專利名稱：促紅細胞生成素受體結(jié)合抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及識別、結(jié)合和優(yōu)選地激活促紅細胞生成素受體的抗體。
背景技術(shù)：
促紅細胞生成素(“EPO”)是一種糖蛋白，其是紅細胞生成的主要調(diào)節(jié)物。具體地說，EPO負責(zé)促進紅細胞系祖細胞的生長、分化和生存，使成熟紅細胞產(chǎn)生。響應(yīng)于血液和組織中氧水平變化，促紅細胞生成素看來似乎可刺激未成熟成紅細胞的增殖和分化。其也作為生長因子的功能，刺激紅細胞系祖細胞的有絲分裂活性，例如紅細胞爆發(fā)形成和集落生成單位。也充當(dāng)分化因子，觸發(fā)紅細胞集落生成單位轉(zhuǎn)化為原成紅細胞(參見Erslev，A.，New Eng.R Med.，316101-103(1987))。
EPO具有約34,000道爾頓的分子量，以-α、β和脫唾液酸基的(asialo)三種形式存在。在懷孕的中期至晚期，EPO在胎兒肝臟內(nèi)合成。此后，EPO在腎臟內(nèi)合成，在血液中循環(huán)并在尿中排泄。
人尿EPO已得到分離純化(參見Miyake等.，J Biol.Chem.，2525558(1977))。此外，用于鑒定、克隆和表達編碼EPO基因的方法(參見美國專利第4,703,008號)以及從細胞培養(yǎng)基中純化重組EPO的方法(參見美國專利第4,667,016號)為本領(lǐng)域公知。
通過結(jié)合并激活稱為促紅細胞生成素受體的細胞表面受體，介導(dǎo)了EPO活性。所述EPO受體屬于細胞因子受體超家族，據(jù)信含有至少兩種不同的多肽，55-72kDa類和85-100kDa類(參見美國專利第6,319,499號，Mayeux等.，J Biol.Chem，26623380(1991)，McCaffery等.，J Biol.Chem.，26410507(1991))。另外的研究業(yè)已揭示其它EPO受體多肽復(fù)合物具有諸如110、130和145kDa的分子量(參見美國專利第6,319,499號)。
鼠和人EPO受體皆已得到克隆和表達(參見D′Andrea等.，Cell，57277(1989)；Jones等.，Blood，7631(1990)；Winkelmann等.，Blood，7624(1990)；WO 90/08822/美國專利第5,278,065號)。全長人EPO受體是483個氨基酸的跨膜蛋白質(zhì)，具有約25個氨基酸的信號肽(參見美國專利第6,319,499號)。人受體顯示與鼠受體具有約82％的氨基酸序列同源性。同前。
在沒有配體的情況下，EPO受體以預(yù)成型二聚體形式存在。EPO與其受體的結(jié)合導(dǎo)致構(gòu)象改變，使得胞漿區(qū)密切接近。盡管無法充分理解，據(jù)信在受體激活中該“二聚化”起作用。EPO受體的激活產(chǎn)生了眾多的生物效應(yīng)。這些活性的一些包括刺激增殖、刺激分化和抑制細胞凋亡(參見美國專利第6,319,499號，Liboi等.，PNAS USA，9011351(1993)，Koury，Science，248378(1990))。
EPO受體二聚化和激活之間的關(guān)系可用于鑒定不同于EPO的化合物(即，例如抗體)，所述化合物能(1)使EPO受體二聚化；及(2)激活所述受體。這些化合物可用于治療患貧血癥的哺乳動物，并可用于鑒定具有異常功能EPO受體的哺乳動物。
發(fā)明概述在一個實施方案中，本發(fā)明涉及結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體。在一個實施方案中，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)選自SEQ ID NOS3、7、11、15、19、31、35、39、43、47、51、55及其片段。在另一個實施方案中，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)選自SEQ ID NOS5、9、13、17、21、23、25、27、29、33、37、41、45、49、53、57及其片段。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及分離的抗體，其能在哺乳動物中結(jié)合人促紅細胞生成素受體。該抗體包含重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)，所述可變區(qū)包含CDR1-CDR3的連續(xù)序列。重鏈可變區(qū)的氨基酸序列包含CDR1-CDR3的連續(xù)序列，所述連續(xù)序列選自SEQ ID NO58、SEQ ID NO59、SEQ ID NO60、SEQ ID NO61及其片段。輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列包含CDR1-CDR3的連續(xù)序列，所述連續(xù)序列選自SEQ ID NO62、SEQ ID NO63、SEQ ID NO64、SEQ ID NO65、SEQ ID NO66、SEQ ID NO67、SEQ ID NO68及其片段。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，但不與具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用的抗體。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及在哺乳動物中能激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的抗體，其中所述抗體或其抗體片段顯示了內(nèi)源性人促紅細胞生成素與促紅細胞生成素受體結(jié)合親和力100倍范圍內(nèi)的結(jié)合親和力。
還在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的抗體或其抗體片段。所述抗體或其抗體片段包含至少一種具有SEQ ID NO3氨基酸序列或其抗體片段的人重鏈可變區(qū)，和/或至少一種具有SEQ ID NO5氨基酸序列或其抗體片段的人輕鏈可變區(qū)，只要所述抗體或其抗體片段不與具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用。
還在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的抗體或其抗體片段。所述抗體或其抗體片段包含至少一種具有SEQ ID NO7氨基酸序列或其抗體片段的重鏈可變區(qū)，和/或至少一種具有SEQ ID NO9氨基酸序列或其抗體片段的輕鏈可變區(qū)，只要所述抗體或其抗體片段不與具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用。
該實施方案也包括其它重鏈可變區(qū)，選自SEQ ID NO11、15、19、31、35、39、43、47、51和55或任一這些前述SEQ ID NOS的抗體片段，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽相互作用。包括于該實施方案中的其它輕鏈可變區(qū)可選自SEQ ID NO13、17、21、23、25、27、29、33、37、41、45、49、53和57或任一這些前述SEQ ID NOS的抗體片段，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽相互作用。
還在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種重鏈可變區(qū)和至少一種輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列，所述重鏈可變區(qū)/輕鏈可變區(qū)選自SEQ ID NO11/SEQ ID NO13、SEQ ID NO15/SEQ ID NO17、SEQ ID NO19/SEQ ID NO21、SEQ ID NO11/SEQ ID NO23、SEQ ID NO11/SEQ ID NO25、SEQ ID NO11/SEQ ID NO27、SEQ ID NO11/SEQ ID NO29、SEQ ID NO31/SEQ ID NO33、SEQ ID NO35/SEQ ID NO37、SEQ ID NO39/SEQ ID NO41、SEQ ID NO43/SEQ ID NO45、SEQ ID NO47/SEQ ID NO49、SEQ ID NO51/SEQ ID NO53和SEQ ID NO55/SEQ ID NO57或其抗體片段，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽相互作用。
還在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的方法。所述方法包括給予哺乳動物治療有效量的抗體或其抗體片段以激活EPO受體的步驟。所述抗體或其抗體片段不與具有 PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用。
還在更進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及一種在哺乳動物中調(diào)節(jié)人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的方法。所述方法包括給予哺乳動物治療有效量的抗體或其抗體片段以調(diào)節(jié)哺乳動物中人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，而不與具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用。
還在更進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及一種治療患有通過中和抗促紅細胞生成素抗體所導(dǎo)致的單純紅細胞再生障礙的哺乳動物的方法。所述方法包括給予需要治療的哺乳動物治療有效量的抗體或其抗體片段以激活所述受體，其中所述抗體或其抗體片段不與具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用。
還在更進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物含有治療有效量的抗體或其抗體片段以及藥學(xué)上可接受的賦形劑。包含于所述藥物組合物中的所述抗體或抗體片段在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，但不與具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)的氨基酸序列的肽相互作用。
還在更進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及結(jié)合并激活促紅細胞生成素受體的IgG2抗體或抗體片段。該實施方案的IgG2抗體或抗體片段與任一表位結(jié)合并相互作用，所述表位涉及激活EPO受體。該抗體可以是多克隆或單克隆抗體或任一其抗體片段。所述IgG2抗體可以是嵌合的、人源化的或人抗體。
還在更進一步的實施方案中，本發(fā)明提供了一種在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的方法，包含給予哺乳動物治療有效量的本發(fā)明的IgG2抗體或抗體片段以激活所述受體的步驟。
還在更進一步的實施方案中，本發(fā)明提供了一種在哺乳動物中調(diào)節(jié)人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的方法，包含給予哺乳動物治療有效量的本發(fā)明的IgG2抗體或抗體片段以調(diào)節(jié)所述受體的步驟。
還在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種治療患發(fā)育不良的哺乳動物的方法，所述方法包含給予需要治療的哺乳動物治療有效量的本發(fā)明的IgG2抗體或抗體片段以激活所述受體的步驟。
還在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種治療患發(fā)育不良的哺乳動物的方法，所述方法包含給予需要治療的哺乳動物治療有效量的本發(fā)明的IgG2抗體或抗體片段以調(diào)節(jié)所述受體的步驟。
還在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包含治療有效量的本發(fā)明的IgG2抗體或抗體片段以及藥學(xué)上可接受的賦形劑。
最后，本發(fā)明涉及分離的和純化的多核苷酸和氨基酸序列。所述分離的和純化的多核苷酸序列選自SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26、SEQ ID NO28、SEQ ID NO30、SEQ ID NO32、SEQ ID NO34、SEQ ID NO36、SEQ ID NO38、SEQ ID NO40、SEQ ID NO42、SEQ ID NO44、SEQ ID NO46、SEQ ID NO48、SEQ ID NO50、SEQ ID NO52、SEQ ID NO54、SEQ ID NO56及其片段、互補物和簡并密碼子等價物。
本發(fā)明進一步涉及分離的和純化的氨基酸序列，選自SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11、SEQ ID NO13、SEQ ID NO15、SEQ ID NO17、SEQ ID NO19、SEQ ID NO21、SEQ ID NO23、SEQ ID NO25、SEQ ID NO29、SEQ ID NO31、SEQ ID NO33、SEQ ID NO35、SEQ ID NO37、SEQ ID NO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQ ID NO45、SEQ ID NO47、SEQ ID NO49、SEQ ID NO51、SEQ ID NO53、SEQ ID NO55、SEQ ID NO57、SEQ ID NO58、SEQ ID NO59、SEQ ID NO60、SEQ ID NO61、SEQ ID NO62、SEQ ID N063、SEQ ID NO64、SEQ ID NO65、SEQ ID NO66、SEQ ID NO67、SEQ ID NO68及其片段和互補物。
附圖簡述

圖1顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO69和SEQ ID NO70)和人抗體Ab12的重鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS71-74。恒定區(qū)的序列單獨顯示于SEQID NO75?？勺冩溎┒宋挥诤塑账?283。可變/恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸1284-1289。恒定區(qū)位于核苷酸1290-2826。
圖2顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO76和SEQ ID NO77)和人抗體Ab12的輕鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS78。恒定區(qū)的序列單獨顯示于SEQ IDNO79?？勺冩溎┒宋挥诤塑账?363。可變/恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸1364-1369。恒定區(qū)位于核苷酸1370-1618。
圖3顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO80和SEQ ID NO81)和人抗體Ab198的重鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS82和SEQ ID NOS72-74。可變鏈末端位于核苷酸1304?？勺?恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸1305-1310。恒定區(qū)位于核苷酸1311-2847。
圖4顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO83和SEQ ID NO84)和人抗體Ab198的輕鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS78。可變鏈末端位于核苷酸1351?？勺?恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸1352-1357。恒定區(qū)位于核苷酸1358-1606。
圖5顯示了Ab12與125I標(biāo)記的EPO對與中國倉鼠卵巢細胞表達的重組EPO受體結(jié)合的競爭。
圖6顯示了使用Ab12和Ab198的EPO依賴性人細胞增殖試驗的結(jié)果。
圖7顯示了Ab12在4℃下儲存20天后，在誘導(dǎo)F36E細胞增殖中仍有活性。
圖8顯示了Ab12誘導(dǎo)從人36+祖細胞形成CFU-E(集落生成單位-紅細胞系)。
圖9顯示了用Ab198誘導(dǎo)人紅細胞系產(chǎn)生細胞增殖。
圖10顯示了Ab198誘導(dǎo)短尾猴(cynomologous)骨髓源性紅細胞系祖細胞CFU-E集落的形成。
圖11顯示了Ab12并不與SE-3肽相互作用。Ab71A與SE-3肽相互作用。
圖12顯示了原代雜交瘤分泌的人Abs誘導(dǎo)F36E細胞的增殖。
圖13顯示了原代雜交瘤分泌的人Ab上清液與完整EPO受體相互作用，但不與SE-3肽相互作用。
圖14顯示了不同濃度的Ab12對UT7/EPO細胞增殖的活性。
圖15顯示了不同濃度的Ab198對UT7/EPO細胞增殖的活性。
圖16顯示了不同濃度的Ab198(具有或不具有二級羊抗人FC抗體添加物)對UT7/EPO細胞生長和增殖的活性。
圖17顯示了不同濃度的Ab12(具有或不具有二級羊抗人FC抗體添加物)對UT7/EPO細胞生長和增殖的活性。
圖18是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-003的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖18A(SEQ ID NO10)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖18B(SEQ ID NO11)顯示了由圖18A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖18C(SEQ ID NO12)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖18D(SEQ ID NO13)顯示了由圖18C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖19是本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-012(在本文中也稱為Ab12)的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖19A(SEQ ID NO2)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖19B(SEQ ID NO3)顯示了由圖19A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖19C(SEQ ID NO4)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖19D(SEQ ID NO5)顯示了由圖19C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖20是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-022的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖20A(SEQ ID NO14)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖20B(SEQ ID NO15)顯示了由圖20A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖20C(SEQ ID NO16)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖20D(SEQ ID NO17)顯示了由圖20C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖21是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-054的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖21A(SEQ ID NO18)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖21B(SEQ ID NO19)顯示了由圖21A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖21C(SEQ ID NO20)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖21D(SEQ ID NO21)顯示了由圖21C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖22是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-060的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖22A(SEQ ID NO10)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖22B(SEQ ID NO11)顯示了由圖22A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖22C(SEQ ID NO22)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖22D(SEQ ID NO23)顯示了由圖22C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖23是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-102的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖23A(SEQ ID NO10)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖23B(SEQ ID NO11)顯示了由圖23A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖23C(SEQ ID NO24)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖23D(SEQ ID NO25)顯示了由圖23C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖24是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-135的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖24A(SEQ ID NO10)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖24B(SEQ ID NO11)顯示了由圖24A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖24C(SEQ ID NO26)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖24D(SEQ ID NO27)顯示了由圖24C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖25是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-145的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖25A(SEQ ID NO10)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖25B(SEQ ID NO11)顯示了由圖25A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖25C(SEQ ID NO28)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖25D(SEQ ID NO29)顯示了由圖25C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖26是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-198(在本文中也稱為Ab198)的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖26A(SEQ ID NO6)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖26B(SEQ ID NO7)顯示了由圖26A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖26C(SEQ ID NO8)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖26D(SEQ ID NO9)顯示了由圖26C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖27是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-254的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖27A(SEQ ID NO30)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖27B(SEQ ID NO31)顯示了由圖27A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖27C(SEQ ID NO32)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖27D(SEQ ID NO33)顯示了由圖27C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖28是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-267的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖28A(SEQ ID NO34)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖28B(SEQ ID NO35)顯示了由圖28A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖28C(SEQ ID NO36)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖28D(SEQ ID NO37)顯示了由圖28C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖29是顯示了根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的抗EPOr mAbs的重鏈可變區(qū)氨基酸序列比對的表格，顯示了它們相關(guān)的胚系可變區(qū)序列和鑒定的骨架區(qū)以及互補決定區(qū)。
圖30是顯示了根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的抗EPOr mAbs的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列比對的表格，顯示了它們相關(guān)的胚系可變區(qū)序列和鑒定的骨架區(qū)以及互補決定區(qū)。
圖31是比較在不同濃度下，γ-1 Ab12單克隆抗體(Mab)和γ-2 Ab12 Mab對F36e人紅白血病細胞系的紅細胞生成活性的圖。
圖32是顯示了用載體、Epogen(5U)或Ab12抗體(5或50μg)的多劑量給藥法處理的轉(zhuǎn)基因小鼠中網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)和紅細胞比容百分數(shù)的增加的圖。
圖33是顯示了用不同濃度的AranespTM或Ab12的周劑量給藥法(超過3周)處理的轉(zhuǎn)基因小鼠中網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)的增加的圖。
圖34是顯示了用不同濃度的AranespTM或Ab12的單或周劑量給藥法處理的轉(zhuǎn)基因小鼠中網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)的增加的比較圖。
圖35是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-390的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖35A(SEQ ID NO38)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖35B(SEQ ID NO39)顯示了由圖35A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖35C(SEQ ID NO40)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖35D(SEQ ID NO41)顯示了由圖35C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖36是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-412的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖36A(SEQ ID NO42)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖36B(SEQ ID NO43)顯示了由圖36A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖36C(SEQ ID NO44)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖36D(SEQ ID NO45)顯示了由圖36C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖37是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-430/432的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖37A(SEQ ID NO46)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖37B(SEQ ID NO47)顯示了由圖37A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖37C(SEQ ID NO48)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖37D(SEQ ID NO49)顯示了由圖37C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖38是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-467的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖38A(SEQ ID NO50)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖38B(SEQ ID NO51)顯示了由圖38A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖38C(SEQ ID NO52)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖38D(SEQ ID NO53)顯示了由圖38C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖39是在本發(fā)明中稱為ABT2-SCX-484的細胞系表達的人抗EPO-R抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)核苷酸和氨基酸序列的一系列代表，圖39A(SEQ ID NO54)顯示了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，圖39B(SEQ ID NO55)顯示了由圖39A所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列，圖39C(SEQ ID NO56)顯示了編碼輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列，以及圖39D(SEQ ID NO57)顯示了由圖39C所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
圖40是顯示了根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的抗EPOr mAbs的重鏈可變區(qū)氨基酸序列比對的表格，顯示了它們相關(guān)的胚系可變區(qū)序列和鑒定的骨架區(qū)以及互補決定區(qū)。
圖41是顯示了根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的抗EPOr mAbs的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列比對的表格，顯示了它們相關(guān)的胚系可變區(qū)序列和鑒定的骨架區(qū)以及互補決定區(qū)。
圖42顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO86和SEQ ID NO87)和人抗體Ab390的重鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS88和SEQ ID NOS 72-74。可變鏈末端位于核苷酸463?？勺?恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸464-469。恒定區(qū)位于核苷酸470-2006。
圖43顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO89和SEQ ID NO90)和人抗體Ab390的輕鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS91。可變鏈末端位于核苷酸463。可變/恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸464-469。恒定區(qū)位于核苷酸470-718。
圖44顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO92和SEQ ID NO93)和人抗體Ab412的重鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS94和SEQ ID NOS 72-74?？勺冩溎┒宋挥诤塑账?69?？勺?恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸470-475。恒定區(qū)位于核苷酸476-2012。
圖45顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO95和SEQ ID NO96)和人抗體Ab412的輕鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS97。可變鏈末端位于核苷酸463。可變/恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸464-469。恒定區(qū)位于核苷酸470-718。
圖46顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO98和SEQ ID NO99)和人抗體Ab432的重鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS100和SEQ ID NOS 72-74?？勺冩溎┒宋挥诤塑账?63?？勺?恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸464-469。恒定區(qū)位于核苷酸470-2006。
圖47顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO101和SEQ ID NO102)和人抗體Ab430的輕鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS103?？勺冩溎┒宋挥诤塑账?63?？勺?恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸464-469。恒定區(qū)位于核苷酸470-718。
圖48顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO104和SEQ ID NO105)和人抗體Ab467的重鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS106和SEQ ID NOS 72-74?？勺冩溎┒宋挥诤塑账?63?？勺?恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸464-469。恒定區(qū)位于核苷酸470-2006。
圖49顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO107和SEQ ID NO108)和人抗體Ab467的輕鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS109。可變鏈末端位于核苷酸463。可變/恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸464-469。恒定區(qū)位于核苷酸470-718。
