專利名稱：具有抗腫瘤活性的大黃素衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物合成領(lǐng)域。具體涉及具有抗腫瘤活性的大黃素衍生物。
背景技術(shù)：
隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，一般性傳染病的逐漸被控制，惡性腫瘤——癌癥成為常見且嚴(yán)重威脅人類生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一，它已成為僅次于心血管疾病的世界第二號“殺手”。從1996年以來全球每年新確診的腫瘤病人都在1000萬以上，死亡700多萬人，國內(nèi)每年新增腫瘤病人200萬人，死亡130多萬人左右，目前全國腫瘤患者總數(shù)估計在450萬人左右。
雖然近年來世界各國的科研機(jī)構(gòu)和大制藥公司在抗腫瘤藥物的開發(fā)上都投入巨資，且取得了較大的進(jìn)展，但總體上對癌細(xì)胞的病變和轉(zhuǎn)移以及藥物對癌細(xì)胞的作用機(jī)理還不十分清晰，所以到目前為止腫瘤仍是難以徹底治愈的疾病，至多只能起到一定的延緩生命的作用。而且腫瘤發(fā)病率仍有逐年增加的趨勢，因此目前對于開發(fā)更加有效的抗腫瘤藥物仍然有迫切的需求。
新型抗癌藥物的開發(fā)一般有兩種途徑對原有抗癌藥物的修飾和對新結(jié)構(gòu)化合物的篩選。前一種方法涉及到知識產(chǎn)權(quán)問題，一般都是各制藥公司對自己的藥物進(jìn)行改進(jìn)。對于要開發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的化合物，就需要采用后一種方法。新結(jié)構(gòu)化合物的來源可以是用化學(xué)合成法合成的化合物庫，尤其是利用近年來發(fā)展起來的組合化學(xué)技術(shù)來獲得化合物庫。另一種來源是天然化合物。我國是舉世公認(rèn)的天然藥物大國，并且具有使用中草藥治療各種疾病的悠久歷史，所以在中草藥中篩選抗癌新藥具有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢。目前國外制藥企業(yè)對天然化合物的篩選也是日益重視，并且卓有成效，例如近年來美國開發(fā)的紫杉醇已首次成為世界頭號暢銷抗癌藥。通過對天然化合的篩選得到具有生物活性的前導(dǎo)化合物以后，一般還需對化合物進(jìn)行修飾，以得到活性更強(qiáng)，毒性更小，生物利用度更高的化合物。
對中藥掌葉大黃的有效成分大黃素(emodin)的藥理研究表明其具有抗腫瘤作用實驗表明，大黃素對小鼠肉瘤180、小鼠肝癌、小鼠乳腺癌、小鼠艾氏腹水癌、小鼠淋巴肉瘤、小鼠黑色素瘤及大白鼠瓦克癌均有療效，抑制率均在30％以上〔P＜0.05〕，且在較大pH范圍內(nèi)皆有明顯抑制作用。50mg/kg劑量的大黃素對小鼠B16黑色素瘤有很明顯的抑制作用，抑制率為73％。小鼠每日注射75mg/kg對小鼠乳腺癌的抑制率達(dá)45％。對艾氏腹水癌也有抑制作用，50％的抑制濃度為20mg/ml。大黃素對艾氏腹水癌細(xì)胞呼吸的抑制較強(qiáng)。對艾氏腹水癌的某些氨基酸和糖代謝中間產(chǎn)物的氧化和脫氫有強(qiáng)烈的影響，50mg/ml時對乳酸氧化和脫氫的抑制分別為87％和91％。大黃素對癌細(xì)胞的糖酵解有刺激作用。大黃素還能延長P388小鼠的存活期，延長率為40％，腹水量和癌細(xì)胞數(shù)也相應(yīng)減少，能明顯抑制P388癌細(xì)胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)的生物合成，呈劑量依從性。抑制(3H)TdR、(3H)Urd、(3H)Leu的IC50分別為55mg/ml，50mg/ml和75mg/ml。大黃素對肺癌A-549細(xì)胞的分裂增殖有明顯抑制作用，能明顯抑制胸腺嘧啶核苷摻入人肺癌A-549細(xì)胞DNA的合成，細(xì)胞DNA的含量明顯降低、可使Gl期和S期細(xì)胞相對增加，G2期和M期和異倍體細(xì)胞相對減少?？傊?，大黃素的對多種腫瘤具有增值抑制作用，它的作用機(jī)制是多靶位的，可以抑制腫瘤細(xì)胞的供能過程，也可能抑制細(xì)胞的DNA合成。近年來國外文獻(xiàn)報道大黃素對腫瘤細(xì)胞異?；钴S的信號分子-蛋白激酶的活性有抑制作用，認(rèn)為大黃素通過對蛋白激酶的抑制來抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。
本發(fā)明申請人已在中國專利申請02137127.X中提供了具有下述結(jié)構(gòu)的大黃素衍生物
其中R1為氫、羰基、間-氯苯氨基或間-氯苯甲基；R2為氫或間-氯苯氨基。這一結(jié)構(gòu)的化合物具有抑制EGF受體酪氨酸激酶的活性，從而抑制依賴于EGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的腫瘤細(xì)胞生長，誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是從大黃素(emodin)的蒽醌母核出發(fā)，合成一系列新衍生物，并篩選出更加高效的具有抗腫瘤作用的新化合物。
本發(fā)明公開的具有抗腫瘤活性的大黃素衍生物具有下述式I的結(jié)構(gòu) 其中環(huán)A為六元環(huán)，可以為環(huán)烷烴或芳烴；B為C＝O，S，SO2，COH或N；
