專利名稱：一種血漿蛋白的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人血漿蛋白制品的制備方法，特別是白蛋白和球蛋白的制備方法。
背景技術(shù)：
影響蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)有諸多因素，改變這些因素可容易地從復(fù)雜的血漿混合物中提純蛋白質(zhì)。在低溫乙醇法中影響蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)的因素主要有五個(gè)，通稱五變因素①pH控制；②溫度；③蛋白濃度；④離子強(qiáng)度；⑤乙醇濃度。因而分離可按兩種不同的途徑考慮(1)選擇要提取的蛋白質(zhì)溶解度最大，其他蛋白質(zhì)溶解度最小的條件，將需要的蛋白質(zhì)保存在溶液中，其余所有的蛋白質(zhì)被沉淀。(2)選擇上述相反的條件，使要提取的蛋白質(zhì)選擇性地沉淀下來，而其余的蛋白質(zhì)保存在溶液中。
E.J.Cohn教授等利用上述原理，發(fā)表了一系列有關(guān)從血漿中分離、純化蛋白質(zhì)的方法(Cohn1-10法)，奠定了血漿蛋白分離技術(shù)的基礎(chǔ)。1946年發(fā)表的Cohn 6法主要用于分離白蛋白，是白蛋白分離的經(jīng)典方法，今天所使用的有關(guān)白蛋白和免疫球蛋白分離的方法都是在Cohn 6法的基礎(chǔ)上形成的。
瑞士紅會(huì)的Nitchmann Kistler等人，在Cohn 10法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，于1962年發(fā)表了稱之為“Kistler和Nitchmann”血漿蛋白分離改良法。該法的優(yōu)點(diǎn)是適合大規(guī)模的分離，簡化了生產(chǎn)步驟，生產(chǎn)周期縮短了1/3；該法用95％的乙醇緩慢加入血漿蛋白溶液內(nèi)，使待分離溶液體積減少，欲處理的最大溶液體積從投產(chǎn)血漿體積的2.2倍減少到1.7倍(包括免疫球蛋白的分離)，生產(chǎn)中乙醇的耗量大大降低。同時(shí)，通過此法的多級(jí)分離，提高了血漿中白蛋白和免疫球蛋白的回收率。
在血漿蛋白低溫乙醇分離法中，蛋白質(zhì)溶液的液-固相分離是分級(jí)分離法的關(guān)鍵之一，現(xiàn)有的血漿蛋白多級(jí)分離方法是采用離心方法來達(dá)到液-固相分離的目的。但由于低溫乙醇法要求低溫條件和連續(xù)冷凍離心機(jī)等設(shè)備，所以一次性投資相對(duì)較高，同時(shí)，其生產(chǎn)過程不利于管道化和自動(dòng)化控制，且工作人員與中間產(chǎn)品的直接接觸容易導(dǎo)致人員和產(chǎn)品的污染，影響產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)率。此外，現(xiàn)有的血漿蛋白低溫乙醇分離法仍然存在步驟較多、周期較長的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種有別于傳統(tǒng)的分離血漿蛋白液-固相的分離方法，即有別于離心的方法。通過pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度、溫度以及血漿蛋白液固相分離方式的改變，克服離心方法一次性設(shè)備投資大及由于采用人工取沉淀方式導(dǎo)致的人員和產(chǎn)品污染、產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)率降低的缺陷，，同時(shí)克服血漿蛋白分級(jí)分離步驟較多、周期較長的缺陷。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是提供一種血漿蛋白的分離方法，其特征是調(diào)節(jié)血漿的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，用加壓過濾的方式分離得上清液和沉淀。
所述的血漿蛋白的分離方法包括a、調(diào)節(jié)血漿的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，得到上清A和沉淀C；b、取上清A，調(diào)節(jié)其pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，棄去沉淀B1，得到上清A1；c、調(diào)節(jié)上清A1的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，棄去上清A2，得到沉淀B2，即白蛋白；d、將步驟a的沉淀C溶解，調(diào)節(jié)其pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，棄去沉淀D1，分離得上清C1；e、調(diào)節(jié)上清C1的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，棄去上清C2，得沉淀D2，即球蛋白。
如圖1所示，上述步驟c、e分別得到的白蛋白和球蛋白沉淀用注射用水溶解后，經(jīng)過濾機(jī)過濾和超濾進(jìn)一步去雜質(zhì)得血漿制品白蛋白原液和球蛋白原液，可以被進(jìn)一步制備成白蛋白及免疫球蛋白制劑。
上述分離方法中步驟a所述的pH為5.8～6.1，蛋白濃度為5.28％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.14，溫度為-5℃±1℃，乙醇濃度為20％(v/v)。
