專利名稱：新的苯并二氫吲哚化合物、它們的制備方法及含有它們的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是EP-1170288的選擇發(fā)明，涉及新的苯并二氫吲哚化合物、它們的制備方法及含有它們的藥物組合物。
背景技術(shù)：
額頁皮質(zhì)(frontal cortex)在控制精神病中的改變的功能的過程中起著不可或缺的作用。特別是，現(xiàn)已公認，去甲腎上腺素能、多巴胺能和膽堿能的傳遞紊亂與那些各種疾病的病因密切相關(guān)。例如，對于抑郁癥，這些神經(jīng)調(diào)節(jié)劑在皮質(zhì)邊緣區(qū)域的活性降低。
在調(diào)節(jié)機制中所牽涉的各種類別的單胺自身-和異體-受體中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)α2-AR(腎上腺素受體)和5-HT2C受體非常重要。這兩種受體亞型通過抑制多巴胺能和腎上腺素能的傳遞而發(fā)揮相同的作用。一方面，α2-AR受體對多巴胺能、去甲腎上腺素能和膽堿能神經(jīng)元發(fā)揮抑制性控制作用[TheJournal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，270，958(1994)；European Journal of Neuroscience，12，1079-1095(2000)；The Journal ofPharmacology and Experimental Therapeutics，305，338-346(2003)]，另一方面，5-HT2C受體對多巴胺能和去甲腎上腺素能的傳遞發(fā)揮抑制性控制作用[Neuropharmacology，36，609(1997)]。
過去已經(jīng)證明了結(jié)合于一種或者他種那些受體類型的化合物用于治療多種病狀的潛力。
例如，已經(jīng)研究了α2-AR拮抗化合物在治療下述疾病中的有益作用認知障礙[Psychopharmacology，123，239-249(1996)；Journal ofPsychopharmacology，6，3，376-381(1992)；Neuroscience Letters，142，36-40(1992)；European Journal of Pharmacology，277，113-116(1995)]、帕金森病[CNS Drugs，10，189(1998)]、性欲障礙和性功能障礙[Journal ofPharmacology，11，72(1997)；Urology，49，3，441-444(1997)；InternationalJournal of Impotence Research，12，S70-S74(2000)；International Journal ofImpotence Research，12，增刊1，S75-S80(2000)；World Journal of Urology，19，51-56(2001)]、精神分裂癥[British Journal of Pharmacology，124，1550-1556(1998)]和抑郁癥「European Journal of Neuroscience，12，1079-95(2000)；The Journal of Pharmacology and ExperimentalTherapeutics，277(2)，852-60(1997)；Naunyn-Schmiedeberg’s Archiv.Pharmacol，355(1)，20-9(1997)]。
同樣，已經(jīng)證明5-HT2C受體拮抗化合物在治療下述疾病中的有效性性功能障礙[Life Sciences，45，1263-1270(1989)；PharmacologicalBiochemistry and Behavior，39，605-612(1991)；Psychopharmacology，119，291-294(1995)；Neuroendocrinology，76，28-34(2002)]和帕金森病[DrugNews Perspect，12(8)，477-483(1999)]以及抑郁癥[Prog.Neuro-Psychopharmacol.Biol.Psychiat.