專利名稱：三七三醇皂甙的制備方法
技術領域：
本發(fā)明是關于一種藥用植物的提取方法，更特別的是關于一種從三七中提取三七三醇皂甙的制備方法。
背景技術：
三七歷來是治療跌打損傷的良藥，這在傳統(tǒng)中醫(yī)學中是已得到確認和廣泛應用。如目前仍在臨床上應用的，以三七為君藥的中成藥有馳名中外的云南白藥、參七傷藥、復方治傷散、跌打七厘散及白藥等等。其中復方治傷散及白藥還分別能治骨絡作痛和筋骨腫痛。
三七三醇皂甙是單味中藥三七(又名田七，人參三七)的皂甙提取物，是三七散瘀消腫定痛的有效部位，除主含消腫定痛作用的有效成分人參皂甙Rb1、和Rd外，還含有具有活血化瘀作用的人參皂甙Rg1、Re及三七皂甙R1等成分。
三七別名田七、人參三七，為五加科人參屬Panaxnotoginseng(Burk)F.H.Chen的根莖，主產于云南、廣西。三七為常用中藥之一，其生物活性和藥理作用的主要成分為皂苷類。藥理實驗結果表明，三七總皂苷能增加動脈血流量、擴張血管、降低動脈血壓及心肌耗氧量，提高肌體功能及對缺氧的耐受力，并有抑止血小板聚集、降低血粘度等作用。
血瘀癥的治療，中醫(yī)有許多寶貴的治法及經驗，三七是其中一個重要藥物。在心腦血管疾病(如動脈粥樣硬化及血栓性疾病)方面，抗血小板類藥的地位日益引起人們的矚目，其中具代表性的是環(huán)氧酶抑制劑阿司匹林，它阻止血小板內TX的合成，同時也影響PG，但也正因為這種對酶的不可逆的抑制，造成出血危險，是其帶本質的弱點。人們期待著一種對TX更具專屬性的抗血小板聚集藥，也是當今這類藥研究中的熱點。三七三醇皂甙只影響TX的活性而不影響PG的活性，顯示了其作用特點。國外學者近幾年發(fā)現人參皂苷Rg1具有抗血小板作用，且正常人體50mg有效。其作用機理有的學者推論是作用于血小板膜TXA2受體與TXA2的結合部及其之后的部位。有的學者認為是作用于抑制腎上腺素和凝血酶引起的第二相細胞內鈣離子的增加，不同于阿司匹林。
隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，心腦血管疾病已成為嚴重危害人民身體健康的重要疾病，發(fā)病率呈逐年升高的趨勢。目前可供選擇的藥物大多為西藥品種，中藥品種較少，且中藥制劑均為傳統(tǒng)型或普通型。為了更好的開發(fā)我國的傳統(tǒng)中藥資源，提高中藥制劑的內在質量和市場競爭力，對療效肯定、安全性好的中藥品種進行開發(fā)，將具有重點的現實意義。
本發(fā)明人經多年研究發(fā)現，三七總皂苷中的許多成分對人體是無效的，真正有作用的是三七三醇皂苷等，有關三七三醇皂苷的性質、藥理作用以及對人體的作用均未見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是克服現有技術存在的缺陷，提供一種從三七中提取三七三醇皂甙的方法。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種能預防和治療心腦血管疾病的三七三醇皂甙的制備方法。
本發(fā)明的這些以及其它目的將通過下面的詳細描述來進一步體現和說明。
本發(fā)明的三七三醇皂甙的制備方法，包括下列步驟A、取三七粉碎過一號篩，加濃度為60％的乙醇浸泡12-30小時，然后均勻，壓實填入滲漉桶；B、用藥材量6-12倍量的60％乙醇滲漉至流出液無皂甙反應，流速為3-7毫升/分鐘每千克藥材；C、在真空度為0.04-0.1Mpa，溫度為50-55℃時減壓濃縮滲漉液，回收乙醇，濃縮后的藥液無醇味，相對密度在1.06-1.12；D、將濃縮至無醇味后的滲漉液加水至3-6倍量，離心，取清液上柱，滴加速度為3-7毫升/分鐘每千克藥材；E、經水洗樹脂柱后用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，過濾，減壓濃縮，在55℃時真空干燥，研磨成粉狀。
