專利名稱：作為腦缺血性疾病和cns疾病治療劑的哌嗪苯并噻唑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及哌嗪苯并噻唑衍生物，主要用于治療和/或預防腦缺血性疾病或CNS疾病。本發(fā)明還涉及它們的制備方法。
背景技術：
哺乳動物細胞通過激活由各種促細胞分裂劑激活性蛋白激酶(MAPKs)介導的信號級聯(lián)反應對某些細胞外刺激產(chǎn)生應答。盡管它們對上游刺激的應答各不相同，MAP激酶級聯(lián)都是以類似的方式組織的，包含MAP激酶激酶激酶(MAPKKK或MEKK)、MAP激酶激酶(MAPKK或MKK)和MAP激酶(MAPK)。MAP激酶系是個激酶大家族，它包括c-Jun N-末端激酶(JNKs)，也稱為“應激反應-激活的蛋白激酶”(SAPKs)，以及細胞外信號調(diào)節(jié)的激酶(ERKs)和p38 MAP激酶。這三個MAP激酶子家族的每一個都參與至少三個不同的但是平行的轉(zhuǎn)運由外界刺激觸發(fā)的信息的通路。JNK信息通路通過以下方式被激活細胞暴露于環(huán)境應力(如化學毒素、射線、缺氧和滲透休克)、以及用生長因子或促炎性細胞因子(如腫瘤壞死因子α(TNF-α)或白細胞介素-1β(IL-1β))處理細胞。
在對細胞因子和應力信號作出應答時，兩種MAP激酶激酶(稱為MKKs或MAPKKs)，即MKK4(也稱為JNKK1)和MKK7，通過位于酶的激活環(huán)上的Thr-Pro-Tyr基元中特定的蘇氨酸和酪氨酸殘基的雙重磷酸化來激活JNK。即使在信號級聯(lián)的更上游，也知道MKK4也是由MAP激酶激酶激酶(MEKK1)通過絲氨酸和蘇氨酸殘基的磷酸化來激活自身。
一旦激活以后，JNK與轉(zhuǎn)錄因子靶標的N-末端區(qū)結(jié)合，并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構域磷酸化，引起各種基因產(chǎn)物表達的上調(diào)，這可導致細胞凋亡、炎性反應或腫瘤發(fā)生的過程(1)。
一些稱為JNK底物的轉(zhuǎn)錄因子是Jun蛋白(c-jun、JunB和JunD)、有關的轉(zhuǎn)錄因子ATF2和ATFa、Ets轉(zhuǎn)錄因子(如Elk-1和Sap-1)、腫瘤抑制基因p53和細胞死亡結(jié)構域蛋白(DENN)。
已經(jīng)鑒定了三個不同的JNK酶作為基因JNK1、JNK2和JNK3的產(chǎn)物，還鑒定了10個不同的JNK同工型(2)。JNK1和JNK2在人組織中普遍表達，但JNK3只在大腦、心臟和睪丸中選擇性地表達(2)。每一種同工型各以不同的親和性與底物結(jié)合，這提示，在體內(nèi)，通過不同的JNK同工型有信號通路的底物專一性的調(diào)節(jié)。
JNK通路的激活已經(jīng)在許多疾病過程中得到記載，因此為針對此通路的藥物開發(fā)提供了理論基礎。此外，分子遺傳學方法也已經(jīng)證實了此通路在幾種疾病中的致病作用。
例如，自身免疫和炎性疾病因免疫系統(tǒng)不適當?shù)募せ疃l(fā)生。激活的免疫細胞表達許多基因，它們編碼炎性分子，包括細胞因子、生長因子、細胞表面受體、細胞粘合分子和降解酶。這些基因中的許多已知是由JNK通路通過轉(zhuǎn)錄因子c-Jun和ATF-2的激活而調(diào)節(jié)的。
在細菌脂多糖-刺激的巨噬細胞中JNK激活的抑制能有效地調(diào)控關鍵性的促炎性細胞因子TNFα的產(chǎn)生(3)。
JNK激活的抑制能降低與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)誘導表達有關的轉(zhuǎn)錄因子激活(4)，已知基質(zhì)金屬蛋白酶與類風濕性關節(jié)炎中促進軟骨和骨骼侵蝕及其它自免疫疾病中促進全身組織毀損有關。
在T細胞中JNK級聯(lián)也通過抗原刺激和CD28受體共刺激被激活(5)，并調(diào)節(jié)IL-2啟動子的產(chǎn)生(6)。T淋巴細胞的不適當激活引發(fā)許多自身免疫性疾病并延長其病程，包括哮喘、炎性腸綜合征和多發(fā)性硬化癥。
在易受阿爾茨海默氏病損傷的神經(jīng)元中和在有急性缺氧的病人的CA1神經(jīng)元中(7)，JNK3蛋白高度表達。在阿爾茨海默氏病人的腦受損區(qū)域中也發(fā)現(xiàn)了JNK3基因的表達(8)。此外，JNK3 KO小鼠的神經(jīng)元與野生型小鼠的神經(jīng)元比較，前者能抵抗由紅藻氨酸誘導的神經(jīng)元細胞凋亡。
基于這些發(fā)現(xiàn)，JNK信號通路，特別是JNK2和JNK3信號通路，被認為參與了細胞凋亡驅(qū)動的神經(jīng)變性疾病，如阿茨海默氏病、帕金森氏病、癲癇和發(fā)作、亨廷頓氏病、CNS疾病、創(chuàng)傷性腦損傷以及局部缺血性疾病和出血性中風。
已經(jīng)提出一些小分子作為JNK通路的調(diào)控劑(WO 00/35909；WO00/35906；WO 00/3592；WO 00/64872；WO 01/12609；WO 00/75118；WO01/12621)。
WO 01/47920公開了作為JNK抑制劑的式(A)所示苯并噻唑衍生物。
在治療CNS疾病(如腦疾病)中的一個普遍的問題是治療化合物輸送到CNS系統(tǒng)(如腦)中的問題。眾所周知，BBB阻止藥物輸送到CNS。
血腦屏障(BBB)是一種由毛細血管壁組成圍繞神經(jīng)膠質(zhì)的屏障，它限制物質(zhì)在血液和腦組織之間通行。
血腦屏障(BBB)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中維持自穩(wěn)態(tài)環(huán)境。輸送血液到大腦的毛細血管具有緊密的連接點，它們阻斷大多數(shù)分子通過毛細血管的內(nèi)皮細胞膜。雖然這些膜允許脂溶性物質(zhì)(如海洛因和其它精神活性藥物)的通過，但水溶性物質(zhì)(如葡萄糖、蛋白質(zhì)和氨基酸)不能通過BBB。存在受介導的轉(zhuǎn)運葡萄糖和必需氨基酸跨越BBB的轉(zhuǎn)運機制。主動轉(zhuǎn)運機制將過量存在的分子(如鉀)從腦中除去。作為綜述，見Goldstein & Betz，1986；Betz等，1994，它們?nèi)拷Y(jié)合在此作為參考(14；15)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及哌嗪苯并噻唑衍生物，主要用于腦缺血性疾病和/或CNS疾病的治療和預防。本發(fā)明還涉及它們的制備方法。
具體實施方式
以下各段提供各種化學基團的定義，這些化學基團構成本發(fā)明的化合物，這些定義始終如一地應用在整個說明書和權利要求書中，除非另外表述的定義提供更為廣泛的含義。
“C1-C6-烷基”指具有1-6個碳原子的單價烷基。該術語的例子有甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正己基等基團。
“芳基”指具有單環(huán)(如苯基)或多稠合環(huán)(如萘基)的6-14個碳原子的不飽和芳族碳環(huán)基團。優(yōu)選的芳基包括苯基、萘基、菲基等。
“C1-C6-烷基芳基”指具有芳基取代基的C1-C6-烷基，包括芐基、苯乙基等。
“雜芳基”指單環(huán)雜芳族，或雙環(huán)或三環(huán)稠環(huán)雜芳族基團。雜芳族基團的具體例子包括可任選取代的吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、1，3，4-三嗪基、1，2，3-三嗪基、苯并呋喃基、[2，3-二氫]苯并呋喃基、異苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并三唑基、異苯并噻吩基、吲哚基、異吲哚基、3H-吲哚基、苯并咪唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹嗪基、喹唑啉基、2，3-二氮雜萘基、喹喔啉基、噌啉基、1，5-二氮雜萘基、吡啶并[3，4-b]吡啶基、吡啶并[3，2-b]吡啶基、吡啶并[4，3-b]吡啶基、喹啉基、異喹啉基、四唑基、5，6，7，8-四氫喹啉基、5，6，7，8-四氫異喹啉基、嘌呤基、蝶啶基、咔唑基、呫噸基、或苯并喹啉基。
