專利名稱：綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有生物活性的化合物，更具體指綠原酸、異綠原酸的組合物及它的抗SARS病毒活性在制備預(yù)防和治療非典型性肺炎藥物中應(yīng)用。
金銀花又名雙花、銀花、忍冬花，為忍冬科多年生纏繞性木質(zhì)藤本植物忍冬的花蕾。我國南北各地均有分布。夏初當(dāng)花蕾含苞未放時采摘，晾曬或陰干，生用或炒用。性寒，味甘，入肺、胃、大腸經(jīng)。功能清熱解毒、疏散風(fēng)熱、涼血止痢。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為金銀花甘寒質(zhì)輕，其氣清香，既能清熱解毒，又能宣散風(fēng)熱，清解之中能宣透，為治療外感風(fēng)熱、溫病初期、癰瘡癤腫之要藥。我國民間常以金銀花、生甘草適量泡茶飲用，可用于夏季防暑抗溫，清熱解渴。亦有取金銀花、麥冬、桔梗、烏梅、甘草等泡飲治療急慢性咽喉炎的。
綠原酸(Chlorogenic acid)，異名咖啡鞣酸，是苯丙烯?？鼘幩狨ヮ惢衔镏凶钪匾奶烊划a(chǎn)物之一，主要存在于一些具有清熱解毒的傳統(tǒng)中藥，如金銀花之中，是這些中藥的功效成分之一。綠原酸的結(jié)構(gòu)式如下 綠原酸具有較廣泛的抗菌作用?？诜蚋骨蛔⑸鋾r，可提高大鼠的中樞興奮性?？稍黾哟笫蠹靶∈蟮男∧c蠕動和大鼠子宮的張力。有利于膽的作用，能增進(jìn)大鼠的膽汁分泌。對人有致敏作用，吸入含有本品的植物塵埃后，可發(fā)生氣喘、皮炎等，但食入后可經(jīng)小腸分泌物作用，變?yōu)闊o致敏性物質(zhì)。有止血、增高白血球，具有縮短血凝及出血時間的作用。綠原酸毒性很小，幼大鼠口服LD50大于1g/Kg腹腔注射大于0.25g/Kg。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種綠原酸、異綠原酸的醫(yī)學(xué)新用途，特別是具有抗SARS病毒活性，可在制備預(yù)防、治療SARS病毒疾病的藥用中應(yīng)用。
本發(fā)明的另一目的是將具有抗SARS病毒活性的綠原酸或異綠原酸作為主要成份組成組合物在治療、預(yù)防由SARS病毒引起疾病的藥物中應(yīng)用。
本發(fā)明的再一目的是將組合物配制成合適的劑型。
本發(fā)明的綠原酸是從植物金銀花經(jīng)水煎二次，煎液減壓濃縮至一定體積，稀石灰乳懸濁液調(diào)PH到堿性，離心分離，沉淀物與2倍量乙醇研勻攪拌加入稀硫酸使PH至3，離心，上清液用2N NaOH調(diào)PH，得沉淀物水重結(jié)晶，得綠原酸純品。
結(jié)構(gòu)證明為 (綠原酸結(jié)構(gòu))綠原酸經(jīng)藥理試驗(yàn)證明其具有明顯的抗SARS病毒活性，活性測定采用Vero-E6細(xì)胞作為病毒宿主細(xì)胞(易感細(xì)胞)，測樣品綠原酸對病毒感染細(xì)胞的保護(hù)作用檢測指標(biāo)為細(xì)胞變性反應(yīng)，以及感染細(xì)胞保護(hù)率。
病毒株為BF-01，篩選用樣品7個稀釋度，結(jié)果證明其具有明顯的抗SARS病毒活性。
根據(jù)綠原酸、異綠原酸具有明顯的抗SARS病毒活性，結(jié)合維生素C的醫(yī)學(xué)用途特點(diǎn)配制成新的組合物，維生素C、綠原酸或異綠原酸∶維生素C重量比為10∶1-1∶10。再根據(jù)需要加入輔劑制成不同劑型的組合物。
本發(fā)明含有有效量綠原酸、異綠原酸與藥物可接受的賦形劑、載體或稀釋劑配制成不同的藥物劑型，它可將綠原酸、異綠原酸與維生素C與口服制劑中的典型藥物載體和賦形劑制成口服劑，藥物載體和賦形劑包括乳糖；淀粉及其衍生物類如玉米淀粉、羧甲基淀粉鈉等；纖維素衍生物，諸如甲基和乙基纖維素；明膠；無機(jī)類化合物如輕質(zhì)氧化鎂、滑石粉等；油，諸如植物油、芝麻油等；包合劑如β-壞糊精；以及二元醇類如聚乙二醇?？诜苿┑目勺龀善瑒⒛z囊、乳劑、溶液等，也可應(yīng)用于固體分散片、脂質(zhì)體制劑、靶向制劑和控釋制劑等。