Y為C或N，與Z之間形成的鍵為單鍵(Y-Z)或雙鍵(Y＝Z)；Z為＝N-， ＝CH-，-CH2-， -S-， 或-SO2-；R1，R4，R5，R8任選取代基H，OH，OMe，OCH2Ph，NO2或NH2；R2，R3，R6，R7任選取代基H，OH，NH2，NO2，NHCOCH＝CH2，OCH2CH2OMe，OMe，OCH2Ph， OCH2CH2OCH2CH2OMe,CO2H，CO2Me，CN或CO2C2H5；X1，X2，X3任選取代基H，Cl，Br，F(xiàn)，I，OH，Me或OMe。
本發(fā)明優(yōu)選的大黃素衍生物結(jié)構(gòu)為I1、I2、I3、I4 其中Z為N或CH；B為C＝O，S，S＝O或SO2；R1，R4，R5，R8任選取代基H，OH，NH2，NO2，OMe或OCH2Ph；R2，R3，R6，R7任選取代基H，OH，NH2，NO2，OMe，OCH2Ph，NHCOCH＝CH2，OCH2CH2OMe，OCH2CH2OCH2CH2OMe， X1，X2，X3任選取代基H，Cl，Br，F(xiàn)，I，OH，Me或OMe。
其中Z為NH2，CH2，C＝O，S，S＝O或SO2；B為C＝O，S，S＝O或SO2；R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，X1，X2，X3的定義同I1。
其中Z為NH，CH2，O，C＝O，S，S＝O或SO2B為COH或NR1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，X1，X2，X3的定義同I1。
其中Z為NH，CH2，或S；B為C＝O，S，S＝O或SO2；R1，R4，R5，R8，X1，X2，X3的定義同I1；R2，R3，R6，R7任選取代基H，OH，NH2，NO2，NHCOCH＝CH2，OCH2CH2OMe，OMe，OCH2Ph， OCH2CH2OCH2CH2Ome，CO2H，CO2Me，CN或CO2C2H5。
本發(fā)明公開的優(yōu)選具體結(jié)構(gòu)的大黃素衍生物見表1。
表1大黃素衍生物化合物結(jié)構(gòu)表ZY B R1R2R3R4R R R R8X X2X35671E005NCC＝OHHHHH H H HH ClHE005A NH CH C＝OHHHHH H H HH ClHE005B NCC＝OHHHHH H H HH BrHE005P NCC＝OHHHHH H H HH H ClE006NH CH C＝OOH HHHH H H OH X ClHE006x NH CH C-OHOH HHHH H H OH H ClHE036NCC＝OHHOCH2CH2OCH2CH2OMeHH H H HH ClHE080NCC＝OHHOH HH H H HH ClHE090NCC＝OHHHNO2 H H H HH ClHE101NH CH SO2 HHHHH H H HH ClHE030A NCC＝OHH HH H H HH ClHEC004 CH2 NS＝OHHHHH H H HH ClHEC005 CH2 CH C＝oHHHHH H H HH ClHEC102 CH2 NSO2 HHHHH H H HH ClH
EC103 CH2 NC＝OHH HHH H H HH ClHE104N CC＝OHCH3HHH H H HH ClHE104Y N CC＝OHH CH3 HH H H HH ClHE105N CC＝OHOCH3 HHH H H HH ClHE105Y N CC＝OHH OCH3 HH H H HH CLH本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題是公開上述大黃素衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明中的代表性化合物E005對不同腫瘤細(xì)胞株的in vitro實驗的半抑制劑量IC50值，見表2。
表2 E005對不同腫瘤細(xì)胞株的IC50值細(xì)胞株 半抑制劑量(uM)來源效果SK-BR-3 1.5 人乳腺癌細(xì)胞 高度敏感MDA-MB-2312 人乳腺癌細(xì)胞 高度敏感ZR-75-30 3 人乳腺癌細(xì)胞 中度敏感MDA-MB-4352 人乳腺癌細(xì)胞 高度敏感MCF-7 4 人乳腺癌細(xì)胞 中度敏感A2780 ＞5 人乳腺癌細(xì)胞 低度敏感MDA-MB-453 未測到 人乳腺癌細(xì)胞 不敏感A431 1.9 人陰道癌細(xì)胞 高度敏感ECV3042 人臍帶內(nèi)皮細(xì)胞高度敏感Meg-016 人骨髓瘤 低度敏感A549 4 人非小細(xì)胞肺癌中度敏感HFL-1 7 人正常肺成纖維細(xì)胞低度敏感HepG2 ＞10人肝癌細(xì)胞不敏感SMMC-7721 52人肝癌細(xì)胞不敏感COS-7 未測到 猴腎成纖維細(xì)胞不敏感(SV-40轉(zhuǎn)化)P815 1.9 鼠肥大細(xì)胞瘤 高度敏感P19 5 鼠畸形瘤 低度敏感F9100 鼠畸形瘤 不敏感從表2可見，E005對乳腺癌、陰道癌和非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞有良好的抑制效果。
用本發(fā)明中的代表性化合物E005進(jìn)行了負(fù)瘤裸鼠腫瘤生長抑制實驗。接種1 X 107的A549細(xì)胞于裸鼠腋窩皮下，7天后給小鼠口服不同劑量的化合物溶液，每個劑量組10只小鼠。每隔3天測定腫瘤體積。以此計算抑制率達(dá)50％時的化合物濃度(IC50)。結(jié)果見圖1。結(jié)果表明以50mg/Kg/d和100mg/Kg/d劑量給藥兩周后，腫瘤生長與對照組相比分別被抑制了72.5％和79.5％(P＜0.001)，具有顯著的抑制腫瘤生長作用。
