專利名稱：一種植物提取物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的提取物，及這種提取物的提取方法和這種提取物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
提取一些特有植物中有效成分，以得到具有臨床治療應(yīng)用的提取物是一件極有意義的工作。
砂生槐(Sophora Moorcroftiana)是在我國西藏南河谷地區(qū)分布的特有的多年生矮豆科灌木，是一種可在高寒和貧脊地區(qū)生長的植物，具有耐干旱、耐干暖、抗風(fēng)沙，以及極強的適應(yīng)性和很好的防風(fēng)固沙，保持水土等生態(tài)功能?，F(xiàn)階段砂生槐多作生態(tài)植物用于對沙漠化土地的恢復(fù)和改良。根據(jù)中國藥典記載，砂生槐具有清熱利濕，驅(qū)風(fēng)殺蟲之效，可治療腸炎痢疾等癥。據(jù)中國醫(yī)學(xué)百科全書·藏藥學(xué)記載砂生槐果實味苦性涼，入肝經(jīng)，可用作催吐和消炎解毒之用，但在現(xiàn)有文獻中記載中砂生槐的應(yīng)用均是與其它植物藥配合共同使用。另據(jù)《自然資源學(xué)報》1993，8(5)和《自然資源學(xué)報》1992，7(4)李玉祥、許毓英等人的文章披露，砂生槐的果實蛋白質(zhì)含量高達29.42～30.60％，僅次于大豆，17種氨基酸的含量為23.22～24.53％，有較高的營養(yǎng)價值，因此建議用其作為一種蛋白質(zhì)類的營養(yǎng)物質(zhì)使用。
在現(xiàn)有文獻中尚未發(fā)現(xiàn)對砂生槐的進一步研究，特別是對砂生槐提取物、提取方法及其提取物應(yīng)用的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種植物提取物，以及這種植物提取物的提取方法和其應(yīng)用。
本發(fā)明的提取物是砂生槐提取物，特別是砂生槐的親脂性總生物堿。本發(fā)明的親脂性總生物堿中包括脫去提取物中的部分脂類雜質(zhì)成分后的產(chǎn)物。
本發(fā)明的砂生槐提取物的提取方法，是將經(jīng)分揀的砂生槐成熟果實粉碎，將經(jīng)上處理的砂生槐果實粉用鹽酸水溶液少量多次浸泡。將浸泡液合并收集，用三氯甲烷萃取部分脂類成分，再將回收的液體用氨水調(diào)pH值＝10～11，靜止24小時后用氯仿多次萃取，得白色或黃白色的固體狀生物總堿。
或者，將收集自然群落中成熟的砂生槐果實種子，分離出蟲害果實和雜質(zhì)后進行粉碎，將其置入乙醇中，或者置入60～80％的乙醇水溶液中，用回流或室溫滲漏，提取液蒸去酒精后在所得的膠質(zhì)中加入2％左右的稀酸水溶液提取生物堿，所得液體用乙醚、氯仿洗滌，再對水相用氨水、碳酸鈉或石灰水溶液進行堿化，游離出的生物堿分別再用乙醚、氯仿提取、純化，再將提取液進行蒸餾濃縮，得白色或黃白色的固體狀生物總堿。
或者，將收集自然群落中成熟的砂生槐果實種子，分離出蟲害果實和雜質(zhì)后進行粉碎，再將先用少量堿水拌勻至濕潤為止，將其加入苯或氯仿或二氯乙烷進行浸泡或滲漏，再將所得液體用鹽酸水溶液處理三至五次。收集并合并所得鹽酸水溶液，將所得液體用三氯甲烷萃取脂類成分，再將回收的液體用氨水調(diào)pH值＝10～11，靜止24小時后再用氯仿多次萃取，再進行蒸餾濃縮，得白色或黃白色的固體狀生物總堿。
本發(fā)明的應(yīng)用是將砂生槐提取物作為制備癌癥治療藥物的應(yīng)用，或者作為制備癌癥治療藥物原料的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一種應(yīng)用是將砂生槐提取物作為制備殺滅絳蟲藥物的應(yīng)用，或者作為制備殺滅絳蟲藥物的原料的應(yīng)用。
