專利名稱：作為白細(xì)胞介素抑制劑的嘧啶基衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一系列新穎的天冬氨酸類似物，這些類似物在體外試驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn)中顯示出對(duì)白細(xì)胞介素-1β轉(zhuǎn)化酶的選擇性抑制作用；還涉及含有這種新穎天冬氨酸類似物的組合物和治療方法。更具體而言，本發(fā)明所述的白細(xì)胞介素1β轉(zhuǎn)化酶抑制劑包括新的N-(嘧啶基)-天冬氨酸的醛類和α-取代甲基的酮類，它們?cè)谥委煼尾?、中樞神?jīng)系統(tǒng)和結(jié)締組織的炎癥和基于免疫的疾病方面，具有特別的效用。
背景技術(shù)：
白細(xì)胞介素1β(IL-1β)蛋白酶(也稱為白細(xì)胞介素1β轉(zhuǎn)化酶或ICE)是負(fù)責(zé)將無(wú)生物活性的31kD前體IL-1β加工為有生物活性的17kD型的酶(M.J.科斯圖臘，M.J.托西，G.利謬科，J.欽，P.卡麥倫，A.G.希爾曼，N.A.恰特賴因，J.A.施密特，Proc.Nat.Acad.Sci.，(1989)，86，5227-5231和R.A.布拉克，S.R.克朗海姆，P.R.斯利恩，F(xiàn)EBS-Let.，(1989)，247，386-391)。除了作為軀體對(duì)損害和傳染的早期反應(yīng)之一以外，有人提出，IL-1β還在多種疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、腸炎病、敗血病、急性和慢性的骨髓性白血病和骨質(zhì)疏松癥中起到介體的作用(C.A.迪納雷洛，S.M.沃爾夫，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志，(1993)，328，106)。自然存在的IL-1β受體拮抗劑已用來(lái)說(shuō)明在許多人體疾病和動(dòng)物模型中IL-1β的中介性(C.H.漢農(nóng)，C.J.威爾科克斯，W.P.阿倫德，G.G.焦斯林，D.J.德里普斯，P.L.海姆達(dá)爾，L.G.阿梅斯，A.索默，S.P.艾森伯格，R.C.湯普森，自然，(1990)，343，336-340；S.P.艾森伯格，R.J.伊文斯，W.P.阿倫德，E.佛德伯，M.T.布雷沃，C.H.漢農(nóng)，R.C.湯普森，自然，(1990)，343，341-346；K.沃爾森，P.布焦克，M.伯根費(fèi)爾特，R.哈杰門，R.C.湯普森，自然，(1990)，348，550-552；G.瓦卡巴亞希，F(xiàn)ASEB，(1991)，338-343；R.帕西菲西等，Proc.Natl.Acad.Sci.(1989)，86 2398-2402和I.亞馬莫托等，癌癥研究(1989)，49，4242-4246)。IL-1β在炎癥和免疫調(diào)節(jié)方面的特定作用已由近期的觀察結(jié)果所證實(shí)，這觀察結(jié)果是牛痘病毒使用ICE抑制劑來(lái)阻止其宿主的炎性反應(yīng)(C.A.賴等，細(xì)胞，(1992)，69，597-604)。
概而言之，已有一些本領(lǐng)域的工作者提出并用體內(nèi)試驗(yàn)證明ICE抑制劑對(duì)某些由IL-1β傳遞的疾病狀態(tài)的改變效用。下列的對(duì)ICE研究領(lǐng)域現(xiàn)況的評(píng)述進(jìn)一步為ICE抑制劑的效用提供了證據(jù)1)1993年5月11日公布的WO 9309135宣稱，基于肽的天冬氨酸的芳酰氧基-和芳氧基甲基酮類是體外試驗(yàn)有效的ICE抑制劑。這些化合物還能抑制整個(gè)細(xì)胞內(nèi)成熟IL-1β的形成，而使整個(gè)細(xì)胞內(nèi)(在體內(nèi))的ICE受到特別抑制。這些ICE抑制劑還證明有減輕大鼠發(fā)燒和發(fā)炎/腫脹的作用。
2)Lyme病的患者有時(shí)發(fā)展為L(zhǎng)yme關(guān)節(jié)炎。而Lyme病的病原體，B.burgdorferi，是一種由單核細(xì)胞合成IL-1的強(qiáng)有力的誘導(dǎo)劑。米勒等。(L.C.米勒，E.A.伊薩，S.林奇，J.W.洛根，C.A.迪納雷洛和A.C.斯提爾，“關(guān)節(jié)液IL-1β和IL-1受體拮抗劑的平衡及從Lyme關(guān)節(jié)炎的恢復(fù)”，柳葉刀(1993)341；146-148)指出，在Lyme關(guān)節(jié)炎恢復(fù)快的患者的關(guān)節(jié)液中，IL-1β和IL-1ra的平衡有利于IL-ra.當(dāng)該平衡移向有利于IL-1β時(shí)，則此病需要更長(zhǎng)時(shí)間才能恢復(fù)。結(jié)論是過(guò)量的IL-1ra封阻了上述這些患者的IL-1β的影響。
3)IL-1存在于患潰瘍性結(jié)腸炎的人體受感染的組織中。在有該病的動(dòng)物模型內(nèi)，IL-1β的量與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。在該模型中，給于IL-1ra可減少組織壞死和結(jié)腸中有炎性的細(xì)胞數(shù)。參見(jiàn)F.科米內(nèi)利，C.C.納斯特，B.D.克拉克，R.辛德勒，R.勒倫納，V.E.埃塞林，R.C.湯普森和C.A.迪納雷洛，“白細(xì)胞介素-1基因表達(dá)、合成和其在兔免疫復(fù)合物結(jié)腸炎中特定IL-1受體封阻的作用”臨床研究雜志(1990)第86卷，第972-980頁(yè)。
4)IL-Ira可抑制大鼠關(guān)節(jié)炎的PG-APS模型中的關(guān)節(jié)腫脹。參見(jiàn)J.H.施瓦布，S.K.安德?tīng)?，R.R.布朗，F(xiàn).G.達(dá)爾多夫和R.C.湯普森，“白細(xì)胞介素-1在細(xì)菌細(xì)胞壁引起的大鼠關(guān)節(jié)炎復(fù)發(fā)中的促炎和抗炎作用”、傳染免疫(1991)59；4436-4442。
5)IL-1ra在小開(kāi)式標(biāo)記(open-label)的人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎試驗(yàn)中顯出功效。參見(jiàn)M.E.累布薩克，C.C.波爾，C.C.布洛多，F(xiàn).X.伯奇，M.A.薩克，W.恰斯和M.A.卡塔倫諾，“類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者皮下用的IL-1受體拮抗劑”，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(1991)34；545。
6)看來(lái)IL-1是慢性骨髓性白血病細(xì)胞激增的自分泌增長(zhǎng)因子。IL-1ra和sIL-1R都能抑制由白血病患者取出的細(xì)胞的群體增長(zhǎng)。參見(jiàn)Z.埃斯特洛夫，R.克茲羅克，M.韋茨勒，H.肯塔今，M.布拉克，D.哈里斯，J.U.古特曼和M.塔爾帕茲，“用白細(xì)胞介素-1(IL-1)受體拮抗劑和可溶性IL-1受體抑制慢性骨髓性白血病的群體增長(zhǎng)IL-1活性抑制劑的新的應(yīng)用”，血(1991)78；1476-1484。
7)如上述6)，但不是針對(duì)慢性骨髓性白血病，而是針對(duì)急性骨髓性白血病。參見(jiàn)Z.埃斯特洛夫，R.克茲羅克，E.埃斯特，M.韋茨勒，A.弗臘焦利，D.哈里斯，M，布拉克，J.U.古特曼和M.塔爾帕茲，“用白細(xì)胞介素-1(IL-1)受體拮抗劑和可溶性IL-1受體抑制急性骨髓性白血病的爆發(fā)性激增”，(1992)血79；1938-1945。