本發(fā)明含有有效量綠原酸、異綠原酸與藥物可接受的賦形載體或稀釋劑配制成注射劑包括等滲鹽水、5％葡萄糖水溶液、注射用水、茶油、大豆油、麻油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、苯甲酸芐酯；吐溫80、卵磷脂、脫氧膽酸鈉、蛋黃磷脂、聚乙烯吡咯烷酮；醋酸、醋酸鈉、枸櫞酸及鈉鹽、乳酸、酒石酸及鈉鹽、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸氫鈉和碳酸鈉；明膠、羧甲基纖維素鈉、果膠、山梨醇溶液；肌酐、甘氨酸；亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞磷酸鈉、硫代硫酸鈉、苯甲醇、對羥基苯甲酸丁酯及乙酯酚、三氯叔丁醇；利多卡因；腦磷脂、大豆磷脂等，注射制劑的典型形式為粉針劑、混懸型注射劑等。
在片劑中，可將組合物與用碳酸氫鈉與酒石酸或枸櫞酸混合組成的崩解劑一起制成泡騰片，當(dāng)遇水時產(chǎn)生二氧化碳?xì)怏w使片劑迅速崩解。
組合物也可制成氣霧劑，例如采用聚氯乙烯糊狀樹脂苯二甲酸二丁酯、苯二甲酸二辛酯、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅等配制而成氣霧劑。
綠原酸抗SARS病毒活性結(jié)果測試項(xiàng)目綠原酸抗SARS病毒活性的篩選(病毒-細(xì)胞水平模型)測試原理以Vero-E6細(xì)胞作為病毒宿主細(xì)胞(易感細(xì)胞)，測試樣品對病毒感染細(xì)胞的保護(hù)作用，檢測指標(biāo)為細(xì)胞變性反應(yīng)(CPE)以及感染細(xì)胞保護(hù)率。
測試材料和方法綠原酸病毒株BJ-01樣品處理樣品溶于培養(yǎng)液或DMSO，配成適宜的初始濃度，5倍稀釋，各7個稀釋度。
測試方法把Vero-E6細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，置37℃，5％CO2孵箱培養(yǎng)，分別加入SARS病毒和不同稀釋濃度的樣品，設(shè)病毒對照、細(xì)胞對照和樣品對照。每日鏡下觀察結(jié)果，記錄CPE，并用中性紅染色測定OD值，參照對照進(jìn)行樣品抗SARS病毒活性作用的計(jì)算和評價。
測試結(jié)果濃度(ug/ml) CPE 感染細(xì)胞保護(hù)率100 -3.0120-2.544 -2.650.8 -2.770.16 -2.380.032 -2.330.0064+1.21細(xì)胞病變法(CPE)以加號表示細(xì)胞病變程度，＜25％+，25％～50％++，50％～75+++，＞75％++++。
感染細(xì)胞保護(hù)率通過比較病毒對照、細(xì)胞對照和樣品對照的OD值，計(jì)算樣品對病毒感染細(xì)胞的保護(hù)活性，保護(hù)率＞1.5倍率，初步被認(rèn)為樣品對病毒感染細(xì)胞具有一定的保護(hù)活性。
*樣品細(xì)胞毒性如果樣品的細(xì)胞毒性與細(xì)胞對照比＞50％時，不做CPE評價和保護(hù)率計(jì)算。
上述結(jié)果顯示該化合物具有明顯的抗SARS病毒活性作用。而綠原酸的LD50大于1g/Kg，腹腔注射大于0.25g/Kg證明毒性較低。
實(shí)施例一選用下列用量的藥物組合物與附加劑(化合物∶維生素＝1∶1w/w)活性化合物 400克維生素C400克羥丙維生素 20克微粉硅膠 60克預(yù)膠化淀粉 120克硬脂酸鎂 適量制成 1000粒將上述藥物組合物與附加劑混合均勻，用10％預(yù)膠化淀粉漿作為黏合劑，濕法制粒，烘干，加入適量硬脂酸鎂混合，壓制成片劑。
實(shí)施例二選用下列用量的藥物組合物與附加劑(化合物∶維生素＝1∶9)活性化合物 80克維生素C 720克羥丙維生素 20克微粉硅膠48克乙醇適量硬脂酸鎂適量制成900粒將上述藥物組合物與羥丙纖維素及微粉硅膠混合，用適量70％乙醇做濕潤劑，濕法制粒，過40目篩選成顆粒，烘干，加入硬脂酸鎂，混合，裝入硬膠囊。
實(shí)施例三選用下列用量的藥物組合物與附加劑(化合物∶維生素＝2∶1)活性化合物 800克維生素C400克蔗糖 40克防腐劑 適量蒸餾水 適量制成 20000ml取蒸餾水適量，加入上述藥物組合物，邊加熱邊攪拌使溶解，過濾。另將蔗糖和防腐劑用蒸餾水加熱溶解，在攪拌下緩緩加入上述溶液中，加蒸餾水至全量，混合，冷藏，過濾，灌封，滅菌，得口服液。
