專利名稱：人血清白蛋白多聚體的單體化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人血清白蛋白多聚體的單體化的方法。具體指的是關(guān)于用堿性溶液處理(以下稱之為“堿性處理”)人血清白蛋白多聚體進(jìn)而得到單體的方法，其中的人血清白蛋白多聚體指的是在以人血漿為原料的制備人血清白蛋白的步驟中或者在應(yīng)用基因重組技術(shù)制造人血清白蛋白的步驟中生成的人血清白蛋白多聚體。
本發(fā)明還涉及通過加入含有SH基化合物，抑制由于上述的堿性溶液處理造成的人血清白蛋白的分子內(nèi)或者分子間的二硫鍵的不正確結(jié)合所致的錯誤交聯(lián)的方法。
背景技術(shù)：
人血清白蛋白(以下稱為“HSA”)是血漿中的主要成分，由585個氨基酸的單鏈多肽組成，分子量約66000道爾頓(Minghetti，P.P.etal(1986)Molecular structure of the human albumin gene isrevealed by nucleotide sequence within 11-22 of chromosome 4.J.Biol.Chem.261，6747-6757)。已知HSA的主要功能是維持血液的正常滲透壓和結(jié)合血液中出現(xiàn)的鈣離子、脂肪酸、膽紅素、色氨酸以及藥物等各種物質(zhì)，在這些物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)中起到了載體的作用。純化的HSA用于治療例如外科手術(shù)、出血性休克以及燙傷和腎性綜合癥等由于白蛋白的損失導(dǎo)致的低白蛋白血癥。
最初，HSA是根據(jù)Cone的低溫乙醇分級法或者以這種方法為基準(zhǔn)的方法，從人血漿得到HSA組分(HSA組分分級為V)后，進(jìn)一步，通過利用各種純化方法進(jìn)行制備。并且，近年來，作為不依賴人血漿為原料的方法，應(yīng)用基因重組技術(shù)開發(fā)了在酵母和大腸桿菌、枯草桿菌中生產(chǎn)人血清白蛋白的技術(shù)。
參考在酵母中(1)Production of Recombinant Human SerumAlbumin from Saccharomyces cerevisiae；Quirk，R.et.al，Biotechnology and Applied Biochemistry 11，273-287(1989)、(2)Secretory Expression of the Human Serum Albumin Gene in theYeast，Saccharomyces cerevisiae；Ken. Okabayashi et.al，J.Biochemistry，110，103-110(1991)、(3)Yeast Systems for theCommercial Production of Heterologous proteins；Richard G.Buckholz and Martin A.G.Gleeson，Bio/Technology 9，1067-1072(1991)、在大腸桿菌(4)Construction of DNA sequences and theiruse for microbial production of proteins，in particular humanserum albumin；Lawn，R.M.，European Patent Appl.73，646(1983)、(5)Synthesis and Purification of mature humanserum albumin from E.coli；Latta，L.et.al.Biotechnique5，1309-1314(1897)、在枯草桿菌(6)Secretion of human serumalbumin from Bacillus subtilis；Saunders，C.W.et.al，J.Bacteriol.169，2917-2925(1987)。
