專利名稱：N－磺酰氨基噻唑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N-磺酰氨基噻唑，例如可用于治療由類固醇硫酸酯酶的作用介導(dǎo)的疾病的N-磺酰氨基噻唑。
一方面，本發(fā)明提供了其中吡啶的氮原子是取代的、例如且其中吡啶環(huán)任選地是橋連的N-(4，5，6，7-四氫-噻唑并-[5，4-c]吡啶-2-基)-(C6-18)芳基磺酰胺在制備治療由類固醇硫酸酯酶的作用介導(dǎo)的疾病例如痤瘡的藥物中的用途。
其中吡啶的氮原子是取代的、例如并且其中吡啶環(huán)任選地是橋連的N-(4，5，6，7-四氫-噻唑并-[5，4-c]吡啶-2-基)-(C6-18)芳基磺酰胺在本文中被稱為“(按照)本發(fā)明的噻唑并-吡啶-芳基磺酰胺”。吡啶的氮原子是取代的，例如被以下基團取代(C1-12)烷氧基羰基、(C1-6)烷基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基羰基、未取代的或取代的(C6-18)芳基、單或多重取代的例如苯基，例如被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基、例如被氨基羰基或鹵代(C1-6)烷基取代的(C6-18)芳基。優(yōu)選地，吡啶的氮原子被(C1-12)烷氧基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基羰基、未取代的或取代的(C6-18)芳基取代。吡啶環(huán)是未橋連的或橋連的，例如通過(C1-4)亞烷基、例如(C1-2)亞烷基如亞乙基橋連。本發(fā)明的噻唑并-吡啶-芳基磺酰胺包括例如N-(4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基)-苯磺酰胺。與磺酰胺連接的(C6-18)芳基可以是未取代的或取代的，例如被有機化學(xué)中常規(guī)的基團例如鹵代(C1-4)烷基或鹵素取代。
另一方面，本發(fā)明所提供使用的本發(fā)明的噻唑并-比啶-芳基磺酰胺是式I的化合物
其中R1是未取代的或取代的(C6-18)芳基，例如被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代，優(yōu)選被鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代，R2是(C1-12)烷氧基羰基、(C1-6)烷基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基羰基或未取代的或取代的(C6-18)芳基，例如被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代，且-R3、R4和R5是氫或者-R3和R5一起是(C1-4)亞烷基且R4是氫。
用于制備治療由類固醇硫酸酯酶的作用介導(dǎo)的疾病的藥物的本發(fā)明的包括式I化合物在內(nèi)的噻唑并-吡啶-芳基磺酰胺在下文中被稱為“(按照)用于本發(fā)明的化合物”。
本發(fā)明的噻唑并-吡啶-芳基磺酰胺中所定義的每個單獨的取代基可以本身是優(yōu)選的取代基，獨立于所定義的其它取代基。
另一方面，本發(fā)明提供了為式II化合物的式I化合物 其中R1是未取代的或取代的(C6-18)芳基，例如被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代，R2`是(C1-12)烷氧基羰基、(C1-6)烷基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基羰基或未取代的或取代的(C6-18)芳基，例如被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代，且R3和R5一起是(C1-4)亞烷基且R4是氫。
另一方面，本發(fā)明提供了為式IIA化合物的式II化合物
其中R1是被鹵代(C1-4)烷基或鹵素取代的苯基，且R2`是(C1-8)烷氧基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-4)烷基羰基或未取代的或取代的苯基，例如被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基單或多重取代的苯基。
另一方面，本發(fā)明提供了為式IIA1化合物的式II或IIA化合物 另一方面，本發(fā)明提供了為式III化合物的式I化合物 其中R1是未取代的或取代的(C6-18)芳基，例如被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代，且R2``是(C1-12)烷氧基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基羰基、未取代的(C6-18)芳基或被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代的(C6-18)芳基。
另一方面，本發(fā)明提供了為式IIIA化合物的式III化合物
其中R1是被鹵代(C1-4)烷基或鹵素單或多重取代的苯基，且R2``是(C1-6)烷氧基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-2)烷基羰基或被氨基羰基或鹵代(C1-4)烷基取代的苯基。
另一方面，本發(fā)明提供了式IIIA1的化合物 另一方面，本發(fā)明提供了式II化合物，其是N-(3-硫雜-5，11-二氮雜-三環(huán)[6.2.1.0*2，6*]十一碳-2(6)，4-二烯-4-基)-苯磺酰胺。