圖50顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO110和SEQ ID NO111)和人抗體Ab484的重鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS112和SEQ ID NOS 72-74?？勺冩溎┒宋挥诤塑账?69。可變/恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸470-475。恒定區(qū)位于核苷酸470-2012。
圖51顯示了分離的和純化的多核苷酸(頂鏈和底鏈分別為SEQ IDNO113和SEQ ID NO114)和人抗體Ab484的輕鏈氨基酸序列。所述氨基酸序列包含SEQ ID NOS115?？勺冩溎┒宋挥诤塑账?63。可變/恒定連接區(qū)(下劃線)位于核苷酸464-469。恒定區(qū)位于核苷酸470-718。
發(fā)明詳述定義本文中使用的術(shù)語“抗體”或“免疫球蛋白”指屬于多克隆、單克隆、嵌合和人或人源化種類的單鏈、雙鏈和多鏈蛋白質(zhì)及糖蛋白。術(shù)語“抗體”也包括合成的及其基因工程變體。
本文中使用的術(shù)語“抗體片段”指Fab、Fab’、F(ab’)2及Fv片段，也指對于至少一個所期望表位具有特異性的抗體的任何部分。
本文中使用的術(shù)語“γ-2”、“γ-2同種型”或“IgG2”指免疫球蛋白G(IgG)亞類2，也指其任一抗體片段。IgG分子的四種亞類為本領(lǐng)域技術(shù)人員所充分鑒定并眾所周知(參見例如，MolecularBiology of the Cell，第2版，Bruce Alberts等.，1989)。可獲得識別所有人同種型(IgA、IgG、IgD、IgE和IgM)及人免疫球蛋白亞同種型(IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的一系列單克隆抗體。
本文中使用的術(shù)語“人源化抗體”指源自非人抗體(即鼠)的保持或基本上保持親本抗體抗原結(jié)合特性，但在人中具有較低免疫原性的抗體。
本文中使用的術(shù)語“人抗體”指具有源自人胚系免疫球蛋白序列的序列的抗體，例如源自具有人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠(如，XenoMouse小鼠)、人噬菌體展示文庫或人B細胞的抗體。
本文中使用的術(shù)語“表位”指決定能特異性結(jié)合抗體或T細胞受體的任何蛋白質(zhì)。表位決定簇通常由諸如氨基酸或糖側(cè)鏈的分子的化學(xué)活性基團組成，通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征，和特定的帶電特性。
本文中使用的術(shù)語“內(nèi)源性”指相對于來自外部的產(chǎn)物或活性，在身體或細胞中出現(xiàn)的產(chǎn)物或活性。
本文中使用的術(shù)語，多核苷酸“源自”或“特異于”指定序列指包含大約至少6個核苷酸、優(yōu)選至少約8個核苷酸、更優(yōu)選至少約10-12個核苷酸、以及甚至更優(yōu)選至少約15-20個核苷酸的連續(xù)序列的多核苷酸序列，所述多核苷酸序列相應(yīng)于所指定核苷酸序列的區(qū)域，即與之同一或互補。所述序列可互補或同一于一種序列，所述一種序列特異于為本領(lǐng)域公知技術(shù)所確定的特定多核苷酸序列。來自所述序列的區(qū)域可源自，包括但不限于，編碼特定表位的區(qū)域，及非翻譯和/或非轉(zhuǎn)錄區(qū)域。
所得到的多核苷酸勿需從物理上源自研究所感興趣的核苷酸序列，可產(chǎn)生自任何方法，包括，但不限于，化學(xué)合成、復(fù)制、逆轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄，即基于該多核苷酸所源自區(qū)域的堿基序列所提供的信息。同樣地，其可表示為原始多核苷酸的有義向或反義向。此外，相應(yīng)于指定序列的組合可以本領(lǐng)域公知的方法進行改造以符合預(yù)期用途。
本文中使用的術(shù)語“為……所編碼”指對多肽序列編碼的核酸序列，其中所述多肽序列或其部分含有至少3-5個氨基酸、更優(yōu)選至少8-10個氨基酸、以及甚至更優(yōu)選至少15-20個氨基酸的氨基酸序列，所述氨基酸序列來自為該核酸序列所編碼的多肽。也包括與為所述序列所編碼的多肽可看作具相同免疫性的的多肽序列。因此，“多肽”、“蛋白質(zhì)”或“氨基酸”序列與本發(fā)明的抗體具有至少約50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高的同一性。此外，本發(fā)明的抗體與本發(fā)明的抗體的多肽或氨基序列可具有至少約60％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的相似性。本發(fā)明抗體的氨基酸序列可選自SEQUENCE ID NOS3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55和57，優(yōu)選的本發(fā)明抗體的氨基酸序列選自SEQ ID NOS3、5、7、9、51和53。
本文中使用的術(shù)語“重組多肽”、“重組蛋白質(zhì)”或“重組技術(shù)產(chǎn)生的多肽”，在本文中上述術(shù)語可互換使用，描述了根據(jù)其來源或處理方式與其在自然狀態(tài)下相關(guān)聯(lián)的多肽的全部或部分無關(guān)的多肽和/或連接到非與其在自然狀態(tài)下相連的多肽相連的多肽。重組或編碼多肽或蛋白質(zhì)勿需翻譯自指定的核酸序列。其也可以任何方法產(chǎn)生，包括化學(xué)合成或重組表達系統(tǒng)表達。
本文中使用的術(shù)語“合成肽”指任意長度氨基酸的多聚形式，其可通過本領(lǐng)域眾所周知的方法化學(xué)合成得到(參見美國專利4,816,513、5,854,389、5,891,993和6,184,344)。
本文中使用的術(shù)語“多核苷酸”指任意長度核苷酸的多聚形式，核苷酸可以是核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸。該術(shù)語僅指分子的一級結(jié)構(gòu)。因此，所述術(shù)語包括雙鏈和單鏈DNA，及雙鏈和單鏈RNA。也包括變體，諸如多核苷酸的甲基化物或加帽及修飾形式。術(shù)語“多核苷酸”、“寡聚體”、“寡核苷酸”和“寡(oligo)”在本文中可互換使用。
本文中使用的術(shù)語“純化的多核苷酸”指基本上游離的感興趣的多核苷酸或其片段，如含有小于約50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％的與所述多核苷酸天然相關(guān)的蛋白質(zhì)。用于純化感興趣的多核苷酸的技術(shù)為本領(lǐng)域眾所周知，包括例如，用促溶劑破裂含有所述多核苷酸的細胞，通過離子交換層析、親和層析以及依據(jù)密度的沉降法將所述多核苷酸與蛋白質(zhì)分離。
本文中使用的術(shù)語“純化的多肽”或“純化的蛋白質(zhì)”指基本上游離的感興趣的多肽或其片段，如含有小于約50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％與所述感興趣的多肽天然相關(guān)的細胞成分。用于純化感興趣的多肽的方法為本領(lǐng)域公知。
本文中使用的術(shù)語“分離的”指離開其原始環(huán)境(如，如果其天然存在，則為天然環(huán)境)的物質(zhì)。例如，在活的動物中出現(xiàn)的天然存在的多核苷酸或多肽是未分離的，但上述多核苷酸或DNA或多肽，在天然系統(tǒng)中分離自某些或全部的共存物質(zhì)，是分離的。上述多核苷酸可以是載體和/或上述多核苷酸或多肽可以是組合物，以及由于所述載體或組合物不是其天然環(huán)境的一部分，其仍然是分離的。
本文中使用的術(shù)語“多肽”和“蛋白質(zhì)“可互換使用，并指至少一種通過共價和/或非共價鍵連接的氨基酸分子鏈。所述術(shù)語不指特定長度的產(chǎn)物。因此，肽、寡肽和蛋白質(zhì)皆包括于多肽的定義中。所述術(shù)語包括多肽的翻譯后修飾，包括，但不限于，糖基化、乙?；?、磷酸化等。此外，蛋白質(zhì)片段、類似物、突變或變異的蛋白質(zhì)、融合蛋白等也包括于多肽的含義中。
本文中使用的術(shù)語“重組宿主細胞”、“宿主細胞”、“細胞”、“細胞系”、“細胞培養(yǎng)物”和其它表示作為單細胞實體培養(yǎng)的微生物或高等真核細胞系的上述術(shù)語指可用作為或已用作為重組載體或其它轉(zhuǎn)化DNA的受體，包括已被轉(zhuǎn)染的原始細胞的最初后代。
本文中使用的術(shù)語“復(fù)制子”指任何遺傳成分，例如質(zhì)粒、染色體或病毒，其作為細胞中多核苷酸復(fù)制的獨立單元。
本文中使用的術(shù)語“可操作地連接”指一種狀態(tài)，其中所描述成分以一種允許它們以預(yù)期方式行使功能的關(guān)系存在。因此，例如，控制序列“可操作地連接”編碼序列以這樣一種方式連接，即在與控制序列相容的條件下完成編碼序列的表達。
本文中使用的術(shù)語“載體”指一種復(fù)制子，其中連接有另一種多核苷酸區(qū)段，例如使復(fù)制和/或所述附著區(qū)段表達發(fā)生的。
本文中使用的術(shù)語“控制序列”指對于影響其所連接的編碼序列表達必需的多核苷酸序列?；诓煌乃拗魃矬w，所述序列具有不同種類。在原核生物中，上述控制序列通常包括啟動子、核糖體結(jié)合位點和終止子，以及在某些情況下，包括增強子。所述術(shù)語“控制序列”因此意在包括最低限度的其存在對于表達必需的所有成分，以及也包括其存在是有利的附加成分，例如，前導(dǎo)序列。
術(shù)語“轉(zhuǎn)染”指外源多核苷酸導(dǎo)入原核或真核宿主細胞，與用于導(dǎo)入的方法無關(guān)。所述術(shù)語“轉(zhuǎn)染”指多核苷酸穩(wěn)定或瞬時導(dǎo)入，以及包括多核苷酸的直接攝入、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)和f-接合(f-mating)。一旦導(dǎo)入至宿主細胞中，外源多核苷酸可保持作為非整合復(fù)制子，例如質(zhì)粒，或可選地，可整合入宿主基因組。
本文中使用的“處理”指預(yù)防和/或治療。
本文中使用的術(shù)語“純化的產(chǎn)物”指已分離自與所述產(chǎn)物通常相關(guān)的細胞成分或分離自可存在于感興趣的樣品中的其它類型細胞的產(chǎn)物的制劑。
本文中使用的術(shù)語“促紅細胞生成素(EPO)受體的激活”指一種或多種EPO受體經(jīng)歷的導(dǎo)致信號轉(zhuǎn)導(dǎo)入帶受體細胞內(nèi)部的分子進程。最后，該信號產(chǎn)生一種或多種細胞生理學(xué)改變。EPO受體的激活通常導(dǎo)致帶有EPO受體的細胞增殖或分化，例如，但不限于，紅細胞系祖細胞。許多事件與EPO受體的激活相關(guān)，例如，但不限于，受體的二聚化。
抗體的結(jié)構(gòu)單元是一種四聚體。每個四聚體是由兩對相同的多肽鏈組成，每對具有一條“輕”鏈(25kDa)和一條“重”鏈(約50-70kDa)。每條鏈的氨基末端部分包括主要負責(zé)抗原識別的可變區(qū)。鏈的羧基末端部分定義了主要負責(zé)抗體效應(yīng)器功能的恒定區(qū)。人輕鏈分為κ和λ輕鏈。重鏈分為μ、δ、γ、α或ε重鏈并定義為抗體同種型IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG免疫球蛋白進一步分為分別具有γ-1、γ-2、γ-3和γ-4重鏈的四種亞類(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。大多數(shù)可用于治療的人、嵌合或人源化抗體是IgG1抗體類型，包括用于治療乳腺癌的赫賽汀(Herceptin)、用于治療非霍奇金淋巴瘤的Rituxan以及用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的Humira和Remicade(參見Glennie，M.J.等.，Drug Discovery Today，8503(2003))。
在輕鏈和重鏈中，可變區(qū)和核定區(qū)連接是通過“J”區(qū)與重鏈連接，也包括“D”區(qū)。每對輕/重鏈的可變區(qū)形成抗原結(jié)合位點。因此，完整抗體具有兩個結(jié)合位點，除雙功能或雙特異性抗體外，這兩個結(jié)合位點是相同的。雙功能或雙特異性抗體是具有兩對不同重/輕鏈和兩個不同結(jié)合位點的人工雜種抗體。雙功能或雙特異性抗體可使用本領(lǐng)域公知的常規(guī)技術(shù)進行生產(chǎn)。
抗體的鏈結(jié)構(gòu)顯示了相同的一般結(jié)構(gòu)三個超變區(qū)，也稱為互補決定區(qū)或CDRs與相對保守的骨架區(qū)(FR)連接。來自每對兩條鏈的CDRs通過骨架區(qū)得到排列，能與特定表位結(jié)合。從N-末端到C-末端，輕鏈和重鏈都包含結(jié)構(gòu)域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
美國專利第6,319,499號公開了能結(jié)合并激活促紅細胞生成素受體(EPO-R)的抗體。在該專利中明確鑒定的抗體是Mabs71和73。Mab71結(jié)合稱為“SE-3”的肽，該肽具有氨基酸序列PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)(參見實施例3)。SE-3位于人EPO-R的氨基酸殘基49-78上。根據(jù)美國專利第6,319,499號所述，當(dāng)EPO-R的該區(qū)域(即氨基酸殘基49-79)與諸如Mab71的交聯(lián)劑結(jié)合，導(dǎo)致EPO受體的激活。美國專利第6,319,499號實施例6陳述了較其它受測試的肽，Mab71結(jié)合“顯著數(shù)量的SE-3肽”。該實施例進一步陳述了“顯示Mab71與含有或重疊殘基49-78的人EPO-R區(qū)結(jié)合”的情形。Mabs71和73是鼠抗體。盡管嚙齒動物和人抗體都提供了精確的靶特異性，人抗體能更有效地與身體的天然防御相互作用，且不引起與嚙齒動物抗體相同程度的抗抗體應(yīng)答(Winter，G.和Milstein，C.Nature 349293(1991))。此外，人IgG亞類具有不同柔性(Roux，K.H.等.，J.Immunol.1593372(1997))，且該差異也超出了嚙齒動物IgG同種型，因為嚙齒動物IgG同種型不同于它們的人相似物。因為蛋白質(zhì)柔性可影響抗體-抗原識別(Jimenez，R.，等.Proc.Natl.Acad Sci.USA，10092(2003))，人IgG2同種型引發(fā)的抗原識別機制截然不同于鼠抗體的那些。鼠IgG同種型通常不同于人的那些。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及結(jié)合促紅細胞生成素受體抗體或抗體片段。所述結(jié)合促紅細胞生成素受體抗體或抗體片段包含至少一種重鏈，所述重鏈具有選自SEQ ID NOS3、7、11、15、19、31、35、39、43、47、51、55和其片段的氨基酸序列。在第二個實施方案中，所述結(jié)合促紅細胞生成素受體抗體或抗體片段包含至少一種輕鏈，所述輕鏈具有選自SEQ ID NOS5、9、13、17、21、23、25、27、29、33、37、41、45、49、53、57和其片段的氨基酸序列。
在第三個實施方案中，本發(fā)明涉及在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的分離的抗體。更具體地，所述抗體包含重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)，所述可變區(qū)包含了CDR1-CDR3的連續(xù)序列。重鏈可變區(qū)的氨基酸序列包含選自SEQ ID NO58、SEQ ID NO59、SEQ IDNO60和SEQ ID NO61及其片段的CDR1-CDR3連續(xù)序列。輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列包含選自SEQ ID NO62、SEQ ID NO63、SEQID NO64、SEQ ID NO65、SEQ ID NO66、SEQ ID NO67和SEQID NO68及其片段的CDR1-CDR3連續(xù)序列。此外，本發(fā)明涉及包含重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)的分離的抗體，所述可變區(qū)包含至少一個CDR。更具體地，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，所述可變區(qū)包含至少一種選自SEQ ID NO11氨基酸殘基99-112、SEQ ID NO3氨基酸殘基26-35、SEQ ID NO3氨基酸殘基50-65、SEQ ID NO3氨基酸殘基98-105、SEQ ID NO19氨基酸殘基26-35、SEQ ID NO19氨基酸殘基50-66、SEQ ID NO19氨基酸殘基99-105、SEQ ID NO31氨基酸殘基50-66、SEQ ID NO31氨基酸殘基99-105、SEQ ID NO39氨基酸殘基26-35、SEQ ID NO39氨基酸殘基50-65、SEQ ID NO39氨基酸殘基98-105、SEQ ID NO43氨基酸殘基26-37、SEQ ID NO43氨基酸殘基52-67、SEQ ID NO43氨基酸殘基100-107、SEQ ID NO47氨基酸殘基26-35、SEQ ID NO47氨基酸殘基50-65、SEQ ID NO51氨基酸殘基26-35、SEQ ID NO51氨基酸殘基50-65、SEQ ID NO51氨基酸殘基98-105、SEQ ID NO55氨基酸殘基26-37和SEQ ID NO55氨基酸殘基52-67的CDR，或包含輕鏈可變區(qū)，所述可變區(qū)包含至少一種選自SEQ ID NO13氨基酸殘基24-34、SEQ ID NO13氨基酸殘基50-56、SEQ ID NO5氨基酸殘基89-97、SEQ ID NO27氨基酸殘基24-34、SEQ ID NO9氨基酸殘基50-56、SEQ ID NO33氨基酸殘基24-39、SEQ ID NO33氨基酸殘基55-61、SEQ ID NO41氨基酸殘基24-34、SEQ ID NO41氨基酸殘基89-97、SEQ ID NO45氨基酸殘基24-34、SEQ ID NO45氨基酸殘基50-56、SEQ ID NO45氨基酸殘基89-97、SEQ ID NO49氨基酸殘基89-97和SEQ ID NO57氨基酸殘基24-34的CDR。
在第四個實施方案中，本發(fā)明涉及結(jié)合并激活促紅細胞生成素受體的抗體或抗體片段。本發(fā)明的抗體結(jié)合至少一種與激活EPO受體相關(guān)的表位(實施例4)。不象本領(lǐng)域公知的能結(jié)合并激活促紅細胞生成素受體的其它抗體或抗體片段，例如描述于美國專利第6,319,499號的抗體，本發(fā)明的抗體并不與稱為SE-3的肽相互作用。令人驚奇地，本發(fā)明的抗體是紅細胞生成抗體，即使該抗體不與SE-3肽結(jié)合。因此，本發(fā)明的人抗體與至少一種較美國專利第6,319,499號所描述的抗體不同的人EPO受體表位相互作用。
在第五個實施方案中，本發(fā)明涉及結(jié)合并激活促紅細胞生成素受體的IgG2抗體或抗體片段。該實施方案的IgG2抗體或抗體片段與任何激活EPO受體相關(guān)表位結(jié)合并相互作用。
此外，為BIAcore所證實的結(jié)果示于實施例1中，本發(fā)明的抗體顯示了內(nèi)源性人促紅細胞生成素與促紅細胞生成素受體結(jié)合親和力100倍范圍內(nèi)的對促紅細胞生成素受體的結(jié)合親和力。已報道了由兩種EPO上非等價受體結(jié)合位點產(chǎn)生的EPO受體對EPO高(～1nM)和低(～1μM)親和力(參見Philo，J.S.等.，Biochemistry，351681(1996))。
本發(fā)明的抗體可以是多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體(參見美國專利第6,020,153號)或人或人源化抗體或其抗體片段。本發(fā)明也涉及任一前述抗體的合成的或基因工程改造的變體(參見美國專利第6,331,415號)。無論如何，優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體是人或人源化抗體。人或人源化抗體的優(yōu)點是它們潛在地減少或消除在宿主受體中抗體的免疫原性，從而允許生物利用度的增加和不利免疫反應(yīng)可能性的減少，因此潛在地使多種抗體的給予成為可能。
人源化抗體包括嵌合或CDR-移植抗體。同樣，人抗體可使用動物基因工程菌株生產(chǎn)，其中動物抗體基因表達為人抗體基因表達所抑制并功能性置換。
用于制備人源化和人抗體的方法為本領(lǐng)域公知。一種用于制備人抗體的方法使用了諸如轉(zhuǎn)基因小鼠的轉(zhuǎn)基因動物。這些轉(zhuǎn)基因動物包含插入到它們自己基因組中的產(chǎn)生人抗體實質(zhì)部分的基因組，以致在抗體生產(chǎn)過程中無法產(chǎn)生這些動物自己的內(nèi)源性抗體。用于制備上述轉(zhuǎn)基因動物的方法為本領(lǐng)域公知。上述轉(zhuǎn)基因動物可使用XenoMouse技術(shù)或通過使用“微小基因座(minilocus)”方法進行制備。用于制備XenomiceTM的方法描述于美國專利第6,162,963號、第6,150,584號、6,114,598號和6,075,181號中。用于制備使用“微小基因座(minilocus)”方法的轉(zhuǎn)基因小鼠的方法描述于美國專利第5,545,807號、5,545,806號和5,625,825號中。也參見國際公開號WO93/12227。
使用XenoMouse技術(shù)，可通過用感興趣的抗原免疫XenoMouse小鼠(Abgenix，F(xiàn)remont，California)而獲得人抗體。從表達抗體的小鼠中回收淋巴細胞(例如B細胞)。這些回收的細胞可與骨髓樣細胞系融合以制備永生雜交瘤細胞系。這些雜交瘤細胞系可得到篩選和選擇以鑒定產(chǎn)生特異于感興趣抗原的抗體的雜交瘤細胞系?？蛇x地，所述抗體可在不同于雜交瘤細胞系的細胞系中表達。更具體地，編碼特定抗體的序列可克隆自產(chǎn)生所述抗體的細胞，并可用于合適的哺乳動物宿主細胞。
對于將多核苷酸導(dǎo)入宿主細胞而言，可通過任何公知的方法進行轉(zhuǎn)化，包括，例如在病毒或病毒載體中包裝所述多核苷酸并用病毒或病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主細胞，或通過本領(lǐng)域公知的轉(zhuǎn)染方法，諸如描述于美國專利第4,399,216號、4,912,040號、4,740,461號和4,959,455號中的那些。例如，一種或多種編碼重鏈的基因可在細胞中表達，以及一種或多種編碼輕鏈的基因可在另一個細胞中表達。然后，使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)將產(chǎn)生的重鏈和輕鏈融合在一起以形成本發(fā)明的抗體?？蛇x地，可使用內(nèi)切核酸酶連接編碼部分重鏈和輕鏈的基因以重建編碼每條鏈的基因。接著，上述基因可在細胞中表達以產(chǎn)生本發(fā)明的抗體。
基于要被轉(zhuǎn)化的宿主選擇轉(zhuǎn)化方法。用于在哺乳動物細胞中導(dǎo)入異源多核苷酸的方法為本領(lǐng)域眾所周知，包括葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、磷酸鈣沉淀、1，5-二甲基-1，5-二氮十一亞甲基聚甲溴化物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、原生質(zhì)體融合、電穿孔、多核苷酸包入脂質(zhì)體膠囊內(nèi)和直接微注射DNA分子。
可用作為表達宿主的哺乳動物細胞系為本領(lǐng)域眾所周知，包括，但不限于，中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人肝細胞癌細胞、諸如大腸桿菌 (E.coli)的細菌細胞、諸如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的酵母細胞等。
也可使用CDR移植的方法制備人源化抗體。上述人源化抗體為本領(lǐng)域眾所周知。一般來說，通過獲得編碼結(jié)合EPO受體的抗體的重鏈可變和輕鏈可變序列的核酸序列，鑒定重鏈可變和輕鏈可變序列中互補決定區(qū)或“CDR”，以及將CDR核酸序列移植到人骨架核酸序列上以產(chǎn)生人源化抗體(參見，例如，美國專利第4,816,567號和第5,225,539號)。
選擇適合于體內(nèi)給藥的人骨架，意味著其不顯示免疫原性。例如，可通過之前在體內(nèi)使用上述抗體以及對氨基酸相似性研究的經(jīng)驗來決定上述選擇。
用于克隆核酸的方法為本領(lǐng)域公知。這些方法包括使用適當(dāng)?shù)囊锿ㄟ^多聚酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增要被克隆的抗體序列。適于擴增抗體核苷酸序列的引物和特異性鼠重鏈可變和輕鏈可變序列為本領(lǐng)域公知。
一旦鑒定了要被人源化的克隆抗體序列的CDRs和FRs，鑒定編碼CDRs的氨基酸序列并將相應(yīng)的核酸序列移植到所選擇的人FRs上?？墒褂霉囊锖徒宇^進行該移植，引物和接頭的選擇為本領(lǐng)域公知。
在CDRs移植到所選擇的人FRs上后，產(chǎn)生的“人源化”重鏈可變和輕鏈可變序列得到表達以產(chǎn)生結(jié)合EPO受體的人源化Fv或人源化抗體。通常而言，人源化重鏈可變和輕鏈可變序列作為融合蛋白表達，具有人恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域序列，因此獲得了結(jié)合EPO受體的完整抗體。但是，所產(chǎn)生的人源化Fv抗體并不含有所述恒定序列。優(yōu)選人恒定序列融合到人源化可變區(qū)。
使用本發(fā)明抗體結(jié)合并優(yōu)選激活的EPO受體優(yōu)選是哺乳動物EPO受體，最優(yōu)選是人EPO受體。本發(fā)明也涉及所述EPO受體類似物的使用，諸如描述于美國專利第5,292,654號中的那些。人EPO受體可購自R&D Systems(Minneapolis，Minnesota)。
(1)結(jié)合并激活EPO受體，(2)不與具有PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHQAPTARGAV(SEQ ID NO1)氨基酸序列的肽相互作用；以及(3)顯示了內(nèi)源性人EPO與EPO受體結(jié)合親和力100倍范圍內(nèi)的結(jié)合親和力的兩個(2)抗體實例是稱為Ab12和Ab198的人抗體。Ab12和Ab198是使用本文中所述的XenoMouseXenoMax技術(shù)(參見實施例1)開發(fā)的人抗體。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及編碼本文所述抗體多核苷酸和多肽序列。優(yōu)選地，上述多核苷酸編碼每條重鏈和輕鏈的可變區(qū)和恒定區(qū)，盡管其它組合也為本發(fā)明所涉及。
本發(fā)明也涉及源自與這些多核苷酸互補的公開的多核苷酸和核酸序列的寡核苷酸片段。所述多核苷酸可以RNA或DNA的形式存在。以DNA、cDNA、基因組DNA、核酸類似物及合成DNA形式存在的多核苷酸也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。所述DNA可以是雙鏈或單鏈的，如果是單鏈的，可以是編碼(有義)鏈或非編碼(反義)鏈。所述編碼多肽的編碼序列可以與本文所提供的編碼序列是相同的，或可以是與該編碼序列不同的編碼序列，由于遺傳密碼的冗余性或簡并性，本文中提供了DNA以編碼相同多肽。
優(yōu)選地，所述多核苷酸編碼本發(fā)明的至少一種重鏈可變區(qū)和至少一種輕鏈可變區(qū)。上述多核苷酸的實例顯示于SEQ ID NOS2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54和56及其片段、互補物和簡并密碼子等價物。例如，SEQ ID NO2編碼Ab12的重鏈(可變區(qū))和SEQ IDNO4編碼Ab12的輕鏈(可變區(qū))。SEQ ID NO6編碼Ab198的重鏈(可變區(qū))和SEQ ID NO8編碼Ab198的輕鏈(可變區(qū))。
本發(fā)明也包括含有修飾的多核苷酸變體，諸如多核苷酸缺失、取代或添加，以及產(chǎn)生自多核苷酸序列變體的任何多肽修飾。本發(fā)明的多核苷酸也可具有一種編碼序列，所述編碼序列是本文中所提供的編碼序列天然存在的變體。
如果在多核苷酸和所述序列之間具有至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％同一性，預(yù)計所述多核苷酸可認為與本文所提供的序列雜交。
本發(fā)明進一步涉及編碼本發(fā)明抗體的多肽及該多肽片段、類似物和衍生物。本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然純化的多肽或合成多肽。本發(fā)明多肽的片段、衍生物或類似物可以是其中一種或多種氨基酸殘基被保守的或非保守的氨基酸殘基(優(yōu)選保守的氨基酸殘基)取代的一種物質(zhì)，上述取代的氨基酸殘基可以是或可以不是為遺傳密碼所編碼的一種物質(zhì)；或其可以是其中一種或多種氨基酸殘基包括取代基團的一種物質(zhì)；或其可以是其中多肽與另一種化合物融合的一種物質(zhì)，所述另一種化合物諸如一種增加所述多肽半衰期(的化合物例如，聚乙二醇)；或其可以是其中額外的氨基酸融合到所述多肽的一種物質(zhì)，所述額外的氨基酸諸如一種前導(dǎo)或分泌序列或一種用于純化所述多肽的序列或一種前蛋白序列。上述片段、衍生物和類似物都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的多肽可具有與本文所述抗體相同的氨基酸序列，或由于一個或多個氨基酸取代的微小變化而不同的氨基酸序列。所述變化可以是通常在約1-5個氨基酸范圍內(nèi)的“保守改變”，其中取代的氨基酸具有相似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)，如用異亮氨酸取代亮氨酸或用絲氨酸取代蘇氨酸。與此相反，變化可包括非保守改變，如用色氨酸取代甘氨酸。類似的微小變化也可包括氨基酸缺失或插入或兩者?？捎帽绢I(lǐng)域眾所周知的計算機程序來創(chuàng)建用于確定哪個或多少氨基酸殘基可被取代、插入或缺失而不改變生物學(xué)或免疫學(xué)活性的指導(dǎo)，例如DNASTAR軟件(DNASTAR，Inc.，Madison，Wisconsin)。
優(yōu)選地，所述多核苷酸編碼本發(fā)明抗體的至少一種重鏈可變區(qū)或至少一種輕鏈可變區(qū)。更優(yōu)選地，所述多肽編碼本發(fā)明抗體的至少一種重鏈可變區(qū)和一種輕鏈可變區(qū)。上述多肽的實例是具有顯示于SEQID NOS3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、46、47、49、51、53、55、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68的氨基酸序列的那些及其片段。特別地，Ab12的重鏈具有顯示于SEQ ID NO3的氨基酸序列，輕鏈具有顯示于SEQ ID NO5的氨基酸序列。Ab198的重鏈具有顯示于SEQ ID NO7的氨基酸序列，輕鏈具有顯示于SEQ ID NO9的氨基酸序列。
本發(fā)明也提供了包括本發(fā)明多核苷酸的載體，用本發(fā)明載體基因工程的宿主細胞以及通過重組技術(shù)本發(fā)明抗體的產(chǎn)生方法。
宿主細胞是用諸如克隆載體或表達載體的載體基因工程的(轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)化)。所述載體可以質(zhì)粒、病毒顆粒、噬菌體等的形式存在。所述工程的宿主細胞可在改良的以適于激活啟動子、選擇轉(zhuǎn)染細胞等的常規(guī)營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。所述培養(yǎng)條件，例如溫度、pH等等，是那些先前宿主細胞選擇用于表達所使用的條件，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。
本發(fā)明的多核苷酸可用于產(chǎn)生多肽，并由此產(chǎn)生本發(fā)明的抗體。本發(fā)明的多核苷酸序列可包括于多種表達載體的任何一種中，具體而言，用于表達多肽的載體或質(zhì)粒。上述載體包括染色體、非染色體和合成DNA序列，SV40衍生物，細菌質(zhì)粒，噬菌體DNA，酵母質(zhì)粒，源自質(zhì)粒和噬菌體DNA組合的載體，諸如牛痘、腺病毒、雞痘病毒和偽狂犬病的病毒DNA。另一方面，任何其它質(zhì)粒或載體只要其在宿主中可復(fù)制并存活就可使用。
通過不同的方法可將合適的DNA序列插入到載體中。一般而言，通過本領(lǐng)域公知的方法將DNA序列插入到合適的限制性內(nèi)切核酸酶位點。表達載體中的多核苷酸序列可操作地與合適的表達控制序列(即啟動子)連接以指導(dǎo)mRNA合成。上述啟動子的實例包括，但不限于，LTR或SV40啟動子、大腸桿菌lac或trp、λ噬菌體PL啟動子和其它已知用于控制原核或真核細胞或它們的病毒中基因表達的啟動子。所述表達載體也包含用于起始翻譯的核糖體結(jié)合位點和轉(zhuǎn)錄終止子。所述載體也可包括用于擴增表達的合適的序列。例如，所述載體可含有增強子，其是病毒來源的刺激轉(zhuǎn)錄的DNA序列，例如源自諸如SV40的猿病毒、多瘤病毒、牛乳頭狀瘤病毒或莫洛尼肉瘤病毒的那些，或是基因組來源的。所述載體也優(yōu)選包含復(fù)制起點。可構(gòu)建所述載體以包含外源復(fù)制起點，上述復(fù)制起點可源自SV40或不同的病毒來源，或為宿主細胞染色體復(fù)制機制。
此外，所述載體優(yōu)選包含用于轉(zhuǎn)染宿主細胞選擇的標(biāo)記基因，例如二氫葉酸還原酶或諸如G-418(遺傳霉素，一種新霉素衍生物)或潮霉素的抗生素，或彌補諸如胸苷激酶、次黃嘌呤轉(zhuǎn)磷酸核糖激酶、二氫葉酸還原酶等的缺乏的宿主細胞遺傳損傷的基因。
適合用于本發(fā)明的載體為本領(lǐng)域公知。任何質(zhì)?；蜉d體可用于本發(fā)明中，只要其在宿主中可復(fù)制并存活?？墒褂玫妮d體的實例包括適合哺乳動物宿主和基于病毒復(fù)制系統(tǒng)的那些，例如猿病毒40(SV40)、勞氏肉瘤病毒(RSV)、腺病毒2、牛乳頭狀瘤病毒、乳頭狀瘤多型空泡形病毒BK突變株(BKV)或小鼠和人巨細胞病毒(CVM)。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及包含上述構(gòu)建體的宿主細胞。所述宿主細胞可以是諸如哺乳動物細胞的高等真核細胞，或諸如酵母細胞的低等真核細胞，或所述宿主細胞可以是諸如細菌細胞的原核細胞。優(yōu)選地，所述宿主細胞提供了適合活性抗體生產(chǎn)的環(huán)境，因為功能性四聚體抗體分子的生物合成需要正確的新生多肽鏈折疊、糖基化和組裝。合適的宿主細胞的實例，包括哺乳動物細胞，例如COS-7細胞、Bowes黑色素瘤細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、胎肺細胞L-132和諸如骨髓瘤和淋巴瘤細胞的淋巴來源的哺乳動物細胞?？捎冒瑔为毦幋aH-鏈多核苷酸序列的載體、另一種單獨編碼輕鏈的載體(例如通過使用先前討論的兩種不同載體)轉(zhuǎn)染所述宿主細胞。優(yōu)選地，用兩種不同載體轉(zhuǎn)染所述宿主細胞。
將所述載體導(dǎo)入宿主細胞中可通過磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染或電穿孔實現(xiàn)(L.David等.，Basic Methods in MolecularBiology第2版，Appleton和Lang，Paramount Publishing，East Norwalk，Conn.(1994))。
為了獲得本發(fā)明的抗體，一種或多種編碼本發(fā)明抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)及輕鏈和重鏈恒定區(qū)的多核苷酸序列應(yīng)當(dāng)整合入載體中。編碼本發(fā)明抗體的輕鏈和重鏈的多核苷酸序列可整合入一種或多種載體中，接著整合入所述宿主細胞中。
表達Ab12和Ab467的細胞系根據(jù)布達佩斯條約的規(guī)定，于2003年9月30日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，10801University Boulevard，Manassas，Virginia 20110，并獲得PTA-5554和PTA-5555的保藏號。為了本領(lǐng)域技術(shù)人員的方便，提供了這些保藏物，但并非限定上述保藏物對于實施本發(fā)明是必需的，考慮到本發(fā)明所公開的內(nèi)容，也不是限定等價的實施方案不在本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)。這些保藏物的公眾可用性并不是許可同意在本發(fā)明或任何其它專利中制造、使用或銷售所保藏的物質(zhì)。所保藏物質(zhì)的核酸序列并入本發(fā)明公開內(nèi)容中作為參考，如果與任何本文所述序列沖突的話，可作為對照。
本發(fā)明的抗體具有許多用途。一般而言，所述抗體可用于治療任何可用促紅細胞生成素或其生物學(xué)活性變體活類似物治療的病癥。例如，本發(fā)明的抗體用于治療表現(xiàn)為低紅細胞水平和/或減少的血紅蛋白水平的病癥(如貧血癥)。此外，本發(fā)明的抗體可用于治療表現(xiàn)為在血液或組織中減少或低于正常水平氧的病癥，例如，低氧癥或慢性組織缺氧和/或表現(xiàn)為不充分的血液循環(huán)或減少的血流量的疾病。本發(fā)明的抗體也可用于促進傷口愈合或用于保護由腦/脊髓損傷、中風(fēng)等所產(chǎn)生的神經(jīng)細胞和/或組織的損傷。用本發(fā)明抗體可治療的病癥的非限制性實例包括貧血癥，例如化學(xué)療法所導(dǎo)致的貧血癥、癌癥相關(guān)的貧血癥、慢性病的貧血癥、HIV相關(guān)的貧血癥、骨髓移植相關(guān)的貧血癥等，心力衰竭、缺血性心臟病和腎衰竭。同樣地，本發(fā)明包括治療任一上述疾病或病癥的方法，所述方法包含給予哺乳動物治療有效量所述抗體的步驟。優(yōu)選地，所述哺乳動物是人。
本發(fā)明的抗體也可用于鑒定和診斷具有功能失調(diào)EPO受體的哺乳動物。具有功能失調(diào)EPO受體的哺乳動物表現(xiàn)為諸如貧血癥的病癥。優(yōu)選地，所述被鑒定和診斷的哺乳動物是人。此外，本發(fā)明的抗體可用于治療患紅細胞發(fā)育不良哺乳動物中的貧血癥。紅細胞發(fā)育不良可能是由于患者在用重組促紅細胞生成素治療期間中和抗促紅細胞生成素抗體的形成而產(chǎn)生的(Casadevall，N.等.，n.Eng.J.Med.346469(2002))。所述方法包括給予患所述發(fā)育不良和需要治療的哺乳動物治療有效量本發(fā)明抗體的步驟。