目前還必須充分開(kāi)發(fā)出能商品化的有效療法來(lái)治療由IL-1β傳遞的炎性疾病。因此，需要有一些治療和預(yù)防這些疾病的有效藥物。
據(jù)本申請(qǐng)人所知，本領(lǐng)域敘述過(guò)的所有ICE抑制劑都是基于肽的，以利用該基質(zhì)的酶的特征。在本發(fā)明中我們對(duì)不基于肽的ICE抑制劑加以敘述，明確地說(shuō)，在這類抑制劑中嘧啶用作P2和P3氨基酸的識(shí)別代替物，至今為止P2和P3氨基酸曾是必須存在的，以產(chǎn)生有效的ICE抑制劑(參見(jiàn)式1)。非肽型抑制劑對(duì)它們相對(duì)應(yīng)的肽型抑制劑而言有一熟知的優(yōu)點(diǎn)，那就是這類非肽型抑制劑在體內(nèi)的代謝和排泄大大地變小，從而提高了這些化合物在動(dòng)物和人體內(nèi)的生物利用率(M.J.亨夫雷和P.S.林格羅斯，“肽和有關(guān)的藥物有關(guān)它們的吸收、代謝和排泄的評(píng)論”，藥物代謝評(píng)論，(986)，17，283-310.還有J.J.普拉特納和D.W.諾貝克，“由肽前導(dǎo)體開(kāi)發(fā)藥物的障礙”，藥物發(fā)現(xiàn)技術(shù)，(1990)，第5章，92-126，C.R.克拉克和W.H.穆斯編；HorwoodChichester，U.K.).
式1 基于肽的ICE抑制劑(R..多爾等，藥物化學(xué)雜志，(1994)，37，563) 基于嘧啶的ICE抑制劑(本發(fā)明)應(yīng)當(dāng)指出，近期已提到將基于嘧啶的三氟甲基酮類(式2)作為絲氨酸蛋白酶，彈性蛋白酶的抑制劑。由于ICE是一種半胱氨酸蛋白酶而現(xiàn)有技術(shù)已知道三氟甲基酮類是相當(dāng)差的半胱氨酸蛋白酶抑制劑(參見(jiàn)，B.英珀里利厄和R.H.艾布爾斯，生物化學(xué)(1986)，25.3760-7)，所以預(yù)計(jì)式2的嘧啶類不是ICE抑制劑。還已經(jīng)知道，ICE需要在P1處有天冬氨酸支鏈(-CH2COOH)。抑制彈性蛋白酶的嘧啶類(式2)含有纈氨酸支鏈(-CHMe2)。此外，正如下文將會(huì)指出，本發(fā)明所述的基于嘧啶的ICE抑制劑(式1)不抑制人類的白細(xì)胞彈性蛋白酶，因此它對(duì)ICE有特別的選擇性，并與已知的彈性蛋白酶抑制劑明顯不同。
式2 基于嘧啶的彈性蛋白酶抑制劑(Imperical Chemical Industries；EPO 528 633 A1；1993)
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，提供了式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
式中-Y是 而當(dāng)R6是OH，則Y還可以是 R5是H或氘；R6是OR8或NHOH此處R8獨(dú)立地是H，烷基或芳烷基R3和R4獨(dú)立地是H，烷基或芳烷基R2＝H、烷基、-(CH2)0-4-環(huán)烷基、 芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、-(CH2)2-4-R10；此處n＝1-3；此處R10＝烷氧基、CH2F、CHF2、CF3、CF2CF3、OH、COOR11、CONR9R11或NR9R11；此處R9獨(dú)立地是H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、-CH2CH2O-烷基和C(O)-R12；此處R11獨(dú)立地是H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基和雜芳烷基；而當(dāng)R9和R11合在一起，則它們可成為五、六或七元環(huán)，其類型是 此處n＝1-3和m＝0-1；而R12是烷基、芳基、芳烷基、雜芳基和雜芳烷基；R7＝H，CH2F，CHR13O(CO)0-1-芳基，HR13OP(O)(R14)R(15)， 或 式中R13＝H或烷基R14＝H、烷基或芳基R15＝H、烷基或芳基R16＝H、烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基R17＝H、烷基、CF3、CF2CF3、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、COOR11或CONR9R11R18＝H、烷基、CF3、CF2CF3、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基R1定義為R19-R2，R19-R20，R19-R21，R19-NR9R11此處R19＝(CR3R4)-0-4；
和 此處X＝O，S，NR9 和 此處n-1-3；R22O-此處R22是烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、R19-環(huán)烷基、R19-R21、R23-R10、R23-R20；式中R23＝(CR3R4)-2-4；R9R11N-和R24R11N-此處R24＝R19-環(huán)烷基、R19-R21、R23-R10、R23-R20、CR3R4COOR11和CR3CR4CONR9R11；本文所用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”包括酸加成鹽和堿加成鹽。
術(shù)語(yǔ)“酸加成鹽”是指那些仍能保持原游離堿生物效力和性質(zhì)的鹽，并且它們并非生物學(xué)上或其它方面不需要的鹽，它們是用無(wú)機(jī)酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，和有機(jī)酸，諸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來(lái)酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸等制成的。
術(shù)語(yǔ)“堿加成鹽”包括那些由無(wú)機(jī)堿衍生的鹽，諸如鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳、鋁鹽等。特別優(yōu)選的是銨、鉀、鈉、鈣和鎂鹽，以及由藥學(xué)上可接受的有機(jī)無(wú)毒堿衍生的鹽，這包括伯、仲和叔胺、取代胺(包括自然存在的取代胺、環(huán)胺和堿性離子交換樹(shù)脂諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、三甲胺、二(環(huán)己基)胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡堿、普魯卡因、哈胺、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌定聚胺樹(shù)脂等)的鹽。特別優(yōu)選的有機(jī)無(wú)毒堿是異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二(環(huán)己基)胺、膽堿和咖啡堿。
在上文和全文中所用的下列術(shù)語(yǔ)，除非另外注明，都應(yīng)認(rèn)為具有下述的含意“烷基”定義為直鏈或支鏈飽和脂族烴，優(yōu)選的基團(tuán)具有不大于約12個(gè)碳原子，可以是甲基、乙基、丙基等以及丙基、丁基、戊基、己基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基的異構(gòu)體。