“C1-C6-烷基雜芳基”指有雜芳基取代基的C1-C6-烷基，包括2-呋喃基甲基、2-噻吩基甲基、2-(1H-吲哚-3-基)乙基等。
“C2-C6-烯基”指優(yōu)選有2-6個碳原子并有至少1個或2個烯基不飽和度位點的烯基基團。優(yōu)選的烯基基團包括乙烯基(-CH＝CH2)、正-2-丙烯基(烯丙基，-CH2CH＝CH2)等。
“C2-C6-烯基芳基”指有芳基取代基的C2-C6-烯基基團，包括2-苯基乙烯基等。
“C2-C6-烯基雜芳基”指有雜芳基取代基的C2-C6-烯基基團，包括2-(3-吡啶基)乙烯基等。
“C2-C6-炔基”指優(yōu)選有2-6個碳原子并有至少1-2個炔基不飽和度位點的炔基基團，優(yōu)選的炔基基團包括乙炔基(-C≡CH)和丙炔基(-CH2C≡CH)等。
“C2-C6-炔基芳基”指有芳基取代基的C2-C6-炔基基團，包括苯基乙炔基等。
“C2-C6-炔基雜芳基”指有雜芳基取代基的C2-C6-炔基基團，包括2-噻吩基乙炔基等。
“C3-C8-環(huán)烷基”指3-8個碳原子的單環(huán)飽和碳環(huán)基團(如環(huán)己基)或多縮合環(huán)飽和碳環(huán)(如降冰片基)。優(yōu)選的環(huán)烷基包括環(huán)戊基、環(huán)己基、降冰片基等。
“雜環(huán)烷基”指根據(jù)上述定義的C3-C8-環(huán)烷基，其中最多3個碳原子被選自O、S、NR的雜原子替代，R定義為氫或甲基。優(yōu)選的雜環(huán)烷基包括吡咯烷、哌啶、哌嗪、1-甲基哌嗪、嗎啉等。
“C1-C6-烷基環(huán)烷基”指有環(huán)烷基取代基的C1-C6-烷基基團，包括環(huán)己基甲基、環(huán)戊基丙基等。
“C1-C6-烷基雜環(huán)烷基”指有雜環(huán)烷基取代基的C1-C6烷基基團，包括2-(1-吡咯烷基)乙基、4-嗎啉基甲基、(1-甲基-4-哌啶基)甲基等。
“羧基”指-C(O)OH基團。
“C1-C6-烷基羧基”指有羧基取代基的C1-C6-烷基基團，包括2-羧基乙基等。
“酰基”指基團-C(O)R，其中R包括“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。
“C1-C6烷基?；爸赣絮；〈腃1-C6烷基基團，包括2-乙?；一?。
“酰氧基”指基團-OC(O)R，其中R包括“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。
“C1-C6烷基酰氧基”指有酰氧基取代基的C1-C6烷基基團，包括2-乙酰氧基乙基等。
“烷氧基”指基團-OR，其中R包括“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。優(yōu)選的烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、苯氧基等。
“C1-C6-烷基烷氧基”指有烷氧基取代基的C1-C6-烷基基團，包括2-乙氧基乙基等。
“烷氧基羰基”指基團-C(O)OR，其中R包括H、“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基烷氧基羰基”指有烷氧基羰基取代基的C1-C6-烷基基團，包括2-(芐氧基羰基)乙基等。
“氨基羰基”指基團-C(O)NRR’，其中R、R’各自獨立地包括H、“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基氨基羰基”指有氨基羰基取代基的C1-C6-烷基基團，包括2-(二甲基氨基羰基)乙基等。
“?；被敝富鶊F-NRC(O)R’，其中R、R’各自獨立地包括H、“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基?；被敝赣絮；被〈腃1-C6-烷基基團，包括2-(丙酰基氨基)乙基等。
“脲基”指基團-NRC(O)NR’R”，其中R、R’、R”各自獨立地包括H、“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”、“C1-C6烷基雜芳基”、“環(huán)烷基”或“雜環(huán)烷基”，其中R’和R”與它們所連接的氮原子一起可任選地形成3-8元雜環(huán)烷基環(huán)。
“C1-C6-烷基脲基”指有脲基取代基的C1-C6-烷基基團，包括2-(N’-甲基脲基)乙基等。
“氨基”指基團-NRR’，其中R、R’各自獨立地包括H、“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”、“C1-C6烷基雜芳基”、“環(huán)烷基”或“雜環(huán)烷基”，其中R’和R”與它們所連接的氮原子一起可任選地形成3-8元雜環(huán)烷基環(huán)。
“C1-C6-烷基氨基”指有氨基取代基的C1-C6-烷基基團，包括2-(1-吡咯烷基)乙基等。
“銨”指帶正電荷的基團-N+RR’R”，其中R、R’、R”各自獨立地為“C1-C6-烷基”、“C1-C6烷基芳基”、“C1-C6烷基雜芳基”、“環(huán)烷基”或“雜環(huán)烷基”，其中R和R’與它們所連接的氮原子一起可任選地形成3-8元雜環(huán)烷基環(huán)。
“鹵素”指氟、氯、溴、碘原子。
“磺酰氧基”指基團-OSO2-R，其中R選自氫、“C1-C6-烷基”、被鹵素取代的“C1-C6-烷基”(如-OSO2-CF3基團)、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基磺酰氧基”指有磺酰氧基取代基的C1-C6-烷基基團，包括2-(甲基磺酰氧基)乙基等。
“磺酰基”指基團-SO2-R，其中R選自氫、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6-烷基”、被鹵素取代的“C1-C6-烷基”(如-SO2-CF3基團)、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基磺?；敝赣谢酋；〈腃1-C6-烷基基團，包括2-(甲基磺?；?乙基等。
“亞磺酰基”指基團-S(O)-R，其中R選自氫、“C1-C6-烷基”、被鹵素取代的“C1-C6-烷基”(如-SO-CF3基團)、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基亞磺?；敝赣衼喕酋；〈腃1-C6-烷基基團，包括2-(甲基亞磺?；?乙基等。
“硫烷基”指基團-S-R，其中R包括“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。優(yōu)選的硫烷基包括甲基硫烷基、乙基硫烷基等。
“C1-C6-烷基硫烷基”指有硫烷基取代基的C1-C6-烷基基團，包括2-(乙基硫烷基)乙基等。
“磺?；被敝富鶊F-NRSO2-R’，其中R、R’各自獨立地包括H、“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基磺?；被敝赣谢酋；被〈腃1-C6-烷基基團，包括2-(乙基磺?；被?乙基等。
“取代或未取代的”除非被各個取代基的定義另行限制，以上所列舉的基團，如“烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”和“雜芳基”等基團可任選地被1-5個取代基所取代，所述的取代基選自“C1-C6烷基”、“C2-C6烯基”、“C2-C6炔基”、“環(huán)烷基”、“雜環(huán)烷基”、“C1-C6烷基芳基”、“C1-C6烷基雜芳基”、“C1-C6烷基環(huán)烷基”、“C1-C6烷基雜環(huán)烷基”、“氨基”、“銨”、“?；?、“酰氧基”、“酰基氨基”、“氨基羰基”、“烷氧基羰基”、“脲基”、“芳基”、“雜芳基”、“亞磺?；?、“磺?；薄ⅰ巴檠趸?、“硫烷基”、“鹵素”、“羧基”、三鹵甲基、氰基、羥基、巰基、硝基等?；蛘咚龅娜〈部砂@樣的情況，其中相鄰的取代基發(fā)生了閉環(huán)，主要是當涉及鄰位的官能取代基時，因此形成如內(nèi)酰胺、內(nèi)酯、環(huán)狀酸酐，還例如閉環(huán)形成縮醛、硫縮醛、縮醛胺以得到保護基團。