在本發(fā)明另一個實施方案中，本發(fā)明的EPO受體抗體和抗體片段也可用于檢測EPO受體(如，在生物樣品中，例如組織標(biāo)本、完整細胞或其提取物)，使用常規(guī)免疫測定，例如酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射性免疫測定(RIA)或組織免疫組織化學(xué)。本發(fā)明提供了一種用于在生物樣品中檢測EPO受體的方法，包含將生物樣品與本發(fā)明的抗體或抗體片段接觸，檢測任一抗體(或抗體部分)，從而在所述生物樣品中檢測EPO受體。用可檢測的物質(zhì)直接或間接標(biāo)記所述抗體或抗體片段，以便于檢測結(jié)合或未結(jié)合的抗體或抗體片段。可利用多種本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的免疫測定方法(例如競爭性測定、直接或間接夾心免疫測定等)。
合適的可檢測物質(zhì)包括各種酶、輔基、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)和放射性物質(zhì)。合適的酶的實例包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、B-半乳糖苷酶或乙酰膽堿脂酶；合適的輔基復(fù)合體的實例包括抗生物素蛋白鏈菌素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合適的熒光物質(zhì)的實例包括7-羥基香豆素、熒光素、異硫氰酸熒光素、若丹明、二氯三嗪胺(dichlorotriazinylamine)、丹磺酰氯或藻紅蛋白；發(fā)光物質(zhì)的實例包括魯米諾；合適的放射性物質(zhì)的實例包括125I、131I、35S或3H。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種包含治療有效量的本發(fā)明抗體以及藥學(xué)上可接受載體或賦形劑的藥物組合物。在本文中使用的“藥學(xué)上可接受載體”或“藥學(xué)上可接受賦形劑”包括任何及全部生理學(xué)上相容的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲透劑和吸收延遲劑等。藥學(xué)上可接受載體或賦形劑的實例包括一種或多種水、鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等，以及它們的組合物。在許多情況下，在所述組合物中應(yīng)優(yōu)選包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇的多元醇或氯化鈉。也包括能增加所述抗體或抗體部分的貯存期限或效力的藥學(xué)上可接受物質(zhì)，例如潤濕劑或小量諸如潤濕劑或乳化劑的輔助物質(zhì)、防腐劑或緩沖液。任選地，可包括崩解劑，例如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、海藻酸或其鹽，如海藻酸鈉等。除了賦形劑之外，所述藥物組合物可包括一種或多種如下成分諸如血清白蛋白的載體蛋白、緩沖液、粘合劑、增甜劑和其它調(diào)味劑；著色劑和聚乙二醇。
本發(fā)明的化合物可以多種形式存在。它們包括，例如，液態(tài)、半固態(tài)和固態(tài)劑型，例如液態(tài)溶液(如可注射和能注入溶液)、分散液或混懸劑、片劑、丸劑、粉劑、脂質(zhì)體和栓劑。優(yōu)選的形式依賴于預(yù)期的給藥方式和療法。通常，優(yōu)選的組合物是以可注射或能注入溶液的形式存在，例如類似于用于其它抗體進行人被動免疫的那些的組合物。所述優(yōu)選的給藥方式是腸胃外給藥(如，靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)給藥)。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述抗體通過靜脈輸注或注射進行給藥。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述抗體或抗體片段通過肌肉內(nèi)或皮下注射給藥。
其它適合用于藥物組合物的給藥途徑包括，但不限于，直腸、經(jīng)皮、陰道、轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)或腸內(nèi)給藥。
在制造和貯存條件下，治療組合物通常應(yīng)當(dāng)是無菌和穩(wěn)定的。組合物可配制為溶液、微乳劑、分散液、脂質(zhì)體或其它適于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。無菌注射液的制備可通過將所需數(shù)量的活性化合物(即抗體或抗體片段)摻入至合適的溶劑中，所述溶劑具有上述列出成分的一種或組合，如果需要，接著進行過濾滅菌而實現(xiàn)。一般而言，分散液的制備可通過將活性化合物摻入至無菌載體中而實現(xiàn)，所述載體包含基本分散劑和其它來自那些上述列舉的所需成分。就用于制備無菌注射液的無菌粉劑來說，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥以產(chǎn)生活性組分加上來自先前其滅菌過濾溶液的任何附加所需成分。可保持適當(dāng)?shù)娜芤毫鲃有?，例如，通過使用諸如卵磷脂的包衣、通過維持分散液中所需的顆粒尺寸和通過使用表面活性劑。通過在組合物中包含諸如單硬脂酸鹽和明膠的延遲吸收劑可導(dǎo)致可注射組合物的延遲吸收。
本發(fā)明的抗體和抗體片段可以本領(lǐng)域公知的多種方法給予，盡管對于許多療法而言，優(yōu)選的給藥途徑/方式是靜脈注射或輸注。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，給藥途徑和/或方式基于所需結(jié)果的不同而不同。在某些實施方案中，所述活性化合物的制備可使用保護化合物抗快速釋放的載體，例如控制釋放成分，包括埋植劑、透皮貼劑和微囊遞送系統(tǒng)?？墒褂蒙锟山到?、生物相容的聚合物，例如乙二醇二乙酸乙烯酯(ethylene vinyl acetate)、聚酐、聚乙醇酸、膠原、多正酯類和聚乳酸。許多用于制備上述成分的方法是取得專利權(quán)的或通常為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的(參見，如Sustained and Controlled Release DrugDelivery Systems，J.R.Robinson，編輯.，Marcel Dekker，Inc.，NewYork，1978)。
在某些實施方案中，本發(fā)明的抗體和抗體部分可以口服給予，例如，使用惰性稀釋劑或可吸收的食用載體。所述化合物(如果需要，和其它成分)也可包被在硬或軟殼的膠囊中，壓制為片劑、含片、錠劑、膠囊、酏劑、混懸劑、糖漿劑、糯米紙囊劑等。為給予本發(fā)明的抗體或抗體片段，可通過其它腸胃外給藥法，其可能需要用物質(zhì)包被化合物、或?qū)⑺鑫镔|(zhì)與化合物共給予以免所述化合物失活。
補充的活性物質(zhì)亦可摻入至所述化合物中。在某些實施方案中，本發(fā)明的抗體或抗體片段與一種或多種附加的治療劑共配制和/或共給予。例如，本發(fā)明的EPO受體抗體或抗體片段可與一種或多種附加的能結(jié)合其它靶的抗體(如，能結(jié)合其它細胞因子或結(jié)合細胞表面分子的抗體)或一種或多種細胞因子共配制和/或共給予。此外，一種或多種本發(fā)明的可與兩種或更多種前述治療劑聯(lián)合給藥。上述聯(lián)合治療可有利于使用較低劑量的所要給予的治療劑，因此避免了與不同單一療法相關(guān)的可能的毒性或并發(fā)癥。
在本文中使用的術(shù)語“治療有效量”指其給予能產(chǎn)生療效的抗體或抗體片段的量。精確劑量可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員來確定。本領(lǐng)域公知，基于年齡、體重、性別、飲食、給藥時間、藥物相互作用和病癥嚴重程度的劑量調(diào)節(jié)是必需的且可為本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)實驗方法所確定。治療有效量也是一種其中抗體或抗體片段的治療有益效果優(yōu)于任何毒性或有害效果的量?！芭c預(yù)防相關(guān)的有效量”指在劑量上和需要達到所需預(yù)防效果的時期內(nèi)的有效量。通常地，因為在受試者疾病發(fā)作前或早期階段使用預(yù)防劑量，所以預(yù)防有效量可以小于治療有效量。
可調(diào)整給藥方案以提供最佳的所需響應(yīng)(如，治療或預(yù)防響應(yīng))。例如，可給予快速灌注劑量，在全程中給予幾次分份劑量或根據(jù)緊急治療情況的需求按比例地減少或增加劑量。以單位劑量形式配制腸胃外組合物的特別有利之處在于可易于給藥和取得劑量一致性。本文中使用的劑量單位形式指適合作為單劑量用于要被測試的哺乳動物受試者的物理上分離的單位；每個單位包含通過計算以產(chǎn)生所需的治療效果而預(yù)先確定數(shù)量的活性化合物和所需的藥物載體。本發(fā)明對劑量單位形式的規(guī)格標(biāo)準是規(guī)定自和直接基于(a)所述活性化合物的獨特特性和所要達到的特定治療或預(yù)防效果和(b)本領(lǐng)域配藥法的內(nèi)在局限性，即上述用于治療的活性化合物的個體敏感性。
本發(fā)明的抗體或抗體部分的治療或預(yù)防有效量的一個實例的非限制范圍是0.1-20mg/kg，更優(yōu)選1-10mg/kg。應(yīng)當(dāng)注意劑量值可隨著病癥類型和所要減輕的嚴重程度的變化而變化。還應(yīng)當(dāng)了解，對于任何特定的受試者而言，特定的給藥方案應(yīng)當(dāng)根據(jù)個體需要和執(zhí)行或指導(dǎo)所述組合物給藥人士的專業(yè)判斷而隨時調(diào)整，在本文中所列的劑量范圍僅作為例證無意于限制權(quán)利要求的組合物的范圍或使用。
作為實施例，而非限制，現(xiàn)在將給出本發(fā)明的實施例。
實施例1人促紅細胞生成素受體抗體的產(chǎn)生抗原制備。使用兩種不同方法將用于免疫XenoMouse動物的抗原與通用的T細胞表位(TCE)(J.Immunol.，148(5)1499(1992))偶聯(lián)。含有等量的兩種方法所制備物質(zhì)的混合物用作為免疫原。
1)2.3mg二硫蘇糖醇(DTT)和200mcg半胱氨酸偶聯(lián)的TCE(J.Immunol.，148(5)1499(1992))在室溫下混合30分鐘。通過離心經(jīng)由Sephadex G10(Pharmacia，Upsala，Sweden)層析柱除去DTT。向還原的半胱氨酸偶聯(lián)的TCE中加入200mcg重懸于磷酸鹽(PBS)緩沖液(8.1mM Na2HPO4，1.6mM NaH2PO4，136mM NaCl，2.6mM KCl，pH7.4)中的人EpoR(R&D Systems，Minneapolis，MN)可溶胞外域和33mcg磺基琥珀酸亞胺基4-(N-馬來酸亞氨甲基)-環(huán)己烷-1-羧酸酯(磺基SMCC)，并在4C下混合過夜。通過離心經(jīng)由截止分子量為10kDa的Centricon柱(Millipore，Bedford，MA)除去未反應(yīng)的EpoR。
2)人EpoR(R&D Systems，Minneapolis，MN)可溶胞外域(200mcg)重懸于PBS中并與4mcg TCE-BPA(對苯酰苯丙氨酸)混合，在紫外光(362nM)下在室溫下溫育45分鐘。通過離心經(jīng)由截止分子量為10kDa的Centricon柱(Millipore，Bedford，MA)除去未反應(yīng)的EpoR。
動物免疫。通過用上述偶聯(lián)到TCE的可溶的EpoR免疫XenoMouse小鼠(XenoMouseXG2，Abgenix，Inc.，F(xiàn)remont，CA和Vancouver，BC)產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆抗體，包括Ab12和Ab198(在本文中也分別稱為AB-ABT2-XG2-012和AB-ABT2-XG2-198)。使用20mcg抗原并以1∶1 v/v與完全弗氏佐劑(CFA)(Sigma，St Louis，MO)混合對每只小鼠進行初次免疫接種。使用20mcg以1∶1 v/v混合有不完全弗氏佐劑(IFA)的抗原進行隨后的免疫接種。具體而言，每只動物開始在尾部免疫，接著在0、14、28和42天通過腹膜內(nèi)注射進行免疫。
EpoR的生物素化。300mcg EpoR(Abbott CHO細胞，源自ref#RB690844)重懸于990mcL PBS pH8.6中，加入100mcg溶于DMSO(二甲基亞砜)的生物素-NHS(Pierce，Rockford，111)，在室溫(RT)下溫育40分鐘。通過離心經(jīng)由5kDa Centricon柱，用PBS pH7.4洗柱數(shù)次以除去游離的生物素和緩沖液，接著重懸于適當(dāng)體積中以使終濃度為600mcg/mL。
用于收獲的動物的選擇。通過ELISA測定抗EpoR抗體的滴度。將0.7mcg/ml生物素EpoR(上述的)包被在抗生物素蛋白鏈菌素培養(yǎng)板上(Sigma，St Louis，MO)，在室溫下保持1小時。除去含有未結(jié)合生物素EpoR的溶液，接著所有培養(yǎng)板用dH2O洗5次。來自EpoR免疫動物或首次用于實驗的XenoMouse動物的XenoMouse血清在2％牛奶/PBS中滴定，從最初的1∶100稀釋度至1∶2稀釋度，進行兩次重復(fù)實驗。最后一個孔為空白，培養(yǎng)板用dH2O洗5次。加入羊抗人IgGFc特異性辣根過氧化物酶(HRP)(Pierce，Rockford，IL)綴合的抗體，終濃度為1mcg/mL，在室溫下保持1小時。培養(yǎng)板用dH2O洗5次。外加TMB發(fā)色底物(KPL，Gaithersburg，MD)對培養(yǎng)板顯影30分鐘，通過添加1M磷酸終止ELISA。獲得自XenoMouse動物的特異性滴度通過在450nm下的光密度得到測定，并顯示于表1中。該滴度代表血清稀釋度的倒數(shù)，因此更高的數(shù)量就代表著對EpoR更強的體液免疫應(yīng)答。
表1

基于表1中的血清學(xué)數(shù)據(jù)，選擇XenoMouse動物14用于收獲。
B細胞的培養(yǎng)和選擇。培養(yǎng)來自收獲的動物的B細胞，那些分泌EpoR特異性抗體的細胞基本上得到分離，如Babcook等.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，937843-7848(1996)所描述的。如上所述進行測定血清滴度的ELISA，用于鑒定EpoR特異性孔。用生物素EpoR篩選以500細胞/孔培養(yǎng)的50個培養(yǎng)板，以鑒定抗原特異性孔。數(shù)據(jù)顯示于表2中，證明了存在701個ODs明顯大于背景(0.05)的孔。
表2

這些數(shù)據(jù)顯示了頻率十分低的命中，并顯示了對于抗原特異性而言孔是單克隆的。用生物素EpoR對這些701個陽性孔進行重篩選，發(fā)現(xiàn)137個孔(在下表3中以粗體顯示)重復(fù)作為真實的抗原特異性孔，具有明顯大于背景(0.05)的ODs。
表3

激動劑活性測定。將Epo響應(yīng)細胞系的增殖用作為激動劑篩選的基礎(chǔ)。接著，使用人紅白血病細胞系UT-7/Epo(Abbottref#.RB29454-174)對這些137個孔的激動劑活性進行篩選。將12.5mcL上清液加入到96孔培養(yǎng)板一半?yún)^(qū)域中，每孔1×105個細胞，加入RPMI1640(10％FCS)，以達到50mcL終體積?？壮叽鐬榈湫偷?6孔培養(yǎng)板的一半面積。目測鑒定增殖并與培養(yǎng)液中細胞比較，包含人Epo的滴定，或無Epo作為對照基線。具有增殖活性的11個孔得到鑒定。
EpoR特異性溶血空斑試驗。進行該試驗需要許多專門的試劑。這些試劑制備如下綿羊紅細胞(SRBC)的生物素化SRBC貯存于RPMI培養(yǎng)液中作為25％母液。通過抽取1.0ml母液于15-ml falcon試管中，旋壓細胞并除去上清液，獲得了250ul SRBC壓緊細胞片。接著，在50ml試管中將細胞片重懸于4.75ml pH8.6 PBS。在一個單獨的50ml試管中，將2.5mg磺基-NHS生物素加入到45ml pH8.6 PBS中。一旦生物素完全溶解，加入5ml SRBCs，將試管在室溫下旋轉(zhuǎn)1小時。SRBCs在3000g下離心5分鐘，除去上清液，用25mls pH7.4 PBS洗滌。重復(fù)3次洗滌循環(huán)，接著將4.75ml免疫細胞培養(yǎng)液(含10％FCS的RPMI 1640)加入到250ul生物素化-SRBC(B-SRBC)細胞片中，輕輕地重懸B-SRBC(5％B-SRBC母液)。母液貯存在4℃直到需要使用。
B-SRBC的抗生物素蛋白鏈菌素(SA)包被將1ml 5％B-SRBC母液轉(zhuǎn)移至新的微量離心管中。在微型夏普列斯超速離心機(microfuge)中以8000rpm(6800rcf)脈沖旋轉(zhuǎn)使B-SRBC細胞沉淀成為顆粒狀，除去上清液，細胞片重懸于1.0ml pH7.4 PBS，重復(fù)離心。重復(fù)2次洗滌循環(huán)，接著，將B-SRBC細胞片重懸于1.0ml pH7.4PBS中，以達到5％(v/v)的終濃度。加入10ul 10mg/ml抗生物素蛋白鏈菌素(CalBiochem，San Diego，CA)母液，混合試管并在室溫下旋轉(zhuǎn)20分鐘。重復(fù)洗滌步驟，SA-SRBC重懸于1ml pH7.4 PBS(5％(V/V))。
SA-SRBC的EpoR包被用10ug/ml的生物素化EpoR包被SA-SRBC，混合并在室溫下旋轉(zhuǎn)20分鐘。如上，用1ml pH7.4 PBS洗滌SRBC兩次。將EpoR包被的SRBC重懸于RPMI(+10％FCS)中至終濃度5％(v/v)。
通過免疫熒光檢驗法(IF)測定EpoR-SRBC的品質(zhì)將10ul 5％SA-SRBC和10ul 5％PTH包被的SRBC分別加入到新的1.5ml微量離心管中，離心管中含有40ul PBS。將鼠抗EpoR抗體(R&D SystemsCat.#.MAB307)加到每個SRBCs樣品中，濃度達到20ug/ml。將試管在室溫下旋轉(zhuǎn)25分鐘，接著用100ul PBS洗滌細胞3次。將細胞重懸于50ul PBS中，并與40mcg/mL Alexa488(Molecular Probes，Eugene，OR)綴合的Gt-抗小鼠IgG Fc抗體溫育。將試管在室溫下旋轉(zhuǎn)25分鐘，接著用100ul PBS洗滌，將細胞重懸于10ul PBS中。將10ul的染色的細胞點在清潔的玻璃載玻片上，用玻璃蓋玻片覆蓋，在熒光下觀察，打分為0-4的任意標(biāo)度。
血漿細胞的制備收獲通過先前試驗鑒定的單一微量細胞培養(yǎng)孔的內(nèi)容物，其含有分泌感興趣免疫球蛋白的B細胞克隆。使用100-1000ul自動移液器，通過添加37C R PMI(+10％FCS)回收孔內(nèi)容物。通過移液重懸細胞，接著轉(zhuǎn)移至新的1.5ml微量離心管中(終體積大約為500-700ul)。在室溫下，細胞在微型夏普列斯超速離心機上以1500rpm(240rcf)離心2分鐘，接著試管旋轉(zhuǎn)180度并以1500rpm旋轉(zhuǎn)2分鐘。除去結(jié)冰的培養(yǎng)液，將免疫細胞重懸于100ul RPMI(10％FCS)中，接著離心。重復(fù)用RPMI(10％FCS)洗滌，將細胞重懸于60ul RPMI(FCS)中，貯存在冰上備用。
噬菌斑測定預(yù)先準備具有硅氧烷邊緣的載玻片(2×3英寸)，使之在室溫下保藏過夜。在使用該載玻片前，用大約5ul SigmaCoat(Sigma，Oakville，ON)均勻地擦拭玻璃表面，使之干燥，接著用力擦拭。將60ul細胞樣品加到60ul每個EpoR包被的SRBC(5％v/v母液)、配制于含10％FCS的RPMI中的4x豚鼠補體(Sigma，Oakville，ON)母液，和4x增強血清母液(在含10％FCS的RPMI中，1∶900)中。將混合液(3-5ul)點在制備的載玻片上，并用未稀釋的石蠟油覆蓋斑點。載玻片在37℃下最少溫育45分鐘。
噬菌斑測定結(jié)果通過使用MAB307檢測包被的免疫熒光顯微術(shù)定性檢測的包被應(yīng)當(dāng)是十分高的(4/4)，相比而言，二級檢測試劑僅為(0/4)。使用MAB307抗體對僅包被有抗生物素蛋白鏈菌素的紅細胞檢測，沒有檢測到信號(0/4)。接著，這些紅細胞被用于鑒定來自表4中所鑒定的14個孔的抗原特異性血漿細胞。在顯微操作以拯救抗原特異性血漿細胞后，在單個血漿細胞上通過RT-PCR，編碼可變區(qū)基因的基因得到拯救。
表4

表達。在單個血漿細胞分離后，抽提mRNA，進行逆轉(zhuǎn)錄酶PCR以產(chǎn)生cDNA。使用多聚酶鏈式反應(yīng)特異性擴增編碼可變重鏈和輕鏈的cDNA。將可變重鏈區(qū)克隆至IgG2表達載體。通過將人IgG2恒定區(qū)克隆至pcDNA3.1+/Hygro(Invitrogen，Burlington，ON)的多克隆位點以產(chǎn)生該載體。將可變輕鏈區(qū)克隆至IgK表達載體。通過將人IgK恒定區(qū)克隆至pcDNA3.1+/Neo(Invitrogen，Burlington，ON)的多克隆位點以產(chǎn)生該載體。接著，將適當(dāng)配對的重鏈和輕鏈表達載體共脂質(zhì)轉(zhuǎn)染入60mm培養(yǎng)皿中，該培養(yǎng)皿中為70％匯合的人胚腎293細胞，讓轉(zhuǎn)染的細胞持續(xù)分泌重組抗體24小時。從HEK 293細胞中收獲上清液(3mL)，用特異性檢測人IgG的夾心ELISA來證明完整抗體(AB-ABT2-XG2-012和AB-ABT2-XG2-198)的分泌物(表5，第4欄)。用ELISA通過重組抗體與生物素化EpoR的結(jié)合來評估AB-ABT2-XG2-012和AB-ABT2-XG2-198的特異性，(表5，第5欄)。
表5

對抗原特異性抗體分泌物而言，ELISA按如下進行。用2mg/mL羊抗人IgG H+L O/N包被對照培養(yǎng)板。對于結(jié)合培養(yǎng)板而言，將生物素-EpoR(0.7mcg/mL) 包被在抗生物素蛋白鏈菌素96孔培養(yǎng)板(Sigma，St Louis，MO)上，在室溫下保持1小時。培養(yǎng)板用dH2O洗5次。來自未稀釋的微脂質(zhì)轉(zhuǎn)染上清液對7個孔的重組抗體以1∶2滴定。培養(yǎng)板用dH2O洗5次。加入HRP綴合的羊抗人IgG Fc特異性抗體，終濃度至1ug/mL，在室溫下保持1小時，用于分泌物和結(jié)合ELISA。培養(yǎng)板用dH2O洗5次。添加TMB發(fā)色底物(KPL，Gaithersburg，MD)對培養(yǎng)板顯影30分鐘，通過添加1M磷酸終止ELISA。分析每塊ELISA培養(yǎng)板以測定在450nm下每個孔的光密度。
AB-ABT2-XG2-012和AB-ABT2-XG2-198的純化。對于大規(guī)模生產(chǎn)而言，將重鏈和輕鏈表達載體(2.5ug每條鏈/皿)脂質(zhì)轉(zhuǎn)染入10個100mm培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿中為70％匯合的HEK293細胞。轉(zhuǎn)染細胞在37℃下溫育4天，收獲上清液(6mL)，并用6mL的新鮮培養(yǎng)液置換。在第7天，分離上清液，并與最初的收獲物混合(120mL，總共來自10個培養(yǎng)皿)。使用蛋白Sepharose(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)親和層析(1mL)從上清液中純化ABT2-XG2-012和ABT2-XG2-198抗體。用500mcL 0.1M pH2.5甘氨酸將抗體從蛋白-A柱上洗脫下來。洗脫液在pH7.4 PBS中透析并過濾滅菌。使用非還原SDS-PAGE分析抗體以評估純度和產(chǎn)率。
重組抗體的激動劑活性。使用UT-7/Epo細胞檢測這些重組抗體刺激Epo響應(yīng)細胞的增殖，根據(jù)如上所述的激動劑活性測定方法，通過在490nm下測量MTS試劑(Promega，Madison，WI)對增殖定量。與培養(yǎng)液中無抗體的細胞比較，ABT2-SCX-012和ABT2-SCX-198引起增殖，顯示如下(分別于圖14和15)。
抗人Fc的影響。ABT2-SCX-012和ABT2-SCX-198的激動劑活性有可能是基于自聚集。為了求證該觀點，我們通過添加抗人Fc二抗誘導(dǎo)了聚集，使用UT-7/Epo細胞測定了對ABT2-SCX-012和ABT2-SCX-198激動劑活性的影響。顯示如下，二抗的添加不影響ABT2-SCX-198的活性(圖16)，但抑制了ABT2-SCX-012的活性(圖417)。
因為添加二級抗體抑制了ABT2-SCX-012的活性，所以我們推測該抗體的聚集干擾其活性，因此ABT2-SCX-012基于聚集而具有激動劑活性是不太可能的。但是，ABT2-SCX-198的結(jié)果卻更難以解釋。缺乏能暗示ABT2-SCX-198是完全聚集的結(jié)果，因此添加二級抗體并不能進一步影響其活性。可選地，也缺乏能暗示通過應(yīng)用二抗ABT2-SCX-198活性而不受構(gòu)象限制微擾的結(jié)果。
ABT2-SCX-012和ABT2-SCX-198的序列分析。對抗體ABT2-SCX-012和ABT2-SCX-198的可變重鏈和可變輕鏈測序以確定它們的DNA序列。對于抗EpoR抗體而言，完整的序列信息顯示于圖1、2中，圖18-30顯示了重鏈γ和κ輕鏈的每個可變區(qū)的核苷酸和氨基酸序列。圖1和2提供了全長序列，包括恒定區(qū)。
對可變重鏈序列分析以確定VH家族、D區(qū)序列和J區(qū)序列。接著將序列翻譯以確定一級氨基酸序列(圖29)，并與胚系VH、D和J區(qū)序列比較以評估體細胞高度突變。所有抗EpoR抗體γ鏈的一級氨基酸序列顯示于圖16中。胚系序列顯示在上方，突變用新的氨基酸序列標(biāo)明。未改變的氨基酸用破折號(-)標(biāo)明。分析輕鏈，類似于測定V和J區(qū)，并鑒定任何來自胚系κ序列的體細胞突變(圖30)。顯示了ABT2-SCX-012的重鏈利用了VH 4-59(DP-71)、DIR4rc和JH4a區(qū)段，同時顯示了其輕鏈利用了VkI(A30)和Jk1基因區(qū)段。顯示了ABT2-SCX-198的重鏈利用了VH 3-30(V3-30)、D4-23和JH6b基因區(qū)段，同時顯示了其輕鏈利用了VkI(L5)和Jk3基因區(qū)段。
實施例2Ab12與125I標(biāo)記的EPO對CHO細胞表達的重組EPO受體結(jié)合的競爭在試驗前72小時，表達全長重組人EPO受體的CHO細胞以5x105細胞/孔置于24孔培養(yǎng)板中。在試驗日，95ul Ab12、Ab198或Epo按規(guī)定濃度(示于圖5)稀釋于RPMI 1640，0.5％BSA，1mM NaN3和5ul(6ng)125I-EPO(Amersham Cat.#IM178，Arlington Heights，IL486ci/mM)中，添加到孔中。在37℃下溫育1.5小時，用冷HBSS洗孔3次，使用0.5mi 0.1N NaOH收獲。在Micromedic ME Plus γ計數(shù)器中對樣品計數(shù)，結(jié)果顯示對于與促紅細胞生成素受體結(jié)合而言，Abs12和198與EPO競爭。
實施例3Biacore研究該研究描述如下，在Biacore 2000上進行，使用Biacontrol 3.1版軟件(Biacore，Uppsala，Sweden)。將抗體直接固定在芯片表面，接著注射不同濃度的受體以進行結(jié)合分析。
抗體的固定化使用Biacore軟件包中的常規(guī)固定化程序進行抗體的固定化。在補充的乙酸緩沖液中將抗體稀釋到10ug/mL，以預(yù)篩選用于固定化的合適的pH。對于固定化來說，抗體在合適的乙酸緩沖液(10mM pH4.0乙酸)中稀釋，并在三種不同蛋白質(zhì)水平(500，1000和1500RU)下，使用標(biāo)準的EDC化學(xué)作用直接偶聯(lián)到芯片表面。用EDC對第四種流動的細胞模擬偶聯(lián)，對羧基基團加帽，并提供了作為陰性對照的背景表面。
結(jié)合研究通過在芯片表面(500RU固定的蛋白質(zhì))連續(xù)注射不同濃度的可溶人EPO受體進行結(jié)合研究。在補充的HBS-EP緩沖液[HBS緩沖液-10mM HEPES pH＝7.4，150mM NaCl，3mM EDTA，0.005％聚山梨醇酯20(v/v)，Biacore]中，使用稀釋到所需濃度(10-200nM)的受體，使用電泳緩沖液(HBS-EP)進行結(jié)合分析。在30uL/min的流速下進行試驗。受體注射3分鐘后，接著解離15分鐘。同時也注射流動的細胞以創(chuàng)建陰性對照。所有注射重復(fù)3次。
模型擬合數(shù)據(jù)利用BiaEvaluation 3.0.2軟件包(Biacore)進行對模型的擬合。來自試驗注射的數(shù)據(jù)點通過將數(shù)據(jù)點減去同時在陰性對照表面上出現(xiàn)的得到校正。將校正的數(shù)據(jù)與1∶1(Langmuir)結(jié)合模型以及由BiaEvaluation軟件包所得的二價結(jié)合物模型擬合。從與Langmuir結(jié)合模型的擬合中直接計算解離常數(shù)。對于二價分析物模型而言，使用動力學(xué)解離和動力學(xué)結(jié)合常數(shù)(kd和ka)的計算值間接計算解離常數(shù)。
表6

實施例4EPO依賴性人細胞增殖試驗人紅白血病細胞系的儲用培養(yǎng)物，F(xiàn)36E細胞保持在含有10％胎牛血清和1單位/毫升的重組人促紅細胞生成素的RPMI 1640培養(yǎng)液中。在試驗前，培養(yǎng)細胞過夜，在不含有EPO的生長培養(yǎng)液中密度為4.0-5.0×105細胞/毫升?；厥占毎?，洗滌并以1.0×106細胞/毫升的密度重懸于試驗培養(yǎng)液(RPMI 1640+10％FBS)中，將50uL細胞加到96孔微量培養(yǎng)板的孔中。將50uL試驗培養(yǎng)液中的Ab12、Ab390、Ab412、Ab467、Ab484、Ab430/432和Ab198或EPO標(biāo)準(重組人EPO(rHuEPO))分別加到孔中，將培養(yǎng)板在潮濕的保溫箱于37℃，5％CO2氣氛中溫育。72小時后，20μL Promega Cell Titer 96 Aqueous試劑(根據(jù)制造商的說明書進行制備，Madison，Wisconin)加到所有孔中。培養(yǎng)板于37℃，5％CO2氣氛中溫育4小時，使用全自動定量繪圖酶標(biāo)儀(microplate reader) (Wallac Victor 1420 MultilabelCounter，Wallac Company，Boston，MA)在490nm處測定光密度。結(jié)果顯示于圖6中。所有Abs都刺激F36E細胞系的增殖。最大增殖活性類似于用EPO作對照所觀察到的結(jié)果，顯示為隨著濃度增加的鐘形曲線。圖7中的結(jié)果證明了Ab12，在4℃下貯存20天后，具有誘導(dǎo)F36E細胞增殖的活性。增殖活性類似于用EPO作對照所觀察到的結(jié)果，具有較基本摩爾等價物不同的約10倍的最大效應(yīng)。
實施例5人CD36+CFUe測定對獲得自Poietics(Biowhittaker(Walkersville，MD))的冷凍的人CD36+紅細胞系組細胞解凍，在IMDM-2％FBS中密度為104細胞/毫升。將0.3ml細胞(0.3ml)加到試管中，該試管含有2.4ml Methocult(StemCell Technologies，Vancouver，Canada，Cat.#04230)，0.3ml干細胞生長因子(Sigma，St.Louis，Missouri Cat.#S7901，100ug/ml)和0.3ml EPO(R&D Systems)、Ab12或IMDM-2％FBS。混合后，將1.1ml Methocult懸浮液加到35mm非組織培養(yǎng)物處理的無菌皮氏培養(yǎng)皿中，在37℃，5％CO2下溫育2周。用顯微鏡鑒定克隆。結(jié)果顯示于圖8中。特別地，Ab12誘導(dǎo)從人CD36+組細胞形成CFU-E集落。通過顯微鏡鑒定的集落是紅色的。該集落的尺寸和數(shù)量較用EPO作對照所觀察到的那些減少了，大概是由于減少的增殖信號的緣故。
實施例6液體培養(yǎng)物中紅細胞生成活性的證實使用指導(dǎo)CD34+組細胞分離試劑盒(Miltenyi，Auburn，CA)從人外周血中富集CD34+細胞?；厥盏募毎忙?培養(yǎng)液洗滌2次，重懸于懸浮培養(yǎng)液(補充有30％FCS、1％去離子BSA、10-5M巰基乙醇、10-6M地塞米松、0.3mg/mL人hollo轉(zhuǎn)鐵蛋白和10ng/mL人重組干細胞因子的α-培養(yǎng)液)中。細胞以1×104細胞/毫升密度移至兩個相同的6孔微量培養(yǎng)板中，微量培養(yǎng)板含有濃度范圍從0.1-100ng/mL的測試抗體。培養(yǎng)板在37℃和5％CO2下溫育2周?；厥諄碜悦總€孔的兩份樣品用于細胞計數(shù)，并用聯(lián)苯胺染色(參考文獻Fibach，E.，1998Hemoglobin，225-6，445-458)。
結(jié)果顯示于圖9中。具體而言，Ab198誘導(dǎo)了源自祖細胞的人紅細胞系生成細胞以劑量依賴方式的增殖。增殖細胞的數(shù)量和表達血紅蛋白的百分數(shù)，通過用聯(lián)苯胺染色指示，與EPO處理的對照比較再次減少，大概是由于減少的增殖信號的緣故。
實施例7短尾猴骨髓CFUe測定從短尾猴中獲得骨髓并用PBS以1∶2稀釋。3ml稀釋的骨髓在6ml的淋巴細胞分離劑(Gibco(Invitrogen)，Carlsbad，CA Cat.#1001967)上分層，以2700rpm離心20分鐘，回收淡黃色層，在10mlIMDM-2％FBS中稀釋。將細胞離心并以106細胞/毫升重懸于IMDM-2％FBS中。將細胞(0.3ml)加到試管中，該試管含有2.4ml Methocult(StemCell Technologies，Vancouver，Canada，Cat.#04230)、0.3ml干細胞生長因子(Sigma，Cat.#S7901，100ug/ml)、0.3ml EPO(R&DSystems，Minneapolis，Minnesota)、測試抗體(Ab198)或IMDM-2％FBS?；旌虾?，將1.1ml Methocult懸浮液加到35mm非組織培養(yǎng)物處理的無菌皮氏培養(yǎng)皿中，在37℃、5％CO2下溫育2周。用顯微鏡鑒定集落。試驗結(jié)果顯示于圖10中，證實了Ab198誘導(dǎo)CFU-E集落的形成(盡管于用EPO作對照所觀察到的結(jié)果比較，許多集落減小了)。
實施例8用ELISA測定與SE-3肽的結(jié)合96孔聚苯乙烯培養(yǎng)板(Dynatec(Elk Grove Village，IL)Immunolon4)用80ul 5ug/ml的可溶EPO受體(sEPOR)(R&D Systems(Minneapolis，MN)Cat.#307-ER/LF)包被，或SE-3肽(PGNYSFSYQLEDEPWKLCRLHWAPTARGAV)(描述于美國專利第6,319,499號)稀釋于0.015M Na2CO3、0.035M pH9.4 NaHCO3中，在室溫下保持2小時并在4℃下過夜。培養(yǎng)板用100ul溶于PBS中的5％BSA(Gibco(Invitrogen(Carlsbad，CA))Cat.#10010)在室溫下封閉30分鐘。在除去封閉溶液后，向孔中加入50ul Ab12，Ab12以5ug/ml溶于含1％BSA的PBS中，培養(yǎng)板在室溫下溫育2小時。培養(yǎng)板用含PBS/0.05％Tween 20的Skatron 400培養(yǎng)板洗液洗滌3次，向孔中加入50ul稀釋于PBS/0.25％BSA/0.05％Tween 20中的二抗。對于Ab12而言，使用1∶1000稀釋的羊抗人IgG(Fc)-HRP(Caltag(Burlingame，CA)Cat.#H10507)，對于Ab71A(獲得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心HB11689，也描述于美國專利第6,319,499號)而言，使用1∶5000稀釋的羊抗小鼠IgG(Fc)-HRP(Jackson Laboratories(WestGrove，PA)Cat.#115-035-164)。室溫溫育1小時后，如前所述，培養(yǎng)板洗滌3次，向每個孔中加入50ul OPD顯影試劑(Sigma#P9187)。通過向孔中添加50ul 1N HCl終止顏色顯影，在Victor 1420 Multi-Label計數(shù)器上在490nm處測量光密度。
圖11顯示了Ab12不與SE-3肽相互作用(即結(jié)合)。Ab71A與SE-3肽相互作用(即結(jié)合)，Abs12和71A都與固定化促紅細胞生成素受體相互作用。
實施例9EPO依賴性增殖測定原代雜交瘤上清液在試驗培養(yǎng)液中稀釋，測試它們刺激F36E人紅白血病細胞增殖的能力，如實施例5所描述。5種原代上清液的結(jié)果顯示于圖12中。這些樣品刺激F36E細胞的增殖。
實施例10用ELISA測定雜交瘤上清液與SE-3肽的結(jié)合測試42種原代雜交瘤上清液與固定化EPO受體或SE-3肽的結(jié)合能力，如實施例10所描述。圖13顯示了盡管所有的雜交瘤上清液都測試與固定化EPO受體相互作用，但是僅有樣品16與SE-3肽相互作用，高于背景水平。
實施例11γ-1Ab12對γ-2Ab12紅細胞生成活性的比較進行增殖測定(如實施例4所描述)以比較γ-1Ab12和γ-2Ab12對F36e人紅白血病細胞的紅細胞生成活性。結(jié)果顯示于圖31中。如圖31所顯示，γ-2Ab12較γ-1Ab12在刺激F36E細胞系增殖方面更有效。
實施例12Ab12對體內(nèi)紅細胞生成的影響(a)mEpoR-/-、hEopR+轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建如Liu，C.等.，Jounal ofBiological Chemistry，27232395(1997)和Yu，X.，等.，Blood，98(2)475(2001)中所描述，產(chǎn)生僅生成人EpoR(hEpoR+，單等位基因)而無內(nèi)源性小鼠EpoR(mEpoR-/-，雙等位突變)的轉(zhuǎn)基因小鼠。繁育已確定生育用于體內(nèi)紅細胞生成研究的小鼠的群體。
(b)多劑量給藥法在最初的試驗中，對動物施以Ab12多劑量給藥法以測定是否抗體能引起網(wǎng)織紅細胞計數(shù)和/或％紅細胞比容的增加。5種轉(zhuǎn)基因小鼠(mEpoR-/-，hEpoR+，用溶在0.2ml載體(含有0.1％牛血清白蛋白[BSA]的磷酸鹽緩沖液[PBS])中的5μg或50μgAb12皮下注射。對照動物也以同樣方式用相等體積的載體單獨注射，或用含有5U Epogen(Amgen，Thousand Oaks，CA)的載體注射。所有動物根據(jù)如下時間表給藥3周

在第4天取樣抽血(第1周星期四)用于測定網(wǎng)織紅細胞計數(shù)，在第19天取樣抽血(第3周星期五)用于測定紅細胞比容。使用本領(lǐng)域眾所周知的方法進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù)和紅細胞比容測定。如圖32所顯示，Ab12引起了接受5或50μg Ab12抗體的動物中網(wǎng)織紅細胞計數(shù)和％紅細胞比容統(tǒng)計學(xué)上的顯著增加(較對照而言)。
(c)周劑量給藥法為評估是否在多劑量給藥法中所觀察到的結(jié)果在動物接受更少劑量Ab12時仍可觀察到，用不同濃度(0.5、2.5、5.0、50和250μg)的Ab12或?qū)φ眨珹ranespTM(Amgen，Thousand Oaks，CA)，一種Epogen的更具活性變體，在第1、8和15天注射(如上述(b)所描述)轉(zhuǎn)基因小鼠以及在第4和19天抽血，用于分別測定網(wǎng)織紅細胞和紅細胞比容。對照動物僅接受單劑量載體或人IgG2同種型對照。圖33顯示了盡管僅在更低濃度測試，Ab12仍引起統(tǒng)計學(xué)上的顯著增加(較載體和同種型對照而言)。
