專利名稱：8－(C－β－D－葡糖吡喃基)－7，3’，4’－三羥基黃酮、其分離方法、藥物組合物和用于糖 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的化合物，8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮。本發(fā)明還涉及一種用于從印度吉納樹中分離所述新化合物8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的方法。本發(fā)明還涉及一種含有8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的藥物組合物，以及采用所述化合物治療糖尿病的方法。
背景技術(shù)：
印度吉納樹Roxb(豆科植物類)也稱作印度吉納樹(IndianKino tree)或Bi jasar，在中部和半島狀印度的多山地區(qū)是常見的[Jain，S.K.，Medicinal Plants，National Book Trust，NewDelhi，1968，p.116]。這種樹的樹葉、花和樹膠在醫(yī)學(xué)上已經(jīng)用于治療腹瀉、牙痛、發(fā)熱、尿道和皮膚感染[Chopra，R.N.，Chopra，I.C.，Handa，K.L.and Kapur，L.D.，Indigenous Drugs ofIndia，2ndEd.，Dhar，U.N.And Sons Private Limited，Calcutta，1958，p.522]。所述樹皮的萃取物，長久以來被認(rèn)為對于治療糖尿病是有用的[Kirtikar，K.R.and Basu，B.D.，IndianMedicinal Plants，2ndEd.，edited by Blatter，E.，Cailes，J.F.And Mhaskar，K.S.，Singh and Singh，Delhi，India，1975，p.2135]。據(jù)Chakravarthy等人報導(dǎo)[Chakravarthy，B.K.，Gupta，S.And Gode，K.D.，Lancet，1982，272(及其所引證的資料)，所述樹皮的活性低血糖本質(zhì)是(-)-表兒茶酸，而且，其效果歸因于胰腺的β細(xì)胞的再生。但是，這種主張受到Kolb等人的質(zhì)疑[Kolb，H.，Kiesel，U.，Grenlich，B.And Bosch，J.V.D.，Lancet，1982，1303]和Sheehan等人[Sheehan，E.W.，Zemaitis，M.A.，Slatkin，D.J.And Schiff，Jr.，P.L.，Journal of Natural Products，1983，46，232]?，F(xiàn)在人們認(rèn)為，在(-)-表兒茶酸被認(rèn)為是一種可行的抗糖尿病試劑用于人體臨床研究之前，對其作進(jìn)一步研究是必要的。
印度醫(yī)藥體系的研究人員認(rèn)為，印度吉納樹的心材較其樹皮，對于糖尿病人的治療是更為有用的，而且，所述植物越古老，則其心材越有效。它還聲稱，僅有其顏色是明顯紅色而且它能賦予水帶有藍(lán)綠熒光的紅色的心材(在水中它是保持浸濕的)，才適合用作抗糖尿病的藥物。
心材的水合或醇合萃取物的低血糖作用，已經(jīng)被實驗[Shah，D.S.，Indian Journal of Medical Research，1967，55，166 andreferences cited therein；Gupta，S.S.，Indian Journal ofMedical Research，1963，51，716]和臨床研究[Sepha，G.C.andBose.S.N.，J.Ind.Med Assoc.，1956，27，383，Kedar，P.and Chkrabarti，C.H.，Maharastra Med.J.，1981，28，165]所證實。
印度吉納樹心材富含酚類。對印度吉納樹心材的化學(xué)研究，可以追溯到1946年，但是，對于這種藥物的最近研究工作[Bhargava，P.N.，Proc.Ind.Acad.Sci.，1946，24A，496]實質(zhì)上則是斷斷續(xù)續(xù)的。