步驟b所述的pH為5.75～6.00，蛋白濃度為2.42％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.09，溫度為-5℃～-9℃，乙醇濃度為40％(v/v)。
步驟c所述的pH為4.8～4.9，蛋白濃度為1.0～1.3％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.1，溫度為-5℃～-9℃，乙醇濃度為40％(v/v)。
步驟d所述的pH為5.10～5.40，蛋白濃度為1.0％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.01，溫度為-4℃±1℃，乙醇濃度為14％(v/v)。
步驟e所述的pH為7.1～7.3，蛋白濃度為0.4％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.05，溫度為-5℃～-8℃，乙醇濃度為25％(v/v)。
優(yōu)選的，在上述的分離方法的步驟a、b、d中加入助濾劑后，再加壓過濾。具體地，所述的助濾劑是硅藻土和珍珠巖中的一種或兩種，其加入量為0.2～1.0克/L，加入助濾劑后的溶液需以20-60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌10分鐘～2小時(shí)。
本發(fā)明所述的血漿蛋白加壓過濾分離方法的壓力為0～3bars，步驟a、b、d中加壓過濾的濾板面積為8～15平方米，步驟c中加壓過濾的濾板面積為4～8平方米，步驟e中加壓過濾的濾板面積為5～8平方米，濾板孔徑均為0.2～1.0微米。
本發(fā)明的有益效果采用本發(fā)明血漿蛋白分離方法，因過濾過程可在密閉的管道內(nèi)進(jìn)行，分離步驟減少，設(shè)備投資減少，無需人工取沉淀，使得整個(gè)生產(chǎn)周期與現(xiàn)有的低溫乙醇法相比減少了一半。而且生產(chǎn)過程易于控制，能夠減少產(chǎn)品污染，提高產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)品收率，其白蛋白產(chǎn)率從2.2～2.4g/100ml血漿提高到2.8～3.0g/100ml血漿，球蛋白產(chǎn)率從0.35～0.45g/100ml血漿提高到0.55～0.70g/100ml血漿。同時(shí)，該方法還可以改善生產(chǎn)環(huán)境，降低操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，提高了安全性，大大降低了生產(chǎn)成本。


圖1本發(fā)明血漿蛋白白蛋白和球蛋白的分步分離步驟顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖1對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
設(shè)備名稱生產(chǎn)廠家 型號(hào)夾層反應(yīng)罐Mueller 4000L壓濾機(jī)SeitzSchenk NIRO600/2000.D過濾器CUNO 12ZPA(1)、取1000人份經(jīng)檢測合格的血漿混合，按照?qǐng)D1所示步驟進(jìn)行分步分離，經(jīng)如下步驟a、冰凍血漿置融漿罐中融化，融漿水溫30～37℃，不斷攪拌直至完全融化；然后，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH為5.8，用注射用水調(diào)整蛋白濃度(P％)為5.28％，用氯化鈉調(diào)整離子強(qiáng)度(r/2)為0.14，溫度(T)為-5℃，用95％(重量)乙醇調(diào)整溶液乙醇(EtOH)濃度為20％。
用注射用水或乙醇溶液平衡管道和濾器，按照每升血漿加入0.95克的助濾劑，以20～60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌10分鐘～2小時(shí)后，將血漿在0～3bars的壓力下，通過15平方米的濾板過濾分離，濾板的孔徑為1.0微米，得上清和沉淀，用壓縮空氣或擠壓的方式干燥，然后取出沉淀物；b、步驟a分離得到的上清液，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH為5.8，用注射用水調(diào)整P％為2.42％，用氯化鈉調(diào)整r/2為0.09，溫度(T)為-7℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為40％。
然后用注射用水和緩沖液平衡管道和濾器，按照每升血漿加入0.96克的助濾劑，以20～60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌10分鐘～2小時(shí)后，將溶液在0～3bars的壓力下通過15平方米的濾板過濾分離得上清和沉淀，濾板的孔徑為0.8微米，過濾完成后用壓縮空氣或擠壓的方式干燥，然后取出沉淀物；c、步驟b過濾分離得到的上清，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH為4.81，用注射用水調(diào)整P％為1.0，用氯化鈉調(diào)整r/2為0.1，溫度(T)為-9℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為40％。
然后，用注射用水或緩沖液平衡管道和濾器，將溶液在0～3bars的壓力下通過8平方米的濾板過濾分離得上清和沉淀，濾板的孔徑為1.0微米，過濾完成后用壓縮空氣擠壓的方式干燥，然后取出沉淀物；d、步驟a分離得到的沉淀，用注射用水溶解后，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH為5.10，用注射用水調(diào)整P％為1.0％，用氯化鈉調(diào)整r/2為0.01，溫度(T)為-3℃，用95％7醇調(diào)整溶液EtOH濃度為14％。
