì)加甲醇20ml的比例添加)溶解，再按照上述步驟進行重結(jié)晶，也得到高純度的血根堿的鹽酸鹽。
(B)在主要含白屈菜紅堿的洗脫液中加入甲醇(按每克溶質(zhì)加甲醇20ml的比例添加)，置于60℃水浴上加熱15min，趁熱過濾，濾液再加相當于濾液體積4％的濃鹽酸，置于60℃水浴上加熱15min，冷卻過夜，結(jié)晶，得到高純度的白屈菜紅堿的鹽酸鹽；濾渣再加甲醇(添加比例同前)，置于60℃水浴上加熱15min，冷卻過夜，過濾；所得濾渣，再重復(fù)上述操作步驟，將兩次所得濾液進行重結(jié)晶，均得到高純度的白屈菜紅堿的鹽酸鹽。
血根堿回收率為75％，純度為98.3％；白屈菜紅堿回收率60％，純度達98.2％。
白屈菜紅堿的紅外譜圖、紫外譜圖、液相色譜圖分別見附圖1、4、6；血根堿的紅外譜圖、紫外譜圖、液相色譜圖分別見附圖2、3、5。
權(quán)利要求
1.一種血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝，包括以下步驟(1)樹脂預(yù)處理、裝柱將大孔吸附樹脂置于甲醇中浸泡2-6小時，濕法裝入層析柱中，用水沖洗至無甲醇氣味；(2)原料預(yù)處理、裝柱將生物堿質(zhì)量百分含量達30％以上的博落回提取物，加水溶解，用超聲提取，過濾，濾液裝入裝好的層析柱中，靜置2-6h；(3)沖洗、分離①用含甲醇10-30％的甲醇水溶液沖洗，至有黃色液體流出后，再沖洗2-7BV；②用含甲醇50-70％的甲醇水溶液沖洗，沖洗量為2-7BV，前1BV的洗脫液收集到一起，此段洗脫液主要含原阿片堿和別隱品堿；剩下的洗脫液收集到一起，此段洗脫液主要含白屈菜紅堿；③用含甲醇80-95％并加有相當于甲醇體積0.005-0.015％的濃鹽酸的甲醇鹽酸水溶液沖洗，此段洗脫液主要含白屈菜紅堿；④用100％的乙醇溶液進行沖洗，沖洗量為3-5BV，此段洗脫液中主要含血根堿；⑤用2-3％的鹽酸溶液浸泡3-6小時，用量為1-2BV，然后用水沖洗至柱子幾乎無色，此段洗脫液中主要含血根堿；上述百分比均為體積百分比；(4)重結(jié)晶①在主要含血根堿的洗脫液中，按照每克溶質(zhì)加甲醇30-50毫升的比例加入甲醇和相當于甲醇體積0.3-0.6％的濃鹽酸，然后將該洗脫液置于50-70℃水浴上加熱10-40min，趁熱過濾；濾液再加相當于濾液體積2-10％的濃鹽酸，在50-70℃水浴上加熱10-40min，冷卻，結(jié)晶，得到高純度的血根堿的鹽酸鹽；②在主要含白屈菜紅堿的洗脫液中，按照每克溶質(zhì)加甲醇10-30ml的比例，加入甲醇，然后將該洗脫液置于50-70℃水浴上加熱10-40min，趁熱過濾，冷卻過夜，結(jié)晶，得到高純度的白屈菜紅堿的鹽酸鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝，其特征在于，用水超聲提取時間為10-60min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝，其特征在于，超聲提取的原料濾液按照0.5-1.5BV/h的速度裝入裝好的層析柱中。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝，其特征在于，所用各種洗脫劑的流速為1-3BV/h。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝，其特征在于，所用各種洗脫劑的流速為1-3BV/h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝，其特征在于，進行洗脫分離時，同步用紫外檢測器于250-290nm監(jiān)測分離純化情況。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種血根堿和白屈菜紅堿分離制備工藝，其特征是以博落回提取物或其他含血根堿和白屈菜紅堿等生物堿的植物提取物為原料，加水溶解，超聲提取，濾液裝入裝好的經(jīng)甲醇浸泡處理過的大孔吸附樹脂玻璃層析柱中，再分別分步驟用不同濃度的甲醇水溶液、100％乙醇、水進行沖洗，分離，分別收集主要含白屈菜紅堿的洗脫液和主要含血根堿的洗脫液，在適當條件下分別進行重結(jié)晶。所得血根堿和白屈菜紅堿的鹽酸鹽純度達98％以上(HPLC)，回收率達50％以上，對環(huán)境污染少，制造成本低，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D491/14GK1532197SQ0311820
公開日2004年9月29日 申請日期2003年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月25日
發(fā)明者波 陳, 陳波, 姚守拙, 張斐, 羅旭彪, 朱小蘭 申請人:湖南師范大學(xué)