“環(huán)烷基”定義為含有至少3個(gè)到多至8個(gè)碳原子的飽和環(huán)脂族烴。優(yōu)選的基團(tuán)包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。
“芳基”定義為苯環(huán)或萘環(huán)或取代苯環(huán)或取代萘環(huán)，其中有一個(gè)或多個(gè)氫原子已由相同或不同的取代基所取代，這些取代基選自R1、COR1或R25，此處R25定義為H、OH、鹵代、-OC(O)R11、-C(O)R11、-NR11C(O)R1、-NR11C(O)(CR3R4)2-6R1、-COOR11、-COOR11、-CONR9，R11、R11S-、-NR9，R11SO2R8、-SO2NR9，R11、硝基、氰基、-NR11CONR9R11，此處R1、R8、R9、R11和R12如上所定義。
“雜芳基”定義為約5至約12個(gè)碳原子的、未取代或任選取代的、單環(huán)或二環(huán)的環(huán)狀體系，此處每個(gè)單環(huán)可具有0至約4個(gè)雜原子，而每個(gè)二環(huán)物可具有0至約5個(gè)雜原子，這些雜原子選自N、O和S，但這些雜原子不是相鄰的氧和/或硫原子；此處取代基的數(shù)目為0至約5個(gè)，它們可位于該環(huán)狀物的任何適當(dāng)位置，這些取代基可任選地選自已在有關(guān)芳基的說(shuō)明中列出的那些取代基。這種單環(huán)或二環(huán)的環(huán)狀體系的實(shí)例包括苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、苯并吡唑、香豆素、異喹啉、吡咯、噻吩、呋喃、噻唑、咪唑、吡唑、三唑、喹啉、pyrollidenone、嘧啶、吡啶、吡啶酮、吡嗪、噠嗪、異噻唑、異噁唑和四唑，但這決不意味著限制本發(fā)明的范圍。
“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。例如，芐基。
“雜芳烷基”是指被雜芳基取代的烷基。例如，(4-吡啶基)甲基。
“烷氧基”是指被烷基、芳基或芳烷基取代的氧原子。例如，甲氧基、乙氧基、苯氧基、芐氧基。
“鹵代”是指碘代、溴代、氯代和氟代。
“(CR3R4)2-4”這一標(biāo)示是指至少由2個(gè)但不超過(guò)4個(gè)碳原子組成的烷基鍵，此處所述的碳原子獨(dú)立地用以R3和R4表示的基團(tuán)來(lái)代替。這種鍵的實(shí)例包括，但不限于，乙基、丙基、丁基、2-甲基乙基(-(MeHCCH2-)、2，2-二甲基乙基(Me2CCH2-)。
本發(fā)明還涉及治療哺乳動(dòng)物所需的由IL-1β蛋白酶?jìng)鬟f的病癥或失調(diào)的藥用組合物和方法，它包括服用作為活性劑的式(I)的IL-1β蛋白酶抑制劑。這些病癥和失調(diào)包括傳染病，諸如腦膜炎和輸卵管炎之類；敗血性休克，呼吸系統(tǒng)疾??；炎癥，諸如關(guān)節(jié)炎、膽管炎、結(jié)腸炎、大腦炎、endocerolitis、肝炎、胰腺炎和再灌注損害之類；基于免疫的疾病，諸如過(guò)敏性疾病之類；自動(dòng)免疫性疾病，諸如多發(fā)性硬化之類；骨病以及某些腫瘤和白血病。
本發(fā)明在調(diào)節(jié)處理IL-1β以治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面有特別的效用。在此病患者的關(guān)節(jié)液中，IL-1β的水平升高是已知道的。此外，IL-1β能促進(jìn)合成一些認(rèn)為與炎癥有關(guān)的酶，諸如膠原酶和PLA2之類，并能引起關(guān)節(jié)破壞，這與動(dòng)物關(guān)節(jié)內(nèi)注射后的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎非常相似。
在實(shí)施本發(fā)明時(shí)，將有效量的本發(fā)明化合物或其藥用組合物給于需要或希望這種治療的患者。這些化合物或組合物可經(jīng)過(guò)多種途徑中的任一種來(lái)給藥，這取決于具體使用目的，這些給藥途徑包括口服的、非經(jīng)腸道的(包括皮下的、關(guān)節(jié)內(nèi)的、肌肉內(nèi)的和靜脈內(nèi)的給藥)、直腸的、口腔的(包括舌下的)、經(jīng)皮膚的或鼻內(nèi)的。任一給定情況下最適宜的給藥途徑取決于用途、具體的有效成分和有關(guān)患者的情況。正如本文進(jìn)一步敘述的那樣，這種化合物或組合物還可用控制釋放、長(zhǎng)效植入物或可注射的配制劑等方式來(lái)給藥。
一般說(shuō)來(lái)，在本發(fā)明所述的用途中，對(duì)人的治療而言，有效成分給藥量為約0.1-100mg/kg體重是恰當(dāng)?shù)?，最?yōu)選為約0.1-30mg/kg體重，有效成分的給藥最好是在約0.1-約20-50mg/kg/日的范圍。給藥的方式可以一次完成或分成幾次或用緩釋方式以便達(dá)到最有效的結(jié)果。當(dāng)采用一次給藥時(shí)，給藥量最優(yōu)選為約0.1-約10mg/kg的范圍。
這些化合物和組合物的確切給藥劑量和給藥方式，必須依據(jù)待治療的患者個(gè)人的需要、治療的類型和痛苦程度或需要而定。一般說(shuō)來(lái)，非經(jīng)腸道給藥的所需劑量比其它更依賴于吸收的給藥方式所需的低些。
本發(fā)明的另一方面涉及藥用組合物，該組合物包括作為有效成分的本發(fā)明的化合物，并與藥學(xué)上可接受的無(wú)毒載體混合在一起。如上所述，這種組合物可制成非經(jīng)腸道的(皮下的、關(guān)節(jié)內(nèi)的、肌肉內(nèi)的或靜脈內(nèi)的)用藥，特別是制成溶液或懸浮液；或口服的或口腔的用藥，特別是制成片劑或膠囊；或鼻內(nèi)用藥，特別是制成粉劑、滴鼻液或煙霧劑。
在口服(或經(jīng)直腸)給藥時(shí)，通常將本發(fā)明的化合物配成單位劑量的形式，例如片劑、膠囊、栓劑或扁囊劑。這種配制劑通常包括固態(tài)、半固態(tài)或液態(tài)的載體或稀釋劑。典型的稀釋劑和賦形劑是乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯樹(shù)膠、磷酸鈣、礦物油、可可脂、可可油、aginates、黃蓍膠、明膠、糖漿、甲基纖維素、聚氧乙烯失水山梨糖醇單月桂酸酯、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石和硬脂酸鎂。
這些組合物可用制藥領(lǐng)域熟知的方法，例如賴明頓的藥物科學(xué)，第17版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1985中所述方法的任一種來(lái)制備。非經(jīng)腸道給藥的配制劑中可含有無(wú)菌水或鹽水、亞烷基二醇諸如丙二醇之類、聚(亞烷基)二醇諸如聚乙二醇之類、植物油、氫化萘等作為通用賦形劑。非經(jīng)腸道用藥的賦形劑實(shí)例包括水；含水賦形劑，諸如鹽水、Ringer′s溶液、葡萄糖溶液和Hank′s溶液之類；和非水賦形劑，諸如固定油(如玉米油、棉籽油、花生油和麻油)、油酸乙酯和肉豆蔻酸異丙酯。無(wú)菌鹽水是優(yōu)選的賦形劑，且本發(fā)明化合物有足夠的水溶性以配制所有預(yù)先要求的溶液。賦形劑中可含有少量諸如提高溶解度、等滲性和化學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)的添加劑，例如抗氧劑、緩沖劑和防腐劑。對(duì)口服給藥而言，添加膽汁鹽，以及添加?；舛緣A，可提高配制劑性能(美國(guó)生理學(xué)雜志，251332(1986))。鼻內(nèi)給藥的配制劑可呈固態(tài)并含有例如乳糖或葡聚糖作為賦形劑；也可以是水溶液或油溶液，以滴鼻液或定量噴霧劑的形式給藥。對(duì)口腔給藥而言，典型的賦形劑包括糖、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、預(yù)膠凝淀粉等。
