專利名稱：組蛋白脫乙?；敢种苿┑闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制組蛋白脫乙?；?deacetylase)。本發(fā)明更具體涉及抑制組蛋白脫乙酰化酶活性的化合物和方法。
背景技術(shù)：
在真核細(xì)胞中，細(xì)胞核DNA與組蛋白結(jié)合以形成稱為染色質(zhì)的緊密復(fù)合物。組蛋白構(gòu)成了在真核生物物種之間通常高度保守的堿性蛋白家族。稱為H2A、H2B、H3和H4的核心組蛋白結(jié)合以形成蛋白核心。DNA沿著該蛋白核心纏繞，同時(shí)組蛋白的堿性氨基酸與DNA的帶負(fù)電荷的磷酸根基團(tuán)相互作用。約有146個(gè)DNA的堿基對(duì)沿著組蛋白核心纏繞，以構(gòu)成核小體顆?！旧|(zhì)的重復(fù)結(jié)構(gòu)基元。
Csordas，Biochem.J.，28623-38(1990)提出，組蛋白發(fā)生N-末端賴氨酸殘基的α，ε-氨基的翻譯后乙酰化，這是被組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT1)催化的反應(yīng)。乙?；泻土速嚢彼醾?cè)鏈的正電荷，并且據(jù)信會(huì)影響染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。Taunton等人，Science，272408-411(1996)提出，轉(zhuǎn)錄因子到達(dá)染色質(zhì)模板的路徑被組蛋白高度乙?；鰪?qiáng)。Taunton等人還指出，在基因組的轉(zhuǎn)錄沉默區(qū)域中發(fā)現(xiàn)了富集的乙?；M蛋白H4。
組蛋白乙?；强赡嫘揎棧渲忻撘阴；怯煞Q為組蛋白脫乙?；?HDAC)的一族酶催化的。Grozinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，964868-4873(1999)中提出HDAC分為兩類，第一類由酵母Rpd3-樣蛋白代表，第二類由酵母Hda1-樣蛋白代表。Grozinger等人還提出，人HDAC1、HDAC2和HDAC3蛋白是第一類HDAC的成員，并且公開了稱為HDAC4、HDAC5和HDAC6的新蛋白，它們是第二類HDAC的成員。Kao等人，Genes & Dev.，1455-66(2000)公開了HDAC7-第二類HDAC的一個(gè)新成員。Van den Wyngaert，F(xiàn)EBS，47877-83(2000)公開了HDAC8第一類HDAC的一個(gè)新成員。
Richon等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，953003-3007(1998)公開了HDAC活性被曲古抑菌素A(TSA)—一種從吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)中分離的天然產(chǎn)物和合成化合物辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)抑制。Yoshida和Beppu，Exper.Cell Res.，177122-131(1988)指出，TSA在細(xì)胞周期的G1和G2期引起大鼠成纖維細(xì)胞的停滯，這意味著HDAC在細(xì)胞周期中具有調(diào)控作用。Finnin等人，Nature，401188-193(1999)提出，TSA和SAHA抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)末端分化，并防止在小鼠中形成腫瘤。Suzuki等人，U.S.專利6,174,905、EP 0847992、JP 258863/96和第10138957號(hào)日本專利申請(qǐng)公開了誘導(dǎo)細(xì)胞分化和抑制HDAC的苯甲酰胺衍生物。Delorme等人，WO01/38322和PCT IB01/00683公開了起HDAC抑制劑作用的另外一些化合物。
編碼具有HDAC活性的蛋白的基因序列的分子克隆已確立了存在一組離散的HDAC酶同種型。Grozinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，964868-4873(1999)中提出HDAC分為兩類，第一類由酵母Rpd3-樣蛋白代表，第二類由酵母Hda1-樣蛋白代表。Grozinger等人還提出，人HDAC1、HDAC2和HDAC3蛋白是第一類HDAC的成員，并且公開了稱為HDAC4、HDAC5和HDAC6的新蛋白，它們是第二類HDAC的成員。Kao等人，Gene & Development，1455-66(2000)公開了稱為HDAC-7的第二類的另一個(gè)成員。最近，Hu，E.等人.J.Bio.Chem.27515254-13264(2000)公開了第一類組蛋白脫乙?；傅囊粋€(gè)最新成員HDAC-8。尚不清楚這些HDAC酶起什么作用。
這些發(fā)現(xiàn)表明，抑制HDAC活性是干預(yù)細(xì)胞周期調(diào)控的一種新方法，并且HDAC抑制劑在細(xì)胞增殖性疾病或病癥的治療中有著很大的治療潛力。迄今為止，本領(lǐng)域中已知的組蛋白脫乙?；敢种苿┖苌?。因此需要確定出另外的HDAC抑制劑和確定出有效HDAC抑制活性所需的結(jié)構(gòu)特征。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了治療細(xì)胞增殖性疾病的化合物和方法。本發(fā)明提供了組蛋白脫乙酰化酶活性的新抑制劑。
在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了可用作組蛋白脫乙?；敢种苿┑幕衔?。
在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了組合物，其中包含本發(fā)明組蛋白脫乙酰化酶抑制劑和可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了抑制細(xì)胞中組蛋白脫乙酰化酶的方法，包括將需要抑制組蛋白脫乙?；傅募?xì)胞與本發(fā)明組蛋白脫乙酰化酶抑制劑接觸。
上面僅僅總結(jié)了本發(fā)明的一些方面，其在性質(zhì)上不是限制性的。下面更充分地描述這些方面和其它方面以及實(shí)施方案。
附圖簡(jiǎn)單說明

圖1是表明化合物106在HCT 116人結(jié)腸直腸腫瘤模型中的抗腫瘤活性的圖。
圖2-11顯示了關(guān)于在測(cè)定實(shí)施例2中描述的體內(nèi)試驗(yàn)中使用的其它化合物的另外數(shù)據(jù)。
優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述本發(fā)明提供了抑制組蛋白脫乙?；富钚缘幕衔锖头椒?。本發(fā)明還提供了用于治療細(xì)胞增殖性疾病和病癥的組合物和方法。本文中引用的專利和科學(xué)文獻(xiàn)建立了本領(lǐng)域技術(shù)人員可以獲得的知識(shí)。在本文中引用的公布的專利、申請(qǐng)和參考文獻(xiàn)以同樣的程度在此引入作為參考，即每個(gè)特定且單獨(dú)在此引入作為參考。當(dāng)不一致時(shí)，本申請(qǐng)公開內(nèi)容將占優(yōu)勢(shì)。
對(duì)于本發(fā)明目的，使用下列定義(除非另有說明)本文所用術(shù)語“組蛋白脫乙?；浮焙汀癏DAC”是指能將乙?；鶑脑诮M蛋白的N-末端的賴氨酸殘基的α，ε-氨基上除去的酶家族的任一個(gè)成員。除非在上下文中另有說明，術(shù)語“組蛋白”是指得自任何物種的任何組蛋白，包括H1、H2A、H2B、H3、H4和H5。優(yōu)選的組蛋白脫乙酰化酶包括I類和II類酶。組蛋白脫乙?；竷?yōu)選為人HDAC，包括但不限于HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC-7和HDAC-8。在某些其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，組蛋白脫乙?；傅米栽鷦?dòng)物或真菌來源。
術(shù)語“組蛋白脫乙?；敢种苿焙汀敖M蛋白脫乙?；傅囊种苿笔侵妇哂斜疚乃x結(jié)構(gòu)的化合物，其能夠與組蛋白脫乙?；赶嗷プ饔貌⑶乙种平M蛋白脫乙?；傅拿富钚??！耙种平M蛋白脫乙?；富钚浴笔侵附档徒M蛋白脫乙?；笇⒁阴；鶑慕M蛋白上除去的能力。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，組蛋白脫乙酰化酶活性被降低了至少約50％，更優(yōu)選至少約75％，還更優(yōu)選至少約90％。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，組蛋白脫乙?；富钚员唤档土酥辽?5％，更優(yōu)選至少99％。
優(yōu)選地，這樣的抑制是特異性的，也就是說，組蛋白脫乙?；敢种苿┙档徒M蛋白脫乙?；笇⒁阴；鶑慕M蛋白上除去的能力的濃度，低于產(chǎn)生另一不相關(guān)生物作用所需的抑制劑濃度。優(yōu)選地，組蛋白脫乙?；敢种苹钚运璧囊种苿舛缺犬a(chǎn)生不相關(guān)生物作用所需的濃度低至少2倍，更優(yōu)選低至少5倍，甚至更優(yōu)選低至少10倍，最優(yōu)選低至少20倍。
簡(jiǎn)單起見，在本文中，化學(xué)基團(tuán)部分主要定義為和稱為單價(jià)化學(xué)基團(tuán)部分(例如烷基、芳基等)。然而，在合適的結(jié)構(gòu)情況下，還使用這樣的術(shù)語來表示本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚的相應(yīng)的多價(jià)基團(tuán)部分。例如，雖然“烷基”部分通常是指單價(jià)基團(tuán)(例如CH3-CH2-)，但是在一些情況下，二價(jià)連接基團(tuán)部分可以是“烷基”，在這種情況下本領(lǐng)域技術(shù)人員知道烷基是二價(jià)基團(tuán)(例如-CH2-CH2-)，其等同于術(shù)語“亞烷基”(類似地，在其中需要二價(jià)基團(tuán)并且其被表述為“芳基”的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員知道術(shù)語“芳基”是指相應(yīng)的二價(jià)基團(tuán)部分，即亞芳基)。應(yīng)當(dāng)理解，所有原子都具有關(guān)于形成鍵的其標(biāo)準(zhǔn)價(jià)數(shù)(即，對(duì)于碳是4，對(duì)于N是3，對(duì)于O是2，對(duì)于S，根據(jù)硫的氧化態(tài)是2、4或6)。有時(shí)基團(tuán)部分被定義為例如(A)a-B-，其中a是0或1。在這樣的情況下，當(dāng)a是0時(shí)，該基團(tuán)部分是B-，當(dāng)a是1時(shí)，該基團(tuán)部分是A-B-。很多本文公開的基團(tuán)部分以多個(gè)互變異構(gòu)形式存在，所有它們都包括在任何給定的互變異構(gòu)結(jié)構(gòu)范圍內(nèi)。
術(shù)語“烴基”是指直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、鏈烯基或炔基，所述基團(tuán)分別如本文所定義?！癈0”烴基是用于指共價(jià)鍵。因此，“C0-C3-烴基”包括共價(jià)鍵、甲基、乙基、丙基和環(huán)丙基。
本文所用術(shù)語“烷基”是指具有1-12個(gè)碳原子，優(yōu)選1-8個(gè)碳原子，更優(yōu)選1-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈脂族基團(tuán)，所述基團(tuán)可任選被1、2或3個(gè)取代基取代。優(yōu)選的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基?！癈0”烷基(例如在“C0-C3-烷基”中)是共價(jià)鍵(象“C0”烴基一樣)。
本文所用術(shù)語“鏈烯基”是指具有一個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵，有2-12個(gè)碳原子，優(yōu)選2-8個(gè)碳原子，更優(yōu)選2-6個(gè)碳原子的不飽和直鏈或支鏈脂族基團(tuán)，所述基團(tuán)可任選被1、2或3個(gè)取代基取代。優(yōu)選的鏈烯基包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基和己烯基。
本文所用術(shù)語“炔基”是指具有一個(gè)或多個(gè)碳-碳三鍵，有2-12個(gè)碳原子，優(yōu)選2-8個(gè)碳原子，更優(yōu)選2-6個(gè)碳原子的不飽和直鏈或支鏈脂族基團(tuán)，所述基團(tuán)可任選被1、2或3個(gè)取代基取代。優(yōu)選的炔基包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。
“亞烷基”、“亞鏈烯基”或“亞炔基”是如上所定義的烷基、鏈烯基或炔基，其位于兩個(gè)其它化學(xué)基團(tuán)之間并連接這兩個(gè)化學(xué)基團(tuán)。優(yōu)選的亞烷基包括但不限于亞甲基、亞乙基、亞丙基和亞丁基。優(yōu)選的亞鏈烯基包括但不限于亞乙烯基、亞丙烯基和亞丁烯基。優(yōu)選的亞炔基包括但不限于亞乙炔基、亞丙炔基和亞丁炔基。
本文所用術(shù)語“環(huán)烷基”包括具有3-12個(gè)碳原子，優(yōu)選3-8個(gè)碳原子，更優(yōu)選3-6個(gè)碳原子的飽和及部分不飽和環(huán)狀烴基，其中所述環(huán)烷基還可以任選被取代。優(yōu)選的環(huán)烷基包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。
術(shù)語“雜烷基”是指如上所定義的烷基，其中鏈中有一個(gè)或多個(gè)碳原子被選自O(shè)、S和N的雜原子代替。
“芳基”是包含1-3個(gè)芳環(huán)的C6-C14芳族基團(tuán)，所述基團(tuán)可任選被取代。芳基優(yōu)選為C6-C10芳基。優(yōu)選的芳基包括但不限于苯基、萘基、蒽基和芴基?！胺纪榛被颉胺蓟榛卑ü矁r(jià)連接在烷基上的芳基，二者中任一個(gè)可獨(dú)立地任選被取代或者未取代。芳烷基優(yōu)選為(C1-C6)烷(C6-C10)芳基，包括但不限于芐基、苯乙基和萘基甲基。
“雜環(huán)基”或“雜環(huán)基團(tuán)”是具有約3-約8個(gè)原子，其中一個(gè)或多個(gè)原子選自N、O和S的環(huán)結(jié)構(gòu)。雜環(huán)基可任選在一個(gè)或多個(gè)位置上在碳上被取代。雜環(huán)基還獨(dú)立地任選在氮上被烷基、芳基、芳烷基、烷基羰基、烷基磺?；⒎蓟驶?、芳基磺?；?、烷氧基羰基、芳烷氧基羰基取代，或者在硫上被氧代基或低級(jí)烷基取代。優(yōu)選的雜環(huán)基包括但不限于環(huán)氧基、氮雜環(huán)丙烯基、四氫呋喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、噻唑烷基、惡唑烷基、惡唑烷酮基和嗎啉代。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，雜環(huán)基與芳基、雜芳基或環(huán)烷基稠合。這樣的稠合雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于四氫喹啉和二氫苯并呋喃。從該術(shù)語范圍內(nèi)具體排除的是具有相鄰環(huán)O和/或S原子的化合物。
本文所用術(shù)語“雜芳基”是指這樣的基團(tuán)，其具有5-14個(gè)環(huán)原子，優(yōu)選具有5、6、9或10個(gè)環(huán)原子；具有6、10或14個(gè)在環(huán)排列中共享的π電子；并且除了碳原子以外，每個(gè)環(huán)具有1-3個(gè)選自N、O和S的雜原子?！半s芳烷基”或“雜芳基烷基”包括共價(jià)連接在烷基上的雜芳基，二者中任一個(gè)可獨(dú)立地任選被取代或者未取代。優(yōu)選的雜烷基包括C1-C6烷基和具有5、6、9或10個(gè)環(huán)原子的雜芳基。從該術(shù)語范圍內(nèi)具體排除的是具有相鄰環(huán)O和/或S原子的化合物。優(yōu)選的雜芳烷基的實(shí)例包括吡啶基甲基、吡啶基乙基、吡咯基甲基、吡咯基乙基、咪唑基甲基、咪唑基乙基、噻唑基甲基和噻唑基乙基。從該術(shù)語范圍內(nèi)具體排除的是具有相鄰環(huán)O和/或S原子的化合物。
“亞芳基”、“亞雜芳基”或“亞雜環(huán)基”是如上所定義的芳基、雜芳基或雜環(huán)基，其位于兩個(gè)其它化學(xué)基團(tuán)之間并連接這兩個(gè)化學(xué)基團(tuán)。
優(yōu)選的雜環(huán)基和雜芳基包括但不限于吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻吩基、苯并惡唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并異惡唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色滿基、色烯基、噌啉基、十氫喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氫呋喃并[2，3-b]四氫呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、假吲哚基、二氫吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、異苯并呋喃基、異色滿基、異吲唑基、異二氫吲哚基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異惡唑基、亞甲二氧基苯基、嗎啉基、萘啶基、八氫異喹啉基、噁二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、惡唑烷基、惡唑基、惡唑烷基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、phenoxathiinyl、吩惡嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并惡唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環(huán)基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并惡唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基和夾氧蒽基。
如本文所用的那樣，當(dāng)基團(tuán)部分(例如環(huán)烷基、烴基、芳基、雜芳基、雜環(huán)、脲等)被表述為“任選取代的”時(shí)，這是指基團(tuán)可任選具有1-4個(gè)，優(yōu)選1-3個(gè)，更優(yōu)選1或2個(gè)非氫取代基。合適的取代基包括但不限于鹵素、羥基、氧代基(例如被氧代基取代的環(huán)-CH-是-C(O)-)、硝基、鹵代烴基、烴基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、氨基、?；被⑼榛被柞；?、芳基氨基甲酰基、氨基烷基、酰基、羧基、羥基烷基、烷磺?；?、芳烴磺?；?、烷磺酰胺基、芳烴磺酰胺基、芳烷基磺酰胺基、烷基羰基、酰氧基、氰基和脲基。自身未被進(jìn)一步取代(除非另有說明)的優(yōu)選的取代基是(a)鹵素、氰基、氧代基、羧基、甲?；?、硝基、氨基、脒基、胍基，(b)C1-C5烷基或鏈烯基或芳基烷基亞氨基、氨基甲?；B氮基、酰胺基、巰基、羥基，羥基烷基、烷基芳基、芳基烷基、C1-C8烷基、C1-C8鏈烯基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷氧基羰基、芳氧基羰基、C2-C8?；?、C2-C8?；被?、C1-C8烷硫基、芳基烷硫基、芳硫基、C1-C8烷基亞磺?；⒎蓟榛鶃喕酋；?、芳基亞磺?；?、C1-C8烷基磺?；?、芳基烷基磺?；?、芳基磺?；0-C6N-烷基氨基甲?；2-C15N，N-二烷基氨基甲酰基、C3-C7環(huán)烷基、芳酰基、芳氧基、芳基烷基醚、芳基、與環(huán)烷基或雜環(huán)或另一芳環(huán)稠合的芳基、C3-C7雜環(huán)，或與環(huán)烷基、雜環(huán)基或芳基稠合或螺稠合的任何這些環(huán)，其中每個(gè)上述基團(tuán)可任選被一個(gè)或多個(gè)在上文(a)中列出的基團(tuán)取代；和(c)-(CH2)s-NR30R31，其中s為0(在這種情況下，氮直接鍵合到被取代的基團(tuán)部分上)至6，并且R30和R31分別獨(dú)立地為氫、氰基、氧代基、酰胺基、脒基、C1-C8羥基烷基、C1-C3烷基芳基、芳基-C1-C3烷基、C1-C8烷基、C1-C8鏈烯基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳基-C1-C3烷氧基羰基、C2-C8?；?、C1-C8烷基磺?；?、芳基烷基磺?；?、芳基磺酰基、芳?；?、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基或雜芳基，其中每個(gè)上述基團(tuán)可任選被一個(gè)或多個(gè)在上文(a)中列出的基團(tuán)取代；或者R30和R31與它們所連接的N一起形成，雜環(huán)基或雜芳基，每個(gè)所述基團(tuán)可任選被1-3個(gè)在上文(a)中列出的取代基取代。
此外，在環(huán)狀基團(tuán)(即環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基)上的取代基包括5-6元單環(huán)基團(tuán)和10-12元二環(huán)基團(tuán)，它們與母環(huán)部分稠合以形成二環(huán)或三環(huán)稠合環(huán)系。例如，任選被取代的苯基包括下列基團(tuán) “鹵代烴基”是其中有一個(gè)至所有氫被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的烴基。
本文所用術(shù)語“鹵素原子”或“鹵素”是指氯、溴、氟或碘。本文所用術(shù)語“?；笔侵竿榛驶蚍蓟驶〈?。術(shù)語“?；被笔侵冈诘由线B接的酰胺基團(tuán)(即R-CO-NH-)。術(shù)語“氨基甲酰基”是指在羰基碳原子上連接的酰胺基團(tuán)(即NH2-CO-)。酰基氨基或氨基甲?；牡右部梢员蝗〈Ｐg(shù)語“磺酰胺基”是指通過硫原子或氮原子連接的磺酰胺基團(tuán)。術(shù)語“氨基”包括NH2、烷基氨基、芳基氨基和環(huán)狀氨基。本文所用術(shù)語“脲基”是指取代或未取代的脲基團(tuán)。
本文所用術(shù)語“基團(tuán)”是指包含一個(gè)或多個(gè)未成對(duì)電子的化學(xué)基團(tuán)。
被取代的基團(tuán)部分是其中有一個(gè)或多個(gè)氫獨(dú)立地被另一化學(xué)取代基取代的基團(tuán)。作為非限制性實(shí)例，取代的苯基包括2-氟苯基、3，4-二氯苯基、3-氯-4-氟-苯基、2-氟-3-丙基苯基。作為另一非限制性實(shí)例，取代的正辛基包括2，4-二甲基-5-乙基-辛基和3-環(huán)戊基-辛基。包括在該定義內(nèi)的是被氧取代以形成羰基(-CO-)的亞甲基(-CH2-)。
如上所定義的“未取代”(例如未取代的環(huán)烷基、未取代的雜芳基等)是指不具有該基團(tuán)的定義(上文)所提供的任何任選取代基的如上所定義的基團(tuán)。因此，例如，“芳基”包括苯基和被鹵素取代的苯基，“未取代的芳基”不包括被鹵素取代的苯基。
特定種類本發(fā)明化合物的優(yōu)選實(shí)施方案包括優(yōu)選實(shí)施方案的組合。例如，段落 確定了優(yōu)選的Ay1，段落 確定了優(yōu)選的Ar1(二者都是關(guān)于段落 的化合物(1))。因此，另一優(yōu)選的實(shí)施方案包括段落 中的式(1)化合物，其中Ay1如段落 中所定義，Ar1如段落 中所定義。
化合物 在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了新的組蛋白脫乙?；敢种苿?。在第一個(gè)實(shí)施方案中，新的組蛋白脫乙?；敢种苿┦鞘?1)化合物 及其可藥用鹽，其中R3和R4獨(dú)立地選自氫、L1、Cy1和-L1-Cy1，其中L1是C1-C6烷基、C2-C6雜烷基或C3-C6鏈烯基；且Cy1是環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，每一所述基團(tuán)可任選被取代，并且每一所述基團(tuán)可任選與一個(gè)或多個(gè)芳基或雜芳基環(huán)或者與一個(gè)或多個(gè)飽和或部分不飽和環(huán)烷基環(huán)或雜環(huán)稠合，每一所述環(huán)可任選被取代；或者R3和R4與相鄰氮原子一起形成5-、6-或7-元環(huán)，其中所述環(huán)原子獨(dú)立地選白C、O、S和N，并且其中所述環(huán)可任選被取代，和任選形成二環(huán)環(huán)系的一部分，或任選與一個(gè)或多個(gè)芳基或雜芳基環(huán)或者與一個(gè)或多個(gè)飽和或部分不飽和環(huán)烷基環(huán)或雜環(huán)稠合，每一所述環(huán)和環(huán)系可任選被取代；Y1選自-N(R1)(R2)、-CH2-C(O)-N(R1)(R2)、鹵素和氫，其中R1和R2獨(dú)立地選自氫、L1、Cy1和-L1-Cy1，其中L1是C1-C6烷基、C2-C6雜烷基或C3-C6鏈烯基；Cy1是環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，每一所述基團(tuán)可任選被取代，并且每一所述基團(tuán)可任選與一個(gè)或多個(gè)芳基或雜芳基環(huán)或者與一個(gè)或多個(gè)飽和或部分不飽和環(huán)烷基環(huán)或雜環(huán)稠合，每一所述環(huán)可任選被取代；或者R1和R2與相鄰氮原子一起形成5-、6-或7-元環(huán)，其中所述環(huán)原子獨(dú)立地選自C、O、S和N，并且其中所述環(huán)可任選被取代，和任選形成二環(huán)環(huán)系的一部分，或任選與一個(gè)或多個(gè)芳基或雜芳基環(huán)或者與一個(gè)或多個(gè)飽和或部分不飽和環(huán)烷基環(huán)或雜環(huán)稠合，每一所述環(huán)和環(huán)系可任選被取代；Y2是化學(xué)鍵或N(R0)，其中R0選自氫、烷基、芳基、芳烷基和?；籄k1是C1-C6亞烷基、C1-C6-亞雜烷基(優(yōu)選其中一個(gè)-CH2-被-NH-替代的C1-C6-亞雜烷基，更優(yōu)選-NH-CH2-)、C2-C6亞鏈烯基或C2-C6亞炔基；Ar1是亞芳基或亞雜芳基，每一所述基團(tuán)可任選被取代；且Z1選自 和 其中Ay1是芳基或雜芳基，所述基團(tuán)可任選被取代。
在依據(jù)段落 的化合物中，優(yōu)選的是，Ay1是苯基或噻吩基，每一所述基團(tuán)被-OH或-NH2取代。
在依據(jù)段落 的化合物中，更優(yōu)選的是，Ay1是任選被氨基或羥基取代的苯基或噻吩基，其中所述氨基或羥基取代基優(yōu)選在與Ay2連接的氮的鄰位。
在依據(jù)段落 的化合物中，更優(yōu)選的是，Ay1是鄰位苯胺、鄰位苯酚、3-氨基-2-噻吩基，或3-羥基-2-噻吩基及其互變異構(gòu)體。
在依據(jù)段落 的化合物的某些優(yōu)選實(shí)施方案中，Z1是 在依據(jù)段落 的化合物的某些優(yōu)選實(shí)施方案中，Ar1是亞苯基。在某些實(shí)施方案中，Ak1是亞烷基，優(yōu)選亞甲基。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，Y2是-NH-。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，Y1是-N(R1)(R2)或-CH2-C(O)-N(R1)(R2)。
在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，R1和R2分別獨(dú)立地選自氫、L1、Cy1和-L1-Cy1。在其它實(shí)施方案中，R1和/或R2是氫。在其它實(shí)施方案中，R1和/或R2是烷基或鏈烯基，優(yōu)選烯丙基。在其它實(shí)施方案中，R1和/或R2是芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基，每一所述基團(tuán)的環(huán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。某些優(yōu)選的芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基包括苯基、吡啶基或吡咯基環(huán)。在其它實(shí)施方案中，R1和/或R2是環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)戊基或環(huán)己基，所述基團(tuán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。
在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，R3和R4分別獨(dú)立地選自氫、L1、Cy1和-L1-Cy1。在其它實(shí)施方案中，R3和/或R4是氫。在其它實(shí)施方案中，R3和/或R4是烷基或鏈烯基，優(yōu)選烯丙基。在其它實(shí)施方案中，R3和/或R4是芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基，每一所述基團(tuán)的環(huán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。某些優(yōu)選的芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳烷基包括苯基、吡啶基或吡咯基環(huán)。在其它實(shí)施方案中，R3和/或R4是環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)戊基或環(huán)己基，所述基團(tuán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。
如上所述，L1是C1-C6烷基、C2-C6雜烷基或C3-C6鏈烯基。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)L1不是末端基團(tuán)時(shí)，L1是C1-C6亞烷基、C2-C6亞雜烷基或C3-C6亞鏈烯基。在某些實(shí)施方案中，L1是亞烷基，優(yōu)選亞甲基或亞乙基。在某些實(shí)施方案中，L1是鏈烯基，優(yōu)選烯丙基。在某些實(shí)施方案中，Cy1是雜環(huán)基，包括但不限于哌啶、吡咯烷、哌嗪和嗎啉，每一所述基團(tuán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。在其它實(shí)施方案中，Cy1是環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)戊基或環(huán)己基。在其它實(shí)施方案中，Cy1是芳基或雜芳基，例如苯基、吡啶基或吡咯基，每一所述基團(tuán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。在某些實(shí)施方案中，Cy1與一個(gè)或兩個(gè)苯環(huán)稠合。在某些實(shí)施方案中，Cy1具有1-約5個(gè)選自C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和鹵素的取代基。優(yōu)選的取代基的實(shí)例包括甲基、甲氧基和氟。
在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，R1和R2和/或R3和R4與相鄰氮原子一起形成5-或6-元環(huán)，其中所述環(huán)原子獨(dú)立地選自C、O和N，并且其中所述環(huán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，R1和R2和/或R3和R4與相鄰氮原子一起形成環(huán)例如吡咯烷、哌啶、哌嗪和嗎啉，其中所述環(huán)可任選被取代，并且任選與芳基環(huán)稠合。在某些實(shí)施方案中，包含R1和R2或R3和R4的環(huán)與苯環(huán)稠合。在某些實(shí)施方案中，包含R1和R2或R3和R4的環(huán)具有包含芳基或環(huán)烷基環(huán)的取代基，其中任一個(gè)可任選被取代，并任選與環(huán)烷基環(huán)、芳基環(huán)、雜芳基環(huán)或雜環(huán)稠合。優(yōu)選的取代基包括但不限于苯基、苯基甲基和苯基乙基，所述基團(tuán)的苯基環(huán)可任選與環(huán)烷基環(huán)、芳基環(huán)或雜環(huán)稠合。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明HDAC抑制劑包括式1(a)化合物 及其可藥用鹽，其中J是C1-C3-烴基、-N(R20)-、-N(R20)-CH2-、-O-或-O-CH2-；R20是-H或-Me；X和Y獨(dú)立地選自-NH2、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基和A-(C1-C6-烷基)n-B-；A是H、C1-C6-烷氧基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基；B是-NH-、-O-或一個(gè)鍵；且n是0(在這種情況下A直接鍵合到B上)或1。
在依據(jù)段落 的化合物中，優(yōu)選A是任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素(優(yōu)選氯)和甲氧基的基團(tuán)取代的苯基，且B是-NH-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，A選自環(huán)丙基、吡啶基和茚滿基。
在依據(jù)段落 的化合物中，優(yōu)選的是，J是-NH-CH2-、-O-CH2-、-N(CH3)-CH2-、-CH＝CH-或-CH2-CH2-。
在依據(jù)段落 的化合物中，R20優(yōu)選為-H。
在依據(jù)段落 的化合物中，X優(yōu)選選自 且Y優(yōu)選選自
在依據(jù)段落 的化合物的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明HDAC抑制劑包括下列式1a化合物 在第二個(gè)方面，本發(fā)明新的組蛋白脫乙?；敢种苿┦鞘?2)化合物
及其可藥用鹽，其中Cy2是環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，每一所述基團(tuán)可任選被取代，并且每一所述基團(tuán)可任選與一個(gè)或多個(gè)芳基或雜芳基環(huán)或者與一個(gè)或多個(gè)飽和或部分不飽和環(huán)烷基環(huán)或雜環(huán)稠合，每一所述環(huán)可任選被取代；X1選自共價(jià)鍵、M1-L2-M1和L2-M2-L2，其中L2在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自化學(xué)鍵、C0-C4烴基、C0-C4烴基-(NH)-C0-C4烴基、C0-C4-烴基-(S)-C0-C4-烴基和C0-C4-烴基-(O)-C0-C4-烴基，條件是當(dāng)X1是M1-L2-M1時(shí)，L2不是化學(xué)鍵；M1在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自-O-、-N(R7)-、-S-、-S(O)-，S(O)2-、-S(O)2N(R7)-、-N(R7)-S(O)2-、-C(O)-、-C(O)-NH-，-NH-C(O)-、-NH-C(O)-O-和-O-C(O)-NH-，其中R7選自氫、烷基、芳基、芳烷基、?；?、雜環(huán)基和雜芳基；且M2選自M1、亞雜芳基和亞雜環(huán)基，任一所述環(huán)可任選被取代；Ar2是亞芳基或亞雜芳基，每一所述基團(tuán)可任選被取代；R5和R6獨(dú)立地選自氫、烷基、芳基和芳烷基；q是0或1；且Ay2是5-6元環(huán)烷基、雜環(huán)基或雜芳基，所述基團(tuán)被氨基或羥基取代(這些基團(tuán)優(yōu)選在與Ay2連接的酰胺氮的鄰位)，并且還任選被進(jìn)一步取代；條件是當(dāng)Cy2是萘基，X1是-CH2-，Ar2是苯基，R5和R6是H，且q是0或1時(shí)，Ay2不是苯基或鄰羥基苯基。
在依據(jù)段落 的化合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)Ay2是任選被鹵素、硝基或甲基取代的鄰苯酚，Ar2是任選取代的苯基，X1是-O-、-CH2-、-S-、-S-CH2-、-S(O)-、-S(O)2-、-C(O)-或-OCH2-時(shí)，Cy2不是任選取代的苯基或萘基。
在依據(jù)段落 的化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)Ay2是任選被鹵素、C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基或-NO2取代的鄰苯胺基，q是0，Ar2是苯基，且X1是-CH2-時(shí)，Cy2不是取代的吡啶酮(吡啶酮的取代基不限于本文描述的取代基)。
在依據(jù)段落 的化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)X1是-CH2-，Ar2是任選取代的苯基，q是1，且R6是H時(shí)，則Cy2不是任選取代的咪唑。
在依據(jù)段落 的化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)Ar2是被氨基或羥基取代的苯基，X1是C0-C8-烷基-X1a-C0-C8-烷基，其中X1a是-CH2-、-O-、-S-、-NH-、-C(O)-時(shí)，Cy2不是任選取代的萘基或二氫萘或四氫萘。
在依據(jù)段落 的化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)Ay2是鄰苯酚，Ar2是取代的苯基，X1是-O-、-S-、-CH2-、-O-CH2-、-S-CH2-或-C(O)-，且R5和R6是H時(shí)，Cy2不是任選取代的萘基。
在依據(jù)段落 的化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)Ay2是鄰苯胺基，q是0，Ar2是未取代的苯基，X1是-CH2-時(shí)，Cy2不是取代的6-氫咪唑并[5，4-d]噠嗪-7-酮-1-基或取代的6-氫咪唑并[5，4-d]噠嗪-7-硫酮-1-基。
在依據(jù)段落 的化合物中，優(yōu)選地，Ay2是苯基或噻吩基，所述基團(tuán)分別被-OH或-NH2取代。
在依據(jù)段落 的化合物中，更優(yōu)選地，Ay2是任選被氨基或羥基取代的苯基或噻吩基，其中所述氨基或羥基優(yōu)選在與Ay2連接的氮的鄰位。
在依據(jù)段落 的化合物中，更優(yōu)選地，Ay2是鄰苯胺、鄰苯酚、3-氨基-2-噻吩基或3-羥基-2-噻吩基及其互變異構(gòu)體。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明新的組蛋白脫乙?；敢种苿┦且罁?jù)段落 的那些，其中q是1；M1在每次出現(xiàn)時(shí)選自-N(R7)-、-S-、-C(O)-NH-和-O-C(O)-NH-，其中R7選自氫、烷基、芳基、芳烷基和?；磺褹y2是任選取代的苯胺基。
在依據(jù)段落 的化合物的某些優(yōu)選實(shí)施方案中，Ay2的-NH2在與Ay2連接的氮原子的鄰位。在某些實(shí)施方案中，R5和R6獨(dú)立地選自氫和C1-C4烷基。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，R5和R6是氫。
在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，Ar2具有下式
或 其中G在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為N或C，并且C可任選被取代。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，Ar2具有下式 或 在依據(jù)段落 的化合物的某些優(yōu)選實(shí)施方案中，Ar2選自亞苯基、亞吡啶基、亞嘧啶基和亞喹啉基。
在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，X1是化學(xué)鍵。在某些實(shí)施方案中，X1是L2-M2-L2，且M2選自-NH-、-N(CH3)-、-S-、-C(O)-N(H)-和-O-C(O)-N(H)-。在某些實(shí)施方案中，X1是L2-M2-L2，其中至少一個(gè)出現(xiàn)的L2為化學(xué)鍵。在其它實(shí)施方案中，X1是L2-M2-L2，其中至少一個(gè)出現(xiàn)的L2為亞烷基，優(yōu)選亞甲基。在其它實(shí)施方案中，X1是L2-M2-L2，其中至少一個(gè)出現(xiàn)的L2為亞鏈烯基。在某些實(shí)施方案中，X1是M1-L2-M1，且M1選自-NH-、-N(CH3)-、-S-和-C(O)-N(H)-。
在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，Cy2是芳基或雜芳基，例如苯基、吡啶基、咪唑基或喹啉基，每一所述基團(tuán)可任選被取代。在其它實(shí)施方案中，Cy2是雜環(huán)基例如 和 每一所述基團(tuán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。在某些實(shí)施方案中，Cy2具有1-3個(gè)獨(dú)立地選自下列的取代基烷基、烷氧基、氨基、硝基、鹵素、鹵代烷基和鹵代烷氧基。優(yōu)選的取代基的實(shí)例包括甲基、甲氧基、氟、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、氨基、氨基甲基和羥基甲基。
在依據(jù)段落 的化合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括式(2a)化合物
及其可藥用鹽，其中Ara是苯基或噻吩基；R6是H或C1-C6-烷基(優(yōu)選-CH3)；Y和Z獨(dú)立地為-CH＝或-N＝；W是鹵素、(V’-L4)t-V-L3-；L3是一個(gè)鍵、-C1-C6-烴基、-(C1-C3-烴基)m1-X’-(C1-C3-烴基)m2、-NH-(C0-C3-烴基)、(C1-C3-烴基)-NH-或-NH-(C1-C3-烴基)-NH-；m1和m2獨(dú)立地為0或1；X’是-N(R21)-、-C(O)N(R21)-、N(R21)C(O)-、-O-或-S-；R21是-H、V”-(C1-C6-烴基)c；L4是(C1-C6-烴基)a-M-(C1-C6-烴基)b；a和b獨(dú)立地為0或1；M是-NH-、-NHC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)-、-SO2-、-NHSO2-或-SO2NH-；V、V’和V”獨(dú)立地選自環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基；t是0或1；或者，W、其所鍵合的環(huán)C以及Y一起形成單環(huán)環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基；且其中A和Ara環(huán)可任選被1-3個(gè)獨(dú)立地選自甲基、羥基，甲氧基、鹵素和氨基的取代基進(jìn)一步取代。
在依據(jù)段落 的化合物的優(yōu)選實(shí)施方案中Y和Z是-CH＝，且R6是H；W是V-L3；L3是-NH-CH-或-CH-NH-；V是苯基，所述苯基可任選被1-3個(gè)獨(dú)立地選自下列的基團(tuán)取代鹵素、羥基、C1-C6-烴基、C1-C6-烴氧基或烴硫基(特別是甲氧基或甲硫基)，其中每一所述烴基可任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、亞硝基、氨基、磺酰胺基和氰基的基團(tuán)取代；且Ara是苯基，并且與其鍵合的氨基彼此呈鄰位關(guān)系。
在依據(jù)段落 的化合物的某些優(yōu)選實(shí)施方案中，V是任選取代的選自下列的環(huán)基團(tuán) 在依據(jù)段落 的化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，W選自
在依據(jù)段落 的化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，A和Ara環(huán)沒有被進(jìn)一步取代。
在依據(jù)段落 的化合物的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物選自下列化合物，其中除非另有說明，Ara是苯基(并且優(yōu)選地，鍵合在Ara上的酰胺氮與氨基氮彼此呈鄰位關(guān)系)


