專利名稱：白藜蘆醇低聚茋類化合物及其制法和其藥物組合物與用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及白藜蘆醇低聚茋類化合物，它們的制備方法，含有它們的藥物組合物，和在制備治療類風濕性關節(jié)炎、哮喘、過敏性炎癥的藥物中的應用。
背景技術：
低聚茋類(oligomer stilbene)為一類頗為新穎而結(jié)構(gòu)復雜的化合物，它們的結(jié)構(gòu)特征多以白藜蘆醇單體或其類似物(如1、7)以不同的聚合方式共存在同一種植物中。該類化合物極性大、類型多、分離困難，結(jié)構(gòu)鑒定也有一定難度。90年代至今國內(nèi)外對這類化合物研究達到高潮，據(jù)不完全統(tǒng)計，目前這類化合物已分得近200多種，通常以2-4個單體聚合，最高的聚合度已達到8度。這類聚合物的藥理活性往往強于它們的單體化合物，且多具有較強的抗細菌、抗真菌、抗氧化、抗炎等活性，對蛋白激酶C、環(huán)氧酶生成有較強的抑制作用。同時對抗腫瘤及抗艾滋病等也有較強的活性。經(jīng)研究某些化合物在抗炎方面的作用強于已知藥3個數(shù)量級。而對以上活性成分的體內(nèi)作用研究較少，并且不夠深入。主要原因這類化合物不易大量分離得到，所得微量成分只能供體外試驗。若用人工全合成的方法制備，目前有一定困難。
TNFα抑制劑為目前抗炎免疫藥物研究領域中一個較新的研究方向，是具有抗腫瘤活性的一類化合物，并能調(diào)節(jié)炎癥反應。通過調(diào)節(jié)血液內(nèi)皮細胞以提高各種粘附分子的含量，進而調(diào)節(jié)白細胞的粘附及滲出，在免疫及炎癥反應中發(fā)揮重要的作用。這類化合物與哮喘、皮炎、腸炎、類風濕性關節(jié)炎、艾滋病、多發(fā)性硬化(如心腦血管動脈硬化)等疾病有關，并在病理發(fā)展過程中起著重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供一類新的白藜蘆醇低聚茋類化合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供制備新的白藜蘆醇低聚茋類化合物的方法，包括從植物中提取和人工合成。
本發(fā)明一方面涉及一種藥物組合物，其包括藥物有效劑量的，作為活性成份的新的白藜蘆醇低聚茋類化合物及制藥領域中常用的載體。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種新的白藜蘆醇低聚茋類化合物在制備治療類風濕性關節(jié)炎、抗哮喘、抗過敏的藥物中的應用。
本發(fā)明還涉及大子買麻藤(Gnetum Montanum f.megalocarpum)有效部位群提取物及其制備方法(1)大子買麻藤(Gnetum Montanum f.megalocarpum)粉碎，用乙醇多次回流提取，提取液減壓濃縮，得粗浸膏；(2)粗提物分別用石油醚回流脫脂多次，脫脂后的浸膏用丙酮回流提取多次。濃縮丙酮溶解部分，聚酰胺拌樣，裝柱，用30％-80％乙醇充分洗脫。收集30％-80％乙醇部分濃縮，為大子買麻藤有效部分，其中含有大子買麻藤素B。
本發(fā)明的一種白藜蘆醇低聚茋類化合物，如通式(I)所示，是白藜蘆醇類似物單體聚合而成的2-4度的聚合體及其全甲醚、脫氫化合物。
白藜蘆醇類似物單體 表-1茋類化合物單體取代基No. 名稱R1R2 R3a 白藜蘆醇(resveratol) H H H異丹葉大黃素b OCH3H H(isorhapontigenin)
10-異戊烯基白藜蘆醇cH 異戊烯基 H(10-isopentenyl-resveratrol)12，-異戊烯基白藜蘆醇dHH異戊烯基(12-isopentenyl-resveratrol)優(yōu)選的白藜蘆醇低聚茋類化合物包括大子買麻藤素B(gnetumontanin B，化合物1) 順式葡萄藤戊素(cis-ε-viniferin，化合物2) 雙氧化白藜蘆醇甲素(化合物7) 6b，14b-去氫雙白藜蘆醇(化合物8) 雙異丹葉大黃丙素(化合物9)
三聚異丹葉大黃甲素(化合物10) 四聚異丹葉大黃甲素(化合物11) 雙異戊烯基白藜蘆醇甲素(化合物12) 雙異戊烯基白藜蘆醇乙素(化合物13)
異-二聚茋甲素(化合物14) 異-三聚茋甲素(化合物15) 7，8-脫氫-全甲醚射干乙素(7，8位為雙鍵，化合物16)
全甲醚射干乙素(化合物17) 全甲醚葡萄滕戊素(化合物18) 根據(jù)本發(fā)明還涉及化合物1與2的衍生物，這種衍生物系指分別從天然界中獲得的白藜蘆醇低聚茋類似物，如雙高白藜蘆醇甲素(7)等從天然得到的低聚茋類化合物與以下列各種單體[白藜蘆醇(a)、異丹葉大黃素(b)、10-異戊烯基-白藜蘆醇(c)、12-異戊烯基-白藜蘆醇(d)]為原料，通過氧化劑、紫外光照等用人工的方法，合成成各種不同聚合方式的白藜蘆醇低聚茋類衍生物。例如化合物8-13。
本發(fā)明的化合物可以從植物中提取或經(jīng)人工半合成獲得。
本發(fā)明還涉及大子買麻藤乙素(gnetumontanin B，1)和順式葡萄藤戊素(cis-ε-viniferin，2)的制備方法，包括如下步驟(1)大子買麻藤(Gnetum montanum f.megalocarpum)的植株，包括根、莖、葉，優(yōu)選是大子買麻藤的莖，磨粉后以極性有機溶劑提取，優(yōu)選是低級醇或醇水混合物，低級醇包括甲醇，乙醇，丙醇，更優(yōu)選是95％酒精水溶液，提取的溫度是從室溫到提取溶劑回流的溫度，優(yōu)選是在溶劑回流的狀態(tài)下，提取的次數(shù)是1-6次，優(yōu)選是3-5次，更優(yōu)選是4次。
(2)提取后減壓蒸餾除溶劑，所得粗浸膏再進行索氏提取，分別以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇洗脫。
(3)乙酸乙酯部分進一步經(jīng)硅膠柱層析，優(yōu)選使用140-180目的硅膠，再用氯仿-甲醇梯度洗脫(30∶1，20∶1，15∶1，12∶1，10∶1，9∶1，8∶1，6∶1，5∶1，4∶1)，分成A-H共八個部分。
(4)H部分44g經(jīng)硅膠柱層析，優(yōu)選使用140-180目的硅膠，用環(huán)己烷-丙酮梯度洗脫(1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶2.5，1∶3，1∶4)分成六部分(H1-H6)。
(5)H4部分經(jīng)中壓柱層析，甲醇-水(3.5∶6.5)洗脫得到大子買麻藤乙素。
(6)H2部分經(jīng)中壓柱層析，甲醇-水(4∶6)洗脫得到順式葡萄藤戊素。
本發(fā)明的化合物可以用白藜蘆醇類似物單體聚合制備而成。聚合是使用的氧化劑選自FeCl3、K3Fe(CN)6、H2O2、H2O2/辣椒酶；或使用紫外光照。
本發(fā)明的全甲醚化合物可以用白藜蘆醇低聚茋類化合物在無水碳酸鉀存在的條件下和硫酸二甲酯反應制得。
本發(fā)明涉及順式葡萄藤戊素和6b，14b-去氫雙白藜蘆醇的制備方法，包括如下步驟(1)取白藜蘆醇溶于甲醇，在攪拌情況下逐步滴入FeCl3水溶液，室溫攪拌48小時后蒸去甲醇并以適量水稀釋，乙酸乙脂提取，提取液合并，減壓濃縮，該濃縮物經(jīng)硅膠柱層析，以環(huán)己烷/丙酮(3∶1-2∶1)混合溶劑洗脫得葡萄藤戊素(ε-viniferin)；(2)上述葡萄藤戊素(ε-viniferin)置入石英園底瓶中，加入無水乙醇，紫外光(254nm，200w)照射2.5小時，反應停止后蒸去乙醇，殘留物以Rp-18反相低壓柱層析；(3)以甲醇/水(4∶6-6∶5)洗脫，得順式葡萄藤戊素；(4)以甲醇/水(4∶6-6∶5)洗脫，得6b，14b-去氫雙白藜蘆醇。
本發(fā)明涉及雙異丹葉大黃丙素、三聚異丹葉大黃甲素和四聚異丹葉大黃甲素的制備方法，包括如下步驟(1)異丹葉大黃素和FeCl3·6H2O反應，反應水液以乙酸乙脂提取至無色，合并提取液，干燥，減壓濃縮至干，得總反應物；(2)上述反應物，溶于少量乙醇，并與硅膠H(10-40um)拌和待干后，填裝于硅膠柱頂進行柱層析，以氯仿-甲醇-正己烷-水(7.5∶1.1∶1.0∶0.08)洗脫、收集、合并為I-IX部分；(3)VIII部分以反相Rp-18低壓柱層析，以甲醇-水(65∶35)流動相洗脫，收集1-16分，第13-14分合并，濃縮后得雙異丹葉大黃丙素；(4)VI部分，以反相Rp-18低壓柱層析，以甲醇-水(155∶145)流動相洗脫，收集洗脫液濃縮后得三聚異丹葉大黃甲素；(5)IX部分，先以硅膠柱層析，以氯仿-乙酸乙脂-丙酮-醋酸(600∶150∶300∶75∶2.5)混合溶劑洗脫，收集22份，第4份濃縮后得四聚異丹葉大黃甲素。