以前報導(dǎo)的有關(guān)這種植物的研究，包括下述化學(xué)成分1、印度吉納樹心材的乙醚萃取物提供了異類黃酮乙二醇4，4’-二羥基-α-甲基二苯基乙二醇，命名為Marsupol[Rao，A.V.S.，Mathew，J.，Phytochemistry，1982，21，1837]，一種苯并呋喃酮生物，2，4’，6-三羥基-4-甲氧基苯并(b)呋喃-3(2H)-酮，命名為carpusin[Mathew，J.and Rao，A.V.S.，Phytochemistry，1983，22，794]，2-丙醇衍生物，1，3-二(4-羥基苯基)丙烷-2-醇，命名為propterol[Rao，A.V.S.，Mathew，J.and Shankaran，A.V.B.，Phytochemistry，1984，23，897]，1-(2，4-二羥基苯基)-3-(4-羥基苯基)丙烷-2-醇，命名為propterol B[Mathew，J.，rao，A.V.S.and Rambhav，S.Current Science，1984，53，576]，6-羥基-7-O-甲基-3-(3-羥基-4-O-甲基苯甲基)苯并二氫呋喃-4-酮[Jain.S.C.，Sharma，S.K.，Kumar，R.，Rajwansh，V.K.and Babu，V.R.，Phytochemistry，1997，44，765]。
2、心材的醇合萃取物的醋酸乙酯可溶餾分提供了pterosupin β，2’，4，4’-四羥基-3’(c-β-D-吡喃葡糖苷)二氫查耳酮[Adinarayana，D.，Syamsundar，K.V.，Seligmann，O.，& Wagner，H.，(Z.Naturforsch.，1982，37c，145)]，Marsupinol[Trivedi，J.J.，Indian J.Phys.Pharmacol，1997，15，51]，5，4’-二甲氧基-8-甲基異黃酮-7-O-α-L-鼠李糖吡喃糖苷，凹豬屎豆堿-O-β-D吡喃葡糖苷和irisolidine-7-O-α-L-鼠李糖吡喃糖苷[Mitra，J.And Joshi.T.，Phytochemistry，1982，21，2429]和5，7’-二羥基-6-甲氧基-7-O-α-L-鼠李糖吡喃糖苷[Mitra，J.And Joshi.T.，Phytochemistry，1983，22，2326]，它們從心材的醇合萃取物的醋酸乙酯可溶餾分中得到的。
3、苯并呋喃酮衍生物，2-6-二羥基-2-(p-羥基苯基)-4-甲氧基-3(2H)-苯并呋喃酮，命名為marsupin[Maurya，R.，Ray，A.B.，Duah，F(xiàn).K.，Slatkin，D.J.& Schiff，P.L.Jr.，Heterocycles，1982，19，2103]&蝶芪(pterostilbin)，(2S)-羥基黃酮，異甘草素，甘草素，7，4’-二羥基黃酮，5-莰非醇，&3，7，4’-三羥基黃酮[Maurya，R.，Ray，A.B.Duah，F(xiàn).K.，Slatkin，D.J.&Schiff，P.L.Jr.，J.Nat.Prod.1984，47，179]，兩種C-糖苷，8-C-β-D-葡糖吡喃基-3，7，4’-三羥基&3，7，3’，4’-四羥基黃酮&3’-C-β-D-葡糖吡喃基-α-羥基-二氫查耳酮[Bezuidenhoudt，B.C.B.，Brandt，E.V.，and Ferreira，E.V.Phytochemistry，1987，26，531]，它們是從脫脂的心材醋酸乙酯萃取物中得到的。
4、印度吉納樹根的石油萃取物提供了蛇床烷基-4(15)-烯-1β，11-二醇，β-桉醇，高根二醇-3-單乙酸酯和蝶芪[Adinarayana，D.，and Syamasundar，K.V.，Phytochemistry，1982，22，1083]。印度吉納樹花的乙醇萃取物提供了4，6，4’-三羥基(2-次苯甲基苯(并)呋喃酮)6-O-鼠李糖吡喃糖苷和4，6，4’-三羥基-7-甲基(2-次苯甲基苯(并)呋喃酮)4-O-鼠李糖吡喃糖苷[Mohan，P.，and Joshi，T.，Phytochemistry，1989，28，1287]，而印度吉納樹皮的乙醇萃取物則提供了(-)-表兒茶酸[Chakravarthy，B.K.，and Gode，K.D.，Planta Medica，1985，56]。
盡管如此，但是，現(xiàn)有技術(shù)沒有提供任何與這類化學(xué)成分有關(guān)的生物活性的詳細(xì)信息。而且，現(xiàn)有技術(shù)僅公開了乙醚萃取物、醋酸乙酯萃取物和醇合萃取物的醋酸乙酯可溶餾分的制備方法，但是沒有公開制備印度吉納樹心材的水萃取物的方法，也沒有公開企圖從其中分離出任意化學(xué)成分的方法。
發(fā)明目的本發(fā)明的主要目的是相應(yīng)地制備所述印度吉納樹心材的水萃取物，并從中得到化學(xué)成分。
本發(fā)明的另一個目的是研究所述印度吉納樹心材的水萃取物，從而得到可用于治療糖尿病的生物活性餾分。
發(fā)明概述本發(fā)明的上述和其它目的，可通過制備所述印度吉納樹心材水萃取物研究一種正丁醇可溶的水萃取物，并從中分離出一種新的生物活性餾分。因此，本發(fā)明提供了一種新的化合物8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮。
