專利名稱：轉(zhuǎn)移素衍生物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的轉(zhuǎn)移素(metastin)衍生物及其用途。
背景技術(shù)：
已經(jīng)公知癌癥是全球?qū)е滤劳龅闹饕∫蛑?。最近治療癌癥的策略已經(jīng)集中于轉(zhuǎn)移。在該方法中，癌癥細(xì)胞從惡性腫瘤上脫落并然后侵襲周圍或遠(yuǎn)的組織，并在那里增殖。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)KiSS-1基因的產(chǎn)物抑制人黑素瘤和乳腺癌癥的轉(zhuǎn)移。
KiSS1肽最初確定為在C8161黑素瘤細(xì)胞中分化上調(diào)，所述的細(xì)胞已經(jīng)利用微細(xì)胞-介導(dǎo)的人染色體的轉(zhuǎn)移使其不具有轉(zhuǎn)移性。(Lee，JH等，J NatlCancer Inst 1996，88，1731-7).。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)KiSS1轉(zhuǎn)染進(jìn)入人黑素瘤和乳腺癌細(xì)胞可防止這些細(xì)胞轉(zhuǎn)移并不會導(dǎo)致細(xì)胞增殖。(Lee，JH等，Cancer Res 1997，57，2384-87)。此外，已經(jīng)表明KiSS1基因產(chǎn)物通過減少NF-κB與啟動子的結(jié)合抑制92-kDa 4型膠原酶(MM對9)表達(dá)。(Yan，C.等，J Biol Chem 2001，276，1164-72)。發(fā)現(xiàn)KiSS1基因產(chǎn)物在正常的人胎盤、睪丸、腦、胰腺和肝臟中表達(dá)。(Muir，AI等，J Biol Chem 2001，276，28969-75)。
KiSS-1編碼145-氨基酸殘基肽，其通過進(jìn)一步的加工成C-端酰胺化的最終54-氨基酸肽。54個氨基酸肽稱為“metastin”，為已知為OT7T175或AXOR 12的G-蛋白-偶聯(lián)的孤兒受體的配體。(Muir，AI.等，supra；Ohtaki，T，等，Nature 2001，411，613-7；Hori，A.等，Biochem Biophys Res Commun 2001，286，958-63；Kotani，M.等，J Biol Chem 2001，276，34631-6).。該受體與大鼠孤兒七螺旋區(qū)受體GPR54高度同源(Lee，DK.等，F(xiàn)EBS Lett 1999，446，103-7)(81％氨基酸一致性)，暗示這兩種受體為直向同源。轉(zhuǎn)移素增強(qiáng)粘著斑激酶的表達(dá)和活性，并減弱體內(nèi)hOT7T175轉(zhuǎn)染的B16-BL6黑素瘤的肺轉(zhuǎn)移。(Ohtaki，T.等，supra.)。也發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移素體外抑制hOT7T175轉(zhuǎn)染的中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞的趨化性和侵襲，并活化磷脂酶C以及釋放花生四烯酸以及磷酸化ERK。(Hori，A.等，supra和Kotani，M.等，supra.)。盡管這些通路典型地誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，沒有觀察到細(xì)胞生長的變化。
KiSS1基因位于人染色體1q32-q41上。(West，A.等，Genomics 1998，54，145-8)。但是，后來的實(shí)驗(yàn)證據(jù)暗示KiSS1的表達(dá)很可能被位于介于6q16.3-q23之間的40-cM區(qū)域的一種基因或多種基因調(diào)節(jié)。(Lee，JH.等，JNatl Cancer Inst 1996，88，1731-7)。在胰腺癌癥中，經(jīng)常觀察到6q、8p、9p、17p和18q位點(diǎn)并且這些改變傾向于引起淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及較遠(yuǎn)的轉(zhuǎn)移，暗示在這些區(qū)域存在負(fù)責(zé)胰腺癌轉(zhuǎn)移的一種轉(zhuǎn)移抑制子基因或多種基因。(Rigaud，G，等，Int J Cancer 2000，88，772-7；Yatsuoka，T.等，Am J Gastroenterol2000，95，2080-5；Harada，T.等，Oncology 2002，62，251-8).。這些結(jié)果暗示胰腺癌癥與轉(zhuǎn)移素的表達(dá)下調(diào)有關(guān)。此外，與正常的組織相比，在其他的癌癥如卵巢和乳腺癌以及甲狀腺乳突癌癥中，轉(zhuǎn)移素受體hOT7T175的過表達(dá)已經(jīng)得到證實(shí)(Muir，AI.等，supra；Ohtaki，T.等，supra)，盡管轉(zhuǎn)移素自身在腫瘤組織中過表達(dá)更不常見。(Lee，JH.等，supra)。KiSS-1的表達(dá)，即，轉(zhuǎn)移素的產(chǎn)生以及其受體在胰腺癌中的表達(dá)迄今為止還未研究。類似地，對內(nèi)源性表達(dá)受體的癌癥細(xì)胞運(yùn)動的影響還沒有進(jìn)行研究。