，18，563-574(1994)；British Journalof Psychiatry，171，444-448，(1997)；Neuropharmacology，39，l222-1236(2000)]、焦慮癥[British Journal of Pharmacology，117，427，(1996)]、精神分裂癥[Neuroscience Letter，181，65(1996)；The Journal ofPharmacology and Experimental Therapeutics，295，1，226-232(2000)；Molecular Psychiatry，6，373-379(2001)；The Journal of Neuroscience，21，19，7781-7787(2001)；Pharmacology，Biochemistry and Behavior，71，745-756(2002)；Psychopharmacology，162，55-62(2002)]、沖動型行為障礙[The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，298(2)，581-591(2001)；Brain research，835，104-112(1999)]和睡眠障礙[Psychopharmacology，96，395-399(1988)；Neuropsychopharmacology，21，455-466(1999)；Biological Psychiatry，47，468-470(2000)；Pharmacology，Biochemistry and Behavior，71，599-605(2002)]。
具有α2-AR和5-HT2C雙重拮抗劑特性的化合物對臨床醫(yī)生非常有用，通過施用單一的化合物，就可以在恢復(fù)神經(jīng)傳遞中獲得顯著增強的作用，即協(xié)同作用。而且，該類化合物較施用兩種不同的化合物具有顯著的優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的化合物具有新的苯并二氫吲哚結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)使這些化合物具有α2-AR/5-HT2C雙重拮抗劑特性，因而可以用于治療抑郁癥、焦慮癥、精神分裂癥、帕金森病、認知障礙、性欲障礙和性功能障礙、睡眠障礙和沖動型行為障礙。
本發(fā)明涉及新的苯并二氫吲哚化合物，它們構(gòu)成專利申請EP-1170288所述的化合物的選擇發(fā)明。這些化合物是新化合物且與專利申請EP-1170288實施例中所述和提及的化合物的區(qū)別不僅在于在二氫吲哚上沒有鹵素原子，而且特別是存在一個與二氫吲哚基團稠合的苯并基團。
令人驚訝的是，該基團的引入使本發(fā)明的化合物的藥理學活性明顯優(yōu)于那些現(xiàn)有技術(shù)中結(jié)構(gòu)最相近的化合物(專利申請EP-1170288實施例116-氯-5-氟-N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1-二氫吲哚-甲酰胺)。
因此，應(yīng)用苯并二氫吲哚基團已經(jīng)使本發(fā)明化合物的藥理學性質(zhì)的顯著改善成為可能。
更具體地，本發(fā)明涉及式(I)化合物 其中R1和R2一起形成苯并環(huán)，其任選被鹵素原子取代或被烷基、烷氧基、氰基、硝基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或三氟甲基取代，且R3和R4代表氫原子，或
R1和R4代表氫原子，且R2和R3一起形成苯并環(huán)，其任選被鹵素原子取代或被烷基、烷氧基、氰基、硝基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或三氟甲基取代，或R1和R2代表氫原子，且R3和R4一起形成苯并環(huán)，其任選被鹵素原子取代或被烷基、烷氧基、氰基、硝基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或三氟甲基取代，它們的對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體，以及它們與可藥用酸或堿的加成鹽，應(yīng)當理解●術(shù)語“烷基”是指含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，●術(shù)語“烷氧基”是指含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基-氧基團。
