專利名稱：含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物及其制備方法與應(yīng)用。
二、技術(shù)背景研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生是衰老發(fā)展的重要因素之一，所以有效清除體內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基在抗衰老方面很重要。目前國內(nèi)外大都采用有抗氧化作用的物質(zhì)來延緩衰老，如維生素C、E及其它一些植物制劑；但是存在一些不足如效果不明顯、穩(wěn)定性不好、有一定的副作用。
在中老年女性骨質(zhì)疏松方面，傳統(tǒng)的單純補鈣是沒有明顯效果的，因為這一人群的骨質(zhì)疏松主要是由于卵巢分泌的雌激素水平逐漸降低，而雌激素又控制鈣在骨骼上的沉積，它的減少會導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生。目前國內(nèi)大都使用單純補鈣的方法；國外采用合成雌激素補充的方法，但有很多副作用，使用受到很大限制。
在更年期綜合癥的藥治療方面，目前國內(nèi)外采用激素替代療法，就是補充合成雌激素的方法。合成雌激素雖然能有效治療更年期綜合癥，但是它有引起腫瘤發(fā)生的危險，因此它的應(yīng)用受到極大的限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具有延緩衰老、增加骨密度和作為雌激素替代物的作用的含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物制備方法。
本發(fā)明的另一目的是提供含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物在延緩衰老、增加骨密度及作為雌激素替代物中的應(yīng)用。
為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物，其特殊之處在于它是由下述重量配比的原料組成含15％-20％的白藜蘆醇提取物 140-220份含20％-35％的大豆異黃酮提取物60-120份上述的含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物，其特殊之處在于其中各原料的重量配比是含17％的白藜蘆醇提取物 180份含30％的大豆異黃酮提取物 90份一種含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物的制備方法，其具體步驟如下(1)、所述的含白藜蘆醇提取物的制備方法如下將葡萄籽、皮經(jīng)純凈水沖洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，然后回收乙醇，濃縮提取液，濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析，洗脫液洗脫，在60-70℃、30分鐘以上至波美度15的條件下濃縮，并在溫度≥180℃，瞬間滅菌，噴霧干燥，將提取物成品，裝入無菌袋，備用。
(2)、所述的含大豆異黃酮提取物的制備方法如下將大豆胚芽或豆粕用純凈水沖洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，回收乙醇、濃縮提取液，80％丙酮冷沉結(jié)晶，結(jié)晶用90％乙醇溶解，溶解液過濾，濾液回收乙醇，濃縮后，并在溫度≥180℃，噴霧干燥，裝入無菌袋，備用。
(3)、將葡萄籽、皮提取物，大豆提取物，按配方比例混勻滅菌，即得。
一種含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物的制備方法，其具體步驟如下(1)所述的含白藜蘆醇提取物的制備方法如下將虎杖根粉碎，用80％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，然后回收乙醇，濃縮提取液。濃縮液加硫酸水解5小時后水洗3次，過濾，濾出物過氧化鋁柱，洗脫液洗脫并結(jié)晶，真空干燥，將提取物成品裝入無菌袋，備用，該提取物含有15％-20％的白藜蘆醇。