人血清白蛋白的純化方法一般使用蛋白質(zhì)化學(xué)中常規(guī)使用的純化方法，例如使用鹽析法、超濾法、等電點(diǎn)沉淀法、電泳法、離子交換層析法、凝膠過濾層析法、親和層析方法等。實(shí)際上，在純化人血清白蛋白時(shí)，由于其中混有來自生物組織、細(xì)胞、血液等的多種污染物，所以采用上述方法的復(fù)雜組合進(jìn)行純化。
進(jìn)行人血清白蛋白工業(yè)生產(chǎn)時(shí)，必須在不同于人的體內(nèi)環(huán)境的各種條件下進(jìn)行處理，因此生成了人血清白蛋白的多聚體。在臨床應(yīng)用人血清白蛋白時(shí)，盡管尚未見到報(bào)告這種多聚體對人體產(chǎn)生的壞影響，但是懷疑這種多聚體能夠表現(xiàn)出新的抗原性。從醫(yī)藥的安全性角度出發(fā)，在醫(yī)藥用“人血清白蛋白”檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了多聚體混入量的限度，因此在制造上，盡可能降低制劑中的多聚體含量是非常重要的課題。
已有幾篇用于去除生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的多聚體的報(bào)道。例如據(jù)報(bào)道組合使用各種層析技術(shù)(SepHadex G-25，DEAE-以及CE-SepHaroseCL-6B，sepHacryl S-200等)，從血漿乙醇分級分離的V組分中得到了純度99％、凝集體(和“多聚體”同義)在1％以下的HSA(JOURNALOF APPLIED BIOCHEMISTRY5，282-292，1983)、或者向組分V中加入穩(wěn)定劑，進(jìn)行加熱處理(50～70℃，1～10小時(shí))后，利用硫酸銨和聚乙二醇以及等電點(diǎn)沉淀法，除去污染物和HSA聚集體(特愿昭63-265025)(特開平2-111728)。
可是，所有這些方法都是在HSA的制造過程中，從所產(chǎn)生的含有HSA多聚體的溶液中去除該種多聚體，制造出不含有這種多聚體的HSA的方法。因此，如果根據(jù)上述的方法，將能夠轉(zhuǎn)換成單體的多聚體去除后，只是廢棄掉，伴隨去除操作不可避免的造成單體收率的損失。HSA制劑是一種對患者進(jìn)行大量給藥性質(zhì)的制劑，與其他蛋白質(zhì)制劑相比，需要擴(kuò)大的生產(chǎn)量，因此在工業(yè)上期待有盡可能降低多聚體的含量能夠高效率進(jìn)行HSA生產(chǎn)的制造方法。
發(fā)明的內(nèi)容因此，本發(fā)明的第一目的是提供一種在人血清白蛋白制造過程中、將在從前的方法去除廢棄的人血清白蛋白的多聚體有效的進(jìn)行單體化的人血清白蛋白的制備方法。
本發(fā)明的第二目的是提供一種在人血清白蛋白的制造過程中，用于抑制在進(jìn)行堿性溶液處理(包括層析法等)步驟中所形成的人血清白蛋白分子內(nèi)錯誤交聯(lián)或HSA自體或者HSA和其他的夾雜物形成的分子間錯誤交聯(lián)的方法。
此外，本發(fā)明的第三目的是提供高安全性的人血清白蛋白醫(yī)藥用品。
本發(fā)明者等人就上述情況進(jìn)行了刻苦的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在堿性條件下，將含有多聚體的HSA或者rHSA水溶液放置適當(dāng)時(shí)間后，這種多聚體能夠轉(zhuǎn)換成單體。本發(fā)明者等人進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，用添加含有諸如半胱氨酸的SH基的化合物的處理液處理上述的堿性溶液，能夠抑制HSA的分子內(nèi)以及/或者分子間的錯誤交聯(lián)。
本發(fā)明是基于上述的發(fā)現(xiàn)完成的。
本發(fā)明的第一部分提供人血清白蛋白多聚體的單體化方法，以堿性溶液處理人血清白蛋白的多聚體為特征。
本發(fā)明的第二部分提供以在含有SH基化合物存在的情況下，進(jìn)行堿性溶液處理人血清白蛋白的多聚體為特征的將人血清白蛋白多聚體單體化的方法。
本發(fā)明第三部分提供在堿性溶液處理人血清白蛋白的多聚體進(jìn)行單體化時(shí)，用來抑制人血清白蛋白的錯誤交聯(lián)的方法，以人血清白蛋白溶液在含有SH基化合物存在的情況下，用堿性溶液處理為特征。