“藥學上可接受的鹽或復合物”指以下定義的式(I)或(II)化合物的鹽或復合物，它們保留了所需的生物活性。這些鹽的例子包括但不限于與無機酸(如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)形成的酸加成鹽，及與有機酸(如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、富馬酸、馬來酸、抗壞血酸、苯甲酸、單寧酸、4，4’-亞甲基雙(3-羥基-2-萘酸)(pamoic acid)、藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸)形成的鹽。所述的化合物也可作為藥學上可接受的季鹽給藥，如本領域技術人員所知的，它們特別包括式-NRR’R”+Z-所示季銨鹽，其中R、R’、R”各自獨立地是氫、烷基或芐基、C1-C6-烷基、C2-C6-烯基、C2-C6-炔基、C1-C6-烷基芳基、C1-C6-烷基雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基，Z是抗衡離子，包括氯、溴、碘離子，-O-烷基、甲苯磺酸、甲基磺酸、磺酸、磷酸或羧酸(如苯甲酸、琥珀酸、乙酸、羥基乙酸、馬來酸、蘋果酸、富馬酸、檸檬酸、酒石酸、抗壞血酸、肉桂酸、扁桃酸和二苯基乙酸)離子。
“藥學活性衍生物”指任何化合物，在給予接受者時，能夠直接或間接地提供此處公開的活性。
“對映體過量”(ee)指由不對稱合成，即涉及非外消旋的起始材料和/或試劑的合成，或包含至少一個對映選擇性步驟的合成所得到的產(chǎn)物，由此產(chǎn)生的一個對映體的超過量至少為約52％ee。
所述化學式也包含其互變異構體、其幾何異構體、其光學活性形式(對映體、非對映體)及其外消旋形式、以及其藥學上可接受的鹽。優(yōu)選的式(I)所示藥學上可接受的鹽為與藥學上可接受的酸形成的酸加成鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽或硫酸氫鹽、磷酸鹽或磷酸氫鹽、乙酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、葡糖酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽及對甲苯磺酸鹽。
本發(fā)明化合物是式I所示的那些化合物。
式(I)中的R選自氫、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6-烷基芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的C1-C6-烷基雜芳基、取代或未取代的C2-C6-烯基、取代或未取代的C2-C6-烯基芳基、取代或未取代的C2-C6-烯基雜芳基、取代或未取代的C2-C6-炔基、取代或未取代的C2-C6-炔基芳基、取代或未取代的C2-C6-炔基雜芳基、取代或未取代的C3-C8環(huán)烷基、取代或未取代的雜環(huán)烷基、取代或未取代的C1-C6-烷基環(huán)烷基、取代或未取代的C1-C6烷基雜環(huán)烷基、取代或未取代的C1-C6-烷基羧基、?；?、取代或未取代的C1-C6-烷基?；ⅤＱ趸?、取代或未取代的C1-C6-烷基酰氧基、取代或未取代的C1-C6-烷基烷氧基、烷氧基羰基、取代或未取代的C1-C6-烷基烷氧基羰基、氨基羰基、取代或未取代的C1-C6-烷基氨基羰基、酰基氨基、取代或未取代的C1-C6-烷基酰基、脲基、取代或未取代的C1-C6-烷基脲基、氨基、取代或未取代的C1-C6-烷基氨基、磺酰氧基、取代或未取代的C1-C6-烷基磺酰氧基、磺?；?、取代或未取代的C1-C6-烷基磺?；?、亞磺?；⑷〈蛭慈〈腃1-C6-烷基亞磺?；?、硫烷基、取代或未取代的C1-C6-烷基硫烷基、磺?；被⑷〈蛭慈〈腃1-C6-烷基磺?；被?；R1選自H、鹵素、氰基、硝基、氨基、取代或未取代的C1-C6-烷基、特別是C1-C3烷基如甲基或乙基或CF3、取代或未取代的C2-C6-烯基、取代或未取代的C2-C6-炔基、取代或未取代的C1-C6-烷基-芳基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的C1-C6-烷基-雜芳基、-C(O)-OR2、-C(O)-R2、-C(O)NR2R2’、-(SO2)R2，其中R2和R2’各自獨立選自氫、取代或未取代的C1-C6-烷基、取代或未取代的C2-C6-烯基、取代或未取代的C2-C6-炔基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的雜芳基、取代或未取代的C1-C6-烷基-芳基、取代或未取代的C1-C6-烷基雜芳基。優(yōu)選R1是H。
n是0-3的整數(shù)，更優(yōu)選n是1。
按照本發(fā)明的一個更優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的哌嗪苯并噻唑衍生物是那些其中R為氫、C1-C3烷基、氨基羰基、C1-C6-烷基烷氧基羰基、C1-C6-烷基烷氧基、C1-C6-烷基酰氧基、烷氧基羰基、C1-C6-烷基氨基羰基的化合物。特別是，R為H或C1-C3-烷基(特別是甲基或乙基)，或C1-C6-烷基烷氧基。
本發(fā)明還包含具有下式的相應的互變異構體 本發(fā)明具體的哌嗪苯并噻唑衍生物選自1，3-苯並噻唑-2-基[2-({4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]芐基}氧)嘧啶-4-基]乙腈1，3-苯並噻唑-2-基[2-({4-[(4-芐基-哌嗪-1-基)甲基]-芐基}氧)嘧啶-4-基]乙腈1，3-苯並噻唑-2-基(2-{[4-(哌嗪-1-基甲基)芐基]氧}嘧啶-4-基)乙腈1，3-苯並噻唑-2-基[2-({4-[(4-甲?；哙?1-基)甲基]芐基}氧)嘧啶-4-基]乙腈[2-({4-[(4-乙?；哙?1-基)甲基]芐基}氧)嘧啶-4-基](1，3-苯並噻唑-2-基)乙腈(3H-苯並噻唑-2-亞基)-{2-[4-(4-[1，2，4]噁二唑-3-基甲基-哌嗪-1-基甲基)-芐基氧]-嘧啶-4-基}-乙腈4-(4-{4-[(3H-苯並噻唑-2-亞基)-氰基-甲基]-嘧啶-2-基氧甲基}-芐基)-哌嗪-1-羧酸甲酯
2-[4-(4-{4-[(3H-苯並噻唑-2-亞基)-氰基-甲基]-嘧啶-2-基氧甲基}-芐基)-哌嗪-1-基]-乙酰胺(2-{4-[4-(2-氨基-乙酰基)-哌嗪-1-基甲基]-芐基氧}-嘧啶-4-基)-(3H-苯並噻唑-2-亞基)-乙腈[4-(4-{4-[(3H-苯並噻唑-2-亞基)-氰基-甲基]-嘧啶-2-基氧甲基}-芐基)-哌嗪-1-基]-乙酸乙酯(3H-苯並噻唑-2-亞基)-(2-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基甲基]-芐基氧}-嘧啶-4-基)-乙腈4-(4-{4-[(3H-苯並噻唑-2-亞基)-氰基-甲基]-嘧啶-2-基氧甲基}-芐基)-哌嗪-1-羧酸二甲基酰胺(3H-苯並噻唑-2-亞基)-{2-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-芐基氧]-嘧啶-4-基}-乙腈(3H-苯並噻唑-2-亞基)-(2-{4-[4-(2-羥基-乙基)-哌嗪-1-基甲基]-芐基氧}-嘧啶-4-基)-乙腈本發(fā)明還包括式I化合物的幾何異構體、光學活性形式、對映體、非對映體以及它們的外消旋體，還包括藥學上可接受的鹽，以及式I所示藥學活性的哌嗪苯并噻唑衍生物。
本發(fā)明化合物是JNKs，特別是JNK3的抑制劑，因此可用于治療由JNKs介導的疾病。令人驚喜的是，本發(fā)明化合物表現(xiàn)出相當大的跨越血腦屏障(BBB)的能力，因此對腦缺血性疾病或CNS疾病的治療特別有用。因此，本發(fā)明的另一個方面是本發(fā)明的哌嗪苯并噻唑衍生物在治療和/或預防腦缺血性疾病或CNS疾病中的應用。
本發(fā)明的再一個方面涉及式I或式II所示哌嗪苯并噻唑衍生物在制備治療腦缺血性疾病或CNS疾病的藥物組合物中的應用。
本發(fā)明的還有一個方面是式I或式II所示新穎的苯并噻唑衍生物的制備方法。流程I列出式I化合物的一般合成方法。