然后，用注射用水或緩沖液平衡管道和濾器，按照每升血漿加入0.66克的助濾劑，以20-60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌10分鐘～2小時(shí)后，將溶液在0～3bars的壓力下通過15平方米的濾板過濾分離得上清和沉淀，濾板的孔徑為1.0微米，過濾完成后用壓縮空氣擠壓的方式干燥，然后取出沉淀物；e、步驟d過濾分離得到的上清，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用1mol的NaOH溶液調(diào)整pH為7.15，用注射用水調(diào)整P％為0.4％，用氯化鈉調(diào)整r/2為0.05，溫度(T)-8℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為25％。
然后，用注射用水或緩沖液平衡管道和濾器，將溶液在0～3bars的壓力下通過8平方米的濾板過濾分離得上清和沉淀，濾板的孔徑為1.0微米，過濾完成后用壓縮空氣擠壓的方式干燥，然后取出沉淀物。
(2)、在上述步驟(1)中調(diào)節(jié)了pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度后，溶液通過壓濾機(jī)過濾，壓濾機(jī)系統(tǒng)的操作步驟如下(A)濾器安裝和準(zhǔn)備清洗濾器夾板并用65％(v/v)的乙醇噴淋處理，檢查濾板是否破損，將濾板和夾板以自下而上的順序安裝到濾芯上，將安裝完畢的濾芯正確放入濾器中，并連接好相應(yīng)管道，調(diào)好壓力；(B)濾器預(yù)處理啟動(dòng)濾器夾層制冷，檢查濾器管道和開關(guān)，開動(dòng)進(jìn)液泵排除管道內(nèi)殘余液體并用相應(yīng)的緩沖液沖洗平衡濾器和管道，然后用壓縮空氣吹干液體；(C)過濾將反應(yīng)罐出液開關(guān)及相應(yīng)主管道開關(guān)調(diào)至打開位置，打開進(jìn)液泵開始過濾，控制過濾速度，進(jìn)液壓力0～3bars；(D)干燥濾過完成后用壓縮空氣吹干過濾系統(tǒng)；(E)刮取沉淀關(guān)閉壓力泵，調(diào)整過濾系統(tǒng)管道開關(guān)至“關(guān)閉”位置，打開濾器取出濾芯，水平取下濾板放于沉淀車上，用刮刀將濾板上沉淀刮入指定容器內(nèi)，根據(jù)不同反應(yīng)步驟決定沉淀的進(jìn)一步處理(溶解或廢棄)；(F)清洗過濾系統(tǒng)用注射用水清洗濾器各部分及管道，清洗干凈后用65％的乙醇噴淋消毒濾器，用95％的乙醇沖洗管道消毒備用。
(3)、步驟c和e所得的沉淀經(jīng)常規(guī)的溶解，過濾，超濾等步驟得到白蛋白原液和球蛋白原液。
所得的白蛋白產(chǎn)率為2.92g/(100ml血漿)；球蛋白產(chǎn)率為0.66g/(100ml血漿)。
實(shí)施例1(1)、取1000人份經(jīng)檢測合格的血漿混合，按照?qǐng)D1所示步驟進(jìn)行分步分離，經(jīng)如下步驟a、冰凍血漿置融漿罐中融化，融漿水溫30～37℃，不斷攪拌直至完全融化后；進(jìn)入夾層反應(yīng)罐，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH5.81(改為5.9)，用注射用水調(diào)整蛋白濃度(P％)5.28％，用氯化鈉調(diào)整r/20.14，T-4℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為20％。
然后，按照每升血漿加入0.31克的硅藻土，以20～60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌60分鐘后，溶液進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板10平方米，濾板的孔徑為0.45微米。壓濾分離得上清和沉淀；b、步驟a分離得到的上清液，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH5.9，用注射用水調(diào)整P％2.42％，用氯化鈉調(diào)整r/20.09，T-5℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為40％。
然后，按照每升血漿加入0.45克的硅藻土，以20～60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌60分鐘，然后進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板8平方米，濾板的孔徑為0.22微米。壓濾分離得上清和沉淀；c、步驟b過濾分離得到的上清，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH4.85，用注射用水調(diào)整P％1.2％，用氯化鈉調(diào)整r/20.1，T-7℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為40％。
然后進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板6平方米，濾板的孔徑為0.45微米。壓濾分離得沉淀和上清；d、步驟a分離得到的沉淀，用注射用水溶解后，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH5.2，用注射用水調(diào)整P％1.0％，用氯化鈉調(diào)整r/20.01，T-4℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度14％。