本發(fā)明的第四部分提供根據(jù)第一部分的單體化方法得到的多聚體含量很低的HSA。
本發(fā)明的第五部分提供了根據(jù)第一、第二或第三部分的方法得到的不含有該復(fù)合體的HSA。
附圖的簡單說明

圖1所示的是將調(diào)制例1中得到的人血清白蛋白溶液經(jīng)堿性溶液處理前后的試料進(jìn)行SDS-PAGE后，經(jīng)蛋白質(zhì)印跡檢測的結(jié)果的照片。①所示的是用堿性溶液處理前的試料、②所示的是用堿性溶液處理后的試驗(yàn)材料。
實(shí)施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明的第1方法如例所示以向含有人血清白蛋白的多聚體的溶液中加入堿性物質(zhì)，混合后，將pH調(diào)整到堿性后，暫時(shí)放置一段時(shí)間，將多聚體向單體轉(zhuǎn)換為特征。在制造過程中，適當(dāng)?shù)牟扇?次或者多次反復(fù)操作這種方法，有效的制造這種多聚體含量很低的、高純度的人血清白蛋白。
本發(fā)明的第2方法以在人血清白蛋白的制造過程中，在將人血清白蛋白多聚體進(jìn)行單體化的時(shí)候所使用的堿性溶液中存在含有SH基化合物為特征。
通常情況下，蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行堿性化時(shí)，蛋白質(zhì)分子內(nèi)的半胱氨酸殘基的巰基能夠在蛋白質(zhì)分子內(nèi)或者蛋白質(zhì)分子間形成二硫鍵(包括二硫鍵交換反應(yīng))。此時(shí)，發(fā)生二硫鍵不正確交聯(lián)，能夠產(chǎn)生與天然蛋白質(zhì)的立體構(gòu)型不同的蛋白質(zhì)。這種二硫鍵的不正確交聯(lián)能夠在分子內(nèi)或者分子間發(fā)生。因此，當(dāng)混有多種不同的夾雜物時(shí)，能夠和這些污染物之間形成二硫鍵，產(chǎn)生新型物質(zhì)。將這種錯誤的二硫鍵交聯(lián)稱為“錯誤交聯(lián)”。一旦通過錯誤交聯(lián)形成了新型物質(zhì)，去除這種物質(zhì)是非常困難和麻煩的。這種新型物質(zhì)通過表現(xiàn)出新的抗原性和其他原因等，可能引起用藥患者發(fā)生過敏反應(yīng)等的副作用。根據(jù)本發(fā)明的第2方法，能夠有效的抑制由于堿性化而產(chǎn)生的人血清白蛋白分子內(nèi)或者分子間的錯誤交聯(lián)，可以制造更高純度的人血清白蛋白。
在本發(fā)明中所使用的人血清白蛋白多聚體的來源沒有特別的限制，血漿來源的HSA或者根據(jù)基因重組技術(shù)生產(chǎn)得到的HSA(以下稱之為“rHSA”)的衍生物都可以提供進(jìn)行堿性化處理。以下，將HSA以及rHSA的多聚體均稱之為“多聚體”。
進(jìn)行血漿來源的HSA制造的時(shí)候，能夠預(yù)測到在制造的各個步驟中生成的多聚體的量，在任何一個步驟中生產(chǎn)的含有多聚體的水溶液都可以使用。例如低溫乙醇分級分離的組分V的水溶液、將組分V提供用于進(jìn)一步純化步驟(層析法或者熱處理等)時(shí)在隨后的各個純化階段所產(chǎn)生的含有多聚體的水溶液等。
同樣也能夠使用rHSA制造時(shí)在各個制造步驟中所產(chǎn)生的含有多聚體的水溶液。例如rHSA產(chǎn)生宿主的培養(yǎng)物、這種培養(yǎng)物用于進(jìn)一步制造步驟(層析、熱處理等)，在任何生產(chǎn)步驟中生產(chǎn)的含有多聚體的水溶液等。在這里所說的培養(yǎng)物指的是培養(yǎng)上述宿主的培養(yǎng)液以及按照通常使用的方法將宿主破碎得到的含有宿主破碎液的物質(zhì)。
作為rHSA生產(chǎn)所使用的宿主，只要是能夠生產(chǎn)rHSA的宿主，沒有特殊的限制。例如可以使用酵母、細(xì)菌、動物細(xì)胞、植物細(xì)胞等，其中較好的是酵母。
在制造過程中，用堿性溶液處理HSA或者rHSA中含有的多聚體時(shí)的HSA或者rHSA的濃度，只要是能夠溶解HSA或者rHSA的濃度，沒有特殊限制，其中較佳的是100mg/mL以下的濃度。