本發(fā)明中其他9種代表性化合物對不同腫瘤細(xì)胞的抑制效果見表3。
表3 9種化合物對腫瘤細(xì)胞的抑制效果化合物活性ZR-75-30 MDA-MB-231 A431uM 抑制率uM 抑制率uM抑制率E005 高 3 50％ 2 50％ 0.7 50％E005A 高 3 50％ 1.8 50％ 1.0 50％E005B 高 3 50％E006x 高 5 25％ 0.7 50％E036 中 5 20％E090 中 5 0E101 中 5 05 0E030A 中 5 19％ 5 0EC005 低 56 50％上述結(jié)果顯示，本發(fā)明大黃素衍生物對腫瘤細(xì)胞具有較顯著的抑制效果，在腫瘤治療領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價值。


圖1 E005對負(fù)瘤裸鼠腫瘤生長抑制結(jié)果圖具體實施方式
實施例1 N-(3-氯苯基)-10-氨基蒽酮的合成(E005A)
(1)在150毫升的燒瓶中加入蒽醌5克，氯化亞錫15克，冰乙酸40毫升，濃鹽酸14毫升，加熱回流2小時，冷卻過濾，固體用水洗滌干燥的產(chǎn)物蒽酮3.8克，產(chǎn)率是82％。
(2)11.9克蒽酮(0.061摩爾)溶解在35毫升二硫化碳中，攪拌下慢慢滴加3.8毫升液溴，保持反應(yīng)溫度在8-10度。液溴加完，有淡黃色固體析出，過濾，固體用依次甲苯250毫升，正己烷40毫升洗滌，干燥后得到14.4克10-溴蒽酮，產(chǎn)率是86％。
(3)5克10-溴蒽酮溶解于100毫升二氯甲烷中，加入2.3克間氯苯胺，2.5克三乙胺，加熱回流24小時，冷卻。將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水洗滌至水層pH值到7，無水硫酸鈉干燥，抽干溶劑。用層析方法(洗脫劑是苯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化產(chǎn)物的產(chǎn)物N-(3-氯苯基)-10-氨基蒽酮0.85克，產(chǎn)率是48％。
氫譜1H NMR(CDCl3)6.68(d，J＝6.68Hz，1H)，6.90(s，1H)，7.09(d，J＝6.68Hz，1)，7.20-8.50(m，11H)。
紅外光譜IR(neat)1672，1587，1265(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 319(M+)，321(M+)，284，253，152。
實施例2 N-(3-氯苯基)-10-亞氨基蒽酮的合成(E005) 10.9克蒽酮溶解在200毫升二硫化碳中，攪拌下慢慢滴加9毫升液溴，保持反應(yīng)溫度在8-10度。液溴加完，室溫攪拌過夜，抽干溶液，固體用正己烷40毫升洗滌，干燥后得到15.1克10，10-二溴蒽酮，產(chǎn)率是77％。
2克10，10-二溴蒽酮溶解于100毫升二氯甲烷中，加入2.3克間氯苯胺，6.0克三乙胺，室溫攪拌24小時。將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水洗滌至水層pH值到7，無水硫酸鈉干燥，抽干溶劑。用層析方法(洗脫劑是苯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化產(chǎn)物的產(chǎn)物N-(3-氯苯基)-10-亞氨基蒽酮1.21克，產(chǎn)率是67％。
氫譜1H NMR(CDCl3)6.67(d，J＝6.68Hz，1H)，6.91(s，1H)，7.09(d，J＝6.68Hz，1H)，7.20-8.50(m，9H)。
紅外光譜IR(neat)1672，1587，1265(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 319(M+)，321(M+)，282，253，152。
實施例3 N-(4-氯苯基)-10-亞氨基蒽酮的合成(E005P) 2克10，10-二溴蒽酮溶解于100毫升二氯甲烷中，加入2.3克對氯苯胺，6.0克三乙胺，室溫攪拌24小時。將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水洗滌至水層pH值到7，無水硫酸鈉干燥，抽干溶劑。用層析方法(洗脫劑是苯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化產(chǎn)物的產(chǎn)物N-(4-氯苯基)-10-亞氨基蒽酮1.16克，產(chǎn)率是65％。
氫譜1H NMR(CDCl3)6.89(d，2H)，7.01(d，2H)，7.20-8.50(m，8H)。
紅外光譜IR(neat)1672，1587，1265(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 319(M+)，321(M+)，282，253，152。
實施例4 N-(3-溴苯基)-10-亞氨基蒽酮的合成(E005B) 2.5克10，10-二溴蒽酮溶解于100毫升二氯甲烷中，加入3.2克間溴苯胺，6.0克三乙胺，室溫攪拌24小時。將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水洗滌至水層pH值到7，無水硫酸鈉干燥，抽干溶劑。用層析方法(洗脫劑是苯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化產(chǎn)物的產(chǎn)物N-(3-溴苯基)-10-亞氨基蒽酮1.21克，產(chǎn)率是67％。