這些發(fā)現(xiàn)表明KiSS1-hOT7T175充當(dāng)轉(zhuǎn)移抑制子系統(tǒng)。由于轉(zhuǎn)移素抑制癌癥細(xì)胞的轉(zhuǎn)移且不影響正常細(xì)胞的細(xì)胞生長活性，迫切期望靶向轉(zhuǎn)移素受體以治療癌癥。因此，期望具有結(jié)合轉(zhuǎn)移素受體的化合物，抑制癌癥轉(zhuǎn)移和/或抑制癌癥增殖。此外，有用地具有轉(zhuǎn)移抑制活性并可用來治療急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥的化合物。
WO00/24890公開了人轉(zhuǎn)移素，WO01/75104公開了小鼠或大鼠轉(zhuǎn)移素并且WO02/85399公開了包括轉(zhuǎn)移素的緩釋制劑。這些參考公開了轉(zhuǎn)移素可抑制癌癥轉(zhuǎn)移。但是，期望發(fā)展抑制癌癥轉(zhuǎn)移和癌癥增殖并可用作癌癥治療有用的治療劑的化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)通過對相應(yīng)于或類似于轉(zhuǎn)移素氨基酸序列部分的肽進(jìn)行一定的修飾，得到的衍生物是穩(wěn)定的并且顯示突出的癌癥轉(zhuǎn)移抑制活性和癌癥增殖抑制活性。
本發(fā)明提供了下式表示的轉(zhuǎn)移素衍生物X-AA1-AA2-AA3-AA4-Z(I)
其中X為下式表示的基團(tuán) 其中Y為下式表示的基團(tuán) 或(v)
其中R1、R2、R3和R4各自選自氫原子或C1-6烷基；W1和W2各自選自氫原子、C1-6烷基、C6-14芳基或雜環(huán)基；R為下式表示的基團(tuán) 或 n為0、1或2；AA1為天然或非天然的芳香族氨基酸；AA2為Gly、Ala、Pro或Pic；AA3為脂肪族氨基酸；AA4為堿性氨基酸或瓜氨酸；Z選自(i)天然或非天然的芳香族氨基酸，或其酰胺，或其酯，(ii)下式表示的基團(tuán) 其中n1為0、1或2(iii)下式表示的基團(tuán) 其中n2為0、1或2，或(iv)下式表示的基團(tuán)
其中n2為0、1或2，或其鹽；本發(fā)明還提供了如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，其為4-[N，N-雙(2-吡啶基甲基)氨基甲基]苯甲酰基-Phe-Gly-Leu-Arg-Trp-NH2(FM052a)(SEQ ID NO4)、4-(胍基甲基)苯甲?；?Phe-Gly-Leu-Arg-Trp-NH2(FM053)(SEQ ID NO3)或其鹽。
本發(fā)明還提供了如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)或其鹽的前藥。
本發(fā)明還提供了藥物組合物，包括如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。本發(fā)明的藥物組合物為用于抑制癌癥轉(zhuǎn)移的有用藥物或用于抑制癌癥增殖的有用藥物。本發(fā)明的藥物組合物也為預(yù)防或治療癌癥的有用藥物。
本發(fā)明的藥物組合物還為調(diào)節(jié)胰腺功能的有用藥物。本發(fā)明的藥物組合物尤其為用于預(yù)防或治療急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥的有用藥物。
本發(fā)明還提供了藥物組合物，包括如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥，其為調(diào)節(jié)胎盤功能的有用藥物。
本發(fā)明還提供了藥物組合物，包括如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥，其為預(yù)防或治療纖毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂質(zhì)代謝障礙或引產(chǎn)的有用的藥物。