另一方面，本發(fā)明提供了選自以下的式III化合物-2-[2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺，-2-[2-(2，3-二氯-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺，-2-[2-(3，5-二氯-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺，-2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯，-2-(2，3-二氯-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯，-2-(3，5-二氯-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯，和-N-[5-(2-環(huán)戊基-乙?；?-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基]-3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰胺。
如果本文中沒有另外定義，則
-(C6-18)芳基包括未取代的和取代的(C6-18)芳基、例如苯基，例如被例如包括氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基在內(nèi)的有機化學(xué)中的常規(guī)基團單或多重取代的(C6-18)芳基。
-鹵代(C1-6)烷基包括鹵代(C1-4)烷基，例如CF3，-鹵素包括氟、氯、溴和碘，例如氯，-(C1-12)烷氧基包括(C1-8)烷氧基，例如(C1-4)烷氧基，例如叔丁氧基，-(C3-6)環(huán)烷基包括(C5-6)環(huán)烷基，例如環(huán)戊基，-(C1-6)烷基羰基包括(C1-4)烷基羰基，例如甲基羰基。
本發(fā)明所提供的化合物例如式II、IIA、IIA1、III、IIIA和IIIA1的化合物在下文中被稱為“(按照)本發(fā)明的化合物”。本發(fā)明的化合物中以上所定義的每個單獨的取代基可以本身是優(yōu)選的取代基，獨立于所定義的其它取代基。式II化合物包括式IIA和IIA1的化合物。式III化合物包括式IIIA和IIIA1的化合物。
本發(fā)明的化合物包括任何形式的化合物，例如游離形式、鹽形式、溶劑合物形式以及鹽和溶劑合物形式的化合物。
另一方面，本發(fā)明提供了鹽形式的本發(fā)明的化合物。
用于本發(fā)明的化合物可以以任何形式被使用，例如游離形式、鹽形式、溶劑合物形式以及鹽和溶劑合物形式。
本發(fā)明的化合物的鹽或用于本發(fā)明的化合物的鹽包括可藥用鹽，例如包括金屬鹽和酸加成鹽。金屬鹽包括例如堿金屬鹽或堿土金屬鹽，例如鈉鹽；酸加成鹽包括本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物與酸例如HCl的鹽。
游離形式的本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物可以被轉(zhuǎn)化成鹽形式的相應(yīng)化合物；并且反之亦然。游離形式或鹽形式或溶劑合物形式的本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物可以被轉(zhuǎn)化成游離形式或鹽形式或非溶劑合物形式的相應(yīng)化合物；并且反之亦然。
本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物可以以異構(gòu)體形式和它們的混合物形式存在。異構(gòu)體混合物例如包括對映體混合物或非對映體混合物在內(nèi)的異構(gòu)體混合物可以例如按照常規(guī)方法被適當(dāng)?shù)剡M行分離以獲得純的異構(gòu)體。本發(fā)明包括任何異構(gòu)體形式和任何異構(gòu)體混合物形式的本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物。
另一方面，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明的化合物的方法，例如或者制備用于本發(fā)明的化合物的方法，該方法包括使4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基-胺、例如式IV化合物 其中X具有以上所定義的R2、R2`或R2``的含義且R3、R4和R5如以上所定義，與合適的磺酰鹵例如磺酰氯、例如其中R1如以上所定義的式R1-SO2Cl的化合物反應(yīng)，以獲得本發(fā)明的化合物例如或用于本發(fā)明的化合物。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物可以通過下述步驟制備a.使其中X是叔丁氧基羰基且R3、R4和R5如以上所定義的式IV化合物與其中R1如以上所定義的式R1-SO2Cl化合物反應(yīng)，以獲得其中R1、R3、R4和R5如以上所定義且X是叔丁氧基羰基的式I或式II或式III化合物，和b.斷裂叔丁氧基羰基，例如通過用HCl乙醚溶液處理，以獲得式V化合物 其中R1如以上所定義，例如以鹽形式如鹽酸鹽形式獲得，c.使式V化合物c1.與(取代的)苯基氟反應(yīng)，以獲得其中R1如以上所定義且R2、R2`或R2``是(取代的)苯基的式I或式II或式III化合物，或c2.與(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基碳酰鹵例如碳酰氯反應(yīng)，以獲得其中R1如以上所定義且R2、R2`或R2``是(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基羰基的式I或式II或式III化合物，和d.從反應(yīng)混合物中分離出所獲得的式I或式III化合物。
式IV和V化合物可用作制備式I或式III化合物的中間體。式IV化合物也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
另一方面，本發(fā)明提供了式IV的化合物 其中X具有以上所定義的R2``的含義，例如提供鹽形式如鹽酸鹽形式的式IV化合物，例如用作制備式III化合物的中間體。