當(dāng)配制鼻內(nèi)用藥時(shí)，添加有表面活性的酸諸如甘膽酸、膽酸、?；悄懰帷thocholic acid、脫氧膽酸、鵝脫氧膽酸、去氫膽酸、脫氧甘膽酸等，可提高透過(guò)鼻粘膜吸收的效果(參見(jiàn)B.H.維克里，“LHRH和其類似物-Contraccption和治療應(yīng)用”，第2部分，B.H.維克里和J.S.內(nèi)斯特編，MTP Press，Lancaster，UK，1987)。
發(fā)明詳述本發(fā)明的化合物是用一般的在方案1、2、3和4中所述的合成方法來(lái)制備的。將Z-天冬氨酸α-溴代甲基酮(方案1；結(jié)構(gòu)式1；Z＝芐氧基羰基)以DMF為溶劑，在KF存在下用醇或羧酸處理，得到α-取代的Z-天冬氨酸甲基酮(結(jié)構(gòu)式2)。制備結(jié)構(gòu)式1的溴化物和將其轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)構(gòu)2的化合物，是用A.克蘭茨等(生物化學(xué)，(1991)，30，4678-4687)所述的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)的，隨后，在氫解條件下將Z-基團(tuán)除去，以產(chǎn)生N-末端胺(結(jié)構(gòu)式3)。氫解除去Z-基團(tuán)所用的典型試劑和條件是氫氣；常溫和常壓；在醇類溶劑例如甲醇中，該甲醇還任選含有2當(dāng)量的鹽酸；以載5％鈀的碳為催化劑。沒(méi)有必要精制這種游離胺中間體或其鹽酸鹽(如氫解時(shí)采用鹽酸)，盡管該物料必須干燥而且不含醇，以使隨后進(jìn)行的偶聯(lián)反應(yīng)有好的收率。然后將所得的胺(結(jié)構(gòu)式3)與嘧啶羧酸(結(jié)構(gòu)式4)縮合，以產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式5的中間體。一般必須將嘧啶羧酸首先活化為酰氯或混合酐，然后在有機(jī)堿例如N-甲基嗎啉存在下將其與此游離堿(或其鹽酸鹽)反應(yīng)。嘧啶羧酸與這種胺中間體的偶聯(lián)反應(yīng)也可采用肽偶聯(lián)化學(xué)中所用的酰胺偶聯(lián)試劑和條件來(lái)進(jìn)行(“肽合成的實(shí)踐”，M.博丹斯基，Springer-Verlag，NY，1984；肽，第1-3卷，E.格羅斯和J.邁因霍弗編，Academic Press，NY，1981)。制備ICE抑制劑的最后一步合成反應(yīng)是叔丁基酯官能團(tuán)的水解。這是將該叔丁基酯(結(jié)構(gòu)式5)在25℃放于25％三氟乙酸(TFA)的二氯甲烷溶液中進(jìn)行的。通常該脫酯反應(yīng)可經(jīng)3小時(shí)完成。除去揮發(fā)的TFA和有機(jī)溶劑后得到這類天冬氨酸(結(jié)構(gòu)式6)。在所提供的叔丁基酯起始物料純度高時(shí)，在大多數(shù)實(shí)例中該反應(yīng)的收率是定量的。如果需要，可用重結(jié)晶或色譜法進(jìn)行精制，這些方法都是該領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的。TFA的濃度可為5％-100％，也可采用其它溶劑例如氯仿。用3克分子濃度的無(wú)水氯化氫的乙酸乙酯溶液代替TFA-二氯甲烷溶液，也可得相同的效果。
方案2概括了含嘧啶類的天冬氨醛的合成過(guò)程。這類合成的起始物料是天冬氨?？s氨基脲(結(jié)構(gòu)式7)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的加氫條件將Z-基團(tuán)除去，以產(chǎn)生相應(yīng)的胺(結(jié)構(gòu)式8)。然后將其與嘧啶酸(結(jié)構(gòu)式4)相偶聯(lián)，所用的偶聯(lián)條件與上文所述的類似。還需要進(jìn)行雙重去保護(hù)反應(yīng)以游離出β位的羧酸基團(tuán)(用三氟乙酸)和α位的醛基團(tuán)(用37％多聚甲醛水溶液、乙酸和甲醇)，從而產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式10的化合物。
方案3概括了將R1基團(tuán)引至嘧啶的5-氨基官能團(tuán)上的另一合成法，該法可進(jìn)一步增加本發(fā)明的范圍。含有Z-基團(tuán)的嘧啶的酸、酯或天冬氨酸酰胺(結(jié)構(gòu)式11)可進(jìn)行氫解反應(yīng)(其反應(yīng)條件與上文所述的類似)以產(chǎn)生相應(yīng)的5-氨基嘧啶類化合物(結(jié)構(gòu)式12)，胺的部分可與酰氯或活化的羧酸反應(yīng)(其反應(yīng)條件與上文方案1中所述用于結(jié)構(gòu)式3和4偶聯(lián)的條件類似)，以產(chǎn)生含有R1基團(tuán)的嘧啶類化合物，此處R1具有多種結(jié)構(gòu)。
方案4概括了所需的嘧啶類化合物的合成過(guò)程。起始物料是3-羧乙基嘧啶類化合物，其中帶有N-烯丙基(結(jié)構(gòu)式13)或N-乙醛縮二甲醇(結(jié)構(gòu)式14)。它們的合成過(guò)程可利用本領(lǐng)域已發(fā)表在文獻(xiàn)中的反應(yīng)條件等內(nèi)容方便地演繹而得(C.A.維爾等，有機(jī)化學(xué)雜志，(1993)，58，4490-4493；K.A.古普塔等，印度化學(xué)雜志B，21B，228；Nemeryuk，M.P.內(nèi)默留克等，捷克化學(xué)通訊集，(1986)，51，215-233)。將該乙基酯在含水堿(在H2O-THF中的LiOH或在H2O-THF中的NaOH)存在下水解，以制得相應(yīng)的酸(結(jié)構(gòu)式15和16)。再將此羧酸進(jìn)行Curtius重排(J.R.菲斯特等，合成，(1983)，38；A.S.臘哈克里什納等，合成，(1983)，538；K.尼努米亞等，四面體，(1974)，30，2151)得到高反應(yīng)性的異氰酸酯(結(jié)構(gòu)式17和18)，這種異氰酸酯不需分離，可立即與醇或胺反應(yīng)(參見(jiàn)上述Ninomiya等文獻(xiàn))。全部過(guò)程提供了氨基甲酸酯(以醇封端的異氰酸酯)或脲(以胺封端的異氰酸酯)，如結(jié)構(gòu)式19和20所示。此處合成路線分為兩路，一路是以N-烯丙基嘧啶為起始物料(結(jié)構(gòu)式19)，該烯烴部分用四氧化鋨/N-甲基嗎啉N-氧化物(參見(jiàn)V.文倫嫩等，四面體通信，(1976)，1973-1976；有機(jī)合成第58卷，第43-51頁(yè))和高碘酸鈉或高碘酸鉀(H.O.豪斯；近代合成反應(yīng)，W.A.Benjamin Inc.，Menlo Park，CA1972，353-359)來(lái)氧化，得到中間體醛(結(jié)構(gòu)式13→結(jié)構(gòu)式19→結(jié)構(gòu)式21)。另一路是以N-乙醛縮二甲醇為起始物料(結(jié)構(gòu)式20)，該二甲基縮醛官能團(tuán)用稀酸(鹽酸水溶液)來(lái)處理，得到中間體醛(結(jié)構(gòu)式14→結(jié)構(gòu)式20→結(jié)構(gòu)式21)。結(jié)構(gòu)式4的酸由結(jié)構(gòu)式21的醛經(jīng)以亞氯酸鈉或亞氯酸鉀媒介的氧化而制得(B.S.巴爾等，四面體，(1981)，37，2091)。應(yīng)當(dāng)指出，用芐醇來(lái)對(duì)異氰酸酯(結(jié)構(gòu)式17和18)封端可得到中間體Z-氨基甲酸酯，該中間體最終可制成結(jié)構(gòu)式11(方案3)的化合物。