實(shí)施例四選用下列用量的藥物組合物與附加劑(化合物∶維生素＝6∶1)活性化合物2400克維生素C 400克吐溫80適量注射用水 適量制成 45000ml取適量注射用水，加入上述藥物組合物，加熱，攪拌使充分溶解，加入4％吐溫80，充分?jǐn)噭?，過濾，加鹽酸調(diào)PH至6.8，加注射用水至足量，中空纖維超濾，精濾，灌封，滅菌，得注射液。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)構(gòu)如下的綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途，其特征在于其具有抗SARS病毒活性， 由綠原酸、異綠原酸為主要成分與維生素C加上賦形劑、載體或稀釋劑配成組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途，其特征在于綠原酸或異綠原酸與維生素C的重量比為1∶10～10∶1w/w。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途，其特征在于制成口服的賦型劑、載體或稀釋劑為不同的藥物劑型，將綠原酸、異綠原酸與維生素C與口服制劑中的典型藥物載體和賦形劑制成口服劑，藥物載體和賦形劑包括乳糖；淀粉及其衍生物類如玉米淀粉、羧甲基淀粉鈉等；纖維素衍生物，諸如甲基和乙基纖維素；明膠；無機(jī)類化合物如輕質(zhì)氧化鎂、滑石粉等；油，諸如植物油、芝麻油等；包合劑如β-環(huán)糊精；以及二元醇類如聚乙二醇?？诜苿┑目勺龀善瑒?、膠囊、乳劑、溶液等，也可應(yīng)用于固體分散片、脂質(zhì)體制劑、靶向制劑和控釋制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途，其特征在于制成針劑的賦形載體或稀釋劑配制成注射劑包括等滲鹽水、5％葡萄糖水溶液、注射用水、茶油、大豆油、麻油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、苯甲酸芐酯；吐溫80、卵磷脂、脫氧膽酸鈉、蛋黃磷脂、聚乙烯吡咯烷酮；醋酸、醋酸鈉、枸櫞酸及鈉鹽、乳酸、酒石酸及鈉鹽、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸氫鈉和碳酸鈉；明膠、羧甲基纖維素鈉、果膠、山梨醇溶液；肌酐、甘氨酸；亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞磷酸鈉、硫代硫酸鈉、苯甲醇、對羥基苯甲酸丁酯及乙酯酚、三氯叔丁醇；利多卡因；腦磷脂、大豆磷脂，注射制劑的典型形式為粉針劑、混懸型注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途，其特征在于口服片采用碳酸氫鈉酒石酸，枸櫞酸制成泡騰片。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途，其特征在于該配方采用聚氯乙稀糊狀樹脂、苯二甲酸二丁酯、苯二甲酸二辛酯、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅配制成氣霧劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠原酸、異綠原酸的組合物及它的醫(yī)學(xué)用途，其特征在于在制備預(yù)防、治療SARS病毒引起疾病的藥物中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了從天然植物中提取獲得的綠原酸、異綠原酸，經(jīng)藥理試驗(yàn)證明其具有明顯的抗SARS病毒活性，將具有該活性的綠原酸、異綠原酸與維生素C為主要活性成份，根據(jù)不同要求加入賦形劑、輔劑或載體，配制成不同劑型的組合物。它們可在制備治療、預(yù)防SARS病毒引起疾病的藥物中應(yīng)用。
文檔編號C07C69/732GK1449753SQ0312900
公開日2003年10月22日 申請日期2003年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月2日
發(fā)明者左建平, 趙維民, 楊以阜, 何佩嵐, 周宇, 唐煒, 任永欣, 唐堅(jiān), 劉群芳, 田佳 申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所