進一步的，本發(fā)明的三七三醇皂甙的制備方法，包括下列步驟A、取三七粉碎過一號篩，加濃度為60％的乙醇浸泡20-28小時、然后均勻，壓實填入滲漉桶；B、用藥材量8-10倍量的60％乙醇滲漉至流出液無皂甙反應，流速為4-6毫升/分鐘每千克藥材；C、在真空度為0.05-0.06Mpa，溫度為50-55℃時減壓濃縮滲漉液，回收乙醇，濃縮后的藥液無醇味，相對密度在1.06-1.12；D、將濃縮至無醇味后的滲漉液加水至5-6倍量，離心，取清液上柱，滴加速度為4-6毫升/分鐘每千克藥材；E、經水洗樹脂柱后用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，過濾，減壓濃縮，在55℃時真空干燥，研磨成粉狀。
較好的是，本發(fā)明的三七三醇皂甙的制備方法，包括下列步驟A、取三七粉碎過一號篩，加濃度為60％的乙醇浸泡24小時、然后均勻，壓實填入滲漉桶；B、用藥材量10倍量的60％乙醇滲漉至流出液無皂甙反應，流速為5毫升/分鐘每千克藥材；C、在真空度為0.06Mpa，溫度為55℃時減壓濃縮滲漉液，回收乙醇，濃縮后的藥液無醇味，相對密度在1.06-1.12；D、將濃縮至無醇味后的滲漉液加水至5倍量，離心，取清液上柱，滴加速度為5毫升/分鐘每千克藥材；E、經水洗樹脂柱后用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，過濾，減壓濃縮，在55℃時真空干燥，研磨成粉狀。
在本發(fā)明的三七三醇皂甙的制備方法中，滲漉時浸泡液先流盡齊液面，后滴加60％乙醇，控制上下流速相當，不能干柱；在柱層析步驟中用9倍量水洗后，再用9倍量40％乙醇洗，控制滴加與流出速度相適宜，同樣也不能出現干柱；三七三醇皂甙從第一色帶開始收集，以TLC鑒別控制收集三七三醇皂甙部分，待不顯色即為完成。
在本發(fā)明中，將使用過的大孔吸附樹脂分離柱以1％鹽酸乙醇液沖洗，直至用蒸餾水沖洗至中性，即可再次使用；大孔吸附樹脂的柱徑與柱高之比為30∶160，所述的大孔吸附樹脂為苯乙烯型共聚體，型號為D-101。
用本發(fā)明的方法提取的三七三醇皂甙含量高、質量穩(wěn)定，色澤好，以其為原料制成的中藥制劑將完全能滿足現代化中藥的要求，并且成本低、三七三醇皂甙損失少；和傳統(tǒng)的溶劑萃取法相比，工藝流程中不使用毒性和易揮發(fā)的有機溶劑，安全可靠，大大簡化的生產工藝。
用本發(fā)明的方法提取的三七三醇皂苷具有顯著的增加動脈血流量、擴張血管、降低動脈血壓、提高肌體功能及對缺氧的耐受力、抑止血小板聚集和降低血粘度等作用，并且能治療和預防心腦血管疾病。
本發(fā)明采用三七總皂苷中的精華-三七三醇皂苷為主要成分，因此療效較普通采用三七總皂苷的藥物高許多，并且生物利用度高、攜帶及給藥、服用方便和吸收快，據研究統(tǒng)計，療效較普通以三七總皂苷為主要成分的中藥高50％以上。
以下結合實施例詳述本發(fā)明，但實施例僅用于說明并不能限制本在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設備和原材料等均可從市場購得或是本行業(yè)常用的。
具體實施例方式
