專利名稱：環(huán)焦磷酸酯類化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及環(huán)焦磷酸酯類化合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
環(huán)腺苷二磷酸核糖(cADPR)是內(nèi)源性的細(xì)胞內(nèi)鈣離子激動劑，近年來研究表明它還可以作為細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的第二信使。由于cADPR在細(xì)胞內(nèi)易酸解和酶解，因而迫切需要穩(wěn)定性強(qiáng)，活性高的cADPR類似物作為藥理學(xué)工具對cADPR在細(xì)胞內(nèi)的作用機(jī)制進(jìn)行研究。目前合成cADPR類似物的方法主要有三種酶法合成，仿生法合成和化學(xué)法合成。其中酶法合成和仿生法合成對底物的局限較大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供穩(wěn)定性強(qiáng)、活性高的環(huán)焦磷酸酯類化合物及其制備方法。
本發(fā)明所提供的環(huán)焦磷酸酯類化合物是具有通式(I)的化合物， 式中X為C或O，Y為C或O。
通式(I)表示的環(huán)焦磷酸酯類化合物的制備方法，包括如下步驟1)將N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于二氯甲烷中，加入DBU后，滴加氯甲氧基乙酸乙酯，室溫下攪拌0.5-1h后蒸干溶劑，柱層析得N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-(甲基-乙二醇)-次黃嘌呤；2)將N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于THF后，加入TBAF的THF溶液，室溫下攪拌1-3h后蒸干溶劑，柱層析得N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-(甲基-乙二醇)-次黃嘌呤；3)將N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-(甲基-乙二醇)-次黃嘌呤溶于無水吡啶中，加入1-H四唑和(PhNH)2POCl，室溫下攪拌44-52h后蒸干溶劑，柱層析得N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤；4)將N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于無水甲醇中，滴入甲醇鈉溶液，室溫?cái)嚢?-3h，過濾后濃縮濾液，得N1-[甲基-乙二醇]-N9-[(二苯胺磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤；5)將N1-[甲基-乙二醇]-N9-[(二苯胺磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于無水吡啶中，加入TPSCl(2，4，6-三異丙基苯磺酰氯)，1-H四唑和PSS(S，S’-二苯巰基磷?；h(huán)己胺鹽)，室溫?cái)嚢?0-28h，蒸干溶劑，柱層析得N1-[[(二苯基硫代)磷酰基-O-乙氧基]-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤；6)將N1-[[(二苯基硫代)磷?；?O-乙氧基]-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于吡啶-乙酸-乙酸酐中，加入亞硝酸異戊酯，室溫?cái)嚢?-10h，蒸干溶劑后溶于無水吡啶中，加入H3PO2和三乙胺室溫下攪拌10-12h，蒸干溶劑，萃取、柱層析、凍干后得N1-[(苯基硫代磷?；?O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤的三乙胺鹽；7)將活化好的3分子篩和I2置于反應(yīng)瓶中，加入無水吡啶，室溫下攪拌，將N1-[(苯基硫代磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(XII))的三乙胺鹽上述反應(yīng)瓶中，繼續(xù)攪拌1-3小時，過濾掉分子篩，萃取、柱層析、凍干后得N1-[(磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤-環(huán)焦磷酸酯的三乙胺鹽。
其中所述N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤按如下步驟制備1)將腺嘌呤溶于無水吡啶中，加入苯甲酰氯后回流反應(yīng)1-2小時，蒸干溶劑，萃取、過濾、濃縮，得N6-苯甲?；?腺嘌呤；2)將N6-苯甲?；?腺嘌呤溶于無水1，2二氯乙烷中，加入N，O-雙三甲基硅基乙酰胺(BSA)，加熱至110-130℃，加入氯代甲氧基乙酸乙酯，在70-90℃下攪拌反應(yīng)1-2h，萃取、濃縮得N6-苯甲?；?N9-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-腺嘌呤；3)將N6-苯甲?；?N9-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-腺嘌呤溶于甲醇-氨水中，室溫下攪拌反應(yīng)20-28h，蒸干溶劑，用水重結(jié)晶，得N9-甲基乙二醇-腺嘌呤；4)將N9-甲基乙二醇-腺嘌呤溶于冰醋酸，攪拌下加入亞硝酸鈉水溶液，室溫下攪拌20-28h，蒸干溶劑，得N9-甲基乙二醇-次黃嘌呤；5)將N9-甲基乙二醇-次黃嘌呤溶于無水DMF中，加入咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷，室溫下攪拌2-4h，經(jīng)沉淀、過濾、濃縮，得N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤。