(2)、所述的含大豆異黃酮提取物的制備方法如下將大豆胚芽或豆粕用純凈水沖洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，回收乙醇、濃縮提取液，80％丙酮冷沉結(jié)晶，結(jié)晶用90％乙醇溶解，溶解液過濾，濾液回收乙醇，濃縮后，并在溫度≥180℃，噴霧干燥，裝入無菌袋，備用。
(3)、將虎杖提取物，大豆提取物，按配方比例混勻滅菌，即得。
含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物在延緩衰老中的應(yīng)用，該含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物具有抗衰老作用。
含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物在增加骨密度中的應(yīng)用，該含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物具有增加骨密度作用。
含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物作為雌激素替代物中的應(yīng)用，該含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物具有作為雌激素替代物的作用。
上述組合物內(nèi)的白藜蘆醇與大豆異黃酮的用量配比范圍為白藜蘆醇 0.2mg-5.0mg/公斤體重大豆異黃酮0.2mg-5.0mg/公斤體重本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，其優(yōu)點如下含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物具有很好的抗氧化活性，抗衰老效果好，且性質(zhì)穩(wěn)定，無副作用；含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物具有雌激素樣活性，針對中老年女性的骨質(zhì)疏松能從根本上達到改善作用，效果明顯，而又無不良作用；含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物有雌激素樣活性，但他們的分子結(jié)構(gòu)完全不同；白藜蘆醇和雌醇相似，大豆異黃酮和孕酮相似，其二者配伍能達到很好的效果。并且無引發(fā)腫瘤的風(fēng)險，尤其白藜蘆醇對雌激素依賴腫瘤有對抗作用。因此該組方可以作為雌激素替代藥物；本發(fā)明從葡萄籽、皮或虎杖提取含有白藜蘆醇的提取物，從大豆胚芽或豆粕提取含有大豆異黃酮的提取物，其工藝簡單，可以工廠化大規(guī)模生產(chǎn)；本發(fā)明其組方合理，組合了兩種物質(zhì)的優(yōu)點。
具體實施例方式本發(fā)明含有白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物，含有白藜蘆醇的提取物可以從葡萄籽、皮或虎杖提取，含有大豆異黃酮的提取物從大豆胚芽或豆粕提??；而本發(fā)明含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物具有雌激素樣活性，但他們的分子結(jié)構(gòu)完全不同；白藜蘆醇和雌醇相似，大豆異黃酮和孕酮相似，其二者配伍能達到很好的效果。并且無引發(fā)腫瘤的風(fēng)險，尤其白藜蘆醇對雌激素依賴腫瘤有對抗作用。因此該組方不僅可以作為雌激素替代物，還具有延緩衰老、增加骨密度的作用，下面將其作用實驗數(shù)據(jù)分別列舉如下報告一本組合物可具有增加骨密度作用，下面將本組合物增加骨密度作用實驗報告列舉如下1材料和方法1.1樣品本組合物為棕色粉末，人體推薦量1.20/60kgBw/d，每100g內(nèi)容物含鈣4.0g，供試驗用。