例1三七三醇皂苷(PTS)的化學成分①、三七皂苷C1、D1的分離薄層硅膠(10-40μ青島海洋化工廠生產)干法裝柱(¤42*400mm)。PTS溶于稀醇，拌入薄層硅膠，低溫晾干，裝入柱頂，氯仿—甲醇—水(65∶35∶10)下相為展開溶劑，自動分樣接收器接收，每份20ml。薄層色譜鑒定，在高效薄層硅膠板(青島海洋化工廠生產)上點樣、水平展開槽上展開，展開溶劑同于柱色譜的展開劑系統(tǒng)，展開后晾干、硫酸乙醇溶液噴霧，105℃烘烤5分鐘，后電熱吹風機熱風烘，取色譜斑點相同的流份合并，Rf值與對照品人參皂苷Rg1、Re相同的兩個流份，蒸除溶劑，即得三七皂苷C1、D1(Sanchinoside C1、D1)。
②、三七皂苷C1的鑒定取上面柱色譜分離得到的C1，經過乙醇—丁酮重結晶，干燥，樣品測試數據如下(a)熔點190--192℃191--192.5℃(b)元素分析本院分析室采用CH自動分析儀測定分子式C42H72O14.2H2O理論值(％)C 60.22 H 9.15實驗值(％)C 60.27 H 9.28與人參皂苷Rg1分子式、C、H測試結果一致。
測定三次的數據見本院分析室元素分析報告單。
元素分析報告單樣品名稱三七皂甙專題編號樣品批號62104(2)分析編號027592 送樣者唐永華 送樣日期2004年6月2日 (c)紅外分光譜本院紅外光譜儀測定(1710 FTIR)
樣品的紅外光譜圖與對照品人參皂苷Rg1的一致。
MaxIRVKBr cm-1，3400(-OH)，1630(c＝c)(d)13C核磁共振譜北京藥物所Bruker AM-500儀測試樣品及對照品人參皂苷Rg1的13CNMR圖譜相同。
皂甙甙元及糖的化學位移值見表1-1。兩者一致。
表1-1 人參皂苷Rg1及三七皂苷C1的13CNMR化學位移值


e、色譜鑒定供試品溶液三七皂苷C1(分離所得)甲醇溶液2毫克/毫升，PTS甲醇溶液2毫克/毫升。
對照品溶液人參皂苷Rg1，中國藥品生物制品檢定所提供，甲醇溶液2毫克/毫升。
TLS法取供試品及對照品溶液在高效硅膠板(青島海洋化工廠生產)上點樣7μl，水平展開儀上展開，展距8-9cm，取出晾干，10％濃硫酸乙醇溶液噴霧，105℃烘烤5分鐘，三七皂苷C1與人參皂苷Rg1的Rf值相同。PTS中含有主要成分的Rf值與人參皂苷Rg1相同。
HPLC法三七皂苷C1，人參皂苷Rg1對照品在島津LC-6AHPLC儀上測試柱WATERS Carbhydrate ¤3.9*300毫米柱壓98公斤/厘米2紙速3毫米/分鐘流動相乙腈—水(85∶15)結果表明三七皂苷C1為一個單純化合物，其保留時間與人參皂苷Rg1相同。
以上數據及PLC、HPLC定性鑒定，從三七根中分離得到的三七皂甙C1即為人參皂苷Rg1。
化學名(3β，6α，12β)-3，12-dihydroxydamanar-24-ene-6、20-dylbis-β-D-Glucopyrannoside，即(3β，6α，12β)-3，12-二羥基噠瑪烷-24-烯-6、20-雙--β-D-吡喃葡萄糖甙。
結構式為

③PTS的化學組成生產試制生產產品含量平均值為Rg164.92％ Re7.79％ R112.6％總和為85.31％PTS的化學組成，用TLCS法測定Rg1、D1、Rb1、斑點，雙波長掃描。
Rg1為對照品計算，見表1-2表1-2 PTS的化學組成(％)