在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包括式(2b)化合物 及其可藥用鹽，其中Ay2是苯基或噻吩基，每一所述基團(tuán)在鄰位上被-NH2或-OH取代，并分別任選被1-3個(gè)獨(dú)立地選自-NH2、-OH和鹵素的取代基進(jìn)一步取代；q是0或1；X1選自-CH2-、-NH-CH2-和-S-CH2-；Cy2是單環(huán)或稠合二環(huán)芳基或雜芳基，所述基團(tuán)任選被1-3個(gè)選自下列的取代基取代CH3-、CH3O-、任選被1-3個(gè)CH3O-取代的苯基、嗎啉基、嗎啉基-C1-C3-烷氧基、氰基和CH3C(O)NH-；條件是當(dāng)Cy2是萘基，X1是-CH2-，且q是0或1時(shí)，Ay2不是鄰羥基苯基。
在依據(jù)段落 的化合物中，優(yōu)選地，Ay2選自 和 在依據(jù)段落 的化合物中，優(yōu)選地，Cy2是苯基、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、噻吩基、四氫喹唑啉基或1，3-二氫喹唑啉-2，4-二酮，每一所述基團(tuán)可任選被1-3個(gè)CH3O-取代。更優(yōu)選地，Cy2是被1-3個(gè)CH3O-取代的苯基。
在第三個(gè)實(shí)施方案中，新的組蛋白脫乙酰化酶抑制劑是式(3)化合物 及其可藥用鹽，其中Ar3是亞芳基或亞雜芳基，任一所述基團(tuán)可任選被取代；Cy3是環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，每一所述基團(tuán)可任選被取代，并且每一所述基團(tuán)可任選與一個(gè)或多個(gè)芳基或雜芳基環(huán)或者與一個(gè)或多個(gè)飽和或部分不飽和環(huán)烷基環(huán)或雜環(huán)稠合，每一所述環(huán)可任選被取代；條件是當(dāng)Cy3是在環(huán)中具有-C(O)-、-C(S)-、-S(O)-或-S(O)2-的環(huán)基團(tuán)時(shí)，Cy3不被包含芳基或雜芳基環(huán)的基團(tuán)額外取代；且
X2選自化學(xué)鍵、L3、W1-L3、L3-W1、W1-L3-W1和L3-W1-L3，其中W1在每次出現(xiàn)時(shí)為S、O或N(R9)，其中R9選自氫、烷基、芳基和芳烷基；且L3是C1-C4亞烷基、C2-C4亞鏈烯基或C2-C4亞炔基；條件是X2不包含-C(O)-、-C(S)-、-S(O)-或-S(O)2-基團(tuán)；并且條件還是當(dāng)Cy3是吡啶時(shí)，X2是L3、W1-L3或L3-W1。
優(yōu)選地，Ar3具有下列結(jié)構(gòu) 或 其中Q在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為N或C，并且C可任選被取代。
優(yōu)選地，在依據(jù)段落 的化合物中，X2選自L3、W1-L3、L3-W1、W1-L3-W1和L3-W1-L3。
優(yōu)選地，在依據(jù)段落 的化合物中，當(dāng)X2是化學(xué)鍵時(shí)，Ar3不是 或 且Cy3不是取代或未取代的二氮雜卓(diazepine)或苯并呋喃基團(tuán)。
在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，Q在每次出現(xiàn)時(shí)為C(R8)，其中R8選自氫、烷基、芳基、芳烷基、烷氧基、氨基、硝基、鹵素、鹵代烷基和鹵代烷氧基。在某些其它實(shí)施方案中，1-約3個(gè)變量Q是氮。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，Ar3選自亞苯基、亞吡啶基、亞噻唑基和亞喹啉基。
在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，X2是化學(xué)鍵。在其它實(shí)施方案中，X2是非環(huán)烴基。在某些這樣的實(shí)施方案中，X2是亞烷基，優(yōu)選亞甲基或亞乙基。在其它這樣的實(shí)施方案中，X2是亞鏈烯基或亞炔基。在其它這樣的實(shí)施方案中，烴鏈中的一個(gè)碳被-NH-或-S-代替。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，X2是W1-L3-W1，且W1是-NH-或-N(CH3)-。
在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，Cy3是環(huán)烷基，優(yōu)選環(huán)己基。在其它實(shí)施方案中，Cy3是芳基或雜芳基，例如苯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、噻唑基、噁二唑基、喹啉基或芴基，每一所述基團(tuán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。在某些實(shí)施方案中，Cy3環(huán)基團(tuán)與苯環(huán)稠合。在某些實(shí)施方案中，Cy3具有1-3個(gè)獨(dú)立地選自下列的取代基烷基、烷氧基、芳基、芳烷基、氨基、鹵素、鹵代烷基和羥基烷基。優(yōu)選的取代基的實(shí)例包括甲基、甲氧基、氟、三氟甲基、氨基、硝基、氨基甲基、羥基甲基和苯基。某些其它優(yōu)選的取代基具有式-K1-N(H)(R10)，其中K1是化學(xué)鍵或C1-C4亞烷基；R10選自Z’和-Ak2-Z’，其中Ak2是C1-C4亞烷基；且Z’是環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，每一所述基團(tuán)可任選被取代，并且每一所述基團(tuán)可任選與一個(gè)或多個(gè)芳基或雜芳基環(huán)或與一個(gè)或多個(gè)飽和或部分不飽和環(huán)烷基或雜環(huán)稠合。
優(yōu)選的依據(jù)段落 的取代基的實(shí)例包括 和 在依據(jù)段落 的化合物的某些實(shí)施方案中，Cy3是雜環(huán)基，例如 和 每一上述基團(tuán)可任選被取代，并任選與一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)稠合。在某些實(shí)施方案中，Cy3雜環(huán)與苯環(huán)稠合。
優(yōu)選地，在段落 的化合物中，當(dāng)Ar4是亞喹喔啉基時(shí)，X3不是-CH(OH)-。
在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ar3是 其中X是-CH2-、-NH-、O或S。Ar3優(yōu)選是 且X是S或O。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明新的組蛋白脫乙酰化酶抑制劑是依據(jù)段落 的那些，其中Ay2是鄰苯胺基；q是0；且X1是M1-L2-M1或L2-M2-L2。
在依據(jù)段落 的化合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，Ar2是芳基或雜芳基；且Cy2-X1-選自a)A1-L1-B1-，其中A1是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L1是-(CH2)0-1NH(CH2)0-1-、-NHC(O)-或-NHCH2-；且其中B1是苯基或共價(jià)鍵；b)A2-L2-B2-，其中A2是CH3(C＝CH2)-、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的烷基或任選取代的芳基；其中L2是-C≡C-；且其中B2是共價(jià)鍵；c)A3-L3-B3-，其中A3是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L3是共價(jià)鍵；且其中B3是-CH2NH-；d)A4-L4-B4-，其中A4是任選取代的芳基；其中L4是-NHCH2-；且其中B4是噻吩基；e)A5-L5-B5-，其中A5是任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L5是共價(jià)鍵；且其中B5是-SCH2-；f)嗎啉基-CH2-；g)任選取代的芳基；h)A6-L6-B6-，其中A6是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L6是共價(jià)鍵；且其中B6是-NHCH2-；i)A7-L7-B7-，其中A7是任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L7是共價(jià)鍵；且其中B7是-CH2-；j)任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；k)A8L8-B8-，其中A8是任選取代的苯基；其中L8是共價(jià)鍵；且其中B8是-O-；l)A9-L9-B9-，其中A9是任選取代的芳基；其中L9是共價(jià)鍵；且其中B9是呋喃基；m)A10-L10-B10-，其中A10是任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L10是-CH(CH2CH3)-；且其中B10是-NHCH2-；
n)A11-L11-B11-，其中A11是任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L11是共價(jià)鍵；且其中B11是-OCH2-；o)A12-L12-B12-，其中A12是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L12是-NHC(O)-；且其中B12是-N(任選取代的芳基)CH2-；p)A13-L13-B13-，其中A12是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L13是共價(jià)鍵；且其中B13是-NHC(O)-；q)A14-L14-B14-，其中A14是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L14是-NHC(O)(任選取代的雜芳基)；且其中B14是-S-S-；r)F3CC(O)NH-；s)A15-L15-B15-，其中A15是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L15是-(CH2)0-1NH(任選取代的雜芳基)-；且其中B15是-NHCH2-；t)A16-L16-B16-，其中A16是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L16是共價(jià)鍵；且其中B16是-N(任選取代的烷基)CH2-；和u)A16-L16-B16-，其中A16是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中L16是共價(jià)鍵；且其中B16是-(任選取代的芳基-CH2)2-N-。
在依據(jù)段落 的化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，Cy2-X1-選自a)D1-E1-F1-，其中D1是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中E1是-CH2-或共價(jià)鍵；且其中B1是共價(jià)鍵；b)D2-E2-F2-，其中D2是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中E2是-NH(CH2)0-2-；且其中F2是共價(jià)鍵；c)D3-E3-F3-，其中D3是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中E3是-(CH2)0-2NH-；且其中F3是共價(jià)鍵；d)D4-E4-F4-，其中D4是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中E4是-S(CH2)0-2-；且其中F4是共價(jià)鍵；e)D5-E5-F5-，其中D5是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中E5是-(CH2)0-2S-；且其中F5是共價(jià)鍵；和
f)D6-E6-F6-，其中D6是任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或任選取代的雜環(huán)基；其中E6是-NH(CH2)0-2NH-；且其中F6是共價(jià)鍵. 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的HDAC抑制劑包括具有(3b)的段落 化合物 及其可藥用鹽，其中Y和Z獨(dú)立地為N或CH，且W選自




在依據(jù)段落 的化合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，化合物包括其中Y、Z和W如下所定義的那些 在依據(jù)段落 的化合物的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，化合物包括其中Y、Z和W如下所定義的那些





在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明新的組蛋白脫乙酰化酶抑制劑選自下列化合物及其可藥用鹽


在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物選自在表2a-b、3a-d、4a-c和5a-5f中列出的那些。
合成其中Y1是-N(R1)(R2)的式(1)化合物可優(yōu)選依據(jù)在反應(yīng)方案1中描述的合成路線制得。因此，將三氯三嗪I與胺II在二異丙基乙基胺存在下反應(yīng)，以生成二氯氨基三嗪III。將胺R1R2NH加到二氯氨基三嗪III中，以生成二氨基氯三嗪V。在四氫呋喃(THF)或1，4-二噁烷中用氨或R3R4NH處理V，以獲得三氨基三嗪VI。
或者，可將二氯氨基三嗪III與氨氣在1，4-二噁烷中反應(yīng)，以生成二氨基氯三嗪IV。然后在密封的燒瓶中，在THF或1，4-二噁烷中用R1R2NH處理IV，以獲得三氨基三嗪VI。
通過用氫氧化物堿例如氫氧化鋰處理來將VI中的酯基團(tuán)水解，以獲得相應(yīng)的酸VII。在BOP試劑、三乙胺和二甲基甲酰胺(DMF)存在下用1，2-苯二胺處理酸VII，以獲得苯胺基酰胺VIII。
反應(yīng)方案1 其中Y1是-CH2-C(O)-N(R1)(R2)的式(1)化合物可優(yōu)選如反應(yīng)方案2所示制得。因此，用乙酰氯和三乙胺處理哌嗪IX，以生成酰胺X。將X與二氯嗎啉基三嗪和六甲基二硅氧烷鋰反應(yīng)，以獲得化合物XI。如反應(yīng)方案1所述，將XI氯化物轉(zhuǎn)化成XII苯胺基酰胺用胺和二異丙基乙基胺處理；然后用氫氧化鋰處理；之后用BOP試劑、苯二胺、三乙胺和DMF處理。
反應(yīng)方案2 其中Ar2是亞吡啶基且X1包含-N(R7)-的式(2)化合物，其中Ar3是亞吡啶基且X2包含-N(R9)-的式(3)化合物，和其中Ar4是亞吡啶基且X3包含-N(R11)-的式(4)化合物可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案3中描述的方法制得。用胺RNH2處理二溴吡啶XIII或XIV，以分別生成氨基溴吡啶XV或XVI。在一氧化碳下，用二乙酰氧基鈀、二苯基膦基二茂鐵、DMF、二異丙基乙基胺和苯二胺處理XV或XVI，以分別生成苯胺基酰胺XVII或XVIII。
在氮?dú)夥障拢贒MF中，用丙烯酸叔丁酯、二異丙基乙基胺、二芐基丙酮鈀和三鄰甲苯基膦(POT)處理XV或XVI，以分別獲得化合物XIX和XX。通過在二氯甲烷中與三氟乙酸反應(yīng)，將XIX或XX的酯基團(tuán)水解，以分別生成在XXI或XXII中的相應(yīng)酸基團(tuán)。用苯二胺、BOP和三乙胺處理酸XXI或XXII，以分別獲得苯胺基酰胺XXIII或XXIV。
反應(yīng)方案3
其中X1包含-O-C(O)-NH-的式(2)化合物可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案4所示的合成路線制得。因此，將甲醇XXV與羰基二咪唑(CDI)、三乙胺和1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)加到在DMF內(nèi)的溴芐基胺XXVI中，以生成化合物XXVII。苯胺基酰胺XXVIII制備中的其余合成步驟如上文反應(yīng)方案3所述。
反應(yīng)方案4 其中X1包含-N(R7)-的式(2)化合物可優(yōu)選如反應(yīng)方案5所示制得。在DMF中，在碳酸鉀存在下，將胺XXIX與對(duì)溴芐基溴反應(yīng)，以生成溴芐基胺XXX。在DMF中用N-丙烯酰硝基苯胺、二芐基丙酮鈀、POT和二異丙基乙基胺處理XXX，以獲得N-硝酰苯胺(nitroanilide)XXXI。通過在甲醇和水中用氯化亞錫處理將N-硝酰苯胺XXXI轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的苯胺基酰胺XXXII。
用低聚甲醛處理在甲酸中的胺XXXI以獲得甲基胺XXXIII。然后通過在甲醇和水中用氯化亞錫處理將XXXIII中的N-硝酰苯胺部分轉(zhuǎn)化成XXXIV中的相應(yīng)的苯胺基酰胺部分。
反應(yīng)方案5 或者，其中X1包含-N(R7)-的式(2)化合物可依據(jù)反應(yīng)方案6所示的合成路線制得。用鹽酸處理在甲醇中的羧酸XXXV，以生成酯XXXVI。通過在DMF中于60℃用催化劑例如三乙胺、甲氧基芐基氯、碘化鈉和碳酸鉀處理，將XXXVI中的伯胺基團(tuán)轉(zhuǎn)化成XXXVI中的仲胺基團(tuán)。如上文反應(yīng)方案3所述，通過用氫氧化鈉、THF和甲醇處理，然后用BOP、三乙胺和苯二胺在DMF中處理，將酯XXXVI轉(zhuǎn)化成苯胺基酰胺XXXVII。
反應(yīng)方案6
其中X1包含 或-C(O)-NH-的式(2)化合物可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案7中描述的方法制得。將胺68加到在DMF內(nèi)的鹵代芳基化合物XXXVIII或XXXIX和碳酸鉀中，以分別獲得芳基胺XL或XLI。然后使用類似于上文反應(yīng)方案3-6中描述的方法制得苯胺基酰胺XLII或XLIII。
反應(yīng)方案7 化合物例如XLVII和XLIX可優(yōu)選如反應(yīng)方案8所示制得。將二溴吡啶與二氨基乙烷合并，以生成胺XLIV。在甲醇和水中用衣托酸酐LV處理胺XLIV，然后在甲酸中回流，以獲得化合物XLVI。用芐基氨基二乙酸與乙酸酐的反應(yīng)產(chǎn)物處理胺XLIV，以獲得化合物XLVIII。按照類似于上文反應(yīng)方案3-7中描述的方法將溴吡啶基胺XLVI和XLVIII分別轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的二烯苯胺基酰胺XLVII和XLIX。
反應(yīng)方案8 化合物例如LIV可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案9所示的合成路線制得。用氨基茚滿和二異丙基乙基胺處理三氯三嗪，以生成二氯氨基三嗪L。用溴芐基胺和二異丙基乙基胺處理，以獲得二氨基氯三嗪LI。加入氨氣和二噁烷，以獲得三氨基三嗪LII。用保護(hù)的N-丙烯酰苯胺、三乙胺、POT和二芐基丙酮鈀處理，以獲得二烯苯胺基酰胺LIII，將其用三氟乙酸脫保護(hù)，以獲得終產(chǎn)物L(fēng)IV。
反應(yīng)方案9 其中Ar2是亞喹啉基且X1包含-N(R7)-的式(2)化合物，其中Ar3是亞喹啉基且X2包含-N(R9)-的式(3)化合物，和其中Ar4是亞喹啉基且X3包含-N(R11)-的式(4)化合物可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案10中描述的方法制得。將在吡啶中的二羥基喹啉LV和二甲基氨基吡啶(DMAP)用三氟甲磺酸酐處理，以獲得二(三氟甲烷磺酰氧基)-喹啉LVI。用對(duì)甲氧基芐基胺處理LVI，以獲得氨基喹啉LVII。然后按照類似于上文反應(yīng)方案1-9中描述的方法制得苯胺基酰胺LVIII和LIX。
反應(yīng)方案10 a.Tf2O/Py/DMAP/0Cb.對(duì)甲氧基芐基胺/120Cc.1，2-苯二胺/CO(40psi)/Pd(OAc)2/dppf/DMF/DIPEA/70Cd.丙烯酸叔丁酯/Pd2(dba)3/POT/DMF/DIPEA/120Ce.TEA/DCM/Rtf.1，2-苯二胺/BOP/DMF/TEA/rT其中X2包含硫原子的式(3)化合物，和其中X3包含硫原子的式(4)化合物可優(yōu)選如反應(yīng)方案11所示制得。使用類似于上文反應(yīng)方案6所述的方法將溴化物L(fēng)X轉(zhuǎn)化成二芳基酯LXI。然后使用類似于上文反應(yīng)方案1所述的合成方法，將酯LXI轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酸LXIV?；蛘?，可用氯乙基嗎啉、碘化鈉、碳酸鉀、三乙胺和碘化四丁基銨(TBAI)在DMF中處理酯LXI，以生成酯LXIII，然后如反應(yīng)方案1所示將其轉(zhuǎn)化成酸LXIV。按照類似于上文反應(yīng)方案1所述的方法將酸LXIV轉(zhuǎn)化成苯胺基酰胺LXV。
反應(yīng)方案11 或者，其中X2包含硫原子的式(3)化合物，和其中X3包含硫原子的式(4)化合物可依據(jù)反應(yīng)方案12中描述的方法制得。硫烷基苯胺基酰胺LXVIII是用類似于上文反應(yīng)方案3和5中描述的方法制得的。
反應(yīng)方案12 其中X2包含-N(R9)-的式(3)化合物，和其中X3包含-N(R11)-的式(4)化合物可依據(jù)反應(yīng)方案13描述的合成路線制得。氨基苯胺基酰胺LXXI是按照類似于上文反應(yīng)方案1和6中描述的合成步驟制得的。
反應(yīng)方案13
其中X2包含硫原子的式(3)化合物，和其中X3包含硫原子的式(4)化合物可如反應(yīng)方案14所示制得。將苯二胺與二碳酸二叔丁酯反應(yīng)，然后與碘苯甲酸、二甲基氨基丙基乙基碳二亞胺、羥基苯并三唑和三乙胺反應(yīng)，以獲得保護(hù)的苯胺基酰胺LXXII。使用類似于反應(yīng)方案3中描述的方法，將LXXII的碘基團(tuán)轉(zhuǎn)化成LXXIII的甲酯基團(tuán)。通過用還原劑例如二異丁基氫化鋁(DIBAL-H)處理，將LXXIII的甲酯基團(tuán)轉(zhuǎn)化成LXXIV的羥基。加入雜環(huán)基巰基化合物Het-SH和三苯基膦以及偶氮二甲酸二乙酯，以將LXXIV的羥基轉(zhuǎn)化成LXXV的硫烷基。用三氟乙酸將LXXV脫保護(hù)，以獲得硫烷基苯胺基酰胺LXXVI。
反應(yīng)方案14 其中X2是化學(xué)鍵的式(3)化合物可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案15中描述的合成路線制得。因此，用芳基硼酸、苯、乙醇、碳酸鈉水溶液和三苯基膦鈀處理氯芳基苯胺基酰胺LXXVII，以獲得二芳基苯胺基酰胺LXXVIII。
反應(yīng)方案15
化合物例如LXXXI可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案16中描述的方法獲得。因此，用對(duì)氨基甲基苯甲酸處理在乙酸中的苯-1，2-甲醛LXXIX，以生成苯甲酸LXXX。通過用羥基苯并三唑、二氯乙烷和苯二胺處理，將酸LXXX轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的苯胺基酰胺LXXXI。
反應(yīng)方案16 a.對(duì)氨基甲基苯甲酸/AcOH/5min/回流b.HOBT/EDC/1，2-二氨基苯化合物例如LXXXVI和LXXXIX可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案18中描述的方法制得。將鄰苯二甲酸酐LXXXV和對(duì)氨基甲基苯甲酸在乙酸中合并，以生成羧酸中間體，使用類似于上文反應(yīng)方案15和16中描述的方法將其轉(zhuǎn)化成苯胺基酰胺LXXXVI。
將4-(2-氨基乙基)苯酚加到在乙酸內(nèi)的鄰苯二甲酸酐LXXXV中，以獲得羥基化合物L(fēng)XXXVII。通過用氫化鈉、THF、DMF和苯基氨基二-三氟甲磺酸酯處理，將LXXXVII的羥基轉(zhuǎn)化成LXXXVIII的三氟甲磺酸酯基。依據(jù)類似于上文反應(yīng)方案3中描述的方法處理LXXXVIII，以獲得苯胺基酰胺LXXXIX。
反應(yīng)方案18 a.對(duì)氨基甲基苯甲酸/AcOH/回流/3hrsb.HOBT/EDC/1，2-二氨基苯c.4-(2-氨基乙基)苯酚/AcOH/5hrs/回流d.PhNTf2/NaH/THF-DMF/30min/0℃e.1.CO/Pd(OAc)2/dppf/Et3N/MeOH-DMF/4天/75℃2.AcOH/HCl/3hrs/回流化合物例如XCI-XCVI可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案19中描述的合成路線制得。用在水中的對(duì)氨基甲基苯甲酸和三乙胺處理衣托酸酐(isatoicanhydride)XC，然后用甲酸處理，以獲得中間體羧酸，使用類似于上文反應(yīng)方案16中描述的方法將其轉(zhuǎn)化成苯胺基酰胺XCI。
或者，用在水中的對(duì)氨基甲基苯甲酸和三乙胺處理衣托酸XC，然后用鹽酸和亞硝酸鈉處理，以獲得中間體羧酸，使用類似于上文反應(yīng)方案16中描述的方法將其轉(zhuǎn)化成苯胺基酰胺XCII。
或者，用在水中的對(duì)氨基甲基苯甲酸和三乙胺處理衣托酸XC，以獲得苯甲酸XCIII。用氫氧化鈉、二噁烷、氯甲酸甲酯和甲醇處理XCIII，以獲得喹唑啉二酮羧酸中間體，使用類似于上文反應(yīng)方案16中描述的方法將該中間體的酸基團(tuán)轉(zhuǎn)化成XCIV的苯胺基酰胺基團(tuán)?；蛘撸锰妓徕浐图谆馓幚碓贒MF中的喹唑啉二酮羧酸中間體，以生成苯甲酸甲酯中間體，通過用氫氧化鈉、甲醇和水處理將其轉(zhuǎn)化成苯甲酸中間體。然后使用類似于上文反應(yīng)方案16中描述的方法將該苯甲酸中間體轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的苯胺基酰胺XCV。
或者，用乙酸酐處理XCIII，然后用乙酸處理，以生成羧酸中間體，使用類似于上文反應(yīng)方案16中描述的方法將其轉(zhuǎn)化成苯胺基酰胺XCVI。
反應(yīng)方案19 化合物例如C可優(yōu)選如反應(yīng)方案20所示制得。用在二氯甲烷中的硫代羰基二咪唑處理烷基胺XCVII，然后用氫氧化銨處理，以獲得硫脲XCVIII。用在二噁烷中的甲氧基丙烯酸甲酯和N-溴琥珀酰亞胺處理硫脲XCVIII，以生成噻唑酯IC。使用類似于上文反應(yīng)方案1中描述的方法將酯IC轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的苯胺基胺C。
反應(yīng)方案20 其中X2是化學(xué)鍵，且Cy3具有氨基取代基的式(3)化合物可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案21中描述的合成路線制得。因此，依據(jù)類似于上文反應(yīng)方案15中描述的方法處理保護(hù)的碘芳基苯胺基酰胺CI，以獲得二芳基苯胺基酰胺CII。通過用伯胺和三乙酰氧基硼氫化鈉處理，然后用冰醋酸處理，將CII中的醛基團(tuán)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的仲胺基團(tuán)。使用類似于上文反應(yīng)方案3中描述的方法將所得化合物脫保護(hù)，以獲得CIII。
反應(yīng)方案21 其中X2包含亞炔基的式(3)化合物，和其中X3包含亞炔基的式(4)化合物可如反應(yīng)方案22所示制得。用三苯基膦氯化鈀、碘化亞銅和1-乙炔基環(huán)己基胺處理保護(hù)的碘芳基苯胺基酰胺CI，以獲得炔基芳基苯胺基酰胺CIV。使用類似于上文反應(yīng)方案21中描述的方法，將CIV中的伯胺基團(tuán)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的仲胺基團(tuán)，并將苯胺脫保護(hù)，以獲得CV。
反應(yīng)方案22 反應(yīng)方案24
化合物例如CVIII可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案24中描述的合成路線制得。在二異丙基乙基胺存在下，用4-氨基苯甲酸甲酯處理二氯氨基三嗪CVI，以生成二氨基三嗪CVII。加入氨氣和二噁烷，然后使用上文反應(yīng)方案1中描述的相同方法進(jìn)行皂化和肽偶聯(lián)。
反應(yīng)方案30 化合物例如CX可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案30中描述的合成路線制得。將三氯氨基三嗪與各種溴化烷基鎂進(jìn)行格式反應(yīng)，然后在二異丙基乙基胺存在下，用4-氨基苯甲酸甲酯處理，以生成烷基氨基三嗪CIX。然后使用類似于上文反應(yīng)方案1中描述的方法將酯CIX轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的苯胺基酰胺CX。
反應(yīng)方案32 使用反應(yīng)方案1中描述的通常條件進(jìn)行二氯三嗪的胺化，以獲得CXI。使用乙烯基錫烷進(jìn)行Stille偶聯(lián)，以獲得CXII。然后用保護(hù)的N-碘酰苯胺、三乙胺、POT和二芐基丙酮鈀處理，以生成苯胺基酰胺，用三氟乙酸將其脫保護(hù)，以獲得烯烴CXIII。將該烯烴氫化，以獲得最終的化合物CXIV。
反應(yīng)方案33 化合物例如CXVIII可優(yōu)選依據(jù)反應(yīng)方案33中描述的合成路線制得。用三溴化硼處理甲氧基氨基苯并噻唑，以獲得相應(yīng)的酸CXV。在偶氮二甲酸二乙酯和三苯基膦存在下，使用羥基乙基嗎啉進(jìn)行Mitsunobu反應(yīng)，以獲得胺CXVI。使用苯基硅烷和錫催化劑，用4-甲酰基苯甲酸甲酯進(jìn)行還原胺化，以獲得CXVII。然后按照類似于上文反應(yīng)方案1中描述的方法進(jìn)行皂化和常規(guī)肽偶聯(lián)，以獲得所需N-酰苯胺CXVIII。
反應(yīng)方案42 用硫化氫處理4-甲基氰基苯甲酸，以獲得CXIX，然后在1，3-二氯丙酮存在下進(jìn)行環(huán)化，以獲得CXX。用嗎啉處理，然后使用標(biāo)準(zhǔn)條件進(jìn)行肽偶聯(lián)，以生成CXXI。
反應(yīng)方案49 iBrCH2C6H4COOMe/MeONa/THF；iiPhNHNH2；iiiNaOH，then HClivHOBt/EDCxHCl然后1，2-二氨基苯；vBrCH2C6H4COOMe/MeONa/MeOH，然后HCl/AcOH；viCH2(CN)2/S8/Et2NH；viiAcCl；viii2-N-Bocamino苯胺；ixTFA化合物例如CXXIII和CXXVII可優(yōu)選依據(jù)合成反應(yīng)方案49制得。在NaOMe和苯基肼存在下，用溴甲基苯甲酸甲酯連續(xù)處理乙酰基丙酮，然后皂化，以獲得酸中間體CXXII。使用標(biāo)準(zhǔn)方法將該中間體與1，2-二氨基苯偶聯(lián)以獲得CXXIII。
在NaOMe和1∶1混合物AcOH-HCl(濃)存在下，用溴甲基苯甲酸甲酯連續(xù)處理乙?；垣@得酸中間體CXXIV。將該酮基酸與硫和丙二腈在堿存在下反應(yīng)，以生成噻吩CXXV，使用標(biāo)準(zhǔn)方法將其轉(zhuǎn)化成所要的CXXVII。
反應(yīng)方案50 化合物例如CXXX可優(yōu)選依據(jù)合成反應(yīng)方案50制得。用羥基胺處理4-氰基甲基苯甲酸，以生成偕胺肟CXXVIII，通過用乙酸酐處理將其轉(zhuǎn)化成惡二唑CXXIX。使用標(biāo)準(zhǔn)方法將后者與1，2-二氨基苯偶聯(lián)，以獲得CXXX。
反應(yīng)方案57 化合物例如CXXXIII可依據(jù)反應(yīng)方案57中描述的合成路線制得。用亞硫酰氯處理4-甲酰基苯甲酸，以獲得酰氯，將其與保護(hù)的N-酰苯胺偶聯(lián)，以生成CXXXI。使用苯基硅烷和錫催化劑，用二甲氧基苯胺還原胺化，以獲得保護(hù)的N-酰苯胺CXXXII。用異氰酸酯處理，然后用三氟乙酸脫保護(hù)，以獲得N-脲酰苯胺(ureidoanilide)CXXXIII。
藥物組合物在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，其中包含本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿┖涂伤幱幂d體、賦形劑或稀釋劑。可通過本領(lǐng)域眾所周知的任何方法配制本發(fā)明化合物，并且可制成能通過任何途徑給藥的形式，所述途徑包括但不限于非胃腸道、口服、舌下、透皮、局部、鼻內(nèi)、氣管內(nèi)或直腸內(nèi)給藥途徑。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物可在醫(yī)院中靜脈內(nèi)給藥。在一些其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，給藥可優(yōu)選通過口服途徑進(jìn)行。
載體的特征取決于給藥途徑。本文所用術(shù)語“可藥用”是指這樣的無毒材料，其與生物系統(tǒng)例如細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)物、組織或生物體相容，并且不干擾活性組分的生物活性的有效性。因此，除了本發(fā)明抑制劑以外，本發(fā)明組合物還包含稀釋劑、填充劑、鹽、緩沖劑、穩(wěn)定劑、助溶劑和本領(lǐng)域眾所周知的其它材料?？伤幱弥苿┑闹苽涿枋鲈诶鏡emington’s Pharmaceutical Sciences，18th Edition，ed.A.Gennaro，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990中。
本文所用術(shù)語可藥用鹽是指保持上述化合物希望的生物活性，并且表現(xiàn)出最小或沒有任何不良毒性作用的鹽。這樣的鹽的實(shí)例包括但不限于與下列酸形成的酸加成鹽無機(jī)酸(例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)，和有機(jī)酸例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、撲酸、藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸和聚半乳糖醛酸?；衔镞€可以作為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的可藥用季銨鹽給藥，這樣的季銨鹽具體包括式-NR+Z-的銨鹽，其中R是氫、烷基或芐基，且Z是抗衡離子，包括氯離子、溴離子、碘離子、-O-烷基、甲苯磺酸基、甲磺酸基、磺酸基、磷酸根或羧酸基(例如苯甲酸基、琥珀酸基、乙酸基、羥乙酸基、馬來酸基、蘋果酸基、檸檬酸基、酒石酸基、抗壞血酸基、苯甲酸基、肉桂酸基、扁桃酸基、苯甲醇陰離子和二苯基乙酸基)。
活性化合物以足以給患者遞送治療有效量，同時(shí)在所治療的患者中不引起嚴(yán)重毒性作用的量包含在可藥用載體或稀釋劑中。對(duì)于所有上述病癥，活性化合物的優(yōu)選劑量為約0.01-300mg/kg，優(yōu)選為0.1-100mg/kg每天，更通常為0.5-約25mg/千克接受者的體重/天。典型的局部給藥劑量為在適當(dāng)載體中的0.01-3％wt/wt。本發(fā)明可藥用衍生物的有效劑量可根據(jù)欲給藥的母化合物的重量計(jì)算。如果衍生物自身表現(xiàn)出活性，則可以用衍生物的重量如上所述估計(jì)有效劑量或者通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法估計(jì)有效劑量。
抑制組蛋白脫乙?；冈诘谌齻€(gè)方面，本發(fā)明提供了抑制細(xì)胞中組蛋白脫乙酰化酶的方法，包括將希望抑制其組蛋白脫乙酰化酶的細(xì)胞與本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿┙佑|。因?yàn)楸景l(fā)明化合物能抑制組蛋白脫乙?；?，所以它們是用于在體外研究生物過程中組蛋白脫乙酰化酶的作用的有用研究工具。此外，本發(fā)明化合物可選擇性地抑制HDAC的一些異構(gòu)體。
可使用已知方法測(cè)定組蛋白脫乙?；傅拿富钚?。例如Yoshida等人，J.Biol.Chem.，26517174-17179(1990)描述了通過檢測(cè)曲古柳菌素(trichostatin A)處理的細(xì)胞中的乙酰化組蛋白來評(píng)價(jià)組蛋白脫乙?；傅拿富钚?。Taunton等人，Science，272408-411(1996)類似地描述了通過使用內(nèi)源性和重組HDAC-1來測(cè)定組蛋白脫乙?；傅拿富钚缘姆椒ā?br> 在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，組蛋白脫乙?；敢种苿┡c細(xì)胞中的所有組蛋白脫乙?；赶嗷プ饔貌⒔档退鼈兊幕钚?。在依據(jù)本發(fā)明該方面的某些其它優(yōu)選實(shí)施方案中，組蛋白脫乙?；敢种苿┡c細(xì)胞中少數(shù)組蛋白脫乙酰化酶而不是所有組蛋白脫乙?；赶嗷プ饔茫⒔档退鼈兊幕钚?。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，抑制劑與一種組蛋白脫乙酰化酶(例如HDAC-1)反應(yīng)并降低其活性，而不與其它組蛋白脫乙?；?例如HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC-7和HDAC-8)相互作用或降低它們的活性。如下所述，一些特別優(yōu)選的組蛋白脫乙?；敢种苿┦桥c涉及腫瘤發(fā)生的組蛋白脫乙?；赶嗷プ饔貌⒔档推涿富钚缘哪切Ｒ恍┢渌鼉?yōu)選的組蛋白脫乙?；敢种苿┡c真菌組蛋白脫乙酰化酶相互作用并降低其酶活性。
優(yōu)選地，依據(jù)本發(fā)明第三個(gè)方面的方法引起所接觸的細(xì)胞的細(xì)胞增殖被抑制。短語“抑制細(xì)胞增殖”是用來指，與未接觸的細(xì)胞相比，組蛋白脫乙酰化酶抑制劑延遲與抑制劑接觸的細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。細(xì)胞增殖的評(píng)價(jià)可通過使用Coulter細(xì)胞計(jì)數(shù)器(Coulter，Miami，F(xiàn)L)或血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)接觸和未接觸的細(xì)胞來進(jìn)行。當(dāng)細(xì)胞在實(shí)體生長(zhǎng)(例如實(shí)體瘤或器官)中時(shí)，這樣的細(xì)胞增殖評(píng)價(jià)可通過用卡鉗測(cè)定生長(zhǎng)，并比較接觸的細(xì)胞與未接觸的細(xì)胞的生長(zhǎng)尺寸來進(jìn)行。
優(yōu)選地，與未接觸的細(xì)胞相比，與抑制劑接觸的細(xì)胞的生長(zhǎng)被延遲了至少50％。更優(yōu)選地，細(xì)胞增殖被抑制了100％(即接觸的細(xì)胞在數(shù)目上沒有任何增加)。更優(yōu)選地，短語“抑制細(xì)胞增殖”包括，與未接觸的細(xì)胞相比，接觸的細(xì)胞的數(shù)目減少或尺寸減小。因此，本發(fā)明抑制細(xì)胞增殖的組蛋白脫乙?；敢种苿┛烧T導(dǎo)接觸的細(xì)胞經(jīng)受生長(zhǎng)延遲、經(jīng)受生長(zhǎng)停滯、經(jīng)受編程性細(xì)胞死亡(即細(xì)胞凋亡)或經(jīng)受壞死性細(xì)胞生長(zhǎng)。
本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿┑募?xì)胞增殖抑制能力使得不同步生長(zhǎng)的細(xì)胞群體同步化。例如，本發(fā)明組蛋白脫乙酰化酶抑制劑可用于在體外抑制處于細(xì)胞周期的G1或G2期的非瘤形成細(xì)胞群體。這樣的同步化使得能夠例如鑒定在細(xì)胞周期的G1或G2期時(shí)段內(nèi)表達(dá)的基因和/或基因產(chǎn)物。這樣的培養(yǎng)細(xì)胞的同步化還可用于測(cè)試新轉(zhuǎn)染方案的效力，其中轉(zhuǎn)染效力隨著欲轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的特定細(xì)胞周期時(shí)期而變并取決于特定細(xì)胞周期的時(shí)期。本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿┑膽?yīng)用使得細(xì)胞群體同步化，由此能夠有助于檢測(cè)提高的轉(zhuǎn)染效力。
在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，接觸的細(xì)胞是瘤形成細(xì)胞。術(shù)語“瘤形成細(xì)胞”是用來指表現(xiàn)出異常細(xì)胞生長(zhǎng)的細(xì)胞。瘤形成細(xì)胞的異常細(xì)胞生長(zhǎng)優(yōu)選是增加的細(xì)胞生長(zhǎng)。瘤形成細(xì)胞可以是增生細(xì)胞，在體外表現(xiàn)出缺乏生長(zhǎng)接觸抑制的細(xì)胞，在體內(nèi)不能轉(zhuǎn)移的良性腫瘤細(xì)胞，或在體內(nèi)能夠轉(zhuǎn)移，并且在試圖除去之后可復(fù)發(fā)的癌細(xì)胞。術(shù)語“腫瘤發(fā)生”是用來指導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)發(fā)展的細(xì)胞增殖誘導(dǎo)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿┰诮佑|的細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞分化。因此，當(dāng)與組蛋白脫乙酰化酶抑制劑接觸時(shí)，瘤形成細(xì)胞可被誘導(dǎo)發(fā)生分化，導(dǎo)致產(chǎn)生在種系發(fā)生方面比接觸的細(xì)胞更高級(jí)的非瘤形成子細(xì)胞。
在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，接觸的細(xì)胞在動(dòng)物中。因此，本發(fā)明提供了治療動(dòng)物中細(xì)胞增殖疾病或病癥的方法，包括給需要這種治療的動(dòng)物施用治療有效量的本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿?。動(dòng)物優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為馴養(yǎng)的哺乳動(dòng)物。動(dòng)物最優(yōu)選為人。
術(shù)語“細(xì)胞增殖疾病或病癥”是指特征是異常細(xì)胞生長(zhǎng)，優(yōu)選異常增加的細(xì)胞增殖的任何病癥。這樣的細(xì)胞增殖疾病或病癥的實(shí)例包括但不限于癌癥、再狹窄和牛皮癬。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制動(dòng)物中瘤形成細(xì)胞增殖的方法，包括給體內(nèi)存在至少一種瘤形成細(xì)胞的動(dòng)物施用治療有效量的本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿?br> 某些本發(fā)明化合物具有抗原生動(dòng)物來源的組蛋白脫乙?；傅囊种苹钚浴Ｒ虼?，本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防原生動(dòng)物疾病或感染的方法，包括給需要這種治療的動(dòng)物施用治療有效量的本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿?。動(dòng)物優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為人。優(yōu)選地，依據(jù)本發(fā)明該實(shí)施方案使用的組蛋白脫乙?；敢种苿┮种圃鷦?dòng)物組蛋白脫乙酰化酶的程度大于其抑制哺乳動(dòng)物組蛋白脫乙?；福貏e是人組蛋白脫乙?；傅某潭取?br> 本發(fā)明還提供了治療真菌疾病或感染的方法，包括給需要這種治療的動(dòng)物施用治療有效量的本發(fā)明組蛋白脫乙酰化酶抑制劑。動(dòng)物優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為人。優(yōu)選地，依據(jù)本發(fā)明該實(shí)施方案使用的組蛋白脫乙?；敢种苿┮种普婢M蛋白脫乙?；傅某潭却笥谄湟种撇溉閯?dòng)物組蛋白脫乙?；?，特別是人組蛋白脫乙酰化酶的程度。
術(shù)語“治療有效量”是指足以在個(gè)體的細(xì)胞中引起組蛋白脫乙酰化酶活性被抑制的劑量，或足以在個(gè)體中抑制細(xì)胞增殖或誘導(dǎo)細(xì)胞分化的劑量。給藥可通過任何途徑進(jìn)行，包括但不限于非胃腸道、口服、舌下、透皮、局部、鼻內(nèi)、氣管內(nèi)或直腸內(nèi)給藥途徑。在一些特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物可在醫(yī)院中靜脈內(nèi)給藥。在一些其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，給藥可優(yōu)選通過口服途徑進(jìn)行。
當(dāng)全身給藥時(shí)，組蛋白脫乙?；敢种苿﹥?yōu)選以足以達(dá)到下列抑制劑血液水平的劑量給藥約0.01μM-約100μM，更優(yōu)選約0.05μM-約50μM，還更優(yōu)選約0.1μM-約25μM，仍更優(yōu)選約0.5μM-約25μM。對(duì)于局部給藥，比此低得多的濃度可能是有效的，并且可耐受高得多的濃度。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，產(chǎn)生療效所需的組蛋白脫乙?；敢种苿┑膭┝靠筛鶕?jù)欲治療的組織、器官或特定動(dòng)物或患者而顯著改變。
在本發(fā)明第三個(gè)方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，方法包括將細(xì)胞與抑制組蛋白脫乙酰化酶表達(dá)的反義低聚核苷酸接觸。核酸水平抑制劑(例如反義低聚核苷酸)與蛋白水平抑制劑(即組蛋白脫乙?；傅拿富钚砸种苿?的聯(lián)合使用帶來了提高的抑制作用，由此降低了達(dá)到給定抑制作用所需的抑制劑的量—與單獨(dú)使用任一種抑制劑所需的量相比。依據(jù)本發(fā)明該方面的反義低聚核苷酸與編碼HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC-6、HDAC7和/或HDAC-8的RNA或雙螺旋DNA區(qū)域互補(bǔ)(參見例如對(duì)于HDAC-1的GenBankAccession Number U50079，對(duì)于HDAC-2的GenBank AccessionNumber U31814，和對(duì)于HDAC-3的GenBank Accession NumberU75697)。
對(duì)于本發(fā)明目的，術(shù)語“低聚核苷酸”包括兩個(gè)或多個(gè)脫氧核苷、核糖核苷或2’-取代的核糖核苷殘基或其任何組合的聚合物。優(yōu)選地，這樣的低聚核苷酸具有約6-約100個(gè)核苷殘基，更優(yōu)選約8-約50個(gè)核苷殘基，最優(yōu)選約12-約30個(gè)核苷殘基。核苷殘基可通過任何多種已知的核苷間鍵彼此偶聯(lián)。這樣的核苷間鍵包括但不限于硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、烷基磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、硅氧烷、碳酸酯、羧基甲基酯、乙酰胺酸酯、氨基甲酸酯、硫醚、橋連氨基磷酸酯、橋連膦酸亞甲基酯、橋連硫代磷酸酯和砜核苷間鍵。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，這些核苷間鍵可以是磷酸二酯、磷酸三酯、硫代磷酸酯或氨基磷酸酯鍵或其組合。術(shù)語低聚核苷酸還包括具有化學(xué)修飾的堿基或糖和/或具有另外的取代基，包括但不限于親脂性基團(tuán)、嵌入劑、二胺和金剛烷的聚合物。
對(duì)于本發(fā)明目的，術(shù)語“2’取代的核糖核苷”包括其中在戊糖部分的2’-位的羥基被取代以生成2’-O-取代的核糖核苷的核糖核苷。優(yōu)選地，這樣的取代是被下列基團(tuán)取代含有1-6個(gè)飽和或不飽和碳原子的低級(jí)烷基或具有2-6個(gè)碳原子的芳基或烯丙基，其中這樣的烷基、芳基或烯丙基可以是未取代或取代的，例如被鹵素、羥基、三氟甲基、氰基、硝基、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、烷氧羰基或氨基取代。術(shù)語“2’取代的核糖核苷”還包括其中2’-羥基被氨基或鹵素，優(yōu)選氟替代的核糖核苷。
在本發(fā)明該方面使用的特別優(yōu)選的反義低聚核苷酸包括嵌合低聚核苷酸和雜合低聚核苷酸。
對(duì)于本發(fā)明目的，“嵌合低聚核苷酸”是指具有一種以上類型的核苷間鍵的低聚核苷酸。這樣的嵌合低聚核苷酸的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)例是包含硫代磷酸酯、磷酸二酯或二硫代磷酸酯區(qū)域-優(yōu)選包含約2-約12個(gè)核苷，和烷基磷酸酯或烷基硫代膦酸酯區(qū)域的嵌合低聚核苷酸(參見例如Pederson等人U.S.專利5,635,377和5,366,878)。優(yōu)選地，這樣的嵌合低聚核苷酸含有至少3個(gè)選自磷酸二酯和硫代磷酸酯鍵或其組合的連續(xù)的核苷間鍵。
對(duì)于本發(fā)明目的，“雜合低聚核苷酸”是指具有一種以上類型的核苷的低聚核苷酸。這樣的雜合低聚核苷酸的一個(gè)優(yōu)選實(shí)例包含核糖核苷酸或2’-取代的核糖核苷酸區(qū)域-優(yōu)選包含約2-約12個(gè)2’-取代的核苷酸，和脫氧核糖核苷酸區(qū)域。優(yōu)選地，這樣的雜合低聚核苷酸包含至少3個(gè)連續(xù)的脫氧核糖核苷，并且還包含核糖核苷、2’-取代的核糖核苷，優(yōu)選2’-O-取代的核糖核苷或其組合(參見例如Metelev和Agrawal，U.S.專利5,652,355)。
在本發(fā)明中使用的反義低聚核苷酸的精確核苷酸序列和化學(xué)結(jié)構(gòu)可以變化，只要低聚核苷酸保持其抑制目標(biāo)基因表達(dá)的能力即可。這可通過測(cè)試特定反義低聚核苷酸是否有活性來容易地確定。對(duì)于此目的，有用的測(cè)定包括定量測(cè)定編碼基因產(chǎn)物的mRNA，基因產(chǎn)物的Western印跡分析測(cè)定，酶活性基因產(chǎn)物的活性測(cè)定，或軟瓊脂生長(zhǎng)測(cè)定，或報(bào)道基因構(gòu)建測(cè)定，或體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)測(cè)定，所有這些都詳細(xì)描述在本說明書或Ramchandani等人(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94684-689中。
在本發(fā)明中使用的反義低聚核苷酸可在合適的固體載體上用眾所周知的化學(xué)方法來常規(guī)合成，這些方法包括H-膦酸酯化學(xué)、氨基磷酸酯化學(xué)或H-膦酸酯化學(xué)與氨基磷酸酯化學(xué)的組合(即對(duì)于某些循環(huán)使用H-膦酸酯化學(xué)，對(duì)于其它循環(huán)使用氨基磷酸酯活性)。合適的固體載體包括用于固相低聚核苷酸合成的任何標(biāo)準(zhǔn)固體載體例如孔控玻璃(CPG)(參見例如Pon，R.T.(1993)Methods in Molec.Biol.20465-496)。
特別優(yōu)選的低聚核苷酸具有約13-約35個(gè)核苷酸的核苷酸序列，包括表1所示序列。還特別優(yōu)選的低聚核苷酸具有表1所示的約15-約26個(gè)核苷酸的核苷酸序列。
表1