方案1 方案2
方案3
方案4
式中R1-R4、R9、R11和R24與式(1)中定義相同，Z定義為芐氧基羰基，W定義為OH基、HNC(H)(CH2COOtBu)COCH2R26部分和HNC(H)(CH2COOtBu)C＝NNHCONH2部分。此處R26定義為F、-O(CO)0-1-芳基、-OP(O)(R14)R(15)、** 或 式中R8、R14、R15、R16、R17和R18與以前定義的相同。
下面對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)一步加以闡述。
實(shí)施例1N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；?acetoyl)-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮部分A將N-芐氧基羰基-L-天冬氨酸溴代甲基酮β-叔丁基酯(0.3g；0.76mM)溶于12ml無(wú)水DMF中。在此溶液中加粉狀氟化鉀(0.11g；19mmol)和2，6-二氯苯甲酸(0.17g；0.91mmol)，并將該反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜。將該溶液用Et2O稀釋，再用水、飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，然后干燥(用MgSO4)。所得的酮用硅膠色譜法以乙酸乙酯/己烷為洗脫溶劑來(lái)純化(1H NMR(CDCl3)§7.36(m，9H)，5.90(d，1H)，5.20(m，4H)，4.67(m，1H)，3.00和2.75(doublet of doublets，1H each)，1.42(s，9H))。
部分B將N-芐氧基羰基-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮β-叔丁基酯(1.02g，2mmol；上述部分A)溶于絕對(duì)乙醇(100ml，4mmol)中，該絕對(duì)乙醇還含有2當(dāng)量的6N HCl水溶液(4mmol)和載10％Pd/C(96mg)。將該反應(yīng)混合物在氫氣氣氛中攪拌約1小時(shí)(薄層層析[5％MeOH-CH2Cl2]表明，起始物料已消失)。將該溶液過(guò)濾，在真空下除去溶劑，得到L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮β-叔丁基酯的HCl鹽，這種HCl鹽可立即用于下述部分C的反應(yīng)中。
部分C將2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酸(771mg，2.05mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液冷卻至-20℃，再依次將氯甲酸異丁酯(0.28ml，2.05mmol)和N-甲基嗎啉(0.23ml，2.05mmol)加入。將該反應(yīng)混合物攪拌15分鐘，再將天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮β-叔丁基酯HCl鹽溶液(上述部分B制備的)加入，隨后加第二批N-甲基嗎啉(0.23ml，2.05mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后用EtOAc稀釋，用水、飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，隨后干燥(用MgSO4)。在真空下除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠色譜法以40％EtOAc-己烷為洗脫劑純化，得到N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基-)1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮β-叔丁基酯(1.2g；80％)。
部分D將N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮β-叔丁基酯(上述部分C)的含25％(體積/體積)三氟乙酸的二氯甲烷溶液(20ml)在0℃攪拌2小時(shí)。在真空下除去溶劑，將殘余物用硅膠色譜法純化得到分析純的N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮，低分辨率質(zhì)譜m/z＝699(M+H)。
實(shí)施例2N-[2-(5-硫代甲基苯甲酰氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮部分A將N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基-甲基酮β-叔丁基酯(2.5g，3.0mmol)溶于絕對(duì)乙醇(100ml，4mmol)中，該絕對(duì)乙醇還含有2當(dāng)量的6N HCl水溶液。將該溶液用氮脫氣，再加入10％Pd/C(300mg)。將該反應(yīng)混合物在氫氣氣氛下攪拌5小時(shí)(薄層層析[50％EtOAc-己烷起始物料的Rf＝0.5；產(chǎn)品的Rf＝0.0]表明，起始物料已消失)。將該溶液過(guò)濾，在真空下除去溶劑，以得到N-[2-(5-氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮β-叔丁基酯，它與甲苯形成共沸混合物，且不須要進(jìn)一步純化即可直接用于下一步部分B所述的反應(yīng)中。
部分B在N-[2-(5-氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)-乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮β-叔丁基酯(713mg，1.0mmol上述部分A制備的)的二氯甲烷(30ml)溶液中，于5℃將4-硫代甲基苯甲酰氯(279mg，1.5mmol)加入，隨后再將N-甲基嗎啉(0.5ml；4.5mmol)和4-N，N-二甲氨基吡啶(10mg)加入。將該反應(yīng)混合物于5℃攪拌2小時(shí)，然后讓其升至室溫。將該溶液用EtOAc稀釋，再用水、飽和NaHCO3水溶液洗和鹽水洗滌，然后干燥(用MgSO4)。在真空下除去溶劑。所得產(chǎn)物用硅膠色譜法以約30％EtOAc-己烷為洗脫劑純化，得到N-[2-(5-(4-硫代甲基苯甲酰氨基)-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮β-叔丁基酯，收率為50％。
