專利名稱：治療腦血管疾病的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療腦血管疾病的藥物及其制備方法，特別是涉及一種以梔子中所含有的梔子總環(huán)烯醚萜苷為藥物有效成分的中藥制劑，該藥物對腦出血的治療有良好療效，本發(fā)明還提供了該藥物的制備方法。
出血性中風(腦出血)是指腦動脈、靜脈或毛細血管破裂導(dǎo)致腦實質(zhì)內(nèi)的出血。小量的出血，血液滲透到腦實質(zhì)，可不破壞腦組織，不產(chǎn)生任何癥狀和體征。出血量多形成較大血腫時，可在數(shù)小時內(nèi)導(dǎo)致腦水腫，產(chǎn)生急性顱內(nèi)高壓，使腦組織受壓、移位或腦疝形成。由于腦出血的病因、發(fā)病機制比較復(fù)雜，對其研究目前還不十分清楚，對于腦出血的治療，目前主要是采取控制腦水腫，降低顱內(nèi)壓等方法，在急性期常能獲得較好療效。在恢復(fù)期，對于促進血腫的消退和神經(jīng)功能的恢復(fù)，還沒有較好的治療藥物。近年來，國內(nèi)外亦采用外科方法進行開顱清除血腫和血腫穿刺吸引術(shù)。由于缺乏設(shè)計良好的前瞻性外科治療與內(nèi)科治療相對照，至今國內(nèi)外尚未建立明確的外科治療適應(yīng)癥。出血性中風患者常死于血腫所致高顱內(nèi)壓或腦水腫形成的疝或小腦扁桃體疝。而出血性中風患者致殘率也常與血腫消退緩慢，較長期壓迫神經(jīng)組織有關(guān)。
治療腦血管疾病的中藥，一直以治療腦缺血和腦栓塞為主，而治療出血性中風的中藥至今面市者極少。近幾年來，清熱解毒法用于治療出血性中風受到重視。發(fā)現(xiàn)該法可減輕腦血腫周圍腦組織的炎癥反應(yīng)和水腫，對血腫有促進吸收作用，從而降低顱內(nèi)壓，改善出血灶周圍的微循環(huán)，解除血管痙攣。中國工程院院士王永炎提出“毒損腦絡(luò)”假說，經(jīng)實驗研究證實，清熱解毒方藥具有神經(jīng)細胞保護作用，如改善腦神經(jīng)細胞新陳代謝，改善能量代謝，清除自由基，保護神經(jīng)細胞超微結(jié)構(gòu)，抑制細胞凋亡的發(fā)生等作用。梔子，茜草科植物梔子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果實，為《中華人民共和國藥典》1990年版收載，性味苦寒，歸心、肝、胃、三焦諸經(jīng)。以通瀉三焦之火，涼血解毒為主要功效，并兼能止血、利濕，尤以清降心肝之熱見長。臨床多用以治療熱邪擾心，肝火上炎，心煩郁悶，躁擾不寧；或火毒熾盛，高熱煩躁，神昏譫語以及各種血熱妄行之證。如《醫(yī)學(xué)啟源》言其“療心經(jīng)客熱，除煩躁，去上焦熱，治風?！薄兜は姆ā愤€認為“(梔子)大能降火，從小便泄去。其性能屈曲下降，人所不知。”梔子中含有多種環(huán)烯醚萜苷、有機酸類、色素、揮發(fā)性成分、多糖等成分。現(xiàn)代研究表明，梔子及其有效成分梔子環(huán)烯醚萜苷具有明顯減輕組織炎癥反應(yīng)和水腫的作用，能利尿及通過加強延腦副交感中樞緊張度而降壓，促使腦血腫吸收。能促進血管內(nèi)皮細胞中DNA和蛋白質(zhì)合成，從而使血管內(nèi)膜得以修復(fù)。梔子也有較好的止血作用，臨床上亦用于多種急性出血癥，法國現(xiàn)已將梔子中主要有效成分之一京尼平苷用于腦外傷顱內(nèi)出血的治療。它還具有一定的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和降溫作用，有利于消除出血性中風患者的緊張情緒，降低組織代謝率，從而提高機體的應(yīng)激能力。一些試驗還證實，它具有促進神經(jīng)細胞修復(fù)和保護神經(jīng)細胞超微結(jié)構(gòu)免受自由基等的侵害，認為其具有治療神經(jīng)組織退性行病變作用，如法國又將京尼平苷用于老年性癡呆和帕金森氏病治療，亦取得較好療效。
本發(fā)明進一步提供了以所述梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物為活性成分、用于治療腦出血的中藥藥物制劑和相應(yīng)的藥物劑型。
本發(fā)明的另一目的在于提供用于治療腦出血的該中藥藥物的制備方法，特別是梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法。