另一方面，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明的化合物例如或用于本發(fā)明的化合物的方法，該方法包括使4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基-胺、例如式VI化合物 其中X具有以上所定義的R2`的含義，與磺酰鹵例如磺酰氯、例如其中R1如以上所定義的式R1-SO2Cl化合物反應(yīng)，以獲得本發(fā)明的化合物例如或用于本發(fā)明的化合物，例如式I或式II化合物。
式VI和VII的化合物可用作制備式I或式II或式III化合物的中間體，并且也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
另一方面，本發(fā)明提供了式VI的化合物
其中X具有以上所定義的R2`的含義，例如提供鹽形式如鹽酸鹽形式的式VI化合物，例如用作制備式I或式II化合物的中間體。
另一方面，本發(fā)明提供了式VII的化合物 其中R1如以上所定義，例如提供鹽形式如鹽酸鹽形式的式VII化合物，例如用作制備式I或式II化合物的中間體。
上述反應(yīng)是酰化反應(yīng)，可以被合適地進行，例如在合適的溶劑中和在合適的溫度下、例如按照例如與常規(guī)方法類似的方法或如本文所述進行。
式I或式II或式III化合物可以被轉(zhuǎn)化成其鈉鹽形式，例如通過用NaOH例如在EtOH中處理游離堿形式的式I或式II或式III化合物以獲得其中磺酰胺基團的氮原子是帶有Na作為陽離子的陰離子形式的式I或式II或式III化合物。
合適時可以獲得式IV化合物，例如按照例如與常規(guī)方法類似的方法獲得，例如通過使N-取代的哌啶酮與氨腈于硫存在下在極性溶劑例如吡啶中反應(yīng)。
合適時，可以制備本文所述的任何化合物，例如包括本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物以及例如包括式IV、V、VI或VII在內(nèi)的其制備中的中間體，例如按照例如與常規(guī)方法類似的方法、例如或本文中所具體描述的方法獲得。
在本發(fā)明的中間體中，如果存在官能團，其任選地可以是被保護的形式或是鹽形式(如果存在成鹽基團)。任選存在的保護基可以在合適的階段被除去，例如按照例如與常規(guī)方法類似的方法被除去。
特定組織中的類固醇激素與許多疾病相關(guān)，例如乳腺、子宮內(nèi)膜和前列腺腫瘤以及毛囊皮脂腺單位的疾病例如痤瘡、雄激素性脫發(fā)和多毛癥。局部產(chǎn)生這些類固醇激素的重要前體是類固醇3-O-硫酸酯，其在靶組織中通過類固醇硫酸酯酶被脫硫。對該酶的抑制導(dǎo)致相應(yīng)的活性類固醇激素局部水平降低，預(yù)計這具有治療相關(guān)性。此外，類固醇硫酸酯酶抑制劑可以用作免疫抑制劑，已經(jīng)證明當(dāng)其被遞送至腦時能增強記憶。
痤瘡是由許多因素的相互作用導(dǎo)致的多病因疾病，所述的因素例如遺傳、皮脂、激素和細菌。對于痤瘡，最重要的誘發(fā)因素是皮脂產(chǎn)生；與具有健康皮膚的人相比，在幾乎所有痤瘡患者中皮脂腺更大且產(chǎn)生更多皮脂。皮脂腺的發(fā)育和皮脂產(chǎn)生的程度由雄激素類進行激素控制；因此，雄激素類在痤瘡的發(fā)病機制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在男性中，有兩個主要來源向靶組織供應(yīng)雄激素類(i)分泌睪酮的性腺，(ii)產(chǎn)生脫氫表雄酮(DHEA)的腎上腺，脫氫表雄酮以硫酸酯軛合物(DHEAS)形式被分泌。睪酮和DHEAS在靶組織例如在皮膚中均被轉(zhuǎn)化成最具活性的雄激素-二氫睪酮(DHT)。有證據(jù)表明，與從循環(huán)中直接提供活性雄激素類相比，皮膚中的這些DHT局部合成通路更為重要。因此，用特異性抑制劑降低靶組織中的內(nèi)源性雄激素水平應(yīng)當(dāng)對痤瘡和皮脂溢有治療益處。此外，它開啟了通過局部治療調(diào)節(jié)局部雄激素類水平而非通過全身性治療影響循環(huán)激素水平來治療這些疾病的前景。
男性雄激素性脫發(fā)在白種人中是非常常見的，占所有類型的脫發(fā)的約95％。男性型脫發(fā)由頭皮中進入毛發(fā)生長終期的毛囊數(shù)量增加和由毛發(fā)生長終期持續(xù)時間變長引起。其是通過雄激素類實現(xiàn)的遺傳上決定的毛發(fā)喪失。據(jù)報道，與非脫發(fā)對照相比，在脫發(fā)的男性中有升高的血清DHEA但是有正常的睪酮水平，暗示了在雄激素性脫發(fā)中靶組織中的雄激素產(chǎn)生是非常重要的。
多毛癥是毛發(fā)的病理性增厚和增密，其特征在于兒童和女性的毛發(fā)生長的雄性模式。多毛癥通過雄激素類形成增加或通過毛囊對雄激素的敏感性增加而由雄激素誘發(fā)。因此，導(dǎo)致靶組織(皮膚)中內(nèi)源性雄激素類和/或雌激素類水平降低的治療應(yīng)當(dāng)對痤瘡、雄激素性脫發(fā)和多毛癥有效。
如上所述，DHT-最具活性的雄激素在皮膚中由充足的全身性前體DHEAS合成，并且在從DHEAS到DHT的代謝通路中第一步是通過類固醇硫酸酯酶將DHEAS脫硫產(chǎn)生DHEA。已有描述稱在角質(zhì)形成細胞和皮膚衍生的成纖維細胞中存在該酶。利用已知的類固醇硫酸酯酶抑制劑例如雌酮3-O-氨基磺酸酯和4-甲基香豆素-7-基(umbelliferyl)-O-氨基磺酸酯確證了類固醇硫酸酯酶用于降低皮膚中內(nèi)源性類固醇激素水平的潛在用途。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)胎盤類固醇硫酸酯酶的抑制劑也抑制由人角質(zhì)形成細胞(HaCaT)或人皮膚衍生的成纖維細胞系(1BR3GN)制備的類固醇硫酸酯酶。還證明所述抑制劑能阻斷完整單層HaCaT角質(zhì)形成細胞中的類固醇硫酸酯酶。