氫譜1H NMR(CDCl3)6.66(d，1H)，6.92(s，1H)，7.07(d，1H)，7.20-8.50(m，9H)。
紅外光譜IR(neat)1677，1585，1253(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 363(M+)，365(M+)，208，194，169。
實施例5 N-(3-氯苯基)-1，8-二羥基-10-氨基蒽酮的合成(E006) (1)在250毫升的燒瓶中加入1，8-二羥基蒽醌3.1克，氯化亞錫18克，冰乙酸150毫升，濃鹽酸50毫升，加熱回流14小時，冷卻過濾，固體用水洗滌干燥的產(chǎn)物蒽酮2.2克，產(chǎn)率是76％。
(2)1.2克1，8-二羥基蒽酮溶解在150毫升二硫化碳中，攪拌，加熱回流，原料溶解后慢慢滴加1.5毫升液溴。液溴加完，繼續(xù)回流36小時。冷卻，將溶劑抽至5毫升左右，加入40毫升正己烷，析出固體，抽濾，用40毫升正己烷洗滌，干燥后得到0.5克1，8-二羥基-10-溴蒽酮，產(chǎn)率是27％。
(3)0.5克1，8-二羥基-10-溴蒽酮溶解于30毫升二氯甲烷中，加入0.2克間氯苯胺，2.5克三乙胺，加熱回流24小時，冷卻。將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用水洗滌至水層pH值到7，無水硫酸鈉干燥，抽干溶劑。用層析方法(洗脫劑是苯∶二氯甲烷的比例是1∶3)純化產(chǎn)物的產(chǎn)物N-(3-氯苯基)-1，8-二羥基-10-氨基蒽酮0.4克，產(chǎn)率是70％。
氫譜1H NMR(CDCl3)6.66(d，J＝6.68Hz，1H)，6.91(s，1H)，7.09(d，J＝6.68Hz，1H)，7.20-8.50(m，7H)，12.1(s，2H)。
紅外光譜IR(neat)1677，1589，1260(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 351(M+)，353(M+)，318，125。
實施例6 10-(3-氯苯甲基)蒽酮的合成(EC005) 在50毫升的單口瓶中加入10克蒽酮，吡啶30毫升，間氯苯甲醛8.6克，六氫吡啶1毫升，加熱回流15小時。冷卻，減壓蒸去溶劑，得褐色固體。將此粗產(chǎn)品用50毫升正丁醇加熱溶解，慢慢冷卻，析出淡黃色固體10.25克10-(3-氯苯基)亞甲基蒽酮，產(chǎn)率是63％。
取以上產(chǎn)物0.503克，用100毫升無水甲醇溶解，加入10％鈀碳0.100克，在常壓氫氣氛圍攪拌24小時，停止通入氫氣，靜置36小時。慮去鈀碳，抽干溶劑得粘稠液體。用層析方法(洗脫劑是苯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化，得到產(chǎn)物10-(3-氯苯甲基)蒽酮0.285克，產(chǎn)率是61％。
氫譜1H NMR(CDCl3)3.16(d，2H)，4.56(t，1H)，6.30-8.25(m，12H)。
紅外光譜IR(neat)1677，1548，1312(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 318(M+)，193，207，125實施例7 9-(3-氯苯甲基)-10-氧代酚噻嗪的合成(EC004) 在無水無氧條件下，將2.96克氫化鈉(含量60％)加入到含有10.5克酚噻嗪的80毫升四氫呋喃溶液中，室溫攪拌1小時。向反應(yīng)液里滴加間氯芐溴8.2毫升，加完室溫繼續(xù)攪拌過夜。抽干溶劑，用柱層析分離(洗脫劑是正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)得產(chǎn)物9-(3-氯苯甲基)酚噻嗪10.5克，產(chǎn)率是57％。
在單口瓶中加入9-(3-氯苯甲基)酚噻嗪2.5克，5毫升30％雙氧水，乙醇57毫升加熱回流3小時，冷卻，蒸去溶劑用用柱層析分離(洗脫劑是正己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)得產(chǎn)物9-(3-氯苯甲基)-10-氧代酚噻嗪2.4克，產(chǎn)率是91％。
氫譜1H NMR(CDCl3)5.82(s，2H)，7.01(s，1H)，7.20-8.60(m，11H)。
紅外光譜IR(neat)1687，1589，1326，1277(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 331(M+)，333(M+)，206，125實施例8 9-(3-氯苯甲基)-10，10-二氧代酚噻嗪的合成(EC102) 在單口瓶中加入9-(3-氯苯甲基)酚噻嗪2.0克，3毫升30％雙氧水，乙酸25毫升加熱回流3小時，冷卻，有固體析出即得產(chǎn)物9-(3-氯苯甲基)-10，10-二氧代酚噻嗪1.9克，產(chǎn)率是86％。
氫譜1H NMR(CDCl3)5.82(s，2H)，7.01(s，1H)，7.20-8.60(m，11H)。
紅外光譜IR(neat)1677，1583，1314，1279(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 347(M+)，349(M+)，222，125實施例9 10-(3-氯苯甲基)吖啶酮的合成(EC103)