下列實(shí)施例是為了進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施方案，并不是為了限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例 實(shí)施例14-{[4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]-三嗪-2-基-氨基]-甲基}-N-(2-氨基-苯基)-苯甲酰胺(化合物8)步驟14-[(4，6-二氨-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(化合物3)在-78℃、氮?dú)夥障?，向氰尿酰?(8.23g，44.63mmol)在無水THF(100mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯.HCl 2(10.00g，49.59mmol)在無水THF(50mL)中的懸浮液，然后加入i-Pr2NEt(19.00mL，109.10mmol)。30分鐘后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/CH2Cl25/95)，獲得了本標(biāo)題化合物3(12.12g，38.70mmol，87％產(chǎn)率)，為淺黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)AB系統(tǒng)(δA＝8.04，δB＝7.38，J＝8.5Hz，4H)，6.54(bt，1H)，4.76(d，J＝6.3Hz，2H)，3.93(s，3H)。
途徑A步驟24-[(4-氨基-6-氯-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(化合物4)在150mL密封燒瓶?jī)?nèi)，將3(6.00g，19.16mmol)在無水1，4-二噁烷(60mL)中的溶液于室溫?cái)嚢?，用NH3氣飽和5分鐘，溫?zé)嶂?0℃并保持6小時(shí)。讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，將使用NH3氣的飽和步驟在室溫重復(fù)進(jìn)行5分鐘，將該反應(yīng)混合物再次溫?zé)嶂?0℃并保持18小時(shí)。然后讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/CH2Cl230/70)，獲得了本標(biāo)題化合物4(5.16g，17.57mmol，91％產(chǎn)率)，為白色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)AB系統(tǒng)(δA＝8.01，δB＝7.35，J＝8.1Hz，4H)，5.79(bs，1H)，5.40-5.20(m，2H)，4.72-4.63(m，2H)，3.91(s，3H)。
途徑B步驟24-[(4-氯-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(化合物5)在室溫、氮?dú)夥障?，?(3.00g，9.58mmol)在無水THF(50mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中分別加入i-Pr2NEt(8.34mL，47.90mmol)和2-氨基茚滿.HCl(1.95g，11.50mmol)或R1R2NH(1.2當(dāng)量)。18小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，獲得了本標(biāo)題化合物5(4.06g，9.91mmol，定量產(chǎn)率)，為白色粉末。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，8.06-7.94(m，2H)，7.43-7.28(m，2H)，7.24-7.12(m，4H)，6.41和6.05(2bt，1H)，5.68-5.44(m，1H)，4.92-4.54(m，3H)，3.92(bs，3H)，3.41-3.12(m，2H)，2.90-2.70(m，2H)。
步驟34-[(4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(化合物6)用NH3氣胺化的一般方法在150mL密封燒瓶?jī)?nèi)，將5(3.90g，9.51mmol)在無水1，4-二噁烷(80mL)中的溶液于室溫?cái)嚢?，用NH3氣飽和5分鐘，溫?zé)嶂?40℃并保持6小時(shí)。讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，將使用NH3氣的飽和步驟在室溫重復(fù)進(jìn)行5分鐘，將該反應(yīng)混合物再次溫?zé)嶂?40℃并保持18。然后讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl23/97)，獲得了本標(biāo)題化合物6(3.50g，8.96mmol，94％產(chǎn)率)，為淺黃色粘性固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.99(bd，J＝8.2Hz，2H)，7.41-7.33(m，2H)，7.24-7.13(m，4H)，5.50-5.00(m，2H)，4.90-4.55(m，5H)，3.92(s，3H)，3.40-3.10(m，2H)，2.90-2.70(m，2H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ(ppm)166.88，167.35，166.07，144.77，141.07，129.82，128.93，127.01，126.61，124.70，52.06，51.80，44.25，40.16.HRMS(計(jì)算值)390.1804，(實(shí)測(cè)值)390.1800。
途徑A和B，步驟3，使用伯胺和/或仲胺的一般方法在50-75mL密封燒瓶?jī)?nèi)，將4(500mg，1.70mmol，1當(dāng)量)、i-Pr2NEt(1.48mL，8.51mmol，5當(dāng)量)和R1R2NH或R3R4NH(1.5-3當(dāng)量)在無水THF或1，4-二噁烷(20-30mL)中的攪拌著的溶液溫?zé)嶂?20-140℃，并保持15-24小時(shí)。然后讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物，獲得了本標(biāo)題化合物。
步驟44-[(4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三噻-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸(化合物7)在室溫，向6(2.07g，5.30mmol)在THF(50mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入LiOH.H2O(334mg，7.96mmol)在水(25mL)中的溶液。18小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物在水中稀釋，用1N HCl酸化直至pH5-6以獲得白色沉淀。1小時(shí)后，將該懸浮液過濾，用水將濾餅充分洗滌，并干燥，獲得了本標(biāo)題化合物7(1.73g，4.60mmol，87％產(chǎn)率)，為白色固體。1HNMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)8.05(bd，J＝8.1Hz，2H)，7.56-7.42(m，2H)，7.30-7.10(m，4H)，5.90-5.65(m，2H)，4.85-4.60(m，4H)，3.40-2.80(m，4H).HRMS(計(jì)算值)376.1648，(實(shí)測(cè)值)376.1651。
步驟54-{[4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]-三嗪-2-基-氨基]-甲基}-N-(2-氨基-苯基)-苯甲酰胺(化合物8)在室溫、氮?dú)夥障?，?(200mg，0.53mmol)在無水DMF(5mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中分別加入Et3N(74μl，0.53mmol)和BOP試劑(282mg，0.64mmol)。40分鐘后，滴加1，2-苯二胺(64mg，0.58mmol)、Et3N(222μl，1.59mmol)在無水DMF(2mL)中的溶液。1.5小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl22/98→5/95)，獲得了本標(biāo)題化合物8(155mg，0.33mmol，63％產(chǎn)率)，為淺黃色泡沫狀物。1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)9.04(bs，1H)，7.96(bd，J＝8.0Hz，2H)，7.50-7.40(m，2H)，7.30(dd，J＝8.0Hz，1.4Hz，1H)，7.22-7.08(m，4H)，6.99(ddd，J＝8.0Hz，7.5Hz，1.5Hz，1H)，6.86(dd，J＝8.0Hz，1.4Hz，1H)，6.67(dt，J＝7.5Hz，1.4Hz，1H)，6.60-5.49(m，4H)，4.80-4.50(m，4H)，3.30-3.08(m，2H)，2.96-2.74(m，2H)。
實(shí)施例2-28實(shí)施例2-28描述了使用制備實(shí)施例1的化合物8所述的相同方法制備化合物9-35。特征數(shù)據(jù)列在表2a和2b中。
表2a在實(shí)施例2-28中制得的化合物的特征










