專利名稱：一種多肽——具有南瓜蛋白的n端順序的多肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種多肽——具有南瓜蛋白的N端27個(gè)氨基酸順序的多肽。
背景技術(shù)：
南瓜蛋白(Cucurmosin)是一種類型1的核糖體失活蛋白(Ribosome-inactivating Protein)，核糖體失活蛋白是一類能使真核生物細(xì)胞的核糖體失活，從而抑制細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的細(xì)胞毒素，其作用機(jī)制是具有RNA N-糖苷酶或叫多核苷酸·腺苷糖苷酶[EC3.2.2.22]活性。根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)，可以分為3類，類型1核糖體失活蛋白是具RNA N-糖苷酶活性的單肽鏈蛋白，例如，來(lái)自葫蘆科植物瓜蔞塊根的天花粉蛋白(Trichosanthin，簡(jiǎn)稱TCS)，苦瓜種子的α，β-苦瓜子蛋白(α，β-Momorcharin，簡(jiǎn)稱α，β-MOM)和西葫蘆瓜瓢的西葫蘆蛋白(Pepocin，簡(jiǎn)稱PEP)。類型2核糖體失活蛋白是雙肽鏈蛋白，例如，來(lái)自大戟科植物蓖麻毒素(Ricin)和豆科植物相思樹(shù)種子的相思子毒素(Abrin)，它是由一條具有RNA N-糖苷酶活性的A鏈和一條具凝集素活性的B鏈通過(guò)二硫鍵連接而成的。類型3核糖體失活蛋白是一類茉莉酮誘導(dǎo)的蛋白(jasmonate-induced protein)，它是由具有RNA N-糖苷酶功能的N端結(jié)構(gòu)域和一個(gè)未知功能的C端結(jié)構(gòu)域組成，例如來(lái)自大麥的JIP60。從葫蘆科植物中分離出來(lái)的類型1核糖體失活蛋白，例如天花粉蛋白、苦瓜子蛋白、絲瓜蛋白、白瀉根蛋白等，均具有抗腫瘤抗病毒活性，特別是抗艾滋病毒活性。關(guān)于類型1核糖體失活蛋白和類型2核糖體失活蛋白已有很多的專利和文獻(xiàn)報(bào)道。
中國(guó)專利99102290.4提供了從南瓜中分離出的類型1核糖體失活蛋白——南瓜蛋白(Cucurmosin)，并公開(kāi)了它的制備方法。SDS-PAGE顯示它的分子量為27kDa，等電點(diǎn)pI＞9，具有強(qiáng)烈抑制細(xì)胞內(nèi)核糖體蛋白質(zhì)合成的活性；并已培養(yǎng)出可供X-射線衍射用的單晶，晶體結(jié)構(gòu)分析工作正在進(jìn)行[Chen et al.Acta Cryst.D56 2000，665-666；Shi et alChinese J.struct.chem.2003，22(2)，165-168]。
本發(fā)明是基于上述現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)，測(cè)定了南瓜蛋白的N端27個(gè)氨基酸順序，它與天花粉蛋白和α-苦瓜子蛋白N-端順序在蛋白水平上分別有66.7％和55.6％的同一性，二者都有70.3％的相似性。因此認(rèn)定本發(fā)明的多肽——具有南瓜蛋白N端順序的多肽、或其多肽的活性片斷、類似物或衍生物與天花粉蛋白和α-苦瓜子蛋白相似，同為類型1的核糖體失活蛋白家族成員，并具有相似的生物學(xué)功能。這種多肽、或其多肽的活性片斷、類似物或衍生物可以構(gòu)成開(kāi)發(fā)治療藥物的基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的，是提供分離的新的多肽——南瓜蛋白的N端氨基酸順序的多肽。
本發(fā)明的其它方面由于本文的技術(shù)的公開(kāi)，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。
本發(fā)明的說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中使用的下列術(shù)語(yǔ)除非特別說(shuō)明具有下列含義“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白質(zhì)序列及其片段或部分。當(dāng)本發(fā)明中的氨基酸序列涉及一種天然存在的蛋白質(zhì)分子的氨基酸序列時(shí)，這種“多肽”或“蛋白質(zhì)”不意味著將氨基酸序列限制為與所述蛋白質(zhì)分子相關(guān)的完整的天然氨基酸。
“相同性百分率”是指在兩種或多種氨基酸序列比較中序列相同或相似的百分率。兩個(gè)氨基酸序列如序列A和序列B之間的相同性百分率通過(guò)下式計(jì)算(序列A與序列B之間相同或相似的殘基個(gè)數(shù))÷(序列A的殘基數(shù)+序列B的殘基數(shù))×100％。