本發(fā)明涉及異戊烯基白藜蘆醇甲素的制備方法，是12-異戊烯基白藜蘆醇和FeCl3·6H2O反應，再經(jīng)分離純化制得。
本發(fā)明涉及異戊烯基白藜蘆醇乙素的制備方法，是10-異戊烯基白藜蘆醇和FeCl3·6H2O反應，再經(jīng)分離純化制得。
本發(fā)明涉及異-二聚茋甲素及異-三聚茋甲素的制備方法，白藜蘆醇和異丹葉大黃素和FeCl3·6H2O反應再分離純化制得。
本發(fā)明涉及7，8-脫氫-全甲醚射干乙素的制備方法，全甲醚射干乙素用2，5-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)脫氫制得。
根據(jù)本發(fā)明還涉及含有作為活性成份的本發(fā)明的提取物或化合物和常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有0.1-95重量％的本發(fā)明提取物或化合物。
本發(fā)明化合物的藥物組合物可根據(jù)本領域公知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將本發(fā)明的提取物或化合物與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?br> 本發(fā)明提取物或化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等，優(yōu)選口服。
本發(fā)明提取物或化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和皮內(nèi)注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。
本發(fā)明提取物或化合物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。其它載體如聚丙烯酸樹脂類、脂質(zhì)體，水溶性載體如PEG4000和PEG6000、PVP等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
例如為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。
例如為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分本發(fā)明提取物或化合物與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應用。
例如，將本發(fā)明提取物或化合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。這些輔料是本領域常用的。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
為達到用藥目的，增強治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。
本發(fā)明提取物或化合物、藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預防或治療疾病的性質(zhì)和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重、性格及個體反應，給藥途徑、給藥次數(shù)、治療目的，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明中藥學成分的使用劑量是本領域技術人員公知的?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明化合物組合物中最后的制劑中所含有的實際藥物數(shù)量，加以適當?shù)恼{(diào)整，以達到其治療有效量的要求，完成本發(fā)明的預防或治療目的。本發(fā)明化合物的每天的合適劑量范圍本發(fā)明的提取物或化合物的用量為0.001-150mg/Kg體重，優(yōu)選為0.01-100mg/Kg體重，更優(yōu)選為0.01-60mg/Kg體重，最優(yōu)選為0.1-10mg/Kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥這受限于給藥醫(yī)生的臨床經(jīng)驗以及包括運用其它治療手段的給藥方案。
本發(fā)明對植物中含量少活性強的微量成分用人工仿生半合成的方法，制備該類化合物，從而獲得足量的化合物供藥用。
白藜蘆醇類單體在植物中分布較廣，含量較高。本發(fā)明可以充分利用天然資源，首先從天然界中分離得到白藜蘆醇類單體，然后以人工半合成的方法獲得白藜蘆醇低聚茋類化合物。通過實踐，這種從富含二苯乙烯植物中提取單體，然后進一步仿生聚合生成活性更強、藥理作用更廣的低聚茋及其衍生物的設想是可行的并獲得成功，也為本專利的主要發(fā)明成果，而國外從事這類系統(tǒng)的合成或半合成研究工作很少。
腫瘤壞死因子α(TNFα)主要由單核巨噬細胞分泌，在炎癥中起重要作用，為誘發(fā)皮膚炎癥反應、引起過敏變態(tài)反應等慢性炎性疾病，為類風濕性關節(jié)炎與TNFα關系密切。本發(fā)明的化合物對小鼠腹腔巨噬細胞腫瘤壞死因子生成抑制作用。
具體實施例方式
實施例1.大子買麻藤有效部位群提取物的制備大子買麻藤(Gnetum Montanum f.megalocarpum)莖10kg粉碎后分別用5倍量、4倍量、4倍量，95％乙醇回流2小時，提取3次，提取液減壓濃縮，得粗浸膏874克。粗提物分別用3倍量石油醚回流脫脂2次，每次1小時，脫脂后的浸膏用3倍量丙酮回流提取4次，每次各1小時。濃縮丙酮溶部分，按1∶2的倍數(shù)，30～60目聚酰胺拌樣，1∶5裝柱，用30％-80％乙醇充分洗脫。收集30％-80％乙醇部分濃縮，為大子買麻藤有效部分提取物44.2g。
實施例2.大子買麻藤乙素(gnetumontanin B，1)的制備大子買麻藤(Gnetum montanum f.megalocarpum)莖(10Kg)，磨粉后以95％酒精回流提取四次，減壓蒸餾除溶劑，所得粗浸膏(870g)索氏提取，分別以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇洗脫。乙酸乙酯部分(200g)進一步經(jīng)硅膠柱層析(140-180目)，氯仿-甲醇梯度洗脫(30∶1，20∶1，15∶1，12∶1，10∶1，9∶1，8∶1，6∶1，5∶1，4∶1)，分成A-H共八個部分。H部分(44g)經(jīng)硅膠柱層析(140-180目)，環(huán)己烷-丙酮梯度洗脫(1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶2.5，1∶3，1∶4)分成六部分(H1-H6)。H4部分(0.2g)經(jīng)中壓柱層析，甲醇-水(3.5∶6.5)洗脫得到化合物1(31mg)。
化合物1為淺黃色無定型粉末，[α]22D-16.0°(c0.10，MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)＝206(4.90)，285(4.21)，310(4.19)nm；IR(KBr)νmax＝3329，1604，1514，1456，1338，1263，1159，1005，978，835cm-1；FABMS m/z＝712[M]+，HR-ESIMSm/z＝713.2005[M+H]+(calcd.for C42H33O11，713.2017)；1H(300MHz)和13C(75MHz)NMR數(shù)據(jù)，見表-2。