定性表明PTS中含有少量色素、糖及一些氨基酸，將PTS溶于水，經大孔吸附樹脂吸附，不含皂苷的水洗液流經足夠量的732[H]樹脂柱，流出液不成茚三酮反應，濃縮至干得極少一點黃色物質，稱不準重量，用氨水洗脫732樹脂柱，濃縮至干，其中含有氨基酸、干燥至恒重，與投入得PTS量計算百分比見表5-3-3，該物質經氨基酸分析儀分析(WATERS-HPLC-AAA系統(tǒng))含有蘇氨酸、絲氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、色氨酸等七種AA。
PTS水分含量(藥典方法測定)表1-3

總之PTS中可測定含量成分總和約85％，三七二醇皂苷類(Rg1類)約6％，732[H]吸附物，氨基酸肽等約2-3％，水分5-7％。
4、PTS的理化性質外觀三七三醇皂苷為黃棕色粉末，無嗅，味微苦。
溶解度按中國藥典(一九九 年版附錄9溶解度試驗法)測試，PTS的溶解度為溶于水、稀乙醇；微溶于乙醇、甲醇；極微溶于丙酮。在乙酸乙酯，氯仿、石油醚中幾乎不溶。
熔點本品為一個混合物，熔點范圍波動較大，四批樣品也測定了m.p.180-184℃之間。
批號040326 m.p.180-184℃040409 m.p.180.0-182.5℃040414 m.p.182.0-184.0℃040427 m.p.181.0-183.0℃5、放大試驗補充放大試驗，五批每批投料4Kg三七，結果如下
表1-4 三七三醇皂苷放大試驗數據

十批生產試制產品收率及含量測定結果如下表1-5三七三醇皂甙生產試制收率含量表

例2按以下步驟制備三七三醇皂甙A、取三七粉碎過一號篩，加濃度為60％的乙醇浸泡14小時，然后均勻，壓實填入滲漉桶；B、用藥材量6倍量的60％乙醇滲漉至流出液無皂甙反應，流速為3毫升/分鐘每千克藥材，滲漉時浸泡液先流盡齊液面，后滴加60％乙醇，控制上下流速相當，不能干柱；C、在真空度為0.04Mpa，溫度為50-55℃時減壓濃縮滲漉液，回收乙醇，濃縮后的藥液無醇味，相對密度在1.06-1.12；D、將濃縮至無醇味后的滲漉液加水至3倍量，離心，取清液上柱，滴加速度為3毫升/分鐘每千克藥材，用9倍量水洗后，再用9倍量40％乙醇洗，控制滴加與流出速度相適宜，不能出現干柱，三七三醇皂甙從第一色帶開始收集，以TLC鑒別控制收集三七三醇皂甙部分，待不顯色即為完成。；E、經水洗樹脂柱后用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，過濾，減壓濃縮，在55℃時真空干燥，研磨成粉狀。
F、使用過的大孔吸附樹脂分離柱以1％鹽酸乙醇液沖洗，直至用蒸餾水沖洗至中性，即可再次使用，大孔吸附樹脂的柱徑與柱高之比為30∶160，為苯乙烯型共聚體，型號為D-101。
例3按以下步驟制備三七三醇皂甙A、取三七粉碎過一號篩，加濃度為60％的乙醇浸泡28小時，然后均勻，壓實填入滲漉桶；B、用藥材量12倍量的60％乙醇滲漉至流出液無皂甙反應，流速為7毫升/分鐘每千克藥材，滲漉時浸泡液先流盡齊液面，后滴加60％乙醇，控制上下流速相當，不能干柱；C、在真空度為0.08Mpa，溫度為50-55℃時減壓濃縮滲漉液，回收乙醇，濃縮后的藥液無醇味，相對密度在1.06-1.12；D、將濃縮至無醇味后的滲漉液加水至6倍量，離心，取清液上柱，滴加速度為7毫升/分鐘每千克藥材，用9倍量水洗后，再用9倍量40％乙醇洗，控制滴加與流出速度相適宜，不能出現干柱，三七三醇皂甙從第一色帶開始收集，以TLC鑒別控制收集三七三醇皂甙部分，待不顯色即為完成；E、經水洗樹脂柱后用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，過濾，減壓濃縮，在55℃時真空干燥，研磨成粉狀。