1.2實驗動物體重70±5克左右的斷乳WISTAR雄性大鼠(二級)，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所繁殖場，批準(zhǔn)號SCXK11-00-0006號。適應(yīng)一周后，按體重隨機分為五組，每組10只，自由進食，飲去離子水。
試驗設(shè)基礎(chǔ)飼料組、碳酸鈣對照組及0.10、0.20、0.60g/kgBW三個劑量的本組合物試驗組，(分別相當(dāng)于人體推薦量的5、10、30倍)。
第1組基礎(chǔ)飼料組，每百克飼料含鈣180mg第2組基礎(chǔ)飼料組加碳酸鈣對照組，每百克飼料含鈣204mg第3組基礎(chǔ)飼料組加本組合物組(0.10g/kgBW)，相當(dāng)于每百克飼料含鈣184mg第4組基礎(chǔ)飼料組加本組合物組(0.20g/kgBW)，相當(dāng)于每百克飼料含鈣188mg第5組基礎(chǔ)飼料組加本組合物組(0.60g/kgBW)，相當(dāng)于每百克飼料含鈣204mg每100g基礎(chǔ)飼料中含酪蛋白 10.0黃豆粉 15.0
小麥面粉54.0玉米油或花生油 4.0纖維素 2.0混合維生素 1.0氯化膽堿0.2dl-蛋氨酸 0.2淀粉11.0混合鹽 2.6按要求本組合物拌在飼料中，連續(xù)喂飼料12周。
1.4動物生長發(fā)育觀察指標(biāo)每周量身長，稱體重一次。
1.5動物股骨長度及重量測量動物喂養(yǎng)12周后斷頭處死，剝離取出右側(cè)股骨，測量股骨長度。在105℃烤箱烤至恒重，稱量骨重。
1.6骨密度測量用SD-1000骨密度儀(核工業(yè)部北京地質(zhì)研究院)，測量股骨中點及股骨于骺端骨密度。
1.7數(shù)據(jù)處理用Stata軟件包進行方差分析統(tǒng)計。
2結(jié)果2.1本組合物對大鼠體重、身長的影響表1各組大鼠實驗前后的體重變化動物數(shù)體重 (g)級別(Camg/100g飼料)P1P2(只) 實驗前 實驗后基礎(chǔ)飼料組(180.0) 10 68.0±2.4 370.0±6.6碳酸鈣對照組(204.0) 10 68.4±2.2 429.8±7.8**0.0000.10g/kgBW本組合物(184.0) 10 68.8±2.1 369.9±2.9 0.9950.20g/kgBW本組合物(188.0) 10 69.4±1.2 399.2±3.7**0.000 0.0010.60g/kgBW本組合物(204.0) 10 69.4±1.5 435.6±32**## 0.000 0.001P1與基礎(chǔ)飼料組比較**P＜0.01 P2與碳酸鈣對照組比較##P＜0.01由表1可見，喂飼大鼠本組合物12周后，0.20、0.60g/kgBW劑量組的大鼠體重明顯高于基礎(chǔ)飼料組(P＜0.01)；0.60g/kgBW劑量組的大鼠體重與石碳酸鈣對照組比較明顯增加(P＜0.01)。
表2 各組大鼠實驗前后的身長變化動物數(shù)身長 (cm)級別(Camg/100g飼料) P1P2(只)實驗前 實驗后基礎(chǔ)飼料組(180.0) 1016.0±0.1 23.0±0.2碳酸鈣對照組(204.0)1015.9±0.1 27.2±0.3**0.0000.10g/kgBW本組合物(184.0) 1015.9±0.1 24.0±0.3 0.0000.20g/kgBW本組合物(188.0) 1016.0±0.2 26.2±0.2**0.0000.60g/kgBW本組合物(204.0) 1016.0±0.1 27.1±02**## 0.000 0.865P1與基礎(chǔ)飼料組比較**P＜0.01 P2與碳酸鈣對照組比較##P＞0.05由表2可見，喂飼大鼠本組合物12周后，各劑量組的大鼠身長明顯高于基礎(chǔ)飼料組(P＜0.01＝；0.60g/kgBW劑量組的大鼠體重與碳酸鈣對照組比較，差異無顯著性(P＜0.05)。