然后，按照每升血漿加入0.31克的硅藻土，以20～60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌60分鐘，然后進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板10平方米，濾板的孔徑為0.45微米，壓濾分離得沉淀和上清；e、步驟d過濾分離得到的上清， 進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用1mol的NaOH溶液調(diào)整pH7.1，用注射用水調(diào)整P％0.4％，用氯化鈉調(diào)整r/20.05，T-6℃，用95％乙醇調(diào)整ETOH25％。
然后，然后進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板4平方米，濾板的孔徑為0.45微米。壓濾分離得沉淀和上清。
(2)、步驟c和e所得的沉淀經(jīng)常規(guī)的溶解、過濾、超濾等步驟得到白蛋白和球蛋白。
本實(shí)施例所得的白蛋白產(chǎn)率為2.82g/(100ml血漿)；球蛋白產(chǎn)率為0.56g/(100ml血漿)。
實(shí)施例2(1)、取1000人份經(jīng)檢測合格的血漿混合，按照?qǐng)D1所示步驟進(jìn)行分步分離，經(jīng)如下步驟a、冰凍血漿置融漿罐中融化，融漿水溫30～37℃，不斷攪拌直至完全融化后；進(jìn)入夾層反應(yīng)罐，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH6.1，用注射用水調(diào)整蛋白濃度(P％)5.28％，用氯化鈉調(diào)整r/20.14，T-6℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為20％。
然后，按照每升血漿加入0.66克的硅藻土，以20～60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌30分鐘，然后進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板12平方米，濾板的孔徑為0.65微米，壓濾分離得沉淀和上清；b、步驟a分離得到的上清液，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH6.0，用注射用水調(diào)整P％2.42％，用氯化鈉調(diào)整r/20.09，T-9℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為40％。
然后，按照每升血漿加入0.66克的硅藻土，以20～60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌30分鐘后，進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板12平方米，濾板的孔徑為0.65微米，壓濾分離得沉淀和上清；c、步驟b過濾分離得到的上清，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH4.9，用注射用水調(diào)整P％1.0％，用氯化鈉調(diào)整r/21.3％，T-5℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為40％。
然后進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板8平方米，濾板的孔徑為0.65微米，壓濾分離得沉淀和上清；d、步驟a分離得到的沉淀，用注射用水溶解后，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用醋酸鹽緩沖液調(diào)整pH5.4，用注射用水調(diào)整P％1.0％，用氯化鈉調(diào)整r/2為0.01，T-5℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為14％。
然后，按照每升血漿加入0.47克硅藻土，以20～60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌30分鐘，然后進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板12平方米，濾板的孔徑為0.65微米，壓濾分離得沉淀和上清；e、步驟d過濾分離得到的上清，進(jìn)入夾層反應(yīng)罐中，在攪拌條件下，調(diào)整以下參數(shù)用1mol的NaOH溶液調(diào)整pH7.3，用注射用水調(diào)整P％為0.4％，用氯化鈉調(diào)整r/20.05，T-5℃，用95％乙醇調(diào)整溶液EtOH濃度為25％。
然后進(jìn)入壓濾機(jī)過濾壓力0～3bars，濾板6平方米，濾板的孔徑為0.65微米。
(2)、步驟c和e所得的沉淀經(jīng)常規(guī)的溶解、過濾、超濾等步驟得到白蛋白和球蛋白。
本實(shí)施例所得的白蛋白產(chǎn)率為2.89g/(100ml血漿)；球蛋白產(chǎn)率為0.62g/(100ml血漿)。
權(quán)利要求