在可藥用酸中，可提及鹽酸、氫溴酸、硫酸、膦酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、富馬酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、抗壞血酸、甲磺酸、樟腦酸等。
在可藥用堿中，可提及氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙胺、叔丁基胺等。
本發(fā)明的一個有利方面涉及這樣的化合物，其中R1和R2一起形成苯并環(huán)，其任選被鹵素原子取代或被烷基、烷氧基、氰基、硝基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或三氟甲基取代，且R3和R4代表氫原子。
在本發(fā)明的優(yōu)選化合物中，可更特別地提及N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1，2-二氫-3H-苯并[e]-吲哚-3-甲酰胺。
本發(fā)明還涉及一種制備式(I)化合物的方法，其特征在于，使用式(II)的苯并吲哚化合物作為原料 其中R1、R2、R3和R4如式(I)所定義，將式(II)化合物與式(III)化合物縮合
其中Y代表-N＝C＝O或-C(O)-N3基團，以生成式(I)化合物，●必要時，可以根據(jù)常規(guī)的純化技術(shù)將其純化，●必要時，通過常規(guī)的分離技術(shù)將其分離為其異構(gòu)體(非對映異構(gòu)體和對映異構(gòu)體)，●需要時，將其轉(zhuǎn)化為與可藥用酸或堿的加成鹽，應(yīng)當理解，式(II)的二氫吲哚是根據(jù)已知方法制備，例如從相應(yīng)的硝基萘基乙腈化合物開始制備。
本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包含至少一種單獨或者與一種或多種惰性無毒的可藥用賦形劑或載體組合的式(I)化合物作為活性成分。
在本發(fā)明的藥物組合物中，可更特別地提及那些適合于口服、胃腸外、經(jīng)鼻或透皮施用的藥物組合物，片劑或糖衣丸、舌下片、明膠膠囊、錠劑、栓劑、霜劑、軟膏劑、皮膚凝膠劑等。
有效劑量根據(jù)下述因素變化患者的年齡和體重、疾病的性質(zhì)和嚴重程度以及施用途徑，它可以是口服、經(jīng)鼻、經(jīng)直腸或胃腸外施用。單位劑量范圍一般為每24小時施用0.05至500mg，施用1至3次。
具體實施例方式
以下實施例進一步解釋本發(fā)明，但不以任何方式進行限制。
所述化合物的結(jié)構(gòu)已經(jīng)通過常規(guī)的光譜和光譜測定技術(shù)進行確認。
所使用的原料是已知物或者根據(jù)已知方法制備。
制備12，3-二氫-1H-苯并[e]吲哚步驟A(2-硝基-1-萘基)乙腈制備53.5g(0.477mol)叔丁醇鉀于400ml二甲基甲酰胺中的溶液。將得到的溶液冷卻至-10℃并在約1小時期間向其中加入40g4-氯苯氧基乙腈(0.24mol)和37g2-硝基萘(0.213mol)于200ml二甲基甲酰胺中的溶液。在-5℃下2小時后，將混合物倒入4升含有1升濃鹽酸的水中，用3×500ml二氯甲烷萃取水相。用300ml水洗滌有機相，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，然后蒸出溶劑。
得到65g產(chǎn)物。
在環(huán)己烷/乙酸乙酯的混合物(50/50，v/v)中重結(jié)晶該65g產(chǎn)物。
步驟B3H-苯并[e]吲哚在環(huán)境溫度兼4bar氫氣壓力下，使用19g10％的披鈀碳，對溶解于含有10％水和6.3ml純乙酸的630ml乙醇中的33g(2-硝基-1-萘基)乙腈(0.155mol)進行氫化。吸收停止后，濾出催化劑，真空濃縮溶劑，然后將殘余物放入250ml二氯甲烷中；用100ml 0.1N氫氧化鉀溶液洗滌有機相，然后用硫酸鎂干燥有機相，過濾并濃縮。