因此，類固醇硫酸酯酶的抑制劑可用于降低皮膚中的雄激素和雌激素水平。它們可用作類固醇硫酸酯酶的抑制劑來局部治療毛囊皮脂腺單位的雄激素依賴性疾病(例如痤瘡、皮脂溢、雄激素性脫發(fā)、多毛癥)和局部治療鱗狀細胞癌。
此外，預(yù)計非類固醇性類固醇硫酸酯酶抑制劑可用于治療由類固醇激素的作用介導(dǎo)的疾病，其中硫酸酯酶分裂的類固醇產(chǎn)物發(fā)揮作用。這些新型抑制劑的適應(yīng)癥包括毛囊皮脂腺單位的雄激素依賴性疾病(例如痤瘡、皮脂溢、雄激素性脫發(fā)、多毛癥)；雌激素-或雄激素-依賴性腫瘤，例如鱗狀細胞癌和瘤，例如乳腺、子宮內(nèi)膜和前列腺的鱗狀細胞癌和瘤；炎性疾病和自身免疫性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、I型和II型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、甲狀腺炎、脈管炎、潰瘍性結(jié)腸炎和局限性回腸炎、銀屑病、接觸性皮炎、移植物抗宿主病、濕疹、哮喘和移植后的器官排斥反應(yīng)。類固醇硫酸酯酶抑制劑還可用于治療癌癥，尤其是用于治療雌激素-和雄激素-依賴性癌癥，例如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌和鱗狀細胞癌以及前列腺癌。類固醇硫酸酯酶抑制劑還可通過增加中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的DHEAS水平而用于增強認知功能，尤其是用于治療老年性癡呆，包括阿爾茨海默病。
化合物在抑制類固醇硫酸酯酶活性方面的活性可以在以下試驗系統(tǒng)中證實人類固醇硫酸酯酶的純化在分娩和與膜和結(jié)締組織分離后新鮮獲得人胎盤。為了貯存，將該物質(zhì)冷凍在-70℃下。解凍后，所有進一步的步驟均在4℃下進行，同時在20℃下調(diào)節(jié)pH值。將400g該組織在1.2升緩沖液A(50mM Tris-HCl，pH7.4，0.25M蔗糖)中均質(zhì)化。將獲得的勻漿在10,000×g下離心45分鐘。取出上清液存留并將獲得的沉淀物在500ml緩沖液A中再均質(zhì)化。離心后，將獲得的兩個上清液合并并進行超速離心(100,000×g，1小時)。將獲得的沉淀物重新混懸在緩沖液A中并重復(fù)離心。將獲得的沉淀物混懸在50ml pH7.4的50mM Tris-HCl中，并貯存在-20℃下直至進一步進行處理。
解凍后，通過超速離心(如上所述)收集微粒體并將其混懸在50ml緩沖液B(10mM Tris-HCl，pH7.0，1mM EDTA，2mM 2-巰基乙醇，1％ TritonX-100，0.1％抑酶肽)中。在冰上溫和攪拌1小時后，將混懸液離心(100,000×g，1小時)。收集合有酶活性的上清液并用1M Tris將pH調(diào)整至8.0。將獲得的溶液加載在羥基磷灰石柱(2.6×20cm)上并用pH8.0的緩沖液B平衡。將柱用緩沖液B以2ml/分鐘的流速洗滌。在流動中回收活性。將合并物調(diào)整至pH7.4并在于緩沖液C(20mM Tris-HCl，pH7.4，0.1％ TritonX-100，0.5M NaCl)中平衡的伴刀豆球蛋白A瓊脂糖柱(1.6×10cm)上進行色譜分離。用緩沖液C沖洗柱，并用10％的在緩沖液C中的甲基甘露糖苷洗脫結(jié)合的蛋白。將活性級分合并并用緩沖液D(20mM Tris-HCl，pH8.0，1mM EDTA，0.1％ Triton X-100，10％甘油(v/v))透析。
將獲得的滲余物加載在用緩沖液D平衡的藍瓊脂糖柱(0.8×10cm)上，沖洗柱并用緩沖液D至2M的在緩沖液D中的NaCl的線性梯度進行洗脫。將活性級分合并，根據(jù)需要進行濃縮(Centricon 10)，用緩沖液D滲析并以等分量貯存在-20℃下。
人類固醇硫酸酯酶的分析已知純化的人類固醇硫酸酯酶不僅能夠裂解類固醇硫酸酯，而且還能容易地裂解芳基硫酸酯例如4-甲基香豆素-7-基硫酸酯，其在本試驗系統(tǒng)中被用作活性指示物。通過順序?qū)⑾率鋈芤杭尤氚咨⒘康味ò宓目字衼碇苽浞治龌旌衔?)50μl底物溶液(在0.1M Tris-HCl，pH7.5中的1.5mM 4-甲基香豆素-7-基硫酸酯)2)50μl供試化合物在0.1M Tris-HCl pH7.5，0.1％ Triton X-100中的稀釋液(在DMSO中制備供試化合物的貯備液；在分析混合物中溶劑的最終濃度不超過1％)3)50μl酶稀釋液(約12個酶單位/ml)我們將一個酶單位定義為在初始底物濃度500μM時于37℃下在0.1MTris-HCl，pH7.5，0.1％ Triton X-100中每小時水解1nmol 4-甲基香豆素-7-基硫酸酯的類固醇硫酸酯酶的量。
將板在37℃下溫育1小時。然后通過加入100μl 0.2M NaOH停止反應(yīng)。在Titertek Fluoroskan II儀器中用λex＝355nm和λem＝460nm測定熒光強度。
相對IC50值的計算用以下方程由上述人類固醇硫酸酯酶分析中在供試化合物的不同濃度(c)下獲得的熒光強度數(shù)據(jù)(I)計算50％抑制酶活性的濃度(IC50)I=I1001+(c/IC50)s]]>其中I100是不存在抑制劑時觀察到的強度且s是斜率因子。用雌酮氨基磺酸酯作為參比化合物，與所有其它供試化合物平行地測定它的IC50值。相對IC50值的定義如下
根據(jù)我們的試驗和計算，雌酮氨基磺酸酯的IC50值為約60nM。
包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物在所述的分析中均顯示出活性。