2.2本發(fā)明對大鼠股骨長及股骨重量的影響表3 大鼠股骨長度動物數(shù) 股骨長度級別(Camg/100g飼料) P1P2(只) (cm)基礎(chǔ)飼料組(180.0) 10 3.39±0.04碳酸鈣對照組(204.0)10 68.4±0.11**0.0000.10g/kgBW本組合物(184.0) 10 68.8±0.330.9950.20g/kgBW本組合物(188.0) 10 69.4±0.06**0.000 0.0010.60g/kgBW本組合物(204.0) 10 69.4±0.06**## 0.000 0.001P1與基礎(chǔ)飼料組比較**P＜0.01 P2與碳酸鈣對照組比較##P＜0.01由表3可見，喂飼大鼠本組合物12周后，0.20、0.60g/kgBW劑量組的大鼠體重明顯高于基礎(chǔ)飼料組(P＜0.01)；0.60g/kgBW劑量組的大鼠體重與石碳酸鈣對照組比較明顯增加(P＜0.01)。
表4 大鼠股骨長度動物數(shù) 股骨重量級別(Camg/100g飼料)P1P2(只)(cm)基礎(chǔ)飼料組(180.0) 10 0.93±0.03碳酸鈣對照組(204.0) 10 1.19±0.03**0.0000.10g/kgBW本組合物(184.0) 10 1.05±0.34 0.0000.20g/kgBW本組合物(188.0) 10 1.17±0.03**0.0000.60g/kgBW本組合物(204.0) 10 1.28±0.02**## 0.000 0.000P1與基礎(chǔ)飼料組比較**P＜0.01 P2與碳酸鈣對照組比較##P＜0.01
由表4可見，喂飼大鼠本組合物12周后，各劑量組的大鼠股骨重量顯著高于基礎(chǔ)飼料組(P＜0.01)；0.60g/kgBW劑量組的大鼠股骨重量與碳酸鈣對照組比較明顯增加(P＜0.01)。
2.3本組合物對大鼠骨密度的影響表5 各組大鼠股骨干骺端骨密度比較動物數(shù)股骨干骺端骨密度級別(Camg/100g飼料)P1P2(只) (g/cm2)基礎(chǔ)飼料組(180.0) 10 0.264±0.008碳酸鈣對照組(204.0) 10 0.282±0.007**0.0000.10g/kgBW本組合物(184.0) 10 0.266±0.005 0.5010.208/kgBW本組合物(188.0) 10 0.279±0.006**0.5040.608/kgBW本組合物(204.0) 10 0.288±0.006**# 0.000 0.048P1與基礎(chǔ)飼料組比較**P＜0.01 P2與碳酸鈣對照組比較#P＜0.05表6 各組大鼠股骨中點骨密度比較動物數(shù)股骨干骺端骨密度級別(Camg/100g飼料)P1P2(只) (g/cm2)基礎(chǔ)飼料組(180.0) 10 0.253±0.005碳酸鈣對照組(204.0) 10 0.278±0.008**0.0000.10g/kgBW本組合物(184.0) 10 0.263±0.008**0.0020.208/kgBW本組合物(188.0) 10 0.264±0.008**0.0010.608/kgBW本組合物(204.0) 10 0.281±0.004**0.000 0.276P1與基礎(chǔ)飼料組比較**P＜0.01 P2與碳酸鈣對照組比較#P＞0.05由表5、6可見，喂飼大鼠本組合物12周后，0.20、0.60g/kgBW劑量組的大鼠股骨干骺端骨密度及股骨中點骨密度明顯高于基礎(chǔ)飼料組(P＜0.01)；0.60g/kgBW劑量組的大鼠體重與石碳酸鈣對照組比較明顯增加(P＞0.05)。
2.4結(jié)論本實驗結(jié)果表明在飼料中添加0.10、0.20、0.60g/kgBW劑量的本組合物，與基礎(chǔ)飼料組比較，各劑量的本組合物可使鈣攝入不足大鼠的股骨重量顯著增加，0.20、0.60g/kgBW劑量的本組合物可使鈣攝入不足大鼠的股骨長度及骨密度顯著增加，并有統(tǒng)計學(xué)上的差異(P＜0.05)。由此可以判定本組合物具有增加骨密度的作用。
報告二本組合物可具有延緩衰老的作用，下面將本組合物延緩衰老作用實驗報告列舉如下一、材料和動物1、受試物“本組合物”成品為棕色粉末，人體推薦用量1.2g人/日。用蒸餾水配制各劑量濃度。
2、蠅種由西北大學(xué)生物系引進野生型“美國黑腹果蠅”(Drosophilamelanogaster)，本實驗室擴大繁育備用。
3、大鼠湖北省預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供18月齡SPE級Wister雌性大鼠40只，體重365-447g和月齡SPE級雌性Wister大鼠10只，體重210-228g(醫(yī)動字19-084號)。