HSA或者rHSA的多聚體進(jìn)行單體化時(shí)的堿性溶液的pH較佳的是8～11，更佳的是8.5～9.5，最佳的是9.0。
堿性處理液中使pH堿性化時(shí)所使用的化學(xué)物質(zhì)沒有特殊的限定。例如堿性有機(jī)化合物、堿性無機(jī)化合物，具體指的是氨、氨鹽、堿性金屬的氫氧化物(例如氫氧化鈉、氫氧化鉀)、硼酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、三羥氨基甲烷以及由上述2種以上的混合物組成的組中選用的物質(zhì)。
所加入的化學(xué)物質(zhì)，根據(jù)含有多聚體水溶液的濃度不同而有所差異，在使HSA或者rHSA不發(fā)生變性的范圍內(nèi)使用。
在人血清白蛋白的多聚體的單體化時(shí)，將含有多聚體的水溶液進(jìn)行堿性化后，所定的放置時(shí)間較好是15分鐘以上，更好是3小時(shí)以上。放置時(shí)間的上限沒有特殊限定。
進(jìn)行堿性處理的溫度，在使HSA或者rHSA不發(fā)生變性的溫度以下即可。例如0～65℃、較好是10～40℃、更好是在室溫(約25℃)。
作為堿性溶液處理時(shí)HSA或者rHSA的溶液中存在的含有SH基的化合物，只要是含有SH基官能團(tuán)的化合物即可，沒有特殊的限制。優(yōu)選含有SH基的低分子量的化合物。具體指的是半胱氨酸、巰乙胺、胱胺和蛋氨酸等。優(yōu)選采用半胱氨酸。對1～100mg/mL的HSA或者rHSA濃度，添加含有SH基化合物以達(dá)到終濃度為0.1～50mM較好，達(dá)到0.2～15mM更好，達(dá)到0.5～5mM最好。
在應(yīng)用基因重組技術(shù)的制造中，將分泌這種rHSA的宿主培養(yǎng)液或者這種rHSA產(chǎn)生宿主破碎后直接將破碎物進(jìn)行低速離心分離后，通過陽離子交換、陰離子交換、凝膠過濾、鹽析、螯合層析、疏水性層析以及吸附層析等多種純化方法以及這些方法的組合等進(jìn)行高純度產(chǎn)品的制備。
此外，血漿來源的HSA例如人來源的血漿進(jìn)行低溫乙醇分級分離，得到含有含量約90％的HSA的組分V后，利用前述的純化方法進(jìn)行純化。低溫乙醇分級分離前，可以進(jìn)行熱處理以防止蛋白水解酶的降解作用。
本發(fā)明第1方法，可以用于前述的HSA或者rHSA的制造過程中的任何步驟。用在pH5以下的條件下進(jìn)行人血清白蛋白溶液處理步驟較好，例如能夠有效的用于陽離子交換層析、陰離子交換層析后所生成的多聚體的單體化。
本發(fā)明的第2方法，可以用于前述的HSA或者rHSA的制造過程中的任何步驟。用于pH5以下的條件下進(jìn)行血清白蛋白溶液的處理步驟較好，例如能夠有效的用于陽離子交換層析、陰離子交換層析后所生成的多聚體利用堿性溶液處理進(jìn)行單體化。
實(shí)施例調(diào)制例1制備含有多聚體的人血清白蛋白溶液根據(jù)特表平11-509525所述的方法，用酵母(Saccharomycescerevisiae)生產(chǎn)rHSA。將含有此rHSA的培養(yǎng)液用純水進(jìn)行2倍稀釋后，用醋酸水溶液調(diào)節(jié)pH為4.5。將含有50mM氯化鈉的50mM醋酸鈉緩沖液(pH4.5)加到平衡化的STREAMLINE SP柱子(AmershamPharmacia Biotech公司制造)(柱徑60cm×16cm)上。然后，用和平衡柱子時(shí)所用的緩沖液相同的緩沖液進(jìn)行洗滌，之后，用含有300mM氯化鈉的50mM的磷酸緩沖液(pH9.0)進(jìn)行洗脫，得到含有rHSA的組分。