部分C將N-[2-(5-(4-硫代甲基苯甲酰氨基)-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮β-叔丁基酯采用上文實(shí)施例1中部分D所述的條件轉(zhuǎn)變?yōu)榕c其相對(duì)應(yīng)的酸N-[2-(5-(4-硫代苯甲酰氨基)-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮。質(zhì)譜m/z＝787(M+H)。
按方案1和2的過(guò)程，采用與實(shí)施例1和2類似的方法來(lái)制備下列化合物。
實(shí)施例3N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸二苯基膦氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝727(M+H)
實(shí)施例4N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝771(M+H)實(shí)施例5N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(3-苯基)香豆酰(coumarinyl)氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝747(M+H)實(shí)施例6N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝737(M+H)實(shí)施例7N-[2-(5-異丙氧基羰基氨基-6-氧代-2-苯基-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝671(M+H)實(shí)施例8N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(3-吡啶基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝720(M+H)實(shí)施例9N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝725(M+H)實(shí)施例10N-{2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-甲基-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝657(M+H)實(shí)施例11N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸5-(1-(2-吡啶基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝726(M+H)實(shí)施例12N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝759(M+H)實(shí)施例13N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮質(zhì)譜m/z＝687(M+H)實(shí)施例14N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-，嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸醛質(zhì)譜m/z＝485(M+H)按下列模式測(cè)試本發(fā)明的化合物對(duì)IL-1β蛋白酶抑制的活性體外試驗(yàn)去活二級(jí)速率常數(shù)是采用R.E.多爾等，藥物化學(xué)雜志，(1994)，37，781中所述的酶分析法來(lái)求得的。
實(shí)施例1-13的化合物具有IL-1β蛋白酶抑制能力(kobs/l大于50,000M-1S-1)。
體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)抑制(IC50)按如下方法進(jìn)行測(cè)定從Biological Specialty Corporation(Lansdale，PA)獲得的肝素化白細(xì)胞電泳單元(heparinized leukopheresis units)分離得到人的單核白細(xì)胞。采用Ficoll-Hupaque(Pharmacia Fine Chemicals，Piscataway，NJ)梯度離心來(lái)純化單核白細(xì)胞，并用離心淘析得到純度大于95％的單核白細(xì)胞群。該分析是對(duì)新鮮分離出來(lái)的人的單核白細(xì)胞取重復(fù)樣品進(jìn)行的，這種單核白細(xì)胞是培養(yǎng)在37℃的懸浮液中并盛于圓錐底的聚丙烯試管內(nèi)(Sardstedt Inc.，Princeton，NJ)加以緩慢旋轉(zhuǎn)。將這種人的單核白細(xì)胞以5×106cells/ml的濃度再懸浮于1ml RPMI 1640(一種M.A.Bioproducts，Walkersville，MD的普通組織緩沖液)中，該RPMI1640中含1％胎牛血清(FCS)(HyClone，Logan，UT)和50μg/ml慶大霉素(Gibco，Grand Island，NY)。將這種細(xì)胞用本發(fā)明的化合物(即需測(cè)試的化合物)或非抑制劑(即對(duì)照化合物，通常為0.03％DMSO)處理15分鐘，然后用0.01％的固定金黃色葡萄球菌(The Enzyme Center，Malden MA)活化1小時(shí)。然后將這種細(xì)胞進(jìn)行離心并再懸浮于1ml不含半胱氨酸、蛋氨酸的RPMI介質(zhì)中，該介質(zhì)含有1％透析過(guò)的FCS(Hyclone)。將這種細(xì)胞用需測(cè)試的化合物或?qū)φ栈衔镱A(yù)處理15分鐘，然后將0.01％的固定金黃色葡萄球菌和100μCi Tran 35-S標(biāo)記物(ICN，Irvine，CA)加入，再將這種細(xì)胞在37℃培養(yǎng)1小時(shí)。然后將這種細(xì)胞進(jìn)行離心，用磷酸鹽緩沖鹽水洗一次并再懸浮于1ml加有1％胎牛血清的RPMI中。將這種細(xì)胞再一次用需測(cè)試的化合物或?qū)φ栈衔镱A(yù)處理15分鐘，然后用0.01％金黃色葡萄球菌處理2小時(shí)。培養(yǎng)完畢后，將這種細(xì)胞進(jìn)行離心，收集上層清液用于免疫沉淀。將這種細(xì)胞再用磷酸鹽緩沖鹽水洗一次，然后溶解于RIPA中，RIPA是一種含有2mM苯甲磺酰氟、10mM碘代乙酸鹽、1μg/ml胃酶抑素A、1μg/ml亮肽菌素和0.5TIU抑肽酶的傳代細(xì)胞介質(zhì)緩沖液。
為了進(jìn)行免疫沉淀，在上述的上層清液中加等體積1％奶粉的RIPA緩沖液和50μl再懸浮的蛋白質(zhì)A瓊脂糖凝膠CL-4B(Pharmacia，Piscataway，New York)，并在上述的細(xì)胞溶解液中加1ml含蛋白質(zhì)A瓊脂糖凝膠CL-4B的4％奶粉溶液，再將這些試樣在4℃旋轉(zhuǎn)30分鐘。此后將小珠體離心沉降，再將試樣轉(zhuǎn)移至新的試管中，并與40μg兔的抗人體IL-1β的多克隆抗體(Genzyme，Cambridge，MA)在一起培養(yǎng)過(guò)夜。然后用70μl蛋白質(zhì)A瓊脂糖凝膠將IL-1β蛋白質(zhì)沉淀出來(lái)，再懸浮于60μlSDS試樣緩沖液中并在15％SGD-PAGE凝膠上進(jìn)行試驗(yàn)。在干的凝膠上進(jìn)行放射自顯影，并用Betascope 603分析儀定量測(cè)定放射性量(每分鐘的計(jì)數(shù)，cpm)。