本發(fā)明還提供了一種用來分離8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的方法，它包括(a)使所述植物印度吉納樹的心材粉末化，(b)采用一種質(zhì)子溶劑對所制備的粉狀植物材料進(jìn)行萃取，(c)濃縮所述萃取物至最小體積，采用不同具有提高極性的有機溶液進(jìn)行分配，以除去非極性成分，采用極性溶劑對所述含水層進(jìn)行萃取，除去所述溶劑，得到殘余物，(d)從所述殘余物中分離出所述8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述用于制備步驟(b)中的質(zhì)子溶劑，是選自由水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇和其任意混合物所組成的組。
在本發(fā)明的又一種實施方式中，所述用來萃取所述含水層的極性溶劑是選自醋酸乙酯、丙醇和丁醇。
在本發(fā)明的又一種實施方式中，用于步驟(c)除去非極性成分的有機溶劑，是選自己烷、石油醚和氯仿。
在本發(fā)明的又一種實施方式中，所述用于分離8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的層析方法，是選自MPLC、HPLC和閃蒸層析法。
本發(fā)明還涉及一種在一種藥物可接受載體上含有藥物有效量的8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的藥物組合物。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮在所述組合物中的含量，相對于病人體重來說，其范圍為0.5-10mg/kg。
本發(fā)明還涉及一種用來治療糖尿病的方法，包括向病人給一定藥物有效量的8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮。
在本發(fā)明的一種實施方式中，所述8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮在所述組合物中的含量，相對于病人體重來說，其范圍為0.5-10mg/kg。
本發(fā)明還涉及一種8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮在制備用于治療糖尿病的藥物組合物中的用途。
發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明提供了一種用來分離8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的方法，它包括(a)使所述植物印度吉納樹的心材粉末化，(b)采用一種質(zhì)子溶劑對所制備的粉狀植物材料進(jìn)行萃取，(c)濃縮所述萃取物至最小體積，采用不同具有提高極性的有機溶液進(jìn)行分配，以除去非極性成分，采用極性溶劑對所述含水層進(jìn)行萃取，除去所述溶劑，得到殘余物，(d)從所述殘余物中分離出所述8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮。
所述用于制備萃取物的溶劑，可為水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等或它們的任意混合物。所述用于步驟(c)除去非極性成分的有機溶劑，是選自己烷、石油醚和氯仿。所述用來萃取所述含水層的極性溶劑是選自醋酸乙酯、丙醇和丁醇。所述用于分離8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的層析方法，可為MPLC、閃蒸層析法等。
在所述MPLC方法中，所需要的洗脫溶劑是經(jīng)由分離柱泵出的，而在所述閃蒸層析中，溶劑是由大氣壓推動的。所述化合物確定其分子式為C21H20O10[FAB-MS，m/z 433[M+1]+]。該結(jié)論得到了13CNMR和DEPT光譜的支持。
所述化合物8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮是從所述印度吉納樹心材的水煎劑的正丁醇可溶餾分分離得到的，它對于人體和動物都具有抗糖尿病活性。在這種化合物的現(xiàn)有技術(shù)中沒有公開這些內(nèi)容，這是因為現(xiàn)有技術(shù)的研究工作是針對乙醚萃取物、醋酸乙酯萃取物和醇合萃取物的醋酸乙酯可溶餾分進(jìn)行的。
所述從印度吉納樹中分離活性要素的方法，包括采用不同的分子中含有1-6個碳原子的有機溶劑，對所述粉狀心材的水合萃取物進(jìn)行分配。通過采用現(xiàn)代層析方法如中壓液體層析方法(MPLC)、高壓液體層析方法(HPLC)和使用硅膠(230-400目)的閃蒸層析方法，可從質(zhì)子餾分中分離出8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮，它具有低血糖活性。
