專利名稱：替加氟的環(huán)甘油硒代磷脂綴合物及其合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種含替加氟的硒代環(huán)甘油硒代磷脂綴合物及其合成，涉及一種核苷類物質(zhì)，具體是替加氟的硒代磷脂衍生物。
背景提要磷脂具有廣泛的生理活性，大量的磷脂已被合成并證明具有良好的抗癌活性，同時(shí)它又是藥物的有效載體，對(duì)腫瘤組織具有一定的靶向作用；核苷及其類似物在臨床上廣泛用作抗腫瘤和抗病毒藥物；硒是人體必須微量元素，它具有非常明顯的防癌、抗癌作用，臨床結(jié)果表明，有機(jī)態(tài)硒能極為有效地提高硒的生物利用度及其作為生命必須微量元素的生理功能，且其毒性比無機(jī)硒大大降低。其化合物在治療癌癥方面發(fā)揮了重大的作用，近幾年，將Se引入到藥物分子中或合成新的含Se藥物是一個(gè)研究的熱點(diǎn)。但是將硒引人到磷脂核苷綴合物中，還未見文獻(xiàn)報(bào)道。因此，合成這類化合物并研究它們的生物活性，對(duì)磷脂類新藥的創(chuàng)制將會(huì)具有一定的指導(dǎo)意義。我們首先研究核苷環(huán)甘油硒代磷脂綴合物的合成及其活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于合成核苷的硒代環(huán)甘油磷脂綴合物，以期解決核苷類藥物療效低，毒性大等不足。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是本發(fā)明的化合物是一種如通式所示的替加氟的環(huán)甘油硒代磷脂綴合物
n＝2，3，6其合成方法為 下面進(jìn)一詳述本發(fā)明合成的替加氟的硒代環(huán)甘油磷脂綴合物的元素分析用Yanaco CHN CORDER MT-3型自動(dòng)元素分析儀測(cè)定。元素分析結(jié)果及理化數(shù)據(jù)見表1。
表1.2a～3c的31P NMR，元素分析及理化數(shù)據(jù)Entry n分子式 Rf狀態(tài)Yield(％)元素分析分析值(計(jì)算值)碳 氫 氮2a 2C29H50FN2O7PSe 0.53 Syrup68 52.3(52.1) 7.51(7.48) 4.21(4.19)2b 3C30H52FN2O7PSe 0.58 Syrup72 53.5(53.8) 7.79(7.77) 4.18(4.19)2c 6C33H58FN2O7PSe 0.62 Syrup56 54.9(54.6) 8.05(8.01) 3.33(3.32)說明測(cè)定比移值Rf所用的流動(dòng)相是石油醚/乙酸乙酯(5∶1)；收率是柱層析后的產(chǎn)率。
用BRUKERAC-P400HE型儀測(cè)定測(cè)定1H NMR(以TMS為內(nèi)標(biāo))和31P NMR(85％H3PO4為外標(biāo))，結(jié)果見表2。
表2.2a～3c核磁共振氫及31P NMR如下2a1H NMR(CDCl3，δppm)0.879(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.210～1.290(m，26H，(CH2)13)，1.511～1.560(m，2H，OCH2C15H31)，1.888～1.892(m，1H，1/2CH2CHN)，2.007～2.097(m，1H，1/2CH2CHN)，2.184～2.229(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，2.329～2.440(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，3.473(t，J＝6.8Hz，2H，OCH2CH2N，)，3.559(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H，1/2CH2OP)，3.649(dd，J＝11.2Hz，J＝4.8Hz，1H，1/2CH2OP)，3.993(dd，J＝15.6Hz，J＝8.41Hz，1/2CH2OCHN)，4.180～4.264(m，3H，OCH2CH2N，1/2CH2OCHN)，4.310～4.525(m，4H，OCH2C15H31，OCH2CHOP)，4.668～4.747(m，1H，CHOP)，5.968～5.980(m，1H，CH(O)N)，7.419(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR87.328，87.635ppm.