表2b








實(shí)施例29N-(2-氨基-苯基)-4-({4-[2-(4-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-6-嗎啉-4-基-[1，3，5]三嗪-2-基氨基}-甲基)-苯甲酰胺(化合物39)步驟1N-乙?；?1-胡椒基哌嗪(化合物37)在0℃，向1-胡椒基哌嗪36(5.00g，22.7mmol)在無水CH2Cl2(60mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入Et3N(6.33mL，45.4mmol)，然后加入乙酰氯(1.94mL，27.2mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl24/96)，獲得了本標(biāo)題化合物37(5.52g，21.11mmol，93％產(chǎn)率)，為黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)6.83(s，1H)，6.72(m，2H)，5.92(s，2H)，3.59(t，J＝5.1Hz，2H)，3.44-3.40(m，4H)，2.42(dt，J＝5.1Hz，5.1Hz，4H)，2.06(s，3H)。
步驟22-氯-4-嗎啉-4-基-6-[2-(4-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-[1，3，5]三嗪(化合物38)在-78℃，向37(3.00g，11.4mmol)在無水THF(25mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中緩慢地加入LiHMDS的溶液(11.4mL，11.4mmol，1M在THF中的溶液)。將該反應(yīng)混合物在-78℃攪拌1小時(shí)，加入2，4-二氯-6-嗎啉-4-基-[1，3，5]三嗪(2.69g，11.4mmol)在無水THF(25mL)中的溶液。將該反應(yīng)混合物緩慢地溫?zé)嶂潦覝兀?6小時(shí)后，用飽和NH4Cl水溶液中止該反應(yīng)。將THF蒸發(fā)，用AcOEt稀釋殘余物。將有機(jī)層依次用飽和氯化銨和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl21/99→3/97)，獲得了本標(biāo)題化合物38(4.84g，10.49mmol，92％產(chǎn)率)，為淺黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)6.84(s，1H)，6.77-6.69(m，2H)，5.95(s，2H)，3.75-3.43(m，16H)，2.42(m，4H)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-({4-[2-(4-苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基甲基-哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]-6-嗎啉-4-基-[1，3，5]三嗪-2-基氨基}-甲基)-苯甲酰胺(化合物39)本標(biāo)題化合物39是按照與實(shí)施例1步驟5相同的方法制得的。1HNMR(CDCl3)δ(ppm)7.96(bs，1H)，7.87(d，J＝8.2Hz，2H)，7.39(d，J＝8.2Hz，2H)，7.33(d，J＝8.5Hz，1H)，7.10(dt，J＝7.6Hz，1.2Hz，1H)，6.87-6.81(m，3H)，6.75-6.68(m，2H)，5.93(s，2H)，5.67(bs，1H)，4.64(s，2H)，3.90(bs，2H)，3.75-3.35(m，16H)，2.45-2.30(m，4H)。
實(shí)施例40N-(2-氨基苯基)-6-(2-苯基氨基-乙基氨基)-煙酰胺(化合物44)步驟1N-(5-溴-吡啶-2-基)-N’-苯基-乙烷-1，2-二胺(化合物42)將2，5-二溴吡啶40(2.08g，8.6mmol)和苯基-1，2-乙基二胺(1.98g，14.6mmol，1.7當(dāng)量)的混合物在120℃于氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。冷卻至室溫后，將該固體混合物在研缽中研磨，溶解在乙酸乙酯(200mL)中，用飽和NaHCO3(2×50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。經(jīng)由短色譜柱(硅膠，洗脫用50％乙醚在己烷中的混合物)純化后，獲得了淺黃色固體42(1.75g，6.01mmol，70％產(chǎn)率)。13C NMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)158.6，149.6，148.8，139.9，129.8，117.1，113.1，110.8，106.6，43.9，41.5.LMRS＝294.0(M+1)。
步驟2N-(2-氨基苯基)-6-(2-苯基氨基-乙基氨基)-煙酰胺(化合物44)將5-溴-2-N-烷基-2-氨基吡啶42(352mg，1.2mmol)、1，2-苯二胺(3.95mmol，3.3當(dāng)量)、Pd(OAc)2(0.31mmol，26％mol)和1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵(124mg，0.22mmol)的混合物懸浮在脫氣的DMF(3mL)中，用二異丙基乙基胺(0.9mL，5.2mmol)處理，用CO沖洗該系統(tǒng)。將該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃，在該溫度下于CO(氣囊)下攪拌18小時(shí)。將DMF真空蒸發(fā)后，經(jīng)由色譜柱純化殘余物(硅膠，洗脫用3％-6％甲醇在二氯甲烷中的混合物)，獲得了258mg(0.74mmol，62％產(chǎn)率)氨基N-酰苯胺(aminoanilide)44。1H-NMR(CD3OD-d4)，δ(ppm)8.67(d，J＝2.2Hz，1H)，7.97(dd，J＝8.9Hz，2.5Hz，1H)，7.58(m，1H)，7.51(m，1H)，7.15(dd，J＝7.7Hz，1.1Hz，1H)，7.08(m，2H)，6.89(dd，J＝8.0Hz，1.4Hz，1H)，6.76(dt，J＝7.7Hz，4.4Hz，1H)，6.67(t，J＝7.7Hz，2H)，6.60(m，2H)，4.87(bs，4H)，3.60(t，J＝6.3Hz，2H)，3.35(t，J＝6.3Hz，2H)。
實(shí)施例41N-(2-氨基-苯基)-6-(4-甲氧基-芐基氨基)-煙酰胺(化合物45)步驟1N-(5-溴-吡啶-2-基)-4-甲氧基芐基胺(化合物43)2，6-二溴吡啶41(6.03mmol，2當(dāng)量)和對(duì)甲氧基芐基胺(413mg，3.01mmol)的混合物在120℃于氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。如上所述進(jìn)行后處理，并經(jīng)由硅膠墊純化(洗脫用50％乙醚在己烷中的混合物)，獲得了淺黃色固體43(773mg，2.60mmol，87％產(chǎn)率)。13C NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)159.1，139.7，132.1，130.5，128.9，127.2，116.2，114.3，104.8，55.4，46.0.LMRS＝295.0(M+1)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-6-(4-甲氧基-芐基氨基)-煙酰胺(化合物45)按照實(shí)施例40步驟2中描述的方法，但是用43代替42，以61％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物45。
實(shí)施例42N-(2-氨基苯基)-3-[6-(2-苯基氨基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-丙烯酰胺(化合物50)步驟23-[6-(2-苯基氨基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-丙烯酸叔丁酯(化合物46)在50mL燒瓶?jī)?nèi)，將42(308mg，1.05mmol)、丙烯酸叔丁酯(0.8mL，5.5mmol)、二異丙基乙基胺(0.8mL，4.6mmol)、三鄰甲苯基膦(POT，192mg，0.63mmol)、Pd2(dba)3(73mg，0.08mmol)在無水DMF(4mL)中的混合物在120℃(預(yù)熱的油浴)于氮?dú)夥障聰嚢?小時(shí)。除去DMF后，通過色譜法純化殘余粗產(chǎn)物(硅膠柱，50％乙醚在己烷中的混合物)，獲得了316mg的46(88％產(chǎn)率)。13C NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)166.6，159.3，149.6，147.8，140.7，134.9，129.1，119.8，117.3，115.9，112.6，107.8，80.0，43.5，40.9，28.1.LRMS＝340.3(M+1)。
步驟33-[6-(2-苯基氨基-乙基氨基)-吡啶-3-基)-丙烯酸(化合物48)將酯46(0.93mmol)溶解在40％TFA在二氯甲烷中的溶液(10mL)中，將該溶液在室溫?cái)嚢柽^夜。通過與乙腈(3×10mL)真空蒸餾來除去溶劑，在高度真空下貯存6小時(shí)。所得固體殘余物48不用進(jìn)一步純化直接用于下一反應(yīng)。LRMS＝284.1(M+1)。
步驟4N-(2-氨基苯基)-3-[6-(2-苯基氨基-乙基氨基)-吡啶-3-基]-丙烯酰胺(化合物50)將酸48(0.93mmol)、BOP(495mg，1.12mmol)和1，2-苯二胺(124mg，1.15mmol)的混合物溶解在無水乙腈(4mL)中，用三乙胺(0.8mL，5.7mmol)處理。將所得溶液在室溫于氮?dú)夥障聰嚢?6小時(shí)。真空濃縮后，粗產(chǎn)物經(jīng)由色譜柱純化(5％甲醇在二氯甲烷中的混合物)，然后從氯仿中重結(jié)晶，獲得了50(247mg，71％產(chǎn)率)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)9.25(bs，1H)，8.21(d，J＝1.6Hz，1H)，7.67(d，J＝8.5Hz，1H)，7.43(d，J＝15.7Hz，1H)，7.32(d，J＝7.4Hz，1H)，7.24(t，J＝1.0Hz，1H)，7.08(t，J＝7.4Hz，2H)，6.91(t，J＝8.0Hz，1H)，6.75(dt，J＝8.0Hz，0.4Hz，1H)，6.57(m，6H)，5.20(bs，1H)，3.48(t，J＝6.3Hz，2H)，3.33(bs，2H)，3.21(t，J＝6.3Hz，2H)。
實(shí)施例43N-(2-氨基苯基)-3-[6-(4-甲氧基-芐基氨基)-吡啶-2-基]-丙烯酰胺(化合物51)步驟2N-(2-氨基苯基)-3-[6-(4-甲氧基-芐基氨基)-吡啶-2-基]-丙烯酰胺(化合物51)按照實(shí)施例42步驟2、3、4中描述的方法，但是用43代替42，以50％的產(chǎn)率(2步的產(chǎn)率)獲得了本標(biāo)題化合物51。1H-NMR(CDCl3)，δ(ppm)7.60(bs，1H)，7.55(bs，1H)，7.43(t，J＝7.7Hz，1H)，7.29(d，J＝8.3Hz，2H)，7.17(d，J＝15.1Hz，1H)，7.06(t，J＝7.7Hz，1H)，6.88(d，J＝8.3Hz，2H)，6.80(m，2H)，6.70(m，3H)，6.41(d，J＝8.5Hz，1H)，4.50(d，J＝5.5Hz，2H)，3.80(s，3H)，3.45(bs，2H)。
實(shí)施例444-[2-(2-氨基-苯基氨基甲?；?-乙烯基]-芐基}-氨基甲酸吡啶-3-基甲基酯(化合物55)步驟1(4-溴-芐基)-氨基甲酸吡啶-3-基-甲基酯(化合物54)在室溫將4-溴芐基胺HCl(3.0g，13.4mmol)溶解在DMF(60mL)中，然后用10分鐘滴加Et3N(4.13mL，29.7mmol)，獲得了渾濁溶液。向該溶液中加入DBU(2.42mL，16.2mmol)和1，1’-羰基二咪唑(2.41g，14.8mmol)。在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，用10分鐘滴加3-吡啶基甲醇(1.44mL，14.8mmol)。將所得反應(yīng)混合物攪拌過夜，然后減壓濃縮。將所得殘余物用乙醚/EtOAc(9∶1)稀釋，然后用H2O洗滌。用Na2SO4將有機(jī)層干燥，過濾，然后濃縮，獲得了粗產(chǎn)物，將其從EtOAc中重結(jié)晶，獲得了2.55g產(chǎn)物54(59％產(chǎn)率，LRMS＝323(M+1)。
步驟24-[2-(2-氨基-苯基氨基甲?；?-乙烯基]-芐基}-氨基甲酸吡啶-3-基甲基酯(化合物55)按照實(shí)施例42步驟2、3的方法，但是用54代替42，用丙烯酸代替丙烯酸叔丁酯，以20％的總產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物55。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)10.03(s，1H)，9.32(s，1H)，8.65(s，1H)，8.55(d，J＝3.3Hz，1H)，7.85(d，J＝7.69Hz，1H)，7.40-7.60(m，6H)，7.31(d，J＝7.69Hz，1H)，6.89(dd，J＝7.14Hz，J＝7Hz，1H)，6.71-6.79(m，2H)，6.55(dd，J＝7.1Hz，J＝7Hz，1H)，5.20(s，2H)，4.93(bs，2H)。
實(shí)施例45N-(2-氨基苯基)-3-{4-[(3，4，5-三甲氧基-芐基氨基)-甲基]-苯基}-丙烯酰胺(化合物59)步驟1(4-溴-芐基)-(3，4，5-三甲氧基-芐基)-胺(化合物57)向K2CO3(522mg，3.77mmol)在無水DMF內(nèi)的攪拌著的懸浮液中加入3，4，5-三甲氧基芐基胺(1.10mL，6.44mmol，2.2當(dāng)量)，然后加入對(duì)溴芐基溴(0.73g，2.91mmol)在無水DMF(8mL)中的溶液。將該混合物在氮?dú)夥铡⒑诎禇l件下于室溫?cái)嚢?天，用二氯甲烷(200mL)稀釋，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。通過硅膠柱色譜純化殘余粗產(chǎn)物(洗脫用5％甲醇在二氯甲烷中的混合物)，獲得了2.59mmol(89％產(chǎn)率)二芐基胺57。13C NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)152.5，138.8，136.1，135.4，130.6，129.2，119.8，104.2，59.9，55.3，52.6，51.7.LRMS＝368.4(M+1)。
步驟2N-(2-硝基-苯基)-3-{4-[(3，4，5-三甲氧基-芐基氨基)-甲基]-苯基}-丙烯酰胺(化合物58)制備硝基N-丙烯?；桨吩?℃，向2-硝基苯胺(1.73g，12.5mmol)、DMAP(321mg，2.6mmol)和2，6-二-叔丁基-4-甲基苯酚(308mg)在無水二氯甲烷(50mL)內(nèi)的混合物中加入三乙胺(10.6mL，76mmol)，然后加入丙烯酰氯(3.2mL，38mmol，3.0當(dāng)量)，將該混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。用二氯甲烷(250mL)稀釋該溶液，冷卻至0℃，用飽和NaHCO3處理過量試劑(攪拌1小時(shí))。然后將有機(jī)層洗滌(5％KHSO4，然后是鹽水)，干燥(MgSO4)，過濾并減壓濃縮。通過硅膠柱色譜純化(洗脫用50％乙醚在己烷中的混合物)后，獲得了642mg(3.34mmol，27％產(chǎn)率)所需酰胺。13C NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)163.6，136.0，135.6，134.5，131.3，128.6，125.4，123.1，121.8.LRMS＝193.2(M+1)。
步驟3N-(2-氨基苯基)-3-{4-[(3，4，5-三甲氧基-芐基氨基)-甲基]-苯基}-丙烯酰胺(59)將硝基化合物58(127mg，0.27mmol)、SnCl2(429mg，2.26mmol，8.4當(dāng)量)和NH4OAc(445mg)的混合物懸浮在甲醇(9.5mL)和水(1.5mL)中，將該混合物在70℃加熱45分鐘。將該混合物用乙酸乙酯(100mL)稀釋，依次用鹽水和飽和NaHCO3洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，并濃縮。通過硅膠色譜柱純化(洗脫用5-10％甲醇在二氯甲烷中的混合物)，獲得了52mg(43％產(chǎn)率)59。1H-NMR(CDCl3)，δ(ppm)8.25(bs，1H)，7.59(d，J＝15.6Hz，1H)，7.38(d，J＝7.5Hz，2H)，7.29(d，J＝7.5Hz，2H)，7.25(m 1H)，7.02(t，J＝6.8Hz，1H)，6.75(m，2H)，6.62(d，J＝15.6Hz，1H)，6.58(s，2H)，3.97(bs，3H)，3.80(s，9H)，3.78(s，2H)，3.72(s，2H)。
實(shí)施例46N-(2-氨基苯基)-3-(4-{[(3，4，5-三甲氧基-芐基)-氨基]-甲基}-苯基)-丙烯酰胺(化合物61)步驟13-{4-{[甲基-(3，4，5-三甲氧基-芐基)-氨基]-甲基}-苯基)-N-(2-硝基-苯基)-丙烯酰胺(化合物60)將胺58(180.2mg，0.38mmol)溶解在88％的HCO2H(6mL)中，用過量低聚甲醛(7.67mmol)處理，將該混合物在70℃攪拌2.5小時(shí)。緩慢地加入飽和NaHCO3溶液，用二氯甲烷(2×75mL)萃取，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。通過硅膠色譜柱純化(洗脫用3-5％甲醇在二氯甲烷中的混合物)后，獲得了純的N-甲基胺60(118mg，63％產(chǎn)率)。13C NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)164.5，153.1，143.5，142.3，136.8，136.1，136.0，135.3，134.9，132.9，129.3，128.2，125.8，123.1，122.2，120.3，105.4，62.2，61.2，60.8，56.0，42.5.LRMS＝492.5(M+1)。
步驟2N-(2-氨基苯基)-3-(4-{[3，4，5-三甲氧基-芐基)-氨基]-甲基}-苯基)-丙烯酰胺(化合物61)按照實(shí)施例45步驟3中描述的方法，但是用硝基化合物60代替58，以72％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物61。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)9.15(bs，1H)，8.13(bs，1H)，7.58(d，J＝1.9Hz，1H)，7.30(m 4H)，7.12(d，J＝7.7Hz，1H)，6.91(m 3H)，6.75(d，J＝7.8Hz，1H)，6.57(m 2H)，4.83(bs，2H)，4.43(d，J＝5.5Hz，2H)，3.72(s，3H)，3.33(s，3H)。
實(shí)施例47N-(2-氨基苯基)-3-{4-(4-甲氧基-芐基氨基)-苯基}-丙烯酰胺(化合物65)步驟13-(4-氨基-苯基)-丙烯酸甲酯鹽酸鹽(化合物63)在室溫將4-氨基-肉桂酸(10.41g，0.052mol)溶解在甲醇(100mL)中。然后加入HCl在二噁烷中的溶液(15.6mL，4N)。將該反應(yīng)混合物加熱回流過夜。將澄清的溶液蒸發(fā)至一半體積，然后在室溫靜置。通過真空過濾收集所獲得的白色懸浮液。將母液再蒸發(fā)至四分之一體積，并冷卻至室溫。將懸浮液再次過濾。將兩次過濾所收集的固體合并，真空干燥，獲得了7.16g的63(64.3％產(chǎn)率)。LRMS178(M+1)。
步驟23-{4-(4-甲氧基-芐基氨基)-苯基}-丙烯酸甲酯鹽酸鹽(化合物64)向化合物63(3.57g，16.7mmol)在DMF(30mL)內(nèi)的懸浮液中加入Et3N，10分鐘后，依次加入4-甲氧基芐基氯(2.0g，12.8mmol)、NaI(0.38g，2.6mmol)和K2CO3(3.53g，25.5mmol)。將該混合物在60℃加熱過夜，蒸發(fā)至干。將殘余物在飽和NaHCO3溶液(50mL)與EtOAc(50mL×3)之間分配。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，然后蒸發(fā)至干。通過快速色譜法純化殘余物，然后從異丙醇中重結(jié)晶，獲得了1.16g的64(產(chǎn)率30.6％，LRMS＝298)和1.46g的63(49％回收產(chǎn)率)。
步驟3N-(2-氨基苯基)-3-{4-(4-甲氧基-芐基氨基)-苯基}-丙烯酰胺(化合物65)按照實(shí)施例42步驟4中描述的方法，但是用64代替48，以32％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物65。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)9.15(s，1H)，7.24-7.38(m，6H)，6.84-6.90(m，3H)，6.72(m，2H)，6.49-6.60(m，4H)，4.84(s，2H)，4.22(d，J＝5.77Hz，2H)。
實(shí)施例48N-(2-氨基-苯基)-3-(4-苯乙烯基氨基-苯基)-丙烯酰胺(化合物71)步驟1N-(4-碘-苯基)-(3-苯基-烯丙基)-胺(化合物69)按照實(shí)施例47步驟2中描述的方法，但是用68代替63，以70％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物69。LRMS＝288(M+1)
步驟2N-(2-氨基-苯基)-3-(4-苯乙烯基氨基-苯基)-丙烯酰胺(71)按照實(shí)施例42步驟2、4中描述的方法，但是用69代替42，用丙烯酸代替丙烯酸叔丁酯，以60％的總產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物71。1HNMR(DMSO-d6)δ(ppm)9.22(bs，1H)，7.45(d，J＝6.9Hz，2H)，7.39(d，J＝9.0Hz，2H)，7.34(d，J＝7.4Hz，2H)，7.26(dt，J＝7.4Hz，6.8Hz，2H)，6.93(dt，J＝7.9Hz，7.1Hz，1H)，6.78(d，J＝7.9Hz，1H)，6.69(d，J＝8.5Hz，2H)，6.63-6.55(m，4H)，6.44-6.37(m，1H)，4.95(bs，2H)，3.95(bs，2H)。
實(shí)施例49N-(2-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰胺)]-丙烯酰胺(化合物72)步驟1N-(4-碘-苯基)-4-甲氧基-苯甲酰胺(化合物70)按照實(shí)施例47步驟2中描述的方法，但是用68代替63，以90％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物70。LRMS＝354.0(M+1)步驟2N-(2-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰胺)]-丙烯酰胺(化合物72)按照實(shí)施例42步驟2、4中描述的方法，但是用70代替42，用丙烯酸代替丙烯酸叔丁酯，以90％的總產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物72。1HNMR(DMSO-d6)δ(ppm)9.4(bs，1H)，7.60(d，J＝8.5Hz，1H)，7.54-7.45(m，3H)，7.87(d，J＝7.7Hz，1H)，7.10(d，J＝8.8Hz，1H)，6.95-6.77(m，3H)，6.62(d，J＝7.7Hz，2H)，6.08-6.04(m，2H)，4.98(bs，2H)，3.72(s，3H)。
實(shí)施例50N-(2-氨基苯基)-3-{6-[2-(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-乙基氨基]-吡啶-3-基}-丙烯酰胺(化合物76)步驟1N-(5-溴-吡啶-2-基)-乙烷-1，2-二胺(化合物73)按照實(shí)施例40步驟1中描述的方法，但是用1，2-二氨基乙烷代替烷基胺，以84％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物73。13C NMR(300MHz，CD3OD)159.1，148.7，140.7，111.7，107.2，44.3，41.7.LRMS＝218.1(M+1)步驟23-[2-(5-溴-吡啶-2-基氨基)-乙基]-3H-喹唑啉-4-酮(化合物75)將伯胺73(1.17g，5.40mmol)和衣托酸酐74(880mg，5.40mmol)在甲醇(25mL)中的懸浮液于50℃攪拌3小時(shí)，然后濃縮。將所得油狀殘余物溶解在88％甲酸(20mL)中，回流過夜。除去甲酸后，經(jīng)由硅膠柱色譜純化固體殘余物(5％甲醇在二氯甲烷中的混合物)，獲得了1.24g(3.6mmol，67％產(chǎn)率)75。13C NMR(300MHz，CDCl3)161.6，156.8，147.7，147.6，147.2，139.8，134.5，127.4，126.8，126.3，121.6，110.1，107.0，46.3，40.1.LRMS＝347.1(M+1)。
步驟3N-(2-氨基苯基)-3-{6-[2-(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-乙基氨基]-吡啶-3-基}-丙烯酰胺(化合物76)按照實(shí)施例42步驟2-4中描述的方法，但是用75代替42，以68％的總產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物76。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)9.24(bs，1H)，8.17(dd，J＝8.0Hz，1.6Hz，1H)，8.11(bs，1H)，8.08(d，J＝1.9Hz，1H)，7.82(dt，J＝8.5Hz，1.4Hz，1H)，7.64(d，J＝8.2Hz，2H)，7.25(t，J＝5.8Hz，1H)，6.90(dt，J＝15.7Hz，1H)，6.74(dd，J＝8.0Hz，1.4Hz，1H)，6.58(m，3H)，4.95(bs，2H)，4.17(t，J＝5.2Hz，2H)，3.68(m，J＝5.2Hz，2H)。
實(shí)施例51N-(2-氨基苯基)-3-{6-[2-(4-芐基-2，6-二氧代-哌嗪-1-基)-乙基氨基]-吡啶-3-基}-丙烯酰胺(化合物78)步驟24-芐基-1-[2-(5-溴-吡啶-2-基氨基)-乙基]-哌嗪-2，6-二酮(化合物77)將芐基亞氨基二乙酸(702mg，3.15mmol)和乙酸酐(15mL)的懸浮液在120℃攪拌45分鐘。將該反應(yīng)混合物用無水甲苯稀釋，真空濃縮以除去揮發(fā)性物質(zhì)。將殘余物溶解在無水甲苯(15mL)中，經(jīng)由套管轉(zhuǎn)移到含有胺73(475mg，3.2mmol)的反應(yīng)燒瓶中。將該混合物在90℃加熱16小時(shí)，濃縮，通過硅膠柱色譜純化(洗脫用5％甲醇在二氯甲烷中的混合物)，獲得了684mg(1.70mmol，54％產(chǎn)率)77。
步驟3N-(2-氨基苯基)-3-{6-[2-(4-芐基-2，6-二氧代-哌嗪-1-基)-乙基氨基]-吡啶-3-基}-丙烯酰胺(化合物78)按照實(shí)施例42步驟2-4中描述的方法，但是用77代替42，以60％的總產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物78。1H-NMR(CD3OD-d4)，δ(ppm)8.09(d，J＝1.8Hz，1H)，7.68(dd，J＝8.7Hz，2.1Hz，1H)，7.53(d，J＝15.6Hz，1H)，7.29(m，6H)，7.20(dd，J＝7.8Hz，1.2Hz，1H)，7.02(dt，J＝9.0Hz，1.2Hz，1H)，6.86(dd，J＝8.1Hz，1.2Hz，1H)，6.73(dt，J＝7.5Hz，1.5Hz，1H)，6.61(d，J＝15.6Hz，1H)，6.50(d，J＝8.7Hz，1H)，4.85(bs，3H)，3.97(t，J＝7.5Hz，2H)，3.60(s，2H)，3.57(t，J＝7.5Hz，2H)，3.38(s，4H)。
實(shí)施例52(E)-4-{[4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基]-甲基}-N-(2-氨基-苯基)-肉桂酰胺(化合物83)步驟14，6-二氯-2-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪(化合物79)在-78℃、氮?dú)夥障?，通過套管向氰尿酰氯(13.15g，71.33mmol)在無水THF(100mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中緩慢地加入2-氨基茚滿(10.00g，75.08mmol)、i-Pr2NEt(14.39mL，82.59mmol)在無水THF(60mL)中的溶液。50分鐘后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜(AcOEt/CH2Cl22/98→5/95)和共沉淀(AcOEt/己烷)純化該殘余粗產(chǎn)物，獲得了本標(biāo)題化合物79(18.51g，65.78mmol，92％產(chǎn)率)，為米黃色粉末。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.29-7.18(m，4H)，6.02(bd，J＝6.3Hz，1H)，4.94-4.84(m，1H)，3.41(dd，J＝16.2，6.9Hz，2H)，2.89(dd，J＝16.1，4.5Hz，2H)。
步驟22-(4-溴-芐基-氨基)-4-氯-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪(化合物80)在室溫、氮?dú)夥障?，?9(2.68g，9.52mmol)在無水THF(50mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中分別加入i-Pr2NEt(4.79mL，27.53mmol)和4-溴芐基胺.HCl(2.45g，11.01mmol)。17小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/CH2Cl23/97→5/95)，獲得了本標(biāo)題化合物80(4.00g，9.29mmol，97％產(chǎn)率)，為白色粉末。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，7.52-7.42(m，2H)，7.26-7.11(m，6H)，6.51和6.12(2m，1H)，5.72-5.46(m，1H)，4.94-4.64(m，1H)，4.62-4.46(m，2H)，3.43-3.16(m，2H)，2.92-2.74(m，2H)。
步驟34-氨基-2-(4-溴-芐基-氨基)-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪(化合物81)在75mL密封燒瓶?jī)?nèi)，將80(2.05g，4.76mmol)在無水1，4-二噁烷(60mL)中的溶液于室溫?cái)嚢?，用NH3氣飽和5分鐘，溫?zé)嶂?40℃并保持18小時(shí)。讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，將使用NH3氣的飽和步驟重復(fù)進(jìn)行5分鐘，將該反應(yīng)混合物再次溫?zé)嶂?40℃并保持24小時(shí)。然后讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒入1N HCl內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl25/95)，獲得了本標(biāo)題化合物81(1.96g，4.76mmol，定量產(chǎn)率)，為無色泡沫狀物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.43(d，J＝8.2Hz，2H)，7.25-7.12(m，6H)，5.70-5.10(m，2H)，5.00-4.65(m，3H)，4.52(bs，2H)，3.40-3.10(m，2H)，2.90-2.65(m，2H)。
步驟4(E)-4-{[4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基]-甲基}-N-[2-(N-叔丁氧基羰基)-氨基-苯基]-肉桂酰胺(化合物82)制備N-[2-(N-叔丁氧基羰基)-氨基-苯基]-丙烯酰胺按照實(shí)施例45步驟2中描述的方法，但是用硝基化合物2-(N-叔丁氧基羰基)-氨基-苯胺代替2-硝基苯胺，以77％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.51(bs，1H)，7.60-7.45(m，1H)，7.38-7.28(m，1H)，7.20-7.05(m，2H)，6.98(bs，1H)，6.41(dd，J＝17.0Hz，1.1Hz，1H)，6.25(dd，J＝16.9Hz，10.0Hz，1H)，5.76(dd，J＝10.2Hz，1.4Hz，1H)，1.52(s，9H)。
在50mL密封燒瓶?jī)?nèi)，將81(300mg，0.73mmol)、丙烯酰胺(230mg，0.88mmol)、Et3N(407μl，2.92mmol)、三鄰甲苯基膦(POT，13mg，0.04mmol)、Pd2(dba)3(20mg，0.02mmol)在無水DMF(10mL)中的溶液于室溫?cái)嚢?，用氮?dú)怙柡?5分鐘，溫?zé)嶂?00℃并保持15小時(shí)。然后讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl22/98→5/95)，獲得了本標(biāo)題化合物82(240mg，0.41mmol，56％產(chǎn)率)，為米黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.46(bs，1H)，7.71(bd，J＝15.7Hz，1H)，7.62-7.05(m，13H)，6.54(bd，J＝15.9Hz，1H)，5.95-4.90(m，4H)，4.85-4.48(m，3H)，3.40-3.14(m，2H)，2.90-2.70(m，2H)，1.52(s，9H)。
步驟5(E)-4-{[4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基]-甲基}-N-(2-氨基-苯基)-肉桂酰胺(化合物83)在室溫，向82(230mg，0.39mmol)在CH2Cl2(5mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入TFA(1mL，95％水溶液)。18小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NaHCO3水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NaHCO3、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl25/95)，獲得了本標(biāo)題化合物83(170mg，0.35mmol，89％產(chǎn)率)，為黃色固體。1HNMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)8.87(bs，1H)，7.69(d，J＝15.7Hz，1H)，7.59(bd，J＝7.7Hz，2H)，7.49-7.34(m，3H)，7.28-7.11(m，4H)，7.05-6.91(m，2H)，6.88(dd，J＝8.0，1.4Hz，1H)，6.69(td，J＝7.6，1.4Hz，1H)，6.65-5.50(m，4H)，4.83-4.53(m，5H)，3.34-3.11(m，2H)，2.98-2.80(m，2H)。
a.Tf2O/Py/DMAP/0Cb.對(duì)甲氧基芐基胺/120Cc.1，2-苯二胺/CO(40psi)/Pd(OAc)2/dppf/DMF/DIPEA/70Cd.丙烯酸叔丁酯/Pd2(dba)3/POT/DMF/DIPEA/120Ce.TFA/DCM/Rtf.1，2-苯二胺/BOP/DMF/TEA/rT實(shí)施例53N-(2-氨基苯基)-2-(4-甲氧基-芐基氨基)-喹啉-6-基-酰胺(化合物87)步驟12，6-二三氟甲磺酰氧基-喹啉(化合物85)將2，6-二羥基喹啉84(1.254g，7.78mmol)和DMAP(幾粒晶體)在無水吡啶(15mL)中的溶液用純凈的三氟甲磺酸酐(5.2g，18.4mmol，1.2當(dāng)量)處理，在0℃攪拌5小時(shí)。然后將該溶液倒入鹽水/飽和NaHCO3混合物內(nèi)，用二氯甲烷(2×150mL)萃取，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。通過硅膠柱色譜純化(30％-50％乙醚在己烷中的混合物)，獲得了2.58g(6.1mmol，78％產(chǎn)率)85。13C NMR(300MHz，CDCl3)154.5，147.8，144.6，142.0，131.6，127.8，124.9，119.3，118.7，114.9.LRMS＝426.0(M+1)。
步驟2N-(2-氨基苯基)-2-(4-甲氧基-芐基氨基)-喹啉-6-基-酰胺(化合物87)按照實(shí)施例40步驟1、2中描述的方法，但是用85代替40，以92％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物87。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)9.66(bs，1H)，8.32(s，1H)，8.05(d，J＝8.8Hz，1H)，7.96(dd，J＝9.1Hz，2.2Hz，1H)，7.72(d，J＝2.2Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.5Hz，2.2Hz，1H)，7.34(dd，J＝8.5Hz，2.2Hz，1H)，7.20(d，J＝7.7Hz，1H)，6.97(t，J＝7.7Hz，1H)，6.90(m 2H)，6.80(d，J＝7.9Hz，1H)，6.61(t，J＝6.3Hz，1H)，4.90(bs 2H)，4.58(d，J＝3.3Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.33(bs，1H)。
實(shí)施例54N-(2-氨基苯基)-3-[2-(4-甲氧基-芐基氨基)-喹啉-6-基]-丙烯酰胺(化合物88)步驟3N-(2-氨基苯基)-3-[2-(4-甲氧基-芐基氨基)-喹啉-6-基]-丙烯酰胺(化合物88)按照實(shí)施例42步驟1-4中描述的方法，但是用85代替40，以71％的總產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物88。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)9.70(bs，1H)，9.40(bs，1H)，8.20(d，J＝8.9Hz，1H)，8.03(bs，2H)，7.94(d，J＝7.2Hz，1H)，7.64(dd，J＝15.7Hz，2.5Hz，1H)，7.41(d，J＝8.5Hz，2H)，7.39(m，1H)，7.14(d，J＝8.9Hz，1H)，7.05(d，J＝15.7Hz，1H)，6.97(m，1H)，6.95(d，J＝8.5Hz，2H)，6.81(d，J＝8.0Hz，1H)，6.65(t，J＝7.2Hz，1H)，4.76(s，2H)，3.75(s，3H)。
實(shí)施例55-84實(shí)施例55-84描述了使用實(shí)施例40-54中描述的用于制備化合物44-88的相同方法來制備化合物89-118。特征數(shù)據(jù)列在表3a-d中。
表3a在實(shí)施例42-84中制備的化合物的特征
















表3b



表3c


表3d






























實(shí)施例85N-(2-氨基-苯基)-4-(1H-苯并咪唑-2-基硫基甲基)-苯甲酰胺(化合物126)步驟14-(1H-苯并咪唑-2-基硫基甲基)-苯甲酸甲酯(化合物122)按照實(shí)施例47步驟2中描述的方法，但是使用119，并用121代替63，以95％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物122。LRMS＝299.1(M+1)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(1H-苯并咪唑-2-基硫基甲基)-苯甲酰胺(126)按照實(shí)施例1步驟4和5中描述的方法，但是用122代替6，以62％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物126。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)9.57(s，1H)，7.89(d，J＝8.2Hz，2H)，7.55(d，J＝8.2Hz，2H)，7.53(bs，2H)，7.36(bs，2H)，7.14-7.08(m，3H)，6.94(t，J＝8.2Hz，1H)，6.74(d，J＝6.9Hz，1H)，6.56(t，J＝8.0Hz，1H)，4.87(bs，2H)，4.62(s，2H)。
實(shí)施例87N-(2-氨基-苯基)-4-[6-(2-嗎啉-4-基-乙基氨基)-苯并噻唑-2-基硫基甲基]-苯甲酰胺(化合物128)步驟14-(6-氨基-苯并噻唑-2-基硫基甲基)-苯甲酸甲酯(122)按照實(shí)施例47步驟2中描述的方法，但是使用120，并用121代替63，以45％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物122。LRMS＝331.0(M+1)。
步驟24-[6-(2-嗎啉-4-基-乙基氨基)-苯并噻唑-2-基硫基甲基]-苯甲酸甲酯(化合物124)向4-(6-氨基-苯并噻唑-2-基硫基甲基)-苯甲酸甲酯122(800mg，2.42mmol)在DMF(24mL)內(nèi)的溶液中依次加入固體4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(296mg，2.66mmol)、K2CO3(611mg，5.08mmol)、NaI(363mg，2.42mmol)、Et3N(370μL，2.66mmol)和碘化四丁基銨(894mg，2.42mmol)，將該混合物在120℃攪拌24小時(shí)，再加入4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(296mg，2.66mmol)。將該混合物在120℃攪拌8小時(shí)，真空除去溶劑。將所得黑色漿液在H2O與EtOAc之間分配。將有機(jī)層依次用HCl 1N和飽和NaHCO3水溶液洗滌。用EtOAc將沉淀萃取2次，用MgSO4干燥，并濃縮。通過快速色譜法純化(MeOH/CHCl35∶95 to10∶90)，獲得了48mg(4％產(chǎn)率)124，為淺黃色油狀物。LRMS＝444.1(M+1)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-[6-(2-嗎啉-4-基-乙基氨基)-苯并噻唑-2-基硫基甲基]-苯甲酰胺(化合物128)按照實(shí)施例1步驟4和5中描述的方法，但是用124代替6，以76％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物128。1H NMR(丙酮-d6)δ(ppm)9.06(bs，1H)，7.98(d，J＝8.2Hz，2H)，7.63(d，J＝8.5Hz，2H)，7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.06(d，J＝2.2Hz，1H)，7.02-6.97(m，1H)，6.87-6.82(m，2H)，6.66(dt，J＝7.4Hz，1.4Hz，1H)，4.63(s，2H)，3.64-3.60(m，4H)，3.25(t，J＝6.3Hz，2H)，2.63(t，J＝6.3Hz，2H)，2.54-2.42(m，4H)。
實(shí)施例88N-(2-氨基-苯基)-4-(喹啉-2-基硫基甲基)-苯甲酰胺(化合物131)步驟12-(4-溴-芐基硫基)-喹啉(化合物130)按照實(shí)施例47步驟2中描述的方法，但是用129代替63，以89％的產(chǎn)率獲得了標(biāo)題化合物130。LRMS＝332.0(M+1)。
步驟2M(2-氨基-苯基)-4-(喹啉-2-基硫基甲基)-苯甲酰胺(131)按照實(shí)施例40步驟2中描述的方法，但是用129代替42，以70％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物131。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)9.62(bs，1H)，8.21(d，J＝8.8Hz，1H)，8.00-7.89(m，4H)，7.79(dd，J＝6.8Hz，1.3Hz，1H)，7.68(d，J＝6.3Hz，2H)，7.56(t，J＝6.8Hz，1H)，7.44(d，J＝8.7Hz，1H)，7.17(d，J＝8.2Hz，1H)，6.99(dt，J＝7.9Hz，7.4Hz，1H)，6.79(d，J＝6.9Hz，1H)，6.61(dt，J＝7.7Hz，7.4Hz，1H)，4.69(s，2H)。
實(shí)施例89N-(2-氨基-苯基)-4-(嘧啶-2-基氨基甲基)-苯甲酰胺(化合物134)步驟14-(嘧啶-2-基氨基甲基)-苯甲酸甲酯(化合物133)按照實(shí)施例47步驟2中描述的方法，但是用132代替63，以76％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物133。LRMS＝244.2(M+1)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(嘧啶-2-基氨基甲基)-苯甲酰胺(134)按照實(shí)施例1步驟4和5中描述的方法，但是用129代替6，以91％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物134。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)9.6(bs，1H)，8.32(d，J＝4.9Hz，2H)，7.97(dt，J＝9.9Hz，7.9Hz，2H)，7.85-7.83(m，1H)，7.47，(d，J＝8.2Hz，2H)，7.20(d，J＝7.9Hz，1H)，7.01(dt，J＝7.7Hz，7.4Hz，1H)，6.82(d，J＝7.9Hz，1H)，6.66-6.62(m，1H)，4.98(bs，2H)，4.61(d，2H)。
實(shí)施例90N-(2-氨基-苯基)-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基硫基甲基]-苯甲酰胺(化合物139)步驟1[2-(4-碘-苯甲?；被?-苯基]-氨基甲酸叔丁酯(化合物135)向二碳酸二叔丁酯(39g，181mmol)在THF(139mL)中的置于水浴內(nèi)的溶液中加入1，2-苯二胺(15g，139mmol)和DMAP(1.7g，14mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)，并真空除去溶劑。將粗產(chǎn)物在EtOAc與水之間分配。將有機(jī)層用HCl 1N洗滌，然后用飽和NaHCO3水溶液洗滌。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮，獲得了化合物(18.9g，65％產(chǎn)率)，為淺米黃色粉末。LRMS＝209.1(M+1)。
在室溫向4-碘苯甲酸(8.0g，32.3mmol)在DMF(65mL)內(nèi)的溶液中依次加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二酰亞胺鹽酸鹽(8.0g，41.9mmol)和1-羥基苯并三唑(5.2g，38.7mmol)。將該混合物攪拌1小時(shí)，經(jīng)由套管向該混合物中加入(2-氨基-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(6.3g，30.2mmol)在DMF(20mL)中的溶液，然后加入三乙胺(5.9mL，4.9mmol)。將該混合物攪拌16小時(shí)，并真空除去溶劑。將粗產(chǎn)物在氯仿與水之間分配。將有機(jī)層用飽和NaHCO3水溶液洗滌，用MgSO4干燥，濃縮，獲得了淺棕色漿狀物，將其在熱的EtOAc或Et2O中結(jié)晶，獲得了135(9.3g，70％產(chǎn)率)，為白色固體。LRMS＝461.0(M+Na+)。
步驟2N-[2-叔丁氧基羰基氨基-苯基)-對(duì)氨基甲?；郊姿峒柞?化合物136)按照實(shí)施例40步驟2中描述的方法，但是用135代替42，以95％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物136。LRMS＝393.1(M+Na+)。
步驟3[2(4-羥基甲基-苯甲?；被?-苯基]-氨基甲酸叔丁酯(137)在氮?dú)夥障拢蚶鋮s至-20℃的136(7.5g，20.6mmol)在THF(40mL)內(nèi)的溶液中加入1M DIBAL-H(122mL，122mmol)在甲苯中的溶液。在室溫?cái)嚢?8小時(shí)后，將該混合物冷卻至0℃，通過滴加H2O(10mL)和2N NaOH(5mL)來小心地處理。將鋁鹽傾析出來，取出上清液。將有機(jī)層用H2O、1N HCl(6次)、飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮(2.04g，43％)。通過快速色譜法純化粗產(chǎn)物(EtOAc/己烷 50∶50 to 70∶30)，獲得了137(1.14g，16％產(chǎn)率)，為固體泡沫狀物。LRMS＝365.2(M+Na+)。
步驟4{2-[4-(1-甲基-咪唑-2-基硫基甲基)-苯甲?；被鵠-苯基}-氨基甲酸叔丁酯(化合物138)在室溫、于氮?dú)夥障?，向N-甲基-2-巰基咪唑(28mg，0.25mmol)在THF(1mL)內(nèi)的溶液中依次加入137(70mg，0.20mmol)、三苯基膦(70mg，0.27mmol)，然后滴加偶氮二甲酸二乙酯(48μL，0.31mmol)。將該混合物攪拌2小時(shí)，并真空除去溶劑。通過快速色譜法純化，使用MeOH/CHCl3(5∶95)洗脫，以91％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物138(81mg)，發(fā)現(xiàn)其含有某些亞肼基二甲酸二乙酯殘余物。該化合物不用進(jìn)一步純化直接使用。
步驟5N-(2-氨基-苯基)-4-(1-甲基-1H-咪唑-2-基硫基甲基]-苯甲酰胺(化合物139)按照實(shí)施例42步驟3中描述的方法，但是用138代替46，以62％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物139。1H NMR(丙酮-d6)δ(ppm)9.07(bs，1H)，7.93(d，J＝8.2Hz，2H)，7.37(d，J＝8.2Hz，2H)，7.29(d，J＝8.0Hz，1H)，7.10(d，J＝1.1Hz，1H)，7.03-6.96(m，2H)，6.86(dd，J＝8.0Hz，1.4Hz，1H)，6.67(dt，J＝7.4Hz，1.1Hz，1H)，4.63(bs，2H)，4.29(s，2H)，3.42(s，3H)。
實(shí)施例91N-(2-氨基-苯基)-6-(3-甲氧基苯基)-煙酰胺(化合物141)向3-甲氧基苯基硼酸(152mg，1.0mmol)和140(248g，1.0mmol)的混合物中加入苯(8mL)和乙醇(4mL)，然后加入2M Na2CO3水溶液(3.2mL，6.4mmol)。將該反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障聰嚢?0分鐘，然后迅速加入Pd(PPh3)4(58mg，0.05mmol)?；亓?4小時(shí)后，將該混合物冷卻至室溫，經(jīng)由硅藻土墊過濾，用乙酸乙酯(30mL)洗滌。將該有機(jī)溶液用鹽水(5mL)洗滌，干燥(MgSO4)，并濃縮。通過快速硅膠色譜純化(己烷/乙酸乙酯1/1)，獲得了141(302mg，95％產(chǎn)率)。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)9.11(d，J＝1.8Hz，1H)，8.30(dd，J＝8.4Hz，1.8Hz，1H)，7.57(d，J＝8.4Hz，1H)，7.52-7.47(m，1H)，7.36(m，1H)，7.22(m，1H)，7.09-6.78(m，4H)，3.84(s，3H)，3.39(br s，2H)。
a.對(duì)氨基甲基苯甲酸/AcOH/5min/回流b.HOBT/EDC/1，2-二氨基苯實(shí)施例92N-(2-氨基-苯基)-4-(1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基甲基)-苯甲酰胺(化合物144)步驟14-(1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基甲基)-苯甲酸(化合物143)向苯-1，2-二甲醛142(1.0g，7.46mmol)在10mL乙酸內(nèi)的溶液中加入4-氨基甲基苯甲酸(1.13g，7.46mmol)。將該反應(yīng)混合物回流5分鐘，并冷卻至室溫。形成了結(jié)晶沉淀，用CH2Cl2研制，獲得了本標(biāo)題化合143(1.29g，49％)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基甲基)-苯甲酰胺(化合物144)在室溫，向上述羧酸(0.32g，0.89mmol)在DMF(8mL)內(nèi)的溶液中加入HOBt(0.16g，1.15mmol)和EDC(0.25g，1.33mmol)，將該溶液攪拌1.5小時(shí)。最后，加入苯二胺(0.12g，1.07mmol)，將該混合物攪拌18-20小時(shí)。真空除去DMF，將粗產(chǎn)物在乙酸乙酯與H2O之間分配。用Na2SO4將有機(jī)層干燥，并濃縮。通過柱色譜法純化(CH2Cl2-MeOH(19∶1))，以46％的產(chǎn)率獲得了144。1H NMR(DMSO-d6)δ9.71(s，1H)，7.46(d，J＝8.0Hz，2H)，7.80(d，J＝8.0Hz，2H)，7.55-7.70(m，3H)，7.46(d，J＝8.2Hz，2H)，7.20(d，J＝7.7Hz，1H)，7.02(t，J＝7.7Hz，1H)，6.83(d，J＝8.0Hz，1H)，6.65(t，J＝7.4Hz，1H)，4.93(bs，2H)，4.87(s，2H)，4.47(s，2H)。
a.對(duì)氨基甲基苯甲酸/AcOH/回流/3hrsb.HOBT/EDC/1，2-二氨基苯c.4-(2-氨基乙基)苯酚/AcOH/5hrs/回流d.PhNTf2/NaH/THF-DMF/30min/0℃e.1.CO/Pd(OAc)2/dppf/Et3N/MeOH-DMF/4天/75℃2.AcOH/HCl/3hrs/回流實(shí)施例94N-(2-氨基-苯基)-4-(1，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基甲基)-苯甲酰胺(化合物149)將鄰苯二甲酸酐148(1.3g，8.9mmol)和4-氨基甲基苯甲酸在20mL乙酸中回流3小時(shí)，冷卻至室溫，蒸發(fā)，獲得了固體殘余物，用水研制，過濾并干燥，獲得了羧酸中間體(1.7g，68％)。LMRS＝282.0(M+1)。
按照類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用上述酸代替143，以17％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物149。1H NMR(DMSO d6)δ9.59(s，1H)，7.82-7.91(m，6H)，7.40(d，J＝8.0Hz，2H)，7.11(d，J＝7.7Hz，1H)，6.93(t，J＝7.7Hz，1H)，6.73(d，J＝8.0Hz，1H)，6.55(t，J＝7.4Hz，1H)，4.83(bs，4H)。
實(shí)施例95N-(2-氨基-苯基)-4-[2-(1，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-乙基]-苯甲酰胺(化合物152)步驟12-[2-(4-羥基-苯基)-乙基]-異吲哚-1，3-二酮(化合物150)按照類似于實(shí)施例94步驟1中描述的方法，但是用4-氨基甲基苯甲酸代替酪胺，以48％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物150。LMRS＝268.0(M+1)。
步驟2三氟甲磺酸4-[2-(1，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)乙基)-苯基酯(151)在0℃，向氫化鈉(90mg，25mmol)在無水THF(20mL)內(nèi)的溶液中加入150(500mg，8.9mmol)，然后加入無水DMF(2mL)。將該反應(yīng)混合物在0℃攪拌20分鐘，向其中滴加PhN(Tf)2，再攪拌2小時(shí)，蒸發(fā)，獲得了固體殘余物，通過硅膠柱色譜純化(CH2Cl2-MeOH(19∶1))，獲得了151(639mg，86％產(chǎn)率)。LMRS＝400.0(M+1)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-[2-(1，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-乙基]-苯甲酰胺(化合物152)按照類似于實(shí)施例40步驟2中描述的方法，但是用151代替42，以15％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物152。1H NMR(DMSO d6)δ9.57(s，1H)，7.78-7.87(m，6H)，7.31(d，J＝8.0Hz，2H)，7.12(d，J＝7.7Hz，1H)，6.93(t，J＝6.9Hz，1H)，6.74(d，J＝8.0Hz，1H)，6.56(t，J＝7.4Hz，1H)，4.83(bs，2H)，3.85(t，J＝7.1Hz，2H)，3.00(t，J＝7.1Hz，2H)。
實(shí)施例96N-(2-氨基-苯基)-4-(4-氧代-4H-喹唑啉-3-基甲基)-苯甲酰胺(化合物154)將4-氨基甲基苯甲酸(1.00g，6.60mmol)在水(20mL)中的懸浮液用Et3N(0.86mL，6.60mmol)處理，然后加入衣托酸酐153(980mg，6.00mmol)。將該反應(yīng)混合物在40℃加熱3小時(shí)，蒸發(fā)，形成了油狀殘余物，將其在甲酸(20mL)中回流7小時(shí)。真空除去甲酸，獲得了固體，用水研制，過濾，獲得了羧酸(1.61g，96％).LMRS＝281.0(M+1)。
按照類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用上述羧酸代替143，以43％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物154。1H NMR(DMSO d6)δ9.71(s，1H)，8.68(s，1H)，8.23(d，J＝8.0Hz，1H)，8.01(d，J＝8.0Hz，1H)，7.92(t，J＝8.0，2H)，7.78(d，J＝8.0Hz，1H)，7.63(t，J＝7.4，1H)，7.55(d，J＝7.7Hz，2H)，7.22(d，J＝7.4Hz，1H)，7.04(t，J＝7.1Hz，1H)，6.85(d，J＝8.0Hz，1H)，6.67(t，J＝7.4Hz，1H)，5.35(s，2H)。
實(shí)施例97N-(2-氨基-苯基)-4-(4-氧代-4H-苯并[d][1，2，3]三嗪-3-基甲基)-苯甲酰胺(化合物155)將4-氨基甲基苯甲酸(1.00g，6.60mmol)在水(20mL)中的懸浮液用Et3N(0.86mL，6.60mmol)處理，然后加入衣托酸酐(980mg，6.00mmol)。將該反應(yīng)混合物在40℃加熱3小時(shí)，冷卻至0℃。用濃HCl(5mL)將該冷的反應(yīng)混合物酸化，用5分鐘向其中滴加NaNO2溶液(520mg，7.5mmol 5mL水溶液)，然后在室溫靜置過夜。收集所形成的沉淀，用水洗滌，并干燥，獲得了羧酸(1.62g，96％).LMRS＝282.0(M+1)。
按照類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用上述羧酸代替143，以27％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物155。1H NMR(DMSO d6)δ9.62(s，1H)，8.25(t，J＝6.7Hz，2H)，8.11(ddd，J＝7.1Hz，1.4Hz，1H)，7.93-7.98(m，3H)，7.49(d，J＝8.2Hz，2H)，7.13(d，J＝7.7Hz，1H)，6.94(t，J＝8.0Hz，1H)，6.75(d，J＝8.0Hz，1H)，6.57(t，J＝7.7Hz，1H)，5.66(s，2H)，4.87(bs，2H)。
實(shí)施例98N-(2-氨基-苯基)-4-(2，4-二氧代-1，4-二氫-2H-喹唑啉-3-基甲基)-苯甲酰胺(化合物157)步驟14-[(2-氨基-苯甲?；被?-甲基]-苯甲酸(化合物156)向4-氨基甲基苯甲酸(5.09g，33.7mmol)在H2O(50mL)內(nèi)的懸浮液中加入Et3N(4.7mL，33.7mmol)，然后加入衣托酸酐153(5.0g，30.6mmol)。將該棕色混合物在40℃加熱2小時(shí)直至該混合物變均勻，然后真空除去Et3N。將所得水溶液酸化(10％HCl/H2O)，將該混合物在H2O與乙酸乙酯之間分配。將合并的有機(jī)萃取液用Na2SO4干燥，過濾并蒸發(fā)，獲得了156，為白色固體(6.0g，72％)。LMRS＝271.0(M+1)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(2，4-二氧代-1，4-二氫-2H-喹唑啉-3-基甲基)-苯甲酰胺(化合物157)將上述羧酸156(1.72g，6.36mmol)懸浮在NaOH(2.55g，63.6mmol)在H2O(12mL)內(nèi)的溶液中。向該溶液中加入二噁烷(10mL)直至該混合物變均勻。將該溶液在冰浴中冷卻至0℃，用2小時(shí)滴加氯甲酸甲酯(1.25mL，16.1mmol)。反應(yīng)完全后，將過量氯甲酸甲酯和二噁烷真空除去，用甲醇(80mL)和H2O(20mL)將該混合物稀釋。將該溶液在50℃加熱1小時(shí)直至環(huán)合完全。真空除去甲醇，然后用乙酸乙酯萃取水層。將水相酸化(10％HCl/H2O)，用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。將有機(jī)萃取液合并，用Na2SO4干燥，過濾并蒸發(fā)至干。用溫?zé)岬募状佳兄扑么之a(chǎn)物，獲得了羧酸，為白色固體(1.7g，90％)。LMRS＝319.0(M+Na)。
按照類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用所得喹唑啉二酮羧酸代替143，獲得了本標(biāo)題化合物157。1H NMR(DMSO-d6)δ11.56(brs，1H)，9.59(brs，1H)，7.96-7.88(m，3H)，7.67(dt，J＝8.4，1.4Hz，1H)，7.30(d，J＝7.8Hz，2H)，7.21(t，J＝7.5Hz，2H)，7.13(d，J＝6.9Hz，1H)，6.92(dt，J＝6.9，1.2Hz，1H)，6.75(d，J＝6.9Hz，1H)，6.57(t，J＝6.9Hz，1H)，5.15(brs，2H)，4.86(brs，2H)。
實(shí)施例99N-(2-氨基-苯基)-4-(1-甲基-2，4-二氧代-1，4-二氫-2H-喹唑啉-3-基甲基)-苯甲酰胺(化合物158)步驟24-(1-甲基-2，4-二氧代-1，4-二氫-2H-喹唑啉-3-基甲基)-苯甲酸甲酯向喹唑啉二酮羧酸(1.0g，3.38mmol)在DMF(7mL)內(nèi)的溶液中加入K2CO3(1.4g，10.1mmol)，然后將該混合物冷卻至0℃。加入MeI(1.05mL，16.9mmol)，將該混合物在冰浴中溫?zé)嶂潦覝夭⒈３诌^夜。真空除去過量甲基碘和DMF，將粗產(chǎn)物在乙酸乙酯與H2O之間分配。將水相再次用乙酸乙酯洗滌，將合并的有機(jī)萃取液用Na2SO4干燥，然后真空濃縮，獲得了所需產(chǎn)物，為灰白色固體(0.93g，85％).LMRS＝325.0(M+1)。
步驟34-(1-甲基-2，4-二氧代-1，4-二氫-2H-喹唑啉-3-基甲基)-苯甲酸向上述甲酯(1.25g，3.85mmol)在甲醇(35mL)內(nèi)懸浮液中加入1NNaOH(30mL，38.5mmol)，將該混合物在45-50℃加熱3小時(shí)直至其變均勻。真空除去甲醇，將粗產(chǎn)物在乙酸乙酯與H2O之間分配.將水相酸化(10％HCl/H2O)，用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。將這些有機(jī)萃取液用Na2SO4干燥，真空濃縮，獲得了產(chǎn)物5，為白色固體(1.15g，96％).LMRS＝311.0(M+1)。
步驟4N-(2-氨基-苯基)-4-(1-甲基-2，4-二氧代-1，4-二氫-2H-喹唑啉-3-基甲基)-苯甲酰胺(化合物158)按照類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用上述羧酸代替143，以10％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物158。1H NMR(DMSO-d6)δ9.59(brs，1H)，8.03(d，J＝7.8Hz，1H)，7.89(d，J＝7.8Hz，2H)7.80(dt，J＝6.9，1.5Hz，1H)，7.49(d，J＝8.7Hz，1H)，7.42(d，J＝8.1Hz，2H)，7.32(t，J＝7.7Hz，1H)，7.13(d，J＝7.8Hz，1H)，6.95(t，J＝7.6Hz，1H)，6.75(d，J＝7.8Hz，1H)，6.57(t，J＝7.5Hz，1H)，5.21(brs，2H)，4.86(brs，2H)，3.54(s，3H)。
實(shí)施例100N-(2-氨基-苯基)-4-(2-甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基甲基)-苯甲酰胺(化合物159)將156(903mg，3.34mmol)在乙酸酐(15mL)中的懸浮液于50℃加熱1小時(shí)。將乙酸酐真空蒸發(fā)，鈀固體殘余物溶解在乙酸(30mL)中。將該溶液回流48小時(shí)，蒸發(fā)，形成了另一固體殘余物，將其從AcOEt/CHCl3混合物中重結(jié)晶，獲得了羧酸中間體(420mg，43％產(chǎn)率)。LMRS＝385.0(M+1)。
按照類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用上述羧酸代替143，以49％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物159。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.64(bs，1H)，8.17(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.95(d，J＝8.2Hz，2H)，7.95(dd，J＝8.8，2.5Hz，1H)，7.84(ddd，J＝7.6，7.0，1.5Hz，1H)，7.64(d，J＝7.7Hz，1H)，7.53(ddd，J＝7.6，7.6，1.1Hz，1H)，7.33(d，J＝8.2Hz，2H)，7.14(dd，J＝7.7，1.1Hz，1H)，6.96(ddd，J＝7.6，7.6，1.5Hz，1H)，6.77(dd，J＝8.0，1.4Hz，1H)，6.58(ddd，J＝7.6，7.6，1.3Hz，1H)，5.46(s，2H)，4.89(bs，2H)2.5(s，3H，與DMSO信號(hào)重疊)。
實(shí)施例101N-(2-氨基苯基)-2-(4-甲氧基-芐基氨基)-噻唑-5-基-酰胺(化合物163)步驟14-甲氧基芐基-硫脲(化合物161)在0℃，向硫代羰基二咪唑(1.23g，6.22mmol，1.5當(dāng)量)在無水二氯甲烷(10mL)內(nèi)的溶液中滴加純凈的烷基胺160(4.15mmol，1.0當(dāng)量)，將該溶液在0℃-15℃攪拌16小時(shí)。在0℃加入濃的氫氧化銨(3mL，45mmol，3.6當(dāng)量)在1，4-二噁烷(6mL)中的溶液，在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將該溶液用乙酸乙酯(250mL)稀釋，用鹽水(2×50mL)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化(硅膠，洗脫用5％甲醇在二氯甲烷中的混合物)后，獲得了161，為黃色固體(700.2mg，3.6mmol，86％產(chǎn)率)。1H NMR(丙酮-d6)δ(ppm)7.53(bs，1H)，7.28(d，J＝8.8Hz，2H)，6.87(d，J＝8.8Hz，2H)，6.67(bs，2H)，4.67(s，2H)，3.77(s，3H).LMRS＝197.1(M+1)。
步驟22-(4-甲氧基芐基氨基)噻唑-5-甲酸甲酯(化合物162)將反式2-甲氧基丙烯酸甲酯(461mg，3.97mmol，1當(dāng)量)在50％1，4-二噁烷在水中的混合物(4mL)內(nèi)的于-10℃攪拌著的溶液用N-溴琥珀酰亞胺(792mg，4.46mmol，1.12當(dāng)量)處理，在同一溫度下攪拌1小時(shí)，轉(zhuǎn)移到含有硫脲161(700.2mg，3.6mmol)的燒瓶?jī)?nèi)，將該混合物在80℃攪拌2小時(shí)。冷卻至室溫后，加入濃的NH4OH(0.8mL)，攪拌10分鐘，將所得沉淀過濾，用水洗滌，獲得了363mg(1.3mmol，36％產(chǎn)率)162，將濾液蒸發(fā)后，又另外獲得了作為蒸發(fā)殘余物的454mg(HPLC測(cè)定的純度為91％)(總產(chǎn)率計(jì)算為77％)。1H NMR(丙酮-d6)δ(ppm)7.97(bs，1H)，7.72(bs，1H)，7.33(d，J＝8.1Hz，2H)，6.90(d，J＝8.1Hz，2H)，4.52(s，2H)，3.78(s，3H)，3.75(s，3H).LMRS＝279.1(M+1)。
步驟3N-(2-氨基苯基)-2-(4-甲氧基-芐基氨基)-噻唑-5-基-酰胺(化合物163)按照實(shí)施例1步驟4和5中描述的方法，但是用162代替6，以50％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物163。1H-NMR(甲醇-d4)，δ(ppm)7.86(s，1H)，7.29(d，J＝8.8Hz，2H)，7.11(dd，J＝8.0Hz，1.4Hz，1H)，7.04(dt，J＝8.0Hz，1.4Hz，1H)，6.90(d，J＝8.8Hz，2H)，6.86(m，1H)，6.74(dt，J＝7.4Hz，1.4Hz，1H)，4.85(bs，4H)，4.45(s，2H)，3.78(s，3H)。
實(shí)施例102-121實(shí)施例102-121描述了使用實(shí)施例47-101中描述的制備化合物62-163的相同方法來制備化合物164-183。特征數(shù)據(jù)列在表4a和4b中。
表4a在實(shí)施例102-121中制得的化合物的特征