本發(fā)明還提供了一種用于抑制哺乳動物中癌癥轉(zhuǎn)移或抑制癌癥增殖的方法，所述的方法包括對哺乳動物施用有效量的如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防或治療哺乳動物中癌癥的方法，所述的方法包括對哺乳動物施用有效量的如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種調(diào)節(jié)哺乳動物胰腺功能的方法，所述的方法包括對哺乳動物給予有效量的如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防或治療哺乳動物中急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥的方法，所述的方法包括對哺乳動物給予有效量的如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種調(diào)節(jié)哺乳動物胎盤功能的方法，所述的方法包括對哺乳動物施用有效量的如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防或治療哺乳動物中纖毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂質(zhì)代謝障礙或引產(chǎn)的方法，所述的方法包括對哺乳動物施用有效量的如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種用于抑制癌癥轉(zhuǎn)移的藥物或用于抑制癌癥增殖的藥物，包括如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防或治療癌癥的藥物，包括如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種用于調(diào)節(jié)哺乳動物胰腺功能的藥物，包括如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防或治療急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥的制劑，包括如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種用于調(diào)節(jié)胎盤功能的藥物，包括如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防或治療纖毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂質(zhì)代謝障礙或引產(chǎn)的藥物，包括如上定義的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
本發(fā)明還提供了轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于抑制癌癥轉(zhuǎn)移或抑制癌癥增殖的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于預(yù)防或治療癌癥增殖的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于調(diào)節(jié)哺乳動物胰腺功能的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于預(yù)防或治療哺乳動物的急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于調(diào)節(jié)哺乳動物的胎盤功能的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于預(yù)防或治療哺乳動物中纖毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂質(zhì)代謝障礙或引產(chǎn)的藥物中的用途。
附圖簡述

圖1A顯示了轉(zhuǎn)移素mRNA在胰腺癌癥組織中的表達(dá)。
圖1B顯示了hOT7T175 mRNA在胰腺癌癥組織中的表達(dá)。
圖2顯示了KiSS-1 mRNA和hOT7T175 mRNA在6種胰腺癌癥細(xì)胞株中的表達(dá)。
圖3顯示了轉(zhuǎn)移素對胰腺癌癥細(xì)胞生長(AsPC-1和Panc-1)的影響。線條為平均值±SD。
圖4A顯示了用標(biāo)示的轉(zhuǎn)移素濃度作用12小時的AsPC-1和Panc-1遷移分析。線條為平均值±SD。*表示相對于對照p＜0.01。
圖4B顯示用轉(zhuǎn)移素處理12小時后AsPC-1和Panc-1細(xì)胞的侵襲分析。線條為平均值±SD。*表示相對于對照p＜0.01。
圖5A顯示了用轉(zhuǎn)移素處理以后AsPC-1細(xì)胞和Panc-1細(xì)胞中MAPK激活的蛋白印跡分析。
圖5B顯示了用轉(zhuǎn)移素處理后AsPC-1和Panc-1細(xì)胞中的pERK1/2和pp38的相對強(qiáng)度。結(jié)果為3個獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表。線條為平均值±SD。*表示相對于AsPC-1，p＜0.01。
圖6顯示KiSS-1肽的肽序列(SEQ ID NO2)以及其衍生物(按照出現(xiàn)的順序分別地表示SEQ ID NOS 1、3 & 4)。
圖7A顯示用KiSS-1的短衍生物進(jìn)行的Panc-1的增殖分析。