4、試驗環(huán)境室溫24-26℃，生化箱溫度25±1℃，濕度50％-70％RH。
二、設(shè)備與試劑1、LR，H-250型生化培養(yǎng)箱(蘭豹牌)，BS110S型電子天平(賽多利斯牌)，果蠅指管(2.5cm×高12m)、搪瓷盤、試管架、乙醚、丙酸及基礎(chǔ)培養(yǎng)基配料(玉米粉、白糖、瓊脂粉、酵母粉)，電熱恒溫干燥箱，移動式紫外消毒燈(廣西柳州第二醫(yī)療器械廠)。
2、抗氧化功能指標(biāo)測定930型熒光光度計、752C紫外可見分光光度計、恒溫水箱、微量加樣器、普通離心機、游渦混旋器、組織勻漿器、紫外燈、離心管、試管、吸管等、SOD測定試劑盒、MDA及GSH——PX活力測定試劑盒和脂褐質(zhì)測定試劑盒(南京建成生物技術(shù)工程研究所出品)。
三、實驗方法
1、實驗依據(jù)“保健食品功能學(xué)評程序和方法”衛(wèi)生部(1997)。
2、果蠅生存試驗劑量設(shè)計將“本組合物”成品液按人體推薦用量1.2g/人/日，推算設(shè)計(人體推薦量/3000×100％)培養(yǎng)基中含受試物劑量(V/V)按1％，0.2％，0.04％，0.01％四組分別配制各劑量組培養(yǎng)基，對照組給予普通基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
實驗方法收集8小時內(nèi)新羽化的果蠅成蟲，乙醚麻醉下隨機將雌、雄果蠅稱重、分別分為5組，每組200只蠅，再按每管25只蠅，將每組果蠅分放8個基礎(chǔ)培養(yǎng)基蠅管中，于搪瓷盤中平放，按組放入生化培養(yǎng)箱中喂養(yǎng)。至兩周時將各劑量組果蠅換入相應(yīng)含受試物培養(yǎng)基管中，繼續(xù)喂養(yǎng)。每四天換培養(yǎng)管一次，每天定時兩次觀察果蠅活動狀態(tài)，并記錄死亡蠅數(shù)一數(shù)，至果蠅全部死亡為止。
3、抗氧化功能指標(biāo)測定劑量設(shè)計將“本組合物”設(shè)計劑量0.4g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.1g/kg.bw三個劑量組，另設(shè)老齡對照組和少齡鼠對照組，每組10只大鼠，劑量分別相當(dāng)于人體推薦量的20倍、10倍和5倍。
實驗方法各劑量組按每天灌胃一次給予受試物，對照組均給予等容量蒸餾水，連續(xù)66天，每周大鼠稱重一次，于第67天摘眼球取全血、血清及肝組織分別進行四項生化指標(biāo)測定①大鼠肝組織中脂褐質(zhì)含量測定按程序方法用930型熒光光度計進行測定。
②血清中SOD含量測定；按試劑盒法用752C紫外可見分光光度計進行測定。
③大鼠血清中MDA含量測定按試劑盒法用752c紫外可見光光度計進行測定。
④大鼠血清中GSH——PX酶活力測定按試劑盒法用752C紫外可見分光光度計進行測定。
觀察指標(biāo)過氧化脂質(zhì)兩項指標(biāo)為肝組織中脂褐質(zhì)含量測定和血清中MDA含量測定抗氧化酶兩項指標(biāo)為肝組織中SOD含量測定和全血中GSH-PX酶活力測定。將各劑量組以四個指標(biāo)結(jié)果均與其對照組比較，進行方差分析。
四、實驗結(jié)果1、果蠅生存試驗“本組合物”對果蠅壽命影響結(jié)果編計表(X±S)受試物濃 蠅數(shù) 平均體重半數(shù)死亡天 平均壽命 最高平均壽命度(％) (只)(ug) 數(shù)(天) (天) (天)雌雄雌雄雌雄 雌 雌 雌 雌0 200 200 882 698 585656.85±13.10 54.69±13.88 72.2±1.10 68.80±0.691.00 200 200 861 637 575756.72±13.08 57.06±11.54 72.15±1.10 71.05±1.31**0.20 200 200 872 626 69** 65** 66.53±11.28**62.35±11.52**80.75±1..33**73.02±3.92**0.04 200 200 856 664 66** 61** 