本發(fā)明合成反應(yīng)式如下，反應(yīng)式(1)為腺嘌呤合成N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤的反應(yīng)式；反應(yīng)式(2)為以N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤合成N1-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤-環(huán)焦磷酸酯的反應(yīng)式。
試劑(a)BzCl，Py；(b)BSA，TMSOTf，DCE；(c)NH3/CH3OH；(d)NaNO2，AcOH；(e)TBDMSCl，Imidazole，DMF。
試劑(a)DBU，ClCH2CH2OAC，CH2Cl2；(b)TBAF，THF；(c)(PhNH)2POCl，tetrazole，Py；(d)CH3Ona，CH3OH；(e)PSS，TPSCl，tetrazole，Py；(f)i isoamyl nitrite，Py∶ACOH∶AC2O(2∶1∶1)，ii H3PO2，Et3N，Py；(g)I2，3MS，Py。
本發(fā)明的cIDPRE為膜透性的cADPR類似物，具有合成方法簡便，對底物局限小、合成產(chǎn)物量大等特點(diǎn)；產(chǎn)物自身可以發(fā)出熒光，穩(wěn)定性好、修飾范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，可以作為研究cADPR介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鈣庫的鈣離子釋放，cADPR參與的細(xì)胞內(nèi)鈣信號傳導(dǎo)等各方面的材料，是一種理想的藥理學(xué)工具。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、N1-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤-環(huán)焦磷酸酯的合成(cIDPDE，式(I)中X＝O，Y＝O)所有溶劑、原料和試劑如不特別指明，均為分析純或化學(xué)純。溶劑的無水處理按照常規(guī)方法進(jìn)行。
產(chǎn)物分離、鑒定的儀器和方法薄層層析硅膠GF254、柱層析粗孔硅膠(200-300目)、硅膠H均為青島海洋化工廠生產(chǎn)；TLC通過254nm紫外檢測或用5％磷鉬酸乙醇溶液顯色；熔點(diǎn)使用XT-4A型熔點(diǎn)儀測定，溫度計(jì)未校正；旋光使用Perkin-Elmer 243B旋光儀測定；紅外光譜使用DE-983G紅外光譜儀測定，溴化鉀壓片；糖漿用液膜法。FAB和MALDI-TOF由VG-ZAB-HS和Bruker APEXTMII，HR-FAB使用Bruker BIFLEXTMIII質(zhì)譜儀測定；紫外光譜使用Pharmacia LKB Biochrom 4060分光光度計(jì)測定。核磁共振譜使用Varian VXR-500、JEOL AL300、Bruker Advance 300核磁共振儀測定，氫譜、碳譜以TMS為內(nèi)標(biāo)；磷譜以85％H3PO4為外標(biāo)；元素分析使用PE-240C元素分析儀測定。注射泵用Cole-Parmer公司生產(chǎn)的74900型。HPLC使用Gilson高效液相儀，使用Delter Paker C-18半制備柱分離。
1、合成N6-苯甲?；?腺嘌呤(N6-Benzyl-Adenosine)(式(II))將腺嘌呤(10g，74mmol)溶于50ml無水吡啶(Py)中，攪拌下滴加苯甲酰氯(26g，222mmol)，滴加完畢回流兩個小時，停止反應(yīng)，蒸干溶劑，加入飽和碳酸氫鈉攪拌30min，用氯仿萃取水層，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，所得粗品用氯仿重結(jié)晶，得白色針狀晶體(式(II))14g，產(chǎn)率為79％，熔點(diǎn)為248.5-249.5℃。