流程I 如以上流程I所例示的，式III起始化合物與式IV所示適當取代(活化)的嘧啶，像鹵代嘧啶如2，4-二氯代嘧啶反應，產(chǎn)生嘧啶子基苯并噻唑化合物IV。該反應優(yōu)選在合適的堿(如氫化鈉、氫化鉀等)的存在下在無水的惰性氣氛中進行，優(yōu)選在極性溶劑如DMF、DMA、MeCN或THF中在約-78℃-100℃范圍的溫度進行。
式III的苯并噻唑可以購得(如從Maybridge Chemical Co.Ltd)或可從購得的化合物用常規(guī)的程序制備。
鹵化的嘧啶，如式VI所示2，4-二氯代嘧啶，也可購得(如從Aldrich，F(xiàn)luka，Sigma等)或可通過常規(guī)的方法制備。
為了得到式(I)所示的最終哌嗪苯并噻唑，如流程II所示，優(yōu)選地將式(IV)所示中間體化合物與式(V)所示合適的醇反應。
流程II 該反應優(yōu)選在溶劑如DMF、DMA、NMP、DMSO或ACN存在下，最優(yōu)選DMA或MeCN，在合適的堿如tBuOK、CS2CO3(碳酸銫)存在下，有或沒有CuI、NaH等，最優(yōu)選NaH，在約25-120℃范圍的溫度進行。在一個優(yōu)選的方法中，起始化合物在DMA溶液中在NaH存在下于25-100℃加熱。
式(V)的中間體化合物可通過流程III所示合成方法得到。在所述的流程III中，起始的砌塊是用來制備芐基醇的對甲苯甲酸甲酯。在式V所示苯乙醇或苯基丙醇的情況下，對甲苯甲酸甲酯可被適當?shù)钠鹗疾牧?購得的或用常規(guī)方法制備的)代替。
流程III
本文所用的“治療”指抑制或停止疾病、失調(diào)或病況的發(fā)展和/或使得疾病、失調(diào)或病況的癥狀減輕、緩解或消退。本領域技術人員應理解各種方法和測試可用來評價疾病、失調(diào)或病況的發(fā)展，同樣，各種方法和測試可用來評價疾病、失調(diào)或病況的癥狀的減輕、緩解或消退。
當用作藥物時，本發(fā)明的哌嗪苯并噻唑衍生物通常以藥物組合物的形式給藥。因此，包含式I化合物和藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本領域技術人員知道適用于配制藥物組合物的各種載體、稀釋劑或賦形劑化合物。本發(fā)明還提供用作藥物的化合物。
本發(fā)明化合物，與常規(guī)使用的佐劑、載體、稀釋劑或賦形劑一起可配成藥物組合物形式及其單位劑型，該劑型可以是固體(如片劑或填充的膠囊)或液體(如溶液、懸浮液、乳液、酏劑)或填充它們的膠囊，它們都用于口服，或者以滅菌可注射溶液的形式用于胃腸外給藥(包括皮下給藥)。這樣的藥物組合物和它的單位劑型可包含常規(guī)比例的組分，有或沒有其它活性化合物或成分，這樣的單位劑型可含有與要使用的日劑量范圍相稱的任何合適有效量的活性成分。
本發(fā)明藥物組合物可通過各種途徑給藥，包括經(jīng)口、直腸、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、鞘內(nèi)、腹腔內(nèi)和鼻內(nèi)給藥。根據(jù)要采用的給藥途徑，化合物優(yōu)選配制成可注射的、局部用的、或口服的組合物?？诜o藥的組合物可采用大液體溶液或懸浮液的形式，或大粉劑。但是，更為通用的是，組合物以單位劑量的形式提供，以方便精確投藥。術語“單位劑型”指物理學上分離的單位，適合用作單元劑量用于人或其它哺乳動物，這樣的單位含有計算好以產(chǎn)生所需治療效果的預定量的活性物質(zhì)，與合適的藥用賦形劑合在一起。典型的單位劑型包括液體組合物的預填充的預定量的安瓿或注射器，或固體組合物的丸劑、片劑、膠囊等。在這樣的組合物中，哌嗪苯并噻唑化合物通常是少量的成分(約0.1-50wt％，或優(yōu)選1-40wt％)，其余的是有助于形成所需劑型的各種賦形劑或載體和加工助劑。
適于口服給藥的液體形式可包括合適的水性或非水性賦形劑，帶有緩沖劑、懸浮和分散劑、色料、調(diào)味劑等。固體形式可包括，例如，任何下列成分或類似性質(zhì)的化合物粘合劑如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑如淀粉或乳糖；崩解劑如藻酸、乙醇酸淀粉鈉(Primogel)或玉米淀粉；潤滑劑如硬脂酸鎂；助流劑如膠體二氧化硅；甜味劑如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑如薄荷、水楊酸甲酯或橙調(diào)味劑。
可注射組合物通常是基于可注射滅菌鹽水或磷酸鹽緩沖的鹽水或本領域已知的其它可注射載體。如上所述，式I所示哌嗪苯并噻唑衍生物在這樣的組合物中通常是少量的組分，通常是在0.05-10wt％的范圍內(nèi)，其余的是可注射載體等。
上述用于口服給藥的組分或可注射組合物只是代表性的。其它材料和加工技術等見Remington氏《制藥科學》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)第17版的第8部分(1985，Marck Publishing Company，Easton，Penns基vania)，該文獻結(jié)合在此引為參考。
本發(fā)明的化合物還可以持續(xù)釋放形式或從持續(xù)釋放藥物輸送系統(tǒng)給藥。代表性的持續(xù)釋放材料的描述可見所引的資料Remington氏《制藥科學》(Remington’s Pharmaceutical Sciences)。
以下將通過一些實施例來說明本發(fā)明，但它們不應視為對本發(fā)明的限制。
以下實施例中的HPLC、NMR和MS數(shù)據(jù)如下獲得HPLCWatersSymmetry C8 50×4.6mm柱，條件a-MeCN/H2O 0.09％TFA，0-100％(10分鐘)；b-MeCN/H2O，5-100％(8分鐘)，極大標繪230-400nm；MSPE-SCIEX API150 EX(APCI和ESI)，LC/MS譜Waters ZMD(ES)；1H-NMRBrukerDPX-300MHz。
純化如下進行制備型HPLC Waters Prep LC 4000系統(tǒng)，配備的柱為PrepNova-PakHR C186微米60，40×30mm(最高100毫克)或40×300mm(最高1克)。所有的純化都以MeCN/H2O 0.09％TFA梯度進行。
實施例A中間體化合物(IV)的制備(見流程1)1，3-苯并噻唑-2-基(2-氯-4-嘧啶基)-乙腈在惰性氣氛下，向攪拌下的NaH(60％在油中，9.2g，0.23mol)在干THF(200ml)中的懸浮液中，滴加1，3-苯并噻唑-2-基-乙腈(20g，0.15mol)在干THF(200ml)中的溶液。室溫攪拌1.5小時后，滴加2，4-二氯嘧啶(17.1g，0.15mol)在干THF(200ml)中的溶液。反應混合物在惰性氣體下室溫攪拌，直到原料完全消失。加入水終止反應，蒸發(fā)THF。加入水，用1M鹽酸水溶液使懸浮液稍微酸化。過濾得到的沉淀，用水充分洗滌，直到中性，然后用己烷洗滌以除去油。在40℃真空干燥粗產(chǎn)物固體，得到28g(84％)標題化合物，為淡黃色粉末熔點246℃(分解)；MS286.8(M+1)；HPLC(條件a，268nm)97％，滯留時間5.66分鐘；1HNMR(DMSO-d6)δ13.25(brs，1H，exchangeable)，8.09(d，J＝4.14Hz，1H)，7.90(d，J＝7.53Hz，1H)，7.61(d，J＝7.92Hz，1H)，7.39-7.34(m，1H)，7.20-7.15(m，1H)，6.96(br d，1H)。
CHN分析C13H7ClN4S計算C 54.19％，H 2.48％，N 19.45％；發(fā)現(xiàn)C53.35％，H 2.77％，N 17.62％。
實施例B中間體化合物(Va)的制備，(見流程3)4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基-苯基)-甲醇步驟1對甲苯甲酸甲酯于5℃攪拌下向?qū)妆郊姿?175g，1.28mol)在甲醇(2L)中的溶液滴加亞硫酰氯(612g，5.14mol)?；旌衔锘亓鬟^夜，然后蒸發(fā)溶劑。得到的殘渣用10％NaHCO3水溶液(pH～8)處理。用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物，用水洗滌，干燥。除去溶劑，粗產(chǎn)物通過柱色譜純化(石油醚/乙酸乙酯)，得到對甲苯甲酸甲酯，為無色液體(180g，93％)。