“相似性”是指氨基酸序列之間對(duì)比相應(yīng)位置氨基酸殘基的相同或保守性取代的程度。用于保守性取代的氨基酸例如，帶負(fù)電荷的氨基酸可包括天冬氨酸和谷氨酸；帶正電荷的氨基酸可包括賴氨酸和精氨酸；具有不帶電荷的頭部基團(tuán)有相似親水性的氨基酸可包括亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸；甘氨酸和丙氨酸；天冬酰胺和谷氨酰胺；絲氨酸和蘇氨酸；苯丙氨酸和酪氨酸。
本發(fā)明提供了一種多肽——南瓜蛋白的N端順序，基本上是由<210>1所示的氨基酸序列組成的。
本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽、優(yōu)選重組多肽。本發(fā)明的多肽可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學(xué)合成的產(chǎn)物。
本發(fā)明的多肽在結(jié)構(gòu)和功能上和天花粉蛋白和α-苦瓜子蛋白有高度的同源性和相似性，因而也具有天花粉蛋白和α-苦瓜子蛋白的藥用功能。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
實(shí)施例1南瓜蛋白的N端分析1將本發(fā)明一種多肽——南瓜蛋白的N端共27個(gè)氨基酸與天花粉蛋白氨基酸序列同源性作比較，同源結(jié)果示于表1，相同率為66.7％，相似率為70.3％。
表1是本發(fā)明一種多肽——南瓜蛋白的N端共27個(gè)氨基酸與天花粉蛋白氨基酸序列同源性比較表。上方序列是南瓜蛋白，下方序列是天花粉蛋白。相同氨基酸在兩個(gè)序列間用單字符氨基酸表示，相似氨基酸用“+”表示。
表1 相同率＝36/54(66.7％) 相似率＝38/54(70.3％)Cuc1 N V R F D L S S A T S S S Y E T F I K N L R E A L P K 27+ V F L S A T S S S Y F I N L R A L PTCS1 D V S F R L S G A T S S S Y G V F I S N L R K A L P N 27實(shí)施例2南瓜蛋白的N端分析2
將本發(fā)明一種多肽——南瓜蛋白的N端共27個(gè)氨基酸與α-苦瓜子蛋白氨基酸序列同源性作比較，同源結(jié)果示于表2，相同率為55.6％，相似率為70.3％。
表2是是本發(fā)明一種多肽—南瓜蛋白的N端共27個(gè)氨基酸與α-苦瓜子蛋白氨基酸序列同源性比較表。上方序列是南瓜蛋白，下方序列是α-苦瓜子蛋白。相同氨基酸在兩個(gè)序列間用單字符氨基酸表示，相似氨基酸用“+”表示。
表2 相同率＝30/54(55.6％) 相似率＝38/54(70.3％)Cuc1 N V R F D L S S A T S S S Y E T F I K N L R E A L P K 27+ V F L S A S Y F I K + L R + A L PMOM1 D V S F R L S G A D P R S Y G M F I K D L R N A L P F 27
序列表<110>中國(guó)科學(xué)院福建物質(zhì)結(jié)構(gòu)研究所<120>一種多肽——具有南瓜蛋白的N端順序的多肽<160>1<170>Patent In version 3.1<210>1<211>27<212>PRT<213>Cucurbita moschata<400>1Asn Val Arg Phe Asp Leu Ser Ser Ala Thr Ser Ser Ser Tyr Glu Thr1 5 10 15Phe Ile Lys Asn Leu Arg Glu Ala Leu Pro Lys20 2權(quán)利要求
1.一種多肽——具有南瓜蛋白的N端順序的多肽，其特征在于，它的N端包含有<210>1所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片斷、類似物或衍生物。
2.如權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽、類似物或衍生物的N端具有<210>1所示的氨基酸序列至少95％的相同性。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種多肽——具有南瓜蛋白的N端27個(gè)氨基酸順序的多肽。
文檔編號(hào)C07K14/415GK1603339SQ0313504
公開(kāi)日2005年4月6日 申請(qǐng)日期2003年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月29日
發(fā)明者陳明晃, 葉曉明 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院福建物質(zhì)結(jié)構(gòu)研究所