2、合成N6-苯甲?；?N9-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-腺嘌呤(式(III))N6-Benzyl-N9-[(Acetoxy-ethoxy)-methyl]-Adenosine將N6-苯甲?；?腺嘌呤(式(II))(5.9g，24.7mmol)溶于200ml無水1，2二氯乙烷中，加入N，O-雙三甲基硅基乙酰胺(BSA)(12.4ml，49mmol)，加熱至120℃，待固體完全溶解(大約20min)，加入氯甲氧基乙酸乙酯(4.9ml，29.6mmol)，在80℃下攪拌1.5h，冷卻至室溫，加入200ml乙酸乙酯，用100×2ml飽和碳酸氫鈉洗，100ml飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，常壓柱層析得白色固體(式(III))3.1g，產(chǎn)率為35％。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ1.936(s，3H，CH3CO-)，3.75-3.78(m，2H，H5′)，4.08-4.11(m，2H，H4′)，5.71(s，2H，H1′)，7.53-7.68(m，5H，ArH)，8.64(s，1H，H2)，8.79(s，1H，H8)，11.24(s，1H，NHCO)。Anal.Calcd for C17H17N5O4·1/5Et2OC 57.75，H 5.17，N 18.92；Found C 57.20，H 4.94，N 18.92。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
3、合成N9-甲基乙二醇-腺嘌呤(N9-(methyl-glycol)-Adenosine)(式(IV))將N6-苯甲?；?N9-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-腺嘌呤(式(III))(3.1g，8.7mmol)溶于300ml甲醇-氨水(v∶v＝1∶1)，室溫下攪拌24h，蒸干溶劑，用水重結(jié)晶，得白色固體(式(IV))2.1g，產(chǎn)率為99％。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ3.44-3.50(m，4H，H4′，H5′)，4.67(t，1H，JOH，CH2＝5.1，OH)，5.55(s，2H，H1′)，7.28(s，2H，NH2)，8.17(s，1H，H2)，8.27(s，1H，H8)。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
4、合成N9-甲基乙二醇-次黃嘌呤(N9-(methyl-glycol)-Hypoxantine)(式(V))將N9-甲基乙二醇-腺嘌呤(式(IV))(2.1g，8.6mmol)溶于140ml冰醋酸，攪拌下加入亞硝酸鈉得水溶液(5g+40mlH2O)，放出紅棕色氣體，室溫下攪拌24h，蒸干溶劑，用水重結(jié)晶，得淺黃色晶體(式(V))1.5g，產(chǎn)率為71％。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ3.44-3.50(m，4H，H4′，H5′)，4.67(s，1H，OH)，5.55(s，2H，H1′)，8.07(s，1H，H2)，8.21(s，1H，H8)，12.35(s，1H，NH)。Anal.Calcd for C8H10N4O3·1/2H2OC 43.84，H 5.06，N 25.56；FoundC，44.43；H，4.774；N，25.99。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
5、合成N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(VI))N9-[(TBDMS-O-ethoxy)-methyl]-Hypoxantine將N9-甲基乙二醇-次黃嘌呤(式(V))(942mg，3.86mmol)溶于25ml無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入咪唑(806mg，5.79mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)(874mg，5.79mmol)，室溫下攪拌3h，停止攪拌，加入30ml H2O，過濾，濾餅用水洗，將濾餅溶于二氯甲烷中，加入無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得白色固體(式(VI))912mg。產(chǎn)率為73％。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ0.011(s，6H，Si(CH3)2)，0.823(s，9H，C(CH3)3)，3.56-3.67(m，4H，H4′，H5′)，5.57(s，2H，H1′)，8.10(s，1H，H2)，8.24(s，1H，H8)，12.40(s，1H，H1)；13C NMR(75MHz，DMSO)δ156.62，148.49，146.10，140.68，123.99，72.80，70.53，61.85，25.87，17.90，-5.30。Anal.Calcd for C14H24N4O3SiC，51.83；H，7.46；N，17.27；FoundC，52.03；H，7.48；N，17.03。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
6、合成N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(VII))