本發(fā)明提供的藥物組合物，含有從梔子原料藥得到的乙醇提取物，即梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物，該梔子總環(huán)烯醚萜苷的組成中包括梔子苷(京尼平苷，geniposide)、羥異梔子苷(gardenos ide)、京尼平龍膽二糖苷(genipingentiobioside)、山梔子苷(shanzhiside)、梔子酮苷(gardoside)、雞屎藤次苷甲酯(scandoside methyl ester)、脫乙酰車葉草苷酸甲酯(methyl deacetylasperulosidate)、京尼平苷酸(geniposidicacid)等環(huán)烯醚萜苷類成分，其中的主要活性成分是梔子苷，從藥效學(xué)角度出發(fā)，作為本發(fā)明用于治療腦出血的藥物組合物，所述梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物中梔子總環(huán)烯醚萜苷的含量在50％以上，梔子苷的含量在40％以上。
在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明還提供了一種治療腦出血的藥物制劑，該藥物以上述梔子總環(huán)烯醚萜苷為有效活性成分，并包括了藥劑學(xué)上可接受的輔料組分。
本發(fā)明的藥物制劑包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、注射針劑等，其中膠囊劑中梔子總環(huán)烯醚萜苷的含量以梔子苷計不低于標示量的90％。
本發(fā)明還提供了該藥物制劑的制備方法，其包括以梔子為原料，用乙醇提取，并經(jīng)純化分離制取梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物，使該提取物中梔子苷的含量在40％以上，以該梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物為有效成分，按照藥劑學(xué)方法制備成要求的藥物制劑。
選用符合《中國藥典》2000版標準的梔子。梔子藥材表面有致密的外殼(果皮)，直接提取個子藥材，不易浸透，若用細粉，生產(chǎn)中過濾和出渣困難，所以選擇將藥材直接粉碎成粗顆粒，以利于其中有效成分被充分提取。
提取梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物的方法包括以下步驟1)梔子粉碎后用50％-95％濃度的乙醇提??；2)將藥液濃縮至相對密度1.10-1.30(60℃)的浸膏；3)上述濃縮后的提取液用醋酸乙酯回流提取；4)上述醋酸乙酯提取液中加入活性炭，回流濾過，用熱醋酸乙酯液洗脫活性炭；5)回收醋酸乙酯，至藥液出現(xiàn)大量渾濁時停止?jié)饪s；6)減壓干燥(40-50℃)上述得到的結(jié)晶物，即得梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物。
根據(jù)梔子總環(huán)烯醚萜苷的溶解性能，考慮到環(huán)境保護、生產(chǎn)條件及生產(chǎn)成本等因素，選用水或乙醇作為提取溶劑。經(jīng)試驗對比，水提醇沉的樣品有效成分的損失較大，而醇提和醇提水沉的樣品則有較高的轉(zhuǎn)移率，所以選擇乙醇為提取溶劑。醇提水沉法較醇提法梔子苷含量高，故以醇提水沉法進行提取為佳。
提取所用乙醇的濃度從提高提取率的角度考慮是越高越好，從生產(chǎn)成本角度考慮，優(yōu)選使用60％-80％濃度的乙醇進行提取，為了保證提取的完全，可以增加提取次數(shù)，優(yōu)選提取三次，每次提取時間以1至3小時為宜。乙醇與梔子之間應(yīng)保持比較大的比例，可以使用原料重量8-20倍的乙醇溶液進行提取。
醇提水沉后所得的樣品中含有大量的色素、糖類等雜質(zhì)，可采用醇沉的方法去除雜質(zhì)。經(jīng)醇沉后，梔子苷的含量可達到25％以上。
為進一步純化樣品，可用有機溶劑提取進行第二次分離。鑒于環(huán)烯醚萜苷遇酸、遇堿易水解，避免使用含酸堿溶劑。根據(jù)梔子環(huán)烯醚萜苷的溶解性，溶劑的極性并考慮環(huán)保與生產(chǎn)的需要，采用醋酸乙酯進行提取。
為提取充分，可以將浸膏與一定的分散劑拌勻，烘干，粉碎，以增大與溶媒的接觸面積，提高純化效果。分別選用硅藻土、碳酸鈣、三氧化二鋁，與浸膏混勻后，干燥，粉碎，用醋酸乙酯提取。進行預(yù)試驗，結(jié)果表明，用碳酸鈣混合后，質(zhì)地較硬，結(jié)成塊狀，不易粉碎，且難以提取完全；而三氧化二鋁對有效成分的吸附較強，收率低；與硅藻土混合后，則質(zhì)地疏松，容易粉碎，對有效成分的吸附較弱，提取效果好。故優(yōu)選將硅藻土作為分散劑用醋酸乙酯再次提取。經(jīng)此次提取后所得到的干燥物中梔子苷含量在35％以上。