表-2化合物1的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)aNo.1H13C No.1H13C No.1H13C1a120.51b 115.21c 129.92a155.62b 160.12c 7.48d(8.7) 128.73a 6.48d(2.1)103.33b 116.43c 6.89d(8.7) 116.34a158.64b 155.64c 158.16.36dd5a (8.1，2.1)107.35b 6.42d(8.1) 109.25c 6.89d(8.7) 116.36a 6.99d(8.1)127.56b 7.13d(8.1) 128.66c 7.48d(8.7) 128.77a 5.80d(2.7)89.8 7b 5.74d(5.4) 89.8 7c 7.13d(6.5) 129.08a 4.44d(2.7)54.6 8b 4.78d(5.4) 54.2 8c 7.00d(6.5) 126.89a146.99b 146.29c 141.010a 6.34d(2.4)107.010b 6.30d(2.1) 106.910c 6.63d(1.2) 107.911a 159.211b 159.311c 155.312a 6.26t(2.4)101.612b 6.25t(2.1) 101.812c 115.513a 159.213b 159.313c 163.214a 6.34d(2.4)107.014b 6.30d(2.1) 106.914c 6.75d(1.2) 99.2a所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為300MHz和75MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例3.雙氧化白藜蘆醇甲素(bis-oxyresveratrol，7)的制備大子買麻藤(Gnetum montanum f.megalocarpum)莖(10Kg)，磨粉后以95％酒精回流提取四次，減壓蒸餾除溶劑，所得粗浸膏(870g)索氏提取，分別以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇洗脫。乙酸乙酯部分(200g)進一步經(jīng)硅膠柱層析(140-180目)，氯仿-甲醇梯度洗脫(30∶1，20∶1，15∶1，12∶1，10∶1，9∶1，8∶1，6∶1，5∶1，4∶1)，分成A-H共八個部分。H部分(44g)經(jīng)硅膠柱層析(140-180目)，環(huán)己烷-丙酮梯度洗脫(1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶2.5，1∶3，1∶4)分成六部分(H1-H6)。H2部分(0.23g)經(jīng)中壓柱層析，甲醇-水(4∶6)洗脫得到化合物7(45mg)。
化合物7為淺黃色無定型粉末；[α]22D+17.0°(c0.10，MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)＝206(4.77)，283(413)，324(4.03)nm；IR(KBr)νmax＝3313，1614，1516，1456，1306，1157，1099，1066，999，974，835cm-1；FABMS m/z 486[M]+；HR-FABMS m/z 487.1394[M+H]+(calcd.for C28H23O8，487.1393)；1H(300MHz)和13C(75MHz)NMR數(shù)據(jù)，參見表-3。
表-3化合物7的1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)
No.1H13CNo.1H13C1a 120.9 1b117.52a 156.2 2b157.13a 6.50brs 103.6 3b 6.50brs 103.74a 159.0 4b159.35a 6.33dd(8.4，2.1)107.4 5b 6.44dd(8.4，2.4) 108.66a 7.07d(8.4) 128.0 6b 7.47d(8.4)128.57a 5.78d(3.6) 89.2 7b 7.43d(16.5) 124.58a 4.46d(3.6) 54.5 8b 7.03d(16.5) 126.69a 147.1 9b142.010a6.30d(2.4) 107.1 10b 6.61brs 107.711a159.4 11b 155.712a6.24t(2.4) 101.8 12b 115.513a159.4 13b 163.614a6.30d(2.4) 107.1 14b 6.72brs 99.3所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為300MHz和75MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例4.順式葡萄藤戊素(cis-ε-viniferin，2)的制備化合物2由人工仿生半合成而得。以白藜蘆醇單體為起始原料，在氧化劑FeCl3作用下得到中間體葡萄藤戊素(ε-viniferin)，然后用紫外燈(200W)照射后，經(jīng)Rp-18反相柱層析純化而得，收率25％。
葡萄藤戊素(ε-viniferin)的合成取白藜蘆醇(從虎杖中制得，純度95％以上)1.03g(0.0045mol)溶于10ml甲醇，在攪拌情況下逐步滴入FeCl3(0.0046mol)水溶液10ml，室溫攪拌48小時后蒸去甲醇并以適量水稀釋，乙酸乙脂提取，提取液合并，減壓濃縮，該濃縮物經(jīng)硅膠(硅膠H，140-180目)柱層析，以環(huán)己烷/丙酮(3∶1-2∶1)混合溶劑洗脫得葡萄藤戊素(ε-viniferin)(310mg)，收率30.2％。
化合物2的合成取上述葡萄藤戊素(ε-viniferin)100mg(0.044mol)，置入50ml石英園底瓶中，加入無水乙醇20ml，紫外光(254nm，200w)照射2.5小時，反應停止后蒸去乙醇，殘留物以Rp-18反相低壓柱層析，以甲醇/水(4∶6-6∶5)洗脫，得化合物2(25mg)，收率25％。
化合物2為棕黑色無定型粉末；FABMS m/z454(M+)，C28H22O6；UVλmaxEtOH(nm)276(3.22)，225(sh)(3.76)；IR(KBr)ν(cm-1)3346，2924，2854，1697，1608，1514，1444，1338，1238，1120，999，833。1HNMR，13C NMR見表-4。
表-4化合物2的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)
No.1H13C No.1H13C No.1H13C1a 136.411a 158.97b 6.24d(12.3)130.52a 7.05d(8.7) 127.612a 6.20t(2.1)101.18b 6.02d(12.3)125.43a 6.80d(8.7) 115.113a 158.99b132.94a 157.514a 6.03d(2.) 106.110b 119.35a 6.80d(8.7) 115.11b 128.711b 161.86a 7.05d(8.7) 127.62b7.01d(8.7)130.312b6.28brs95.97a 5.27d(5.7) 93.5 3b6.66d(8.7)115.413b 158.78a 3.98d(5.7) 56.3 4b 157.014b6.28brs107.79a 146.45b6.66d(8.7)115.410a6.03d(2.1) 106.16b7.01d(8.7)130.3所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為300MHz和75MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例5.6b，14b-去氫雙白藜蘆醇(6b，14b-dehydro-bis-resveratrol，8)的制備取實施3中的中間體葡萄藤戊素(ε-viniferin)100mg(0.044mol)，置入50ml石英園底瓶中，加入無水乙醇20ml，紫外光(254nm，200W照射3.5小時，反應停止后蒸去乙醇，殘留物以Rp-18反相低壓柱層析以甲醇/水(4∶6-6∶5)洗脫，得化合物8(25mg)，收率25％。