N1-[(Acetoxy-ethoxy)-methyl]-N9-[(TBDMS-O-ethoxy)-methyl]-Hypoxantine將N9-甲基乙二醇-次黃嘌呤(式(VI))(360mg，1.10mmol)溶于10ml二氯甲烷中，加入1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一烷-7-烯(DBU)(0.82ml，5.50mmol)后，滴加氯甲氧基乙酸乙酯(1.65ml，11.0mmol)，反應(yīng)放熱，室溫下攪拌，30min后，TLC檢測原料完全消失，蒸干溶劑，常壓柱層析(200-300目硅膠)，得黃色油狀液體(式(VII))67mg，產(chǎn)率為61％。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ0.084(s，6H，Si(CH3)2)，0.825(s，9H，C(CH3)3)1.96(s，3H，OAc)，3.56-3.67(m，4H，H4′，H5′)，3.77(m，2H，H5′)，4.11(m，2H，H4′)，5.48(s，2H，H1′)，5.59(s，2H，H1′)，8.29(s，1H，H2)，8.52(s，1H，H8)；13C NMR(75MHz，DMSO)δ170.20，156.07，149.11，147.80，141.37，123.25，74.77，72.70，70.53，67.03，62.91，61.83，25.82，20.55，17.87，-5.34.Anal.Calcd forC19H32N4O6SiC，51.80；H，7.32；N，12.72；FoundC，51.74，H，7.47；N，12.42。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
7、合成N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-(甲基-乙二醇)-次黃嘌呤(式(VIII))N1-[(Acetoxy-ethoxy)-methyl]-N9-(methyl-glycol)-Hypoxantine將N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(VII))(268mg，0.609mmol)溶于10mlTHF中，加入1M叔丁基氟化胺(TBAF)的THF溶液(1.25ml，1.25mmol)，室溫下攪拌，2h后TLC檢測原料完全消失，蒸干溶劑，常壓柱層析(200-300目硅膠)，得白色泡狀固體(式(VIII))178mg，產(chǎn)率為90％。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ1.94(s，3H，OAc)，3.44-3.53(m，4H，H4′，H5′)，3.76(m，2H，H5′)，4.09(m，2H，H4′)，4.69(t，1H，JH5′，OH＝5.0Hz，OH)，5.46(s，2H，H1′)，5.56(s，2H，H1′)，8.28(s，1H，H2)，8.50(s，1H，H8).Anal.Calcd for C13H18N4O6C，47.85；H，5.56；N，17.17；FoundC，48.00；H，5.75；N，16.98。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
8、合成N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(IX))N1-[(Acetoxy-ethoxy)-methyl]-N9-[(dianilinophosphoryl-O-ethoxy)-methyl]-Hypoxantine將N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-(甲基-乙二醇)-次黃嘌呤(式(VIII))(250mg，0.767mmol)溶于5ml無水吡啶中，加入1-H四唑(161mg，2.30mmol)和(PhNH)2POCl(613mg，2.30mmol)，室溫下攪拌48h，蒸干溶劑，常壓柱層析(石油醚∶丙酮＝2∶1)(200-300目硅膠)得黃色泡狀物(式(IX))392mg，產(chǎn)率為92％。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ1.93(s，3H，OAc)，3.72-3.76(m，4H，H4′，H5′)，4.07-4.10(m，4H，H5′，H4′)，5.46(s，2H，H1′)，5.55(s，2H，H1′)，6.77-7.16(m，10H，ArH)，8.05(d，2H，2×NH)，8.25(s，1H，H2)，8.49(s，1H，H8)；13C NMR(75MHz，DMSO)δ170.28，156.07，149.23，147.82，141.40，128.75，123.26，120.30，117.23，74.74，72.45，68.16，67.07，63.58，62.95，20.59，20.53；31P NMR(D2O 81MHz，decoupled with1H)δ3.07(s)。Anal.Calcd for C25H29N6O7PC，53.96；H，5.25；N，15.10；FoundC，53.95；H，5.45；N，14.82。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