表4b

















































































表4c其它化合物的特征





反應(yīng)方案21 實(shí)施例122步驟1{2-[(3’-甲?；?聯(lián)苯-4-羰基)-氨基]-苯基}-氨基甲酸叔丁酯(185)按照實(shí)施例15步驟1中描述的方法，但是用184代替140，以74％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物185。1H NMR(CDCl3)δ10.10.(s，1H)，9.41(s，1H)，8.13(m，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，2H)，7.89(m，2H)，7.77(m，1H)，7.70(d，J＝8.4Hz，2H)，7.64(m，1H)，7.27-7.09(m，3H)，7.03(s，1H)，1.52(s，9H)。
步驟2N-(2-氨基苯基)-4-[3-(茚滿-2-基氨基甲基)苯基]]-苯甲酰胺(186)向聯(lián)苯甲醛(104mg，0.25mmol)和2-氨基茚滿(33.3mg，0.25mmol)在二氯乙烷(1mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入三乙酰氧基硼氫化鈉(80mg，0.375mmol)，然后加入冰醋酸(15ul，0.25mmol)，將該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。除去揮發(fā)性物質(zhì)后，將殘余物在乙酸乙酯與10％碳酸氫鈉水溶液之間分配。將合并的有機(jī)層用水洗滌，干燥并濃縮。通過快速色譜法純化(10％甲醇在氯仿中的混合物)，獲得了所需的Boc-單保護(hù)的產(chǎn)物(112mg，84％產(chǎn)率)，為白色固體。1H NMR(CDCl3)δ9.21(s，1H)，8.03(d，J＝8.7Hz，2H)，7.83(m，1H)，7.69(d，J＝8.7Hz，2H)，7.65(s，1H)，7.54-7.38(m，3H)，7.28(m，7H)，6.82(s，1H)，3.95(s，2H)，3.74(m，1H)，3.22(dd，J＝15.6，6.9Hz，2H)，2.89(dd，J＝15.6，6.6Hz，2H)，1.53(s，9H)。
按照實(shí)施例42步驟3中描述的方法，但是用上面的化合物代替46，以98％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物186。1H NMR(20％CD3OD在CDCl3中的混合物)δ7.95.(d，J＝8.4Hz，2H)，7.65(d，J＝8.4Hz，2H)，7.57(m，1H)，7.54-6.79(m，11H)，3.95(s，2H)，3.66(m，1H)，3.16(dd，J＝15.6，6.9Hz，2H)，2.81(dd，J＝15.6，6.6Hz，2H)。
實(shí)施例123-126實(shí)施例123-126(化合物187-190)是用在實(shí)施例122中描述的制備化合物186的方法(反應(yīng)方案21)制得的。
反應(yīng)方案22 實(shí)施例127步驟1{2-[4-(1-氨基-環(huán)己基乙炔基)-苯甲?；被鵠-苯基}-氨基甲酸叔丁酯(191)將碘化物184(438mg，1.0mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(35mg，0.05mmol)、三苯基膦(7.6mg，0.025mmol)和1-乙炔基環(huán)己基胺(185mg，1.5mmol)的混合物在含有三乙胺(0.56mL，4.0mmol)的THF(4mL)中于室溫?cái)嚢?0分鐘。向其中加入CuI(3.8mg，0.02mmol)，繼續(xù)攪拌2小時(shí)。然后將該反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(30mL)稀釋，用水洗滌，將有機(jī)層干燥并濃縮。通過快速色譜法純化(10％甲醇在氯仿中的混合物)，獲得了所需產(chǎn)物191(420mg，97％產(chǎn)率)。1H NMR(CDCl3)δ9.36(s，1H)，7.94(d，J＝8.4Hz，2H)，7.77(d，J＝7.5Hz，1H)，7.47(d，J＝8.4Hz，2H)，7.25-6.85(m，3H)，2.10-1.30(m.10H)，1.51(s，9H)。
步驟2N-(2-氨基苯基)-4-[1-(4-甲氧基-芐基氨基)-環(huán)己基乙炔基]-苯甲酰胺(192)按照實(shí)施例122步驟2中描述的方法，但是用對(duì)甲氧基苯甲醛代替2-氨基茚滿，以74％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物192。1H NMR(CDCl3)δ8.44(s，1H)，7.82(d，J＝8.1Hz，2H)，7.47(d，J＝8.1Hz，2H)，7.31(d，J＝8.4Hz，2H)，7.23(m，1H)，7.05(m，1H)，6.84(d，J＝8.7Hz，2H)，6.78(m，2H)，3.97(s，2H)，3.76(s，3H)，2.10-1.30(m.10H)。
反應(yīng)方案23 實(shí)施例133步驟1N-[2-(叔丁氧基羰基)-氨基-苯基]-4-(三甲基甲硅烷基乙炔基)苯甲酰胺(197)在0℃、氮?dú)夥障?，?84(5.00g，11.41mmol)在無水THF(100ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中分別加入Pd(PPh3)2Cl2(240mg，0.34mmol)、CuI(130mg，0.69mmol)和三甲基甲硅烷基乙炔(2.10ml，14.84mmol)。然后滴加無水Et3N(6.36ml，45.66mmol)。用4小時(shí)將溫度緩慢地溫?zé)嶂潦覝亍⒃摲磻?yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，用乙酸乙酯稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷20/80→50/50)，獲得了本標(biāo)題化合物197(4.42g，10.83mmol，94％產(chǎn)率)，為黃色粉末。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)9.26(bs，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝7.91，δB＝7.55，J＝8.3Hz，4H)，7.85(d，J＝7.9Hz，1H)，7.32-7.13(m，3H)，6.70(bs，1H)，1.53(s，9H)，0.28(s，9H)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(三甲基甲硅烷基乙炔基)苯甲酰胺(198)按照實(shí)施例42步驟3中描述的方法，但是用上面的化合物代替46，獲得了本標(biāo)題化合物198(70mg，0.23mmol)，為白色固體，主要由198和199的混合物組成。1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)9.20(bs，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝8.07，δB＝7.62，J＝8.2Hz，4H)，7.32(d，J＝7.6Hz，1H)，7.05(td，J＝7.6，1.2Hz，1H)，6.90(d，J＝7.6Hz，1H)，6.72(t，J＝7.3Hz，1H)，4.66(bs，2H)，0.30(s，9H)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-乙炔基苯甲酰胺(199)在-20℃、氮?dú)夥障拢?98和199的混合物在無水THF(15ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入TBAF溶液(1ml，1.0M在THF中的溶液)。用2小時(shí)讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。然后將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，用乙酸乙酯稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷30/70)，獲得了本標(biāo)題化合物199(215mg，0.91mmol，2步驟的產(chǎn)率為46％)，為淺黃色粉末。1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)9.19(bs，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝8.08，δB＝7.66，J＝8.5Hz，4H)，7.33(d，J＝7.6Hz，1H)，7.05(t，J＝7.3Hz，1H)，6.91(d，J＝7.6Hz，1H)，6.72(t，J＝7.6Hz，1H)，4.67(bs，2H)，3.88(s，1H)。
實(shí)施例134步驟1N-[2-(叔丁氧基羰基)-氨基-苯基]-4-乙炔基苯甲酰胺(200)在-20℃、氮?dú)夥障拢?99的混合物(3.48g，8.53mmol)在無水THF(50ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中緩慢地加入TBAF溶液(9.4ml，9.38mmol，1.0M在THF中的溶液)。用2小時(shí)讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀谑覝財(cái)嚢?小時(shí)。然后將該反應(yīng)混合物濃縮，用乙酸乙酯稀釋，依次用飽和NH4Cl水溶液、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷25/75→30/70)，獲得了本標(biāo)題化合物200(2.53g，7.53mmol，88％產(chǎn)率)，為淺黃色泡沫狀物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)9.31(bs，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝7.94，δB＝7.59，J＝8.5Hz，4H)，7.83(d，J＝7.6Hz，1H)，7.30-7.10(m，3H)，6.75(bs，1H)，3.23(s，1H)，1.53(s，9H)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-[3-(4-氯苯基)-3-嗎啉-4-基-1-丙炔-1-基]-苯甲酰胺(201)在氮?dú)夥障拢?00(200mg，0.60mmol)在無水1，4-二噁烷(5ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中分別加入4-氯苯甲醛(100mg，0.71mmol)、嗎啉(60μl，0.68mmol)和CuI(6mg，0.03mmol)。向該反應(yīng)混合物中通入氮?dú)?分鐘，溫?zé)嶂?05℃。18小時(shí)后，讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，依次用飽和NH4Cl水溶液、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷40/60)，獲得了所需化合物(193mg，0.35mmol，59％產(chǎn)率)，為淺黃色泡沫狀物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)9.40(bs，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝7.96，δB＝7.36，J＝8.5Hz，4H)，7.79(d，J＝7.9Hz，1H)，7.59(d，J＝8.4Hz，4H)，7.25-7.10(m，3H)，6.91(s，1H)，4.80(s，1H)，3.82-3.68(m，4H)，2.69-2.58(m，4H)，1.53(s，9H)。
按照實(shí)施例42步驟3中描述的方法，但是用上面的化合物代替46，以67％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物201。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.80(bs，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝8.06，δB＝7.71，J＝8.1Hz，4H)，AB系統(tǒng)(δA＝7.65，δB＝7.52，J＝8.3Hz，4H)，7.20(d，J＝7.9Hz，1H)，7.02(t，J＝7.3Hz，1H)，6.82(d，J＝7.0Hz，1H)，6.64(t，J＝7.5Hz，1H)，5.10(s，1H)，4.97(bs，2H)，3.72-3.58(m，4H)，2.67-2.46(m，4H)。
反應(yīng)方案24
實(shí)施例135步驟14-(4-氯-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-苯甲酸甲酯(203)在室溫、氮?dú)夥障?，?02(2.00g，7.11mmol)在無水THF(50ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中分別加入i-Pr2NEt(1.86ml，10.66mmol)和4-氨基苯甲酸甲酯(1.29g，8.53mmol)或ArNH2(1.2當(dāng)量)。然后將該反應(yīng)混合物回流24小時(shí)。冷卻后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/CH2Cl22/98→5/95)，獲得了本標(biāo)題化合物203(1.70g，4.30mmol，60％產(chǎn)率)，為米黃色粉末。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，2AB系統(tǒng)(δA＝8.03，δA’＝8.00，δB＝7.70，δB’＝7.61，JAB＝JA’B’＝8.8Hz，4H)，7.43和7.31(2bs，1H)，7.29-7.19(m，4H)，5.84和5.78(2d，J＝7.2和7.7Hz，1H)，4.98-4.77(2m，1H)，3.91和3.90(2s，3H)，3.41(dd，J＝16.1，7.0Hz，2H)，2.94和2.89(2dd，J＝15.9，4.9Hz，2H)。
步驟24-[4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]-三嗪-2-基氨基]-N-(2-氨基-苯基)-苯甲酰胺(204)本標(biāo)題化合物204是按照實(shí)施例1途徑B步驟3-5中描述的相同方法，在3個(gè)步驟中由203制得的。1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，8.98(m，1H)，8.49和8.28(2m，1H)，8.10-7.92(m，4H)，7.35-7.14(m，5H)，7.03(td，J＝7.6，1.5Hz，1H)，6.90(dd，J＝6.6，1.3Hz，1H)，6.71(td，J＝7.6，1.3Hz，1H)，6.57和6.42(2m，1H)，6.04和5.86(2m，2H)，4.92-4.76(m，1H)，4.70-4.58(m，1H)，3.44-3.26(m，2H)，3.08-2.92(m，2H).HRMS(計(jì)算值)452.2073，(實(shí)測(cè)值)452.2062。
反應(yīng)方案25 實(shí)施例136步驟14-[(4-氯-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]三嗪-2-基氧基)-甲基]-苯甲酸甲酯(206)在0℃，氮?dú)夥障拢?05(2.00g，7.11mmol)在無水THF(50ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入i-Pr2NEt(1.86ml，10.66mmol)和4-(羥基甲基)苯甲酸甲酯(1.30g，7.82mmol)。幾分鐘后，分批加入NaH(95％，186mg，7.11mmol)。然后讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝亍?4小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/CH2Cl22/98)，獲得了本標(biāo)題化合物206(2.00g，4.88mmol，69％產(chǎn)率)，為無色粘性泡沫狀物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，2AB系統(tǒng)(δA＝8.06，δA’＝8.03，δB＝7.52，δB’＝7.46，JAB＝JA’B’＝8.5Hz，4H)，7.26-7.17(m，4H)，5.94和5.85(2bd，J＝7.8Hz，1H)，5.48和5.39(2s，2H)，4.92-4.76(2m，1H)，3.94和3.92(2s，3H)，3.39和3.33(2dd，J＝16.0，7.0Hz，2H)，2.89和2.84(2dd，J＝16.0，4.9Hz，2H)。
步驟24-{4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]-三嗪-2-基氧基]-甲基}-N-(2-氨基-苯基)-苯甲酰胺(207)本標(biāo)題化合物207是按照實(shí)施例1途徑B步驟3-5中描述的相同方法，在3個(gè)步驟中由206獲得的。1H NMR(300MHz，丙酮-d6+εDMSO-d6)δ(ppm)9.49(m，1H)，8.12-8.03(m，2H)，7.60(t，J＝7.7Hz，2H)，7.35(d，J＝7.1Hz，1H)，7.28-7.13(m，4H)，7.07-6.94(m，2H)，6.90(dd，J＝7.3，1.4Hz，1H)，6.70(td，J＝7.3，1.1Hz，1H)，6.44(bs，1H)，6.25(bs，1H)，5.47和5.41(2s，2H)，4.87-4.68(m，3H)，3.35-3.20(m，2H)，3.02-2.88(m，2H).HRMS(計(jì)算值)467.2070，(實(shí)測(cè)值)467.2063。
反應(yīng)方案26 實(shí)施例2104-[(4-氯-6-苯乙基-氨基-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(208)本標(biāo)題化合物208是按照實(shí)施例1途徑B步驟2中描述的相同方法，由2制得的(R1R2NH＝苯乙基胺)。
步驟14-[(4-苯乙基氨基-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(209)向208(300mg，0.75mmol)在MeOH(35mL)內(nèi)的脫氣溶液中加入10％Pd/C(24mg，0.023mmol)。將該反應(yīng)混合物在1atm的H2壓力下于室溫?cái)嚢?0小時(shí)，然后用N2吹掃。通過經(jīng)由硅藻土過濾除去鈀，將該反應(yīng)混合物濃縮。通過快速硅膠色譜法純化殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl24/96)，獲得了本標(biāo)題化合物209(135mg，0.37mmol，50％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.08(d，J＝8.1Hz，2H)，7.46(d，J＝8.1Hz，2H)，7.50-7.15(m，6H)，4.85-4.65(m，2H)，3.98(s，3H)，3.82-3.62(m，2H)，3.05-2.85(m，2H)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(4-苯乙基氨基-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酰胺(210)本標(biāo)題化合物210是按照實(shí)施例1步驟4和5中描述的相同方法，在2個(gè)步驟中由209制得的。1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)9.03(s，1H)，8.17-7.87(m，3H)，7.49(dd，J＝19.2，8.2Hz，2H)，7.32-7.03(m，6H)，6.99(t，J＝7.6Hz，1H)，6.86(d，J＝8.0Hz，1H)，6.67(t，J＝7.4Hz，1H)，6.60-6.30(m，2H)，4.72(t，J＝6.3Hz，1H)，4.65-4.56(m，1H)，3.67-3.51(m，2H)，2.95-2.80(m，2H)。
反應(yīng)方案27 實(shí)施例138步驟14-[(4，6-二甲氧基-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(211)在75ml密封燒瓶?jī)?nèi)，將2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪(540mg，3.08mmol)、4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯.HCl2(689mg，3.42mmol)、i-Pr2NEt(1.49ml，8.54mmol)在無水THF(30ml)內(nèi)的攪拌著的懸浮液在80℃溫?zé)?小時(shí)。然后讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/CH2Cl210/90→30/70)，獲得了本標(biāo)題化合物211(870mg，2.86mmol，93％產(chǎn)率)，為白色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)AB系統(tǒng)(δA＝8.01，δB＝7.39，JAB＝8.5Hz，4H)，6.08-6.00(m，1H)，4.73(d，J＝6.3Hz，2H)，3.95(s，6H)，3.92(s，3H)。
本標(biāo)題化合物212是按照實(shí)施例1步驟4和5中描述的相同方法，在2個(gè)步驟中由211制得的。1H NMR(300MHz，丙酮-d6+∑DMSO-d6)δ(ppm)9.58(bs，1H)，8.27(t，J＝6.3Hz，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝8.04，δB＝7.53，JAB＝8.4Hz，4H)，7.31(d，J＝6.9Hz，1H)，)，7.02(td，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.88(dd，J＝7.9，1.4Hz，1H)，6.68(td，J＝7.6，1.4Hz，1H)，4.86-4.78(m，2H)，4.69(d，J＝6.3Hz，2H)，)，3.90和3.89(2s，6H).HRMS(計(jì)算值)380.1597，(實(shí)測(cè)值)380.1601。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-[(4，6-二甲氧基-[1，3，5]-三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酰胺(212)反應(yīng)方案28 實(shí)施例139步驟14-[(6-(2-茚滿基-氨基)-4-甲氧基-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸(213)在室溫下，向5(300mg，0.73mmol)在MeOH/THF(10ml/5ml)混合物內(nèi)的攪拌著的溶液中加入KOH水溶液(10％，5ml)。3天后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將該反應(yīng)混合物濃縮，在水中稀釋，用1N HCl酸化直至pH5-6，獲得了白色沉淀。15分鐘后，將該懸浮液過濾，用水將濾餅充分洗滌，并干燥，獲得了本標(biāo)題化合物213(282mg，0.72mmol，98％產(chǎn)率)，為白色固體。MSm/z＝392.1[MH].+。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-{[6-(2-茚滿基-氨基)-4-甲氧基-[1，3，5]-三嗪-2-基-氨基]-甲基}-苯甲酰胺(214)本標(biāo)題化合物214是按照實(shí)施例1步驟5中描述的相同方法，在一個(gè)步驟中由213制得的。1H NMR(300MHz，丙酮-d6+∑DMSO-d6)δ(ppm)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，9.69-9.53(m，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝8.04，δB＝7.52，JAB＝7.8Hz，4H)，7.80-7.60(m，1H)，7.45-7.10(m，6H)，7.01(t，J＝7.6Hz，1H)，6.88(d，J＝8.2Hz，1H)，6.68(t，J＝7.6Hz，1H)，4.92-4.60(m，5H)，3.90-3.78(m，3H)，3.35-3.22(m，2H)，3.02-2.83(m，2H).HRMS(計(jì)算值)481.2226，(實(shí)測(cè)值)481.2231。
反應(yīng)方案29 實(shí)施例29步驟14-[(4，6-二氯-[1，3，5]三嗪-2-基-N-甲基-氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(216)在室溫、氮?dú)夥障?，向NaH(95％，81mg，3.19mmol)在無水THF(10ml)內(nèi)的攪拌著的懸浮液中依次加入3(500mg，1.60mmol)在無水THF(10ml)中的溶液和MeI(298μl，4.79mmol)。16小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷10/90→20/80)，獲得了本標(biāo)題化合物215(200mg，0.61mmol，38％產(chǎn)率)，為白色固體結(jié)晶。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)AB系統(tǒng)(δA＝8.04，δB＝7.31，JAB＝8.2Hz，4H)，4.93(s，2H)，3.93(s，3H)，3.18(s，3H)。
步驟24-{[4-氨基-6-(2-茚滿基-氨基)-[1，3，5]-三嗪-2-基-N-甲基-氨基]-甲基}-N-(2-氨基-苯基)-苯甲酰胺(216)本標(biāo)題化合物216是按照實(shí)施例1途徑B步驟2-5中描述的相同方法，在4個(gè)步驟中由215制得的。1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)9.11(bs，1H)，8.03(d，J＝8.0Hz，2H)，7.43(bs，2H)，7.33(d，J＝7.7Hz，1H)，)，7.28-7.09(m，4H)，7.04(td，J＝7.6，1.5Hz，1H)，6.90(dd，J＝8.0，1.4Hz，1H)，6.71(td，J＝7.5，1.3Hz，1H)，6.25-6.05(m，1H)，5.82和5.64(2bs，2H)，5.00-4.56(m，5H)，3.42-2.76(m，7H).HRMS(計(jì)算值)480.2386，(實(shí)測(cè)值)480.2377。
反應(yīng)方案30
實(shí)施例141步驟14-[(4-氯-6-甲基-[1，3，5]三嗪-2-基-氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(217)在-30℃、氮?dú)夥障?，向氰尿酰?(2.00g，10.85mmol)在無水THF(100ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中緩慢地加入MeMgBr溶液(17ml，23.86mmol，1.4M在無水THF/甲苯中的溶液)。1小時(shí)后，用3小時(shí)讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。然后分別加入4-(氨基甲基)苯甲酸甲酯.HCl2(2.08g，10.30mmol)和i-Pr2NEt(3.78ml，21.69mmol)。18小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/CH2Cl210/90→15/85)，獲得了本標(biāo)題化合物217(780mg，2.67mmol，25％產(chǎn)率)，為黃色粉末。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，2AB系統(tǒng)(δA＝8.03，δA’＝8.02，δB＝7.39，δB’＝7.38，J＝8.5Hz，4H)，6.28-6.08(2m，1H)，4.76和4.74(2d，J＝6.3Hz，2H)，3.92(s，3H)，2.46和2.42(2s，3H)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-{[6-(2-茚滿基-氨基)-4-甲基-[1，3，5]-三嗪-2-基-氨基]-甲基}-苯甲酰胺(218)本標(biāo)題化合物218是按照實(shí)施例1步驟3-5中描述的相同方法，在3個(gè)步驟中由217制得的。1H NMR(300MHz，丙酮-d6+∑DMSO-d6)δ(ppm)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，9.62-9.50(m，1H)，8.04(d，J＝8.0Hz，2H)，7.68-7.37(m，3H)，7.33(d，J＝7.7Hz，1H)，7.28-7.07(m，5H)，7.02(t，J＝7.4Hz，1H)，6.89(d，J＝7.9Hz，1H)，6.69(t，J＝7.4Hz，1H)，4.92-4.60(m，5H)，3.35-3.10(m，2H)，3.02-2.82(m，2H)，2.25-2.12(m，3H)。
反應(yīng)方案31 實(shí)施例142步驟1(2-{4-[2-(4，6-二氨基-[1，3，5]三嗪-2-基)-乙烯基]-苯甲?；被鶀-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(219)向184(40mg，0.091mmol)和2-乙烯基-4，6-二氨基-1，3，5-三嗪(11mg，0.083mmol)在無水DMF(1mL)內(nèi)的脫氣溶液中加入三鄰甲苯基膦(POT)(1.5mg，0.005mmol)，然后加入Et3N(46μL，0.33mmol)和三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(2mg，0.0025mmol)。將該溶液在100℃加熱16小時(shí)。然后減壓除去DMF。將該反應(yīng)混合物在AcOEt與飽和NH4Cl之間分配。分離后，將有機(jī)層用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl25/95)，獲得了本標(biāo)題化合物219(25mg，0.056mmol，67％產(chǎn)率)。1HNMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)8.27(s，1H)，8.06(d，J＝8.1Hz，2H)，7.96(d，J＝15.9Hz，1H)，7.79(d，J＝8.1Hz，2H)，7.76-7.69(m，1H)，7.62-7.55(m，1H)，7.26-7.15(m，2H)，6.90(d，J＝15.9Hz)，6.21(s，4H)，1.50(s，9H)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-[2-(4，6-二氨基-[1，3，5]三嗪-2-基)-乙烯基1-苯甲酰胺(220)在室溫，向219(25mg，0.056mmol)在CH2Cl2(1.5mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入TFA(0.3mL，4.3mmol)。30分鐘后，緩慢地加入飽和NaHCO3直至達(dá)到pH 8，減壓除去CH2Cl2，加入AcOEt，分離各相。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過快速硅膠色譜純化殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl210/90)，獲得了本標(biāo)題化合物220(19mg，0.054mmol，98％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ(ppm)8.33，8.13(2d，J＝7.5Hz，1H)，8.22(d，J＝15.9Hz，1H)，8.01(d，J＝8.1Hz，2H)，7.84(d，J＝8.1Hz，2H)，7.38-6.96(m，2H)，7.03(d，J＝15.9Hz，1H)，6.94-6.62(m，2H)。
反應(yīng)方案32 實(shí)施例143a步驟12-氨基-4-氯-6-哌啶-1-基-[1，3，5]三嗪(221)向2，4-二氯-6-哌啶-1-基-[1，3，5]三嗪(500mg，2.15mmol)在無水1，4-二噁烷(20mL)內(nèi)的溶液中通過氨氣5分鐘。在密封的管中將該溶液在70℃加熱16小時(shí)。讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，在AcOEt與飽和NH4Cl溶液之間分配。分離后，將有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮，獲得了本標(biāo)題化合物221(453mg，2.12mmol，98％產(chǎn)率)。LRMS[MH].+＝214.1。
步驟22-氨基-4-哌啶-1-基-6-乙烯基-[1，3，5]三嗪(222)向221(358mg，1.68mmol)在無水甲苯(7mL)內(nèi)的溶液中加入三丁基(乙烯基)錫(514μL，1.76mmol)，然后加入Pd(PPh3)4(97mg，0.084mmol)，在密封的管中將該反應(yīng)混合物在100℃加熱16小時(shí)。然后讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，濃縮，直接通過快速硅膠色譜純化(AcOEt/己烷10/90→30/70)，獲得了本標(biāo)題化合物222(含有氯化三丁基錫)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-[2-(4-氨基-6-哌啶-1-基-[1，3，5]三嗪-2-基)-乙烯基]-苯甲酰胺(223)本標(biāo)題化合物223是按照反應(yīng)方案31步驟1和2中的相同方法，在2個(gè)步驟中由222制得的。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.69(s，1H)，8.01(d，J＝7.5Hz，2H)，7.87(d，J＝16.0Hz，1H)，7.80(d，J＝7.5Hz，2H)，7.18(d，J＝7.5Hz，1H)，7.04-6.92(m，1H)，6.91(d，J＝16Hz，1H)，6.85-6.68(m，3H)，6.60(t，J＝7.2Hz，1H)，4.93(s，2H)，3.77(s，4H)，1.63(s，2H)，1.52(s，4H)。
實(shí)施例143b步驟4N-(2-氨基-苯基)-4-[2-(4-氨基-6-哌啶-1-基-[1，3，5]三嗪-2-基)-乙基]-苯甲酰胺(224)向223(18mg，0.043mmol)在MeOH(5mL)內(nèi)的溶液中加入10％Pd/C(10mg，0.021mmol)。使用氫化裝置將該反應(yīng)混合物在H2壓力(40psi)下于室溫?fù)u動(dòng)16小時(shí)。然后用氮?dú)獯祾咴摲磻?yīng)混合物，經(jīng)由硅藻土過濾，并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(MeOH/CH2Cl22/98→4/96)，獲得了本標(biāo)題化合物224(10mg，0.024mmol，56％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3-CD3OD)δ(ppm)7.82(d，J＝8.1Hz，2H)，7.35(d，J＝8.1Hz，2H)，7.08(t，J＝7.0Hz，1H)，6.89-6.79(m，2H)，7.80-6.90(m，1H)，3.76(s，4H)，3.13(t，J＝8.1Hz，2H)，2.88(t，J＝8.1Hz，2H)，1.90-1.40(m，10H)。
反應(yīng)方案33
實(shí)施例144步驟12-氨基-苯并噻唑-6-醇(225)將2-氨基-6-甲氧基苯并噻唑(5.00g，27.8mmol)在二氯甲烷(70mL)中的懸浮液于氮?dú)夥障吕鋮s至0℃，滴加三溴化硼(3.93mL，41.6mmol)。將該淺黃色混合物攪拌3小時(shí)，讓其緩慢地從0℃溫?zé)嶂?0℃。通過滴加甲醇來緩慢地中止該反應(yīng)，在室溫?cái)嚢柽^夜后，通過過濾收集白色固體(6.04g，88％產(chǎn)率)。將該氫溴酸鹽溶解在水中，用乙酸乙酯洗滌，用飽和NaHCO3水溶液中和。通過過濾收集所得晶體，并在烘箱中于135℃干燥1小時(shí)，獲得了本標(biāo)題化合物225，為無色晶體(3.63g，79％產(chǎn)率)。1H NMR(CD3OD)δ(ppm)7.27(d，J＝8.8Hz，1H)，7.08(d，J＝2.2Hz，1H)，6.80(dd，J＝8.4，2.2Hz，1H)。
步驟26-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯并噻唑-2-基胺(226)在室溫、氮?dú)夥障拢虮讲⑧邕?25(3.62g，21.8mmol)在THF內(nèi)的溶液中依次加入4-(2-羥基乙基)嗎啉(3.17mL，26.1mmol)、三苯基膦(7.43g，28.3mmol)，然后滴加偶氮二碳酸二乙酯(4.46mL，28.3mmol)。將該溶液攪拌3.5小時(shí)，在真空下部分除去THF。將該混合物在乙酸乙酯與H2O之間分配。將合并的有機(jī)層用1N HCl萃取。將合并的酸性萃取液用飽和NaHCO3水溶液中和，用乙酸乙酯溶解沉淀。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮。將濾液濃縮，獲得了本標(biāo)題化合物226(5.83g，96％產(chǎn)率)，為淺黃色油狀物。1H NMR(丙酮-d6)δ(ppm)7.37(d，J＝8.8Hz，1H)，7.34(d，J＝2.6Hz，1H)，6.94(dd，J＝8.8，2.6Hz，1H)，6.60(bs，2H)，4.19(t，J＝6.2Hz，2H)，3.70-3.67(m，4H)，2.90(s，2H)，2.81(t，J＝6.2Hz，2H)，2.62-2.58(m，4H)。
步驟34-{[6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯并噻唑-2-基氨基]-甲基}-苯甲酸甲酯(227)向含有苯并噻唑226(5.80g，20.8mmol)的圓底燒瓶中加入4-甲酰基苯甲酸甲酯(5.11g，31.1mmol)，然后加入THF(8mL)、氯化二丁基錫(315mg，1.04mmol)，并滴加苯基甲硅烷(3.24mL，31.1mmol)。將所得混合物在室溫于氮?dú)夥障聰嚢柽^夜。將該混合物在乙酸乙酯中稀釋，并過濾。將濾液在乙酸乙酯與水之間分配，將合并的有機(jī)層用1N HCl洗滌。用飽和NaHCO3水溶液將合并的酸性層中和，用乙酸乙酯萃取沉淀。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，并濃縮。通過快速色譜法純化所得粗產(chǎn)物，用MeOH/CHCl3(10∶90)洗脫，獲得了227(3.69g，42％產(chǎn)率)。1H NMR(丙酮-d6)δ(ppm)8.04(d，J＝8.5Hz，2H)，7.65(d，J＝8.8Hz，2H)，7.41(d，J＝8.8Hz，1H)，7.34(d，J＝2.5Hz，1H)，6.94(dd，J＝8.5，2.7Hz，1H)，4.50(t，J＝5.5Hz，2H)，3.86(s，3H)。
步驟4N-(2-氨基-苯基)-4-{[6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯并噻唑-2-基氨基]-甲基}-苯甲酰胺(228)按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用上面的化合物代替6，獲得了本標(biāo)題化合物228(958mg，46％)，為無色固體。1H NMR(CD3OD)δ(ppm)8.04(d，J＝8.2Hz，2H)，7.62(d，J＝8.5Hz，2H)，7.40(d，J＝8.8Hz，1H)，7.31(d，J＝2.5Hz，1H)，7.25(d，J＝7.4Hz，1H)，7.15(t，J＝7.4Hz，1H)，6.97(dd，J＝8.8，2.5Hz，2H)，6.84(t，J＝7.4Hz，1H)，4.78(s，2H)，4.21(t，J＝5.2Hz，2H)，3.81-3.77(m，4H)，2.87(t，J＝5.5，2H)，2.69-3.66(m，4H)。
反應(yīng)方案34 實(shí)施例145步驟14-[(5-溴-苯并噻唑-2-基氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(229)按照實(shí)施例144步驟3中描述的方法，但是用2-氨基-6-溴苯并噻唑代替226，以56％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物229。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)8.78(t，J＝5.9Hz，1H)，8.01(d，J＝8.2Hz，2H)，7.99(s，1H)，7.56(d，J＝8.2Hz，2H)，7.43-7.34(m，2H)，4.74(d，J＝5.9Hz，2H)，3.90(s，3H)。
步驟24-{[5-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-苯并噻唑-2-基氨基]-甲基}-苯甲酸甲酯(230)按照實(shí)施例15步驟1中描述的方法，但是用229代替140，以44％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物230，為無色晶體。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)8.73(t，J＝5.7Hz，1H)，8.11(d，J＝1.8Hz，1H)，8.02(d，J＝8.4Hz，2H)，7.63-7.57(m，3H)，7.48(d，J＝8.4Hz，1H)，6.97(s，2H)，4.77(d，J＝5.7Hz，2H)，3.92(m，6H)，3.90(s，3H)，3.74(s，3H)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-{[5-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-苯并噻唑-2-基氨基]-甲基}-苯甲酰胺(231)按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用上面的化合物代替6，以69％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物231。1H NMR(丙酮-d6)δ(ppm)8.31(d，J＝7.9Hz，2H)，8.20(d，J＝7.5Hz，1H)，8.13(s，1H)，7.73-7.58(m，3H)，7.63(d，J＝7.5Hz，2H)，7.48-7.43(m，2H)，7.05(s，2H)，4.98(s，2H)，4.00(s，6H)，3.84(s，3H)。
反應(yīng)方案35 實(shí)施例146步驟14-[(6-甲氧基-苯并噻唑-2-基氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(232)向2-氨基-6-甲氧基苯并噻唑(2.00g，11.1mmol)在二氯乙烷(20mL)與THF(20mL)的混合物內(nèi)的溶液中依次加入4-甲?；郊姿峒柞?1.82g，11.1mmol)、三乙酰氧基硼氫化鈉(3.53g，16.7mmol)和乙酸(1.27mL，22.2mmol)。將該混合物攪拌2天，通過加入飽和NaHCO3水溶液來中止反應(yīng)。將該混合物倒入含有水的分液漏斗中，用二氯甲烷萃取。將合并有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空濃縮。通過快速色譜法純化粗產(chǎn)物，用EtOAc/己烷(20∶80-30∶70)洗脫，獲得了本標(biāo)題化合物232(1.85g，51％產(chǎn)率)。1H NMR(丙酮-d6)δ(ppm)8.04(d，J＝8.5Hz，2H)，7.65(d，J＝8.8Hz，2H)，7.41(d，J＝8.8Hz，1H)，7.34(d，J＝2.5Hz，1H)，6.94(dd，J＝8.5，2.7Hz，1H)，4.50(t，J＝5.5Hz，2H)，3.86(s，3H)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-[(6-甲氧基-苯并噻唑-2-基氨基)-甲基]-苯甲酰胺(233)按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用上面的化合物代替6，以19％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物233，為淺米黃色固體。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)9.68(s，1H)，8.44(t，J＝5.8Hz，1H)，8.00(d，J＝8.2Hz，2H)，7.55(d，J＝8.2Hz，2H)，7.39(d，J＝2.7Hz，1H)，7.34(d，J＝8.8Hz，1H)，7.21(d，J＝6.6Hz，1H)，7.05(t，J＝6.3Hz，1H)，7.00(d，J＝1.4Hz，1H)，6.88(dd，J＝8.8，2.7Hz，1H)，6.86(dd，J＝8.0，1.4Hz，1H)，6.65(td，J＝7.4，1.4Hz，1H)，4.95(s，2H)，4.70(d，J＝5.8Hz，2H)，3.79(s，3H)。
反應(yīng)方案36 實(shí)施例147步驟14-(6-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基硫基甲基)-苯甲酸甲酯氫溴酸鹽(234)向4-(溴甲基)苯甲酸甲酯(2.51g，11.0mmol)在DMF(50mL)內(nèi)的溶液中加入5-甲氧基-2-苯并咪唑硫醇(1.98g，11.0mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?4小時(shí)，將溶劑真空蒸發(fā)。將殘余物懸浮在乙酸乙酯中，通過過濾收集氫溴酸鹽，獲得了本標(biāo)題化合物234(4.10g，91％產(chǎn)率)，為無色固體。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)7.90(d，J＝8.2Hz，2H)，7.55(d，J＝8.2Hz，2H)，7.45(d，J＝8.2Hz，1H)，7.03(s，1H)，6.94(d，J＝8.2Hz，1H)，4.65(s，2H)，3.82(s，3H)，3.79(s，3H)。
步驟24-[6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-1H-苯并咪唑-2-基硫基甲基]-苯甲酸甲酯(235)按照實(shí)施例144步驟1、2中描述的方法，但是用上面的化合物代替2-氨基-6-甲氧基苯并噻唑，以37％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物235。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)8.04-8.00(m，2H)，7.77-7.72(m，1H)，7.69-7.59(m，1H)，7.56-7.49(m，2H)，6.96-6.90(m，1H)，4.68(s，2H)，4.31-4.16(m，4H)，3.97(s，3H)，3.98-3.91(m，2H)，3.82-3.72(m，2H)，2.75-2.47(m，4H)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-[6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-1H-苯并咪唑-2-基硫基甲基]-苯甲酰胺(236)按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用上面的化合物代替6，以11％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物236。1H NMR(CD3OD)δ(ppm)7.89(d，J＝8.2Hz，2H)，7.45(d，J＝8.2Hz，2H)，7.28(d，J＝8.5Hz，1H)，7.19-7.06(m，3H)，6.93-6.79(m，3H)，4.55(s，2H)，4.18(t，J＝6.3Hz，2H)，3.65-3.62(m，4H)，2.51(t，J＝6.6Hz，2H)，2.46-2.42(m，4H)。
反應(yīng)方案37 實(shí)施例148步驟14-嗎啉-4-基-苯甲酸甲酯(237)向火焰干燥的耐壓容器中加入碳酸銫(912mg，2.80mmol)和甲苯(8mL)，用氮?dú)獯祾邿?。加入乙酸鈀(9.0mg，0.004mmol)和外消旋-2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-聯(lián)萘(37mg，0.06mmol)。將該混合物脫氣，在100℃加熱18小時(shí)。讓該混合物冷卻至室溫，經(jīng)由硅藻土過濾，用乙酸乙酯洗滌，在乙酸乙酯與水之間分配。將有機(jī)層用飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，用MgSO4干燥。并真空濃縮，獲得了本標(biāo)題化合物237(443mg，100％產(chǎn)率)。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)8.02(d，J＝9.2Hz，2H)，6.95(d，J＝8.8Hz，2H)，3.95(s，4H)，3.92(s，3H)，3.38-3.35(m，4H)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-嗎啉-4-基-苯甲酰胺(238)按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用上面的化合物代替6，以33％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物238。1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)7.20(d，J＝7.9Hz，1H)，7.07(d，J＝8.8Hz，2H)，7.01(t，J＝7.0Hz，1H)，6.83(d，J＝7.9Hz，1H)，6.65(t，J＝7.5Hz，1H)，4.90(s，2H)，3.81-3.79(m，4H)，3.32-3.28(m，4H)。
反應(yīng)方案38 實(shí)施例149步驟13-甲基硫基-3-(吡啶-4-基氨基)-丙烯腈(239)在室溫向吡啶-4-基胺(1.0g，11.0mmol)和3，3-二-甲基硫基-丙烯腈(2.05g，12.6mmol)在DMF內(nèi)的溶液中加入4A分子篩粉末。將該混合物攪拌1小時(shí)。然后將該混合物冷卻至0℃，用1小時(shí)分批加入60％NaH在油中的分散液(0.92g，23.0mmol)，在0℃再攪拌2小時(shí)。移去冷卻浴，將該混合物在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。真空除去DMF，通過柱色譜法純化粗產(chǎn)物(EtOAc-25％MeOH/EtOAc的梯度)，獲得了所需產(chǎn)物，為灰白色固體(1.9g，89％)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-{[2-氰基-1-(吡啶-4-基氨基)-乙烯基氨基]-甲基}-苯甲酰胺(240)向3-甲基硫基-3-(吡啶-4-基氨基)-丙烯腈(0.2g，1.0mmol)、4-氨基甲基-苯甲酸(0.173g，1.14mmol)、DMAP(1mg)和Et3N(0.14ml，1.0mmol)的混合物中加入無水吡啶(0.5ml)。將所得攪拌著的混合物在55℃加熱4.5小時(shí)，再加入Et3N(0.14ml)，用約30小時(shí)將該混合物從75℃加熱至90℃。當(dāng)反應(yīng)完全時(shí)，在真空下部分除去吡啶，通過柱色譜法純化粗產(chǎn)物(EtOAc-20％MeOH/EtOAc的梯度)，獲得了所需產(chǎn)物，為灰白色固體(130mg，44％)。