化合物8為棕色無定形粉末，F(xiàn)ABMS m/z452(M+)，C28H20O6；UVλmaxEtOH(nm)265(4.21)，347(3.54)，360(3.50)，381(3.58)；IR(KBr)ν(cm-1)3350，2932，2860，1697，1608，1516，1445，1340，1234，1125。1HNMR，13CNMR見表-5。
表-5化合物8的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)No.1H13C No.1H13C1a 133.6s1b 132.3s2a 6.88d(7.8)127.7d2b 133.7s3a 6.48d(7.8)115.8d3b 8.85d(3.0) 112.8d4a 159.3s4b 159.1s5a 6.48d(7.8)115.8d5b 6.70dd(8.7，3.0) 115.2d6a 6.88d(7.8)127.7d6b 7.27d(8.7) 130.0d7a 5.12d(6.0)94.2d 7b 7.12d(8.7) 128.9d8a 4.34d(6.0)57.4d 8b 6.72d(8.7) 120.4d9a 147.8s9b 125.6s10a5.79d(2.1)106.5d10b 114.4s11a 159.5s11b 156.9s12a5.86t(2.1)101.8d12b6.46s97.1d
13a 159.5s 13b158.0s14a 5.79d(2.1)106.5d 14b114.6sOH9.33(brs，OH)， 8.15(brs，OH)， 8.06(brs，OH)，7.78(brs，2×OH)所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為500MHz和125MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例6.雙異丹葉大黃丙素(bis-isorhapontigenin C，9)的制備取異丹葉大黃素(從大葉買麻藤中制得，純度95％以上)5.0g(0.015mol)溶于丙酮20ml，在冰浴中逐滴加入1.1％FeCl3·6H2O(4g，0.015mol)水液30ml，在攪拌情況下通入氮氣，室溫反應36小時。低溫蒸去丙酮，水液以乙酸乙脂提取至無色，合并提取液，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮至干，得總反應物5.0g。
取上述反應物5.0g，溶于少量乙醇，并與硅膠H(10-40um)拌和待干后，填裝于硅膠柱頂進行柱層析，以氯仿-甲醇-正己烷-水(7.5∶1.1∶1.0∶0.08)洗脫、收集、合并為I-IX部分。
取部分VIII以反相Rp-18低壓柱層析，以甲醇-水(65∶35)流動相洗脫，收集1-16分，第13-14分合并，濃縮后得化合物9(27mg)。
化合物9為淺黃色無定型粉末，UVλmaxEtOH(nm)(logε)285(4.10)，335(sh)(4.14)；IR(KBr)νmaxcm-13418，1604，1515，1451，1273，1158，960，870；EI-MS(m/z)514(M+)；元素分析C30H26O8，計算值C60.67％，H5.26％)，實測值C67.28％，H4.62％；1H NMR和13C NMR見表-6。
表-6化合物9的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)(δin ppm and Jin Hz)*No.1H13C No.1H13C1a 134.1 1b 130.32a 6.55d(1.6) 108.6 2b 6.79-6.81m 115.83a 147.5 3b 147.44a 148.4 4b 148.55a 6.56d(8.2) 115.5 5b 6.79-6.81m 115.86a 6.49dd(1.6，8.2) 121.5 6b 6.79-6.81m 119.27a 4.55d(5.6) 58.07b 6.57，d，(16.6) 134.08a 5.40d(5.6) 94.28b 5.54，d，(16.6) 122.09a 146.9 9b 133.110a 6.17d(2.1) 106.8 10b 119.811a 159.7 11b 162.512a 6.04，t(2.1) 101.7 12b 6.54，brs91.213a 159.7 13b 159.714a 6.17，d(2.1) 106.8 14b 6.97，brs110.3OCH33.80s56.0OCH33.69s56.2所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為500MHz和125MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例7.三聚異丹葉大黃甲素，(tri-isorhapontigenin A，10)的制備取上述實施5中部分VI，以反相Rp-18低壓柱層析，以甲醇-水(155∶145)流動相洗脫，收集洗脫液濃縮后得化合物10(17mg)。
化合物10為淺黃色無定型粉末，UVλmaxEtOH(nm)285，330；IR(KBr)νmaxcm-13419，1603，1516，1275，1123，960，870；EI-MS(m/z)770(M+)，C45H38O12；1H NMR和13C NMR見表-7。
表-7化合物10的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)(δin ppm and Jin Hz)No.1H13C No.1H13C No.1H13C1a 131.5 1b 141.9 1c 127.92a 6.71d(1.5) 110.1 2b 6.43d(1.8) 110.1 2c 6.92d(1.8) 110.43a 147.6 3b 147.6 3c 147.64a 147.4 4b 146.7 4c 146.75a 6.45d(8.3) 115.2 5b 6.59d(8.3) 115.4 5c 6.59d(8.3) 115.76a 6.55-6.58m 117.8 6b 6.64dd(1.8，8.3) 117.8 6c 6.55-6.58m 119.37a 5.24d(6.0) 93.37b 5.13brs 90.87c 6.83d16.3130.48a 4.52d(6.0) 55.08b 4.24brs 55.28c 5.56d16.3121.19a 145.6 9b 131.7 9c 134.210a 6.00brs105.3 10b 117.1 10c 120.211a158.9 11b 160.3 11c 160.512a 5.91t(2.1) 101.2 12b 6.15d(2.1) 95.312c 6.53brs 96.513a158.9 13b 159.0 13c 147.414a 6.00brs105.3 14b 5.93d2.1 106.5 14c 6.27brs 103.5OCH33.56s 55.5OCH33.59s55.5OCH33.54s55.3所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為500MHz和125MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例8.四聚異丹葉大黃甲素(tetra-isorhapontigenin A，11)的制備取上述實施5中部分IX，先以硅膠柱層析，以氯仿-乙酸乙脂-丙酮-醋酸(600∶150∶300∶75∶2.5)混合溶劑洗脫，收集22份，第4份濃縮后得化合物11(18mg)。
化合物11為棕色無定型粉末，UVλmaxEtOH(nm)(logε)280(4.47)，310(sh)(4.17)，IRνmax(KBr)cm-13398.4，1602.8，1514.0，1463.9，1272.9，1153.4，1029.9，840.9；FTMS(M++H+K)m/z1068；1HNMR和13C NMR見表-8.