CHO/STS分析將用人類固醇硫酸酯酶穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CHO細胞(CHO/STS)接種入微量滴定板。在達到約90％融合后，將它們用梯度濃度的供試物質(zhì)(例如本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物)溫育過夜。然后將它們在室溫下用4％多聚甲醛固定10分鐘并用PBS洗滌4次，在用100μl/孔0.5mM 4-甲基香豆素-7-基硫酸酯(MUS)溫育之前，將其溶解在0.1M Tris-HCl，pH7.5中。在37℃下進行酶反應(yīng)30分鐘。然后每孔加入50μl終止液(1M Tris-HCl，pH10.4)。將酶反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移入白色板(Microfluor，Dynex，Chantilly，VA)中并在Fluoroskan II熒光微量滴定板讀板器中讀數(shù)。從所有值中減去試劑空白。對于藥物試驗，用熒光單位(FU)除以將細胞蛋白用sulforhodamine B(OD550)染色后的光密度讀數(shù)以便校正細胞數(shù)偏差。通過兩個定標點(bracketing point)之間的線性插值法測定IC50值。在用抑制劑進行的每個分析中，用雌酮3-O-氨基磺酸酯作為參比化合物，并且用雌酮3-O-氨基磺酸酯將IC50值進行標化(相對IC50＝IC50化合物/IC50雌酮3-O-氨基磺酸酯)。
包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物在所述分析中均顯示出活性。
用人皮膚勻漿進行的分析用鋒利的剪刀將冷凍的人尸體皮膚樣品(每個樣品約100mg)切成小片(約1×1mm)。將獲得的小片混懸在10體積(w/w)含有0.1％ Triton X-100的緩沖液(20mM Tris-HCl，pH7.5)中。加入由在乙醇或DMSO中的貯備液制備的梯度濃度的供試化合物(例如本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物)。第二，加入作為底物的DHEAS(1μC/ml[3H]DHEAS，比活性約60Ci/mmol，和20μM未標記的DHEAS)。將樣品在37℃下溫育18小時。在溫育期結(jié)束時，加入50μl 1M Tris，pH10.4和3ml甲苯。取出1ml等分試樣的有機相并將其進行液體閃爍計數(shù)。將在等分試樣中測定的dpm-值轉(zhuǎn)化成每小時每克皮膚裂解的DHEA的nmol數(shù)。
包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物在所述分析中均顯示出活性。
包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物在以上所定義的實驗系統(tǒng)中均顯示出活性。鹽和/或溶劑合物形式的包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物顯示出與游離形式和/或非溶劑合物形式的本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物相同等級的活性。
因此，包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物適合在治療由類固醇硫酸酯酶的作用介導(dǎo)的疾病中用作類固醇硫酸酯酶抑制劑，所述的疾病例如包括毛囊皮脂腺單位的雄激素依賴性疾病，如-痤瘡，-皮脂溢，-雄激素性脫發(fā)，多毛癥；-癌癥，例如雌激素和雄激素-依賴性癌癥；-認知功能障礙，例如包括阿爾茨海默病在內(nèi)的老年性癡呆。
包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物優(yōu)選用于治療痤瘡、皮脂溢、雄激素性脫發(fā)、多毛癥；雌激素例如和雄激素依賴性-癌癥，更優(yōu)選用于治療痤瘡。所述治療包括治療性治療和預(yù)防。
實施例1的化合物是本發(fā)明的優(yōu)選化合物。
例如，已經(jīng)測定了實施例1的化合物在本文所述的用人皮膚勻漿進行的分析中顯示出160nm的IC50。
另一方面，本發(fā)明提供了例如在治療由類固醇硫酸酯酶的作用介導(dǎo)的疾病中用作藥物的式II或式III化合物。
另一方面，本發(fā)明提供了治療由類固醇硫酸酯酶的作用介導(dǎo)的疾病例如治療痤瘡、皮脂溢、雄激素性脫發(fā)、多毛癥；雌激素例如和雄激素-依賴性癌癥的方法，該方法包括對需要該治療的個體施用治療有效量的本發(fā)明的噻唑并-吡啶-芳基磺酰胺，例如包括式I或式II或式III化合物在內(nèi)。
對于所述用途，使用的劑量當(dāng)然可以根據(jù)例如所用的具體化合物、施用方式和所需的治療而變化。然而，一般而言，如果以約0.1mg/kg至約100mg/kg動物體重(例如約0.0625mg/kg至約62.5mg/kg)的日劑量施用化合物，例如方便地以每天2至4次的分劑量進行施用，則可以獲得令人滿意的結(jié)果。對于大部分大的哺乳動物，總?cè)談┝繛榧s5mg至約5000mg，可方便地例如以每天不超過4次的分劑量或以延遲形式施用。單位劑量形式包含例如約1.25mg至約2000mg本發(fā)明的化合物以及與之混合的至少一種可藥用賦形劑，例如載體、稀釋劑。
包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物可以以可藥用鹽形式例如以酸加成鹽或金屬鹽；或以游離形式；任選地以溶劑合物形式施用。
包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物可以以與用于所述適應(yīng)癥的已知標準物相似的方式施用。本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物可以與常規(guī)的例如可藥用的賦形劑例如載體和稀釋劑以及任選地其它賦形劑相混合。包括本發(fā)明的化合物在內(nèi)的用于本發(fā)明的化合物可以例如以藥物組合物形式通過以下途徑施用-口服施用，例如以片劑、膠囊劑形式口服施用；-胃腸外、靜脈內(nèi)施用，例如以液體形式如溶液、混懸液形式胃腸外、靜脈內(nèi)施用；-局部施用，例如以軟膏劑、乳膏劑形式局部施用。