所述化合物8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮，已經(jīng)通過18小時禁食的Wistar鼠對其低血糖活性進(jìn)行了測試。以10mg/kg p.o.的劑量，記錄下所有處理老鼠的低血糖作用。記錄到的平均下降數(shù)值為24mg/100ml血液，從初始平均的92下降到平均的68mg/100ml血液。與此相比，臨床使用的低血糖試劑，在研究中采用來作為正控制，給出的平均下降數(shù)值為23mg/100ml血液。
所述化合物，從其陽性的磷鉬酸測試(藍(lán)色)、氯化鐵測試(綠色)，證明其為一種酚類。它被認(rèn)為是一種黃酮，是由于它對Shinoda測試有反應(yīng)。羥基、羰基、和苯環(huán)的存在，可由在3228cm-1，1615cm-1，1554cm-1，1448cm-1，1422cm-1處的IR吸收得到說明。所述化合物的UV光譜給出了吸收最大值在λmaxMeOH219，238，260，320，358nm處，它們在NaOAc存在下發(fā)生紅移至219，238，267，320，367nm處。這種觀察結(jié)果表明在C-7處存在有一個自由的羥基。
1H NMR光譜(200MHZ，in DMSO-d6)顯示，在芳族區(qū)域具有增寬的信號，估計可能是由于所述葡糖基和B-環(huán)的空間擁擠導(dǎo)致的。對所述光譜進(jìn)行的檢查表明，在δ6.98(1H)處的單峰信號表示在黃酮C-3處的質(zhì)子。在δ8.28(1H，d，J＝2.1Hz)處的雙質(zhì)子信號(它由于相鄰C＝O的作用遷移的低區(qū))，與在δ6.95(1H，d，J＝8.3Hz)處的雙峰信號發(fā)生正交偶合。這種正交偶合是歸屬于在C-5和C-6處的質(zhì)子，表明僅有這兩個質(zhì)子屬于A環(huán)，而C-8是由一個葡糖基占據(jù)的。位于δ7.84(1H，br d，J＝2.1Hz)，7.97(1H，br dd，J＝2.1，8.7Hz)和6.99(1H，d，J＝8.7Hz)的質(zhì)子信號，是歸屬于在B-環(huán)上的質(zhì)子。而且，1H和13C NMR光譜給出了歸屬于一種葡萄糖部分的信號。例如，所述C-C偶合可由δ5.16處芳族質(zhì)子與在C1-取代的葡糖苷特征區(qū)的δ79.3處一個碳雙峰的1H和13C異核關(guān)聯(lián)而得到說明。而且，源自所述葡糖吡喃糖苷的芳族質(zhì)子的信號的偶合常數(shù)(J＝9.5Hz)，表明所述葡糖苷連接具有β-構(gòu)型。這樣，上述分析就得到了8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明將通過下述給出的實例得到詳細(xì)的說明，但是，它們不應(yīng)該理解為是對本發(fā)明范圍的限制。
實施例1采用80％水合乙醇(3×3升)，對所述印度吉納樹的粉狀心材，進(jìn)行滲濾處理48小時。將得到的濃縮物，依次采用己烷、氯仿、丙醇和丁醇進(jìn)行分配。所述極性萃取物進(jìn)行采用硅膠(100-200目)的MPLC處理，得到依次用己烷、氯仿、甲醇、乙醇的總餾分。所述活性化合物通過使用CHCl3-MeOH(19∶1)作為溶劑在硅膠(230-400目)上重復(fù)MPLC和閃蒸層析，進(jìn)行純化，得到8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮，收率為0.046％，mp.202-204℃，[α]D19+25.6°(MeOH，c，0.5)。
實施例2采用熱水，對所述印度吉納樹的心材，進(jìn)行萃取處理4×4小時。將得到的濃縮物，依次在己烷、氯仿、丙醇和丁醇之間進(jìn)行分配。所得到的極性萃取物進(jìn)行閃蒸層析，是使用己烷、氯仿、醋酸乙酯和甲醇作為溶劑體系，采用硅膠(100-200目)進(jìn)行的，得到富含8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的餾分，它繼續(xù)在使用EtOAc-MeOH(19.5∶0.5)作為溶劑于硅膠(230-400目)上重復(fù)層析，得到結(jié)構(gòu)式1的8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮，收率為0.049％，mp.202-204℃，[α]D19+25.6°(MeOH，c，0.5)。