殘余物經(jīng)硅膠層析純化，洗脫劑為環(huán)己烷/乙酸乙酯(80/20，v/v)。
步驟C2，3-二氫-1H-苯并[e]吲哚將10g(0.06mol)前步制備的化合物溶解于50ml四氫呋喃中。在0℃下向得到的溶液中加入120ml1M的硼烷/THF復(fù)合物于四氫呋喃中的溶液，然后加入120ml三氟乙酸。30分鐘后，在0℃下加入6ml水，攪拌15分鐘，然后濃縮混合物至干。將殘余物放入200ml二氯甲烷中，用200ml1N氫氧化鈉溶液洗滌。有機相經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。
制備22，3-二氫-1H-苯并[f]吲哚還原1H-苯并[f]吲哚的實驗方法與制備1中的步驟C相同。原料1H-苯并[f]吲哚的合成已經(jīng)在文獻[Tetrahedron，49，33，7353(1993)；Heterocycles，24，7，1845，(1986)]中描述。
制備32，3-二氫-1H-苯并[e]吲哚-6-甲腈步驟AN-(5-氰基-2-萘基)乙酰胺向25g冷卻至0℃的N-(5，6，7，8-四氫萘-2-基)乙酰胺中連續(xù)加入70ml純的氰化三甲基甲硅烷，然后加入30g在70ml二氯甲烷中的二氯二氰基醌。在環(huán)境溫度下3小時后，再加入60g二氯二氰基醌于140ml二氯甲烷中的溶液。在20℃攪拌12小時，然后在60℃加熱8小時。
用飽和碳酸氫鈉溶液中和后，分離有機相并用水洗滌。將濃縮后得到的殘余物通過使用環(huán)己烷/乙酸乙酯混合物(80/20，v/v)作為洗脫劑的硅膠層析進行純化。
步驟BN-(1-溴-5-氰基-2-萘基)乙酰胺向冷卻至-5℃的50g(0.238mol)前步合成的產(chǎn)物于500ml二氯甲烷和25ml吡啶中的溶液中加入39.8g溶于200ml二氯甲烷中的溴。然后在環(huán)境溫度下劇烈攪拌4小時；然后用500ml二氯甲烷稀釋，用300ml水將有機相洗滌兩次，干燥并濃縮。使殘余物在二氯甲烷/甲醇的混合物(50/50，v/v)中重結(jié)晶。
步驟C6-氨基-5-溴-1-萘甲腈將12.5g(0.043mol)前步合成的產(chǎn)物、3.6g氫氧化鈉、195ml甲醇和65ml水的混合物在80℃加熱6小時。
蒸出甲醇后，將水相用二氯甲烷萃取兩次。隨后將后者干燥并蒸出。使殘余物在二氯甲烷/甲醇的混合物中結(jié)晶。
步驟D1-溴-5-氰基-2-萘基氨基甲酸乙酯在0℃下將19ml氯甲酸乙酯加入到33g(0.133mol)前步合成的產(chǎn)物于200ml吡啶中的溶液中。在5℃下1小時后，蒸出溶劑，將殘余物放入500ml二氯甲烷中，將有機相用100ml0.1N鹽酸洗滌3次，然后用200ml10％碳酸氫鈉溶液洗滌，最后用水洗滌一次。將蒸發(fā)得到的殘余物在二氯甲烷/甲醇的混合物中重結(jié)晶。
步驟E5-氰基-1-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]-2-萘基氨基甲酸乙酯在一個鋼制反應(yīng)器中，將14.1g(0.044mol)前步合成的產(chǎn)物、11ml三甲基甲硅烷基乙炔、13ml三乙胺、670mg碘化亞銅和1.54g二氯-雙(三苯基膦)鈀混合。然后關(guān)閉反應(yīng)器，將反應(yīng)混合物在80℃加熱4小時。用200ml二氯甲烷和100ml水稀釋，過濾混合物，分離有機相，將其干燥并真空蒸出溶劑。將得到的殘余物通過使用環(huán)己烷/乙酸乙酯混合物(90/10，v/v)作為洗脫劑的硅膠層析進行純化，然后在相同的溶劑中結(jié)晶。
步驟F3H-苯并[e]吲哚-6-甲腈向2.74g鈉于280ml干乙醇中的溶液中加入10g(0.0297mol)前步合成的產(chǎn)物，將混合物回流加熱1小時。蒸出溶劑后，將殘余物放入200ml二氯甲烷中并將有機相用200ml水洗滌。蒸發(fā)后，將殘余物通過使用環(huán)己烷/乙酸乙酯混合物(80/20，v/v)作為洗脫劑的硅膠層析進行純化。
步驟G2，3-二氫-1H-苯并[e]吲哚-6-甲腈還原3H-苯并[e]吲哚-6-甲腈的實驗方法與制備1中的步驟C相同。