F、使用過的大孔吸附樹脂分離柱以1％鹽酸乙醇液沖洗，直至用蒸餾水沖洗至中性，即可再次使用，大孔吸附樹脂的柱徑與柱高之比為30∶160，為苯乙烯型共聚體，型號為D-101。
例4按以下步驟制備三七三醇皂甙A、取三七粉碎過一號篩，加濃度為60％的乙醇浸泡24小時，然后均勻，壓實填入滲漉桶；B、用藥材量10倍量的60％乙醇滲漉至流出液無皂甙反應，流速為5毫升/分鐘每千克藥材，滲漉時浸泡液先流盡齊液面，后滴加60％乙醇，控制上下流速相當，不能干柱；C、在真空度為0.06Mpa，溫度為50-55℃時減壓濃縮滲漉液，回收乙醇，濃縮后的藥液無醇味，相對密度在1.06-1.12；D、將濃縮至無醇味后的滲漉液加水至5倍量，離心，取清液上柱，滴加速度為5毫升/分鐘每千克藥材，用9倍量水洗后，再用9倍量40％乙醇洗，控制滴加與流出速度相適宜，不能出現干柱，三七三醇皂甙從第一色帶開始收集，以TLC鑒別控制收集三七三醇皂甙部分，待不顯色即為完成；E、經水洗樹脂柱后用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，過濾，減壓濃縮，在55℃時真空干燥，研磨成粉狀。
F、使用過的大孔吸附樹脂分離柱以1％鹽酸乙醇液沖洗，直至用蒸餾水沖洗至中性，即可再次使用，大孔吸附樹脂的柱徑與柱高之比為30∶160，為苯乙烯型共聚體，型號為D-101。
例5三七三醇皂苷對大鼠中腦動脈阻塞致腦梗塞的保護作用一、試驗目的本試驗用灼斷大鼠大腦中動脈引起腦梗塞的方法，觀察三七三醇皂苷(預防給藥組；阻塞后給藥治療組)對局部腦缺血引起的腦功能障礙和梗塞范圍的影響。為臨床應用該藥治療缺血性腦血管病提供藥理依據。
二、試驗材料藥物三七三醇皂苷淺棕色粉末，人參皂苷Rg1含量68.3％，批號040316，由本院植化室提供，實驗前用蒸餾水配成一定濃度(50、25、12.5mg/ml)的溶液使用。
尼莫地平天津中央藥廠生產。實驗前用0.5％阿拉伯膠漿配成一定濃度的混懸液做陽性對照藥用。
動物大鼠雄性Wistar，體重250～300克，由本院動物房提供，合格證號津實動設施準第001號。
三、方法與結果1.預防給藥實驗
按動物體重隨機分為5組，每組10只，灌胃給藥。
(1)缺血對照組灌服蒸餾水4毫升/公斤/日，(2)陽性藥對照組尼莫地平50毫克/公斤/日，(3)(4)(5)組分別灌服三七三醇皂苷200、100、50毫克/公斤/日，各組均連續(xù)給藥7天，于末次給藥2小時后，腹腔注射水合氯醛350毫克/公斤麻醉，按阻斷大白鼠中腦動脈法[1]暴露出右側大腦中動脈，在手術顯微鏡(上海醫(yī)用光學儀器廠)下，用高頻電刀將大腦中動脈灼斷，術后，回籠飼養(yǎng)，室溫保持在26～27℃，24小時后進行動物行為評分，結果見表1-6，以此作為腦功能障礙的指標。然后斷頭取腦，在手術顯微鏡下證實動物大腦中動脈阻斷后放入冷鹽水中，10分鐘后，取嗅球、小腦及低位腦干。沿冠狀面切成5片，將腦切片置于含有1.5毫升4％紅四氮唑及0.1毫升1MK2HPO4的5毫升染色液中，避光，37℃溫孵30分鐘后，取出放入10％福爾馬林液中，避光保存，正常組織呈玫瑰紅色，缺血區(qū)呈白色，將白色組織仔細挖下稱重，計算梗塞組織重量占大腦半球重量的百分比，以此比值評價藥效，結果見表1-7。
評分標準[2]如下①提鼠尾，離開地面約1尺，觀察兩前肢活動情況。正常動物兩前肢前伸，對稱，手術后缺血腦半球對側前肢內旋和內收，視程度不同，評0～4分；②將動物置平滑地面上，分別推雙肩向對側移動，檢查阻力，正常大鼠雙側阻力對稱，向手術對側推動時阻力下降者，根據下降程度不同，評為0～3分③牽拉兩前肢，正常對稱，手術后對側前肢無力，評0～3分。