2b1H NMR(CDCl3，δppm)0.889(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.213～1.345(m，28H，(CH2)13，OCH2CH2CH2N)，1.521～1.567(m，2H，OCH2C15H31)，1.891～1.895(m，1H，1/2CH2CHN)，2.007～2.097(m，1H，1/2CH2CHN)，2.188～2.232(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，2.332～2.445(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，3.475(t，J＝6.8Hz，2H，OCH2CH2N，)，3.562(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H，1/2CH2OP)，3.655(dd，J＝11.2Hz，J＝4.8Hz，1H，1/2CH2OP)，3.998(dd，J＝15.6Hz，J＝8.41Hz，1/2CH2OCHN)，4.185～4.269(m，3H，OCH2CH2N，1/2CH2OCHN)，4.313～4.528(m，4H，OCH2C15H31，OCH2CHOP)，4.671～4.751(m，1H，CHOP)，5.969～5.982(m，1H，CH(O)N)，7.421(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR87.528，87.815ppm.
2c1H NMR(CDCl3，δppm)0.883(t，J＝6.4Hz，3H，C15H30CH3)；1.215～1.367(m，34H，(CH2)13，OCH2(CH2)4CH2N)，1.535～1.578(m，2H，OCH2C15H31)，1.895～1.898(m，1H，1/2CH2CHN)，2.012～2.223(m，1H，1/2CH2CHN)，2.191～2.237(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，2.362～2.485(m，1H，1/2CH2CH2OCHN)，3.485(t，J＝6.8Hz，2H，OCH2CH2N，)，3.575(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H，1/2CH2OP)，3.667(dd，J＝11.2Hz，J＝4.8Hz，1H，1/2CH2OP)，4.002(dd，J＝15.6Hz，J＝8.41Hz，1/2CH2OCHN)，4.196～4.273(m，3H，OCH2CH2N，1/2CH2OCHN)，4.333～4.558(m，4H，OCH2C15H31，OCH2CHOP)，4.677～4.758(m，1H，CHOP)，5.968～5.981(m，1H，CH(O)N)，7.423(d，J＝6Hz，1H，CHCF).31P NMR87.435，87.725ppm.
我們研究了化合物(2a～c)對(duì)人體對(duì)膀胱癌細(xì)胞T-24抑制作用的體外試驗(yàn)，本試驗(yàn)選用體外連續(xù)培養(yǎng)的膀胱癌細(xì)胞株。細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，37℃、5％CO2條件下；細(xì)胞倍增時(shí)間為24～30h.以替加氟作為參照。其結(jié)果見表3。
表3化合物2a～c對(duì)膀胱癌細(xì)胞T-24抑制作用(半數(shù)置死量IC50，μg/ml)Entry Tegafur 2a 2b 2cT-24 127 28 37 41從表3可知，化合物2a～c對(duì)膀胱癌細(xì)胞T-24生長(zhǎng)抑制效果優(yōu)于原藥替加氟，說明引入硒元素，增強(qiáng)了抗癌活性。
替加氟的環(huán)甘油硒代磷脂綴合物是一類未見文獻(xiàn)報(bào)道新化合物。我們?cè)O(shè)計(jì)經(jīng)“一鍋法”使六乙基亞磷酰三胺依次與羥烷基替加氟、甘油醚及硒反應(yīng)制得。實(shí)驗(yàn)表明上述方案是完全可行的。所以通過本方法可以成功地實(shí)現(xiàn)核苷的硒代磷脂綴合物的合成。
化合物(2a～c)的31P NMR表現(xiàn)為強(qiáng)度相等的雙峰，這是因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物是由兩組非對(duì)映構(gòu)體組成。
環(huán)甘油硒代磷脂綴合物是一類新型的化合物，其光譜性質(zhì)未見報(bào)道。它們的31P NMR值為87ppm左右，而相應(yīng)的硫代磷脂綴合物的31P NMR值為82ppm左右。它們31P NMR這些差異可以從四配位鱗的分子結(jié)構(gòu)得到解釋。