(d)單劑量對周劑量給藥法為測定是否單劑量Ab12在3周后能影響紅細胞生成，給轉(zhuǎn)基因小鼠服用Ab12(50μg)，每次間隔一周，持續(xù)3周，或服用單劑量Ab12(150μg)，在第19天抽血用于測定紅細胞比容百分數(shù)。對照動物僅接受載體，單劑量的AranespTM(900ng)或每次間隔一周注射的3次總劑量的AranespTM(300ng×3)。圖34顯示了較載體對照而言，Ab12的兩種劑量給藥法都引起紅細胞比容百分數(shù)統(tǒng)計學(xué)上的顯著增加。與此相反，AranespTM的單劑量給藥法并不具有該結(jié)果。
所有本文中涉及的摘要、參考文獻、專利和公開的專利申請在此并入作為參考文獻。
經(jīng)由在前描述和實施例以說明本發(fā)明。在前描述意在作為非限制性說明，因為按其觀點許多變化對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言結(jié)果是顯而易見的。
可對描述于本文中的本發(fā)明的組合物、方法的操作和安排進行改變而不背離本發(fā)明的概念和范圍。
序列表<110>Abbott LaboratoriesDeVries，Peter J.
Green，Larry L.
Ostrow，David H.
Reilly，Edward B.
Wieler，James<120>促紅細胞生成素受體結(jié)合抗體<130>6989WOO1<140> Not yet received<141>2003-10-14<150>10/269,711<151>2002-10-14<150>Not yet received<151>2003-10-10<160>115<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>30<212>PRT<213>人<400>1Pro Gly Asn Tyr Ser Phe Ser Tyr Gln Leu Glu Asp Glu Pro Trp Lys1 5 10 15Leu Cys Arg Leu His Gln Ala Pro Thr Ala Arg Gly Ala Val20 25 30<210>2<211>349<212>DNA<213>人
<400>2caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgc ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120ccagggaagg gactggagtg gattgggtat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240aagctgaggt ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agagcgactg 300gggatcgggg actactgggg ccaaggaacc ctggtcaccg tctcctcag 349<210>3<211>116<212>PRT<213>人<400>3Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala Ser Ile Ser Ser Tyr20 25 30Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys50 55 60Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu65 70 75 80Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Arg Glu Arg Leu Gly Ile Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val100 105 110Thr Val Ser Ser115<210>4<211>322<212>DNA<213>人<400>4gacatccagc tgacccaatc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatactt accctccgac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa ac322<210>5<211>107<212>PRT<213>人<400>5Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp20 25 30Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Thr Tyr Pro Pro85 90 95Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105<210>6<211>370<212>DNA<213>人<400>6caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60tcctgtgtag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agttgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcac 300ggtgggaggt acgtctacga ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360gtctcctcag370<210>7<211>123<212>PRT<213>人<400>7
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Asp His Gly Gly Arg Tyr Val Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val100 105 110Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser115 120<210>8<211>322<212>DNA<213>人<400>8gacatccaga tgacccaatc tccatcttcc gtgtctgcat ctataggaga cagagtctcc 60atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctacgctcct tatctatgct gcatccactt tgcaacgtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300gggaccaaag tggatatcaa ac 322<210>9<211>107<212>PRT<213>人<400>9Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Ile Gly1 5 10 15Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp20 25 30Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Thr Leu Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe85 90 95Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys100 105<210>10<211>370<212>DNA<213>人<400>10caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agttgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcac 300ggtgggaggt acgtctacga ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360gtctcctcag370<210>11<211>123<212>PRT<213>人<400>11Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Asp His Gly Gly Arg Tyr Val Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val100 105 110Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120<210>12<211>322<212>DNA<213>人<400> 12gacatccaga tgacccaatc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtctcc 60atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag tctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctgcgctcct aatctatgct gcatccagtt tgcagcgtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300gggaccaaag tggatatcaa ac 322<210>13<211>107<212>PRT<213>人<400>13Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp20 25 30Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Ala Leu Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe85 90 95Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys100 105<210>14<211>370<212>DNA<213>人<400>14
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120ccaggcaagg ggctggagtg ggtggtagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agttgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcac 300ggtgggaggt acgtctacga ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360gtctcctcag370<210>15<211>123<212>PRT<213>人<400>15Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Val Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Asp His Gly Gly Arg Tyr Val Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val100 105 110Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser115 120<210>16<211>322<212>DNA<213>人<400>16gacatccaga tgacccaatc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtctcc 60atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctacgctcct aatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300gggaccaaag tggatatcaa ac 322
<210>17<211>107<212>PRT<213>人<400>17Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp20 25 30Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Thr Leu Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe85 90 95Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys100 105<210>18<211>349<212>DNA<213>人<400>18caggtgcagc tggtggagtc ggggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt aaatatggca tgcactgggt ccgccaggct 120ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt ttatggtatg atggaagtaa taaatactat 180gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggtccg 300tactactttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcag 349<210>19<211>116<212>PRT<213>人<400>19Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ala Val Leu Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val100 105 110Thr Val Ser Ser115<210>20<211>325<212>DNA<213>人<400>20gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactg tcaccatcag cagactggaa 240cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gttcaccgtg gacgttcggc 300caagggacca aggtggaaat caaac 325<210>21<211>108<212>PRT<213>人<400>21Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Val Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro85 90 95Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105<210>22<211>322<212>DNA<213>人<400>22gacatccaga tgacccaatc tccatcttcc gtgtccgcat ctgtaggaga cagagtctcc 60atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctacgctcct aatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300gggaccaaag tggatatcaa ac 322<210>23<211>107<212>PRT<213>人<400>23Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp20 25 30Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Thr Leu Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe85 90 95Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys100 105<210>24<211>322
<212>DNA<213>人<400>24gacatccaga tgacccaatc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtctcc 60atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300gggaccaaag tggatatcaa ac 322<210>25<211>107<212>PRT<213>人<400>25Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp20 25 30Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe85 90 95Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys100 105<210>26<211>322<212>DNA<213>人<400>26gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctacat ctgtaggaga cagagtctcc 60atcacttgtc gggcgagtca gggtattggc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120gggcaagccc ctacgctcct aatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag cctgcagcct 240gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300
gggaccaaag tggatgtcaa ac322<210>27<211>107<212>PRT<213>人<400>27Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Thr Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Trp20 25 30Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Thr Leu Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe85 90 95Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Val Lys100 105<210>28<211>322<212>DNA<213>人<400>28gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtctcc 60atcacttgtc gggcgagtca gggtattggc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120gggcaagccc ctacgctcct aatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag cctgcagcct 240gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300gggaccaaag tggatgtcaa ac 322<210>29<211>107<212>PRT<213>人<400>29Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Trp20 25 30Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Thr Leu Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe85 90 95Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Val Lys100 105<210>30<211>349<212>DNA<213>人<400>30caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtttg atggaaataa taaattctat 180gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agtcgaggac acggctgtgt attactgtgc gcgaggcggg 300agctactggg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcag 349<210>31<211>116<212>PRT<213>人<400>31Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ala Val Ile Trp Phe Asp Gly Asn Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Gly Gly Ser Tyr Trp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val100 105 110Thr Val Ser Ser115<210>32<211>336<212>DNA<213>人<400>32gatattgtga tgacccagac tccactcttc tcatttgtca tgattggaca gccggcctcc 60atctcctgca ggtctaggca aagcctcgta cacagtgatg gaaacaccta cttgaattgg 120cttcagcaga ggccaggcca gcctccaaga ctcctaattt ataagacttc taaccggttc 180tctggggtcc cagatagatt cagtggcagt ggggcaggga cagatttcac actgaaaatc 240agcagggtgg aagctgagga tgtcggggtt tattactgta tgcaagctac acaatttcct 300atcacgttcg gccaagggac acgactggag attaaa 336<210>33<211>112<212>PRT<213>人<400>33Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Phe Ser Phe Val Met Ile Gly1 5 10 15Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser20 25 30Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro35 40 45Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Thr Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro50 55 60Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala85 90 95Thr Gln Phe Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys100 105 110<210>34
<211>370<212>DNA<213>人<400>34caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240ctgcaaatga acagcctgag agttgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatcac 300ggtgggaggt acgtctacga ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360gtctcctcag370<210>35<211>123<212>PRT<213>人<400>35Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Lys Asp His Gly Gly Arg Tyr Val Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val100 105 110Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser115 120<210>36<211>322<212>DNA<213>人<400>36gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtctcc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattggc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120gggcaagccc ctacgctcct aatctatgct gcctccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag cctgcagcct 240gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300gggaccaaag tggatgtcaa ac 322<210>37<211>107<212>PRT<213>人<400>37Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Trp20 25 30Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Thr Leu Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe85 90 95Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Val Lys100 105<210>38<211>348<212>DNA<213>人<400>38caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60aectgcactg tctctggtgc ctccatcagt aattactact ggagctggat ccggcagccc 120ccagggaagg gactggagtg gattgggtat gtctcttaca gtgggagtac gtactacaac 180ccctccctca agggtcgagt caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agaaaaactg 300gggattggag actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348<210>39<211>116<212>PRT
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 404 5Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Cys85 90 95Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys100 105<210>42<211>354<212>DNA<213>人<400>42caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgc ctccatcagc agtggtgctt actactggag ttggatccgc 120cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct ataagagtga gacctcctac 180tacaacccgt ccctcaagag tcgacttacc ctatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240tccctgaacc tgatctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattattg tgcgagagat 300aaactgggga tcgcggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354<210>43<211>118<212>PRT<213>人<400>43Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala Ser Ile Ser Ser Gly20 25 30Ala Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu35 40 45Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Lys Ser Glu Thr Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser50 55 60Leu Lys Ser Arg Leu Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe65 70 75 80Ser Leu Asn Leu Ile Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr85 90 95Cys Ala Arg Asp Lys Leu Gly Ile Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
<213>人<400>39Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala Ser Ile Ser Asn Tyr20 25 30Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Tyr Val Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys50 55 60Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu65 70 75 80Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Arg Glu Lys Leu Gly Ile Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val100 105 110Thr Val Ser Ser115<210>40<211>322<212>DNA<213>人<400>40gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaaa aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt atccgtgcag ttttggccag 300gggaccaagc tggagatcaa ac 322<210>41<211>107<212>PRT<213>人<400>41Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Lys Asn Asp20 25 30
100 105 110Leu Val Thr Val Ser Ser115<210>44<211>322<212>DNA<213>人<400>44gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca ggacattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagct accctcccac tttcggcgga 300gggaccaagg tggaaatcaa ac 322<210>45<211>107<212>PRT<213>人<400>45Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Asp20 25 30Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro85 90 95Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105<210>46<211>349<212>DNA<213>人
<400>46caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgt ctccatcagt aattactact ggagctggat ccggcagtcc 120ccagggaagg gactggagtg gattggatat atctattaca gtgggagtcc ctattacaac 180ccctccctca agagtcgagt cactatatct gcagacacgt ccaagaacca attctccctg 240aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccatttatt actgtgcgag agaaaaactg 300gggattggag actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcag 349<210>47<211>116<212>PRT<213>人<400>47Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Ile Ser Asn Tyr20 25 30Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Pro Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys50 55 60Ser Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu65 70 75 80Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Arg Glu Lys Leu Gly Ile Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val100 105 110Thr Val Ser Ser115<210>48<211>322<212>DNA<213>人<400>48gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtcggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctcccac tttcggccct 300
gggaccaagg tggatatcaa ac322<210>49<211>107<212>PRT<213>人<400>49Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp20 25 30Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro85 90 95Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys100 105<210>50<211>349<212>DNA<213>人<400>50caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt cgttactact ggagctggat ccggcagccc 120ccagggaagg gactggagtg gattgggtat gtctcttaca gtgggagcac ctactacaac 180ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agataaactg 300gggattggag actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcag 349<210>51<211>116<212>PRT<213>人<400>51Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Arg Tyr20 25 30Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Tyr Val Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys50 55 60Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu65 70 75 80Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Arg Asp Lys Leu Gly Ile Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val100 105 110Thr Val Ser Ser115<210>52<211>322<212>DNA<213>人<400>52gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaaccg 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt acccgtgcag ttttggccag 300gggaccaagc tggagatcaa ac 322<210>53<211>107<212>PRT<213>人<400>53Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp20 25 30Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Cys85 90 95Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys100 105<210>54<211>355<212>DNA<213>人<400>54caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc ctttacagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtgttt actactggag ctggatccgc 120cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct ataacagtaa gacctcctat 180tataatccgt ccctcaagag tcgacttacc ctatcagtag acacgtctaa gaaccagttc 240tccctgaacc tgatctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagat 300aaattgggga tcgcggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 355<210>55<211>118<212>PRT<213>人<400>55Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Leu Gln1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly20 25 30Val Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu35 40 45Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Asn Ser Lys Thr Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser50 55 60Leu Lys Ser Arg Leu Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe65 70 75 80Ser Leu Asn Leu Ile Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr85 90 95Cys Ala Arg Asp Lys Leu Gly Ile Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr100 105 110Leu Val Thr Val Ser Ser115