1.一種血漿蛋白的分離方法，其特征是調(diào)節(jié)血漿的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，用加壓過濾的方式分離得上清液和沉淀。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血漿蛋白的分離方法，其特征是包括a、調(diào)節(jié)血漿的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，得到上清A和沉淀C；b、取上清A，調(diào)節(jié)其pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，棄去沉淀B1，得到上清A1；c、調(diào)節(jié)上清A1的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，棄去上清A2，得到沉淀B2，即白蛋白；d、將步驟a的沉淀C溶解，調(diào)節(jié)其pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，棄去沉淀D1，分離得上清C1；e、調(diào)節(jié)上清C1的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，加壓過濾，棄去上清C2，得沉淀D2，即球蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的分離方法，其特征是在步驟a中所述的pH為5.8～6.1，蛋白濃度為5.28％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.14，溫度為-5℃±1℃，乙醇濃度為20％(v/v)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的分離方法，其特征是在步驟b中所述的pH為5.75～6.00，蛋白濃度為2.42％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.09，溫度為-5℃～-9℃，乙醇濃度為40％(v/v)。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的分離方法，其特征是在步驟c中所述的pH為4.8～4.9，蛋白濃度為1.0～1.3％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.1，溫度為-5℃～-9℃，乙醇濃度為40％(v/v)。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的分離方法，其特征是在步驟d中所述的pH為5.10～5.40，蛋白濃度為1.0％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.01，溫度為-4℃±1℃，乙醇濃度為14％(v/v)。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的分離方法，其特征是在步驟e中所述的pH為7.1～7.3，蛋白濃度為0.4％(w/v)，離子強(qiáng)度為0.05，溫度為-5℃～-8℃，乙醇濃度為25％(v/v)。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的分離方法，其特征是在步驟a、b、d中加入助濾劑后再加壓過濾。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的分離方法，其特征是所述的助濾劑是硅藻土和珍珠巖中的一種或兩種。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的分離方法，其特征是助濾劑的加入量為0.2～1.0克/L。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的分離方法，其特征是加入助濾劑后慢速攪拌10分鐘～2小時(shí)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的分離方法，其特征是攪拌速度為20-60轉(zhuǎn)/分鐘。
13.根據(jù)權(quán)利要求1、2或8所述的血漿蛋白的分離方法，其特征在于所述加壓過濾的壓力為0～3bars。
14.根據(jù)權(quán)利要求2所述的血漿蛋白分離的方法，其特征在于步驟a、b、d所述加壓過濾的濾板面積為8～15平方米，步驟c所述加壓過濾的濾板面積為4～8平方米，步驟e所述加壓過濾的濾板面積為5～8平方米，濾板孔徑均為0.2～1.0微米。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種血漿蛋白的分離方法，特別是白蛋白和球蛋白的制備方法，其通過調(diào)節(jié)血漿的pH值、離子強(qiáng)度、蛋白濃度、乙醇濃度和溫度，用加壓過濾的方式分離得上清液和沉淀。因過濾過程可在密閉的管道內(nèi)進(jìn)行，分離步驟減少，無需人工取沉淀，使得整個(gè)生產(chǎn)周期與現(xiàn)有的低溫乙醇法相比減少了一半；而且生產(chǎn)過程易于控制，能夠減少產(chǎn)品污染，提高產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)品收率；同時(shí)，該方法還可以改善生產(chǎn)環(huán)境，降低生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)C07K14/435GK1523038SQ0313579
公開日2004年8月25日 申請(qǐng)日期2003年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月10日
發(fā)明者盛曉彬, 唐章橋, 楊匯川, 王玉 申請(qǐng)人:成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司