65.83±14.77**58.48±13.59**76.25±3.37*72.80±1.40**0.01 200 200 853 663 575757.38±13.59 56.74±11.02**70.55±4.31 72.50±1.14**P＜0.05 ** P＜0.01 F＝29.20 P＜0.01 F＝52.74 P＜0.01 F＝8.89 P＜0.01由上表可見雌、雄蠅0.20％劑量組與0.04％劑量組的平均壽命與最高平均壽命均高于對照組，其差異均有顯著性(P＜0.01；雌、雄果蠅的0.20％g 0.04％的半數(shù)死亡天數(shù)均高于對照組4天。
2抗氧化功能指標(biāo)測定2.1對體重的影響
“本組合物”對大鼠體重的影響初始體重 中期體重 結(jié)束體重組別動物 動物 動物體重(g)體重(g) 體重(g)g/kg.bw 只數(shù) 只數(shù) 只數(shù)0.4 10 418.8±24.0 10414.4±24.9 10414.6±28.30.2 10 418.6±20.4 10418.8±20.1 10420.4±22.20.1 10 416.0±20.5 10418.2±16.8 10418.1±18.0老齡對照 10 415.6±22.1 10423.3±19.6 10433.1±26.5少齡對照 10 220.0±6.6 10252.1±9.1 10264.3±15.5由上表可見，各劑量組與老齡對照組體重指標(biāo)間差異均無顯著性(P＞0.05)2.2老齡對照與少齡對照四項生化指標(biāo)比較“本組合物”老齡與少齡對照組結(jié)果統(tǒng)計生 化 指 標(biāo)組別脂褐質(zhì)GSH-PX酶活力g/kg.bwMDA(nmol/ml)SOD(nu/ml)(μg/g肝) 單位老齡對照 11.66±1.21 7.87±0.98272.62±74.72 11.87±3.04少齡對照 6.89±1.705.46±0.62390.37±63.68 20.16±5.61t值 7.2076.770 3.792 4.106由上表可見，老齡對照較少齡對照線MDA和脂褐質(zhì)含量明顯升高，SOD含量和GSH-PX酶活力明顯降低，且差異均有高度顯著性，即表明老齡對照組老齡化生化指標(biāo)明顯。
2.3脂褐質(zhì)測定“本組合物”對肝組織中脂褐質(zhì)含量的影響級別g/kg.bw脂褐質(zhì)(μg/g肝)q′P值0.48.96±1.89 ＞0.050.29.81±0.86 ＞0.050.110.68±1.28 ＞0.05老齡對照組 11.66±1.21
F＝0.483 p＞0.05由上表可見，各劑量組脂褐質(zhì)含量與老齡對照組比較差異無顯著性(P＞0.05)2.4血清中MDA含量測定“本組合物”對血清中MDA含量的影響級別g/kg.bw MDA(nmol/ml)q′P值0.45.82±0.725.837 ＜0.010.26.81±0.763.023 ＜0.010.16.87±0.632.857 ＜0.01老齡對照組 7.87±0.98F＝3.343p＞0.05由上表可見，各劑量組MDA含量均低于老齡對照組，且差異均有高度顯著性(p＜0.01)2.5血清中SOD含量測定“本組合物”對血清中SOD含量的影響級別g/kg.bwSOD(nmol/ml)q′P值0.4 335.17±56.15 ＞0.050.2 318.11±69.62 ＞0.050.1 292.73±60.04 ＞0.05老齡對照組272.62±74.72F＝3.343 p＞0.05由上表可見，各劑量組SOD含量與老齡對照組比較差異無顯著性(p＞0.05)。
2.6全血中GSH-PX活力測定“本組合物”對血清中SOD含量的影響級別g/kg.bwGSH-PX(活力單位)q′ P值0.416.09±3.562.546 ＜0.050.214.70±4.361.709 ＞0.050.111.96±3.360.057 ＞0.05老齡對照組 11.87±3.04F＝3.343p＜0.05由上表可見，高劑量組GSH-PX含量高于老齡對照組，且差異有顯著性(p＜0.05)。
五、結(jié)論1、果蠅生存試驗雌、雄果蠅平均壽命與最高平均壽命均有兩組或兩組以下為陽性結(jié)果。雌、雄果蠅半數(shù)死亡天數(shù)亦有兩組為陽性結(jié)果。