圖7B顯示用這些衍生物進(jìn)行的Panc-1遷移分析。線條為平均值±SD。*表示相對于對照p＜0.05。
圖7C顯示了兩種衍生物的連接對MAPK的激活。
發(fā)明詳述在結(jié)構(gòu)式中，X為下式表示的基團(tuán) 其中各符號具有如上定義的相同的含義。
Y為下式表示的基團(tuán)
或 其中R1至R4各自選自氫原子或C1-6烷基，并且W1和W2各自選自氫原子、C1-6烷基、C6-14芳基或雜環(huán)基。
C1-6烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、己基等。在一個實(shí)施方案中，C1-3烷基如甲基、乙基是優(yōu)選的。
在一種實(shí)施方案中，Y為Y3，R1至R4各自優(yōu)選地為氫原子。
C6-14芳基包括苯基、1-萘基、2-萘基、2-聯(lián)苯基、3-聯(lián)苯基、4-聯(lián)苯基和2-蒽基。
用于W1和W2的雜環(huán)基包括5～14員(單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)的)雜環(huán)基，除碳原子以外，包含1～4個選自氮原子、硫原子和氧原子的雜原子。優(yōu)選地使用(i)5～14員(優(yōu)選地5～10員)芳香性雜環(huán)基，(ii)5～10員非芳香性雜環(huán)基或(iii)從7～10員雜環(huán)橋環(huán)等上去除任意一個氫原子得到的一價(jià)基團(tuán)和6員芳香性雜環(huán)基。雜環(huán)基的具體的實(shí)例包括，但不限于，芳香性雜環(huán)基如噻吩基(2-噻吩基、3-噻吩基)、呋喃基(2-呋喃基、3-呋喃基)、吡啶基(2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基)、噻唑基(2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基)、噁唑基(2-噁唑基、4-噁唑基)、喹啉基(2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基、5-喹啉基、8-喹啉基)、異喹啉基(1-異喹啉基、3-異喹啉基、4-異喹啉基、5-異喹啉基)、吡嗪基(pirazinyl)、嘧啶基(2-嘧啶基、4-嘧啶基)、吡咯基(1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基)、咪唑基(1-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基)、吡唑基(1-吡唑基、3-吡唑基、4-吡唑基)、噠嗪基(3-噠嗪基、4-噠嗪基)、異噻唑基(3-異噻唑基)、異噁唑基(3-異噁唑基)、吲哚基(1-吲哚基、2-吲哚基、3-吲哚基)、2-苯并噻唑基、苯并[b]噻吩基(2-苯并[b]噻吩基、3-苯并[b]噻吩基)、苯并[b]呋喃基(2-苯并[b]呋喃基、3-苯并[b]呋喃基)等，以及非-芳香性的雜環(huán)基如吡咯烷基(1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基)、噁唑烷基(2-噁唑烷基)、咪唑啉基(1-咪唑啉基、2-咪唑啉基、4-咪唑啉基)、哌啶基(1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基)、哌嗪基(1-哌嗪基、2-哌嗪基)、嗎啉基、硫嗎啉基等。
優(yōu)選的W1和W2的實(shí)例包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基等。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y選自Y3、Y5、N，N-雙-(2-吡啶基甲基)氨基和4-胍基。
R為 或 在一種實(shí)施方案種，R優(yōu)選地為
在本發(fā)明的化合物中，n為0、1或2。在一種實(shí)施方案中，n＝1更優(yōu)選。
優(yōu)選的X的實(shí)例為4-(N，N-雙-(2-吡啶基甲基)氨基甲基)苯甲?；?-(胍基甲基)苯甲?；?br> AA1為天然或非天然的芳香族氨基酸。有用的芳香族氨基酸的實(shí)例包括Phe、Trp、Tyr、His或1-或2-萘基丙氨酸。在一些實(shí)施方案中，AA1優(yōu)選為Phe。
AA2選自Gly、Ala、Pro或Pic。優(yōu)選的AA2的實(shí)例為Gly、D-Ala、D-Pro或D-Pic。在一種實(shí)施方案中，AA2優(yōu)選為Gly。
AA3為脂肪族氨基酸。有用的脂肪族氨基酸的實(shí)例包括Leu、Ile、Val、NIe、Ala和Met。在一種實(shí)施方案中，AA3優(yōu)選為Leu。
AA4為堿性氨基酸或瓜氨酸。有用的堿性氨基酸的實(shí)例為Arg、Lys或Orn。在一種實(shí)施方案中，AA4優(yōu)選為Arg。