醋酸乙酯提取物中仍含有較多的脂溶性雜質(zhì)，如色素等。在醋酸乙酯中，活性炭對脂溶性成分的吸附性較強，可選用活性炭進行脫色。根據(jù)環(huán)烯醚萜苷與其他雜質(zhì)在醋酸乙酯中溶解度不同的性質(zhì)，可采用重結(jié)晶的方法用活性炭進行脫色。將經(jīng)脫色后的藥液回收醋酸乙酯至少部分時，再低溫靜置，使環(huán)烯醚萜苷大部分析出結(jié)晶。將結(jié)晶物干燥，即得到成品，成品中梔子苷的含量可達到50％以上，梔子總環(huán)烯醚萜苷含量可達到60％以上。
根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案，該藥物劑型可以是注射針劑或口服制劑，其中口服制劑包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液等。本發(fā)所涉及的藥物制備成注射劑，可以按照制藥學(xué)常規(guī)方法精制處理提取物并添加輔料制成注射用粉針劑。本發(fā)所涉及的藥物制備成口服制劑，選用的輔料可以是淀粉、糊精或糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規(guī)輔料，制劑的后期制備工藝及設(shè)備均屬制藥領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)，在此不予詳述。
本發(fā)所涉及的藥物優(yōu)選劑型是膠囊劑，優(yōu)選價廉物美、性質(zhì)穩(wěn)定的淀粉作為輔料。
本發(fā)明的創(chuàng)造性在于通過科學(xué)可行的方法從梔子中提取分離出梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物，并進一步將該提取物作為有效成分制備成用于治療腦血管疾病，特別是腦出血的中藥制劑。如前所述，發(fā)明提供的藥物的有效成分是包括梔子苷的梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物，為達到發(fā)明目的，對梔子中梔子總環(huán)烯醚萜苷的提取率應(yīng)在50％以上，同時該提取物中梔子苷的含量也應(yīng)不低于40％。
本發(fā)明提供一個專屬性較強的鑒別方法，利用薄層色譜對提取物進行鑒別。
取梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物20mg，加甲醇5ml溶解，作為供試品。另取梔子苷對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液作為對照品。按藥典2000版薄層色譜法定性分析，吸取以上兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯—丙酮—甲酸—水(5∶5∶1∶1)為展開劑展開，取出晾干，噴以50％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑點顯色清晰。供試品與對照品色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點。
用于檢測所述苷類化合物含量的方法可以借助任何可行的檢測手段和公知的方法，本發(fā)明在此提供一套可行的檢測方法。
通過高效液相色譜分析，與梔子苷對照品譜圖對照，證明在提取物中含有以梔子苷為主要成分的梔子總環(huán)烯醚萜苷混合物。從紫外吸收光譜中可看到，梔子苷對照品與梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物在239nm均有最大吸收峰，據(jù)此本發(fā)明采用紫外分光光度法在239nm波長處測定吸收度，以梔子苷對照品比較法通過回歸分析計算梔子總環(huán)烯醚萜苷的含量。提取物中梔苷的含量通過高效液相色譜法進行測定。測定方法經(jīng)方法學(xué)考察，結(jié)果表明方法穩(wěn)定可行、重現(xiàn)性好。應(yīng)該說明的是，該方法僅作為本發(fā)明產(chǎn)品的質(zhì)量控制手段之一，不應(yīng)排除其他任何滿足要求的方法和操作。