數(shù)據(jù)分析在單核白細(xì)胞脈沖追蹤測(cè)定時(shí)，每一測(cè)試參數(shù)都進(jìn)行兩次測(cè)定。用個(gè)人計(jì)算機(jī)將數(shù)據(jù)從Beta Scope收集起來(lái)，然后傳至VAX系統(tǒng)以計(jì)算平均cpm和該平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。在對(duì)需測(cè)試的化合物進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，按如下方式計(jì)算成熟IL-1β的釋放抑制百分率100×[1-(受需測(cè)試的化合物刺激處理的細(xì)胞-未受刺激的細(xì)胞)/(受對(duì)照化合物刺激處理的細(xì)胞-未受刺激的細(xì)胞)]然后利用這些抑制百分率值來(lái)計(jì)算每種化合物的IC50值。由于這種人的單核白細(xì)胞脈沖追蹤測(cè)定所用的是來(lái)自不同的供血者的原生細(xì)胞，因此對(duì)每種需測(cè)試的化合物是用取自2-3名不同供血者的單核白細(xì)胞進(jìn)行2-3個(gè)分別的試驗(yàn)。
對(duì)實(shí)施例1、6、7和9而言，其體內(nèi)試驗(yàn)IC50值為約0.1-約10μM的范圍。
對(duì)彈性蛋白酶的抑制作用(體外試驗(yàn))對(duì)實(shí)施例1、6和7的化合物檢驗(yàn)了其抑制彈性蛋白酶的能力。這種體外試驗(yàn)是按恰，生物化學(xué)藥理學(xué)，(1975)，24，2177-2185所述方法進(jìn)行的。實(shí)施例1、6和7是這類ICE抑制劑的代表，它們不抑制彈性蛋白酶，其IC50值≥10μM。
權(quán)利要求
1.一種式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式中Y是 而當(dāng)R6是OH，則Y還可以是 R5是H或氘；R6是OR8或NHOH此處R8獨(dú)立地是H、烷基或芳烷基R3和R4獨(dú)立地是H、烷基或芳烷基R2＝H、烷基、-(CH2)0-4-環(huán)烷基、 芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、-(CH2)2-4-R10；此處n＝1-3；此處R10＝烷氧基、CH2F、CHF2、CF3、CF2CF3、OH、COOR11、CONR9R11或NR9R11；此處R9獨(dú)立地是H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、-CH2CH2O-烷基和C(O)-R12；此處R11獨(dú)立地是H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基和雜芳烷基；而當(dāng)R9和R11合在一起，則它們可成為五、六或七元環(huán)，其類型是 此處n＝1-3和m＝0-1；而R12是烷基、芳基、芳烷基、雜芳基和雜芳烷基；R7＝H，CH2F，CHR13O(CO)0-1-芳基，CHR13OP(O)(R14)R(15)， 或 式中R13＝H或烷基R14＝H、烷基或芳基R15＝H、烷基或芳基R16＝H、烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基R17＝H、烷基、CF3、CF2CF3、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、COOR11或CONR9R11R18＝H、烷基、CF3、CF2CF3、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基R1定義為R19-R2，R19-R20，R19-R21，R19-NR9R11此處R19＝(CR3R4)-0-4； 和 此處X＝O，S，NR9 和 此處n-1-3；R22O-此處R22是烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、R19-環(huán)烷基、R19-R21、R23-R10、R23-R20；式中R23＝(CR3R4)-2-4；R9R11N-和R24R11N-此處R24＝R19-環(huán)烷基、R19-R21、R23-R10、R23-R20、CR3R4COOR11和CR3CR4CONR9R11。
2.權(quán)利要求1的化合物，該化合物選自N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；?L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮、N-[2-(5-硫代甲基苯甲酰氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸二苯基膦氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(3-苯基)香豆酰氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-異丙氧基羰基氨基-6-氧代-2-苯基-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(3-吡啶基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-甲基-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸5-(1-(2-吡啶基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸醛。
3.一種抑制白細(xì)胞介素-1β蛋白酶的藥用組合物，該組合物包括式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式中-Y是 而當(dāng)R6是OH，則Y還可以是 R5是H或氘；R6是OR8或NHOH此處R8獨(dú)立地是H、烷基或芳烷基R3和R4獨(dú)立地是H，烷基或芳烷基R2＝H、烷基、-(CH2)0-4-環(huán)烷基， 芳基，雜芳基，芳烷基，雜芳烷基，-(CH2)2-4-R10；此處n＝1-3；R2＝H、烷基、-(CH2)0-4-環(huán)烷基、 芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、-(CH2)2-4-R10；此處n＝1-3；此處R10＝烷氧基、CH2F、CHF2、CF3、CF2CF3、OH、COOR11、CONR9R11或NR9R11；此處R9獨(dú)立地是H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、-CH2CH2O-烷基和C(O)-R12；此處R11獨(dú)立地是H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基和雜芳烷基；而當(dāng)R9和R11合在一起，則它們可成為五、六或七元環(huán)，其類型是 此處n＝1-3和m＝0-1；而R12是烷基、芳基、芳烷基、雜芳基和雜芳烷基；R7＝H，CH2F，CHR13O(CO)0-1-芳基，CHR13OP(O)(R14)R(15)， 或 式中R13＝H或烷基R14＝H、烷基或芳基R15＝H、烷基或芳基R16＝H、烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基R17＝H、烷基、CF3、CF2CF3、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、COOR11或CONR9R11R18＝H、烷基、CF3、CF2CF3、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基R1定義為R19-R2，R19-R20，R19-R21，R19-NR9R11此處R19＝(CR3R4)-0-4； 和 此處X＝ O，S，NR9 和 此處n-1-3；R22O-此處R22是烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、R19-環(huán)烷基、R19-R21、R23-R10、R23-R20；式中R23＝(CR3R4)-2-4；R9R11N-和R24R11N-此處R24＝R19-環(huán)烷基、R19-R21、R23-R20、R23-R20、CR3R4COOR11和CR3CR4CONR9R11。