2、抗氧化功能指標(biāo)測定2.1肝組織中脂褐質(zhì)含量測定為陰性結(jié)果。
2.2血清中SOD含量測定為陰性結(jié)果。
2.3血清中MDA含量測定為陽性結(jié)果。
2.4全血中GSH-PX活力測定為陽性結(jié)果。
綜上所述，果蠅生存試驗與抗氧化功能指標(biāo)測定結(jié)果均為陽性，故可判斷“本組合物”具有延緩衰老作用。
報告三本組合物還具有作為雌激素替代物的作用，白藜蘆醇是一種中藥提取物，最早發(fā)現(xiàn)它有治療腫瘤、心血管疾病、肝損害等多種疾病的作用，目前的研究也多集中于這些方面。后又發(fā)現(xiàn)它可能是與雌激素受體結(jié)合參與細胞內(nèi)信號通路的途徑發(fā)揮作用。最新研究發(fā)現(xiàn)雖然它的分子結(jié)構(gòu)與雌激素類似，但并不與雌激素結(jié)合完全相同的受體，從而有不同的細胞靶向，因此它可能會避免一些ERT所導(dǎo)致的副作用。
為了確定白藜蘆醇是否具有這種作用，我們設(shè)計以幼齡小鼠為動物模型，觀察白藜蘆醇用藥組與空白對照組、雌激素對照組的區(qū)別。
具體方法取約20天齡12g昆明小鼠(未成熟)16只，隨機分為3組實驗組，陰性對照組，陽性對照組。
表4

*2C6F-CPE1，2-二氯-3，3，4，4，5，5-六氟環(huán)戊烯表5

(2)、所述的含大豆異黃酮提取物的制備方法如下將大豆胚芽或豆粕用純凈水沖洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，回收乙醇、濃縮提取液，80％丙酮冷沉結(jié)晶，結(jié)晶用90％乙醇溶解，溶解液過濾，濾液回收乙醇，濃縮后，并在溫度≥180℃，噴霧干燥，裝入無菌袋，備用，該提取物含有20％-35％的大豆異黃酮。
(3)、將葡萄籽、皮提取物，大豆提取物，按配方比例混勻滅菌，即得。
其制備物具有延緩衰老、增加骨密度和作為雌激素替代物的作用；其用量為每天白藜蘆醇0.2mg-5.0mg/公斤體重大豆異黃酮 0.2mg-5.0mg/公斤體重具體實施例2含17％的白藜蘆醇提取物180g含30％的大豆異黃酮提取物 90g(1)、所述的含白藜蘆醇提取物的制備方法如下將虎杖根粉碎，用80％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，然后回收乙醇，濃縮提取液。濃縮液加硫酸水解5小時后水洗3次，過濾，濾出物過氧化鋁柱，洗脫液洗脫并結(jié)晶，真空干燥，將提取物成品裝入無菌袋，備用，該提取物含有17％的白藜蘆醇。
(2)、所述的含大豆異黃酮提取物的制備方法如下將大豆胚芽或豆粕用純凈水沖洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，回收乙醇、濃縮提取液，80％丙酮冷沉結(jié)晶，結(jié)晶用90％乙醇溶解，溶解液過濾，濾液回收乙醇，濃縮后，并在溫度≥180℃，噴霧干燥，裝入無菌袋，備用，該提取物含有30％的大豆異黃酮。
(3)、將虎杖提取物，大豆提取物，按配方比例混勻滅菌，即得。
其制備物的應(yīng)用與實施例1相同。
權(quán)利要求
1.一種含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料組成含15％-20％的白藜蘆醇提取物 140-220份含20％-35％的大豆異黃酮提取物60-120份
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物，其特征在于其中各原料的重量配比是含17％的白藜蘆醇提取物 180份含30％的大豆異黃酮提取物 90份