本發(fā)明可以使砂生槐這一生態(tài)植物具有更大的經(jīng)濟價值，提供一種新的抗癌藥物，和一種有效的殺滅絳蟲的藥物，或者提供前述藥物的生產(chǎn)原料。


圖1為SGC-7901細胞的陰性對照組培養(yǎng)24小時后的熒光顯微鏡形態(tài)圖。圖2為SGC-7901細胞加入0.6mg·ml-1的砂生槐提取物的藥物組經(jīng)培養(yǎng)24小時后的熒光顯微鏡形態(tài)圖。圖3是是SGC-7901細胞培養(yǎng)48小時瓊脂凝膠電泳圖，其中的A為陰性對照組，B為加入0.6mg·ml-1的砂生槐提取物的藥物組，而C為為加入10.6mg·ml-1、1.2mg·ml-1.2mg·ml-1的砂生槐提取物的藥物組。
具體實施例方式
以下提供砂生槐提取物的幾種提取方法及相關(guān)實驗的實例。
砂生槐提取物的提取方法1收集自然群落中成熟的砂生槐果實種子，將分離出蟲害果實和雜質(zhì)的種子粉碎，過40目篩，備用。
將經(jīng)上處理的砂生槐果實粉用15倍體積的0.5％鹽酸水溶液少量多次浸泡。例如首次浸泡2天，第二次浸泡1天，第三次浸泡12小時，第四次浸泡6小時。將浸泡液合并收集，浸泡液用生物堿通用試劑檢查，生物反應(yīng)呈陰性或弱陽性。將浸泡液用三氯甲烷萃取脂類成分，再將回收的液體用氨水調(diào)pH值＝10～11，靜止24小時后用氯仿多次萃取，得白色或黃白色的固體狀生物總堿。
砂生槐提取物的提取方法2收集自然群落中成熟的砂生槐果實種子，將分離出蟲害果實和雜質(zhì)的種子粉碎，過40目篩，備用。
將經(jīng)上處理的砂生槐果實粉置入乙醇中，或者置入60～80％的乙醇水溶液中，用回流或室溫滲漏，提取液蒸去酒精后在所得的膠質(zhì)中加入2％左右的稀酸水溶液提取生物堿，所得液體用乙醚、氯仿洗滌，再對水相用氨水、碳酸鈉或石灰水溶液進行堿化，游離出的生物堿分別再用乙醚、氯仿提取、純化，再將提取液進行蒸餾濃縮，得白色或黃白色的固體狀生物總堿。
砂生槐提取物的提取方法3收集自然群落中成熟的砂生槐果實種子，將分離出蟲害果實和雜質(zhì)的種子粉碎，過40目篩，備用。
將經(jīng)上處理的砂生槐果實粉先用少量堿水拌勻至濕潤為止，將其加入苯或氯仿或二氯乙烷進行浸泡或滲漏，再將所得液體用1～2％的鹽酸水溶液處理三至五次，每次所用的鹽酸水溶液為有機溶劑量的1/10～1/5。收集并合并所得鹽酸水溶液，再將所得液體用三氯甲烷萃取脂類成分，再將回收的液體用氨水調(diào)pH值＝10～11，靜止24小時后再用氯仿多次萃取，得白色或黃白色的固體狀生物總堿。
砂生槐提取物抑制腫瘤細胞增殖的實驗細胞系上皮型低分化人肺腺癌細胞(GLC-83)，上皮型人肺腺癌細胞(SPC-A-1)和人胃癌SGC-7901。
試驗藥物將砂生槐提取物用DMSD配成70.4mg·ml-1。
細胞培養(yǎng)上皮型低分化人肺腺癌細胞(GLC-83)，上皮型人肺腺癌細胞(SPC-A-1)和人胃癌SGC-7901細胞株培養(yǎng)于RPMI-1640完全細胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液中含10％滅活小牛血清、L-谷氨酰胺2mmol·ml-1、青霉素和鏈霉素各100U·L-1。
實驗將生長于RPML-1640完全培養(yǎng)液中的指數(shù)生長細胞，以1.5×105·ml-1的濃度接種于96孔塑料培養(yǎng)板，每孔100μl。以不加藥物僅加入0.1％DMSO的試驗組為陰性對照組；藥物實驗組分為四組，各組所加的砂生槐濃度分別為0.6mg·ml-1、1.2mg·ml-1、2.4mg·ml-1、4.8mg·ml-1。另設(shè)調(diào)零組，即不加藥物，而僅以RPML-1640全培養(yǎng)液代替細胞。再將以上的陰性對照組、藥物組和調(diào)零組置于37℃、5％CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時、48小時和72小時，實驗終止前4小時在每個實驗孔中加入MTT液10μl，孵育結(jié)束時棄去上層清液，所余物加入DMSO150μl，再用振蕩器搖勻，用酶聯(lián)免疫檢測儀于570nm波長處測定各孔的OD值。實驗重復(fù)三次，按下式求出抑制率抑制率(％)＝(對照組OD平均值-實驗組OD平均值)/對照組OD平均值×100％砂生槐提取物對肺癌細胞GLC-82增殖實驗結(jié)果見表1，砂生槐提取物對