制備47-甲氧基-2，3-二氫-1H-苯并[e]吲哚步驟A6-甲氧基-3，4-二氫-1(2H)-萘酮肟將100g(0.57mol)6-甲氧基-1-四氫萘酮溶解于2.5升乙醇/水(80/20)的混合物中。然后在環(huán)境溫度下加入85g(1.04mol)乙酸鈉和43g(0.62mol)鹽酸羥胺。將懸液回流加熱4小時。用5升水稀釋混合物并用乙醚萃取，用水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并過濾。蒸出溶劑后，得到99g米色固體。
步驟B2-氨基-6-甲氧基-3，4-二氫-1(2H)-萘酮將50g(0.26mol)前步合成的產(chǎn)物溶解于185ml吡啶中，然后在環(huán)境溫度下加入54.9g(0.29mol)對甲苯磺酰氯。24小時后，傾于冰上，然后濾出沉淀。將沉淀放入二氯甲烷中并用水洗滌；有機相經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾。蒸出溶劑后，得到89g黃色固體(中間產(chǎn)物1)。
將7.48g(0.32mol)鈉加入到甲苯/乙醇混合物(720/148ml)中。溶解后，用940ml甲苯稀釋并快速加入117g(0.34mol)中間產(chǎn)物1。在環(huán)境溫度下24小時后，濾出對甲苯磺酸鈉，用甲苯?jīng)_洗，然后將有機溶液傾入10％鹽酸溶液(1.1升)中。分離后，用水萃取1次，然后蒸發(fā)水相。將殘余物放入乙醇中，然后濾出沉淀。得到46.5g鹽酸鹽形式的米色固體。
步驟CN-乙基-N’-(6-甲氧基-1-氧代-1，2，3，4-四氫-2-萘基)脲在0℃下將4.77g(0.044mol)氯甲酸乙酯傾入溶解于吡啶中的5g(0.022mol)2-氨基-6-甲氧基-3，4-二氫-2H-萘-1-酮。在環(huán)境溫度下2小時后，濃縮吡啶，放入二氯甲烷中，然后依次用0.1N鹽酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和水洗滌有機相；經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并蒸出溶劑。得到5.48g橙色固體。
步驟DN-乙基-N’-(6-甲氧基-1，2，3，4-四氫-2-萘基)脲在60℃兼大氣壓下，使用10g5％的披鈀碳，對98g(0.37mol)溶解于1.5升乙醇中的先前在步驟C中制備的產(chǎn)物進行氫化。吸收停止后，濾出催化劑并真空濃縮溶劑。得到88.2g油。
步驟EN-乙基-N’-(6-甲氧基-2-萘基)脲將7.42g(0.0298mol)前步合成的產(chǎn)物溶解于100ml甲苯中。加入13.51g(0.0595mol)二氯二氰基醌并回流加熱30分鐘。在環(huán)境溫度下濾出沉淀，用甲苯?jīng)_洗，然后蒸出溶劑。將殘余物通過使用純二氯甲烷作為洗脫劑的硅膠層析進行純化。得到4g灰色固體。
步驟F6-甲氧基-2-萘胺將3.5g前步合成的產(chǎn)物溶解于65ml乙醇中，然后加入氫氧化鉀在65ml水中的溶液?；亓?小時后，在環(huán)境溫度下濾出形成的沉淀。將粗產(chǎn)物放入二氯甲烷中，用水洗至中性；經(jīng)硫酸鎂干燥，濾出沉淀，然后蒸出溶劑。得到2.02g橙色固體。
步驟G1-碘-6-甲氧基-2-萘胺將28.2g(0.16mol)前步合成的產(chǎn)物溶解于二氯甲烷/甲醇(1500/620ml)混合物中。在環(huán)境溫度下向得到的溶液中加入56.7g(0.16mol)二氯碘酸芐基三甲基銨和21.2g(0.212mol)碳酸鈣。30分鐘后，濾出不溶物，然后將有機相放入10％亞硫酸氫鈉溶液中，用乙醚萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，然后蒸發(fā)。將殘余物通過使用環(huán)己烷/乙酸乙酯混合物(70/30，v/v)作為洗脫劑的硅膠層析進行純化。
步驟H1-碘-6-甲氧基-2-萘基氨基甲酸乙酯1-碘-6-甲氧基-2-萘胺的轉(zhuǎn)化通過應(yīng)用步驟C所述的方法進行。