3.一種含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物的制備方法，其具體步驟如下(1)、所述的含白藜蘆醇提取物的制備方法如下將葡萄籽、皮經(jīng)純凈水沖洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，然后回收乙醇，濃縮提取液，濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析，洗脫液洗脫，在60-70℃、30分鐘以上至波美度15的條件下濃縮，并在溫度≥180℃，瞬間滅菌，噴霧干燥，將提取物成品，裝入無菌袋，備用。(2)、所述的含大豆異黃酮提取物的制備方法如下將大豆胚芽或豆粕用純凈水沖洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，回收乙醇、濃縮提取液，80％丙酮冷沉結(jié)晶，結(jié)晶用90％乙醇溶解，溶解液過濾，濾液回收乙醇，濃縮后，并在溫度≥180℃，噴霧干燥，裝入無菌袋，備用。(3)、將葡萄籽、皮提取物，大豆提取物，按配方比例混勻滅菌，即得。
4.一種含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物的制備方法，其具體步驟如下(1)所述的含白藜蘆醇提取物的制備方法如下將虎杖根粉碎，用80％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，然后回收乙醇，濃縮提取液。濃縮液加硫酸水解5小時后水洗3次，過濾，濾出物過氧化鋁柱，洗脫液洗脫并結(jié)晶，真空干燥，將提取物成品裝入無菌袋，備用，該提取物含有15％-20％的白藜蘆醇。(2)、所述的含大豆異黃酮提取物的制備方法如下將大豆胚芽或豆粕用純凈水沖洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小時，醇提取液經(jīng)過過濾，回收乙醇、濃縮提取液，80％丙酮冷沉結(jié)晶，結(jié)晶用90％乙醇溶解，溶解液過濾，濾液回收乙醇，濃縮后，并在溫度≥180℃，噴霧干燥，裝入無菌袋，備用。(3)、將虎杖提取物，大豆提取物，按配方比例混勻滅菌，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物在延緩衰老中的應(yīng)用，該含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物具有抗衰老作用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物在增加骨密度中的應(yīng)用，該含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物具有增加骨密度作用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物作為雌激素替代物中的應(yīng)用，該含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物具有作為雌激素替代物的作用。
8.根據(jù)權(quán)利要求5、6、7所述的組合物的應(yīng)用，其組合物內(nèi)的白藜蘆醇與大豆異黃酮的用量配比范圍為白藜蘆醇 0.2mg-5.0mg/公斤體重大豆異黃酮0.2mg-5.0mg/公斤體重
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物及其制備方法與應(yīng)用。目前國內(nèi)外大都采用有抗氧化作用的物質(zhì)來延緩衰老，但效果不明顯、穩(wěn)定性不好、有一定的副作用；在中老年女性骨質(zhì)疏松方面，單純補鈣效果不佳；在更年期綜合癥的藥治療方面，國內(nèi)外采用激素替代療法，但它有引起腫瘤發(fā)生的危險。本發(fā)明為含有白藜蘆醇和大豆異黃酮的組合物，含白藜蘆醇的提取物可以從葡萄籽、皮或虎杖提取，含大豆異黃酮的提取物從大豆胚芽或豆粕提取。其具有延緩衰老、增加骨密度作用，因其具有雌激素樣活性，白藜蘆醇和雌醇相似，大豆異黃酮和孕酮相似，其二者配伍能達到很好的效果，并且其無引發(fā)腫瘤的風(fēng)險，因而本發(fā)明可以作為雌激素替代物。
文檔編號C07C39/21GK1680240SQ200410026030
公開日2005年10月12日 申請日期2004年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月9日
發(fā)明者汪云 申請人:汪云