在100毫升得三頸瓶中加入8.5克吖啶酮和DMF100毫升，室溫攪拌下加入60％含量的氫化鈉1.8克，繼續(xù)攪拌1小時。滴加10克間氯芐溴，保持室溫攪拌24小時。將反應(yīng)液倒入冰水中，抽濾，固體用乙酸乙酯重結(jié)晶得產(chǎn)物8.7克，產(chǎn)率是65％。
氫譜1H NMR(CDCl3)5.81(s，2H)，7.01(s，1H)，7.20-8.60(m，11H)。
紅外光譜IR(neat)1686，1545，1265(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 311(M+)，313(M+)，186，125實施例10 2-甲基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮(E104)和3-甲基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮的合成(E104Y) 在反應(yīng)瓶中加入2-甲基蒽醌2.8克，二氯甲烷30毫升，室溫攪拌下滴加四氯化鈦3毫升，保持此溫度攪拌半小時，加入間氯苯胺2.5毫升，室溫攪拌過夜。將此反應(yīng)液倒入200毫升碳酸氫鈉得飽和水溶液中，分液，有機(jī)層用硫酸鈉干燥，抽干溶劑，用層析方法(洗脫劑是苯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化得產(chǎn)物2-甲基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮1.2克和3-甲基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮1.2克，總產(chǎn)率是57％。
2-甲基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮?dú)渥V1H NMR(CDCl3)2.25(s，3H)，6.67(d，1H)，6.91(s，1H)，7.09(d，1H)，7.20-8.50(m，8H)。
紅外光譜IR(neat)1672，1587，1265(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 333(M+)，335(M+)，283，267，152。
3-甲基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮?dú)渥V1H NMR(CDCl3)2.27(s，3H)，6.65(d，1H)，6.92(s，1H)，7.07(d，1H)，7.20-8.50(m，8H)。
紅外光譜IR(neat)1673，1587，1265(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 333(M+)，335(M+)，283，267，152。
實施例11 2-甲氧基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮(E105)克和3-甲氧基-10-3-氯苯基)亞氨基蒽酮的合成(E105Y) 在250毫升的反應(yīng)瓶中加入二甲基甲酰胺150毫升，2-羥基蒽醌10克，碘甲烷12毫升，碳酸鉀30克，加熱至45度攪拌24小時。冷卻后將反應(yīng)液倒入水中過慮得產(chǎn)物2-甲氧基蒽醌9.6克，產(chǎn)率是90％。
在反應(yīng)瓶中加入2-甲氧基蒽醌2.4克，二氯甲烷30毫升，室溫攪拌下滴加四氯化鈦3毫升，保持此溫度攪拌半小時，加入間氯苯胺2.5毫升，室溫攪拌過夜。將此反應(yīng)液倒入200毫升碳酸氫鈉得飽和水溶液中，分液，有機(jī)層用硫酸鈉干燥，抽干溶劑，用層析方法(洗脫劑是苯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化得產(chǎn)物2-甲氧基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮0.8克和3-甲氧基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮0.8克，總產(chǎn)率是46％。
2-甲氧基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮?dú)渥V1H NMR(CDCl3)3.89(s，3H)，6.64(d，1H)，6.93(s，1H)，7.07(d，1H)，7.20-8.50(m，8H)。
紅外光譜IR(neat)1681，1589，1235(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 349(M+)，351(M+)，283，125。
3-甲氧基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮?dú)渥V1H NMR(CDCl3)3.87(s，3H)，6.64(d，1H)，6.93(s，1H)，7.07(d，1H)，7.20-8.50(m，8H)。
紅外光譜IR(neat)1684，1589，1234(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 349(M+)，351(M+)，283，125。