步驟I6-甲氧基-1-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]-2-萘基氨基甲酸乙酯1-碘-6-甲氧基-2-萘基氨基甲酸乙酯的轉(zhuǎn)化通過應(yīng)用制備3中步驟E所述的方法進行。
步驟J7-甲氧基-3H-苯并[e]吲哚前步的產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化通過應(yīng)用制備3中步驟F所述的方法進行。
步驟K7-甲氧基-2，3-二氫-1H-苯并[e]吲哚還原7-甲氧基-3H-苯并[e]吲哚的實驗方法與制備1步驟C相同。
制備54-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯甲酰疊氮在環(huán)境溫度下，將5.3g(0.025mol)二氯磷酸苯酯于100ml二氯甲烷中的溶液加入到5g(0.02mol)4-甲氧基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)苯甲酸[J.Med.Chem.，37(15)，2255(1994)]和3.25g(0.05mol)疊氮化鈉于4.05ml吡啶中的溶液中。攪拌12小時后，用100ml水洗滌有機相，分離有機相，經(jīng)硫酸鎂干燥并在30℃真空蒸出溶劑。
實施例1N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1，2-二氫-3H-苯并[e]吲哚-3-甲酰胺鹽酸鹽將29g(0.105mol)制備5中合成的化合物于400ml甲苯中的溶液回流加熱，然后冷卻至20℃，加入100ml二氯甲烷，再加入18g(0.105mol)制備1中得到產(chǎn)品的溶液。在20℃攪拌24小時后，蒸出溶劑，并通過使用二氯甲烷/甲醇/氨水的混合物(95/5/0.5，v/v/v)作為洗脫劑的硅膠層析純化殘余物。使用借助鹽酸的乙醇溶液將堿轉(zhuǎn)化成鹽。
熔點176-178℃。
實施例2N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1，2-二氫-1H-苯并[f]吲哚-1-甲酰胺鹽酸鹽實驗方法與實施例1相同，但從制備2的產(chǎn)物開始。
實施例36-氰基-N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1，2-二氫-3H-苯并[e]-吲哚-3-甲酰胺鹽酸鹽實驗方法與實施例1相同，但從制備3的產(chǎn)物開始。
實施例47-甲氧基-N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1，2-二氫-3H-苯并[e]-吲哚-3-甲酰胺鹽酸鹽實驗方法與實施例1相同，但從制備4的產(chǎn)物開始。
藥理學研究實施例A對大鼠α2-腎上腺素能受體的親和力測定通過[3H]-RX 821，002競爭實驗測定親和力。從大鼠腦皮質(zhì)制備膜，并一式三份地與0.4nM[3H]-RX 821，002和待測化合物以1.0ml終體積在22℃溫育60分鐘。溫育緩沖液含有50nM TRIS-HCl(pH7.5)、1mM EDTA和100μM GppNHp。使用10μM芬妥拉明測定非特異性結(jié)合。
數(shù)據(jù)分析溫育結(jié)束時，將溫育培養(yǎng)基通過浸滲有0.1％聚乙烯亞胺的WHATMAN GF/B濾器過濾，用5ml冷卻的緩沖液洗滌3次。通過液體閃爍計數(shù)法測定過濾器上保留的放射活性。通過非線性回歸對結(jié)合等溫線進行分析。
結(jié)果本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出特異性的α2-腎上腺素能受體拮抗劑活性，例如，實施例1的化合物的pKi為7.4，而對比產(chǎn)品(EP-1170288中的實施例11)6-氯-5-氟-N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1-二氫吲哚甲酰胺的pKi為6.4。
實施例B對5-HT2C受體的親和力測定本發(fā)明化合物的親和力通過[3H]-美舒麥角(mesulergine)存在下的競爭實驗測定，22℃下在含有Hepes 20mM、EDTA 2mM、抗壞血酸0.1％的溫育緩沖液(pH＝7.7)中進行。[3H]-美舒麥角的解離常數(shù)KD是0.54mM。非特異性分數(shù)是在1μM米安舍林存在時確定，米安舍林也用作每次實驗的參照物。