對(duì)于四配位磷分子中的P＝X(X＝O，S，Se)鍵，除一個(gè)σ鍵和一個(gè)pπ-dπ鍵外，還有一個(gè)反饋鍵，即由X原子提供外層孤對(duì)電子，與磷原子的3d空軌道形成的π鍵。由于磷原子的3d軌道參與成鍵，從而使磷原子的核屏蔽效應(yīng)增大，所以，它與三配位磷化合物相比，其31P NMR出現(xiàn)在較高場(chǎng)。而對(duì)于P＝O、P＝S、P＝Se鍵，O，S，Se的原子半徑是依次增大，因此，反饋鍵的強(qiáng)度是P＝O＞P＝S＞糧食P＝Se，即P＝Se型化合物磷原子上的屏蔽不如P＝S型化合物，P＝S型化合物不如P＝O型化合物。所以，在其他基團(tuán)相同時(shí)，P＝Se型化合物的31P NMR比相應(yīng)的P＝S型化合物出現(xiàn)在低場(chǎng)。
具體實(shí)施例方式
1.替加氟的硒代環(huán)甘油磷脂綴合物的合成將0.742ml(3.0mmol)六乙基亞磷酰三胺溶于75ml無水苯中，加入碘粉38mg(0.15mmol)，加熱回流直到生成的白色沉淀消失，加入0.732g(3.0mmol)羥烷基替加氟，在65℃下攪拌8h，加入0.948g(3.0mmol)1-十六烷氧基-2，3-丙二醇，攪拌5h，加入硒237mg(3.0mmol)，攪拌0.5h，減壓去掉溶劑，將殘余物進(jìn)行柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯＝5∶1)，按表1中比移值收集。
2.抗腫瘤活性測(cè)定首先以DMSO為溶劑將樣品和對(duì)照物分別稀釋為10，0.1mg.ml-1，再分別取10ul加入到完全培養(yǎng)基1ml中，使之在實(shí)驗(yàn)中的終濃度為100ug.ml-1、1mg.ml-1。同時(shí)以不加樣品的DMSO為實(shí)驗(yàn)陽性對(duì)照。
以完全培養(yǎng)基為溶劑，分別配制成100，10和1ug.ml-1，作為實(shí)驗(yàn)使用。同時(shí)以完全培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。
細(xì)胞鋪板與觀察計(jì)數(shù)取正常生長(zhǎng)處于對(duì)數(shù)期的T-24和BGC-823細(xì)胞，用0.02％EDTA消化液將細(xì)胞從種子瓶中消化下來，制備成細(xì)胞濃度為1.5×104個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液接種于24孔板，1ml/孔，正常培養(yǎng)24h后，吸取培養(yǎng)基，換入各組含有測(cè)試樣品的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
給藥后，并分別于給藥后24、48、72、96、120h觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，同時(shí)消化各組仍處于生長(zhǎng)狀態(tài)的活細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。得出樣品對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用結(jié)果。在不同時(shí)段，在倒置顯微鏡下，可清晰的觀察到對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)正常。細(xì)胞排列緊密，呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)狀態(tài)。細(xì)胞分裂指數(shù)相為惡性腫瘤細(xì)胞分裂指數(shù)狀態(tài)。以DMSO為溶劑組由于DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，因此在實(shí)驗(yàn)中設(shè)置空白組。在給藥組，細(xì)胞分裂指數(shù)相下降。隨藥物農(nóng)度的增加，其下降趨勢(shì)增大，細(xì)胞死亡增加，存活細(xì)胞出現(xiàn)縮圓、胞質(zhì)濃縮、精糙、顆粒性內(nèi)涵物增加。
權(quán)利要求
1.一種含替加氟的硒代環(huán)甘油磷脂類化合物，其特征在于該化合物的通式為
2.一種如權(quán)利要求1所述的替加氟的硒代環(huán)甘油磷脂類化合物合成方法，其特征在于通過“一鍋法”，使六乙基亞磷酰三胺依次與羥烷基替加氟、甘油醚及硒反應(yīng)，生成替加氟的環(huán)甘油硒代磷脂綴合物(2)。反應(yīng)式為
全文摘要
含替加氟的硒代環(huán)甘油磷脂類化合物及其合成涉有機(jī)硒及一種核苷類物質(zhì)。該化合物的結(jié)構(gòu)式如通式所示如上式化合物的合成，是使六乙基亞磷酰三胺依次與羥烷基替加氟、甘油醚及硒反應(yīng)。經(jīng)抗腫瘤活性測(cè)定，本發(fā)明化合物對(duì)人體膀胱癌抑制效果比原藥替加氟好。因此，硒的引入是提高替加氟的磷脂綴合物活性的有效途徑之一。
文檔編號(hào)C07H19/06GK1634958SQ20041004692
公開日2005年7月6日 申請(qǐng)日期2004年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月12日
發(fā)明者許新華, 周冰, 陳雄 申請(qǐng)人:湖南大學(xué)