藥物組合物中活性物質(zhì)的濃度當(dāng)然例如根據(jù)所用的化合物、所需的治療和所用的組合物的性質(zhì)而變化。一般而言，在局部用組合物中以約0.05至約5％例如約0.1至約1％w/w的濃度和在口服、胃腸外或靜脈內(nèi)組合物中以約1％w/w至約90％w/w的濃度下可以獲得令人滿意的結(jié)果。
另一方面，本發(fā)明提供了包含藥學(xué)有效量的至少一種本發(fā)明的化合物和與之組合的至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明的藥物組合物可以包含一種或多種本發(fā)明的化合物、例如至少一種本發(fā)明的化合物作為活性成分。
除了至少一種本發(fā)明的化合物之外，本發(fā)明的藥物組合物還可以包含一種或多種其它藥學(xué)活性劑。所述的其它藥學(xué)活性劑包括例如視黃醛衍生物，例如視黃酸，如異維甲酸；維甲酸(Roche)；阿達帕林(6-[3-(1-金剛烷基)-4-甲氧基苯基]-2-萘甲酸)；口服避孕藥，例如19-去甲-17a-孕-1，3，5(10)-三烯-20-炔-3，17-二醇、6-氯-17-羥基-1a，2a-亞甲基-4，6-孕二烯-3，20-二酮，如Diane(Schering)，抗菌藥，如紅霉素，包括紅霉素A、阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素；四環(huán)素類，林可酰胺-抗生素，如克林霉素(甲基7-氯-6，7，8-三脫氧-6-(反式-1-甲基-4-丙基-L-2-吡咯烷-甲酰氨基)-1-硫代-L-蘇-a-D-半乳-辛吡喃糖苷(octopyranosid))、壬二酸(壬烷二酸)、那地沙星；氨苯砜、過氧苯酰；角質(zhì)層分離劑，如水楊酸；抗炎劑，如皮質(zhì)類固醇、吡美莫司；類固醇5α-還原酶抑制劑。
對于治療乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌，其它藥學(xué)活性劑包括芳香酶抑制劑，如阿那曲唑、來曲唑、依西美坦。
組合包括-固定組合，其中兩種或多種藥學(xué)活性劑在同一藥物組合物中，-藥盒，其中獨立組合物形式的兩種或多種藥學(xué)活性劑在同一包裝中出售，例如含有共同施用的說明書；和-自由組合，其中藥學(xué)活性劑被單獨包裝，但給出同時或相繼施用的說明書。
另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物與至少一種其它用作藥物的藥學(xué)上有效的活性劑的組合，如包含至少一種本發(fā)明的化合物或用于本發(fā)明的化合物與至少一種其它藥學(xué)上有效的活性劑的組合以及至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物。
另一方面，本發(fā)明提供了式IP1的化合物
其中R1P1是(C6-18)芳基，且R2P1是(C1-12)烷氧基羰基，或未取代的或取代的苯基，例如被一個或多個選自以下的基團取代的苯基-氨基羰基，-鹵素，-(C1-6)鹵代烷基。
另一方面，本發(fā)明提供了式IP2的化合物 其中R1是(C6-18)芳基，且R2是(C1-12)烷氧基羰基、(C1-4)烷基羰基或未取代的或取代的苯基，例如被一個或多個以下基團取代的苯基-氨基羰基，-鹵素，-(C1-6)鹵代烷基。
在用于舉例說明本發(fā)明的以下實施例中，所提及的溫度是攝氏度并且未經(jīng)校正。
使用了下述縮略語BOC 叔丁氧基羰基c-Hex 環(huán)己醇DMSO二甲亞砜DMAPN，N-二甲基氨基吡啶
DIEA二異丙基乙基胺EtAc乙酸乙酯EtOH乙醇m.p.熔點RT 室溫實施例12-[2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺A.游離堿將3.3g 2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-鎓鹽酸鹽、1.545g 2-氟-4-三氟甲基-苯甲酰胺和3.3g K2CO3在DMSO中于150℃下加熱5小時。從所得混合物中蒸除溶劑，將所得的蒸發(fā)殘余物溶解在EtAc/MeOH(9/1)中并用50ml 1M的HCl和鹽水萃取所得混合物。獲得兩相并將其分離，濃縮所得的有機層并進行色譜分離。獲得2-[2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺，用EtAc重結(jié)晶。
熔點225-228℃；1H-NMR/CD3OD8.35(s，2H)，8.03(s，1H)，7.92(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40(dd，J＝8.0，1.1Hz，1H)，7.35(s，1H)，4.06(t，J＝1.8Hz，2H)，3.44(t，J＝5.6Hz，2H)，2.69(m，2H)；13C-NMR/CD3OD168.83，149.35，144.47，133.37，133.11，131.99，131.72，131.08，130.83，126.07，124.89，123.27，119.90，116.27，116.24，113.20，49.44，47.90，22.76。
B.鈉鹽將1.9ml 0.1M的NaOH水溶液加入118mg 2-[2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺在10ml EtOH中的溶液中，將所得混合物在室溫下攪拌5分鐘。從所得混合物中蒸除溶劑并冷凍干燥所得的蒸發(fā)殘余物。獲得[2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺鈉鹽。
類似于實施例1A中所述的方法，但使用合適的起始原料，獲得了式EX1的化合物 其中R1如表1中所定義。1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)也在表1中給出。