溫育階段結(jié)束時，將培養(yǎng)基通過用PEI(0.1％)預(yù)處理的GF/B-Unifilter濾器過濾，然后用溫育緩沖液洗滌3次。通過液體閃爍計數(shù)法測定濾器上保留的放射活性。通過非線性回歸對結(jié)合等溫線進行分析，以確定IC50值。再將它們轉(zhuǎn)換為pKi(其中Ki為解離常數(shù))。
本發(fā)明的化合物顯示出對5-HT2C受體具有高度親和力。例如，實施例1的化合物的pKi為8.2，而對比化合物(EP-1170288中的實施例11)6-氯-5-氟-N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1-二氫吲哚甲酰胺的pKi為7.4。
實施例C大鼠額頁皮質(zhì)中的神經(jīng)遞質(zhì)的測定滲析手術(shù)在戊巴比妥誘導(dǎo)的麻醉(60mg/kg，i.p.)下進行。將200-220g重的雄性Wistar大鼠(Iffa Credo，Arbresle，法國)置于Kopf立體定位器中，將套管導(dǎo)管(CMAMicrodialyse AB，Stockholm，瑞典)植入額頁皮質(zhì)的以下坐標(單位mm)處前后+2.2，側(cè)面±0.6，腹側(cè)偏差-0.2。將這些大鼠分別置于單獨的籠子中，歷經(jīng)5天解除麻醉。在滲析當天，將CuprophanCMA/11探頭(長4mm，外徑0.24mm)插入導(dǎo)管并以1μl/min灌注由NaCl147.2mM、KCl4mM、CaCl22.3mM組成且用磷酸緩沖液調(diào)至pH7.3的溶液。植入2小時后，每20分鐘收集滲析液樣品，共4小時。在施用藥物前收集3批基線樣品。
層析去甲腎上腺素(NA)和多巴胺(DA)的測定如下將20μl滲析液樣品用20μl流動相(NaH2PO475mM，EDTA20μM，癸烷磺酸鈉1mM，甲醇17.5％，三乙胺0.01％，pH5.70)稀釋，取33μl用于HPLC分析，分離時使用恒溫控制于43℃的反相柱(Hypersil C18，150×4.6mm；粒徑5μm)，定量時使用庫侖檢測器(ESA5014，Coulochem II，ESA，Chelmsford，USA)。第一電極的電勢是-90mV(還原反應(yīng))，第二電極的電勢是+280mV(氧化反應(yīng))。流動相流速為2ml/min。NA和DA的靈敏度限度為0.2pg。
在沒有乙酰膽堿酯酶(AChE)抑制劑存在的條件下測定和定量乙酰膽堿(ACh)。將20μl滲析液樣品收集于10μl 0.01％乙酸中。取20μl等分試樣用于HPLC分析。流動相的組成為Na2HPO450mM和ProClin0.5％(BAS，Congleton，英國)，pH8.2。固定相的組成為陽離子交換柱(Sepstik，530×1.0mm；粒徑10μm，BAS)、預(yù)柱(膽堿氧化酶/過氧化氫酶酶反應(yīng)器，55×1mm，BAS)和后柱(膽堿氧化酶/AChE酶反應(yīng)器，50×1mm，BAS)。將系統(tǒng)維持在35℃。借助安培檢測儀(LC-4B，BAS)進行定量。一層過氧化物酶-電子交換聚合物沉積于玻璃碳工作電極(MF2098，BAS)上。該電極相對于Ag/AgCl參比電極的電勢是+100mV。流動相流速為0.14ml/min。ACh的靈敏度限度為0.1pg。
例如，實施例1的化合物(10.0mg/kg，s.c.)使從清醒大鼠的額頁皮質(zhì)收集的滲析液中的NA、DA和Ach的胞外濃度明顯增加(表1)。對比化合物(EP-1170288的實施例11)6-氯-5-氟-N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1-二氫吲哚甲酰胺(10.0m/kg，s.c.)使NA和DA的胞外濃度的增加非常有限，而ACh的胞外濃度則無變化(表1)。NA、DA和Ach的水平表示為施藥后20分鐘至120分鐘之間的曲線下面積百分比(％AbC)±S.E.M.。將實施例1化合物的效果與用溶劑或用6-氯-5-氟-N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1-二氫吲哚-甲酰胺處理的動物的結(jié)果進行對比(ANOVA)。