肺、癌細胞SPC-A-1增殖實驗結(jié)果見表2，砂生槐提取物對胃癌細胞SGC-7901增殖實驗結(jié)果見表3。
在對胃癌細胞SGC-7901的實驗中發(fā)現(xiàn)，砂生槐提取物能有效地誘導(dǎo)癌細胞凋亡。經(jīng)熒光顯微鏡觀察可見癌細胞凋亡的形態(tài)特征，如細胞皺縮、細胞膜起泡、細胞核碎裂和凋亡小體形成，參見圖1至圖2。經(jīng)對用砂生槐提取物處理的胃癌細胞的電泳實驗表明，受試細胞出現(xiàn)明顯的生化特征的“DNA Ladder”，而對照組(即0.1％DMSO組)則無此特征出現(xiàn)，參見圖3。經(jīng)砂生槐處理24小時后，對受試細胞進行的流式細胞儀測定中還可見，在G1峰前出現(xiàn)了凋亡峰，凋亡細胞為12.9～16.0％，而對照組細胞的G1峰前卻無此現(xiàn)象。這表明砂生槐提取誘導(dǎo)細胞凋亡，產(chǎn)生抗癌的作用。因此砂生槐可以作為一種抗癌的藥物，或者作為抗癌藥物的原料應(yīng)用。
砂生槐提取物用于殺滅細粒棘球絳蟲原頭蚴的實驗1、儀器與試劑CO2細胞培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，顯微成像系統(tǒng)，DMSO。
2、藥物將砂生槐提取物用DMSO配成300mg·ml-1儲液(DMSO終濃度小于0.1％)，經(jīng)滅菌后在-20℃冰箱保存，實驗時用細胞培養(yǎng)液稀釋。
3、細胞培養(yǎng)液20％的小牛血清的RPMI-1640細胞培養(yǎng)液，其內(nèi)再加入500U·ml-1青霉素和500U·ml-1鏈霉素。
4、實驗用原頭蚴用常規(guī)方法從屠宰的原頭蚴羊肝包囊中無菌采集囊液，再用含青霉素和鏈霉素各500U·ml-1的滅菌生理鹽水反復(fù)沖洗原頭蚴。經(jīng)沖洗后用0.03％的亞甲基藍染色進行鏡檢表明原頭蚴存活率達95％以上。
5、實驗方法及數(shù)據(jù)處理在每個培養(yǎng)瓶中取原頭蚴0.3ml(2.0×104個·ml-1)接種于4.7ml的1640培養(yǎng)液中，培養(yǎng)24小時后分為對照組(不加藥組)，加藥實驗組四組(藥物終濃度分別為0.75mg·ml-1、1.50mg·ml-1、3.00mg·ml-1和6.00mg·ml-1)和在培養(yǎng)液中僅加入阿苯達唑20μ·ml-1陽性藥物的對照組，每組各設(shè)三個培養(yǎng)瓶。將各實驗培養(yǎng)瓶置入37℃、5％的飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，再分別於1天、3天、5天和7天在倒置顯微鏡下觀察原頭蚴的活動情況。同時吸取100μl的培養(yǎng)液于載玻片上，用0.03％的亞甲基藍染色1分鐘加蓋玻片后在顯微鏡下觀察。實驗判斷的標(biāo)準(zhǔn)為若2/3以上的蟲體(包括2/3)著色或蟲體不活動即判斷為蟲死亡。計數(shù)200個原頭蚴死亡率，并用顯微成像系統(tǒng)照相，按下式計算并校正蟲體死亡率死亡率＝(藥物組死亡率—對照組死亡率)/(100-對照組死亡率)×100％對以上采集的數(shù)據(jù)用SPSS軟件(8.0)統(tǒng)計處理各劑量組原頭蚴在體外培養(yǎng)不同時間的死亡率。
6、實驗結(jié)果A、光鏡檢查結(jié)果在光學(xué)顯微鏡下可見，在藥物作用下，原頭蚴多呈處翻型，其吸盤變形，頂突已經(jīng)破壞，外表粗糙起泡、腫脹，蟲體結(jié)構(gòu)模糊，鈣粒減少或消失，小鉤發(fā)生脫落或排列不整齊。而對照組的原頭蚴結(jié)構(gòu)則正常。