為了檢驗本發(fā)明所涉及藥物的藥效作用，以本發(fā)明實施例2所得膠囊進行了以下藥效學(xué)、毒理學(xué)研究1.藥效學(xué)研究(1)大鼠自體血尾狀核腦出血模型試驗顯示30-15mg/kg梔子總環(huán)烯醚萜苷可以改善大鼠的神經(jīng)學(xué)癥狀(p＜0.05)，促進血腫的吸收(P＜0.05)，促進腦出血后腦水腫消退(P＜0.05)。減少動物陽性小膠質(zhì)細胞數(shù)目(P＜0.001)。
(2)大鼠膠原酶尾狀核腦出血模型試驗顯示30-15mg/kg梔子總環(huán)烯醚萜苷可以改善大鼠的神經(jīng)學(xué)癥狀(p＜0.05)，促進血腫的吸收(P＜0.05)，促進腦出血后腦水腫消退(P＜0.05)。減少動物陽性小膠質(zhì)細胞數(shù)目(P＜0.001)。
(3)實驗性犬缺血試驗顯示30和15mg/kg劑量梔子總環(huán)烯醚萜苷能明顯減少犬大腦中動脈結(jié)扎后的腦組織缺血區(qū)重量，減少腦組織缺血性壞死(P＜0.01和P＜0.05)。
(4)大鼠腦缺血再灌注損傷保護試驗顯示60和30mg/kg劑量梔子總環(huán)烯醚萜苷能明顯減少大鼠腦缺血再灌注損傷所致腦水腫病變(P＜0.01和P＜0.05)。明顯改善大鼠腦缺血再灌注損傷所致腦組織LPO的升高和SOD、GSH-Px降低(P＜0.01和P＜0.05)。
(5)腦缺血再灌注致學(xué)習(xí)記憶障礙模型試驗顯示60和30mg/kg劑量梔子總環(huán)烯醚萜苷能明顯減少大鼠腦缺血再灌注致學(xué)習(xí)記憶障礙病變(P＜0.01和P＜0.05)；明顯減少大鼠腦缺血再灌注損傷所致海馬遲發(fā)性神經(jīng)元死亡(P＜0.01和P＜0.05)。
(6)抗炎試驗顯示100和50mg/kg梔子總環(huán)烯醚萜苷對二甲苯所致小鼠耳腫脹有顯著抑制作用(P＜0.01)。100mg/kg梔子總環(huán)烯醚萜苷對角叉菜膠所致大鼠足腫脹有明顯的抑制作用(P＜0.05)。100和50mg/kg梔子總環(huán)烯醚萜苷分別能極顯著和顯著抑制大鼠棉球肉芽增生腫脹(P＜0.001和P＜0.01)。
(7)凝血試驗顯示50和25mg/kg梔子總環(huán)烯醚萜苷分別能顯著和明顯縮短小鼠凝血時間(P＜0.01和P＜0.05)，明顯縮短小鼠出血時間(P＜0.05)。
(8)大鼠利尿試驗顯示100~50mg/kg劑量梔子總環(huán)烯醚萜苷在給藥后3h內(nèi)顯著增加動物尿量明顯(P＜0.01)。
以上藥效學(xué)試驗資料表明梔子總環(huán)烯醚萜苷有促進腦血腫消退、改善神經(jīng)功能、減少腦組織缺血性壞死、保護腦缺血再灌注損傷、促進凝血和利尿作用。
2.急性毒性試驗梔子總環(huán)烯醚萜苷小鼠和大鼠灌胃給藥的最大給藥量分別為6000mg/kg/24h和900mg/kg，最大給藥倍數(shù)分別為60kg體重成人臨床口服日用藥量的1200倍和900倍。灌胃給藥后觀察14天，動物無死亡。給藥后30min至3小時，動物表現(xiàn)為安定，活動減少；給藥后6至48小時，動物糞便量增多，藍染，質(zhì)軟不成形，此后，恢復(fù)正常。其余未見異常癥狀。觀察期間，動物的攝食量和體重無明顯減少。處死動物后，肉眼觀察重要器官(心、肝、脾、肺、腎等)均無異常發(fā)現(xiàn)。
急毒結(jié)果表明梔子總環(huán)烯醚萜苷安全劑量范圍較大。
3.長期毒性試驗梔子總環(huán)烯醚萜苷500mg/kg大劑量長期給藥，可能引起大鼠肝細胞病理異常改變和RBC降低。各項指標未見延遲性毒性反應(yīng)及明顯性別差異。250mg/kg及以下劑量為安全劑量范圍。連續(xù)對Beagle犬口服給藥250mg/kg劑量的梔子總環(huán)烯醚萜苷90天及停藥21天，相當于其臨床口服劑量的50倍，主要對Beagle犬肝臟有損害作用，但停藥后可恢復(fù)。125mg/kg梔子總環(huán)烯醚萜苷及以下劑量各項指標未見明顯異常影響，亦無明顯延遲性毒性反應(yīng)，屬安全劑量范圍。
以上研究結(jié)果表明，本發(fā)明所涉及藥物毒性小、使用安全，有促進腦血腫消退、改善神經(jīng)功能、減少腦組織缺血性壞死、保護腦缺血再灌注損傷、促進凝血和利尿作用，是一種具有良好開發(fā)前景的治療腦出血的中藥制劑。
圖2為梔子苷對照品于239nm測得的高效液相色譜圖。