表1

aP＜0.005，相對溶劑；bP＜0.05，相對6-氯-5-氟-N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1-二氫吲哚-甲酰胺。
實施例D藥物組合物制備1000片每片含有10mg活性成分的配方實施例1的化合物10g羥丙基纖維素 2g小麥淀粉 10g乳糖 100g硬脂酸鎂 3g滑石粉 3g
權(quán)利要求
1.式(I)化合物 其中R1和R2一起形成苯并環(huán)，其任選被鹵素原子或被烷基、烷氧基、氰基、硝基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或三氟甲基取代，且R3和R4代表氫原子，或R1和R4代表氫原子，且R2和R3一起形成苯并環(huán)，其任選被鹵素原子或被烷基、烷氧基、氰基、硝基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或三氟甲基取代，或R1和R2代表氫原子，且R3和R4一起形成苯并環(huán)，其任選被鹵素原子或被烷基、烷氧基、氰基、硝基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或三氟甲基取代，它們的對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體，以及它們與可藥用酸或堿的加成鹽，應(yīng)當理解●術(shù)語“烷基”是指含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烴鏈，●術(shù)語“烷氧基”是指含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基-氧基團。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中R1和R2一起形成苯并環(huán)，其任選被鹵素原子或被烷基、烷氧基、氰基、硝基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基或三氟甲基取代，且R3和R4代表氫原子，它們的對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體以及它們與可藥用酸或堿的加成鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的式(I)化合物，其為N-[4-甲氧基-3-(4-甲基-1-哌嗪基)苯基]-1，2-二氫-3H-苯并[e]吲哚-3-甲酰胺，以及其與可藥用酸或堿的加成鹽。
4.一種制備權(quán)利要求1的式(I)化合物的方法，其特征在于，使用式(II)的苯并吲哚化合物作為原料 其中R1、R2、R3和R4如式(I)所定義，將式(II)化合物與式(III)化合物縮合 其中Y代表-N＝C＝O或-C(O)-N3基團，以生成式(I)化合物，●必要時，可以根據(jù)常規(guī)的純化技術(shù)將其純化，●必要時，通過常規(guī)的分離技術(shù)將其分離為其異構(gòu)體(非對映異構(gòu)體和對映異構(gòu)體)，●需要時，將其轉(zhuǎn)化為與可藥用酸或堿的加成鹽。
5.藥物組合物，其包含至少一種單獨或者與一種或多種惰性無毒的可藥用賦形劑或載體組合的權(quán)利要求1至3中任一項所述的化合物作為活性成分。
6.包含至少一種權(quán)利要求1至3中任一項的活性成分的權(quán)利要求5的藥物組合物，用于制備α2-AR/5-HT2C雙重拮抗劑藥物。
7.包含至少一種權(quán)利要求1至3中任一項的活性成分的權(quán)利要求5的藥物組合物，用于制備治療下述疾病的藥物抑郁癥、焦慮癥、沖動型行為疾病、精神分裂癥、帕金森病、認知障礙、性欲障礙和性功能障礙，以及睡眠障礙。
全文摘要
式(I)化合物，其中R
文檔編號C07D209/60GK1616425SQ20041007787
公開日2005年5月18日 申請日期2004年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月16日
發(fā)明者G·拉維勒, O·穆勒, M·米蘭, A·戈貝爾, B·迪卡拉 申請人:瑟維爾實驗室