實施例3所述印度吉納樹的心材，采用水進(jìn)行煮沸(16次)，直到余下1/4體積的水。過濾，濃縮并依次在己烷、氯仿、丙醇和n-丁醇之間進(jìn)行分配。所得到的極性萃取物進(jìn)行柱層析，是使用己烷、氯仿、醋酸乙酯和甲醇作為溶劑體系，采用硅膠(60-120目)進(jìn)行的，得到富含8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的餾分。所述富含8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的餾分，繼續(xù)在使用醋酸乙酯-丙酮(8∶2)的混合物于硅膠(100-200目)上重復(fù)柱層析，得到8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮，收率為0.051％，mp.202-204℃，[α]D19+25.6°(MeOH，c，0.5)。
優(yōu)點1.所得到的化合物8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮是一種具有抗糖尿病活性的新分子。
2.所述分離8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的方法是相對簡便的。
權(quán)利要求
1.8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮。
2.從印度吉納樹中分離的權(quán)利要求1所述8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮。
3.用于分離8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的方法，包括(a)使所述植物印度吉納樹的心材粉末化，(b)采用一種質(zhì)子溶劑對所制備的粉狀植物材料進(jìn)行萃取，(c)濃縮所述萃取物至最小體積，采用不同具有提高極性的有機溶液進(jìn)行分配，以除去非極性成分，采用極性溶劑對所述含水層進(jìn)行萃取，除去所述溶劑，得到殘余物，(d)從所述殘余物中分離出所述8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮。
4.權(quán)利要求3所述方法，其中，所述用于制備步驟(b)中的質(zhì)子溶劑，是選自水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇和其任意混合物。
5.權(quán)利要求3所述方法，其中，所述用于步驟(c)除去非極性成分的有機溶劑，是選自己烷、石油醚和氯仿。
6.權(quán)利要求3所述方法，其中，所述用來萃取所述含水層的極性溶劑是選自醋酸乙酯、丙醇和丁醇。
7.權(quán)利要求3所述方法，其中，所述用于分離8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮的層析方法，是選自MPLC、HPLC和閃蒸層析法。
8.含有藥物有效量的8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮存在于一種藥物可接受載體之上的藥物組合物。
9.權(quán)利要求8所述組合物，其中，8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮在所述組合物中的含量，相對于病人體重來說，其范圍為0.5-10mg/kg。
10.用于治療糖尿病的方法，包括向病人給一定藥物有效量的8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮。
11.權(quán)利要求10所述方法，其中，所述8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮在所述組合物中的含量，相對于病人體重來說，其范圍為0.5-10mg/kg。
12.8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮在制備用于治療糖尿病的藥物組合物中的用途。
13.權(quán)利要求12所述用途，其中，所述8-(C-β-D-葡糖吡喃基)-7，3’，4’-三羥基黃酮在所述組合物中的含量，相對于病人體重來說，其范圍為0.5-10mg/kg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新的化合物8－(C－β－D－葡糖吡喃基)－7，3’，4’－三羥基黃酮，是從印度吉納樹中分離出來，可用于治療糖尿病，本發(fā)明還涉及一種用于制備所述化合物的方法及其用途。
文檔編號C07H7/06GK1453286SQ0312149
公開日2003年11月5日 申請日期2003年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2002年3月28日
發(fā)明者拉凱什·莫里, 蘇克德夫·斯瓦米·漢達(dá), 拉金德爾·辛格 申請人:科學(xué)與工業(yè)研究委員會