按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用上面的化合物代替6，以33％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物240。1H NMR1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.69(br，2H)，8.48(br，3H)，8.03(d，J＝7.9Hz，2H)，7.51(d，J＝8.4Hz，2H)，7.29(br，2H)，7.23(d，J＝7.9Hz，1H)，7.03(t，J＝7.0Hz，1H)，6.84(d，J＝7.9Hz，1H)，6.65(t，J＝7.3Hz，1H)，4.96(br，2H)，4.62(d，J＝5.7Hz，2H)。
反應(yīng)方案39 實(shí)施例150步驟14-[(2-氯-9H-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯(241)將2，6-二氯-9H-嘌呤(1g，5.29mmol)、4-氨基甲基-苯甲酸甲酯鹽酸鹽(1.2當(dāng)量，1.28g)和NaHCO3(2.1當(dāng)量，935mg)在水中的懸浮液于100℃加熱。將由此形成的均勻溶液回流30分鐘。過濾出所得白色沉淀，用冷水洗滌，并真空干燥，獲得了本標(biāo)題化合物241(1g，3.14mmol，60％)。LRMS計(jì)算值317.7，實(shí)測(cè)值318.3(MH)+.
步驟24-{[2-氯-9-(2-甲氧基-乙基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-苯甲酸甲酯(242)按照實(shí)施例144步驟2中描述的方法，但是用上面的化合物代替2-氨基-6-甲氧基苯并噻唑，以41％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物242。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-{[2-氯-9-(2-甲氧基-乙基)-9H-嘌呤-6-基氨基]-甲基}-苯甲酰胺(243)按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用上面的化合物代替6，以85％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物243。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)9.64(s，1H)，8.94(bs，1H)，8.18(s，1H)，7.96(d，J＝7.8Hz，2H)，7.52(d，J＝7.8Hz，2H)，7.21(d，J＝7.7Hz，1H)，7，01(dd，J＝7.3，8.0Hz，1H)，6.81(d，J＝8.0Hz，1H)，6.62(dd，J＝7.3，7.7Hz，1H)，4.91(bs，2H)，4.78(bs，2H)，4.18(m，2H)，3.70(m，2H)，3.26(s，3H)反應(yīng)方案40 實(shí)施例151步驟14-{[3-(2-氯-6-氟-苯基)-5-甲基-異惡唑-4-羰基]-氨基-甲基}-苯甲酸甲酯(244)在0℃、氮?dú)夥障?，?-(氨基甲基)苯甲酸甲酯.HCl2(809mg，4.01mmol)在無水CH2Cl2(25ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中依次加入i-Pr2NEt(1.91ml，10.95mmol)和3-(2-氯-6-氟苯基)-5-甲基異惡唑-4-羰基氯(1.00g，3.65mmol)。45分鐘后，讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒈３?小時(shí)。然后將該反應(yīng)混合物濃縮，用AcOEt稀釋，依次用飽和NH4Cl、H2O、飽和NaHCO3、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮，獲得了本標(biāo)題化合物244(1.50g，定量產(chǎn)率)，為無色粘性泡沫狀物。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.93(d，J＝7.9Hz，2H)，7.46-7.35(m，1H)，7.29(d，J＝8.4Hz，1H)，7.15-7.05(m，3H)，5.49(bs，1H)，4.46(d，J＝5.7Hz，2H)，3.92(s，3H)，2.80(s，3H)。
步驟24-{[3-(2-氯-6-氟-苯基)-5-甲基-異惡唑-4-羰基]-氨基-甲基}-苯甲酸(245)在室溫，向244(1.45g，3.60mmol)在THF(20ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入LiOH.H2O(453mg，10.80mmol)在水(20ml)中的溶液。20小時(shí)后，將該反應(yīng)混合物濃縮，用水稀釋，用1N HCl酸化直至pH 6，獲得了白色沉淀。10分鐘后，將該懸浮液過濾，用水將濾餅充分洗滌，并干燥，獲得了本標(biāo)題化合物245(1.23g，3.15mmol，88％產(chǎn)率)，為白色固體。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.69(t，J＝5.9Hz，1H)，7.91(d，J＝7.9Hz，2H)，7.70-7.58(m，1H)，7.51(d，J＝7.9Hz，1H)，7.45-7.30(m，3H)，4.44(d，J＝5.7Hz，2H)，2.72(s，3H)。
步驟34-(9-氯-3-甲基-4-氧代-4H-異惡唑并[4，3-c]喹啉-5-基甲基)-苯甲酸(246)在室溫，向245(795mg，2.05mmol)在無水DMF(10ml)內(nèi)的攪拌著的懸浮液中加入NaOH(409mg，10.22mmol)在無水MeOH(5.1ml)中的溶液。然后將該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃。3天后，將該反應(yīng)混合物濃縮，用水稀釋，用1N HCl酸化直至pH5，獲得了淡紅色沉淀。30分鐘后，將該懸浮液過濾，用水將濾餅充分洗滌，并干燥，獲得了本標(biāo)題化合物246(679mg，1.84mmol，90％產(chǎn)率)，為淺紅色固體。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)AB系統(tǒng)(δA＝7.92，δB＝7.40，J＝8.4Hz，4H)，7.56(t，J＝8.1Hz，1H)，7.47(d，J＝7.5Hz，1H)，7.31(d，J＝8.3Hz，1H)，5.59(bs，2H)，2.95(s，3H)。
步驟4N-(2-氨基-苯基)-4-(9-氯-3-甲基-4-氧代-4H-異惡唑并[4，3-c]喹啉-5-基甲基)-苯甲酰胺(247)本標(biāo)題化合物247是按照實(shí)施例1步驟5中描述的相同方法在一步中由246制得的。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.65(s，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝7.95，δB＝7.42，J＝8.1Hz，4H)，7.58(t，J＝8.1Hz，1H)，7.48(d，J＝7.5Hz，1H)，7.35(d，J＝8.3Hz，1H)，7.17(d，J＝7.5Hz，1H)，7.00(t，J＝7.3Hz，1H)，6.80(d，J＝7.5Hz，1H)，6.62(t，J＝7.3Hz，1H)，5.61(bs，2H)，4.91(s，2H)，2.97(s，3H)。
反應(yīng)方案41 實(shí)施例152步驟14-(1H-咪唑-2-基)-苯甲酸(248)向4-甲?；郊姿?2.00g，12.3mmol)在氫氧化銨(9ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入乙二醛(2.86ml，20.0mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。向該反應(yīng)混合物中加入1N HCl以將其酸化至pH5。將溶劑蒸發(fā)，把殘余物在水(20ml)中研制30分鐘，過濾，獲得了本標(biāo)題化合物248(2.08g，83％)，為白色固體。LRMS188.1(計(jì)算值)；189.1(實(shí)測(cè)值)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(1H-咪唑-2-基)-苯甲酰胺(249)本標(biāo)題化合物249是按照實(shí)施例1步驟5中描述的相同方法制得的。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.72(bs，1H)，8.07(s，4H)，7.26(s，2H)，7.18(d，J＝7.9Hz，1H)，6.98(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，6.79(d，J＝7.9Hz，1H)，6.60(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H).MS(計(jì)算值)278.1；(實(shí)測(cè)值)279.1(MH)+。
反應(yīng)方案42 實(shí)施例153步驟14-硫代氨基甲?；谆?苯甲酸(250)向4-氰基甲基-苯甲酸(1.65g，10.24mmol)和Et3N(5ml)在吡啶內(nèi)的攪拌著的懸浮液中通入H2S鼓泡3小時(shí)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。然后將水加到該反應(yīng)混合物中，攪拌1小時(shí)，用1M HCl將其酸化至pH6。將溶劑蒸發(fā)，把殘余物在水(20ml)中研制30分鐘，過濾，獲得了本標(biāo)題化合物250(2.08g，83％)，為白色固體。1H NMR(DMSO)δ(ppm)12.85(bs，1H)，9.53(bs，1H)，9.43(bs，1H)，7.88(d，J＝8.1Hz，2H)，7.44(d，J＝8.1Hz，2H)，3.88(s，2H)。
步驟24-(4-氯甲基-噻唑-2-基甲基)-苯甲酸(251)將250(729mg，3.73mmol)和1，3-二氯丙酮(474mg，3.73mmol)在THF(30ml)中的溶液于40℃攪拌48小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，然后將殘余物溶解在乙酸乙酯中，用鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過快速硅膠色譜純化殘余粗產(chǎn)物(2-4％MeOH/CH2Cl2)，獲得了本標(biāo)題化合物(827mg，83％產(chǎn)率)，為白色固體。1H NMR(DMSO)δ(ppm)12.93(bs，1H)，7.91(d，J＝8.1Hz，2H)，7.63(s，1H)，7.46(d，J＝8.1Hz，2H)，4.78(s，2H)，4.42(s，2H)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-(4-嗎啉-4-基甲基-噻唑-2-基甲基)-苯甲酰胺(252)將K2CO3(599mg，4.33mmol)加到251(527mg，1.97mmol)和嗎啉(189μl，2.17mmol)在THF(15ml)內(nèi)的溶液中，回流48小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)。通過快速硅膠色譜純化殘余粗產(chǎn)物(3-50％MeOH/CH2Cl2)，獲得了本標(biāo)題化合物252(238mg，38％產(chǎn)率)，為淺黃色固體。LRMS318.2(計(jì)算值)319.2(實(shí)測(cè)值)。
本標(biāo)題化合物252是按照實(shí)施例1步驟5中描述的相同方法制得的。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.63(bs，1H)，7.94(d，J＝8.1Hz，2H)，7.45(d，J＝8.1Hz，2H)，7.33(s，1H)，7.15(d，J＝8.1Hz，1H)，6.97(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，6.77(d，J＝7.3Hz，1H)，6.59(dd，J＝8.1，8.1Hz，1H)，4.90(bs，2H)，4.40(s，2H)，3.59-3.56(m，6H)，2.44-2.38(m，4H).LRMS408.2(計(jì)算值)409.2(實(shí)測(cè)值)。
反應(yīng)方案43 實(shí)施例154步驟13-[3-(4-甲氧基羰基-芐基)-脲基]-噻吩-2-甲酸甲酯(253)采用Nakao描述的方法(K.Nakao，R.Shimizu，H.Kubota，M.Yasuhara，Y.Hashimura，T.Suzuki，T.Fujita和H.Ohmizu；Bioorg.Med.Chem.1998，6，849-868.)，獲得了本標(biāo)題化合物253(1.01g，91％)，為黃色固體。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)9.55(bs，1H)，8.00-7.97(m，3H)，7.42-7.37(m，3H)，5.45(t，J＝5.8Hz，1H)，4.52(d，J＝6.0Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.82(s，3H)。
步驟24-(2，4-二氧代-1，4-二氫-2H-噻吩并[3，2-d]嘧啶-3-基甲基)-苯甲酸(254)向253(422mg，1.21mmol)在MeOH(15ml)內(nèi)的懸浮液中加入NaOH(145mg，3.63mmol)。將該反應(yīng)混合物在60℃加熱16小時(shí)。然后加入水(1ml)，將該反應(yīng)混合物再攪拌1小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，把殘余物溶解在水中，用HCl 1M將其酸化至pH5。過濾出沉淀，獲得了所需化合物254(348mg，95％)，為白色固體。LRMS302.0(計(jì)算值)；303.0(實(shí)測(cè)值)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-(1-乙基-2，4-二氧代-1，4-二氫-2H-噻吩并[3，2-d]嘧啶-3-基甲基)-苯甲酰胺(255)先采用實(shí)施例99步驟2、3中描述的相同方法，然后采用實(shí)施例1步驟5中描述的相同方法，獲得了本標(biāo)題化合物255，為黃色固體(73％)。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.61(bs，1H，NH)，8.22(d，J＝5.5Hz，1H，CH)，7.91(d，J＝8.2Hz，2H，CH)，7.43-7.40(m，3H，CH)，7.15(d，J＝7.4Hz，1H，CH)，6.96(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H，CH)，6.77(d，J＝7.1Hz，1H，CH)，6.59(dd，J＝7.4，7.4Hz，1H，CH)，5.17(s，2H，NCH2)，4.88(bs，2H，NH2)4.09(q，J＝7.0，2H，CH2)，1.22(t，J＝7.0，3H，CH3).LRMS420.1(計(jì)算值)；421.0(實(shí)測(cè)值)。
反應(yīng)方案44 實(shí)施例155步驟13H-噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-酮(256)3-氨基-2-噻吩甲酸甲酯(510mg，3.24mmol)溶解在甲酰胺(20ml)中，在170℃加熱16小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(2-4％MeOH/CH2Cl2)，獲得了本標(biāo)題化合物256(157mg，32％產(chǎn)率)。LRMS152.0(計(jì)算值)；152.9(實(shí)測(cè)值)。
步驟2N-(2-氨基苯基)-4-(4-氧代-4H-噻吩并[3，2-d]嘧啶-3-基甲基)-苯甲酰胺(257)采用實(shí)施例85步驟1中描述的方法，但是用上面的化合物代替119，然后采用實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，以41％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物257。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.61(bs，1H)，8.70(s，1H)，8.22(dd，J＝5.2，0.5Hz，1H)，7.95(d，J＝8.2Hz，2H)，7.47(d，J＝8.5Hz，2H)，7.44(dd，J＝5.2，0.6Hz，1H)，7.15(d，J＝7.7Hz，1H)，6.96(dd，J＝6.9，6.9Hz，1H)，6.77(d，J＝7.1Hz，1H)，6.58(dd，J＝7.0，7.0Hz，1H)，5.31(s，2H)，4.87(bs，2H).MS376.1(計(jì)算值)；377.1(實(shí)測(cè)值)。
反應(yīng)方案45 實(shí)施例156步驟12-氨基-4，5-二甲基-噻吩-3-甲酸甲酯(258)采用Hozien描述的方法(Z.A.Hozien，F(xiàn).M.Atta，Kh.M.Hassan，A.A.Abdel-Wahab和S.A.Ahmed；Synht.Commun..1996，26(20)，3733-3755.)，獲得了本標(biāo)題化合物258(1.44g，17％)，為黃色固體。LRMS197.1(計(jì)算值)；200.1(實(shí)測(cè)值)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(5，6-二甲基-4-氧代-4H-噻吩并[2，3-d]嘧啶-3-基甲基)-苯甲酰胺(259)按照實(shí)施例155步驟1、2中描述的方法，但是用258代替256，獲得了本標(biāo)題化合物259，為白色固體(55％)。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.61(bs，1H)，8.57(s，1H)，7.94(d，J＝8.0Hz，2H)，7.45(d，J＝7.7Hz，2H)，7.16(d，J＝7.7Hz，1H)，6.96(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，6.77(d，J＝8.0Hz，1H)，6.59(dd，J＝7.4，7.4Hz，1H)，5.25(s，2H)，4.87(bs，2H)，2.39(s，3H)，2.37(s，3H).LRMS404.1(計(jì)算值)；405.0(實(shí)測(cè)值)。
反應(yīng)方案46 實(shí)施例157步驟14-(4-氧代-色滿-3-亞基甲基)-苯甲酸甲酯(260)將濃H2SO4(2ml)緩慢地加到4-色滿酮(2.00g，13.50mmol)和4-甲?；郊姿峒柞?2.11g，12.86mmol)在冰醋酸內(nèi)的溶液中。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。將溶劑濃縮至一半體積，將所得沉淀過濾，并用乙酸乙酯洗滌，獲得了本標(biāo)題化合物260(3.11g，82％)，為紫色固體。1H NMR(DMSO)δ(ppm)8.05(d，J＝8.2Hz，2H)，7.90(d，J＝7.6Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.64-7.59(m，3H)，7.15(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，7.07(d，J＝8.2Hz，1H)，5.43(s，2H)，3.89(s，3H)。
步驟24-(4-氧代-4H-色烯-3-基甲基)-苯甲酸甲酯(261)將水(0.2ml)和RhCl3.H2O(7mg，0.034mmol)加到化合物260(200mg，0.680mmol)在EtOH(2ml)和CHCL3(2ml)內(nèi)的懸浮液中。將該反應(yīng)混合物在70℃攪拌16小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻，在乙酸乙酯中稀釋，用鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(0.5-1％MeOH/CH2Cl2)，獲得了本標(biāo)題化合物261(118mg，59％)，為白色固體。1H NMR(DMSO)δ(ppm)8.45(s，1H)，8.03(dd，J＝7.9，1.8Hz，1H)，7.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.83-7.77(m，1H)，7.65(d，J＝8.3Hz，1H)，7.50-7.43(m3，1H)，3.82(s，3H)，3.80(s，2H)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-(4-氧代-4H-色烯-3-基甲基)-苯甲酰胺(262)本標(biāo)題化合物262是按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的相同方法獲得的。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.56(bs，1H)，8.45(s，1H)，8.04(d，J＝7.9Hz，1H)，7.88(d，J＝8.4Hz，2H)，7.80(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，7.65(d，J＝8.4Hz，1H)，7.51-7.42(m，3H)，7.14(d，J＝7.9Hz，1H)，6.96(dd，J＝7.3，7.3Hz，1H)，6.76(d，J＝7.9Hz，1H)，6.58(dd，J＝7.3，7.3Hz，1H)，4.86(bs，2H)，3.80(s，2H).LRMS370.1(計(jì)算值)；371.1(實(shí)測(cè)值)。
實(shí)施例158步驟24-色滿-3-基甲基-苯甲酸甲酯(263)將Pd/C 10％加到260(200mg，0.68mmol)在MeOH(40ml)和DMA(10ml)內(nèi)的預(yù)先在真空下凈化的懸浮液中。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將MeOH蒸發(fā)后，把水加到油狀殘余物中，將所獲得的沉淀過濾。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(5-8％AcOEt/Hex)，獲得了本標(biāo)題化合物263(114mg，59％)，為白色固體。LRMS282.1(計(jì)算值)；283.0(實(shí)測(cè)值)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-色滿-3-基甲基-苯甲酰胺(265)本標(biāo)題化合物265是按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的相同方法獲得的。1H NMR(丙酮)δ(ppm)9.06(bs，1H)，8.01(d，J＝7.9Hz，2H)，7.42(d，J＝8.4Hz，2H)，7.31(d，J＝7.9Hz，1H)，7.08-6.98(m，3H)，6.87(d，J＝7.5Hz，1H)，6.82-6.66(m，3H)，4.62(s，2H)，4.22-4.17(m，1H)，4.88-3.81(m，1H)，2.88-2.71(m，3H)，2.61-2.53(m，1H)，2.41-2.33(m，1H).LRMS358.2(計(jì)算值)；359.1(實(shí)測(cè)值)。
實(shí)施例159步驟24-(4-氧代-色滿-3-基甲基)-苯甲酸甲酯(264)將260(400mg，1.36mmol)和苯磺酰基肼(702mg，4.08mmol)在DMF(7ml)中的懸浮液于100℃攪拌48小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，將殘余物在AcOEt中稀釋，用飽和NH4Cl和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(5％AcOEt/HEx)，獲得了本標(biāo)題化合物264(170mg，42％)，為白色固體。LRMS296.1(計(jì)算值)；297.0(實(shí)測(cè)值)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-(4-氧代-色滿-3-基甲基)-苯甲酰胺(266)本標(biāo)題化合物266是按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的相同方法獲得的。1H NMR(丙酮)δ(ppm)9.62(bs，1H)，7.93(d，J＝7.9Hz，2H)，7.79(d，J＝7.9Hz，1H)，7.58(dd，J＝7.0，7.0Hz，1H)，7.39(d，J＝7.9Hz，2H)，7.17-7.04(m，3H)，6.97(dd，J＝7.0，7.0Hz，1H)，6.78(d，J＝7.9Hz，1H)，6.60(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，4.88(s，2H)，4.44-4.39(m，1H)，4.28-4.21(m，1H)，2.26-3.21(m，2H)，2.83-2.74(m，1H).LRMS372.1(計(jì)算值)；372.1(實(shí)測(cè)值)。
反應(yīng)方案47 實(shí)施例160步驟14-(3-氧代-3，4-二氫-2H-苯并[1，4]惡嗪-2-基甲基)-苯甲酸甲酯(266)將Et3N(3.18ml，22.8mmol)加到2-H-1，4-苯并惡嗪-3-(4H)-酮(2.50g，16.8mmol)和4-甲酰基苯甲酸甲酯(4.59g，27.5mmol)在Ac2O(20ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中。將該反應(yīng)混合物回流16小時(shí)。將該混合物冷卻3天后，將固體過濾，并用乙酸乙酯洗滌，獲得了本標(biāo)題化合物266(657mg，13％)，為黃色固體。LRMS295.1(計(jì)算值)；296.0(實(shí)測(cè)值)。
步驟24-(3-氧代-3，4-二氫-苯并[1，4]惡嗪-2-亞基甲基)-苯甲酸甲酯(267)本標(biāo)題化合物267是按照實(shí)施例158步驟2中描述的相同方法制得的。LRMS297.1(計(jì)算值)；298.1(實(shí)測(cè)值)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-(4-乙基-3-氧代-3，4-二氫-2H-苯并[1，4]惡嗪-2-基甲基)-苯甲酰胺(269)本標(biāo)題化合物269是采用實(shí)施例99步驟2、3中描述的相同方法，然后采用實(shí)施例1步驟4、5中描述的相同方法，由267制得的。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.61(bs，1H)，7.91(d，J＝7.9Hz，2H)，7.39(d，J＝7.9Hz，2H)，7.22(d，J＝7.9Hz，1H)，7.17(d，J＝7.5Hz，1H)，7.11-6.91(m，4H)，6.77(d，J＝7.0Hz，1H)，6.60(dd，J＝7.0，7.0Hz，1H)，4.95-4.91(m，1H)，4.89(bs，2H)，3.95(q，J＝7.0Hz，2H)，3.28-3.22(m，1H)，3.17-2.89(m，1H)，1.16(t，J＝7.0Hz，3H).LRMS401.2(計(jì)算值)；402.1(實(shí)測(cè)值)。
實(shí)施例161步驟1N-(2-氨基-苯基)-4-(3-氧代-3，4-二氫-2H-苯并[1，4]惡嗪-2-基甲基)-苯甲酰胺(270)本標(biāo)題化合物270是按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的相同方法由267制得的。1H NMR(DMSO)δ(ppm)10.74(bs，1H)，9.61(bs，1H)，7.91(d，J＝8.4Hz，2H)，7.41(d，J＝7.9Hz，2H)，7.17(d，J＝7.5Hz，1H)，6.99-6.85(m，5H)，6.78(d，J＝7.5Hz，1H)，6.60(dd，J＝7.0，7.0Hz，1H)，4.92-4.89(m，3H)，3.29-3.23(m，1H)，3.15-3.07(m，1H).MS(計(jì)算值)373.1；(實(shí)測(cè)值)374.1(MH)+。
反應(yīng)方案48 實(shí)施例162步驟14-(1-氧代-茚滿-2-基甲基)-苯甲酸甲酯(271)在-60℃將2M LDA在THF中的溶液(4.16ml，8.32mmol)加到茚滿酮(1.00g，7.57mmol)在THF(10ml)內(nèi)的溶液中。在15分鐘時(shí)間內(nèi)將溶液緩慢地溫?zé)嶂?℃，再攪拌15分鐘。然后將該反應(yīng)冷卻至-78℃，緩慢地加入4-溴苯甲酸甲酯(1.73g，7.57mmol)。將該溶液緩慢地溫?zé)嶂?20℃，攪拌4小時(shí)。用HCL 1M處理該反應(yīng)混合物，將溶劑蒸發(fā)。將殘余物在乙酸乙酯中稀釋，用鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(5-20％AcOEt/HEx)，獲得了本標(biāo)題化合物271(245mg，17％)，為白色固體。LRMS280.1(計(jì)算值)；281.1(實(shí)測(cè)值)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(1-氧代-茚滿-2-基甲基)-苯甲酰胺(272)本標(biāo)題化合物272是按照實(shí)施例1、步驟4、5中描述的相同方法制得的。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.59(bs，1H)，7.91(d，J＝7.6Hz，2H)，7.69-7.64(m，2H)，7.54(d，J＝7.6Hz，1H)，7.45-7.40(m，3H)，7.16(d，J＝8.2Hz，1H)，6.96(dd，J＝7.3，7.3Hz，1H)，6.77(d，J＝8.2Hz，1H)，6.59(dd，J＝7.3，7.3Hz，1H)，4.87(bs，2H)，3.23-3.14(m，3H)，2.85-2.81(m，2H).LRMS356.1(計(jì)算值)；357.2(實(shí)測(cè)值)。
實(shí)施例163步驟14-(1-氧代-茚滿-2-亞基甲基)-苯甲酸(273)在0℃，向茚滿酮(2.00g，15.1mmol)和4-羧基苯甲醛(1.89g，12.6mmol)在EtOH(10ml)內(nèi)的懸浮液中加入KOH(1.77g，31.5mmol)。將該反應(yīng)混合物在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，把殘余物溶解在水中，用HCl 1M酸化至pH 5。過濾出沉淀，用水洗滌，獲得了本標(biāo)題化合物273(2.27g，57％)，為黃色固體。LRMS264.1(計(jì)算值)；265.0(實(shí)測(cè)值)。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-(1-氧代-茚滿-2-亞基甲基)-苯甲酰胺(274)本標(biāo)題化合物274是按照實(shí)施例1步驟5中描述的相同方法制得的。LRMS354.1(計(jì)算值)；355.0(實(shí)測(cè)值)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-(1-羥基-茚滿-2-基甲基)-苯甲酰胺(275)向274(300mg，0.85mmol)在MeOH(8ml)和水(1ml)內(nèi)的懸浮液至加入NaBH4(75mg，1.95mmol)。將該反應(yīng)混合物在50℃攪拌16小時(shí)，并冷卻。將水加到該溶液中，過濾出沉淀，用冷水洗滌，獲得了本標(biāo)題化合物275(224mg，74％)，為白色固體。1H NMR(丙酮)δ(ppm)9.05(bs，1H)，8.00(dd，J＝8.2，2.7Hz，2H)，7.47(d，J＝8.5Hz，1H)，7.43(d，J＝8.2Hz，1H)，7.38-7.30(m，2H)，7.22-7.12(m，3H)，7.01(ddd，J＝7.6，7.6，1.5Hz，1H)，6.87(dd，J＝8.0，1.1Hz，1H)，6.68(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，4.98(t，J＝5.8Hz，0.4H)，4.89(t，J＝6.7Hz，0.6H)，4.63(bs，2H)，4.45(d，J＝6.9Hz，0.6H)，4.06(d，J＝6.0Hz，0.4H)，3.30-3.19(m，1H)，2.88-2.48(m，3H，CH2).LRMS358.2(計(jì)算值)；359.1(實(shí)測(cè)值)。
反應(yīng)方案49 iiPhNHNH2；iiiNaOH，然后HClivHOBt/EDC.HCl然后1，2-二氨基苯；vBrCH2C6H4COOMe/MeONa/MeOH，然后HCl/AcOH；viCH2(CN)2/S8/Et2NH(或Et3N)；viiAcCl，PhCOCl或PhNCO；viii2-N-Bocarnino苯胺；ixTFA實(shí)施例164步驟14-(3，5-二甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基甲基)-苯甲酸(276)在0℃，向NaH溶液(60％在礦物油中的溶液，250mg，6.3mmol)中加入乙?；?0.646ml，6.3mmol)，然后加入4-溴甲基-苯甲酸甲酯2(1.2g，52mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，回流2小時(shí)。加入苯基肼(0.51ml，5.2mmol)，將該反應(yīng)混合物再回流1小時(shí)。真空除去THF，將油狀殘余物在水與乙酸乙酯之間分配。分離出有機(jī)層，干燥，蒸發(fā)，通過硅膠柱色譜純化，用EtOAc-己烷(1∶1)洗脫，獲得了油狀物(800mg)，在室溫將其用NaOH(0.8g，20mmol)在20ml水中的溶液處理1小時(shí)。進(jìn)行下列步驟-用HCl酸化(pH 6)，用乙酸乙酯萃取所得乳液，用硫酸鈉干燥萃取液，蒸發(fā)，通過柱色譜法純化(洗脫劑EtOAc-己烷，1∶1)，獲得了390mg 276(本標(biāo)題化合物)與278的混合物(摩爾比1∶2)。[M-1]+307.0和191.1。將該混合物以自身的形式用于下一步驟。
步驟2.N-(2-氨基-苯基)-4-(3，5-二甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基甲基)-苯甲酰胺(277)按照類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用276代替143，以25％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物277(通過色譜法純化，使用EtOAc-己烷，1∶1洗脫)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δ(ppm)9.64(s，1H)；7.97(d，J＝7.6Hz，2H)，7.42-7.56(m，5H)，7.37(d，J＝8.2Hz，2H)，7.22(d，J＝7.6Hz，1H)，7.03(t，J＝7.6Hz，1H)，6.84(d，J＝8.2Hz，1H)，6.66(t，J＝7.6Hz，1H)，4.93(s，2H)，3.92(s，2H)，2.34(s，3H)，2.18(s，3H)。
實(shí)施例165步驟14-(3-氧代-丁基)-苯甲酸(278)在室溫，向乙酰基丙酮(5.0ml，49mmol)溶液中加入NaOMe(25％wt，10.8ml，47.3mmol)，然后加入4-溴甲基-苯甲酸甲酯2(9.0g，39.3mmol)。將該反應(yīng)混合物回流3小時(shí)，冷卻至室溫，用HCl酸化(pH 1-2)。將所得溶液蒸發(fā)，獲得了殘余物，將其在冰醋酸(50ml)與濃HCl(25ml)的混合物中回流4小時(shí)。將酸真空除去，用水研制殘余物以形成結(jié)晶，通過過濾收集所得結(jié)晶，并干燥，獲得了278(6.72g，80％產(chǎn)率)。[M-1]191.1。
步驟2.4-(5-氨基-4-氰基-3-甲基-噻吩-2-基甲基)-苯甲酸279向4-(3-氧代-丁基)-苯甲酸278(700mg，3.65mmol)、丙二腈(241mg，3.65mmol)和硫(130mg，3.65mmol)在20ml EtOH內(nèi)的回流的懸浮液中加入二乙胺(0.5ml，4.8mmol)。將該反應(yīng)混合物回流1小時(shí)，冷卻至室溫，用濃HCl酸化(pH4-5)，蒸發(fā)，獲得了固體殘余物。將該殘余物在水與乙酸乙酯之間分配，分離出有機(jī)層，干燥，蒸發(fā)，通過硅膠柱色譜純化，用EtOAc-己烷，1∶1洗脫，獲得了本標(biāo)題化合物279(300mg，30％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)7.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.29(d，J＝7.9Hz，2H)，6.98(s，2H)，3.92(s，2H)，2.03(s，3H)。
步驟3.4-(5-乙酰基氨基-4-氰基-3-甲基-噻吩-2-基甲基)-苯甲酸280在室溫，向4-(5-氨基-4-氰基-3-甲基-噻吩-2-基甲基)-苯甲酸279(230mg，0.86mmol)在丙酮(5ml)-二氯甲烷(5ml)的溶劑混合物內(nèi)的溶液中加入乙酰氯(0.305ml，4.3mmol)。在相同條件下攪拌2小時(shí)后，形成了本標(biāo)題化合物280的沉淀，收集，并干燥(200mg，75％產(chǎn)率)。[M-1]313.1。
步驟4N-(2-氨基-苯基)-4-(5-乙酰基氨基-4-氰基-3-甲基-噻吩-2-基甲基)-苯甲酰胺(281)按照類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用280代替143，以25％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物281。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.61(s，1H)；7.91(d，J＝7.9Hz，2H)，7.34(d，J＝8.4Hz，2H)，7.15(d，J＝7.5Hz，1H)，6.96(t，J＝6.6Hz，1H)，6.77(d，J＝7.0Hz，1H)，6.59(t，J＝7.9Hz，1H)，4.89(s，2H)，4.10(s，2H)，2.19(s，3H)，2.16(s，3H).[M+1]405.0。
反應(yīng)方案50 實(shí)施例166步驟1.4-(N-羥基脒基甲基)-苯甲酸(282)將4-氰基甲基苯甲酸(2.07g，12.86mmol)、NH2OH.HCl(1.79g，25.71mmol)和氫氧化鉀(2.16g，38.57mmol)在70ml乙醇中的懸浮液回流36小時(shí)，倒入100ml水內(nèi)，用濃HCl酸化(pH5-6)。真空除去EtOH，用另外100ml水處理剩余懸浮液。收集所形成的沉淀，并干燥，獲得了本標(biāo)題化合物282。[M+1]195.1。
步驟2.4-(5-甲基-[1，2，4]惡二唑-3-基甲基)-苯甲酸(283)將4-(N-羥基脒基甲基)-苯甲酸282(388mg，2.0mmol)在吡啶(8ml)中的溶液用乙酸酐(0.283ml，3.0mmol)處理。將所得溶液回流6小時(shí)，真空蒸發(fā)，用水研制剩余固體，通過過濾收集，干燥，通過硅膠柱色譜純化，依次用EtOAc、EtOAc-MeOH(10∶1)和EtOAc-MeOH(1∶1)洗脫，獲得了283(164mg，38％產(chǎn)率)。[M-1]-217.1步驟3.N-(2-氨基-苯基)-4-(5-甲基-[1，2，4]惡二唑-3-基甲基)-苯甲酰胺(284)為了制備本標(biāo)題化合物284，采用類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用283代替143，獲得了本標(biāo)題化合物284。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.62(s，1H)，7.93(d，J＝7.9Hz，2H)，7.42(d，J＝8.4Hz，1H)，7.16(d，J＝7.5Hz，1H)，6.97(t，J＝7.9Hz，1H)，6.78(d，J＝7.5Hz，1H)，6.60(t，J＝7.9Hz，1H)，4.92(s，2H)，4.14(s，2H)，2.55(s，3H)。[M+1]+309.2反應(yīng)方案51 i乙?；?EtOH；iiHOBt/EDCxHCl然后1，2-二氨基苯實(shí)施例167步驟14-(3，5-二甲基-吡唑-1-基)-苯甲酸(285)將4-肼基-苯甲酸(0.60g，3.95mmol)和乙?；?0.405ml，3.95mmol)在乙醇(20ml)中的溶液回流1小時(shí)。真空除去乙醇，用水研制剩余固體，通過過濾收集，獲得了285(0.71mg，83％產(chǎn)率)。[M-1]-215.1。
步驟2.N-(2-氨基-苯基)-4-(3，5-二甲基-吡唑-1-基)-苯甲酰胺(286)為了制備本標(biāo)題化合物286，采用類似于實(shí)施例92步驟2中描述的方法，但是用285代替143，以34％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物286(通過色譜法純化，用CH2Cl2-甲醇，19∶1洗脫)。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.73(s，1H)；8.09(d，J＝8.4Hz，2H)，7.64(d，J＝8.4Hz，2H)，7.17(d，J＝7.5Hz，1H)，6.98(t，J＝7.0Hz，1H)，6.78(d，J＝7.9Hz，1H)，6.60(t，J＝7.5Hz，1H)，6.13(s，1H)，4.92(s，2H)，2.37(s，3H)，2.20(s，3H).[M+1]+303.3反應(yīng)方案52 a.2.5％Pd(OAc)2/nBu4NCl(1eq)/KOAc(3eq)/2.5％PPh3/DMF/80℃b.3-4％Pd(OAc)2/9％PPh3/Ag2CO3(2eq)/CH3CN/80℃c.LiOH·H2O/THF-H2O(2∶1)d.1，2-苯二胺/BOP/Et3N/DMFe.PtO2/H2(1atm)/AcOEt實(shí)施例168步驟12-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2，3-二氫-呋喃(287)向5-碘-1，2，3-三甲氧基苯(900mg，3.06mmol)和2，3-二氫呋喃(1.16mL，15.3mmol)在無水DMF(8mL)內(nèi)的溶液中加入PPh3(20mg，0.077mmol)、KOAc(901mg，9.18mmol)、n-Bu4NCl(850mg，3.06mmol)和Pd(OAc)2(17mg，0.077mmol)。將該反應(yīng)混合物在80℃攪拌18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物用AcOEt和水稀釋。分離后，將有機(jī)層用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷20/80)，獲得了本標(biāo)題化合物287(311mg，1.32mmol，43％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)6.59(s，2H)，6.45(m，1H)，5.45(dd，J＝10.5，8.4Hz，1H)，4.97(m，1H)，3.87(s，6H)，3.84(s，3H)，3.06(m，1H)，2.62(m，1H)。
步驟24-[5-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2，5-二氫-呋喃-2-基]-苯甲酸乙酯(288)向287(200mg，0.846mmol)和4-碘-苯甲酸乙酯(468mg，1.69mmol)在無水乙腈(4mL)內(nèi)的溶液中加入PPh3(20mg，0.076mmol)、Ag2CO3(467mg，1.69mmol)和Pd(OAc)2(7mg，0.03mmol)。將該反應(yīng)混合物在80℃攪拌18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物經(jīng)由硅藻土過濾，用AcOEt洗滌。加入水，分離各相。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷30/70)，獲得了本標(biāo)題化合物288(280mg，0.728mmol，86％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.05(d，J＝7.5Hz，2H)，7.45(d，J＝7.5Hz，2H)，6.61(s，2H)，6.18-5.95(m，4H)，4.38(q，J＝7.0Hz，2H)，3.88(s，6H)，3.84(s，3H)，1.39(t，J＝7.0Hz)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-[5-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2，5-二氫-呋喃-2-基]-苯甲酰胺(289)按照類似于實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用288代替6，以48％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物289。1H NMR(DMSO)δ(ppm)8.00(s，1H)，7.91(d，J＝7.9Hz，2H)，7.48(d，J＝7.9Hz，2H)，7.33(d，J＝7.5Hz，1H)，7.09(t，J＝7.5Hz，1H)，6.92-6.82(m，2H)，6.61(s，2H)，6.14-5.99(m，4H)，3.89(s，6H)，3.84(s，3H).
實(shí)施例169步驟1N-(2-氨基-苯基)-4-[5-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-四氫-呋喃-2-基]-苯甲酰胺.(290)向289(43mg，0.096mmol)在AcOEt(4mL)內(nèi)的脫氣溶液中加入PtO2(3mg，0.01mmol)，將該反應(yīng)混合物在室溫于1atm的H2壓力下攪拌16小時(shí)。用氮?dú)獯祾咴摲磻?yīng)燒瓶，然后將該反應(yīng)混合物經(jīng)由硅藻土過濾，用MeOH洗滌，濃縮。通過快速硅膠色譜將殘余粗產(chǎn)物純化3次(MeOH/DCM2/98，AcOEt/DCM30/70和AcOEt/CHCl330/70)，獲得了本標(biāo)題化合物290(10mg，0.22mmol，23％產(chǎn)率)。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)8.10(s，1H)，7.91(d，J＝8.0Hz，2H)，7.50(d，J＝8.0Hz，2H)，7.34(d，J＝7.5Hz，1H)，7.10(t，J＝7.5Hz，1H)，6.96-6.85(m，2H)，6.64(s，2H)，5.33(t，J＝7.0Hz，1H)，5.21(t，J＝7.0Hz，1H)，3.89(s，6H)，3.85(s，3H)，2.59-2.40(m，2H)，2.09-1.88(m，2H)。
反應(yīng)方案53 a三丁基(乙烯基)錫/Pd(PPh3)4/甲苯/100℃b.m-CPBA/CHCl3/r.t.
c.3，4，5-三甲氧基苯胺/CoCl2/CH3CNd.TFA/DCMe.1，1’-羰基二咪唑/DCM/r.t.
f.1，1’-羰基二咪唑/Et3N/甲苯/THF/90℃實(shí)施例169步驟1[2-(4-乙烯基-苯甲?；被?-苯基]-氨基甲酸叔丁酯(291)按照類似于實(shí)施例143步驟2中描述的方法，但是用184代替221，以90％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物291，為深黃色油狀物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)9.18(s，1H)，7.94(d，J＝8.5Hz，2H)，7.77(d，J＝7.5Hz，1H)，7.49(d，J＝8.5Hz，2H)，7.30-7.10(m，3H)，6.89(s，1H)，6.77(dd，J＝17.4，11.0Hz，1H)，5.87(d，J＝17.4Hz，1H)，5.39(d，J＝11.0Hz，1H)，1.52(s，9H)。
步驟2[2-(4-環(huán)氧乙烷基-苯甲酰基氨基)-苯基]-氨基甲酸叔丁酯(292)向291(4.1g，12.1mmol)在無水CHCl3(60mL)內(nèi)的溶液中加入m-CPBA 70％(3.6g，14.5mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后再加入m-CPBA(0.6g，2.4mmol)，繼續(xù)攪拌1小時(shí)。再加入一定量的m-CPBA(0.6g，2.4mmol)，將該反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)。加入氯仿和10％NaHCO3溶液，分離各相。將有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷1/3)，獲得了本標(biāo)題化合物292(2.86g，8.07mmol，66％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)9.20(s，1H)，7.95(d，J＝8.1Hz，2H)，7.86-7.75(m，1H)，7.38(d，J＝8.1Hz，2H)，7.26-7.10(m，3H)，6.84-6.70(m，1H)，3.93(t，J＝3.0Hz，1H)，3.20(t，J＝5.0Hz，1H)，2.80(dd，J＝5.0，3.0Hz，1H)，1.52(s，9H)。
步驟3(2-{4-[1-羥基-2-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-乙基]-苯甲酰基氨基}-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(295)和(2-{4-[2-羥基-1-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-乙基]-苯甲?；被鶀-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(293)向CoCl2(8mg，0.06mmol)在無水乙腈(10mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入292(1g，2.8mmol)，然后加入3，4，5-三甲氧基苯胺(516mg，2.8mmol)，讓該反應(yīng)混合物在室溫反應(yīng)16小時(shí)，然后將其在60℃加熱5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物在AcOEt與水之間分配，分離各相。用鹽水洗滌有機(jī)層，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過快速硅膠色譜純化殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷1/1)，獲得了化合物s293和295(合并的1.07g，1.99mmol，71％產(chǎn)率，292/295比例＝5/1)，通過快速硅膠色譜分離(AcOEt/己烷1/1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)化合物2929.21(s，1H)，7.92(d，J＝8.1Hz，2H)，7.73(d，J＝6.6Hz，1H)，7.46(d，J＝8.1Hz，2H)，7.28-7.10(m，3H)，6.90(s，1H)，5.83(s，2H)，4.54-4.44(m，1H)，3.93(dd，J＝8.1，3.9Hz，1H)，3.84-3.72(m，1H)，3.71(s，3H)，3.66(s，6H)，1.47(s，9H).化合物2959.22(s，1H)，7.91(d，J＝8.1Hz，2H)，7.77(d，J＝7.2Hz，1H)，7.46(d，J＝8.1Hz，2H)，7.30-7.21(m，3H)，6.88(s，1H)，6.15(s，2H)，5.16-5.06(m，1H)，3.81(s，6H)，3.78(s，3H)，3.50-3.25(m，2H)，1.51(s，9H)。
步驟4N-(2-氨基-苯基)-4-[2-羥基-1-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-乙基]-苯甲酰胺(294)按照類似于實(shí)施例42步驟3中描述的方法，但是用293代替46，以50％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物294。1H NMR(DMSO)δ(ppm)8.36(s，1H)，7.74(d，J＝6.9Hz，2H)，7.30(d，J＝7.8Hz，2H)，7.18(d，J＝6.9Hz，1H)，7.00(t，J＝7.2Hz，1H)，6.72(m，2H)，5.69(s，2H)，4.34(m，1H)，4.02-3.52(m，2H)，3.66(s，3H)，3.57(s，6H)。