表-8化合物11的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)(δin ppm and Jin Hz)No.1H13C No.1H13C1a137.9 1c 130.72a 6.57d(2.0)111.9 2c6.45d(2.0) 109.73a145.4 3c 146.84a147.8 4c 145.25a 5.70d(8.0)115.0 5c6.70d(8.0) 115.56a 6.34dd(8.0，2.0) 119.8 6c6.49dd(8.0，2.0) 120.07a 4.22brs56.7 7c6.08d(16.5)133.7
8a 3.02brs 59.98c 6.04d(16.5) 126.69a 9c 133.710a6.03m105.4 10c 119.611a 159 11c 160.212a6.16t(2.0) 100.9 12c6.37 97.513a 159 13c14a6.03m105.4 14c 122.91b 135.8 1d 133.72b 6.68brs 114.7 2d 6.94d(2.0) 110.33h 3d 144.64b 4d 147.75b 6.52d(8.0) 114.5 5d 6.80d(8.0) 115.56b 6.73d(8.0) 123.2 6d 6.75d(8.0) 119.77b 4.18d(12.5) 53.67d 5.22d(8.0) 94.28b 4.63d(12.5) 54.88d 4.40d(8.0) 58.49b 9d 146.410b 123.6 10d6.03m106.911b 155.2 11d 15912b6.39brs 102.6 12d6.09t(2.0) 101.313b 157.1 13d 15914b5.89brs 106.0 14d6.03m106.93a-OCH33.56s55.83c-OCH33.73s55.93b-OCH33.48s55.53d-OCH33.77s56.2所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為500MHz和125MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例9.異戊烯基白藜蘆醇甲素(bis-isopreprol-resveratrol A，12)的制備中間體12-異戊烯基白藜蘆醇(6)的合成白藜蘆醇(從虎杖中得到，純度＞95％)15.3g(0.067mol)，溶于300ml無水乙醇，冰浴攪拌下，加入KOH3.76g(0.067mol，溶于100ml無水乙醇)溶液，繼續(xù)攪拌2小時后，緩慢滴加溴代異戊烯9.65g(0.065mol)(約30分鐘加完)。室溫繼續(xù)攪拌7小時，保持反應液PH7～8。反應完后，將反應液倒入冰水中，鹽酸調(diào)PH值約為3。乙酸乙酯充分萃取，合并，減壓濃縮，得16g反應物。該反應物經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析，環(huán)己烷-乙酸乙酯(8∶1，7∶1，6∶1，5∶1梯度洗脫)，再經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析環(huán)己烷-丙酮(9∶1)洗脫，得化合物6(81mg)，收率0.41％。
化合物6為淺黃色粉末，EI-MS m/z 296，符合分子式C19H20O3，1H-NMR數(shù)據(jù)見表-9。
表-9化合物6的1H-NMR數(shù)據(jù)No.1H No.1H1 1127.37d(8.4) 1236.81d(8.4) 134 14 6.5856.81d(8.4) 1′3.34d(7.2)67.37d(8.4) 2′5.29t(7.2)76.81d(16.8)3′86.90d(16.8)4′1.75s*
9 5′ 1.63s*106.58s*數(shù)據(jù)可以互換所列1H-NMR數(shù)據(jù)為300MHz氘代丙酮為溶劑測定。
化合物12的合成取化合物6，74mg(0.25mol)溶于5ml丙酮，冰浴、攪拌，通氮氣下緩慢滴加FeCl3·6H2O 67.6mg(0.25mol)的5ml水溶液。冰浴下攪拌反應1小時，再繼續(xù)于室溫下攪拌。5天后，停止反應，減壓蒸除丙酮，所余水溶液用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯層，無水硫酸鈉干燥過夜。過濾，濃縮，得乙酸乙酯萃取物90mg。經(jīng)硅膠柱層析(200～300目)，石油醚-丙酮(4.5∶1，4∶1，3∶1，2.5∶1，2∶1，1.5∶1，1∶1)梯度洗脫。分得化合物12(2.5mg)，收率3.4％(從6到12的收率)。
化合物12為黃綠色粉末，F(xiàn)AB-MS m/z 590，符合分子式C38H38O6，1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)見表-10。
表-10化合物12的1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)No.1H13C No.1H13C1a 135.4 1b130.22a 7.26d(8.7) 128.0 2b 7.21d(8.1) 127.23a 6.85d(8.7) 114.5 3b 6.78d(8.1) 114.34a 158.2 4b158.55a 6.85d(8.7) 114.5 5b 6.78d(8.1) 114.36a 7.26d(8.7) 128.0 6b 7.21d(8.1) 127.27a 5.52d(5.7) 93.07b 6.76d(16.5)129.68a 4.61d(5.7) 56.58b 6.98d(16.5)133.29a 145.5 9b130.110a6.59s106.3 10b 119.811a 159.3 11b 161.512a 115.6 12b 117.313a 159.3 13b 159.114a6.59s106.3 14b6.73s 98051′3.34d(6.9) 24.51″3.36d(6.6) 25.12′5.20t(6.9) 124.6 2″5.29d(6.6) 124.23′ 128.2 3″ 128.04′1.78s17.44″1.60s 17.65′1.78s25.25″1.60s 25.0所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為300MHz和75MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例10.異戊烯基白藜蘆醇乙素(bis-isopreprol-resveratrol B，13)的制備中間體10-雙異戊烯基白藜蘆醇(5)的合成
白藜蘆醇15.3g(0.067mol)，溶于300ml無水乙醇，冰浴攪拌下，加入3.76g KOH(0.067mol)(溶于100ml無水乙醇)溶液，繼續(xù)攪拌2小時后，緩慢滴加9.65g(0.065mol)溴代異戊烯(約30分鐘加完)。室溫繼續(xù)攪拌7小時，保持反應液PH7～8。反應完后，將反應液倒入冰水中，鹽酸調(diào)PH值約為3。乙酸乙酯充分萃取，合并，減壓濃縮，得16g反應物。該反應物經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析，環(huán)己烷-乙酸乙酯(8∶1，7∶1，6∶1，5∶1梯度洗脫)，再經(jīng)硅膠(200～300目)柱層析環(huán)己烷-乙酸乙酯(3∶1)洗脫，得化合物5(1.8g)，收率9.06％。