步驟24-甲氧基羰基芐基溴于50℃向?qū)妆郊姿峒柞?180g，1.2mol)和N-溴代琥珀酰亞胺(235g，1.32mol)在CCl4(2L)中的混合物分批加入過氧化苯甲酰(18g，0.1次)?；旌衔锘亓?小時。然后將混合物冷卻到40℃，濾出固體。濾液濃縮，得到4-甲氧基羰基芐基溴(252g，91％)，為淡黃色液體。
步驟3N-甲基(4-甲氧基羰基芐基)哌嗪于0℃向N-甲基哌嗪(80g，0.91mol)和三乙胺(232g，2.29mol)的無水乙醇(1750ml)溶液中滴加4-甲氧基羰基芐基溴(252g，1.1034mol)的無水乙醇(250ml)溶液?；旌衔锸覝財嚢柽^夜。濃縮混合物得到的殘渣溶解在1.5NHCl(3L)中，用乙醚(3次)和乙酸乙酯洗滌。溶液用10％NaOH水溶液中和并用10％NaHCO3水溶液堿化到pH＝8。用CHCl3萃取產(chǎn)物，用水和鹽水洗滌，用Na2SO4干燥。除去溶劑，粗產(chǎn)物用柱色譜純化(CHCl3/MeOH)，得到N-甲基(4-甲氧基羰基芐基)哌嗪(150g，70％)，為褐色液體。
步驟4(4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基-苯基)-甲醇于0℃氮氣下，向LAH(36g，0.957mol)在干THF(1750ml)中的混合物中滴加N-(4-甲氧基羰基芐基)溴(150g，0.638mol)在干THF(250ml)中的溶液?；旌衔镌贜2下室溫攪拌過夜，然后用10％NaOH水溶液終止反應。濾出固體，濾液濃縮。殘渣溶解在DCM(1L)中，用水洗滌。蒸發(fā)溶劑，得到N-甲基(4-羥基甲基芐基)哌嗪(96g，73％)，為淡黃色液體。
M+(ES)221.21HNMR(DMSO-d6)δ7.26-7.19(m，4H)，5.11(t，J＝5.65Hz，1H)，4.45(d，J＝5.65HZ，2H)，3.40(s，2H)，3.39-2.20(m，8H)，2.12(s，3H)。
以類似的方法得到以下的中間體化合物。
3-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基-苯基)-甲醇1H NMR(DMSO-d6)δ7.27-7.11(m，4H)，5.12(t，J＝5.65Hz，1H)，4.46(d，J＝5.65Hz，2H)，3.43(s，2H)，3.28(br t，4H)，2.27(t，J＝4.9Hz，4H)，1.40(s，9H)。
4-(4-羥基甲基-芐基)-哌嗪-1-羧酸叔丁酯M+(ES)307.2；1H NMR(DMSO-d6)δ7.27-7.21(m，4H)，5.12(t，J＝5.65Hz，1H)，4.46(d，J＝5.65Hz，2H)，3.43(s，2H)，3.28(br t，4H)，2.27(t，J＝4.9Hz，4H)，1.40(s，9H)。
{4-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]苯基}甲醇Y＝78％，M+(ES)235.3；1H NMR(DMSO-d6)δ7.26-7.19(m，4H)，5.12(t，J＝5.6Hz，1H)，4.46(br d，2H)，3.33(s，2H)，2.44-2.20(m，8H)，2.27(q，J＝7.2Hz，2H)，0.95(t，J＝7.2Hz，3H)。
(4-{[4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基]甲基}苯基)甲醇Y＝66％，M+(ES)265；1H NMR(DMSO-d6)δ7.23-7.22(m，4H)，5.11(t，J＝5.7Hz，1H)，4.45(br d，2H)，3.40(s，2H)，3.38(t，J＝5.9Hz，2H)，3.20(s，3H)，2.42(t，J＝5.9Hz，2H)，2.48-2.25(m，8H)。
4-{[4-芐基-哌嗪-1-基]甲基}苯基)甲醇Y＝78％，M+(ES)297。
實施例11，3-苯并噻唑-2-基[2-({4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-芐基}氧)嘧啶-4-基]乙腈(三甲磺酸鹽)的制備(見流程2)于攪拌下，向NaH(60％在油中，1.68g，69.75mol)在干DMA(80ml)中的懸浮液中加入(4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基-苯基)-甲醇(流程2，式V化合物)(7.68g，34.88mmol)的干DMA(80ml)溶液。形成的懸浮液在惰性氣體下室溫攪拌1小時。滴加IV(5g，17.44mmol)在DMA(80ml)中的溶液，混懸液在惰性氣體下100℃攪拌。4小時后冷卻反應液，加入水終止反應。蒸發(fā)溶劑，用水(100ml)收集殘渣。加入10mLEtOAc和環(huán)己烷洗除去從NaH帶來的殘油，溶液在4℃儲藏1天。濾出形成的沉淀，用水洗滌到中性pH，然后用環(huán)己烷洗滌，得到6.17g粗堿。
將3.5g粗堿溶放入水(125ml)中，加入1.25ml甲磺酸。溶液冷凍干燥，得到橙黃色固體，用ACN洗滌，30℃真空干燥，得到4.99g(Y＝66％)的標題化合物，為黃色粉末。
M-(ESI)469.1；M+(ESI)471.16；HPLC(條件b，極大圖標)％，滯留時間2.01分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.30(very br s，1H)，8.06-8.03(m，2H)，7.82(d，J＝8.3Hz，1H)，7.76(d，J＝7.9Hz，2H)，7.69(d，J＝7.9Hz，2H)，7.56-7.51(m，1H)，7.40-7.35(m，1H)，6.88(br d，1H)，5.82(s，2H)，4.52(s，2H)，3.85-3.57(m，4H)，3.48-3.26(m，4H)，2.95(s，3H)，2.48(s，9H)。
實施例21，3-苯并噻唑-2-基[2-({4-[(4-芐基-哌嗪-1-基)甲基]-芐基}氧)嘧啶4-基]乙腈(2Mes)的制備按照與上面實施例1所述相同的方法制備標題化合物，其中用(4-(4-芐基-哌嗪-1-基甲基-苯基)-甲醇代替(4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基-苯基)-甲醇。
Y42％；M-(ESI)545.7；M+(ESI)547.2；HPLC(條件b，極大圖標)99.8％，滯留時間2.52分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.95-7.93(m，2H)，7.73(d，J＝7.9Hz，1H)，7.67-7.64(m，2H)，7.56-7.40(m，8H)，7.29-7.24(m，1H)，6.75(br d，1H)，5.73(s，2H)，4.45-4.15(m，4H)，3.60-3.30(m，4H)，3.25，2.90(m，4H)。
實施例3(3H-苯并噻唑-2-亞基)-{2-[4-(4-乙基哌嗪-1-基甲基)-芐氧基]-嘧啶-4-基}-乙腈的制備按照與上面實施例1所述相同的方法制備標題化合物，其中用{4-[(4-乙基-哌嗪-1-基)甲基]苯基}甲醇代替(4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基-苯基)-甲醇。
Y＝83％，M+(ES)485.18；HPLC(條件b，極大圖標)97.8％，滯留時間2.06分鐘。1H NMR(DMSO-d6)δ7.95(d，J＝7.9Hz，1H)，7.90(br d，1H)，7.74(d，J＝7.9Hz，1H)，7.67(d，J＝7.9Hz，2H)，7.58(d，J＝7.9Hz，1H)，7.45-7.40(m，1H)，7.30-7.24(m，1H)，6.73(br d，1H)，5.73(s，2H)，4.32(s，2H)，4.42-4.23(m，2H)，3.76-3.38(m，4H)，3.32-2.89(m，4H)，1.21(t，J＝7.1Hz，3H)。