<210>56<211>322<212>DNA<213>人<400>56gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc ggacaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagct accctcccac tttcggcgga 300gggaccaagg tggagatcaa ac 322<210>57<211>107<212>PRT<213>人<400>57Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp20 25 30Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro85 90 95Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105<210>58<211>34<212>PRT<213>人<400>58Gly Ala Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly1 5 10 15
Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Glu Arg Leu Gly Ile Gly20 25 30Asp Tyr<210>59<211>41<212>PRT<213>人<400>59Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Val Ile Ser Tyr Asp Gly1 5 10 15Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Asp His Gly Gly Arg20 25 30Tyr Val Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val35 40<210>60<211>34<212>PRT<213>人<400>60Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr Gly Met His Val Leu Trp Tyr Asp Gly1 5 10 15Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Asp Gly His Tyr Phe20 25 30Asp Tyr<210>61<211>34<212>PRT<213>人<400>61Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Val Ile Trp Phe Asp Gly1 5 10 15Asn Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Ala Pro Ala Tyr Trp20 25 30
Asp Tyr<210>62<211>27<212>PRT<213>人<400>62Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Ala Ala Ser Ser Leu1 5 10 15Gln Ser Leu Gln His Asn Thr Tyr Pro Pro Thr20 25<210>63<211>27<212>PRT<213>人<400>63Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Ala Ala Ser Thr Leu1 5 10 15Gln Arg Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr20 25<210>64<211>29<212>PRT<213>人<400>64Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Val Ala Leu Ala Ala Ser1 5 10 15Ser Leu Gln Arg Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr20 25<210>65<211>27<212>PRT<213>人
<400>65Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Ala Ala Ser Ser Leu1 5 10 15Gln Arg Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr20 25<210>66<211>27<212>PRT<213>人<400>66Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Ser Trp Leu Ala Ala Ala Ser Ser Leu1 5 10 15Gln Arg Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr20 25<210>67<211>32<212>PRT<213>人<400>67Arg Ser Arg Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn1 5 10 15Lys Thr Ser Asn Arg Phe Ser Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro Ile Thr20 25 30<210>68<211>28<212>PRT<213>人<400>68Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Gly Ala Ser Ser1 5 10 15Arg Ala Thr Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr20 25
<210>69<211>1990<212>DNA<213>人<400>69atgaagcatc tgtggttctt ccttctccta gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120tgcactgtct ctggtgcctc catcagtagt tactactgga gctggatccg gcagccccca 180gggaagggac tggagtggat tgggtatatc tattacagtg ggagcaccaa ctacaacccc 240tccctcaaga gtcgagtcac catatcagta gacacgtcca agaaccagtt ctccctgaag 300ctgaggtctg tgaccgctgc ggacacggcc gtgtattact gtgcgagaga gcgactgggg 360atcggggact actggggcca aggaaccctg gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc 420ccatcggtct tccccctggc gccctgctct agaagcacct ccgagagcac agccgccctg 480ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct 540ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 600agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta 660gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagacagttg gtgagaggcc agctcaggga 720gggagggtgt ctgctggaag ccaggctcag ccctcctgcc tggacgcacc ccggctgtgc 780agccccagcc cagggcagca aggcaggccc catctgtctc ctcacccgga ggcctctgcc 840cgccccactc atgctcaggg agagggtctt ctggcttttt ccaccaggct ccaggcaggc 900acaggctggg tgcccctacc ccaggccctt cacacacagg ggcaggtgct tggctcagac 960ctgccaaaag ccatatccgg gaggaccctg cccctgacct aagccgaccc caaaggccaa 1020actgtccact ccctcagctc ggacaccttc tctcctccca gatccgagta actcccaatc 1080ttctctctgc agagcgcaaa tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccaggt aagccagccc 1140aggcctcgcc ctccagctca aggcgggaca ggtgccctag agtagcctgc atccagggac 1200aggccccagc tgggtgctga cacgtccacc tccatctctt cctcagcacc acctgtggca 1260ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 1320cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac 1380tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc 1440aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc 1500aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1560tccaaaacca aaggtgggac ccgcggggta tgagggccac atggacagag gccggctcgg 1620cccaccctct gccctgggag tgaccgctgt gccaacctct gtccctacag ggcagccccg 1680agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag 1740cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa 1800tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg ctggactccg acggctcctt 1860cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc 1920atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc 1980tccgggtaaa1990<210>70<211>1990<212>DNA
<213>人<400>70tttacccgga gacagggaga ggctcttctg cgtgtagtgg ttgtgcagag cctcatgcat 60cacggagcat gagaagacgt tcccctgctg ccacctgctc ttgtccacgg tgagcttgct 120gtagaggaag aaggagccgt cggagtccag catgggaggt gtggtcttgt agttgttctc 180cggctgccca ttgctctccc actccacggc gatgtcgctg gggtagaagc ctttgaccag 240gcaggtcagg ctgacctggt tcttggtcat ctcctcccgg gatgggggca gggtgtacac 300ctgtggttct cggggctgcc ctgtagggac agaggttggc acagcggtca ctcccagggc 360agagggtggg ccgagccggc ctctgtccat gtggccctca taccccgcgg gtcccacctt 420tggttttgga gatggttttc tcgatggggg ctgggaggcc tttgttggag accttgcact 480tgtactcctt gccgttcagc cagtcctggt gcacaacggt gaggacgctg accacacgga 540acgtgctgtt gaactgctcc tcccgtggct ttgtcttggc attatgcacc tccacgccgt 600ccacgtacca gttgaactgg acctcggggt cttcgtggct cacgtccacc accacgcacg 660tgacctcagg ggtccgggag atcatgaggg tgtccttggg ttttgggggg aagaggaaga 720ctgacggtcc tgccacaggt ggtgctgagg aagagatgga ggtggacgtg tcagcaccca 780gctggggcct gtccctggat gcaggctact ctagggcacc tgtcccgcct tgagctggag 840ggcgaggcct gggctggctt acctgggcac ggtgggcact cgacacaaca tttgcgctct 900gcagagagaa gattgggagt tactcggatc tgggaggaga gaaggtgtcc gagctgaggg 960agtggacagt ttggcctttg gggtcggctt aggtcagggg cagggtcctc ccggatatgg 1020cttttggcag gtctgagcca agcacctgcc cctgtgtgtg aagggcctgg ggtaggggca 1080cccagcctgt gcctgcctgg agcctggtgg aaaaagccag aagaccctct ccctgagcat 1140gagtggggcg ggcagaggcc tccgggtgag gagacagatg gggcctgcct tgctgccctg 1200ggctggggct gcacagccgg ggtgcgtcca ggcaggaggg ctgagcctgg cttccagcag 1260acaccctccc tccctgagct ggcctctcac caactgtctt gtccaccttg gtgttgctgg 1320gcttgtgatc tacgttgcag gtgtaggtct gggtgccgaa gttgctggag ggcacggtca 1380ccacgctgct gagggagtag agtcctgagg actgtaggac agctgggaag gtgtgcacgc 1440cgctggtcag agcgcctgag ttccacgaca ccgtcaccgg ttcggggaag tagtccttga 1500ccaggcagcc cagggcggct gtgctctcgg aggtgcttct agagcagggc gccaggggga 1560agaccgatgg gcccttggtg gaggctgagg agacggtgac cagggttcct tggccccagt 1620agtccccgat ccccagtcgc tctctcgcac agtaatacac ggccgtgtcc gcagcggtca 1680cagacctcag cttcagggag aactggttct tggacgtgtc tactgatatg gtgactcgac 1740tcttgaggga ggggttgtag ttggtgctcc cactgtaata gatataccca atccactcca 1800gtcccttccc tgggggctgc cggatccagc tccagtagta actactgatg gaggcaccag 1860agacagtgca ggtgagggac agggtctccg aaggcttcac cagtcctggg cccgactcct 1920gcagctgcac ctgggacagg acccatctgg gagctgccac taggagaagg aagaaccaca1980gatgcttcat1990<210>71<211>241<212>PRT<213>人<400>71
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Leu Ala Ala Pro1 5 10 15Arg Trp Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu20 25 30Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala35 40 45Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys50 55 60Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr65 70 75 80Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Ala Ser Pro Thr85 90 95Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp100 105 110Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Leu Gly Ile Gly Asp Tyr115 120 125Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly130 135 140Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser145 150 155 160Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val165 170 175Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe180 185 190Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val195 200 205Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val210 215 220Ala Ser Pro His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Ala Ser Pro Lys Thr225 230 235 240Val<210>72<211>12<212>PRT<213>人<400>72Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro1 5 10
<210>73<211>115<212>PRT<213>人<400>73Ala Pro Pro Val Ala Leu Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro1 5 10 15Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys20 25 30Val Val Val Ala Ser Pro Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe35 40 45Asn Trp Tyr Val Ala Ser Pro Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr50 55 60Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val65 70 75 80Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys85 90 95Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser100 105 110Lys Thr Lys115<210>74<211>107<212>PRT<213>人<400>74Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu1 5 10 15Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe20 25 30Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu35 40 45Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe50 55 60Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly65 70 75 80Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr85 90 95Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys100 105
<210>75<211>310<212>PRT<213>人<400>75Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr1 5 10 15Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser20 25 30Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser35 40 45Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr50 55 60Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys65 70 75 80Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro85 90 95Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp100 105 110Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp115 120 125Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly130 135 140Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn145 150 155 160Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp165 170 175Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro180 185 190Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu195 200 205Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn210 215 220Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile225 230 235 240Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr245 250 255Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys260 265 270Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys275 280 285
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu290 295 300Ser Leu Ser Pro Gly Lys305 310<210>76<211>552<212>DNA<213>人<400>76atgagggtcc ccgctcagct cctggggctc ctgctgctct ggttcccagg tgccaggtgt 60aagcttgaca tccagctgac ccaatctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120gtcaccatca cttgccgggc aagtcagggc attagaaatg atttaggctg gtatcagcag 180aaaccaggga aagcccctaa gcgcctgatc tatgctgcat ccagtttgca aagtggggtc 240ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagaattca ctctcacaat cagcagcctg 300cagcctgaag attttgcaac ttattactgt ctacagcata atacttaccc tccgacgttc 360ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgctagcg ttgtgtgcct gctgaataac 480ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540tcccaggaga gt 552<210>77<211>552<212>DNA<213>人<400>77actctcctgg gagttacccg attggagggc gttatccacc ttccactgta ctttggcctc 60tctgggatag aagttattca gcaggcacac agcgctagca gttccagatt tcaactgctc 120atcagatggc gggaagatga agacagatgg tgcagccaca gttcgtttga tttccacctt 180ggtcccttgg ccgaacgtcg gagggtaagt attatgctgt agacagtaat aagttgcaaa 240atcttcaggc tgcaggctgc tgattgtgag agtgaattct gtcccagatc cactgccgct 300gaaccttgat gggaccccac tttgcaaact ggatgcagca tagatcaggc gcttaggggc 360tttccctggt ttctgctgat accagcctaa atcatttcta atgccctgac ttgcccggca 420agtgatggtg actctgtctc ctacagatgc agacagggag gatggagatt gggtcagctg 480gatgtcaagc ttacacctgg cacctgggaa ccagagcagc aggagcccca ggagctgagc 540ggggaccctc at 552<210>78<211>184<212>PRT<213>人
<400>78Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Phe Pro1 5 10 15Gly Ala Arg Cys Lys Leu Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser20 25 30Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser35 40 45Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys50 55 60Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val65 70 75 80Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr85 90 95Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln100 105 110His Asn Thr Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile115 120 125Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp130 135 140Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn145 150 155 160Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu165 170 175Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser180<210>79<211>31<212>PRT<213>人<400>79Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln1 5 10 15Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser20 25 30<210>80<211>2011<212>DNA<213>人
<400>80atggaattgg ggctccgctg ggttttcctc gttgctcttt taagaggtgt ccagtgtcag 60gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120tgtgtagcct ctggattcac cttcagtagc tatggcatgc actgggtccg ccaggctcca 180ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tcatatgatg gaagtaataa atactatgca 240gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300caaatgaaca gcctgagagt tgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agatcacggt 360gggaggtacg tctacgacta cggtatggac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 420tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc tagaagcacc 480tccgagagca cagccgccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag 600tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc 660cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt 720ggtgagaggc cagctcaggg agggagggtg tctgctggaa gccaggctca gccctcctgc 780ctggacgcac cccggctgtg cagccccagc ccagggcagc aaggcaggcc ccatctgtct 840cctcacccgg aggcctctgc ccgccccact catgctcagg gagagggtct tctggctttt 900tccaccaggc tccaggcagg cacaggctgg gtgcccctac cccaggccct tcacacacag 960gggcaggtgc ttggctcaga cctgccaaaa gccatatccg ggaggaccct gcccctgacc 1020taagccgacc ccaaaggcca aactgtccac tccctcagct cggacacctt ctctcctccc 1080agatccgagt aactcccaat cttctctctg cagagcgcaa atgttgtgtc gagtgcccac 1140cgtgcccagg taagccagcc caggcctcgc cctccagctc aaggcgggac aggtgcccta 1200gagtagcctg catccaggga caggccccag ctgggtgctg acacgtccac ctccatctct 1260tcctcagcac cacctgtggc aggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1320accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1380gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1440aagccacggg aggagcagtt caacagcacg ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg 1500caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca 1560gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc aaaggtggga cccgcggggt atgagggcca 1620catggacaga ggccggctcg gcccaccctc tgccctggga gtgaccgctg tgccaacctc 1680tgtccctaca gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga 1740gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat 1800cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat 1860gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg 1920gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac 1980gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa a2011<210>81<211>2011<212>DNA<213>人<400>81tttacccgga gacagggaga ggctcttctg cgtgtagtgg ttgtgcagag cctcatgcat 60
cacggagcat gagaagacgt tcccctgctg ccacctgctc ttgtccacgg tgagcttgct 120gtagaggaag aaggagccgt cggagtccag catgggaggt gtggtcttgt agttgttctc 180cggctgccca ttgctctccc actccacggc gatgtcgctg gggtagaagc ctttgaccag 240gcaggtcagg ctgacctggt tcttggtcat ctcctcccgg gatgggggca gggtgtacac 300ctgtggttct cggggctgcc ctgtagggac agaggttggc acagcggtca ctcccagggc 360agagggtggg ccgagccggc ctctgtccat gtggccctca taccccgcgg gtcccacctt 420tggttttgga gatggttttc tcgatggggg ctgggaggcc tttgttggag accttgcact 480tgtactcctt gccgttcagc cagtcctggt gcacaacggt gaggacgctg accacacgga 540acgtgctgtt gaactgctcc tcccgtggct ttgtcttggc attatgcacc tccacgccgt 600ccacgtacca gttgaactgg acctcggggt cttcgtggct cacgtccacc accacgcacg 660tgacctcagg ggtccgggag atcatgaggg tgtccttggg ttttgggggg aagaggaaga 720ctgacggtcc tgccacaggt ggtgctgagg aagagatgga ggtggacgtg tcagcaccca 780gctggggcct gtccctggat gcaggctact ctagggcacc tgtcccgcct tgagctggag 840ggcgaggcct gggctggctt acctgggcac ggtgggcact cgacacaaca tttgcgctct 900gcagagagaa gattgggagt tactcggatc tgggaggaga gaaggtgtcc gagctgaggg 960agtggacagt ttggcctttg gggtcggctt aggtcagggg cagggtcctc ccggatatgg 1020cttttggcag gtctgagcca agcacctgcc cctgtgtgtg aagggcctgg ggtaggggca 1080cccagcctgt gcctgcctgg agcctggtgg aaaaagccag aagaccctct ccctgagcat 1140gagtggggcg ggcagaggcc tccgggtgag gagacagatg gggcctgcct tgctgccctg 1200ggctggggct gcacagccgg ggtgcgtcca ggcaggaggg ctgagcctgg cttccagcag 1260acaccctccc tccctgagct ggcctctcac caactgtctt gtccaccttg gtgttgctgg 1320gcttgtgatc tacgttgcag gtgtaggtct gggtgccgaa gttgctggag ggcacggtca 1380ccacgctgct gagggagtag agtcctgagg actgtaggac agctgggaag gtgtgcacgc 1440cgctggtcag agcgcctgag ttccacgaca ccgtcaccgg ttcggggaag tagtccttga 1500ccaggcagcc cagggcggct gtgctctcgg aggtgcttct agagcagggc gccaggggga 1560agaccgatgg gcccttggtg gaggctgagg agacggtgac cgtggtccct tggccccaga 1620cgtccatacc gtagtcgtag acgtacctcc caccgtgatc tctcgcacag taatacacag 1680ccgtgtcctc aactctcagg ctgttcattt gcagatacag cgtgttcttg gaattgtctc 1740tggagatggt gaatcggccc ttcacggagt ctgcatagta tttattactt ccatcatatg 1800atataactgc cacccactcc agccccttgc ctggagcctg gcggacccag tgcatgccat 1860agctactgaa ggtgaatcca gaggctacac aggagagtct cagggacctc ccaggctgga 1920ccacgcctcc cccagactcc accagctgca cctgacactg gacacctctt aaaagagcaa 1980cgaggaaaac ccagcggagc cccaattcca t2011<210>82<211>252<212>PRT<213>人<400>82Met Glu Leu Gly Leu Arg Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Ala Leu Leu1 5 10 15Arg Gly Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val20 25 30
Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Leu Ala Ser35 40 45Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Ala Arg Gly Gln50 55 60Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Leu Ala Val Ile Ser Tyr65 70 75 80Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr85 90 95Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser100 105 110Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp His Gly115 120 125Gly Arg Tyr Val Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr130 135 140Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro145 150 155 160Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly165 170 175Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn180 185 190Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln195 200 205Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser210 215 220Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Ala Ser Pro His Lys225 230 235 240Pro Ser Asn Thr Lys Val Ala Ser Pro Lys Thr Val245 250<210>83<211>752<212>DNA<213>人<400>83atgagggtcc ccgctcagct cctggggctc ctgctgctct ggttcccagg ttccagatgc 60gacatccaga tgacccaatc tccatcttcc gtgtctgcat ctataggaga cagagtctcc 120atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 180gggaaagccc ctacgctcct tatctatgct gcatccactt tgcaacgtgg ggtcccatca 240aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 300gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 360gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggaagtg ggtagtcccg gactcgagcg 720ggcagtgttt ctcgaagttg tcccctgagt gt 752<210>84<211>752<212>DNA<213>人<400>84acactcaggg gacaacttcg agaaacactg cccgctcgag tccgggacta cccacttccc 60ctgttgaagc tctttgtgac gggcgagctc aggccctgat gggtgacttc gcaggcgtag 120actttgtgtt tctcgtagtc tgctttgctc agcgtcaggg tgctgctgag gctgtaggtg 180ctgtccttgc tgtcctgctc tgtgacactc tcctgggagt tacccgattg gagggcgtta 240tccaccttcc actgtacttt ggcctctctg ggatagaagt tattcagcag gcacacaacg 300ctagcagttc cagatttcaa ctgctcatca gatggcggga agatgaagac agatggtgca 360gccacagttc gtttgatatc cactttggtc ccagggccga aagtgaatgg gaaactgtta 420gcctgttgac aaaagtaagt tgcaaaatct tcaggctgca ggctgctgat ggtgagagtg 480aaatctgtcc cagatccact gccgctgaac cttgatggga ccccacgttg caaagtggat 540gcagcataga taaggagcgt aggggctttc cctggtttct gctgatacca ggctaaccag 600ctgctaatac cctgactcgc ccgacaagtg atggagactc tgtctcctat agatgcagac 660acggaagatg gagattgggt catctggatg tcgcatctgg aacctgggaa ccagagcagc 720aggagcccca ggagctgagc ggggaccctc at 752<210>85<211>234<212>PRT<213>人<400>85Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Phe Pro1 5 10 15Gly Ser Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser20 25 30Ala Ser Ile Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly35 40 45Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys AlaPro50 55 60Thr Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser65 70 75 80Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn100 105 110Ser Phe Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg115 120 125Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln130 135 140Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr145 150 155 160Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser165 170 175Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr180 185 190Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys195 200 205His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro210 215 220Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230<210>86<211>1990<212>DNA<213>人<400>86atgaagcatc tgtggttctt ccttctcctg gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120tgcactgtct ctggtgcctc catcagtaat tactactgga gctggatccg gcagccccca 180gggaagggac tggagtggat tgggtatgtc tcttacagtg ggagtacgta ctacaacccc 240tccctcaagg gtcgagtcac catgtcagta gacacgtcca agaaccagtt ctccctgaag 300ctgagctctg tgaccgctgc ggacacggcc gtgtattact gtgcgagaga aaaactgggg 360attggagact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc 420ccatcggtct tccccctggc gccctgctct agaagcacct ccgagagcac agccgccctg 480ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct 540ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 600agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta 660gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagacagttg gtgagaggcc agctcaggga 720gggagggtgt ctgctggaag ccaggctcag ccctcctgcc tggacgcacc ccggctgtgc 780agccccagcc cagggcagca aggcaggccc catctgtctc ctcacccgga ggcctctgcc 840cgccccactc atgctcaggg agagggtctt ctggcttttt ccaccaggct ccaggcaggc 900acaggctggg tgcccctacc ccaggccctt cacacacagg ggcaggtgct tggctcagac 960ctgccaaaag ccatatccgg gaggaccctg cccctgacct aagccgaccc caaaggccaa 1020actgtccact ccctcagctc ggacaccttc tctcctccca gatccgagta actcccaatc 1080
ttctctctgc agagcgcaaa tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccaggt aagccagccc 1140aggcctcgcc ctccagctca aggcgggaca ggtgccctag agtagcctgc atccagggac 1200aggccccagc tgggtgctga cacgtccacc tccatctctt cctcagcacc acctgtggca 1260ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 1320cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac 1380tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc 1440aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc 1500aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1560tccaaaacca aaggtgggac ccgcggggta tgagggccac atggacagag gccggctcgg 1620cccaccctct gccctgggag tgaccgctgt gccaacctct gtccctacag ggcagccccg 1680agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag 1740cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa 1800tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg ctggactccg acggctcctt 1860cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc 1920atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc 1980tccgggtaaa 1990<210>87<211>1990<212>DNA<213>人<400>87tttacccgga gacagggaga ggctcttctg cgtgtagtgg ttgtgcagag cctcatgcat 60cacggagcat gagaagacgt tcccctgctg ccacctgctc ttgtccacgg tgagcttgct 120gtagaggaag aaggagccgt cggagtccag catgggaggt gtggtcttgt agttgttctc 180cggctgccca ttgctctccc actccacggc gatgtcgctg gggtagaagc ctttgaccag 240gcaggtcagg ctgacctggt tcttggtcat ctcctcccgg gatgggggca gggtgtacac 300ctgtggttct cggggctgcc ctgtagggac agaggttggc acagcggtca ctcccagggc 360agagggtggg ccgagccggc ctctgtccat gtggccctca taccccgcgg gtcccacctt 420tggttttgga gatggttttc tcgatggggg ctgggaggcc tttgttggag accttgcact 480tgtactcctt gccgttcagc cagtcctggt gcacaacggt gaggacgctg accacacgga 540acgtgctgtt gaactgctcc tcccgtggct ttgtcttggc attatgcacc tccacgccgt 600ccacgtacca gttgaactgg acctcggggt cttcgtggct cacgtccacc accacgcacg 660tgacctcagg ggtccgggag atcatgaggg tgtccttggg ttttgggggg aagaggaaga 720ctgacggtcc tgccacaggt ggtgctgagg aagagatgga ggtggacgtg tcagcaccca 780gctggggcct gtccctggat gcaggctact ctagggcacc tgtcccgcct tgagctggag 840ggcgaggcct gggctggctt acctgggcac ggtgggcact cgacacaaca tttgcgctct 900gcagagagaa gattgggagt tactcggatc tgggaggaga gaaggtgtcc gagctgaggg 960agtggacagt ttggcctttg gggtcggctt aggtcagggg cagggtcctc ccggatatgg 1020cttttggcag gtctgagcca agcacctgcc cctgtgtgtg aagggcctgg ggtaggggca 1080cccagcctgt gcctgcctgg agcctggtgg aaaaagccag aagaccctct ccctgagcat 1140gagtggggcg ggcagaggcc tccgggtgag gagacagatg gggcctgcct tgctgccctg 1200ggctggggct gcacagccgg ggtgcgtcca ggcaggaggg ctgagcctgg cttccagcag 1260
acaccctccc tccctgagct ggcctctcac caactgtctt gtccaccttg gtgttgctgg 1320gcttgtgatc tacgttgcag gtgtaggtct gggtgccgaa gttgctggag ggcacggtca 1380ccacgctgct gagggagtag agtcctgagg actgtaggac agctgggaag gtgtgcacgc 1440cgctggtcag agcgcctgag ttccacgaca ccgtcaccgg ttcggggaag tagtccttga 1500ccaggcagcc cagggcggct gtgctctcgg aggtgcttct agagcagggc gccaggggga 1560agaccgatgg gcccttggtg gaggctgagg agacggtgac cagggttccc tggccccagt 1620agtctccaat ccccagtttt tctctcgcac agtaatacac ggccgtgtcc gcagcggtca 1680cagagctcag cttcagggag aactggttct tggacgtgtc tactgacatg gtgactcgac 1740ccttgaggga ggggttgtag tacgtactcc cactgtaaga gacataccca atccactcca 1800gtcccttccc tgggggctgc cggatccagc tccagtagta attactgatg gaggcaccag 1860agacagtgca ggtgagggac agggtctccg aaggcttcac cagtcctggg cccgactcct 1920gcagctgcac ctgggacagg acccatctgg gagctgccac caggagaagg aagaaccaca 1980gatgcttcat1990<210>88<211>241<212>PRT<213>人<400>88Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Leu Ala Ala Pro1 5 10 15Arg Trp Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu20 25 30Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala35 40 45Ser Ile Ser Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys50 55 60Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Val Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr65 70 75 80Asn Pro Ser Leu Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Ala Ser Pro Thr85 90 95Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp100 105 110Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Lys Leu Gly Ile Gly Asp Tyr115 120 125Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly130 135 140Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser145 150 155 160Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val165 170 175Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe180 185 190
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val195 200 205Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val210 215 220Ala Ser Pro His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Ala Ser Pro Lys Thr225 230 235 240Val<2l0>89<211>702<212>DNA<213>人<400>89atgaggctcc ccgctcagct cctggggctc ctgctgctct ggttcccagg tgccaggtgt 60gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 120atcacttgcc gggcaagtca gggcattaaa aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 180gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 240aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 300gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt atccgtgcag ttttggccag 360gggaccaagc tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt702<210>90<211>702<212>DNA<213>人<400>90acactctccc ctgttgaagc tctttgtgac gggcgagctc aggccctgat gggtgacttc 60gcaggcgtag actttgtgtt tctcgtagtc tgctttgctc agcgtcaggg tgctgctgag 120gctgtaggtg ctgtccttgc tgtcctgctc tgtgacactc tcctgggagt tacccgattg 180gagggcgtta tccaccttcc actgtacttt ggcctctctg ggatagaagt tattcagcag 240gcacacaacg ctagcagttc cagatttcaa ctgctcatca gatggcggga agatgaagac 300agatggtgca gccacagttc gtttgatctc cagcttggtc ccctggccaa aactgcacgg 360ataactatta tgctgtagac agtaataagt tgcaaaatct tcaggctgca ggctgctgat 420tgtgagagtg aattctgtcc cagatccact gccgctgaac cttgatggga ccccactttg 480caaactggat gcagcataga tcaggcgctt aggggctttc cctggtttct gctgatacca 540
gcctaaatca tttttaatgc cctgacttgc ccggcaagtg atggtgactc tgtctcctac 600agatgcagac agggaggatg gagactgggt catctggatg tcacacctgg cacctgggaa 660ccagagcagc aggagcccca ggagctgagc ggggagcctc at702<210>91<211>234<212>PRT<213>人<400>91Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Phe Pro1 5 10 15Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser20 25 30Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly35 40 45Ile Lys Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro50 55 60Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser65 70 75 80Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser85 90 95Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn100 105 110Ser Tyr Pro Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg115 120 125Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln130 135 140Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr145 150 155 160Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser165 170 175Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr180 185 190Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys195 200 205His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro210 215 220Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230<210>92<211>1996
<212>DNA<213>人<400>92atgaaacatc tgtggttctt cctcctgctg gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cacagaccct gtccctcacc 120tgcactgtct ctggtgcctc catcagcagt ggtgcttact actggagttg gatccgccag 180cacccaggga agggcctgga gtggattggg tacatctata agagtgagac ctcctactac 240aacccgtccc tcaagagtcg acttacccta tcagtagaca cgtctaagaa ccagttctcc 300ctgaacctga tctctgtgac tgccgcggac acggccgtgt attattgtgc gagagataaa 360ctggggatcg cggactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 420aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctctagaa gcacctccga gagcacagcc 480gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 600tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 660aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttggtga gaggccagct 720cagggaggga gggtgtctgc tggaagccag gctcagccct cctgcctgga cgcaccccgg 780ctgtgcagcc ccagcccagg gcagcaaggc aggccccatc tgtctcctca cccggaggcc 840tctgcccgcc ccactcatgc tcagggagag ggtcttctgg ctttttccac caggctccag 900gcaggcacag gctgggtgcc cctaccccag gcccttcaca cacaggggca ggtgcttggc 960tcagacctgc caaaagccat atccgggagg accctgcccc tgacctaagc cgaccccaaa 1020ggccaaactg tccactccct cagctcggac accttctctc ctcccagatc cgagtaactc 1080ccaatcttct ctctgcagag cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccaggtaagc 1140cagcccaggc ctcgccctcc agctcaaggc gggacaggtg ccctagagta gcctgcatcc 1200agggacaggc cccagctggg tgctgacacg tccacctcca tctcttcctc agcaccacct 1260gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 1320cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag 1380ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc acgggaggag 1440cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg 1500aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa 1560accatctcca aaaccaaagg tgggacccgc ggggtatgag ggccacatgg acagaggccg 1620gctcggccca ccctctgccc tgggagtgac cgctgtgcca acctctgtcc ctacagggca 1680gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca 1740ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga 1800gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacacct cccatgctgg actccgacgg 1860ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt 1920cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc 1980cctgtctccg ggtaaa 1996<210>93<211>1996<212>DNA<213>人
<400>93tttacccgga gacagggaga ggctcttctg cgtgtagtgg ttgtgcagag cctcatgcat 60cacggagcat gagaagacgt tcccctgctg ccacctgctc ttgtccacgg tgagcttgct 120gtagaggaag aaggagccgt cggagtccag catgggaggt gtggtcttgt agttgttctc 180cggctgccca ttgctctccc actccacggc gatgtcgctg gggtagaagc ctttgaccag 240gcaggtcagg ctgacctggt tcttggtcat ctcctcccgg gatgggggca gggtgtacac 300ctgtggttct cggggctgcc ctgtagggac agaggttggc acagcggtca ctcccagggc 360agagggtggg ccgagccggc ctctgtccat gtggccctca taccccgcgg gtcccacctt 420tggttttgga gatggttttc tcgatggggg ctgggaggcc tttgttggag accttgcact 480tgtactcctt gccgttcagc cagtcctggt gcacaacggt gaggacgctg accacacgga 540acgtgctgtt gaactgctcc tcccgtggct ttgtcttggc attatgcacc tccacgccgt 600ccacgtacca gttgaactgg acctcggggt cttcgtggct cacgtccacc accacgcacg 660tgacctcagg ggtccgggag atcatgaggg tgtccttggg ttttgggggg aagaggaaga 720ctgacggtcc tgccacaggt ggtgctgagg aagagatgga ggtggacgtg tcagcaccca 780gctggggcct gtccctggat gcaggctact ctagggcacc tgtcccgcct tgagctggag 840ggcgaggcct gggctggctt acctgggcac ggtgggcact cgacacaaca tttgcgctct 900gcagagagaa gattgggagt tactcggatc tgggaggaga gaaggtgtcc gagctgaggg 960agtggacagt ttggcctttg gggtcggctt aggtcagggg cagggtcctc ccggatatgg 1020cttttggcag gtctgagcca agcacctgcc cctgtgtgtg aagggcctgg ggtaggggca 1080cccagcctgt gcctgcctgg agcctggtgg aaaaagccag aagaccctct ccctgagcat 1140gagtggggcg ggcagaggcc tccgggtgag gagacagatg gggcctgcct tgctgccctg 1200ggctggggct gcacagccgg ggtgcgtcca ggcaggaggg ctgagcctgg cttccagcag 1260acaccctccc tccctgagct ggcctctcac caactgtctt gtccaccttg gtgttgctgg 1320gcttgtgatc tacgttgcag gtgtaggtct gggtgccgaa gttgctggag ggcacggtca 1380ccacgctgct gagggagtag agtcctgagg actgtaggac agctgggaag gtgtgcacgc 1440cgctggtcag agcgcctgag ttccacgaca ccgtcaccgg ttcggggaag tagtccttga 1500ccaggcagcc cagggcggct gtgctctcgg aggtgcttct agagcagggc gccaggggga 1560agaccgatgg gcccttggtg gaggctgagg agacggtgac cagggttccc tggccccagt 1620agtccgcgat ccccagttta tctctcgcac aataatacac ggccgtgtcc gcggcagtca 1680cagagatcag gttcagggag aactggttct tagacgtgtc tactgatagg gtaagtcgac 1740tcttgaggga cgggttgtag taggaggtct cactcttata gatgtaccca atccactcca 1800ggcccttccc tgggtgctgg cggatccaac tccagtagta agcaccactg ctgatggagg 1860caccagagac agtgcaggtg agggacaggg tctgtgaagg cttcaccagt cctgggcccg 1920actcctgcag ctgcacctgg gacaggaccc atctgggagc tgccaccagc aggaggaaga 1980accacagatg tttcat 1996<210>94<211>243<212>PRT<213>人<400>94Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Leu Ala Ala Pro1 5 10 15
Arg Trp Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu20 25 30Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala35 40 45Ser Ile Ser Ser Gly Ala Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro50 55 60Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Lys Ser Glu Thr Ser65 70 75 80Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Leu Ser Val Ala Ser85 90 95Pro Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Asn Leu Ile Ser Val Thr Ala100 105 110Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Lys Leu Gly Ile Ala115 120 125Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr130 135 140Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser145 150 155 160Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu165 170 175Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His180 185 190Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser195 200 205Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys210 215 220Asn Val Ala Ser Pro His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Ala Ser Pro225 230 235 240Lys Thr Val<210>95<211>702<212>DNA<213>人<400>95atgagggtcc ccgctcagct cctggggctc ctgctgctct ggttcccagg cgccaggtgt 60gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 120atcacttgcc gggcaagtca ggacattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 180gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 240aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 300gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagct accctcccac tttcggcgga 360