實施例12 2-(3-嗎啉丙氧基基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮(E030A)和3-(3-嗎啉丙氧基基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮(E030AY)的合成 在250毫升的反應(yīng)瓶中加入二甲基甲酰胺150毫升，2-羥基蒽醌10克，3-嗎啉-1-氯丙烷15.1克，碳酸鉀30克，加熱至90度攪拌24小時。冷卻后將反應(yīng)液倒入水中過慮得產(chǎn)物2-(3-嗎啉丙氧基)蒽醌11.2克，產(chǎn)率是74％。
在反應(yīng)瓶中加入2-(3-嗎啉丙氧基)蒽醌2.3克，二氯甲烷30毫升，室溫攪拌下滴加四氯化鈦2.6毫升，保持此溫度攪拌半小時，加入間氯苯胺2.3毫升，室溫攪拌過夜。將此反應(yīng)液倒入200毫升碳酸氫鈉得飽和水溶液中，分液，有機(jī)層用硫酸鈉干燥，抽干溶劑，用層析方法(洗脫劑是乙酸乙酯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化得產(chǎn)物2-(3-嗎啉丙氧基基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮0.6克和3-(3-嗎啉丙氧基基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮0.6克，產(chǎn)率是38％。
氫譜1H NMR(CDCl3)紅外光譜 IR(neat)1677，1589，1260(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e實施例13 2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮(E036)和3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮(E036Y)的合成 在250毫升的反應(yīng)瓶中加入二甲基甲酰胺150毫升，2-羥基蒽醌10克，2-(2-甲氧基乙氧基)-1-氯乙烷11.5克，碳酸鉀30克，加熱至90度攪拌24小時。冷卻后將反應(yīng)液倒入水中過慮得產(chǎn)物2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)蒽醌8.8克，產(chǎn)率是60％。
在反應(yīng)瓶中加入2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)蒽醌3.3克，二氯甲烷40毫升，室溫攪拌下滴加四氯化鈦4.0毫升，保持此溫度攪拌半小時，加入間氯苯胺3.8毫升，室溫攪拌過夜。將此反應(yīng)液倒入250毫升碳酸氫鈉得飽和水溶液中，分液，有機(jī)層用硫酸鈉干燥，抽干溶劑，用層析方法(洗脫劑是乙酸乙酯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化得產(chǎn)物2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮1.6克和3-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮1.6克，產(chǎn)率是72％。
2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮?dú)渥V1H NMR(CDCl3)3.40(s，3H)，3.60(t，2H)，3.73(t，2H)，3.93(t，2H)，4.35(t，2H)，6.68(d，1H)，6.92(s，1H)，7.02(d，1H)，7.20-8.50(m，8H)。
紅外光譜IR(neat)1663，1569，1248(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 435(M+)，437(M+)，332，125.1033-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮?dú)渥V1H NMR(CDCl3)3.41(s，3H)，3.61(t，2H)，3.74(t，2H)，3.93(t，2H)，4.36(t，2H)，6.68(d，1H)，6.92(s，1H)，7.02(d，1H)，7.20-8.50(m，8H)。
紅外光譜IR(neat)1665，1573，1252(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 435(M+)，437(M+)，332，125，103。
實施例14 1-硝基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮(E090)和4-硝基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮(E090Y)的合成
在反應(yīng)瓶中加入1-硝基蒽醌2.0克，二氯甲烷30毫升，室溫攪拌下滴加四氯化鈦2.5毫升，保持此溫度攪拌半小時，加入間氯苯胺2.5毫升，室溫攪拌過夜。將此反應(yīng)液倒入200毫升碳酸氫鈉得飽和水溶液中，分液，有機(jī)層用硫酸鈉干燥，抽干溶劑，用層析方法(洗脫劑是苯∶二氯甲烷的比例是1∶1)純化得產(chǎn)物1-硝基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮0.7克和4-硝基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮0.4克，產(chǎn)率是37％。