實施例4(3H-苯并噻唑-2-亞基)-(2-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基甲基]-芐氧基}-嘧啶-4-基)-乙腈(3TFA)的制備按照與上面實施例1所述相同的方法制備標題化合物，其中用(4-{[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]甲基}苯基)甲醇代替(4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基-苯基)-甲醇。
Y＝33％，M+(ES)515.06；HPLC(條件b，極大圖標)99.5％，滯留時間2.10分鐘。1H NMR(DMSO-d6)δ7.93(d，J＝7.9Hz，1H)，7.87(br d，1H)，7.74(d，J＝8.3Hz，1H)，7.63(d，J＝7.9Hz，2H)，7.50(d，J＝7.90Hz，2H)，7.44-7.39(m，1H)，7.28-7.23(m，1H)，6.70(br d，1H)，5.71(s，2H)，4.10(s，2H)，3.63-3.60(m，2H)，3.50-2.90(m，13H)。
實施例51，3-苯并噻唑-2-基(2-{[4-(哌嗪-1-基甲基)-芐基]氧}-嘧啶-4-基)乙腈(3TFA)的制備按照與上面實施例1所述相同的方法制備標題化合物，其中用(4-(4-Boc-哌嗪-1-基甲基-苯基)甲醇代替(4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基-苯基)-甲醇。得到Boc保護的粗堿。
將Boc保護的粗堿放在DCM/TFA(9∶1)的混合物中，室溫攪拌2小時。室溫蒸發(fā)DCM。殘渣在乙醚中研磨，過濾，室溫真空干燥過夜。用制備性HPLC純化后，收集純流份，冷凍干燥，得到3.03g(34％)的標題化合物，為黃色粉末。Y＝34％；M-(ES)455.2；M+(ES)457.4；HPLC(條件b，極大圖標)99.7％，滯留時間1.98分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.00(br s，1H)，7.93(d，J＝7.6Hz，1H)，7.87(br d，1H)，7.74(d，J＝7.9Hz，1H)，7.63(d，J＝7.9Hz，2H)，7.51(D，J＝7.9Hz，2H)，7.45-7.39(m，1H)，7.28-7.23(m，1H)，6.72(d，J＝6.4Hz，1H)，5.71(s，2H)，4.10(s，2H)，3.32-3.18(m，4H)，3.13-2.92(m，4H)。
實施例61，3-苯并噻唑-2-基[2-({4-[(4-甲酰基哌嗪-1-基)甲基]-芐基}氧)-嘧啶-4-基]乙腈(2TFA)的制備在密封容器中，將實施例3得到的Boc-去保護的粗堿(0.6g，1.31mmol)懸浮在15ml甲酸甲酯中。反應混合物于40℃攪拌15天，然后冷卻到室溫。濾出形成的沉淀，用水洗滌。粗產(chǎn)物用制備性HPLC純化。收集純的流份，冷凍干燥，得到0.26g標題化合物，為黃色粉末。
Y＝28％；M-(ES)483.3；M+(ES)485.5；HPLC(條件b，極大圖標)99.7％，滯留時間2.18分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.95(br s，1H)，8.03(s，1H)，7.93(d，J＝7.9Hz，1H)，7.96-7.84(very br d，1H)，7.73(d，J＝7.9Hz，1H)，7.68(d，J＝7.9Hz，2H)，7.54(d，J＝7.9Hz，2H)，7.47-7.40(m，1H)，7.29-7.24(m，1H)，6.73(br d，1H)，5.73(s，2H)，4.36(s，2H)，4.05-2.80(m，8H)。
實施例7(2-{4-[4-(2-氨基-乙?；?-哌嗪-1-基甲基]-芐氧基}-嘧啶-4-基)-(3H-苯并噻唑-2-亞基)乙腈(2Mes)(3TFA)的制備向?qū)嵤├?中得到的Boc-去保護粗產(chǎn)物(2.9g，3.65mmol)的DMA(40ml)溶液中加入amberlyst A21(0.7g，3.76mmol)，溶液室溫攪拌20分鐘。濾除樹脂，向濾液中加入Boc-甘氨酸(0.74g，4mmol)、HOBt(0.73g，5.47mmol)、EDC(1.05g，5.47mmol)和DIPEA(1.9g，14.6mmol)在DMA(30ml)中的溶液。得到的溶液室溫攪拌過夜。減壓蒸發(fā)溶劑后，將得到的殘渣懸浮在MeOH/EtOAc混合液中，在4℃放置過夜。濾出沉淀，用EtOAc洗滌，40℃真空干燥，得到1.04g標題化合物，為黃色固體。
Y＝10％，M+(ES)514.06；HPLC(條件b，極大圖標)99.9％，滯留時間2.00分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.13-8.02(m，2H)，7.94-7.91(m，2H)，7.73(br d，1H)，7.67(d，J＝7.9Hz，2H)，7.54(d，J＝7.9Hz，2H)，7.45-7.40(m，1H)，7.29-7.24(m，1H)，6.74(br d，1H)，5.74(s，2H)，4.34(s，2H)，3.89(s，2H)，3.73-3.10(m，8H)。
實施例8[2-({4-[(4-乙?；?哌嗪-1-基)甲基]-芐基}氧)-嘧啶-4-基]-(1，3-苯并噻唑-2-基)乙腈(2TFA)的制備向?qū)嵤├?中得到的Boc-去保護粗產(chǎn)物(0.3g，0.66mmol)的DMA(6ml)溶液中加入三乙胺(0.09ml，0.66mmol)和乙酰氯(0.09ml，1.31mmol)，溶液室溫攪拌5分鐘。將反應混合物濃縮到快干，得到的殘渣用制備性HPLC純化。收集純流份，冷凍干燥，得到0.1g(21％)標題化合物，為黃色粉末。M-(ES)496.9；M+(ES)499.1；HPLC(條件b，極大圖標)99％，滯留時間2.19分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ10.05(br s，1H)，7.93(d，J＝7.9Hz，1H)，7.93-7.84(very brd，1H)，7.74(d，J＝7.9Hz，1H)，7.67(d，J＝8Hz，2H)，7.54(d，J＝7.9Hz，2H)，7.45-7.39(m，1H)，7.29-7.24(m，1H)，6.72(br d，1H)，5.73(s，2H)，4.36(s，2H)，4.02-3.87(m，1H)，3.42-2.75(m，7H)，2.01(s，3H)。
實施例94-(4-{4-[(3H-苯并噻唑-2-亞基)-氰基-甲基]-嘧啶-2-基氧甲基}芐基)-哌嗪-1-羧酶二甲基酰胺(2TFA)的制備向?qū)嵤├?中得到的Boc-去保護粗產(chǎn)物(0.5g，0.63mmol)的DMA(12ml)溶液中加入amberlyst A21(1.12g，5.35mmol)和二甲基氨基甲酰氯(0.12ml，1.31mmol)，0℃攪拌溶液1小時。由于沒有形成產(chǎn)物，將溶液溫熱到室溫12天，使原料完全消失。濾出樹脂，向濾液加入水。由于沒有形成沉淀，減壓蒸發(fā)溶劑，殘渣溶解在水中并冷凍干燥。得到的殘渣用制備性HPLC純化。收集純流份，冷凍干燥，得到85mg標題化合物，為黃色固體。
Y＝18％，M+(ES)528.09；HPLC(條件b，極大圖標)98.9％，滯留時間2.32分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.82(非常br s，1H)，7.94-7.86(m，2H)，7.73(d，J＝7.9Hz，1H)，7.67(d，J＝7.9Hz，2H)，7.55(d，J＝7.9Hz，2H)，7.44-7.39(m，1H)，7.28-7.23(m，1H)，6.72(br d，1H)，5.73(s，2H)，4.37(s，2H)，3.65-3.48(m，2H)，3.32-3.18(m，2H)，3.11-2.90(m，4H)，2.74(s，6H)。
用相似的方法得到以下化合物。