4.權(quán)利要求3的藥用組合物，其中所述的化合物選自N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；?L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮、N-[2-(5-硫代甲基苯甲酰氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸二苯基膦氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(3-苯基)香豆酰)氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-異丙氧基羰基氨基-6-氧代-2-苯基-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(3-吡啶基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-甲基-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-(2-吡啶基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸醛。
5.一種抑制白細(xì)胞介素-1β蛋白酶活性的方法，該法是用于需要對(duì)肺部、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和結(jié)締組織的炎癥和基于免疫的疾病接受這種治療的哺乳動(dòng)物的，該方法包括給該哺乳動(dòng)物以有效抑制量的藥用組合物，該藥用組合物包括式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 式中Y是 而當(dāng)R6是OH，則Y還可以是 R5是H或氘；R6是OR8或NHOH此處R8獨(dú)立地是H、烷基或芳烷基R3和R4獨(dú)立地是H、烷基或芳烷基R2＝H、烷基、-(CH2)0-4-環(huán)烷基、 芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、-(CH2)2-4-R10；此處n＝1-3；此處R10＝烷氧基、CH2F、CHF2、CF3、CF2CF3、OH、COOR11、CONR9R11或NR9R11；此處R9獨(dú)立地是H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳烷基、-CH2CH2O-烷基和C(O)-R12；此處R11獨(dú)立地是H、烷基、芳基、芳烷基、雜芳基和雜芳烷基；而當(dāng)R9和R11合在一起，則它們可成為五、六或七元環(huán)，其類型是 此處n＝1-3和m＝0-1；而R12是烷基、芳基、芳烷基、雜芳基和雜芳烷基；R7＝H，CH2F，CHR13O(CO)0-1-芳基，CHR13OP(O)(R14)R(15)， 或 式中R13＝H或烷基R14＝H、烷基或芳基R15＝H、烷基或芳基R16＝H、烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基R17＝H、烷基、CF3、CF2CF3、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、COOR11或CONR9R11R18＝H、烷基、CF3、CF2CF3、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基R1定義為R19-R2，R19-R20，R19-R21，R19-NR9R11此處R19＝(CR3R4)-0-4； 和 此處X＝O，S，NR9 和 此處n-1-3；R22O-此處R22是烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、R19-環(huán)烷基、R19-R21、R23-R10、R23-R20；式中R23＝(CR3R4)-2-4；R9R11N-和R24R11N-此處R24＝R19-環(huán)烷基、R19-R21、R23-R10、R23-R20、CR3R4COOR11和CR3CR4CONR9R11。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述的化合物選自N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮、N-[2-(5-硫代甲基苯甲酰氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸二苯基膦氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(3-苯基)香豆酰氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(4-氟代苯基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-異丙氧基羰基氨基-6-氧代-2-苯基-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(3-吡啶基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-甲基-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙?；鵠-L-天冬氨酸5-(1-(2-吡啶基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-L-天冬氨酸5-(1-(4-氯苯基)-3-三氟甲基)吡唑氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-L-天冬氨酸2，6-二氯苯甲酰氧基甲基酮、N-[2-(5-芐氧基羰基氨基-6-氧代-2-(2-噻吩基)-1，6-二氫-1-嘧啶基)乙酰基]-L-天冬氨酸醛。
全文摘要
公開(kāi)了用于抑制白細(xì)胞介素－1β(IL－β)蛋白酶活性的化合物、組合物和方法。敘述了具有本文所示的式(I)化合物N－(嘧啶基)－天冬氨酸的α－取代的甲基酮類和天冬氨酸的醛類。這些化合物是1β－轉(zhuǎn)化酶的抑制劑，它們用于要求這種抑制作用的時(shí)候。例如，它們可在藥理、診斷和有關(guān)的研究中用作研究工具；也可用于治療哺乳動(dòng)物與IL－β蛋白酶活性有關(guān)的疾病。
文檔編號(hào)C07D409/04GK1504462SQ03145218
公開(kāi)日2004年6月16日 申請(qǐng)日期1995年3月29日 優(yōu)先權(quán)日1994年3月31日
發(fā)明者R·E·多爾, C·P·普勞, P·V·查圖維杜拉, S·J·施米特, R E 多爾, 施米特, 普勞, 查圖維杜拉 申請(qǐng)人:弗特克斯藥品有限公司