9、合成N1-[甲基-乙二醇]-N9-[(二苯胺磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(X))N1-[methyl-glycol]-N9-[(dianilinophosphoryl-O-ethoxy)-methyl]-Hypoxantine將N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(IX))(200mg，0.36mmol)溶于10ml無水甲醇中，滴兩滴5.4M的甲醇鈉溶液，室溫?cái)嚢?h，加入酸性陽離子交換樹脂調(diào)pH之至中性，過濾，濾液濃縮，得到產(chǎn)物(式(X))180mg。
10、合成N1-[[(二苯基硫代)磷?；?O-乙氧基]-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(XI))N1-[[[Bis-(Phenylthio)phosphoryl]oxy-ethoxy]-methyl]-N9-[(dianilinophosphoryl-O-ethoxy)-methyl]-Hypoxantine將N1-[甲基-乙二醇]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(X))(180mg，0.36mmol)溶于10ml無水吡啶中，加入2，4，6-三異丙基苯磺酰氯(TPSCl)(217mg，0.72mmol)，1-H四唑，S，S’-二苯巰基磷?；h(huán)己胺鹽(PSS)(410mg，1.08mmol)，室溫?cái)嚢?4h，蒸干溶劑，常壓柱層析(200-300目硅膠)得產(chǎn)物(式(XI))221mg，產(chǎn)率為79％。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ3.68-3.71(m，2H，H5′)，3.81(m，2H，H4′)，4.07(m，2H，H5′)，4.31(m，2H，H4′)，5.47(s，2H，H1′)，5.55(s，2H，H1′)，6.77-7.53(m，20H，Ar H)，8.05(d，2H，2×NH)，8.26(s，1H，H2)，8.50(s，1H，H8)；13C NMR(75MHz，DMSO)δ156.09，149.23，147.84，141.95，135.09，129.71，128.75，126.17，125.59，123.28，121.35，120.31，117.22，74.76，72.41，68.14，67.91，67.00，63.52；31P NMR(D2O 81MHz，decoupled with1H)δ3.07(s)，49.36(s)。Anal.Calcd for C35H36N6O7P2S2·2acetoneC，55.03；H，5.41；N，9.39；FoundC，55.55；H，5.62；N，8.99。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
11、合成N1-[(苯基硫代磷?；?O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(XII))N1-[[[(Phenylthio)phosphoryl]oxy-ethoxy]-methyl]-N9-[(phosphoryl-O-ethoxy)-methyl]-Hypoxantine將N1-[[(二苯基硫代)磷?；?O-乙氧基]-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(XI))(110mg，0.14mmol)溶于4ml吡啶-乙酸-乙酸酐(2∶1∶1，v∶v∶v)，加入亞硝酸異戊酯(isoamyl nitrite)，室溫?cái)嚢?h，蒸干溶劑，吡啶帶干3次，溶于3ml無水吡啶中，加入H3PO2后室溫下攪拌反應(yīng)11h，然后蒸干溶劑，加入H2O和CH2Cl2各5ml分液，水相用CH2Cl25×3ml洗，減壓蒸干水相(溫度小于30℃)。加入2ml 1M的三乙胺的碳酸氫鹽(TEAB)緩沖溶液，蒸干。將上述混合物溶于1ml 0.1M的TEAB緩沖溶液，反向C18柱HPLC分離，梯度為30min內(nèi)0-40％乙腈0.1MTEAB，流速為5ml/min，檢測波長為260nm，收集31min主峰，凍干后得產(chǎn)物(式(XII))的三乙胺鹽61mg，產(chǎn)率為82％。
1H NMR(500MHz，DMSO)δ3.72(m，2H，H5′)，3.86(m，2H，H4′)，3.92(m，2H，H5′)，4.11(m，2H，H4′)，5.52(s，2H，H1′)，5.65(s，2H，H1′)，7.17-7.43(m，5H，Ar H)，8.26(s，1H，H2)，8.39(s，1H，H8)；31P NMR(D2O81MHz，decoupled with1H)δ1.02(s)，17.85(s)。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