化合物5為無色粉末，F(xiàn)AB-MS m/z 297[M+H]+，符合分子式C19H20O3，1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)見表-11。
表-11化合物5的1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)No.1H13C No.1H13C1129.711 156.12 7.40d(8.7)128.012 6.35d(2.1)101.93 6.84d(8.7)115.813 156.24157.414 6.64d(2.1)103.65 6.84d(8.7)115.81′3.42d(6.9)24.36 7.40d(8.7)128.02′5.13t(6.9)124.77 6.88d(16.2) 129.53′ 128.08 7.20d(16.2) 124.24′1.79s*17.49138.65′1.63s*25.210 117.7*數(shù)據(jù)可以互換所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為300MHz和75MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
化合物13的合成取化合物13，1.006g(0.0034mol)溶于85ml丙酮，冰浴、攪拌，通氮氣下緩慢滴加FeCl3·6H2O，919mg(0.0034mol)的45ml水溶液。冰浴下攪拌反應1小時，再繼續(xù)于室溫下攪拌。5天后，停止反應，減壓蒸除丙酮，所余水溶液用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯層，無水硫酸鈉干燥過夜。過濾，濃縮，得乙酸乙酯萃取物1.3g。經(jīng)硅膠柱層析(200～300目)，石油醚-丙酮(4.5∶1，4∶1，3∶1，2.5∶1，2∶1，1.5∶1，1∶1)梯度洗脫。分得化合物13(132mg)，收率0.13％。
化合物13為淺黃色粉末，F(xiàn)AB-MS m/z 590，符合分子式C38H38O6，1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)見表-12。
表-12化合物13的1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)No.1H13C No.1H13C1a 135.2 1b 129.92a 7.24d(8.4) 128.1 2b 7.21d(8.7) 127.13a 6.82d(8.4) 115.2 3b 6.79d(8.7) 114.84a 158.3 4b 159.05a 6.82d(8.4) 115.2 5b 6.79d(8.7) 114.86a 7.24d(8.4) 128.1 6b 7.21d(8.7) 127.17a 5.54d(5.7) 93.27b 6.79d(16.2) 129.88a 4.57d(5.7) 56.88b 7.01d(16.2) 132.19a 144.9 9b 138.610a 118.1 10b 119.811a 156.1 11b 160.712a6.30d(2.1) 101.8 12b6.42s99.813a 157.0 13b 156.514a6.61d(2.1) 103.4 14b 117.51′3.31d(6.0) 25.11″3.45d(5.7) 24.62′5.23t(6.0) 125.6 2″5.11t(5.7) 124.83′ 127.8 3″ 128.04′1.80s17.04″1.67s17.55′1.80s25.15″1.67s25.3所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為300MHz和75MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例11.異-二聚茋甲素(14)及異-三聚茋甲素(15)的制備取白藜蘆醇(從虎杖中提取，純度＞95％)9.12g(0.04mol)和異丹葉大黃素(從大子買麻藤中提取，純度＞95％)5.16g(0.02mol)于250ml圓底瓶，加80ml丙酮溶解，電磁攪拌下滴加32.4g的FeCl3·6H2O(0.12mol，溶于30ml水)，電磁攪拌反應48小時。減壓蒸去丙酮，以EtOAc/H2O(乙酸乙酯/水)萃取5次，乙酸乙酯層合并，濃縮，得深褐色粗膏17.7g。所得粗膏經(jīng)硅膠(140～180目)柱層析，環(huán)己烷-丙酮(3∶1，2.5∶1)洗脫，得化合物14(720mg)，收率5.04％；化合物15(217mg)，收率1.52％。
化合物14為淺綠色無定型粉末，F(xiàn)AB-MS m/z 485[M+H]+，符合分子式C29H24O7；化合物15為灰綠色無定型粉末，F(xiàn)AB-MS m/z 741[M+H]+，符合分子式C44H36O11?；衔?4和化合物15的1H和13C-NMR數(shù)據(jù)見表-13。
表-13化合物14和化合物15的1H和13C-NMR數(shù)據(jù)1415 15No.No.
1H13C1H13C1H13C1a 129.0128.61c 133.52a 7.13d(8.7)128.17.09d(8.4) 128.02c 6.87d(1.5)109.33a 6.72d(8.7)115.76.69d(8.4) 115.93c 146.34a 157.9157.74c 147.75a 6.72d(8.7)115.76.69d(8.4) 115.95c 6.82brs 115.46a 7.13d(8.7)128.17.09(8.4) 128.06c 6.82d(1.5)118.27a 6.89d(16.5) 129.46.88d(15.9) 130.47c 5.38d(5.4)93.98a 6.67d(16.5) 122.66.61d(15.9) 122.18c 4.64d(5.4)56.79a 135.7135.19c 146.910a 119.1120.910c6.12d(2.1)106.211a 161.8161.311c 159.412a6.33d(2.1)96.1 6.28d(1.8) 96.5 12c6.11t(2.1)101.713a 159.0158.913c 159.414a6.73d(2.1)103.56.64d(1.8) 103.714c6.12d(2.1)106.21b 133.4132.92b 6.97brs 109.66.53d(1.8) 109.73b 147.8146.74b 146.9146.65b 6.8d(1.2) 115.16.53d(8.4) 114.96b 6.8d(1.2) 118.86.06dd(8.4，1.8)118.71.8)7b 5.41d(5.7)93.4 5.16d(1.8) 92.08b 4.49d(5.7)56.5 4.43d(1.8) 49.79b 146.7142.8
10b6.25s106.3 118.211b 159.2 161.712b6.25s101.36.30d(1.8)95.713b 159.2 159.514b6.25s106.36.05d(1.8)107.0OCH355.6 55.655.4所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為300MHz和75MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例12.白藜蘆醇低聚茋類全甲醚化物(permethoxy-resveratrol，17，18)的制備射干素B(大子買麻藤中提得，純度＞95％)140mg(0.27mmol)，溶于25ml無水丙酮，攪拌下加入無水碳酸鉀(K2CO3)1.5g(0.011mol)。再緩慢滴加硫酸二甲酯(Me2SO4)200mg(1.58mmol)液體，水浴加熱回流，反應4小時。反應液冷卻后，濾除K2CO3，濃縮至小體積，攪拌下傾入140ml水中，充分沉淀后，抽濾懸浮液，得化合物17(116mg)，收率72.93％。