實(shí)施例170步驟1N-(2-氨基-苯基)-4-[2-氧代-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-惡唑烷-4-基]-苯甲酰胺(296)向293(200mg，0.372mmol)在甲苯(5mL)和THF(1mL)內(nèi)的溶液中加入1，1’-羰基二咪唑(72mg，0.45mmol)，然后加入Et3N(156μL，1.12mmol)，將該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后在90℃攪拌48小時(shí)。將該反應(yīng)混合物用AcOEt稀釋，加入飽和NH4Cl溶液，分離各相。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過快速硅膠色譜純化殘余粗產(chǎn)物(DCM/AcOEt80/20)，獲得了所需化合物(120mg，0.21mmol，57％產(chǎn)率)。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.37(s，1H)，7.98(d，J＝8.1Hz，2H)，7.76(d，J＝7.5Hz，1H)，7.41(d，J＝8.1Hz，2H)，7.25-15(m，3H)，6.88(s，1H)，6.61(s，2H)，5.40(dd，J＝8.7，6.0Hz，1H)，4.79(t，J＝8.7Hz，1H)，4.19(dd，J＝8.7，6.01H)，3.75(s，3H)，3.72(s，6H)，1.47(s，9H)。
按照類似于實(shí)施例42步驟3中描述的方法，但是用上面的化合物代替46，以81％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物296。1H NMR(DMSO)δ(ppm)8.03(s，1H)，7.91(d，J＝8.1Hz，2H)，7.41(d，J＝8.1Hz，2H)，7.30(d，J＝7.5Hz，1H)，7.07(t，J＝7.5Hz，1H)，6.82(d，J＝7.5Hz，2H)，6.61(s，2H)，5.40(dd，J＝8.7，6.0Hz，1H)，4.78(t，J＝8.7Hz，1H)，4.18(dd，J＝8.7，6.0Hz，1H)，3.75(s，3H)，3.71(s，6H)。
實(shí)施例171步驟1N-(2-氨基-苯基)-4-[2-氧代-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-惡唑烷-5-基]-苯甲酰胺(297)向295(130mg，0.242mmol)在DCM(2mL)內(nèi)的溶液中加入1，1’-羰基二咪唑(47mg，0.29mmol)，將該混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。減壓除去DCM，加入AcOEt和飽和NH4Cl溶液，并分離各相。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過快速硅膠色譜純化殘余粗產(chǎn)物(己烷/AcOEt30/70)，獲得了所需化合物(80mg，0.14mmol，58％產(chǎn)率)。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.39(s，1H)，8.04(d，J＝8.1Hz，2H)，7.84(d，J＝7.5Hz，1H)，7.52(d，J＝8.1Hz，2H)，7.26-7.12(m，3H)，6.86-6.74(m，3H)，5.70(t，J＝8.4Hz，1H)，4.24(t，J＝8.7Hz，1H)，3.97-3.87(m，1H)，3.87(s，6H)，3.82(s，3H)，1.52(s，9H)。
按照類似于實(shí)施例42步驟3中描述的方法，但是用上面的化合物代替46，以94％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物297。1H NMR(DMSO)δ(ppm)8.38(s，1H)，7.97(d，J＝7.5Hz，2H)，7.47(d，J＝8.1Hz，2H)，7.35(d，J＝7.0Hz，1H)，7.08(t，J＝7.0Hz，1H)，6.97-6.87(m，2H)，6.79(s，2H)，5.66(t，J＝8.1Hz，1H)，4.41(t，J＝9.0Hz，1H)，3.91(t，J＝7.8Hz，1H)，3.86(s，6H)，3.82(s，3H)。
反應(yīng)方案54 a.CeCl3七水合物/NaN3/CH3CN-H2O(9∶1)/回流b.H2/Pd/C(10％)/MeOHc.3，4-二甲氧基苯甲酰氯/Et3N/DCM/-20℃d.Burgess試劑/THF/70℃e.TFA/DCM
反應(yīng)方案55 實(shí)施例172步驟1{2-[4-(1-疊氮基-2-羥基-乙基)-苯甲酰基氨基]-苯基}-氨基甲酸叔丁酯(298)和{2-[4-(2-疊氮基-1-羥基-乙基)-苯甲?；被鵠-苯基}-氨基甲酸叔丁酯(302)向292(210mg，0.59mmol)在乙腈(9mL)和水(1mL)內(nèi)的溶液中加入CeCl3七水合物(110mg，0.296mmol)，然后加入NaN3(42mg，0.65mmol)。將該反應(yīng)混合物回流3小時(shí)，然后減壓除去乙腈。就殘余物用DCM稀釋，用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過快速硅膠色譜法純化(AcOEt/己烷1/1)，獲得了本標(biāo)題化合物298和302的1∶1混合物(合并的187mg，0.47mmol，80％產(chǎn)率)，通過快速硅膠色譜分離(AcOEt/己烷2/5)?；衔?981H NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ(ppm)7.95(d，J＝8.1Hz，2H)，7.70-7.63(m，1H)，7.43(d，J＝8.1Hz，2H)，7.36-7.29(m，1H)，7.24-7.14(m，2H)，4.69(dd，J＝7.5，4.8Hz，1H)，3.80-3.65(m，2H)，1.49(s，9H).化合物3021H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)9.28(s，1H)，7.86(d，J＝8.4Hz，2H)，7.71(d，J＝7.5Hz，1H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H)，7.25-7.08(m，3H)，7.01(s，1H)，4.87(dd，J＝6.9，5.1Hz，1H)，3.47-3.38(m，2H)，3.32-3.21(bs，1H)，1.50(s，9H)。
步驟2{2-[4-(1-氨基-2-羥基-乙基)-苯甲?；被鵠-苯基}-氨基甲酸叔丁酯(299)向298(156mg，0.39mmol)在MeOH(2mL)內(nèi)的溶液中加入Pd/C10％(20mg，0.02mmol)。將該反應(yīng)混合物在1atm的H2壓力下于室溫?cái)嚢?6小時(shí)，然后用氮?dú)獯祾?。通過經(jīng)由硅藻土過濾除去鈀，將MeOH減壓蒸發(fā)，獲得了本標(biāo)題化合物299(88mg，0.24mmol，60％產(chǎn)率)，其不用純化直接使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)9.24(s，1H)，7.90(d，J＝7.8Hz，2H)，7.71(d，J＝6.6Hz，1H)，7.40(d，J＝7.8Hz，2H)，7.31-7.10(m，3H)，7.06-6.94(m，1H)，4.12(dd，J＝7.5，4.5Hz，1H)，3.74(dd，J＝7.8，5.4Hz，1H)，3.64-3.51(m，1H)，2.64(s，3H)，1.49(s，9H)。
步驟3(2-{4-[1-(3，4-二甲氧基-苯甲?；被?-2-羥基-乙基]-苯甲?；被鶀-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(300)在-20℃，向299(88mg，0.24mmol)在無水DCM(2mL)內(nèi)的攪拌著的溶液中加入3，4-二甲氧基苯甲酰氯(50mg，0.25mmol)，然后加入Et3N(37μL，0.26mmol)。讓該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀缓髷嚢?8小時(shí)。加入飽和NH4Cl溶液，然后加入DCM，并分離各相。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過快速硅膠色譜純化殘余粗產(chǎn)物(MeOH/DCM4/96)，獲得了本標(biāo)題化合物300(91mg，0.17mmol，71％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)9.29(s，1H)，7.81(d，J＝8.1Hz，2H)，7.65-7.58(m，1H)，7.46(m，7H)，6.80(d，J＝8.1Hz，1H)，5.20-5.10(m，1H)，3.95-3.78(m，2H)，3.88(s，3H)3.84(s，3H)，1.47(s，9H).
步驟4N-(2-氨基-苯基)-4-[2-(3，4-二甲氧基-苯基)-4，5-二氫-惡唑-4-基]-苯甲酰胺(301)向300(91mg，0.17mmol)在無水THF(2mL)內(nèi)的溶液中加入Burgess試劑(44mg，0.19mmol)，將該混合物在70℃攪拌2小時(shí)。將該反應(yīng)混合物在AcOEt與水之間分配，并分離各相。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用無水Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過快速硅膠色譜純化殘余粗產(chǎn)物(MeOH/DCM3/97)，獲得了Boc-保護(hù)的中間體(75mg，0.14mmol，85％產(chǎn)率)。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)9.31(s，1H)，7.94(d，J＝8.4Hz，2H)，7.72(d，J＝7.5Hz，1H)，7.66(d，J＝8.1Hz，1H)，7.61(s，1H)，7.39(d，J＝8.1Hz，2H)，7.27(d，J＝6.0Hz，1H)，7.23-7.08(m，3H)，6.93(d，J＝8.7Hz，1H)，5.43(t，J＝9.0Hz，1H)，4.84(t，J＝9.3Hz，1H)，4.26(t，J＝8.4Hz，1H)，3.95(s，3H)，3.94(s，3H)，1.50(s，9H)。
按照類似于實(shí)施例42步驟3中描述的方法，但是用上面的化合物代替46，以82％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物301。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)8.01(s，1H)，7.89(d，J＝7.9Hz，2H)，7.65(dd，J＝8.4，1.5Hz，1H)，7.60(d，J＝1.5Hz，1H)，7.41(d，J＝7.9Hz，2H)，7.32(d，J＝7.9Hz，1H)，7.08(t，J＝6.6Hz，1H)，6.92(d，J＝8.4Hz，1H)，6.84(d，J＝7.9Hz，2H)，5.43(dd，J＝9.7，8.4Hz，1H)，4.83(dd，J＝9.7，8.4Hz，1H)，4.25(t，J＝8.1Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.93(s，3H)。
實(shí)施例173步驟1{2-[4-(2-氨基-1-羥基-乙基)-苯甲?；被鵠-苯基}-氨基甲酸叔丁酯(303)采用實(shí)施例172步驟2中描述的相同方法，由302以94％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物303?；衔?03不用進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。
步驟22-{4-[2-(3，4-二甲氧基-苯甲?；被?-1-羥基-乙基]-苯甲?；被鶀-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(304)采用實(shí)施例172步驟3中描述的相同方法，由303和3，4-二甲氧基苯甲酰氯以40％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物304。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)9.31(s，1H)，7.78(d，J＝8.1Hz，2H)，7.68(d，J＝6.9Hz，1H)，7.38(d，J＝1.8Hz，1H)，7.33(d，J＝8.1Hz)，7.30-7.06(m，4H)，7.00-6.93(m，1H)，6.79(d，J＝8.4Hz，1H)，4.89-4.82(m，1H)，3.88(s，3H)，3.86(s，3H)，3.85-3.73(m，1H)，3.44-3.32(m，1H)，1.46(s，9H).
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-[2-(3，4-二甲氧基-苯基)-4，5-二氫-惡唑-5-基]-苯甲酰胺(305)按照類似于實(shí)施例172步驟4、5中描述的方法，但是用304代替300，以63％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物305。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)8.02(s，1H)，7.93(d，J＝8.1Hz，2H)，7.63(dd，J＝8.4，1.8Hz，1H)，7.60(s，1H)，7.44(d，J＝8.1Hz，2H)，7.33(d，J＝7.5Hz，1H)，7.09(t，J＝7.5Hz，1H)，6.91(d，J＝8.1Hz，1H)，6.85(d，J＝8.1Hz，2H)，5.74(dd，J＝10.0，7.8Hz，1H)，4.51(dd，J＝14.5，10.0Hz，1H)，4.00-3.90(m，7H)。
反應(yīng)方案57 實(shí)施例178步驟1[2-(4-甲?；?苯甲?；被?-苯基]-氨基甲酸叔丁酯(315)向4-羧基苯甲醛(6g，40mmol)在二氯甲烷(10mL)內(nèi)的懸浮液中加入亞硫酰氯(4.1mL，56mmol，1.4當(dāng)量)，然后滴加DMF(1mL)。將該混合物回流4小時(shí)，將過量亞硫酰氯和DMF減壓除去。向(2-氨基苯基)-氨基甲酸叔丁酯(8.32g，40mmol，1當(dāng)量)在二氯甲烷(80mL)內(nèi)的于0℃攪拌著的溶液中加入4-甲酰基苯甲酰氯在二氯甲烷(20mL)中的懸浮液，然后加入二異丙基乙基胺(3.61mL，20mmol，1當(dāng)量)。將該混合物在0℃攪拌30分鐘，然后在室溫?cái)嚢?0分鐘。就該殘余粗產(chǎn)物用二氯甲烷(300mL)稀釋，用水洗滌。將合并的有機(jī)層干燥(MgSO4)，過濾并真空濃縮。通過硅膠柱色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(用20％乙酸乙酯在己烷中的混合物洗脫)，獲得了6.1g(45％產(chǎn)率)N-酰苯胺315。1H NMR(CDCl3)δ10.18(s，1H)，9.64(brs，1H)，8.20(d，J＝7.9Hz，2H)，8.06(d，J＝7.9Hz，2H)，7.96(d，J＝7.9Hz，1H)，7.28-7.38(m，1H)，7.24(d，J＝4.4Hz，1H)，6.84(s，1H)，6.81(d，J＝8.8Hz，1H)，1.58(s，9H)。
步驟2(2-{4-[(3，4-二甲氧基苯基氨基)-甲基]-苯甲?；被鶀-苯基)-氨基甲酸叔丁酯(316)按照類似于實(shí)施例144步驟3中描述的方法，但是用上面的化合物代替226，以定量產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物316。1H NMR(CDCl3)δ9.21(brs，1H)，8.01(d，J＝7.9Hz，2H)，7.86(d，J＝7.0Hz，1H)，7.55(d，J＝8.3Hz，2H)，7.20-7.34(m，3H)，6.89(brs，1H)，6.81(d，J＝8.8Hz，1H)，6.37(d，J＝2.2Hz，1H)，6.23(dd，J＝2.6，8.3Hz，1H)，4.45(s，2H)，3.89(s，3H)，3.88(s，3H)，1.58(s，9H)。
步驟3N-(2-氨基苯基)-4-[1-(3，4-二甲氧基苯基)-3-(4-甲基硫基苯基)-脲基甲基]-苯甲酰胺317向N-酰苯胺316(500mg，1.047mmol)在氯仿/THF(1∶1，10mL)內(nèi)的溶液中加入異氰酸酯(169μL，1.205mmol，1.15當(dāng)量)。將該混合物在室溫于氮?dú)夥障聰嚢柽^夜，將該殘余粗產(chǎn)物濃縮，通過硅膠柱色譜純化(用40％乙酸乙酯在己烷中的混合物洗脫)，獲得了606mg(90％產(chǎn)率)所需化合物。1H NMR(CDCl3)δ9.25(s，1H)，7.96(d，J＝8.3Hz，2H)，7.85(d，J＝7.0Hz，1H)，7.44(d，J＝8.3Hz，2H)，7.20-7.36(m，6H)，6.93(d，J＝3.5Hz，1H)，6.90(s，1H)，6.75(dd，J＝2.2，8.3Hz，1H)，6.68(dd，J＝2.6Hz，1H)，6.33(s，1H)，5.0(s，2H)，3.97(s，3H)，3.85(s，3H)，2.51(s，3H)，1.57(s，9H)。
按照類似于實(shí)施例42步驟3中描述的方法，但是用上面的化合物代替46，以85％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物317。1H NMR(DMSO-d6)δ.10.14(brs，1H)，7.99(d，J＝7.9Hz，2H)，7.93(s，1H)，7.49(d，J＝8.35Hz，4H)，7.39(d，J＝7.5Hz，1H)，7.10-7.30(2m，5H)，6.97(dd，J＝2.2，8.35Hz，1H)，6.77(dd，J＝2.2，8.35Hz，1H)，5.02(s，2H)，3.80(s，3H)，3.77(s，3H)，2.48(s，3H)。
反應(yīng)方案58 實(shí)施例179步驟1N-(2-氨基-苯基)-6-氯-煙酰胺(318)按照實(shí)施例42步驟2中描述的方法，由80％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物318。LRMS＝計(jì)算值246.69，實(shí)測(cè)值247.7。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-6-(喹啉-2-基硫基)-煙酰胺(319)按照實(shí)施例45步驟1中描述的方法，但是用318代替3，4，5-三甲氧基芐基胺，以20％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物319。1H NMR(CD3OD-d6)δ(ppm)9.08(d，J＝1.9Hz，1H)，8.35-8.25(m，2H)，7.99-7.56(m，7H)，7.23(dd，J＝1.2，7.9Hz，1H)，7.12(dd J＝1.4，7.9，14.0Hz，1H)，6.93(dd，J＝1.2，8.0Hz，1H)，6.79(ddd，J＝1.4，7.7，13.7Hz，1H)。
反應(yīng)方案59 步驟14-[(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-甲基]-苯甲酸(402a).
在室溫將4-甲酰基苯甲酸(2.53g；16.8mmol；1當(dāng)量)、4-嗎啉苯胺(3g；16.8mmol；1當(dāng)量)和Bu2SnCl2(510mg；1.68mmol；0.1當(dāng)量)在無水THF(20ml)中的懸浮液用PhSiH3(3.31ml；16.8mmol；1當(dāng)量)處理12小時(shí)。將該反應(yīng)過濾，用MeOH洗滌固體產(chǎn)物。該反應(yīng)的產(chǎn)量是5.25g(99％)。LRMS計(jì)算值312.37；實(shí)測(cè)值313.2。
步驟2N-(2-氨基-苯基)-4-[(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-甲基]-苯甲酰胺(402)向酸402a(2.61g；8.36mmol；1當(dāng)量)、1，2-苯二胺(903mg；8.36mmol；1當(dāng)量)和BOP(3.70g；8.36mmol；1當(dāng)量)在無水DMF(20ml)內(nèi)的溶液中加入Et3N(4.64ml；33.4mmol；4當(dāng)量)。攪拌過夜后，將大部分DMF減壓除去，通過色譜法純化(Hex∶EtAcO1∶2/EtAcO)。以70％的產(chǎn)率獲得了晶體402(2.35g)。1H-NMR(300.07MHz；DMSO-d6)δ(ppm)9.65(s，1H)，7.97(d，J＝7.9，2H)，7.53(d，J＝7.9，2H)，7.22(d，J＝7.5，1H)，7.03(dd，J＝7.0，7.5，1H)，6.83(d，J＝7.9，1H)，6.77(d，J＝8.8，2H)，6.65(dd，J＝7.5，7.0，1H)，6.57(d，J＝8.8，2H)，4.93(bs，2H)，4.36(d，J＝5.7，2H)，3.75(m，4H)，2.93(m，4H).LRMS計(jì)算值402.49；實(shí)測(cè)值403.4。
反應(yīng)方案60 實(shí)施例283a步驟1.4-[(3，4-二甲氧基苯基氨基)-甲基]-苯甲酸(424a)在50mL燒瓶?jī)?nèi)，將4-氨基藜蘆醚(1.53g，10mmol)、4-甲?；?苯甲酸(1.50g，10mmol)、二氯化二丁基錫(304mg，1mmol)、苯基甲硅烷(2.47ml，20mmol)在無水THF(10mL)和DMA(10ml)中的混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。除去溶劑后，將該殘余粗產(chǎn)物溶解在乙酸乙酯(100ml)中，然后用飽和NaHCO3水溶液(50ml×3)洗滌。將合并的水層用6％NaHSO4酸化至pH＝4。將所得白色懸浮液過濾，然后用水(5ml×3)洗滌濾餅。用冷凍干燥器將濾餅干燥，獲得所需的酸(1.92g，67％)，為白色固體產(chǎn)物。LRMS＝288(MH)+。
步驟2.N-(2-氨基苯基)-4-[(3，4-二甲氧基苯基氨基)-甲基]-苯甲酰胺(424b)在150ml燒瓶?jī)?nèi)，將酸(1.92g，6.69mmol)、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)磷六氟磷酸鹽(BOP，3.26g，7.37mmol)÷三乙胺(1.87ml，13.4mmol)、鄰苯二胺(1.30g，12.02mmol)在二氯甲烷(67ml)中的混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。除去溶劑后，將殘余粗產(chǎn)物溶解在EtOAc(100ml)中，然后用飽和NaHCO3溶液和鹽水50ml洗滌。將合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥，將濾液濃縮至干。通過色譜法純化粗產(chǎn)物(二氧化硅柱，55％-70％EtOAc在1％Et3N的己烷溶液中的混合物)，然后將所需級(jí)份濃縮至干。將殘余物懸浮在最少量的乙酸乙酯中，然后過濾，獲得了終產(chǎn)物(1.49g，59％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.65(s，1H)，7.98(d，J＝7.9Hz，2H)，7.54(d，J＝7.9Hz，2H)，7.22(d，J＝7.9Hz，1H)，7.02(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，6.83(d，J＝7.9Hz，1H)，6.72(d，J＝8.79Hz，1H)，6.45(dd，J＝7.5，7.5Hz，1H)，6.39(d，J＝2.2Hz，1H)，6.01-6.08(m，2H)，4.94(s，2H，NH2)，4.36(d，J＝6.16Hz，2H)，3.72(s，3H)，3.65(s，3H)。
實(shí)施例283b步驟1N-(4-氨基噻吩-3-基)-4-[(3，4-二甲氧基苯基氨基)-甲基]-苯甲酰胺將酸424a(1040mg；3.62mmol)；3，4-二氨基噻吩二鹽酸鹽(1017mg；5.44mmol；1.50當(dāng)量)和BOP(1770mg；4.0mmol；1.1當(dāng)量)懸浮在MeCN中，用三乙胺(4mL；29mmol)處理，在室溫?cái)嚢?8小時(shí)；濃縮，通過硅膠柱色譜純化(用50％EtOAc在DCM中的混合物洗脫)，獲得了527mg(1.37mmol；38％產(chǎn)率)化合物424c，其純度為90％。1H-NMR(300.07MHz；DMSO-d6)δ(ppm)8.56(s，1H)，7.78(d，J＝7.9Hz，2H)，7.43(d，J＝3.5Hz，1H)，7.38(d，J＝7.9Hz，2H)，6.73(d，J＝8.8Hz，1H)，6.33(d，J＝3.5Hz，1H)，6.58(d，J＝2.6Hz，1H)，6.13(dd，J＝2.6，8.3Hz，1H)，4.33(s，2H)，3.80(s，3H)，3.78(s，3H).LRMS計(jì)算值383.4642；實(shí)測(cè)值384.2(M+H)；406.2(M+Na)和192.6(M+2H)/2。
反應(yīng)方案61 步驟1甲基-(5-硝基苯并噻唑-2-基)-胺(456a)將2-氟-5-硝基苯胺(861mg；5.52mmol；1.02當(dāng)量)；Im2CS(960.3mg；5.39mmol)和無水K2CO3(1.45g)的混合物懸浮在無水DME(10mL)中，在室溫于氮?dú)夥障聰嚢?0分鐘。將該黃色懸浮液用DME(10mL)稀釋以增加流動(dòng)性，然后加入40％MeNH2在水中的溶液(4.0mL；46.5mmol；8.6當(dāng)量)。將該系統(tǒng)加熱至65℃，在該溫度下攪拌3.5小時(shí)，冷卻，用乙酸乙酯稀釋，用飽和NaCl洗滌(X2)。常規(guī)后處理操作之后，經(jīng)由硅膠柱色譜純化該深色粗產(chǎn)物混合物(依次用50％EtOAc在己烷中的混合物和5％MeOH在DCM中的混合物洗脫)，獲得了836.8mg(4.0mmol；72％產(chǎn)率)化合物456a。
步驟2N-甲基-苯并噻唑-2，5-二胺(456b)將硝基化合物456a(593mg；2.83mmol)；SnCl2(4.02g；20.8mmol；7.35當(dāng)量)和NH4OAc(4.5g)懸浮在THF∶MeOH∶H2O＝1∶1∶1(60mL)中，在70℃攪拌2小時(shí)，冷卻，用乙酸乙酯稀釋，依次用飽和NaHCO3和鹽水洗滌；干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。殘余物(443mg；2.43mmol；87％)表現(xiàn)出一致的光譜以及適于合成目的的純度，因此不用進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。
步驟34-[(2-甲基氨基苯并噻唑-5-基氨基)-甲基]-苯甲酸(456c)將苯胺456b(509mg；2.8mmol)；4-甲?；郊姿?426mg；2.8mmol)和Bu2SnCl2(198mg；0.65mmol；23％mol)在DME(14mL)中的溶液于室溫?cái)嚢?分鐘，用純凈的PhSiH3(0.6mL；4.7mmol；1.7mmol)處理，讓其反應(yīng)18小時(shí)。用MeOH處理該過量硅烷后，將該混合物濃縮，通過硅膠柱色譜純化(洗脫用5％MeOH在DCM中的溶液)，獲得了729mg(2.54mmol；91％產(chǎn)率)酸456c。
步驟4N-(2-氨基苯基)-4-[(2-甲基氨基苯并噻唑-5-基氨基)-甲基]-苯甲酰胺(456)將酸456c(729mg；2.54mmol)、1，2-苯二胺(376mg；3.47mmol；1.36當(dāng)量)和BOP(1.43g；3.23mmol；1.27當(dāng)量)的混合物溶解在乙腈(15mL)中，用三乙胺(3mL)處理，并攪拌過夜。用甲醇處理該反應(yīng)混合物，濃縮，通過硅膠柱色譜純化(40％EtOAc在DCM中的混合物)，將所得產(chǎn)物從DCM中結(jié)晶，獲得了358mg(0.88mmol；35％產(chǎn)率)純的化合物456。1H-NMR(300MHz；DMSO-d6)δ(ppm)9.57(s，1H)，7.92(d，J＝7.9Hz，2H)，7.66(d，J＝4.8Hz，1H)，7.48(d，J＝8.3Hz，2H)，7.26(d，J＝8.3Hz，1H)，7.15(d，J＝7.9Hz，1H)，6.95(t，J＝7.5Hz，1H)，6.76 4.87(bs，2H)，6.58(t，J＝7.5Hz，1H)，6.54(d，J＝1.8Hz，1H)，6.13(dd，J＝1.8，8.3Hz，1H)，6.27(t，J＝5.7Hz，1H)，4.87(bs，2H)，4.36(d，J＝5.7Hz，2H)，2.85(d，J＝4.8Hz，3H).LRMS計(jì)算值403.5008，實(shí)測(cè)值404.2(M+NH)和202.6(M+2H)/2。
反應(yīng)方案62 實(shí)施例235步驟14-(5-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基-硫基甲基)-苯甲酸甲酯(376a)向5-甲氧基-2-硫代苯并噻唑(2.00g，11.1mmol)在無水DMF(40ml)內(nèi)的溶液中加入4-(溴甲基)-苯甲酸甲酯(2.54g，11.1mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。將DMF蒸發(fā)，把殘余物在乙酸乙酯中研制30分鐘，然后過濾，并干燥。分離出HBr鹽形式的所需化合物98％產(chǎn)率，(4.44g)。1H NMR(DMSO)δ(ppm)7.90(d，J＝8.8Hz，2H)，7.56-7.52(m，3H)，7.09(d，J＝2.2Hz，1H)，7.01(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，4.73(s，2H)，3.82(s，6H).MS(計(jì)算值)328.1，(實(shí)測(cè)值)，329.2(MH)+。
步驟24-(5-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基-硫基甲基)-苯甲酸(376b)將LiOH.H2O(1.02g，24.4mmol)在水(15ml)中的溶液加到376a(3.99g，9.75mmol)在THF(10ml)內(nèi)的懸浮液中。將該反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。用HCl 1M將該反應(yīng)混合物酸化至pH4。在0℃將所需產(chǎn)物研制20分鐘，然后過濾，并干燥。獲得了化合物376b，為白色粉末(100％產(chǎn)率，3.05g)。1H NMR(DMSO)δ(ppm)12.85(bs，1H)，7.86(d，J＝8.1Hz，2H)，7.53(d，J＝8.1Hz，2H)，7.35(d，J＝8.1Hz，1H)，6.97(d，J＝2.2Hz，1H)，6.76(dd，J＝8.8，2.2Hz，1H)，4.60(s，2H)，3.82(s，3H).MS(計(jì)算值)314.1，(實(shí)測(cè)值)，315.1(MH)+。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-4-(5-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基-硫基甲基)-苯甲酰胺(376)按照實(shí)施例1步驟5中描述的方法，但是用4-(5-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基-硫基甲基)-苯甲酸2代替7，獲得了本標(biāo)題化合物376，為白色粉末36％產(chǎn)率(933mg)。1H NMR(DMSO)δ(ppm)12.42(bs，1H)，9.57(bs，1H)，7.89(d，J＝8.1Hz，2H)，7.55(d，J＝8.1Hz，2H)，7.34(d，J＝8.8Hz，1H)，7.14(d，J＝7.3Hz，1H)，6.98-6.93(m，2H)，6.77-6.55(m，2H)，6.58(dd，J＝7.3，7.3Hz，1H)，4.87(s，2H)，4.59(s，2H)，3.77(s，3H).MS(計(jì)算值)404.1，(實(shí)測(cè)值)，405.4(MH)+。
實(shí)施例180-328實(shí)施例180-327(化合物320-468)是用實(shí)施例85-179中描述的制備化合物126-319的相同方法(反應(yīng)方案11-58)制得的。
實(shí)施例329-344實(shí)施例329-344(化合物470-485)是用實(shí)施例1-143中描述的制備化合物8-224的相同方法(反應(yīng)方案1-32)制得的。
反應(yīng)方案63
實(shí)施例345步驟13-(4-溴-苯基)-丙烯酸甲酯(486)在0℃于氮?dú)夥障?，向無水i-Pr2NH(758μl，5.40mmol)在無水THF(25ml)內(nèi)的攪拌著的溶液中緩慢地加入n-BuLi溶液(2.22ml，5.54mmol，2.5M在己烷中的溶液)。30分鐘后，將LDA冷卻至-78℃，滴加無水乙酸甲酯(430μl，5.40mmol)。30分鐘后，緩慢地加入4-溴苯甲醛(500mg，2.70mmol)在無水THF(10ml)中的溶液。30分鐘后，加入2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪(569mg，3.24mmol)在無水THF(15ml)中的溶液。然后讓該混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒈３诌^夜。形成了懸浮液。將該反應(yīng)混合物倒入飽和NH4Cl水溶液內(nèi)，并用AcOEt稀釋。分離后，將有機(jī)層依次用H2O和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過快速硅膠色譜純化粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷10/90)，獲得了本標(biāo)題產(chǎn)物486(394mg，1.9mmol，61％產(chǎn)率)，為無色固體結(jié)晶。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.63(d，J＝16.2Hz，1H)，AB系統(tǒng)(δA＝7.53，δB＝7.39，J＝8.4Hz，4H)，6.43(d，J＝15.8Hz，1H)，3.82(s，3H)。
步驟23-[4-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-苯基]-丙烯酸甲酯(487)用氮?dú)鈱s2CO3(378mg，1.16mmol)、Pd(OAc)2(6mg，0.025mmol)、(rac)-BINAP(23mg，0.037mmol)的混合物吹掃10分鐘。分別加入486(200mg，0.83mmol)、3，4，5-三甲氧基苯胺(182mg，0.99mmol)和無水甲苯(5ml)。將該反應(yīng)混合物在100℃于氮?dú)夥障录訜?4小時(shí)。然后讓其冷卻至室溫，用AcOEt稀釋，依次用飽和NaHCO3水溶液、H2O、飽和NH4Cl、H2O和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥，過濾并濃縮。然后通過快速硅膠色譜純化該殘余粗產(chǎn)物(AcOEt/己烷40/60)，獲得了本標(biāo)題化合物487(280mg，0.82mmol，98％產(chǎn)率)，為黃色油狀物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)7.64(d，J＝16.2Hz，1H)，7.43(bd，J＝7.9Hz，2H)，7.12-6.86(m，2H)，6.60-6.20(m，3H，included at 6.29，d，J＝15.8Hz)，3.84(s，9H)，3.80(s，3H)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-3-[4-(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-苯基]-丙烯酰胺(488)采用與實(shí)施例1步驟4和5相同的方法，在2個(gè)步驟中由487制得了本標(biāo)題化合物488。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ(ppm)9.29(s，1H)，8.48(s，1H)，7.60-7.42(m，3H)，7.38(d，J＝7.5Hz，1H)，7.12(d，J＝8.4Hz，2H)，6.94(t，J＝7.5Hz，1H)，6.78(d，J＝7.9Hz，1H)，6.71(d，J＝15.8Hz，1H)，6.61(t，J＝7.1Hz，1H)，6.47(s，2H)，4.97(s，2H)，3.79(s，6H)，3.66(s，3H)。
反應(yīng)方案64 實(shí)施例346步驟13-(4-甲?；?3-甲氧基-苯基)-丙烯酸叔丁酯489采用實(shí)施例53步驟1中描述的方法，但是用4-羥基-2-甲氧基-苯甲醛代替84，然后采用實(shí)施例42步驟2中描述的方法，但是用上面的化合物代替42，以29％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物489。LRMS＝計(jì)算值262，實(shí)測(cè)值263.2(M+H+)。
步驟23-{3-甲氧基-4-[(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-甲基]-苯基}-丙烯酸叔丁酯490按照實(shí)施例144步驟3中描述的方法，但是用489代替4-甲酰基苯甲醛，以69％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物490。LRMS＝計(jì)算值429，實(shí)測(cè)值430.5(M+H+)。
步驟3N-(2-氨基-苯基)-3-{3-甲氧基-4-[(3，4，5-三甲氧基-苯基氨基)-甲基]-苯基}-丙烯酰胺491按照實(shí)施例42步驟3、4中描述的方法，但是用490代替46，以67％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物491。1H NMR(CDCl3)，δ(ppm)8.08(s，1H)，7.74(d，J＝15.4Hz，1H)，7.30(m，1H)，7.06(m，3H)；6.80(m，3H)，6.70(d，J＝15.4Hz，1H)，5.98(s，2H)，4.40(s，2H)；4.12(bs，3H)，3.94(s，3H)，3.84(s，3H)，3.77(s，6H)。
反應(yīng)方案65 實(shí)施例436步驟15-甲基-苯并呋喃-2-甲酸甲酯(583)將5-甲基水楊醛(1.0mg，7.5mmol)、K2CO3(1.55g，11.0mmol)和Bu4NBr(322mg，1mmol)在甲苯(30ml)中的攪拌著的懸浮液用溴丙二酸二甲酯(1.06ml，8.0mmol)處理。用迪安斯榻克分水器將該懸浮液加熱回流20小時(shí)。將該棕色懸浮液冷卻至25℃，并真空濃縮。將殘余物置于DCM中，并過濾。將濾液用H2O、1N NaOH和鹽水洗滌。用硫酸鎂將有機(jī)層干燥，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化殘余粗產(chǎn)物(10％乙酸乙酯/己烷)，獲得了本標(biāo)題化合物583(600mg，42％產(chǎn)率)。LRMS190.2(計(jì)算值)；191.1(實(shí)測(cè)值)。
步驟25-溴甲基-苯并呋喃-2-甲酸甲酯(585)將583(500mg，2.63mmol)、N-溴琥珀酰亞胺(561mg，3.15mmol)和1，1’-偶氮二(環(huán)己烷甲腈)(Vazo)(63mg，0.26mmol)在15ml CCl4中的混合物加熱回流過夜。將該混合物冷卻至室溫，加入水，用DCM萃取。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并濃縮。通過柱色譜法純化該殘余粗產(chǎn)物(30％乙酸乙酯/己烷)，獲得了本標(biāo)題化合物585(680mg，96％產(chǎn)率)。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)7.79(s，1H)，7.70-7.52(m，3H)，4.69(s，2H)，4.06(s，3H)，3.72(s，2H).LRMS268.2(計(jì)算值)；269.1(實(shí)測(cè)值)。
步驟35-[(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-甲基]-苯并呋喃-2-甲酸甲酯(586)按照實(shí)施例47步驟2中描述的方法，但是用585代替63，以40％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物586。LRMS341(計(jì)算值)；342.3(實(shí)測(cè)值)。
步驟45-[(3，4-二甲氧基-苯基氨基)-甲基]-苯并呋喃-2-甲酸(2-氨基-苯基)-酰胺(587)按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用585代替6，以29％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物587。1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.83(s，1H)，7.75(s，1H)，7.64(s，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.47(d，J＝9.0Hz，1H)，7.18(d，J＝8.0Hz，1H)，6.97(t，J＝7.5Hz，1H)，6.78(d，J＝8.0Hz，1H)，6.65(d，J＝8.5Hz，1H)，6.59(t，J＝7.5Hz，1H)，6.33(s，1H)，6.04(d，J＝8.0Hz，1H)，5.92(d，J＝5.5Hz，1H)，4.93(s，2H)，4.31(d，J＝5.5Hz，1H)，2.82(s，3H)，2.76(s，3H).LRMS417.46(計(jì)算值)；418.4(實(shí)測(cè)值)。
實(shí)施例437步驟15-硝基-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯(584)在5℃，將5-硝基-2-氯-苯甲醛(4.0g，21.6mmol)在DMF(40ml)內(nèi)的攪拌著的懸浮液用K2CO3(3.52g，25.5mmol)處理，然后用甘醇酸甲酯(1.93ml，21.6mmol)處理。將所得溶液溫?zé)嶂?5℃，攪拌20小時(shí)。然后將該溶液倒入250ml冰水內(nèi)，通過過濾收集所形成的沉淀。從EtOAc中結(jié)晶，獲得了細(xì)的淺橙色針狀物584(3.54g，69％)。LRMS237.0(計(jì)算值)；238.1(實(shí)測(cè)值).1H NMR(DMSO)δ(ppm)9.00(d，J＝2.2Hz，1H)，8.45(s，1H)，8.39-8.30(m，2H)，3.93(s，3H)。
步驟25-氨基-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯(588)將584(3.52g，14.8mmol)在甲醇(100ml)中的懸浮液用Fe粉(6.63g，118.7mmol)處理。將所得懸浮液加熱至回流，用15分鐘緩慢地加入12M HCl(8.5ml)。將所得深綠色懸浮液回流3小時(shí)，然后冷卻，濃縮。將殘余物置于EtOAc中，依次用飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾并濃縮，獲得了(2.57g，84％)。1H NMR(DMSO)δ(ppm)7.92(s，1H)，7.65(d，J＝8.8Hz，1H)，7.05(d，J＝1.5Hz，1H)，6.88(dd，J＝1.8，8.4Hz，1H)，5.27(s，2H)，3.85(s，3H).LRMS207.0(計(jì)算值)；208.1(實(shí)測(cè)值)。
步驟35-(3，4，5-三甲氧基-芐基氨基)-苯并[b]噻吩-2-甲酸甲酯(589)按照實(shí)施例144步驟3中描述的方法，但是用588代替226，以68％的產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物589。(DMSO)δ(ppm)7.94(s，1H)，7.69(d，J＝8.8Hz，1H)，7.02-6.99(m，2H)，6.73(s，2H)，6.41(t，J＝5.7Hz，1H)，4.21(d，J＝5.9Hz，2H)，3.84(s，3H)，3.75(s，6H)，3.62(s，3H).LRMS387.1(計(jì)算值)；388.3(實(shí)測(cè)值)。
步驟45-(3，4，5-三甲氧基-芐基氨基)-苯并[b]噻吩-2-甲酸(2-氨基-苯基)-酰胺(590)按照實(shí)施例1步驟4、5中描述的方法，但是用589代替6，以％產(chǎn)率獲得了本標(biāo)題化合物590。1H NMR(DMSO)δ(ppm)7.79(s，1H)，7.60(d，J＝8.8Hz，1H)，7.00-6.95(m，2H)，6.74(s，2H)，4.32(s，2H)，3.80(s，6H)，3.73(s，3H)。
實(shí)施例347-425實(shí)施例347-425(化合物492-570)是按照實(shí)施例40-346中描述的制備化合物44-491的相同方法(反應(yīng)方案3-64)制得的。
實(shí)施例426N-(2-氨基-苯基)-4-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-甲基]苯甲酰胺的合成反應(yīng)方案66 步驟14-胍基甲基-苯甲酸甲酯中間產(chǎn)物1的合成將4-氨基甲基-苯甲酸甲酯HCl(15.7g，77.8mmol)在DMF(85.6mL)和DIPEA(29.5mL，171.2mmol)中的混合物在室溫下攪拌10min。將吡唑-1-脒HCl(12.55g，85.6mmol)加入反應(yīng)混合物中，然后室溫?cái)嚢?小時(shí)，得到澄清溶液。將該混合物真空蒸發(fā)至干燥。加入飽和NaHCO3溶液(35mL)得到均勻懸浮液。將該懸浮液過濾并用冷水洗滌濾餅。將母液揮發(fā)至干燥，然后過濾。將兩種固體合并后用蒸餾水(50mL)再懸浮。然后用少量冷水和乙醚洗滌濾餅，得到12.32g白色結(jié)晶固體中間產(chǎn)物1(產(chǎn)率77％，M+1208，利用MS)。
步驟23-二甲基氨基-1-吡啶-3-基-丙烯酮中間產(chǎn)物2的合成將3-乙?；?吡啶(30.0g，247.6mmol)和DMF二甲基縮醛(65.8mL，495.2mmol)混合在一起，然后加熱回流4小時(shí)。將該反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干燥，然后加入50mL二乙醚，得到棕色懸浮液。將該懸浮液過濾得到36.97g橙色結(jié)晶產(chǎn)物(產(chǎn)率85％，M+1177，利用MS)。
步驟34-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-甲基]-苯甲酸甲酯中間產(chǎn)物3的合成將中間產(chǎn)物1(0.394g，1.9mmol)和中間產(chǎn)物2(0.402g，2.3mmol)和分子篩(0.2g，4A，粉末，＞5微米)與異丙醇(3.8mL)混合。將該反應(yīng)混合物加熱回流5小時(shí)。加入MeOH(50mL)，然后加熱回流。將渾濁溶液通過C鹽過濾。將母液蒸發(fā)至干燥，加入3mL EtOAC研磨殘余物。將懸浮液過濾得到0.317g白色結(jié)晶固體中間產(chǎn)物3(52％，M+1321，利用MS)。
步驟4N-(2-氨基-苯基)-4-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-甲基]-苯甲酰胺的合成將中間產(chǎn)物3(3.68g，11.5mmol)在室溫與THF(23mL)、MeOH(23mL)和水(11.5mL)混合。將LiOH(1.06g，25.3mmol)加入反應(yīng)混合物中。將形成的反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃過夜。當(dāng)該混合物冷卻到室溫時(shí)，加入HCl溶液(12.8mL，2N)調(diào)節(jié)pH＝3。將該混合物蒸發(fā)至干燥，然后通過過濾用少量水洗滌固體。將濾餅在冷凍干燥器上干燥，得到3.44g本標(biāo)題化合物的酸(95％，M+1307，利用MS)。
將本標(biāo)題化合物的酸(3.39g，11.1mmol)、BOP(5.679g，12.84mmol)和o-Ph(NH2)2(2.314g，21.4mmol)溶解在DMF(107mL)和Et3N(2.98mL，21.4mmol)的混合物中。將該反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后蒸發(fā)至干燥。殘余物用閃蒸塔(純EtOAc至5％MeOH/EtOAc)純化，然后濃縮需要的餾分。加入EtOAc研磨最終產(chǎn)物得到2.80g本標(biāo)題化合物(66％，M+1397，利用MS)。1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δ(ppm)9.57(s，1H)，9.22(s，1H)，8.66(d，J＝3.5Hz，1H)，8.39(d，J＝5.1Hz，2H)，8.00(t，J＝6.5Hz，1H)，7.90(d，J＝8.2Hz，2H)，7.50(m，3H)，7.25(d，J＝5.1Hz，1H)，7.12(d，J＝7.4Hz，1H)，6.94(dd，J＝7.0，7.8Hz，1H)，6.75(d，J＝8.2Hz，1H)，6.57(dd，J＝7.0，7.8Hz，1H)，4.86(s，2H)，4.64(d，J＝5.9Hz，2H)。
測(cè)定實(shí)施例1抑制組蛋白脫乙?；傅拿富钚匀薍DAC-1用從桿狀病毒昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)和純化的克隆重組人HDAC-1酶篩選HDAC抑制劑。對(duì)于脫乙酰化酶，將20,000cpm的[3H]-代謝標(biāo)記的乙酰化組蛋白底物(M.Yoshida等人，J.Biol.Chem.265(28)17174-17179(1990))與30μg克隆重組hHDAC-1于37℃培養(yǎng)10分鐘。通過加入乙酸(0.04M，終濃度)和HCl(250mM，終濃度)來停止該反應(yīng)。用乙酸乙酯萃取該混合物，通過閃爍計(jì)數(shù)來定量測(cè)定釋放的[3H]-乙酸。為了進(jìn)行抑制測(cè)定，將酶與化合物在4℃預(yù)培養(yǎng)30分鐘以開始酶測(cè)定。如下所述確定關(guān)于HDAC酶抑制劑的IC50值獲得各化合物的劑量反應(yīng)曲線，確定產(chǎn)生50％最大抑制的抑制劑濃度。代表性化合物的IC50值列在表5的第三欄中。
MTT測(cè)定在用化合物處理的前一天，將HCT116細(xì)胞(2000/孔)置于96-孔組織培養(yǎng)平板中。將不同濃度的化合物加到細(xì)胞中。將細(xì)胞在5％CO2培養(yǎng)器中于37℃培養(yǎng)72小時(shí)。將MTT(3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑溴化物，Sigma)以0.5mg/ml的終濃度加入，與細(xì)胞培養(yǎng)4小時(shí)，然后向培養(yǎng)的細(xì)胞中加入一體積的加溶緩沖液(50％N，N-二甲基甲酰胺，20％SDS，pH4.7)。培養(yǎng)過夜后，使用MR700平板讀數(shù)器(Dynatech Laboratories Inc.)，通過在570nM的比色讀數(shù)(使用在630nM的讀數(shù)作為參照)定量測(cè)定加溶的染料。依據(jù)相關(guān)細(xì)胞系(cell line)的標(biāo)準(zhǔn)生長(zhǎng)曲線將OD值轉(zhuǎn)化成細(xì)胞數(shù)目。將細(xì)胞數(shù)目減至溶劑處理細(xì)胞的數(shù)目的50％的濃度確定為MTT IC50。代表性化合物的IC50值列在表5的第四欄中。
3.通過免疫印跡測(cè)定全細(xì)胞中的組蛋白H4乙?；瘜⒃谂囵B(yǎng)基中生長(zhǎng)的T24人膀胱癌細(xì)胞與HDAC抑制劑一起培養(yǎng)16小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，按照M.Yoshida等人描述的方法(J.Biol.Chem.265(28)17174-17179(1990))從細(xì)胞中提取組蛋白。將總共20g組蛋白負(fù)載到SDS/PAGE上，并轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜上。用乙酰化組蛋白H-4的特異性多克隆抗體(Upstate Biotech Inc.)探測(cè)所述膜，然后加入與次級(jí)抗體綴合的辣根過氧化物酶(Sigma)。使用Kodak膜(Eastman Kodak)檢測(cè)增強(qiáng)的化學(xué)熒光(ECL)(Amersham)。通過測(cè)光密度術(shù)定量測(cè)定乙?；疕-4信號(hào)。代表性數(shù)據(jù)列在表5的第五欄中。數(shù)據(jù)是以將乙?；疕-4信號(hào)有效地降低50％的濃度(EC50)給出的。
表5a抑制組蛋白脫乙?；?