實(shí)施例1使用硼酸鹽進(jìn)行rHSA多聚體的單體化按照調(diào)制例1的方法進(jìn)行制備，將含有14.90％的多聚體的rHSA的10％水溶液(10ml)中添加5％(W/V)的四硼酸二鉀溶液(15ml)，調(diào)整終濃度為3％(pH大約為9.0)。之后，在室溫放置3小時(shí)，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔進(jìn)行樣本收集，將樣本加到配有預(yù)先用0.1M KH2PO4/0.3MNaCl緩沖液平衡化的TSKgel 300SW(Tosoh公司制備)的凝膠過濾柱的高效液相色譜上。根據(jù)其分析結(jié)果，計(jì)算出所用溶液中的白蛋白多聚體的含量。經(jīng)3個小時(shí)的堿性化處理，多聚體向單體轉(zhuǎn)換，經(jīng)確認(rèn)得到了良好的rHSA多聚體的單體化效果(表1)。
表1

實(shí)施例2采用0.5M的氫氧化鈉進(jìn)行rHSA多聚體的單體化按照調(diào)制例1的方法進(jìn)行制備，將含有26.10％的多聚體的rHSA的10％水溶液(50ml)中添加0.5M的氫氧化鈉溶液(2.8ml)，調(diào)整pH為9。之后，在室溫放置5小時(shí)，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔進(jìn)行樣本收集，將樣本加到配有預(yù)先用0.1M KH2PO4/0.3M NaCl緩沖液平衡化的TSKgel G300 SW(Tosoh公司制備)的凝膠過濾柱的高效液相色譜上。根據(jù)其分析結(jié)果，計(jì)算出所用溶液的白蛋白多聚體的含量。經(jīng)5個小時(shí)的堿性化處理，多聚體向單體轉(zhuǎn)換，經(jīng)確認(rèn)得到了良好的rHSA多聚體的單體化效果(表2)。
表2

實(shí)施例3向按照調(diào)制例1的方法進(jìn)行制備得到的含有rHSA組分50ml中添加半胱氨酸至其終濃度為0～15mM，之后，再向其中添加0.5N的氫氧化鈉溶液(2.8ml)，調(diào)整pH為9.0。之后，在室溫放置5小時(shí)。然后向該溶液中添加醋酸水溶液，調(diào)整pH為7.0，結(jié)束堿性溶液處理。根據(jù)常規(guī)方法，在進(jìn)行該溶液的SDS-PAGE(10-20％梯度凝膠)之后，進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。用羊抗-人血清白蛋白作為第一抗體，用抗羊IgG-HRP偶聯(lián)物作為第二抗體，根據(jù)化學(xué)發(fā)光使其發(fā)色轉(zhuǎn)移顯影至膜上。圖1顯示的是以未添加半胱氨酸的堿性溶液處理前后的蛋白質(zhì)印跡分析的結(jié)果。檢測到用堿性溶液處理后的試驗(yàn)材料②形成由于分子內(nèi)錯誤交聯(lián)分子量約為68000的rHSA。添加各種濃度的半胱氨酸，用堿性溶液進(jìn)行處理，將條帶進(jìn)行考馬斯染色，以解析軟件(Collage Ver.3)測定各個條帶的濃度。結(jié)果如圖3所示。各個數(shù)值是相對未添加半胱氨酸時(shí)的條帶的濃度為100％的相對值。
表3

可以看到由于在進(jìn)行堿性化處理時(shí)有半胱氨酸存在，結(jié)果能夠有效的抑制人血清白蛋白的分子內(nèi)錯誤交聯(lián)。
如果根據(jù)本發(fā)明的第1方法，在人血清白蛋白的制造過程中，將在以前的技術(shù)中去除并且廢棄的人血清白蛋白多聚體以非常簡單、低成本的方法實(shí)施堿性溶液處理法，有效的將其轉(zhuǎn)變?yōu)閱误w。其結(jié)果，能夠提供制劑中多聚體的量少于用以前的技術(shù)所得到的，安全性高的人血清白蛋白制劑。
此外，如果根據(jù)本發(fā)明的第1方法，只用堿處理即可將人血清白蛋白的多聚體向單體轉(zhuǎn)換進(jìn)而回收，因此不會造成在從前的方法中由于排除了多聚體而造成的人血清白蛋白的損失，能夠高效率的進(jìn)行人血清白蛋白單體的回收。因此，本發(fā)明的方法有可能在人血清白蛋白的制造時(shí)大幅度的減少成本。
如果根據(jù)本發(fā)明的第2方法，血漿中的HSA或者應(yīng)用基因重組技術(shù)得到的rHSA制造工藝的氧化環(huán)境下，能夠特異并有效的降低生產(chǎn)的人血清白蛋白的分子內(nèi)或者分子間的錯誤交聯(lián)。
此外，根據(jù)本發(fā)明，能夠得到減少了由于錯誤交聯(lián)生成的作為人體給藥時(shí)產(chǎn)生過敏反應(yīng)等副作用的原因的新型物質(zhì)的高純度的人血清白蛋白。