1-硝基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮?dú)渥V1H NMR(CDCl3)6.79(s，1H)，7.01(s，1H)，7.10-9.20(m，9H)。
紅外光譜IR(neat)1866，1745，1533，1223(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 362(M+)，464(M+)，237，125。
4-硝基-10-(3-氯苯基)亞氨基蒽酮?dú)渥V1H NMR(CDCl3)6.77(s，1H)，7.00(s，1H)，7.10-9.20(m，9H)。
紅外光譜IR(neat)1869，1741，1529，1229(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 362(M+)，464(M+)，237，125。
實施例15 N-(3-氯苯基)-4-氨基蒽酮(E007)的合成工藝 (1)在裝有磁攪拌子，回流冷凝管的三頸瓶中加入6.69克1-氨基蒽醌(0.03摩爾)，200毫升1N氫氧化鈉水溶液，攪拌，加熱回流分批加入保險粉40克。加完后繼續(xù)回流兩小時，停止加熱，冷卻，用苯100毫升萃取三次，有機(jī)層合并分別用碳酸氫鈉飽和溶液，水100毫升洗滌，無水硫酸鈉干燥，除去溶劑，用層析柱純化，獲得1-氨基蒽酮4.73克，產(chǎn)率為75％。
(2)在裝有磁攪拌子，回流冷凝管的三頸瓶中加入2.09克4-氨基蒽酮(0.01摩爾)，2.38克間氯碘苯(0.01摩爾)，0.1克銅粉，0.1碘化亞銅，無水碳酸鈉1.59克(0.015摩爾)，硝基苯200毫升，加熱回流24小時，冷卻，加入水500毫升，苯萃取，每次用苯100毫升，有機(jī)層無水硫酸鈉干燥。抽干溶劑，層析柱純化，展開劑為苯，得N-(3-氯苯基)-4-氨基蒽酮1.07克，產(chǎn)率為33.5％氫譜1H NMR(CDCl3)4.34(s，2H)，6.50-8.00(m，11H)，8.29(m，1H)，11.20(s，1H)；紅外光譜IR(neat)3055，1660，1588，1302(cm-1)。
質(zhì)譜MSm/e 319(M+)，284，255，152實施例16 N-(3-氯苯基)-1-氨基蒽醌(E007A)的合成工藝 在裝有磁攪拌子，回流冷凝管的三頸瓶中加入2.23克1-氨基蒽醌(0.01摩爾)，2.38克間氯碘苯(0.01摩爾)，0.1克銅粉，0.1碘化亞銅，無水碳酸鈉1.59克(0.015摩爾)，硝基苯200毫升，加熱回流24小時，冷卻，加入水500毫升，苯萃取，每次用苯100毫升，有機(jī)層無水硫酸鈉干燥。抽干溶劑，層析柱純化，展開劑為苯，得N-(3-氯苯基)-1-氨基蒽醌2.58克，產(chǎn)率為77.2％氫譜1H NMR(CDCl3)6.00-8.00(m，11H)，11.15(s，1H)；紅外光譜IR(neat)3145，1680，1566，1318(cm-1).
質(zhì)譜MSm/e 333(M+)，298，241，151
實施例17 E005A對A431細(xì)胞增殖抑制實驗A431細(xì)胞用150μl含有10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基，在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板種培養(yǎng)，每孔接種5×106個細(xì)胞。37℃5％CO2培養(yǎng)24小時后加入用等體積含有10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基稀釋成不同濃度Ia。37℃5％CO2培養(yǎng)3天后，每孔加入20μl MTT試劑，相同條件溫浴3個小時，用顯微鏡觀察有紫色結(jié)晶形成。去除培養(yǎng)基，用100μl酸性SDS溶解紫色結(jié)晶。37℃溫浴一個小時后測定570nm光吸收值。用非線性二次回歸法計算50％抑制率時的化合物濃度(IC50)為0.7μM，表明該化合物對A431細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制活性(Iressa的IC50為0.5-1μM)。對高濃度5μM以上濃度的Ia作用后的A431細(xì)胞的DNA進(jìn)行抽提后發(fā)現(xiàn)被降解成間距為200bp左右的梯狀片段，表明癌細(xì)胞被誘發(fā)細(xì)胞凋亡。
實施例18 E005對EGF受體酪氨酸激酶活性抑制實驗A431細(xì)胞用硼酸/EDTA低滲緩沖液裂解，在400g 0-4℃離心10分鐘，取上清夜，在25000g 0-4℃離心30分鐘。沉淀用含有5％甘油，4mM苯甲脒和1％Triton X-100的Hepes緩沖液(pH7.4)懸浮，在0-4℃攪拌1小時，然后在100000g 0-4℃離心1小時。上清中含有EGF受體酪氨酸激酶。酪氨酸激酶活性抑制實驗時，取上述EGF受體溶液40μl加入400μl 150mM Hepes緩沖液中(pH7.4，含有500mM正釩酸鈉)，另外再加80μl 25mM DTT，80μl 12.5mMMgCl2溶液，和200μl無菌水配制成酶反應(yīng)液?；衔颕a用DMSO溶解后用含有0.1％Triton X-100，10％甘油40mM Hepes緩沖液稀釋成不同的濃度，在此化合物溶液中加入等體積的20μg/ml EGF溶液，配制成EGF/化合物混合液。