(na＝不能獲得；99＝＞25μM)表5b



(na＝不能獲得)表5c



表5d







表5e


表5f




















測(cè)定實(shí)施例2組蛋白脫乙?；敢种苿┰隗w內(nèi)對(duì)人腫瘤異種移植物的抗腫瘤作用給8-10周大小的雌性BALB/c裸鼠(Taconic Labs，GreatBarrington，NY)在側(cè)腹區(qū)域皮下注射2×106個(gè)預(yù)處理的HCT116人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞。在相同株系的裸鼠中通過最少3次連續(xù)腫瘤移植來進(jìn)行這些預(yù)處理。然后，切下約30mg腫瘤片斷，在Forene麻醉下(AbbottLabs，Geneve，Switzerland)在左側(cè)腹皮下移植到小鼠中。當(dāng)腫瘤達(dá)到100mm3的平均體積時(shí)，通過每日靜脈內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)注射組蛋白脫乙酰化酶抑制劑在適當(dāng)載體例如PBS、DMSO/水或Tween 80/水中的溶液來治療小鼠，開始劑量為10mg/kg。通過依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案的劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)來確定HDAC抑制劑的最佳劑量。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法(例如Meyer等人，Int.J.Cancer 43851-856(1989))，注射后每隔一天計(jì)算一次腫瘤體積。與僅用載體(即沒使用HDAC抑制劑)治療的對(duì)照相比，用本發(fā)明HDAC抑制劑治療使得腫瘤重量和體積顯著減小。此外，在測(cè)定時(shí)，與對(duì)照相比，組蛋白乙?；斤@著增加。所選化合物的數(shù)據(jù)列在表6中。圖1顯示了化合物106的完整實(shí)驗(yàn)結(jié)果，該化合物將腫瘤生長(zhǎng)抑制了80％。圖2-10顯示了所測(cè)試的其它化合物的結(jié)果。
表6在HCT 116結(jié)腸直腸腫瘤模型中的體內(nèi)抗腫瘤活性

a20mg/kg i.p.
b40mg/kg i.p.
表7組蛋白脫乙酰化酶抑制劑對(duì)裸鼠異種移植物模型的抗腫瘤作用

測(cè)定實(shí)施例3組蛋白脫乙?；敢种苿┖徒M蛋白脫乙酰化酶反義低聚核苷酸在體內(nèi)對(duì)腫瘤細(xì)胞的聯(lián)合抗腫瘤作用該實(shí)施例的目的是舉例說明聯(lián)合使用本發(fā)明組蛋白脫乙?；敢种苿┡c組蛋白脫乙酰化酶反義低聚核苷酸在提高抑制哺乳動(dòng)物中腫瘤生長(zhǎng)方面的能力。優(yōu)選地，反義低聚核苷酸與HDAC抑制劑抑制了相同組蛋白脫乙?；傅谋磉_(dá)和活性。
如實(shí)施例126所述，每天用含有約0.1mg-約30mg/kg體重的組蛋白脫乙?；阜戳x低聚核苷酸的鹽水制劑治療攜帶移植的HCT116腫瘤(平均體積為100mm3)的小鼠。每天用含有約0.01mg-約5mg/kg體重的HDAC抑制劑的可藥用制劑治療第二組小鼠。
某些小鼠既接受反義低聚核苷酸，也接受HDAC抑制劑。在這些小鼠中，一組可接受經(jīng)由尾靜脈同時(shí)靜脈內(nèi)給予的反義低聚核苷酸和HDAC抑制劑。另一組可接受經(jīng)由尾靜脈給予的反義低聚核苷酸和皮下給予的HDAC抑制劑。還有一組可接受都是皮下給予的反義低聚核苷酸和HDAC抑制劑。類似地建立對(duì)照組小鼠，它們不接受任何治療(例如僅接受鹽水)，僅接受錯(cuò)配的反義低聚核苷酸，不抑制組蛋白脫乙?；富钚缘膶?duì)照化合物，和錯(cuò)配的反義核苷酸和對(duì)照化合物。
用卡鉗測(cè)定腫瘤體積。與對(duì)照相比，用反義低聚核苷酸加上本發(fā)明組蛋白脫乙?；傅鞍滓种苿┲委熓沟媚[瘤重量和體積顯著減小。
權(quán)利要求
1.一種式(1)的組蛋白脫乙?；敢种苿?或其可藥用鹽。
2.一種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求1所述的化合物和可藥用載體。
3.一種抑制細(xì)胞中組蛋白脫乙?；傅姆椒?，所述方法包括將細(xì)胞與權(quán)利要求1所述的化合物接觸。
4.一種抑制細(xì)胞中組蛋白脫乙酰化酶的方法，所述方法包括將細(xì)胞與權(quán)利要求2所述的組合物接觸。
全文摘要
本發(fā)明涉及抑制組蛋白脫乙?；?。本發(fā)明提供了涉及抑制組蛋白脫乙?；富钚缘幕衔锖头椒ā１景l(fā)明還提供了治療細(xì)胞增殖性疾病和病癥的組合物和方法。
文檔編號(hào)C07D495/04GK1723207SQ200480001769
公開日2006年1月18日 申請(qǐng)日期2004年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月4日
發(fā)明者D·德洛爾姆, Z·周 申請(qǐng)人:梅特希爾基因公司