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 702<210>96<211>702<212>DNA<213>人<400>96acactctccc ctgttgaagc tctttgtgac gggcgagctc aggccctgat gggtgacttc 60gcaggcgtag actttgtgtt tctcgtagtc tgctttgctc agcgtcaggg tgctgctgag 120gctgtaggtg ctgtccttgc tgtcctgctc tgtgacactc tcctgggagt tacccgattg 180gagggcgtta tccaccttcc actgtacttt ggcctctctg ggatagaagt tattcagcag 240gcacacaacg ctagcagttc cagatttcaa ctgctcatca gatggcggga agatgaagac 300agatggtgca gccacagttc gtttgatttc caccttggtc cctccgccga aagtgggagg 360gtagctatta tgctgtagac agtaataagt tgcaaaatct tcaggctgca ggctgctgat 420tgtgagagtg aattctgtcc cagatccact gccgctgaac cttgatggga ccccactttg 480caaattggat gcagcataga tcaggcgctt aggggctttc cctggtttct gctgatacca 540gcctaaatca tttctaatgt cctgacttgc ccggcaagtg atggtgactc tgtctcctac 600agatgcagac agggaggatg gagactgggt catctggatg tcacacctgg cgcctgggaa 660ccagagcagc aggagcccca ggagctgagc ggggaccctc at702<210>97<211>234<212>PRT<213>人<400>97Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Phe Pro1 5 10 15Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser20 25 30Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp35 40 45Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro50 55 60Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser65 70 75 80Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn100 105 110Ser Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg115 120 125Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln130 135 140Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr145 150 155 160Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser165 170 175Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr180 185 190Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys195 200 205His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro210 215 220Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230<210>98<211>1990<212>DNA<213>人<400>98atgaaacacc tgtggttctt ccttctcctg gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120tgcactgtct ctggtgtctc catcagtaat tactactgga gctggatccg gcagtcccca 180gggaagggac tggagtggat tggatatatc tattacagtg ggagtcccta ttacaacccc 240tccctcaaga gtcgagtcac tatatctgca gacacgtcca agaaccaatt ctccctgaag 300ctgagctctg tgaccgctgc ggacacggcc atttattact gtgcgagaga aaaactgggg 360attggagact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc 420ccatcggtct tccccctggc gccctgctct agaagcacct ccgagagcac agccgccctg 480ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct 540ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 600agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta 660gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagacagttg gtgagaggcc agctcaggga 720gggagggtgt ctgctggaag ccaggctcag ccctcctgcc tggacgcacc ccggctgtgc 780agccccagcc cagggcagca aggcaggccc catctgtctc ctcacccgga ggcctctgcc 840cgccccactc atgctcaggg agagggtctt ctggcttttt ccaccaggct ccaggcaggc 900acaggctggg tgcccctacc ccaggccctt cacacacagg ggcaggtgct tggctcagac 960ctgccaaaag ccatatccgg gaggaccctg cccctgacct aagccgaccc caaaggccaa 1020actgtccact ccctcagctc ggacaccttc tctcctccca gatccgagta actcccaatc 1080
ttctctctgc agagcgcaaa tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccaggt aagccagccc 1140aggcctcgcc ctccagctca aggcgggaca ggtgccctag agtagcctgc atccagggac 1200aggccccagc tgggtgctga cacgtccacc tccatctctt cctcagcacc acctgtggca 1260ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 1320cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac 1380tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc 1440aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc 1500aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1560tccaaaacca aaggtgggac ccgcggggta tgagggccac atggacagag gccggctcgg 1620cccaccctct gccctgggag tgaccgctgt gccaacctct gtccctacag ggcagccccg 1680agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag 1740cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa 1800tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg ctggactccg acggctcctt 1860cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc 1920atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc 1980tccgggtaaa1990<210>99<211>1990<212>DNA<213>人<400>99tttacccgga gacagggaga ggctcttctg cgtgtagtgg ttgtgcagag cctcatgcat 60cacggagcat gagaagacgt tcccctgctg ccacctgctc ttgtccacgg tgagcttgct 120gtagaggaag aaggagccgt cggagtccag catgggaggt gtggtcttgt agttgttctc 180cggctgccca ttgctctccc actccacggc gatgtcgctg gggtagaagc ctttgaccag 240gcaggtcagg ctgacctggt tcttggtcat ctcctcccgg gatgggggca gggtgtacac 300ctgtggttct cggggctgcc ctgtagggac agaggttggc acagcggtca ctcccagggc 360agagggtggg ccgagccggc ctctgtccat gtggccctca taccccgcgg gtcccacctt 420tggttttgga gatggttttc tcgatggggg ctgggaggcc tttgttggag accttgcact 480tgtactcctt gccgttcagc cagtcctggt gcacaacggt gaggacgctg accacacgga 540acgtgctgtt gaactgctcc tcccgtggct ttgtcttggc attatgcacc tccacgccgt 600ccacgtacca gttgaactgg acctcggggt cttcgtggct cacgtccacc accacgcacg 660tgacctcagg ggtccgggag atcatgaggg tgtccttggg ttttgggggg aagaggaaga 720ctgacggtcc tgccacaggt ggtgctgagg aagagatgga ggtggacgtg tcagcaccca 780gctggggcct gtccctggat gcaggctact ctagggcacc tgtcccgcct tgagctggag 840ggcgaggcct gggctggctt acctgggcac ggtgggcact cgacacaaca tttgcgctct 900gcagagagaa gattgggagt tactcggatc tgggaggaga gaaggtgtcc gagctgaggg 960agtggacagt ttggcctttg gggtcggctt aggtcagggg cagggtcctc ccggatatgg 1020cttttggcag gtctgagcca agcacctgcc cctgtgtgtg aagggcctgg ggtaggggca 1080cccagcctgt gcctgcctgg agcctggtgg aaaaagccag aagaccctct ccctgagcat 1140gagtggggcg ggcagaggcc tccgggtgag gagacagatg gggcctgcct tgctgccctg 1200ggctggggct gcacagccgg ggtgcgtcca ggcaggaggg ctgagcctgg cttccagcag 1260
acaccctccc tccctgagct ggcctctcac caactgtctt gtccaccttg gtgttgctgg 1320gcttgtgatc tacgttgcag gtgtaggtct gggtgccgaa gttgctggag ggcacggtca 1380ccacgctgct gagggagtag agtcctgagg actgtaggac agctgggaag gtgtgcacgc 1440cgctggtcag agcgcctgag ttccacgaca ccgtcaccgg ttcggggaag tagtccttga 1500ccaggcagcc cagggcggct gtgctctcgg aggtgcttct agagcagggc gccaggggga 1560agaccgatgg gcccttggtg gaggctgagg agacggtgac cagggttccc tggccccagt 1620agtctccaat ccccagtttt tctctcgcac agtaataaat ggccgtgtcc gcagcggtca 1680cagagctcag cttcagggag aattggttct tggacgtgtc tgcagatata gtgactcgac 1740tcttgaggga ggggttgtaa tagggactcc cactgtaata gatatatcca atccactcca 1800gtcccttccc tggggactgc cggatccagc tccagtagta attactgatg gagacaccag 1860agacagtgca ggtgagggac agggtctccg aaggcttcac cagtcctggg cccgactcct 1920gcagctgcac ctgggacagg acccatctgg gagctgccac caggagaagg aagaaccaca 1980ggtgtttcat1990<210>100<211>239<212>PRT<213>人<400>100Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Leu Ala Ala Pro1 5 10 15Arg Trp Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu20 25 30Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val35 40 45Ser Ile Ser Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys50 55 60Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Pro Tyr Tyr65 70 75 80Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys85 90 95Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala100 105 110Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Lys Leu Gly Ile Gly Asp Tyr Trp Gly115 120 125Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser130 135 140Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala145 150 155 160Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val165 170 175Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val195 200 205Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Ala Ser210 215 220Pro His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Ala Ser Pro Lys Thr Val225 230 235<210>101<211>702<212>DNA<213>人<400>101atgagggtcc ccgctcagct cctggggctc ctgctgctct ggttcccagg tgccaggtgt 60gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtcggaga cagagtcacc 120atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 180gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 240aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 300gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctcccac tttcggccct 360gggaccaagg tggatatcaa acgagctgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 702<210>102<211>702<212>DNA<213>人<400>102acactctccc ctgttgaagc tctttgtgac gggcgagctc aggccctgat gggtgacttc 60gcaggcgtag actttgtgtt tctcgtagtc tgctttgctc agcgtcaggg tgctgctgag 120gctgtaggtg ctgtccttgc tgtcctgctc tgtgacactc tcctgggagt tacccgattg 180gagggcgtta tccaccttcc actgtacttt ggcctctctg ggatagaagt tattcagcag 240gcacacaacg ctagcagttc cagatttcaa ctgctcatca gatggcggga agatgaagac 300agatggtgca gccacagttc gtttgatatc caccttggtc ccagggccga aagtgggagg 360gtaactatta tgctgtagac agtaataagt tgcaaaatct tcaggctgca ggctgctgat 420tgtgagagtg aattctgtcc cagatccact gccgctgaac cttgatggga ccccactttg 480caaactggat gcagcataga tcaggcgctt aggggctttc cctggtttct gctgatacca 540gcctaaatca tttctaatgc cctgacttgc ccggcaagtg atggtgactc tgtctccgac 600agatgcagac agggaggatg gagactgggt catctggatg tcacacctgg cacctgggaa 660
ccagagcagc aggagcccca ggagctgagc ggggaccctc at702<210>103<211>234<212>PRT<213>人<400>103Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Phe Pro1 5 10 15Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser20 25 30Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly35 40 45Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro50 55 60Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser65 70 75 80Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser85 90 95Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn100 105 110Ser Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg115 120 125Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln130 135 140Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr145 150 155 160Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser165 170 175Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr180 185 190Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys195 200 205His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro210 215 220Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230<210>104<211>1990<212>DNA<213>人
<400>104atgaaacatc tgtggttctt ccttctcctg gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120tgcactgtct ctggtggctc catcagtcgt tactactgga gctggatccg gcagccccca 180gggaagggac tggagtggat tgggtatgtc tcttacagtg ggagcaccta ctacaacccc 240tccctcaaga gtcgagtcac catatcagta gacacgtcca agaaccagtt ctccctgaag 300ctgagctctg tgaccgctgc ggacacggcc gtgtattact gtgcgagaga taaactgggg 360attggagact actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc 420ccatcggtct tccccctggc gccctgctct agaagcacct ccgagagcac agccgccctg 480ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct 540ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 600agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta 660gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagacagttg gtgagaggcc agctcaggga 720gggagggtgt ctgctggaag ccaggctcag ccctcctgcc tggacgcacc ccggctgtgc 780agccccagcc cagggcagca aggcaggccc catctgtctc ctcacccgga ggcctctgcc 840cgccccactc atgctcaggg agagggtctt ctggcttttt ccaccaggct ccaggcaggc 900acaggctggg tgcccctacc ccaggccctt cacacacagg ggcaggtgct tggctcagac 960ctgccaaaag ccatatccgg gaggaccctg cccctgacct aagccgaccc caaaggccaa 1020actgtccact ccctcagctc ggacaccttc tctcctccca gatccgagta actcccaatc 1080ttctctctgc agagcgcaaa tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccaggt aagccagccc 1140aggcctcgcc ctccagctca aggcgggaca ggtgccctag agtagcctgc atccagggac 1200aggccccagc tgggtgctga cacgtccacc tccatctctt cctcagcacc acctgtggca 1260ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 1320cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac 1380tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc 1440aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc 1500aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1560tccaaaacca aaggtgggac ccgcggggta tgagggccac atggacagag gccggctcgg 1620cccaccctct gccctgggag tgaccgctgt gccaacctct gtccctacag ggcagccccg 1680agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag 1740cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa 1800tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg ctggactccg acggctcctt 1860cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc 1920atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc 1980tccgggtaaa1990<210>105<211>1990<212>DNA<213>人<400>105tttacccgga gacagggaga ggctcttctg cgtgtagtgg ttgtgcagag cctcatgcat 60
cacggagcat gagaagacgt tcccctgctg ccacctgctc ttgtccacgg tgagcttgct 120gtagaggaag aaggagccgt cggagtccag catgggaggt gtggtcttgt agttgttctc 180cggctgccca ttgctctccc actccacggc gatgtcgctg gggtagaagc ctttgaccag 240gcaggtcagg ctgacctggt tcttggtcat ctcctcccgg gatgggggca gggtgtacac 300ctgtggttct cggggctgcc ctgtagggac agaggttggc acagcggtca ctcccagggc 360agagggtggg ccgagccggc ctctgtccat gtggccctca taccccgcgg gtcccacctt 420tggttttgga gatggttttc tcgatggggg ctgggaggcc tttgttggag accttgcact 480tgtactcctt gccgttcagc cagtcctggt gcacaacggt gaggacgctg accacacgga 540acgtgctgtt gaactgctcc tcccgtggct ttgtcttggc attatgcacc tccacgccgt 600ccacgtacca gttgaactgg acctcggggt cttcgtggct cacgtccacc accacgcacg 660tgacctcagg ggtccgggag atcatgaggg tgtccttggg ttttgggggg aagaggaaga 720ctgacggtcc tgccacaggt ggtgctgagg aagagatgga ggtggacgtg tcagcaccca 780gctggggcct gtccctggat gcaggctact ctagggcacc tgtcccgcct tgagctggag 840ggcgaggcct gggctggctt acctgggcac ggtgggcact cgacacaaca tttgcgctct 900gcagagagaa gattgggagt tactcggatc tgggaggaga gaaggtgtcc gagctgaggg 960agtggacagt ttggcctttg gggtcggctt aggtcagggg cagggtcctc ccggatatgg 1020cttttggcag gtctgagcca agcacctgcc cctgtgtgtg aagggcctgg ggtaggggca 1080cccagcctgt gcctgcctgg agcctggtgg aaaaagccag aagaccctct ccctgagcat 1140gagtggggcg ggcagaggcc tccgggtgag gagacagatg gggcctgcct tgctgccctg 1200ggctggggct gcacagccgg ggtgcgtcca ggcaggaggg ctgagcctgg cttccagcag 1260acaccctccc tccctgagct ggcctctcac caactgtctt gtccaccttg gtgttgctgg 1320gcttgtgatc tacgttgcag gtgtaggtct gggtgccgaa gttgctggag ggcacggtca 1380ccacgctgct gagggagtag agtcctgagg actgtaggac agctgggaag gtgtgcacgc 1440cgctggtcag agcgcctgag ttccacgaca ccgtcaccgg ttcggggaag tagtccttga 1500ccaggcagcc cagggcggct gtgctctcgg aggtgcttct agagcagggc gccaggggga 1560agaccgatgg gcccttggtg gaggctgagg agacggtgac cagggttccc tggccccagt 1620agtctccaat ccccagttta tctctcgcac agtaatacac ggccgtgtcc gcagcggtca 1680cagagctcag cttcagggag aactggttct tggacgtgtc tactgatatg gtgactcgac 1740tcttgaggga ggggttgtag taggtgctcc cactgtaaga gacataccca atccactcca 1800gtcccttccc tgggggctgc cggatccagc tccagtagta acgactgatg gagccaccag 1860agacagtgca ggtgagggac agggtctccg aaggcttcac cagtcctggg cccgactcct 1920gcagctgcac ctgggacagg acccatctgg gagctgccac caggagaagg aagaaccaca 1980gatgtttcat1990<210>106<211>241<212>PRT<213>人<400>106Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Leu Ala Ala Pro1 5 10 15Arg Trp Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu20 25 30
Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly35 40 45Ser Ile Ser Arg Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys50 55 60Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Val Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr65 70 75 80Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Ala Ser Pro Thr85 90 95Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp100 105 110Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Lys Leu Gly Ile Gly Asp Tyr115 120 125Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly130 135 140Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser145 150 155 160Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val165 170 175Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe180 185 190Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val195 200 205Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val210 215 220Ala Ser Pro His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Ala Ser Pro Lys Thr225 230 235 240Val<210>107<211>702<212>DNA<213>人<400>107atgaggctcc ctgctcagct cctggggctc ctgctgctct ggttcccagg tgccaggtgt 60gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 120atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaaccg 180gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 240aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 300gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt acccgtgcag ttttggccag 360gggaccaagc tggagatcaa acgagctgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 702<210>108<211>702<212>DNA<213>人<400>108acactctccc ctgttgaagc tctttgtgac gggcgagctc aggccctgat gggtgacttc 60gcaggcgtag actttgtgtt tctcgtagtc tgctttgctc agcgtcaggg tgctgctgag 120gctgtaggtg ctgtccttgc tgtcctgctc tgtgacactc tcctgggagt tacccgattg 180gagggcgtta tccaccttcc actgtacttt ggcctctctg ggatagaagt tattcagcag 240gcacacaacg ctagcagttc cagatttcaa ctgctcatca gatggcggga agatgaagac 300agatggtgca gccacagttc gtttgatctc cagcttggtc ccctggccaa aactgcacgg 360gtaactatta tgctgtagac agtaataagt tgcaaaatct tcaggctgca ggctgctgat 420tgtgagagtg aattctgtcc cagatccact gccgctgaac cttgatggga ccccactttg 480caaactggat gcagcataga tcaggcgctt aggggctttc cccggtttct gctgatacca 540gcctaaatca tttctaatgc cctgacttgc ccggcaagtg atggtgactc tgtctcctac 600agatgcagac agggaggatg gagactgggt catctggatg tcacacctgg cacctgggaa 660ccagagcagc aggagcccca ggagctgagc agggagcctc at702<210>109<211>234<212>PRT<213>人<400>109Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Phe Pro1 5 10 15Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser20 25 30Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly35 40 45Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro50 55 60Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser65 70 75 80Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser85 90 95Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn100 105 110