250μCiγ-[32P]-ATP用2ml 100μMATP溶液稀釋，加入等體積4mg/ml Arg-Arg-Leu-Ile-Glu-Asp-Ala-Glu-Tyr-Ala-Ala-Arg-Gly小肽溶液(溶于含有0.1％Triton X-100，10％甘油40mM Hepes緩沖液中)，配制成ATP/小肽混合液。取上述配制好的5μl EGF/化合物混合液，加入10μl酶反應(yīng)液中，0-4℃冰浴30分鐘，然后加入10μl ATP/小肽混合液，25℃溫浴10分鐘，加入10％TCA終止反應(yīng)。冰浴30分鐘后用液體閃爍儀檢測放射強(qiáng)度。據(jù)此計算抑制率達(dá)50％時的化合物濃度(IC50)為25nM，表明該化合物對EGF受體酪氨酸激酶有很強(qiáng)的抑制活性，基本與Iressa的IC50(23-80nM)相當(dāng)。
實施例19 E005對負(fù)瘤小鼠腫瘤生長抑制實驗接種1 X 107A431細(xì)胞于裸鼠，共24只裸鼠，分為4組。4天后可見腋窩皮下有腫瘤形成。4組分別給以口服對照溶液，10mg/kg/d，30mg/kg/d，100mg/kg/d劑量的Ia化合物溶液，給藥2周后殺死小鼠，稱瘤重。以此計算抑制率達(dá)50％時的化合物濃度(IC50)為15mg/kg，而Iressa的IC50為10-20mg/kg，表明該化合物對此腫瘤模型有很好的抑瘤作用。
權(quán)利要求
1.一種大黃素衍生物，其特征在于所述的衍生物具有下述式I的結(jié)構(gòu) 其中環(huán)A為六元環(huán)，選自環(huán)烷烴或芳烴；B為C＝O，S，SO2，COH或N；Y為C或N，與Z之間形成的鍵為單鍵(Y-Z)或雙鍵(Y＝Z)；Z為＝N-， ＝CH-，-CH2-， -S-， 或-SO2-；R1，R4，R5，R8任選取代基H，OH，OMe，OCH2Ph，NO2或NH2；R2，R3，R6，R7任選取代基H，OH，NH2，NO2，NHCOCH＝CH2，OCH2CH2OMe，OMe，OCH2Ph， OCH2CH2OCH2CH2OMe,CO2H，CO2Me，CN或CO2C2H5；X1，X2，X3任選取代基H，Cl，Br，F(xiàn)，I，OH，Me或OMe。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃素衍生物，其特征在于其中A為六元環(huán)烷烴，Y與Z之間形成的鍵為雙鍵，Y為C原子，并具有下述式I1的結(jié)構(gòu) 其中Z為N或CH；B為C＝O，S，S＝O或SO2；R1，R4，R5，R8任選取代基H，OH，NH2，NO2，OMe或OCH2Ph；R2，R3，R6，R7任選取代基H，OH，NH2，NO2，OMe，OCH2Ph，NHCOCH＝CH2，OCH2CH2OMe，OCH2CH2OCH2CH2OMe， X1，X2，X3任選取代基H，Cl，Br，F(xiàn)，I，OH，Me或OMe。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃素衍生物，其特征在于其中A為六元環(huán)烷烴，Y與Z之間形成的鍵為單鍵，Y為C原子，并具有下述式I2的結(jié)構(gòu) 其中Z為NH2，CH2，C＝O，S，S＝O或SO2；B為C＝O，S，S＝O或SO2；R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，X1，X2，X3的定義同權(quán)利要求2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃素衍生物，其特征在于其中A為六元芳環(huán)，Y與Z之間形成的鍵為單鍵，Y為C原子，并具有下述式I3的結(jié)構(gòu) 其中Z為NH，CH2，O，C＝O，S，S＝O或SO2B為COH或NR1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，X1，X2，X3的定義同權(quán)利要求2。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃素衍生物，其特征在于其中A為六元環(huán)烷烴，Y與Z之間形成的鍵為單鍵，Y為N原子并具有下述式I4的結(jié)構(gòu) 其中Z為NH，CH2，或S；B為C＝O，S，S＝O或SO2；R1，R4，R5，R8，X1，X2，X3的定義同權(quán)利要求1；R2，R3，R6，R7任選取代基H，OH，NH2，NO2，NHCOCH＝CH2，OCH2CH2OMe，OMe，OCH2Ph， OCH2CH2OCH2CH2Ome,CO2H，CO2Me，CN或CO2C2H5。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃素衍生物在制備治療抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有抗腫瘤活性的大黃素衍生物。該大黃素衍生物具有式I的結(jié)構(gòu)其中環(huán)A為六元環(huán)，可以為環(huán)烷烴或芳烴；B為C＝O，S，SO
文檔編號C07D335/00GK1496975SQ03154250
公開日2004年5月19日 申請日期2003年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月25日
發(fā)明者史順程, 程小偉, 趙士民 申請人:上海恒達(dá)科技發(fā)展股份有限公司