12、合成N1-[(磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤-環(huán)焦磷酸酯(式(XIII))N1-[(phosphoryl-O-ethoxy)-methyl]-N9-[(phosphoryl-O-ethoxy)-methyl]-Hypoxantine-cyclicpyrophosphate將活化好的3(1.5g)分子篩和I2(159mg，604μmol)置于圓底燒瓶中，加入50ml無水吡啶，室溫下攪拌，將N1-[(苯基硫代磷?；?O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(XII))的三乙胺鹽(25mg，29.9μmol)溶于5ml無水吡啶中，用微量注射泵20小時內(nèi)注入上述反應(yīng)瓶中，注射完畢后，繼續(xù)攪拌2小時，用硅藻土過濾掉分子篩，濾餅用少量水洗，蒸干濾液，加入水和氯仿分液，水相用氯仿洗3次，蒸干水相，加入2ml 1M的TEAB，蒸干，將上述混合物溶于1ml 0.1M的TEAB緩沖溶液溶液，反向C18柱HPLC分離，梯度為30min內(nèi)0-80％乙腈，0.1MTEAB，流速為5ml/min，檢測波長為260nm，收集30min主峰，凍干后得(式(XIII))的三乙胺鹽6mg，產(chǎn)率為61％。
1H NMR(500MHz，DMSO)δ3.74(m，2H，H5′)，3.83(m，2H，H4′)，4.11(m，4H，H4′，H5′)，5.64(s，2H，H1′)，5.71(s，2H，H1′)，8.23(s，1H，H2)，8.51(s，1H，H8)；31P NMR(D2O 81MHz，decoupled with1H)δ-10.09(s)。HRMS(TOF，positive)for C13H19N5O12P2Calcd，427.0342[(M+1)-]；Found，427.0435。
數(shù)據(jù)表明合成產(chǎn)物正確。
實(shí)施例2、cIDPDE的合成(式(I)中X＝O，Y＝C)將N6-苯甲?；?腺嘌呤(式(II))(5.5g，22.5mmol)溶于200ml無水1，2二氯乙烷中，在氬氣保護(hù)下加入BSA(11.2ml，45mmol)，加熱至80℃，待固體完全溶解(大約20min)，加入氯甲氧基乙酸乙酯(4.5ml，25.6mmol)，在80℃下攪拌1.5h，冷卻至室溫，加入200ml乙酸乙酯，用100×2ml飽和碳酸氫鈉洗，100ml飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，常壓柱層析(乙醚-丙酮＝3∶1)得白色固體N6-苯甲?；?N9-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-腺嘌呤(式(III))2.9g，產(chǎn)率為36％。
其它步驟同實(shí)施例1，得到式(I)化合物，其中X＝O，Y＝C)。
實(shí)施例3、cIDPDE的合成(式(I)中X＝C，Y＝O)將N9-甲基乙二醇-次黃嘌呤(式(VI))(180mg，0.55mmol)溶于20ml二氯甲烷中，加入DBU(0.82ml，5.5mmol)后，滴加氯甲氧基乙酸乙酯(0.41ml，2.75mmol)，反應(yīng)放熱，室溫下攪拌，30min后，TLC檢測原料完全消失，蒸干溶劑，常壓柱層析(石油醚∶丙酮＝5∶1)，得黃色油狀液體N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(IX))128mg，產(chǎn)率為63％。
其它步驟同實(shí)施例1，得到式(I)化合物，其中X＝C，Y＝O)。
實(shí)施例4、cIDPDE的合成(式(I)中X＝C，Y＝C)將N6-苯甲?；?腺嘌呤(式(II))(5.5g，22.5mmol)溶于200ml無水1，2二氯乙烷中，在氬氣保護(hù)下加入BSA(11.2ml，45mmol)，加熱至80℃，待固體完全溶解(大約20min)，加入氯甲氧基乙酸乙酯(4.5ml，25.6mmol)，在80℃下攪拌1.5h，冷卻至室溫，加入200ml乙酸乙酯，用100×2ml飽和碳酸氫鈉洗，100ml飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，常壓柱層析(乙醚-丙酮＝3∶1)得白色固體N6-苯甲?；?N9-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-腺嘌呤(式(III))2.9g，產(chǎn)率為36％。
將N9-甲基乙二醇-次黃嘌呤(式(VI))(180mg，0.55mmol)溶于20ml二氯甲烷中，加入DBU(0.82ml，5.5mmol)后，滴加氯甲氧基乙酸乙酯(0.41ml，2.75mmol)，反應(yīng)放熱，室溫下攪拌，30min后，TLC檢測原料完全消失，蒸干溶劑，常壓柱層析(石油醚∶丙酮＝5∶1)，得黃色油狀液體N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(二苯胺磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(IX))128mg，產(chǎn)率為63％。
其它步驟同實(shí)施例1，得到式(I)化合物，其中X＝C，Y＝C)。
權(quán)利要求
1.具有通式(I)的環(huán)焦磷酸酯類化合物， 式中X為C或O，Y為C或O。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)焦磷酸酯類化合物，其特征在于所述X、Y為O。