提取物中梔子總環(huán)烯醚萜苷含量的測定精密稱取梔子苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供)12.70mg，以10％甲醇水溶液溶解并定容至100ml。精密稱取2.0、5.0、8.0、10.0、12.0ml，分別用10％甲醇水溶液稀釋至50ml，使用紫外分光光度法在239nm波長處測定吸收度，繪制出標準曲線。
線性范圍5.1-30.5μg/ml回歸方程A＝4.2943×10-3C+2.6511×10-2決定系數(shù)r＝0.99996準確稱取梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物24mg，用甲醇溶解并稀釋至100ml，精密量取5ml加水稀釋至50ml，搖勻作為供試品溶液，使用紫外分光光度法測定其在239nm波長處的吸收度，根據(jù)標準曲線計算出以梔子苷計的梔子總環(huán)烯醚萜苷含量為69.1％。
梔子苷的含量測定方法已較成熟，在此不予多述。利用高效液相色譜法在239nm波長處測得該提取物中梔子苷含量為59.6％。
權(quán)利要求
1.一種治療腦血管疾病的藥物，其特征在于其中含有有效劑量的從梔子中提取得到的梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物或梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物和藥學(xué)上可接受的賦形劑，該提取物中梔子總環(huán)烯醚萜苷的含量在50％以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于其劑型包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液、注射針劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物的制備方法，其特征在于包括以下步驟以梔子中藥為原料，用50％-95％濃度的乙醇提取，經(jīng)純化制取梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物，該提取物中梔子苷的含量在35％以上，以該提取物為有效成分按照藥劑學(xué)方法制備成制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于其制備梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物的方法包括以下步驟1)用50％-95％濃度的乙醇提取梔子；2)濃縮乙醇提取液至相對密度1.10-1.30；3)上述濃縮后的提取液用醋酸乙酯回流提?。?)上述醋酸乙酯提取液中加入活性炭，回流濾過，用熱醋酸乙酯液洗脫活性炭；5)回收醋酸乙酯，至藥液出現(xiàn)大量渾濁時停止?jié)饪s；6)減壓干燥上述得到的結(jié)晶物，即得梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于含水乙醇的濃度為60％-80％。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于以硅藻土作為分散劑，用醋酸乙酯提取。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于活性炭的用量為浸膏量的20％-60％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物在制備治療腦出血癥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療腦血管疾病的藥物及其制備方法，該藥物中的有效成分是來自于中藥梔子的梔子總環(huán)烯醚萜苷，且其中的主要成分為梔子苷。本發(fā)明還提供了該藥物的制劑劑型，尤其是膠囊劑型。經(jīng)藥理藥效學(xué)試驗證明本發(fā)明所涉及的梔子總環(huán)烯醚萜苷提取物制成的藥劑使用安全，有促進腦血腫消退、改善神經(jīng)功能、減少腦組織缺血性壞死、保護腦缺血再灌注損傷、促進凝血和利尿作用，是一種具有良好開發(fā)前景的治療腦出血的中藥制劑。
文檔編號C07H1/00GK1460483SQ0313751
公開日2003年12月10日 申請日期2003年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月10日
發(fā)明者楊奎, 楊明, 付超美, 蒲旭峰, 周東 申請人:北京正青星光生物醫(yī)學(xué)科技有限公司, 成都中醫(yī)藥大學(xué)