表1 實施例42-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯將8.5g 2-氨基-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯、15.6g3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氯和8.1g DMAP在100ml吡啶中的混合物在80℃下攪拌4小時。從所得混合物中蒸除溶劑，用EtAc處理所得的蒸發(fā)殘余物并用NaHSO4水溶液和鹽水萃取所得混合物。將所得有機層干燥，從所得溶液中蒸除溶劑并用EtAc和c-Hex混合物(+5％ MeOH)處理所得殘余物。將2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯沉淀物濾出并干燥。
類似于實施例4中所述的方法，但使用合適的起始原料，獲得了式EX2的化合物 其中R1如表2中所定義1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)也在表2中給出。
表2 實施例7類似于實施例4中所述的方法，但使用合適的起始原料，獲得了下式的化合物
13C-NMR133.04，132.70，132.36，129.39，127.24，126.09，124.33，121.61，81.24，52.70，51.50，32.30，28.64。
實施例8N-[5-(2-環(huán)戊基-乙?；?-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基]-3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰胺在0℃下將DIEA和環(huán)戊基乙酰氯加入75mg 2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-鎓鹽酸鹽在CH2Cl2中的混合物中。將所得混合物在室溫下攪拌4小時，加入2ml 1M的NaHSO4水溶液并分離形成的兩相。將所得有機層濃縮并進行制備HPLC(RP-18)。獲得N-[5-(2-環(huán)戊基-乙?；?-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基]-3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰胺。
1H-NMR/CDCl3(2種旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)12.3(bs，1H)，8.28(s，2H)，7.92(s，1H)，4.44(s，1.2H)，4.32(s，0.8H)，3.79(t，J＝5.5Hz，0.8H)，3.16(t，J＝5.6Hz，1.2H)，2.55(m，1.2H)，2.48(m，0.8H)，2.32(t，J＝6.3Hz，1.2H)，2.17(m，1H)，1.78(m，2H)，1.52(m，4H)，1.07(m，2H)；13C-NMR/CDCl3172.12，168.95，145.48，132.84，132.50，129.85，127.03，125.64，124.40，121.68，114.06，43.27，42.49，40.41，40.18，39.69，38.65，36.90，33.08，25.28，24.44，23.37。
起始原料的制備S1.2-氨基-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(其中Y是叔丁氧基羰基的式IVA化合物)
將19.9g 1-BOC-哌啶-4-酮、8.4g氨腈和6.4g硫在100ml吡啶中的混合物在惰性氣氛下回流100分鐘。從所得混合物中蒸除溶劑并將所得蒸發(fā)殘余物在硅膠上進行快速色譜法。獲得2-氨基-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯。
1H-NMR/CDCl3/d6-DMSO5.95(bs，2H)，4.39(s，2H)，3.67(t，J＝5.2Hz，2H)，3.08(bs，2H)，1.43(s，9H)；13C-NMR/CDCl3/d6-DMSO166.17，153.87，79.19，28.86，27.69，26.01。
類似于實施例S1中所述的方法，但使用合適的起始原料，制備了實施例S2和S3中的化合物S2.4-氨基-3-硫雜-5，11-二氮雜-三環(huán)[6.2.1.0*2，6*]十一碳-2(6)，4-二烯-11-甲酸叔丁酯13C-NMR80.24，53.09，52.67，36.70，36.19，28.78。
S3.2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-鎓鹽酸鹽(其中R1是3，5-三氟甲基苯的式V化合物)將50ml飽和的鹽酸乙醚溶液加入9.95g 2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯在150ml CH2Cl2中的溶液中并將所得混合物在室溫下攪拌4小時。從所得混合物中蒸除溶劑并用乙醚處理所得的蒸發(fā)殘余物。將固體沉淀物濾出并干燥。獲得2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-鎓鹽酸鹽。
1H-NMR/CDCl3/d6-DMSO13.30(bs，1H)，9.86(bs，2H)，8.43(s，2H)，8.29(s，1H)，4.04(s，2H)，3.21(t，J＝5.8Hz，2H)，2.70(t，J＝5.7Hz，2H)；13C-NMR/CDCl3/d6-DMSO168.35，145.15，132.17，131.83，131.50，131.17，130.20，127.02，126.66，126.47，124.31，121.59，118.87，109.47，20.30。
類似于實施例S3中所述，但使用合適的起始原料，獲得了實施例S4和S5中的化合物