Ser Tyr Pro Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg115 120 125Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln130 135 140Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr145 150 155 160Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser165 170 175Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr180 185 190Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys195 200 205His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro210 215 220Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230<210>110<211>1996<212>DNA<213>人<400>110atgaagcatc tgtggttctt cctcctgctg gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt tacagaccct gtccctcacc 120tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt ggtgtttact actggagctg gatccgccag 180cacccaggga agggcctgga gtggattggg tacatctata acagtaagac ctcctattat 240aatccgtccc tcaagagtcg acttacccta tcagtagaca cgtctaagaa ccagttctcc 300ctgaacctga tctctgtgac tgccgcggac acggccgtgt attactgtgc gagagataaa 360ttggggatcg cggactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 420aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctctagaa gcacctccga gagcacagcc 480gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 600tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 660aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttggtga gaggccagct 720cagggaggga gggtgtctgc tggaagccag gctcagccct cctgcctgga cgcaccccgg 780ctgtgcagcc ccagcccagg gcagcaaggc aggccccatc tgtctcctca cccggaggcc 840tctgcccgcc ccactcatgc tcagggagag ggtcttctgg ctttttccac caggctccag 900gcaggcacag gctgggtgcc cctaccccag gcccttcaca cacaggggca ggtgcttggc 960tcagacctgc caaaagccat atccgggagg accctgcccc tgacctaagc cgaccccaaa 1020ggccaaactg tccactccct cagctcggac accttctctc ctcccagatc cgagtaactc 1080ccaatcttct ctctgcagag cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccaggtaagc 1140cagcccaggc ctcgccctcc agctcaaggc gggacaggtg ccctagagta gcctgcatcc 1200
agggacaggc cccagctggg tgctgacacg tccacctcca tctcttcctc agcaccacct 1260gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 1320cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag 1380ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc acgggaggag 1440cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg 1500aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa 1560accatctcca aaaccaaagg tgggacccgc ggggtatgag ggccacatgg acagaggccg 1620gctcggccca ccctctgccc tgggagtgac cgctgtgcca acctctgtcc ctacagggca 1680gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca 1740ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga 1800gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacacct cccatgctgg actccgacgg 1860ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt 1920cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc 1980cctgtctccg ggtaaa 1996<210>111<211>1996<212>DNA<213>人<400>111tttacccgga gacagggaga ggctcttctg cgtgtagtgg ttgtgcagag cctcatgcat 60cacggagcat gagaagacgt tcccctgctg ccacctgctc ttgtccacgg tgagcttgct 120gtagaggaag aaggagccgt cggagtccag catgggaggt gtggtcttgt agttgttctc 180cggctgccca ttgctctccc actccacggc gatgtcgctg gggtagaagc ctttgaccag 240gcaggtcagg ctgacctggt tcttggtcat ctcctcccgg gatgggggca gggtgtacac 300ctgtggttct cggggctgcc ctgtagggac agaggttggc acagcggtca ctcccagggc 360agagggtggg ccgagccggc ctctgtccat gtggccctca taccccgcgg gtcccacctt 420tggttttgga gatggttttc tcgatggggg ctgggaggcc tttgttggag accttgcact 480tgtactcctt gccgttcagc cagtcctggt gcacaacggt gaggacgctg accacacgga 540acgtgctgtt gaactgctcc tcccgtggct ttgtcttggc attatgcacc tccacgccgt 600ccacgtacca gttgaactgg acctcggggt cttcgtggct cacgtccacc accacgcacg 660tgacctcagg ggtccgggag atcatgaggg tgtccttggg ttttgggggg aagaggaaga 720ctgacggtcc tgccacaggt ggtgctgagg aagagatgga ggtggacgtg tcagcaccca 780gctggggcct gtccctggat gcaggctact ctagggcacc tgtcccgcct tgagctggag 840ggcgaggcct gggctggctt acctgggcac ggtgggcact cgacacaaca tttgcgctct 900gcagagagaa gattgggagt tactcggatc tgggaggaga gaaggtgtcc gagctgaggg 960agtggacagt ttggcctttg gggtcggctt aggtcagggg cagggtcctc ccggatatgg 1020cttttggcag gtctgagcca agcacctgcc cctgtgtgtg aagggcctgg ggtaggggca 1080cccagcctgt gcctgcctgg agcctggtgg aaaaagccag aagaccctct ccctgagcat 1140gagtggggcg ggcagaggcc tccgggtgag gagacagatg gggcctgcct tgctgccctg 1200ggctggggct gcacagccgg ggtgcgtcca ggcaggaggg ctgagcctgg cttccagcag 1260acaccctccc tccctgagct ggcctctcac caactgtctt gtccaccttg gtgttgctgg 1320gcttgtgatc tacgttgcag gtgtaggtct gggtgccgaa gttgctggag ggcacggtca 1380
ccacgctgct gagggagtag agtcctgagg actgtaggac agctgggaag gtgtgcacgc 1440cgctggtcag agcgcctgag ttccacgaca ccgtcaccgg ttcggggaag tagtccttga 1500ccaggcagcc cagggcggct gtgctctcgg aggtgcttct agagcagggc gccaggggga 1560agaccgatgg gcccttggtg gaggctgagg agacggtgac cagggttccc tggccccagt 1620agtccgcgat ccccaattta tctctcgcac agtaatacac ggccgtgtcc gcggcagtca 1680cagagatcag gttcagggag aactggttct tagacgtgtc tactgatagg gtaagtcgac 1740tcttgaggga cggattataa taggaggtct tactgttata gatgtaccca atccactcca 1800ggcccttccc tgggtgctgg cggatccagc tccagtagta aacaccactg ctgatggagc 1860caccagagac agtgcaggtg agggacaggg tctgtaaagg cttcaccagt cctgggcccg 1920actcctgcag ctgcacctgg gacaggaccc atctgggagc tgccaccagc aggaggaaga 1980accacagatg cttcat 1996<210>112<211>235<212>PRT<213>人<400>112Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp1 5 10 15Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys20 25 30Pro Leu Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile35 40 45Ser Ser Gly Val Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys50 55 60Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Asn Ser Lys Thr Ser Tyr Tyr65 70 75 80Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Leu Ser Val Asp Thr Ser Lys85 90 95Asn Gln Phe Ser Leu Asn Leu Ile Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala100 105 110Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Lys Leu Gly Ile Ala Asp Tyr Trp Gly115 120 125Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser130 135 140Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser G1u Ser Thr Ala145 150 155 160Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val165 170 175Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala180 185 190Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val195 200 205
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His210 215 220Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val225 230 235<210>113<211>702<212>DNA<213>人<400>113atgagggtcc ctgctcagct cctggggctc ctgctgctct ggttcccagg tgccaggtgt 60gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 120atcacttgcc ggacaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 180gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 240aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 300gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagct accctcccac tttcggcgga 360gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt702<210>114<211>702<212>DNA<213>人<400>114acactctccc ctgttgaagc tctttgtgac gggcgagctc aggccctgat gggtgacttc 60gcaggcgtag actttgtgtt tctcgtagtc tgctttgctc agcgtcaggg tgctgctgag 120gctgtaggtg ctgtccttgc tgtcctgctc tgtgacactc tcctgggagt tacccgattg 180gagggcgtta tccaccttcc actgtacttt ggcctctctg ggatagaagt tattcagcag 240gcacacaacg ctagcagttc cagatttcaa ctgctcatca gatggcggga agatgaagac 300agatggtgca gccacagttc gtttgatctc caccttggtc cctccgccga aagtgggagg 360gtagctatta tgctgtagac agtaataagt tgcaaaatct tcaggctgca ggctgctgat 420tgtgagagtg aattctgtcc cagatccact gccgctgaac cttgatggga ccccactttg 480caaactggat gcagcataga tcaggcgctt aggggctttc cctggtttct gctgatacca 540gcctaaatca tttctaatgc cctgacttgt ccggcaagtg atggtgactc tgtctcctac 600agatgcagac agggaggatg gagactgggt catctggatg tcacacctgg cacctgggaa 660ccagagcagc aggagcccca ggagctgagc agggaccctc at702
<210>115<211>234<212>PRT<213>人<400>115Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Phe Pro1 5 10 15Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser20 25 30Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Gly35 40 45Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro50 55 60Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser65 70 75 80Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser85 90 95Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn100 105 110Ser Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg115 120 125Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln130 135 140Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr145 150 155 160Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser165 170 175Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr180 185 190Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys195 200 205His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro210 215 220Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230
權(quán)利要求
1.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，但不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
2.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中能激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，其中所述抗體或其抗體片段顯示了內(nèi)源性人促紅細胞生成素與促紅細胞生成素受體結(jié)合親和力100倍范圍內(nèi)的結(jié)合親和力。
3.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，包含至少一種具有SEQ ID NO3氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段；其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
4.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，包含至少一種具有SEQ ID NO5氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段；其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
5.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，包含至少一種具有SEQ ID NO3氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段；和至少一種具有SEQ ID NO5氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
6.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，包含至少一種具有SEQ ID NO7氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段；其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
7.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，包含至少一種具有SEQ ID NO9氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段；其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
8.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，包含至少一種具有SEQ ID NO7氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段；和至少一種具有SEQ ID NO9氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
9.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，包含至少一種具有選自SEQ ID NO11、15、19、31、35、39、43、47、51和55氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
10.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，包含至少一種具有選自SEQ ID NO13、17、21、23、25、27、29、33、37、41、45、49、53和57氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
11.一種抗體或其抗體片段，其在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性，所述抗體包含至少一種重鏈可變區(qū)和至少一種輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列，選自SEQ ID NO11/SEQ ID NO13、SEQ ID NO15/SEQ ID NO17、SEQ ID NO19/SEQ ID NO21、SEQ ID NO11/SEQ ID NO23、SEQ ID NO11/SEQ ID NO25、SEQ ID NO11/SEQ ID NO27、SEQ ID NO11/SEQ ID NO29、SEQ ID NO31/SEQ ID NO33、SEQ ID NO35/SEQ ID NO37、SEQ ID NO39/SEQ ID NO41、SEQ ID NO43/SEQ ID NO45、SEQ ID NO47/SEQ ID NO49、SEQ ID NO51/SEQ ID NO53和SEQ ID NO55/SEQ ID NO57或其抗體片段，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
12.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO3氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
13.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO5氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
14.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO7氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
15.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO9氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
16.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO11氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
17.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO13氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
18.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO15氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
19.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO17氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
20.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO19氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
21.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO21氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
22.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO23氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
23.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO25氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
24.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO27氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
25.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO29氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
26.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO31氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
27.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO33氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
28.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO35氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
29.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO37氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
30.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO39氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
31.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO41氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
32.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQID NO43氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
33.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO45氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
34.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO47氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
35.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO49氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
36.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO51氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
37.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO53氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
38.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO55氨基酸序列的重鏈可變區(qū)或其抗體片段。
39.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體或其抗體片段，所述抗體包含至少一種具有SEQ ID NO57氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)或其抗體片段。
40.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體，所述抗體包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含CDR1-CDR3的連續(xù)序列，所述連續(xù)序列具有選自SEQ ID NO58、SEQ ID NO59、SEQ ID NO60和SEQ ID NO61及其片段的氨基酸序列。
41.一種分離的在哺乳動物中能結(jié)合人促紅細胞生成素受體的抗體，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)包含CDR1-CDR3的連續(xù)序列，所述連續(xù)序列具有選自SEQ ID NO62、SEQ ID NO63、SEQ ID NO64、SEQ ID NO65、SEQ ID NO66、SEQ ID NO67、SEQ ID NO68、SEQ ID NO74、SEQ ID NO75、SEQ ID NO76、SEQ ID NO77、SEQ ID NO78及其片段的氨基酸序列。
42.一種在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的方法，該方法包含給予所述哺乳動物治療有效量的抗體或其抗體片段以激活所述受體的步驟，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ IDNO1氨基酸序列的肽相互作用。
43.一種在哺乳動物中調(diào)節(jié)人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的方法，該方法包含給予所述哺乳動物治療有效量的權(quán)利要求1的抗體或抗體片段以調(diào)節(jié)受體活性的步驟。
44.一種治療患發(fā)育不良哺乳動物的方法，該方法包含給予需要治療的哺乳動物治療有效量的抗體或其抗體片段以激活所述受體的步驟，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
45.一種治療患發(fā)育不良哺乳動物的方法，該方法包含給予需要治療的哺乳動物治療有效量的權(quán)利要求1的抗體或抗體片段以調(diào)節(jié)受體活性的步驟。
46.一種包含治療有效量的抗體或其抗體片段和藥學(xué)上可接受賦形劑的藥物組合物，其中所述抗體或其抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
47.一種分離的和純化的多核苷酸序列，選自SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26、SEQID NO28、SEQ ID NO30、SEQ ID NO32、SEQ ID NO34、SEQID NO36、SEQ ID NO38、SEQ ID NO40、SEQ ID NO42、SEQID NO44、SEQ ID NO46、SEQ ID NO48、SEQ ID NO50、SEQID NO52、SEQ ID NO54、SEQ ID NO56、其片段、互補物和簡并密碼子等價物。
48.一種分離的和純化的氨基酸序列，選自SEQ ID NO3、SEQID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11、SEQ IDNO13、SEQ ID NO15、SEQ ID NO17、SEQ ID NO19、SEQ IDNO21、SEQ ID NO23、SEQ ID NO25、SEQ ID NO27、SEQ IDNO29、SEQ ID NO31、SEQ ID NO33、SEQ ID NO35、SEQ IDNO37、SEQ ID NO39、SEQ ID NO41、SEQ ID NO43、SEQ IDNO45、SEQ ID NO47、SEQ ID NO49、SEQ ID NO51、SEQ IDNO53、SEQ ID NO55、SEQ ID NO57、SEQ ID NO58、SEQ IDNO59、SEQ ID NO60、SEQ ID NO61、SEQ ID NO62、SEQ IDNO63、SEQ ID NO64、SEQ ID NO65、SEQ ID NO66、SEQ IDNO67、SEQ ID NO68和其片段。
49.一種在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段是γ-2同種型。
50.權(quán)利要求49的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段是單克隆抗體。
51.權(quán)利要求50的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段是人源化抗體。
52.權(quán)利要求50的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段是人抗體。
53.權(quán)利要求50的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段不與具有SEQ ID NO1氨基酸序列的肽相互作用。
54.權(quán)利要求50的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段選自Ab3、Ab12、Ab22、Ab54、Ab60、Ab102、Ab135、Ab145、Ab198、Ab254、Ab267、Ab390、Ab412、Ab430/432、Ab467和Ab484。
55.一種在哺乳動物中激活人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的方法，該方法包含給予哺乳動物治療有效量的權(quán)利要求49的抗體或抗體片段以激活所述受體的步驟。
56.一種在哺乳動物中調(diào)節(jié)人促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的方法，該方法包含給予哺乳動物治療有效量的權(quán)利要求49的抗體或抗體片段以調(diào)節(jié)受體活性的步驟。
57.一種治療患發(fā)育不良哺乳動物的方法，該方法包含給予需要治療的哺乳動物治療有效量的權(quán)利要求49的抗體或抗體片段以激活受體的步驟。
58.一種治療患發(fā)育不良哺乳動物的方法，該方法包含給予需要治療的哺乳動物治療有效量的權(quán)利要求49的抗體或抗體片段以調(diào)節(jié)受體活性的步驟。
59.一種治療患貧血癥哺乳動物的方法，該方法包含給予需要治療的哺乳動物治療有效量的權(quán)利要求49的抗體或抗體片段以調(diào)節(jié)受體活性的步驟。
60.一種藥物組合物，包含治療有效量的權(quán)利要求49的抗體或抗體片段和藥學(xué)上可接受的賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及結(jié)合并激活促紅細胞生成素受體的抗體及其抗體片段。本發(fā)明也涉及在哺乳動物中使用所述抗體和包含所述抗體的藥物組合物調(diào)節(jié)促紅細胞生成素受體內(nèi)源性活性的方法。
文檔編號C07K1/00GK101027322SQ200380106079
公開日2007年8月29日 申請日期2003年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月14日
發(fā)明者P·J·達里埃斯, L·L·格琳, D·H·歐斯羅, E·B·雷利, J·韋勒 申請人:艾博特公司