④動物有不停的向一側轉圈者，加1分。
根據以上標準評分，滿分為11分。分數越高，動物的行為障礙越嚴重。
表1-6.預防給藥三七三醇皂苷對阻斷大鼠大腦中動脈所致行為障礙的影響 ***P＜0.001(與缺血對照組比較)，采用兩組均數的統(tǒng)計分析-t值法進行統(tǒng)計處理。
采用盲法進行評分，結果從表1可見缺血對照組行為障礙最嚴重，三七三醇皂苷高、中劑量組明顯改善行為障礙，低劑量組無明顯影響，尼莫地平亦明顯降低行為評分。
表1-7 預防給藥三七三醇皂苷對阻斷大鼠大腦中動脈腦梗塞面積影響
*P＜0.05，**P＜0.01(與缺血對照組比較)從表1-7結果可見，三七三醇皂苷和尼莫地平預防給藥對阻斷大鼠大腦中動脈引起的腦梗塞有明顯療效。腦梗塞組織百分比分別減少了54.2％(P＜0.01)、44.6％(P＜0.05)、25％、33.3％(P＜0.05)，和行為改善的結果一致。
2.治療給藥實驗取健康大白鼠50只，腹腔注射水合氯醛350毫升/公斤麻醉，同上法進行大鼠大腦中動脈阻斷手術，術后回籠飼養(yǎng)，于術后4小時將大鼠按癥狀輕重均分為5組，每組10只，灌胃給藥。①缺血對照組灌服蒸餾水4毫升/公斤日，②陽性藥對照組尼莫地平50毫升/公斤/日，③、④、⑤組分別灌服三七三醇皂苷200、100、50毫升/公斤/日，各組均連續(xù)給藥六天，并于分組后，每天上午對動物進行行為評分，連續(xù)六天，結果見表1-8，于第七天將動物斷頭取腦，同前法計算梗塞組織重量占大腦半球重量的百分比，結果見表1-9。
表1-8.三七三醇皂苷對阻斷大鼠大腦中動脈所致行為障礙的影響


*P＜0.05、**P＜0.01(與缺血對照組比較)t值法進行統(tǒng)計處理，n為動物數。
從表3結果可見，三七三醇皂苷高劑量組于給藥第5、6天明顯改善行為障礙，中、低劑量組有降低行為評分趨勢，但無統(tǒng)計學差別，尼莫地平于第5、6天亦明顯降低行為評分。
表1-9.三七三醇皂苷對阻斷大鼠大腦中動脈腦梗塞面積的影響

*P＜0.05(與缺血對照組比較)表1-9結果可見，三七三醇皂苷和尼莫地平對阻斷大鼠大腦中動脈引起的腦梗塞亦有明顯的療效，腦梗塞組織百分比分別減少了37.1％(P＜0.05)、28.8％、14.3％、31％(P＜0.05)和行為改善結果一致。
四、小結1、三七三醇皂苷預防給藥(200、100、50毫克/公斤/日)，尼莫地平(50毫克/公斤/日)連續(xù)灌胃給藥7天，使阻斷大鼠大腦中動脈所致腦梗塞有明顯療效，腦梗塞組織百分比分別減少了54.2％(P＜0.01)、44.6％(P＜0.05)、25％、33.3％(P＜0.05)，明顯改善其行為障礙。
2、三七三醇皂苷阻塞后給藥的治療組(200、100、50毫克/公斤/日)、尼莫地平(50毫克/公斤/日)連續(xù)灌胃給藥6天，使阻斷大鼠大腦中動脈所致腦梗塞的梗塞組織百分比分別減少了37.1％(P＜0.05)、28.8％、14.3％、31％(P＜0.05)，亦明顯改善腦梗塞大鼠的行為障礙。
實驗結果表明三七三醇皂苷對大鼠局部腦缺血有保護作用。
權利要求
1.一種三七三醇皂甙的制備方法，其特征在于包括下列步驟A、取三七粉碎過一號篩，加濃度為60％的乙醇浸泡12-30小時，然后均勻，壓實填入滲漉桶；B、用藥材量6-12倍量的60％乙醇滲漉至流出液無皂甙反應，流速為3-7毫升/分鐘每千克藥材；C、在真空度為0.04-0.1Mpa，溫度為50-55℃時減壓濃縮滲漉液，回收乙醇，濃縮后的藥液無醇味，相對密度在1.06-1.12；D、將濃縮至無醇味后的滲漉液加水至3-6倍量，離心，取清液上柱，滴加速度為3-7毫升/分鐘每千克藥材；E、經水洗樹脂柱后用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，過濾，減壓濃縮，在55℃時真空干燥，研磨成粉狀。