4-(4-{4-[(3H-苯并噻唑-2-亞基)氰基-甲基]嘧啶-2-基氧甲基}-芐基)-哌嗪-1-羧酸甲酯(2TFA)Y＝32％，M+(ES)514.85；HPLC(條件b，極大圖標)99％，滯留時間2.36分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.94-7.91(m，2H)，7.73(br d，1H)，7.66(d，J＝7.9Hz，2H)，7.53(d，J＝7.9Hz，2H)，7.46-7.40(m，1H)，7.29-7.24(m，2H)，6.73(br d，1H)，5.73(s，2H)，4.34(s，2H)，4.13-3.92(m，2H)，3.63(s，3H)，3.60-2.94(m，6H)。
實施例10(3H-苯并噻唑-2-亞基)-{2-[4-(4-[1.2.4]噁二唑-3-基甲基-哌嗪-1-基甲基)-芐氧基]-嘧啶-4-基}-乙腈(3TFA)的制備向?qū)嵤├?中得到的Boc-去保護粗產(chǎn)物(0.5g，0.63mmol)的DMA(10ml)溶液中加入amberlyst A21(0.7g，3.76mmol)，溶液室溫攪拌20分鐘。濾出樹脂，向濾液中加入3-(氯甲基)-1，2，4-噁二唑和碳酸鉀。得到的懸浮液室溫攪拌48小時。加入2.4當量的3-(氯甲基)-1，2，4-噁二唑并室溫攪拌3天后，原料才完全消失。過濾并減壓蒸發(fā)溶劑，得到的殘渣用制備性HPLC純化，收集純流份，冷凍干燥，得到110mg標題化合物，為黃色固體。
Y＝20％，M+(ES)538.94；HPLC(條件b，極大圖標)97％，滯留時間2.31分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.62(s，1H)，7.93-7.91(m，2H)，7.73(d，J＝7.9Hz，1H)，7.65(d，J＝7.9Hz，2H)，7.53(d，J＝7.9Hz，2H)，7.44-7.39(m，1H)，7.27-7.22(m，1H)，6.72(br d，1H)，5.72(s，2H)，4.32(s，2H)，3.85(s，2H)，3.34-3.17(m，2H)，3.12-2.88(m，4H)，2.58-2.41(m，2H)。
用相似的方法得到以下化合物。
(3H-苯并噻唑-2-亞基)-(2-{4-[4-(2-羥基-乙基)-哌嗪-1-基甲基]-芐氧基}嘧啶-4-基)乙腈(3TFA)
Y＝22％，M+(ES)500.92；HPLC(條件b，極大圖標)99.3％，滯留時間2.03分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.93(d，J＝7.9Hz，1H)，7.86(very br d，1H)，7.74(br d，1H)，7.58(br d，2H)，7.43-7.36(m，3H)，7.28-7.23(m，1H)，6.71(br d，1H)，5.69(s，2H)，4.20-3.60(m，4H)，3.70-3.67(m，2H)，3.52-3.34(m，2H)，3.20-2.92(m，4H)。
嘧啶-2-基氧甲基}芐基)-哌嗪-1-基]乙酸甲酯(3TFA)Y＝14％，M+(ES)528.85；HPLC(條件b，極大圖標)98％，滯留時間2.38分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.94-7.91(m，2H)，7.73(br d，1H)，7.65(d，J＝7.9Hz，2H)，7.53(d，J＝7.9Hz，2H)，7.44＝7.39(m，1H0，7.28-7.23(m，2H)，6.71(br d，1H)，5.72(s，2H)，4.30(br s，2H)，3.62(s，3H)，3.49-3.36(m，2H)，3.30-3.15(m，2H)，3.10-2.85(m，4H)，2.73-2.54(m，2H)。
2-[4-(4-{4-[(3H-苯并噻唑-2-亞基)氰基-甲基]嘧啶-2-基氧甲基}芐基)-哌嗪-1-基]乙酰胺(3TFA)Y＝16％，M+(ES)513.95；HPLC(條件b，極大圖標)93％，滯留時間2.08分鐘。
1H NMR(DMSO-d6)δ7.93(d，J＝7.9Hz，1H)，7.88(br d，1H)，7.73(d，J＝7.9Hz，1H)，7.61(d，J＝7.9Hz，2H)，7.46(br d，2H)，7.45-7.40(m，1H)，7.28-7.23(m，1H)，6.72(brd，1H)，5.71(s，2H)，4.30-2.65(m，12H)。
實施例11藥物制劑的制備以下的制劑實施例例示本發(fā)明代表性的藥物組合物，但不受此限制。
制劑1-片劑將式I所示哌嗪苯并噻唑化合物以干粉與干明膠粘合劑按約1∶2的重量比混合。加入少量硬脂酸鎂作為潤滑劑?；旌衔镉脡浩瑱C形成240-270mg片劑(每片含活性哌嗪苯并噻唑化合物80-90mg)。
制劑2膠囊劑將式I所示哌嗪苯并噻唑化合物以干粉與淀粉稀釋劑按約1∶1的重量比混合。將混合物填充入250mg膠囊(每個膠囊含活性哌嗪苯并噻唑化合物125mg)。
制劑3液體將式I所示哌嗪苯并噻唑化合物(1250mg)、蔗糖(1.75g)和黃原膠(4mg)混合，通過No.10目U.S.篩，然后與已經(jīng)配好的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉(11∶89，50mg)在水中的溶液混合。將苯甲酸鈉(10mg)、調(diào)味劑和色料用水稀釋，在攪拌下加入。然后加入足量的水至5ml的總體積。
制劑4-片劑將式I所示哌嗪苯并噻唑化合物以干粉與干明膠粘合劑按約1∶2的重量比混合。加入少量硬脂酸鎂作為潤滑劑?；旌衔镉脡浩瑱C形成450-900mg片劑(每片含活性哌嗪苯并噻唑化合物150-300mg)。
制劑5-注射劑將式I所示哌嗪苯并噻唑化合物溶解在緩沖的滅菌鹽水可注射水性介質(zhì)中，濃度約為5mg/ml。
實施例12生物學測試本發(fā)明化合物可進行以下測試a)JNK2和JNK3體外測試本發(fā)明化合物是JNK的抑制劑，特別是JNK2和JNK3的抑制劑?？砂凑找韵路椒?，通過監(jiān)測33P摻入c-jun來測定c-jun通過JNK2或JNK3而發(fā)生的磷酸化。式I化合物對c-jun通過JNK磷酸化的抑制活性，以計算在式I化合物存在或不存在的情況下的磷酸化活性來確定。
JNK3和/或JNK2的測定在96孔MTT板上進行在式I化合物存在或不存在下，將0.5微克重組體、用0.1微克重組體預先活化的GST-JNK3或GST-JNK2、生物素化的GST-c-Jun和2μM 33γ-ATP(2nCi/μl)溫育，反應物體積為50μl，含50mMTris-HCl，pH8.0；10mM MgCl2；1mM二硫蘇糖醇，和100μM NaVO4。溫育在室溫進行120分鐘，加入含250μg鏈霉抗生物素蛋白涂覆的SPA珠(Amersham，Inc)*、5mM EDTA、0.1％Triton X-100和50μMATP在磷酸鹽緩沖液中的溶液200μl終止反應。
在室溫溫育60分鐘后，于1500xg離心5分鐘，使珠子沉降，重新懸浮在200μl PBS(含5mM EDTA、0.1％Triton X-100和50μM ATP)中，在如上述之珠子沉降后用β閃爍計數(shù)器測量放射性。
式I化合物對JNK3的抑制作用(IC50)為低于10μM，優(yōu)選低于1μM，更優(yōu)選低于0.25μM。
b)沙鼠整體缺血可用以下的方案評價式I的JNK抑制劑在中風事件過程中保護細胞死亡的能力沙鼠雙側(cè)頸動脈閉合是急性缺血性中風的成熟的動物模型，涉及相對容易的外科技術。
海馬中的神經(jīng)元退化持續(xù)數(shù)日，常被稱為“延遲性神經(jīng)元死亡”。此外，組織學上觀察到的神經(jīng)退化是明顯的并容易量化(11)。而且，在沙鼠上所見的組織病理學與心跳停止后人腦海馬CA1區(qū)觀察到的很類似。甚至可在沙鼠上進行行為觀察(如記憶試驗)。這種用于評價恢復程度的試驗在諸如大鼠等的其它模型上不易操作，因為它們的學習能力要低很多(12)。
-1-方法*外科-用異氟烷(0.5-4％)麻醉。
-將頸總動脈(左和右)與組織分離。
-用Bulldog微型動脈夾將動脈閉合5分鐘。
-除去夾子(再灌注)。
-將動物廄養(yǎng)在加熱燈下直到蘇醒。
-將動物廄養(yǎng)在各個籠子中。
*處死動物-局部缺血7天后(斷頭或過量戊巴比妥)。
-腦取樣。
*組織學參數(shù)-將大腦冷凍在異戊烷(-20℃)中。