B、殺滅效果實驗組中的原頭蚴的死亡率見表4。經(jīng)雙因素分析，各藥物實驗組的原頭蚴死亡率與陰性對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.005)，而且藥物實驗組中濃度為1.50mg·ml-1～6.00mg·ml-1的與加入阿苯達唑的陽性藥物對照組相比較亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。實驗說明砂生槐提取物能有效殺滅原頭蚴，而且其作用效果強于現(xiàn)使用的阿苯達唑藥物。因此砂生槐提取物是一種極有前途的殺滅絳蟲的藥物，或者藥物的原料。
(以下接后頁)

權(quán)利要求
1.一種植物提取物，其特征是砂生槐提取物，特別是砂生槐的親脂性總生物堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物提取物，其特征在于將所得親脂性總生物堿脫去脂類成份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的植物提取物的提方法，其特征是將經(jīng)分揀的砂生槐成熟果實粉碎，再用含酸水溶液浸泡，所得浸泡液用三氯甲烷脫脂，再用堿調(diào)pH值至10～11，靜置后濾出清液，將清液用氯仿萃取，再將萃液蒸餾濃縮。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的植物提取物的提方法，其特征是將經(jīng)分揀的砂生槐成熟果實粉碎，將其置入乙醇中，或者置入60～80％的乙醇水溶液中，用回流或室溫滲漏，提取液蒸去酒精后在所得的膠質(zhì)中加入2％左右的稀酸水溶液提取生物堿，所得液體用乙醚、氯仿洗滌，再對水相用氨水、碳酸鈉或石灰水溶液進行堿化，游離出的生物堿分別再用乙醚、氯仿提取、純化，再將提取液進行蒸餾濃縮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的植物提取物的提方法，其特征是將經(jīng)分揀的砂生槐成熟果實粉碎，將其加入苯或氯仿或二氯乙烷進行浸泡或滲漏，再將所得液體用1～2％的鹽酸水溶液處理三至五次，每次所用的鹽酸水溶液為有機溶劑量的1/10～1/5。收集并合并所得鹽酸水溶液，再將所得液體用三氯甲烷萃取脂類成分，再將回收的液體用氨水調(diào)pH值＝10～11，靜止24小時后再用氯仿多次萃取后，再將提取液進行蒸餾濃縮。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種植物提取物的應(yīng)用，其特征是砂生槐提取物作為制備癌癥治療藥物的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種植物提取物的應(yīng)用，其特征是砂生槐提取物作為制備殺滅絳蟲的藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種植物的提取物，及這種提取物的提取方法和這種提取物的應(yīng)用。本發(fā)明的提取物是生長于我國西藏南河谷地區(qū)的多年生矮豆科灌木，砂生槐的提取物，特別是砂生槐的親脂性總生物堿。本發(fā)明的親脂性總生物堿中包括脫去提取物中的部分脂類雜質(zhì)成分后的產(chǎn)物。本發(fā)明的應(yīng)用是指用砂生槐提取物作為制備癌癥治療藥物的應(yīng)用，或者作為制備殺滅絳蟲的藥物的應(yīng)用，或者作為制備前述藥物的原料應(yīng)用。
文檔編號C07G5/00GK1513852SQ0313455
公開日2004年7月21日 申請日期2003年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月11日
發(fā)明者李紅玉, 馬興銘, 陸曉民 申請人:蘭州大學(xué), 蘭州同健生物科技股份有限公司