S4.2-(2，3-二氯-苯磺酰氨基)-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-鎓鹽酸鹽(其中R1是2，3-二氯苯基的式V化合物)13C-NMR168.03，141.31，134.17，134.06，129.33，129.23，128.56，128.33，108.80，19.95。
S5.2-(3，5-二氯-苯磺酰氨基)-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-鎓鹽酸鹽(其中R1是3，5-二氯苯基的式V化合物)13C-NMR168.03，141.31，134.17，134.06，129.33，129.23，128.56，128.33，108.80，19.95。
權(quán)利要求
1.其中吡啶的氮原子是取代的且其中吡啶環(huán)任選地是橋連的N-(4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基)-(C6-18)芳基磺酰胺在制備治療由類固醇硫酸酯酶的作用介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，其中的N-(4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基)-(C6-18)芳基磺酰胺是式I的化合物 其中R1是未取代的(C6-18)芳基或被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代的(C6-18)芳基，R2是(C1-12)烷氧基羰基、(C1-6)烷基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基羰基或未取代的(C6-18)芳基或被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代的(C6-18)芳基，且-R3、R4和R5是氫或者-R3和R5一起是(C1-4)亞烷基且R4是氫。
3.式II的化合物 其中R1是未取代的(C6-18)芳基或被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代的(C6-18)芳基，R2`是(C1-12)烷氧基羰基、(C1-6)烷基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基羰基或未取代的(C6-18)芳基或被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代的(C6-18)芳基，R3和R5一起是(C1-4)亞烷基，且R4是氫。
4.式III的化合物 其中R1是未取代的(C6-18)芳基或被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代的(C6-18)芳基，且R2``是(C1-12)烷氧基羰基、(C3-6)環(huán)烷基(C1-6)烷基羰基、未取代的(C6-18)芳基或被氨基羰基、鹵素或鹵代(C1-6)烷基取代的(C6-18)芳基。
5.式II的化合物，其是N-(3-硫雜-5，11-二氮雜-三環(huán)[6.2.1.0*2，6*]十一碳-2(6)，4-二烯-4-基)-苯磺酰胺或選自以下的式III化合物-2-[2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺，-2-[2-(2，3-二氯-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺，-2-[2-(3，5-二氯-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺，-2-(3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯，-2-(2，3-二氯-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯，-2-(3，5-二氯-苯磺酰氨基)-6，7-二氫-4H-噻唑并[5，4-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯，和-N-[ 5-(2-環(huán)戊基-乙?；?-4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基]-3，5-雙-三氟甲基-苯磺酰胺。
6.權(quán)利要求4或5中任一項的下式的化合物
7.權(quán)利要求3至6中任一項的鹽形式的化合物。
8.用作藥物的權(quán)利要求3至7中任一項的化合物。
9.包含藥學(xué)有效量的至少一種權(quán)利要求3至7中任一項的化合物以及至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物。
10.治療由類固醇硫酸酯酶的作用介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括對需要該治療的個體施用治療有效量的N-(4，5，6，7-四氫-噻唑并[5，4-c]吡啶-2-基)-(C6-18)芳基磺酰胺，其中吡啶的氮原子是取代的，且其中吡啶環(huán)任選地是橋連的。
11.式IV的化合物 其中X具有權(quán)利要求4中R2``的含義，或者式VI的化合物 其中X具有權(quán)利要求3中所定義的R2`的含義，或者式VII的化合物 其中R1如權(quán)利要求2中所定義。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的N－(4，5，6，7－四氫－噻唑并[5，4－c]吡啶－2－基)－(C
文檔編號C07D513/00GK1711272SQ200380102933
公開日2005年12月21日 申請日期2003年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月14日
發(fā)明者E·P·施賴納 申請人:諾瓦提斯公司