化合物17，淺黃色無定型粉末，F(xiàn)AB-MS m/z 584，符合分子式C35H36O8，1H-NMR中δ5.55(1H，d，J＝9.0Hz，H-7b)，4.54(1H，d，J＝9.0Hz，H-8b)；6.34～7.26(13H，m，芳氫和烯氫)；3.74(2×OCH3)，3.81(2×OCH3)，3.85(1×OCH3)，3.88(1×OCH3)，3.99(1×OCH3)。
取(E)-ε-verniferin 100mg(0.22mmol)和無水碳酸鉀1.5g(0.11mol)，溶于20ml無水丙酮，電磁攪拌下向此懸浮液中滴加硫酸二甲酯(Me2SO4)138mg(1.095mmol)，室溫攪拌6小時后，濾除K2CO3，濃縮至干，濃縮物經(jīng)硅膠柱層析得化合物18(64mg)，收率55.45％。
化合物18，F(xiàn)AB-MS523(M+-1)，分子式C33H32O6。UVλmaxEtOH(nm)，321(4.23)，225(sh)，4.56；IR(KBr)ν(cm-1)2929，1606，1580，1512，1462，1304，1248，1132，1034，960，829；其1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)見表-14。
表-14化合物18的1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)No.1H13C No.1H13C
1a 135.51b130.22a 7.26d(8.7)128.02b 7.21d(8.7) 127.23a 6.85d(8.7)114.23b 6.77d(8.7) 114.14a 159.94b159.95a 6.85d(8.7)114.25b 6.77d(8.7) 114.16a 7.26d(8.7)128.06b 7.21d(8.7) 127.27a 5.52d(6.0)93.0 7b 6.74d(16.5)129.68a 4.61d(6.0)56.5 8b 6.95d(16.5)133.39a 146.59b130.210a6.42d(2.1)106.210b 120.411a 161.711b 161.712a6.33t(2.1)102.312ba6.75d(3.0)95.113a 161.713b 161.714a6.42d(2.1)106.214bb6.40d(3.0)98.6所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為300MHz和75MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例13.7，8-脫氫-全甲醚射干乙素(7，8-dehydro-permethoxyshegansu B，16)的制備實施例11中化合物17(97mg，0.166mmol)，溶于10ml無水二氧六環(huán)。電磁攪拌下加入2，5-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)66.3mg(0.292mmol)的5ml無水二氧六環(huán)溶液，回流反應6小時，蒸除溶劑，CHCl3/H2O充分萃取，氯仿層濃縮至干，得化合物16(75mg)，收率77.59％。
化合物16，為淺黃色無定型粉末，F(xiàn)AB-MS m/z 582，符合分子式C35H34O8，其1H-NMR數(shù)據(jù)見表-15。
表-15化合物16的1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)
No.1HNo.1H1a1b2a 7.19brs2b7.20d(1.8)3a3b4a4b5a5b6.83d(8.4)6a 7.03brs6b7.34dd(8.4，1.8)7a 6.98d(16.2)7b8a 7.14d(16.2)8b9a9b10a7.26brs10b6.67d(2.4)11a 11b12a6.53t(2.1) 12b6.39t(2.4)13a 13b14a7.26brs14b6.67d(2.4)OCH33.72(1×OCH3)，3.80(2×OCH3)，3.83(2×OCH3)，3.90(1×OCH3)，4.14(1×OCH3)所得1H-和13C-NMR數(shù)據(jù)分別為300MHz和75MHz，氘代丙酮為溶劑測定。
實施例14藥物組合物的制備取化合物8-18(任選一種)50g，加入糊精247.5g，硬脂酸鎂2.5g，充分拌勻后，按膠囊制備法制成1000粒，填裝于250mg膠囊，使每粒含化合物8-18(任選一種)50mg。
實施例15藥物組合物的制備取實施例1的大子買麻藤有效部位群提取物100g，加入糊精147.5g，硬脂酸鎂2.5g，充分拌均勻后，按膠囊制備法制成1000粒，填裝于250mg膠囊，使每粒含大子買麻藤有效部位群100mg，其總聚茋含量＞50％。
藥理實驗部份實驗例1化合物對小鼠腹腔巨噬細胞腫瘤壞死因子生成抑制作用。
實驗目的腫瘤壞死因子α(TNFα)主要由單核巨噬細胞分泌，在炎癥中起重要作用，為誘發(fā)皮膚炎癥反應、引起過敏變態(tài)反應等慢性炎性疾病，為類風濕性關節(jié)炎與TNFα關系密切。研究化合物對TNFα生成抑制作用，將為發(fā)現(xiàn)抗炎藥物先導化合物和作用機理提供新的途徑和實驗依據(jù)。
實驗方法小鼠腹腔巨噬細胞在ConA刺激下生成TNFα，以L929作為靶細胞，結(jié)晶紫法測定TNFα，該法有較好的專一性和較高的靈敏度，以樣品對L929細胞殺傷百分率表示樣品TNFα含量。
具體方法為1.小鼠腹腔巨噬細胞的制備，給藥及培養(yǎng)小鼠(C57BL/6，雄性，6-8周齡)，i.p.3％巰基乙醇酸鈉培養(yǎng)液1ml，4d后斷頭處死，用磷酸緩沖液(PBS)無菌洗出腹腔巨噬細胞，用BPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細胞兩次，計數(shù)，調(diào)整細胞濃度為2×106個·ml-1，加入24孔板，每孔1ml，于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，用PBS洗去未粘附細胞，每孔再加入含樣品的RPMI-1640培養(yǎng)液1ml，或不含樣品的陰性對照，培養(yǎng)0.5小時后，分別加入脂多糖(LPS，10mg·ml-1)，繼續(xù)培養(yǎng)6小時，收集上清液，用LPS透析12小時，再用RPMI-1640培養(yǎng)液平衡12小時，-20℃凍存?zhèn)溆谩?br> 2.L929細胞結(jié)晶紫染色法測樣品TNFα活性和抑制率，L929細胞長滿單層后用0.025％胰酶消化，重懸細胞于含10％NBS的RPMI-1640培養(yǎng)液中，調(diào)細胞濃度為3×105個·ml-1，加入96孔培養(yǎng)板中，每孔100μl，加2μg·ml-1放射菌素D液100μl，RPMI-1640液或待測樣品100μl，37℃，5％CO2下培養(yǎng)20h，去上清液，每孔加0.5％結(jié)晶紫液200μl，染色10min，流水洗去細胞外結(jié)晶紫，常溫干燥儀加10％SDS100μl，測吸收度A570值，以RPMI-1640液孔為對照，細胞毒百分率表示樣品所含TNFα活性，抑制百分率表示化合物對小鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生TNFα的抑制程度，以抑制百分率表示 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)以X±S表示，顯著性測定用t檢驗。