3.權(quán)利要求1的通式(I)表示的環(huán)焦磷酸酯類化合物的制備方法，包括如下步驟1)將N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于二氯甲烷中，加入DBU后，滴加氯甲氧基乙酸乙酯，室溫下攪拌0.5-1h后蒸干溶劑，柱層析得N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-(甲基-乙二醇)-次黃嘌呤；2)將N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于THF后，加入TBAF的THF溶液，室溫下攪拌1-3h后蒸干溶劑，柱層析得N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-(甲基-乙二醇)-次黃嘌呤；3)將N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-(甲基-乙二醇)-次黃嘌呤溶于無水吡啶中，加入1-H四唑和(PhNH)2POCl，室溫下攪拌44-52h后蒸干溶劑，柱層析得N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤；4)將N1-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-N9-[(二苯胺磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于無水甲醇中，滴入甲醇鈉溶液，室溫?cái)嚢?-3h，過濾后濃縮濾液，得N1-[甲基-乙二醇]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤；5)將N1-[甲基-乙二醇]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于無水吡啶中，加入2，4，6-三異丙基苯磺酰氯，1-H四唑和S，S’-二苯巰基磷?；h(huán)己胺鹽，室溫?cái)嚢?0-28h，蒸干溶劑，柱層析得N1-[[(二苯基硫代)磷?；?O-乙氧基]-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤；6)將N1-[[(二苯基硫代)磷?；?O-乙氧基]-甲基]-N9-[(二苯胺磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤溶于吡啶-乙酸-乙酸酐中，加入亞硝酸異戊酯，室溫?cái)嚢?-10h，蒸干溶劑后溶于無水吡啶中，加入H3PO2后室溫下攪拌反應(yīng)10-12h，蒸干溶劑，萃取、柱層析、凍干后得N1-[(苯基硫代磷?；?O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤的三乙胺鹽；7)將活化好的3分子篩和I2置于反應(yīng)瓶中，加入無水吡啶，室溫下攪拌，將N1-[(苯基硫代磷?；?O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷酰基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤(式(XII))的三乙胺鹽上述反應(yīng)瓶中，繼續(xù)攪拌1-3小時，過濾掉分子篩，萃取、柱層析、凍干后得N1-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-N9-[(磷?；?O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤-環(huán)焦磷酸酯的三乙胺鹽。
4.權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤按如下步驟制備1)將腺嘌呤溶于無水吡啶中，加入苯甲酰氯后回流反應(yīng)1-2小時，蒸干溶劑，萃取、過濾、濃縮，得N6-苯甲?；?腺嘌呤；2)將N6-苯甲酰基-腺嘌呤溶于無水1，2二氯乙烷中，加入N，O-雙三甲基硅基乙酰胺，加熱至110-130℃，加入氯甲氧基乙酸乙酯，在70-90℃下攪拌反應(yīng)1-2h，萃取、濃縮得N6-苯甲?；?N9-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-腺嘌呤；3)將N6-苯甲?；?N9-[(乙酰-O-乙氧基)-甲基]-腺嘌呤溶于甲醇-氨水中，室溫下攪拌反應(yīng)20-28h，蒸干溶劑，用水重結(jié)晶，得N9-甲基乙二醇-腺嘌呤；4)將N9-甲基乙二醇-腺嘌呤溶于冰醋酸，攪拌下加入亞硝酸鈉水溶液，室溫下攪拌20-28h，蒸干溶劑，得N9-甲基乙二醇-次黃嘌呤；5)將N9-甲基乙二醇-次黃嘌呤溶于無水DMF中，加入咪唑和叔丁基二甲基氯硅烷，室溫下攪拌2-4h，經(jīng)沉淀、過濾、濃縮，得N9-[(叔丁基二甲基硅基-O-乙氧基)-甲基]-次黃嘌呤。
全文摘要
本發(fā)明公開了環(huán)焦磷酸酯類化合物及其制備方法，目的是提供穩(wěn)定性強(qiáng)、活性高的cADPR類似物及其制備方法。本發(fā)明所提供的環(huán)焦磷酸酯類化合物具有通式(I)結(jié)構(gòu)，其中X為C或O，Y為C或O；其制備以N
文檔編號C07F9/00GK1709898SQ20041004788
公開日2005年12月21日 申請日期2004年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月18日
發(fā)明者張禮和, 古險峰, 楊振軍, 張亮仁 申請人:北京大學(xué)