-用冷凍切片機將海馬切片(20μm)。
-用甲苯紫方法染色-用改進的Gerhard & Boast記分法(13)評價損傷(在海馬的CA1/CA2亞區(qū))。
-2-治療-給予式I化合物或賦形劑(腹膜內(nèi))再灌注(麻醉蘇醒后5-10分鐘)后15分鐘、24小時和48小時。
-標準方案共用40只動物；將所述的動物分為5組，每組8只組A對照組(鹽水)組B-D以3個不同的劑量(10mg/kg；20mg/kg；40mg/kg)給予試驗化合物；組E參考組(乳清酸3×300mg/kg，腹膜內(nèi))。
實施例1的試驗化合物(即1，3-苯并噻唑-2-基[2-({4-[(4-甲基-哌嗪-1-基)甲基]-芐基}氧)嘧啶-4-基]乙腈)以40mg/kg的濃度用于上述測試，測得約60％的神經(jīng)元死亡被抑制。
c)通過BBB的評價腦和血漿取樣本發(fā)明化合物可用于治療和/或預防大腦缺血性疾病或CNS疾病。特別是，本發(fā)明化合物表現(xiàn)出良好的跨越血腦屏障(BBB)的能力。式I或II化合物通過BBB的能力可用以下方案進行評價。本測定的目的是要量化式I或II試驗化合物在靜脈內(nèi)給藥后在大鼠腦中的量。
6只雄性CrlCD(SD)Br Spraque Dawley大鼠(約8周齡，體重約300g)分成以下3組組12只動物用于靜脈內(nèi)給藥(10mg/kg式I試驗化合物在注射用0.9％NaCl中)。試驗化合物單劑量給藥(劑量方案)。處死后的0.25小時進行取樣。
組22只動物用于靜脈內(nèi)給藥(10mg/kg式I試驗化合物在注射用0.9％NaCl中)。試驗化合物單劑量給藥(劑量方案)。處死后的0.5小時進行取樣。
組32只動物用于靜脈內(nèi)給藥(10mg/kg式I試驗化合物在注射用0.9％NaCl中)。試驗化合物單劑量給藥(劑量方案)。處死后的1小時進行取樣。
在每個設定好的處死時間，將相應組的動物用乙醚深度麻醉。將相應血樣的血液收集到肝素化的管子中，離心除去血細胞，得到血漿。在給予式I試驗化合物后將每個取樣時間(即在t＝0.25h，0.5h，1h)從一組大鼠得到的血漿樣品收集起來，得到每組每取樣時間1個歸集的樣品。然后通過放血處死大鼠。
為了進行腦取樣，取出處死大鼠的整個腦(大腦和小腦)。把每個取樣時間(即給藥后t＝0.25h，0.5h，1h)的2個動物的腦收集起來，以便得到每個取樣時間1個歸集的樣品。將每個歸集的樣品在溶劑混合物(乙腈/甲醇/二甲基亞砜，50∶48∶2，v/v)中勻漿化，離心，分析上清液中的試驗化合物。
按照為這些化合物合適開發(fā)的HPLC-MS/MS分析方法，將血漿樣品和腦勻漿中的濃度進行量化。
用于本測試中的試驗化合物是實施例1中的一個化合物(即1，3-苯并噻唑-2-基[2-({4-[(4-甲基-哌嗪-1-基)甲基]-芐基}氧)嘧啶-4-基]乙腈)。
用HPLC-MS/MS分析的血漿和腦勻漿中的試驗化合物濃度列于下表1。
表1在以10mg/kg劑量靜脈內(nèi)給藥后試驗化合物(作為三-TFA鹽)的血漿和腦濃度

從表1可以看到，有相當量的試驗化合物持續(xù)地進入大腦。
權利要求
1.式I所示哌嗪苯并噻唑衍生物 以及它的互變異構體、幾何異構體、作為對映體和非對映體的光學活性形式及其外消旋體形式、以及其藥學上可接受的鹽，其中R選自氫、C1-C6烷基、C1-C6-烷基芳基、雜芳基、C1-C6-烷基雜芳基、C2-C6-烯基、C2-C6-烯基芳基、C2-C6-烯基雜芳基、C2-C6-炔基、C2-C6-炔基芳基、C2-C6-炔基雜芳基、C3-C8環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、C1-C6-烷基環(huán)烷基、C1-C6烷基雜環(huán)烷基、C1-C6-烷基羧基、?；1-C6-烷基?；?、酰氧基、C1-C6-烷基酰氧基、C1-C6-烷基烷氧基、烷氧基羰基、C1-C6-烷基烷氧基羰基、氨基羰基、C1-C6-烷基氨基羰基、酰基氨基、C1-C6-烷基?；被?、脲基、C1-C6-烷基脲基、氨基、C1-C6-烷基氨基、磺酰氧基、C1-C6-烷基磺酰氧基、磺?；?、C1-C6-烷基磺?；喕酋；1-C6-烷基亞磺?；⒘蛲榛?、C1-C6-烷基硫烷基、磺?；被?、C1-C6-烷基磺?；被?；R1選自H、鹵素、氰基、硝基、氨基、C1-C6-烷基、C2-C6-烯基、C2-C6-炔基、C1-C6-烷基-芳基、芳基或雜芳基、C1-C6-烷基-雜芳基、-C(O)-OR2、-C(O)-R2、-C(O)NR2R2’、-(SO2)R2，其中R2和R2’獨立地選自氫、C1-C6-烷基、C2-C6-烯基、C2-C6-炔基、芳基、雜芳基、C1-C6-烷基-芳基、C1-C6-烷基雜芳基；n是0-3的整數(shù)。
2.如權利要求1所述的哌嗪苯并噻唑衍生物，其中R1是氫。
3.如權利要求1或2所述的哌嗪苯并噻唑衍生物，其中R選自氫、C1-C3烷基、氨基羰基、C1-C6-烷基烷氧基羰基、C1-C6-烷基烷氧基、C1-C6-烷基酰氧基、烷氧基羰基、C1-C6-烷基氨基羰基。
5.如權利要求4所述的哌嗪苯并噻唑衍生物，其中R是H、或C1-C3-烷基、特別是甲基或乙基，或C1-C6-烷基烷氧基。
6.如前述權利要求的任何一項所述的哌嗪苯并噻唑衍生物，其中n是1。
7.如前述權利要求的任何一項所述的哌嗪苯并噻唑衍生物，其特征在于，選自以下的化合物1，3-苯並噻唑-2-基[2-({4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]芐基}氧)嘧啶-4-基]乙腈1，3-苯並噻唑-2-基[2-({4-[(4-芐基-哌嗪-1-基)甲基]-芐基}氧)嘧啶-4-基]乙腈1，3-苯並噻唑-2-基(2-{[4-(哌嗪-1-基甲基)芐基]氧}嘧啶-4-基)乙腈1，3-苯並噻唑-2-基[2-({4-[(4-甲?；哙?1-基)甲基]芐基}氧)嘧啶-4-基]乙腈[2-({4-[(4-乙?；哙?1-基)甲基]芐基}氧)嘧啶-4-基](1，3-苯並噻唑-2-基)乙腈(3H-苯並噻唑-2-亞基)-{2-[4-(4-[1，2，4]噁二唑-3-基甲基-哌嗪-1-基甲基)-芐基氧]-嘧啶-4-基}-乙腈4-(4-{4-[(3H-苯並噻唑-2-亞基)-氰基-甲基]-嘧啶-2-基氧甲基}-芐基)-哌嗪-1-羧酸甲酯2-[4-(4-{4-[(3H-苯並噻唑-2-亞基)-氰基-甲基]-嘧啶-2-基氧甲基}-芐基)-哌嗪-1-基]-乙酰胺(2-{4-[4-(2-氨基-乙?；?-哌嗪-1-基甲基]-芐基氧}-嘧啶-4-基)-(3H-苯並噻唑-2-亞基)-乙腈[4-(4-{4-[(3H-苯並噻唑-2-亞基)-氰基-甲基]-嘧啶-2-基氧甲基}-芐基)-哌嗪-1-基]-乙酸乙酯(3H-苯並噻唑-2-亞基)-(2-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基甲基]-芐基氧}-嘧啶-4-基)-乙腈4-(4-{4-[(3H-苯並噻唑-2-亞基)-氰基-甲基]-嘧啶-2-基氧甲基}-芐基)-哌嗪-1-羧酸二甲基酰胺(3H-苯並噻唑-2-亞基)-{2-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-芐基氧]-嘧啶-4-基}-乙腈(3H-苯並噻唑-2-亞基)-(2-{4-[4-(2-羥基-乙基)-哌嗪-1-基甲基]-芐基氧}-嘧啶-4-基)-乙腈。
8.權利要求的任何一項所述的哌嗪苯并噻唑衍生物用作藥物。
9.如權利要求1-7的任何一項所述的哌嗪苯并噻唑衍生物在制備治療腦缺血性疾病或CNS疾病的藥物中的應用。
10. 如權利要求1-7的任何一項所述的哌嗪苯并噻唑衍生物的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟 其中R、R1和n如上所述。
全文摘要
本發(fā)明涉及哌嗪苯并噻唑衍生物，主要用于治療和/或預防腦缺血性疾病或中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病。本發(fā)明還涉及它們的制備方法。
文檔編號C07D417/14GK1662528SQ03814493
公開日2005年8月31日 申請日期2003年4月25日 優(yōu)先權日2002年4月25日
發(fā)明者P·蓋拉德, J·P·戈特蘭德, P·A·懷特 申請人:應用研究系統(tǒng)Ars股份公司