權(quán)利要求
1.一種方法，是在用堿性溶液處理人血清白蛋白的多聚體使之單體化時(shí)，作為抑制人血清白蛋白錯誤交聯(lián)的方法，其特征在于，在含有SH基化合物存在下，用堿性溶液處理該人血清白蛋白溶液。
2.權(quán)利要求1中所記載的方法，其中含有SH基化合物的濃度為0.1～50mM。
3.權(quán)利要求2中所記載的方法，其中含有SH基化合物的濃度為0.2～15mM。
4.權(quán)利要求3中所記載的方法，其中含有SH基化合物的濃度為0.5～5mM。
5.權(quán)利要求1至4中任何一項(xiàng)所記載的方法，其中含有SH基化合物為低分子化合物。
6.權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)所記載的方法，其中含有SH基化合物選自半胱氨酸、巰乙胺、胱胺和蛋氨酸。
7.權(quán)利要求1至6中任何一項(xiàng)所記載的方法，其中人血清白蛋白是根據(jù)基因重組技術(shù)生產(chǎn)的重組人血清白蛋白。
8.權(quán)利要求7中記載的方法，其中堿性溶液的pH值為8～11。
9.權(quán)利要求8中記載的方法，其中堿性溶液的pH值為8.5～9.5。
10.權(quán)利要求9中記載的方法，其中堿性溶液的pH值為9.0。
11.權(quán)利要求1至10任何一項(xiàng)中記載的方法，其中堿性溶液處理時(shí)間為15分鐘以上。
12.權(quán)利要求11中記載的方法，其中堿性溶液處理時(shí)間為2～8小時(shí)。
13.權(quán)利要求12中記載的方法，其中堿性溶液處理時(shí)間為3～4小時(shí)。
14.權(quán)利要求1至13任何一項(xiàng)中記載的方法，其中堿性溶液處理在0～65℃進(jìn)行。
15.權(quán)利要求14中記載的方法，其中堿性溶液處理在室溫進(jìn)行。
16.權(quán)利要求1至15任何一項(xiàng)中記載的方法，其中堿性溶液由選自堿性有機(jī)化合物或堿性無機(jī)化合物的物質(zhì)制備而成。
17.權(quán)利要求1至16任何一項(xiàng)中記載的方法，其中堿性溶液由選自氨、氨鹽、堿性金屬的氫氧化物、硼酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、三羥氨基甲烷以及上述2種以上的混合物的物質(zhì)制備而成。
18.權(quán)利要求1至17任何一項(xiàng)中記載的方法，其中堿性溶液由選自氨、氫氧化鈉、氫氧化鉀、硼酸、硼酸鹽、三羥氨基甲烷以及上述2種以上的混合物的物質(zhì)制備而成。
全文摘要
一種用堿性溶液處理人血清白蛋白多聚體，使人血清白蛋白多聚體單體化的方法。根據(jù)本方法，能夠非常簡便、低價(jià)、有效的將人血清白蛋白多聚體轉(zhuǎn)變成單體。作為用堿性溶液處理人血清白蛋白多聚體使之單體化時(shí)抑制人血清白蛋白的錯誤交聯(lián)的方法是一種以將該人血清白蛋白溶液在含有巰基SH基團(tuán)化合物存在下，進(jìn)行堿性溶液處理。根據(jù)本方法，能夠在進(jìn)行血漿中的HSA或者應(yīng)用基因重組技術(shù)獲得rHSA的制造環(huán)節(jié)的氧化環(huán)境下，特異并且有效的抑制血清白蛋白的分子內(nèi)或者分子間發(fā)生錯誤交聯(lián)。減少作為進(jìn)行人體給藥時(shí)可能引發(fā)過敏等副作用的原因的由于錯誤交聯(lián)所生成新型物質(zhì)的量，進(jìn)而得到高純度的人血清白蛋白。
文檔編號C07K14/435GK1651462SQ20041010006
公開日2005年8月10日 申請日期2001年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月24日
發(fā)明者野內(nèi)俊伸, 溝上寬, 田島義高, 橫手公幸, 足達(dá)聰, 宮津嘉信, 田邊哲朗, 牛尾義高, 柴田伸一 申請人:財(cái)團(tuán)法人化學(xué)及血清療法研究所