實驗結(jié)果化合物1與2在10-5mol·L-1濃度下對ConA刺激的小鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生的TNFα有明顯的抑制作用，抑制率分別為58.1％和51.4％，P值均小于0.01。結(jié)果見表-16表-16化合物1，2對ConA刺激的小鼠腹腔巨噬細胞TNFα生成抑制作用化合物 濃度(mol·L-1) 對TNFα生成抑制率(％)110-558.1210-551.權(quán)利要求
1.大子買麻藤有效部位群提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)粉碎大子買麻藤，用乙醇回流提取，提取液減壓濃縮，得粗浸膏；(2)粗提物分別用石油醚回流脫脂，脫脂后的浸膏用丙酮回流提取，濃縮丙酮溶解部分，聚酰胺拌樣，裝柱，用30％-80％乙醇充分洗脫，收集30％-80％乙醇部分濃縮，為大子買麻藤有效部分，其中含有大子買麻藤素B。
2.一種權(quán)利要求1所述的方法制備的大子買麻藤有效部位提取物。
3.一種白藜蘆醇低聚茋類化合物，其特征在于是通式(I)所示的白藜蘆醇類似物單體聚合而成的2-4度的聚合體及其全甲醚、脫氫化合物 其中，R1選自H、OCH3，R2選自H、異戊烯基，R3選自H、異戊烯基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其特征在于，所述的化合物選自大子買麻藤素B順式葡萄藤戊素雙氧化白藜蘆醇甲素6b，14b-去氫雙白藜蘆醇雙異丹葉大黃丙素三聚異丹葉大黃甲素四聚異丹葉大黃甲素雙異戊烯基白藜蘆醇甲素雙異戊烯基白藜蘆醇乙素異-二聚茋甲素異-三聚茋甲素7，8-脫氫-全甲醚射干乙素全甲醚射干乙素全甲醚葡萄滕戊素。
5.制備權(quán)利要求3的化合物的方法，其特征在于，用的白藜蘆醇類似物單體聚合制備。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的制備方法，其特征在于，所述的聚合是使用的氧化劑選自FeCl3、K3Fe(CN)6、H2O2、H2O2/辣椒酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的制備方法，其特征在于，所述的聚合是使用紫外光照。
8.根據(jù)權(quán)利要求3的全甲醚化合物的制備方法，其特征在于，白藜蘆醇低聚茋類化合物在無水碳酸鉀存在的條件下和硫酸二甲酯反應制得。
9.大子買麻藤乙素和雙氧化白藜蘆醇甲素的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)大子買麻藤酒精回流提取，減壓蒸餾除溶劑，所得粗浸膏索氏提取，分別以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇洗脫；(2)乙酸乙酯部分進一步經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫(30∶1，20∶1，15∶1，12∶1，10∶1，9∶1，8∶1，6∶1，5∶1，4∶1)，分成A-H共八個部分；(3)H部分經(jīng)硅膠柱層析，環(huán)己烷-丙酮梯度洗脫(1∶1，1∶1.5，1∶2，1∶2.5，1∶3，1∶4)分成六部分(H1-H6)；(4)H4部分經(jīng)中壓柱層析，甲醇-水(3.5∶6.5)洗脫得到大子買麻藤乙素；(5)H2部分經(jīng)中壓柱層析，甲醇-水(4∶6)洗脫得到雙氧化白藜蘆醇甲素。
10.順式葡萄藤戊素和6b，14b-去氫雙白藜蘆醇的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)取白藜蘆醇和FeCl3水溶液反應，乙酸乙脂提取，提取液合并，減壓濃縮，該濃縮物經(jīng)硅膠柱層析，以環(huán)己烷/丙酮(3∶1-2∶1)混合溶劑洗脫得葡萄藤戊素；(2)取上述葡萄藤戊素用紫外光(254nm，200w)照射，蒸去溶劑，殘留物以Rp-18反相低壓柱層析；(3)以重量比4∶6-6∶5的甲醇/水洗脫，得順式葡萄藤戊素；(4)以重量比4∶6-6∶5的甲醇/水洗脫，得6b，14b-去氫雙白藜蘆醇。
11.雙異丹葉大黃丙素、三聚異丹葉大黃甲素和四聚異丹葉大黃甲素的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)異丹葉大黃素和FeCl3·6H2O反應，反應水液以乙酸乙脂提取，合并提取液，干燥，減壓濃縮至干，得總反應物；(2)上述反應物，溶于少量乙醇，并與硅膠H(10-40um)拌和待干后，填裝于硅膠柱頂進行柱層析，以重量比為的7.5∶1.1∶1.0∶0.08的氯仿-甲醇-正己烷-水洗脫、收集、合并為I-IX部分；(3)VIII部分以反相Rp-18低壓柱層析，以重量比例為65∶35甲醇-水流動相洗脫，收集1-16分，第13-14分合并，濃縮后得雙異丹葉大黃丙素；(4)VI部分，以反相Rp-18低壓柱層析，以重量比例為155∶145的甲醇-水流動相洗脫，收集洗脫液濃縮后得三聚異丹葉大黃甲素；(5)IX部分，先以硅膠柱層析，以其重量比例為600∶150∶300∶75∶2.5的氯仿-乙酸乙脂-丙酮-醋酸混合溶劑洗脫，收集第4份濃縮后得四聚異丹葉大黃甲素。
12.異戊烯基白藜蘆醇甲素的制備方法，其特征在于12-異戊烯基白藜蘆醇和FeCl3·6H2O反應，再經(jīng)分離純化制得。
13.異戊烯基白藜蘆醇乙素的制備方法，其特征在于10-異戊烯基白藜蘆醇和FeCl3·6H2O反應，再經(jīng)分離純化制得。
14.異-二聚茋甲素及異-三聚茋甲素的制備方法，其特征在于白藜蘆醇和異丹葉大黃素和FeCl3·6H2O反應再分離純化制得。
15.7，8-脫氫-全甲醚射干乙素的制備方法，其特征在于全甲醚射干乙素用2，5-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌脫氫制得。
16.權(quán)利要求2的所述的大子買麻藤(Gnetum Montanum f.megalocarpum)有效部位在制備治療類風濕性關節(jié)炎、哮喘、過敏性炎癥的藥物中的應用。
17.權(quán)利要求3的所述的化合物在制備治療類風濕性關節(jié)炎、哮喘、過敏性炎癥的藥物中的應用。
18.一種藥物組合物，其特征在于，含有藥物有效劑量的如權(quán)利要求3所述的任一化合物，及藥用載體。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物可以是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
20.一種藥物組合物，其特征在于，含有藥物有效劑量的如權(quán)利要求2所述的提取物，及藥用載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的白藜蘆醇低聚茋類化合物，其制備方法，含有它們的藥物組合物，及其作為藥物，尤其是作為治療類風濕性關節(jié)炎、哮喘、過敏性炎癥的藥物的用途。
文檔編號C07C39/23GK1566054SQ0314793
公開日2005年1月19日 申請日期2003年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月27日
發(fā)明者林茂, 程桂芳, 李小妹, 姚春所, 李靖 申請人:中國醫(yī)學科學院藥物研究所