2.根據權利要求1所述的三七三醇皂甙的制備方法，其特征在于包括下列步驟A、取三七粉碎過一號篩，加濃度為60％的乙醇浸泡20-28小時、然后均勻，壓實填入滲漉桶；B、用藥材量8-10倍量的60％乙醇滲漉至流出液無皂甙反應，流速為4-6毫升/分鐘每千克藥材；C、在真空度為0.05-0.06Mpa，溫度為50-55℃時減壓濃縮滲漉液，回收乙醇，濃縮后的藥液無醇味，相對密度在1.06-1.12；D、將濃縮至無醇味后的滲漉液加水至5-6倍量，離心，取清液上柱，滴加速度為4-6毫升/分鐘每千克藥材；E、經水洗樹脂柱后用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，過濾，減壓濃縮，在55℃時真空干燥，研磨成粉狀。
3.根據權利要求1所述的三七三醇皂甙的制備方法，其特征在于包括下列步驟A、取三七粉碎過一號篩，加濃度為60％的乙醇浸泡24小時、然后均勻，壓實填入滲漉桶；B、用藥材量10倍量的60％乙醇滲漉至流出液無皂甙反應，流速為5毫升/分鐘每千克藥材；C、在真空度為0.06Mpa，溫度為55℃時減壓濃縮滲漉液，回收乙醇，濃縮后的藥液無醇味，相對密度在1.06-1.12；D、將濃縮至無醇味后的滲漉液加水至5倍量，離心，取清液上柱，滴加速度為5毫升/分鐘每千克藥材；E、經水洗樹脂柱后用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，過濾，減壓濃縮，在55℃時真空干燥，研磨成粉狀。
4.根據權利要求1-3所述的三七三醇皂甙的制備方法，其特征在于滲漉時浸泡液先流盡齊液面，后滴加60％乙醇，控制上下流速相當。
5.根據權利要求1-3所述的三七三醇皂甙的制備方法，其特征在于在柱層析步驟中用9倍量水洗后，再用9倍量40％乙醇洗，控制滴加與流出速度相適宜，不能出現干柱。
6.根據權利要求1-3所述的三七三醇皂甙的制備方法，其特征在于三七三醇皂甙從第一色帶開始收集，以TLC鑒別控制收集三七三醇皂甙部分，待不顯色即為完成。
7.根據權利要求1-3所述的三七三醇皂甙的制備方法，其特征在于將使用過的大孔吸附樹脂分離柱以1％鹽酸乙醇液沖洗，直至用蒸餾水沖洗至中性，即可再次使用。
8.根據權利要求1-3所述的三七三醇皂甙的制備方法，其特征在于大孔吸附樹脂的柱徑與柱高之比為30∶160。
9.根據權利要求1-3所述的三七三醇皂甙的制備方法，其特征在于大孔吸附樹脂為苯乙烯型共聚體，型號為D-101。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種三七三醇皂甙的制備方法，包括取三七粉碎，加濃度為60％的乙醇浸泡、滲漉，收集滲漉液，滲漉液減壓濃縮，濃縮液用蒸餾水稀釋，緩慢加到大孔吸附樹脂分離柱中，用40％乙醇洗脫，收集40％乙醇洗脫液，然后再精制得三七三醇皂甙等步驟；用本發(fā)明的方法提取的三七三醇皂甙含量高、質量穩(wěn)定，色澤好，并且成本低、安全可靠。
文檔編號C07J17/00GK1603335SQ200410070158
公開日2005年4月6日 申請日期2004年8月4日 優(yōu)先權日2004年8月4日
發(fā)明者李明勁 申請人:李明勁