Z選自(i)天然或非天然的芳香族氨基酸，或其酰胺，或其酯，(ii)下式表示的基團(tuán) 其中n1為0、1或2，(iii)下式表示的基團(tuán) 其中n2為0、1或2，或(iv)下式表示的基團(tuán)
其中n2為0、1或2，或其鹽。
對Z有用的芳香族氨基酸的實(shí)例包括Phe、Trp、Tyr、His或1-或2-萘基丙氨酸的酰胺。在一個實(shí)施方案中，Z優(yōu)選為Trp的酰胺。
優(yōu)選的本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的實(shí)例為在下述制備實(shí)施例中產(chǎn)生的化合物。最優(yōu)選的本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物包括FM052a和FM053a。
本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)可通過本領(lǐng)域中公知的合成肽的方法進(jìn)行制備。合成肽的方法可為，例如，或者通過固相合成方法或液相合成方法。即，最終肽可通過縮合構(gòu)成本發(fā)明肽的部分肽或氨基酸以及剩余部分進(jìn)行制備，當(dāng)產(chǎn)物具有保護(hù)基的時候，去除保護(hù)基。已知的縮合方法以及去除保護(hù)基的方法的實(shí)例包括在下述(1)～(5)中記載的方法，這里以其整體引入作為參考(1)M.Bodanszky和M.A.Ondetti，Peptide Synthesis，IntersciencePublishers，New York(1966)；(2)Schroeder and Luebke，The Peptide，Academic Press，New York(1965)；(3)Nobuo Izumiya等，F(xiàn)undament and Experiment of Peptide Synthesis，Maruzen(K.K.)(1975)；(4)Haruaki Yazima and Syunpei Sakakibara，Biochemistry ExperimentalCourse 1，Protein Chemistry IV，205，(1977)；以及(5)Supervised by Haruaki Yazima，Development of Medicaments，secondseries，vol.14，Peptide Synthesis，Hirokawa Shoten.
此外，反應(yīng)之后，本發(fā)明的肽可通過組合常規(guī)的純化方法進(jìn)行分離和純化，例如，溶劑萃取、蒸餾、柱層析、液相層析以及重結(jié)晶。當(dāng)用上述方法得到的肽是游離肽的時候，可利用已知的方法將其轉(zhuǎn)化成合適的鹽，并且相反地，當(dāng)?shù)玫降碾氖躯}的形式的時候，可利用已知的方法轉(zhuǎn)化成游離肽。
關(guān)于保護(hù)的氨基酸或肽的縮合，可以使用用于肽合成的多種活化劑，具體地三取代的鏻鹽(trisphosphonium salt)、四甲基脲鹽(tetramethyluraniumsalt)、碳二亞胺是合適的。三取代的鏻鹽的實(shí)例包括苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸(PyBOP)、溴三(吡咯烷基)鏻鹽六氟磷酸(PyBroP)和7-氮雜苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸(PyAOP)，四甲基脲鹽的實(shí)例包括2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-六氟磷酸鹽(HBTU)、2-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-六氟磷酸鹽(HATU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)、2-(5-降冰片烯-2，3-二羧基酰亞胺基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TNTU)和O-(N-琥珀酰亞胺基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TSTU)，并且碳二亞胺的實(shí)例包括DCC、N，N’-二異丙基碳二亞胺(DIPCDI)和N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI·HCl)?？s合的時候，優(yōu)選加入消旋化抑制劑(如HONB、HOBt、HOAt、HOOBt等)。用于縮合的溶劑適當(dāng)?shù)剡x自已知用于肽縮合反應(yīng)中的溶劑。例如，使用酰胺類如無水或含水的N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮，鹵代烴如二氯甲烷和氯仿，醇如三氟乙醇和苯酚，亞碸類如二甲基亞碸，叔胺如吡啶，醚類如二噁烷和四氫呋喃，腈類如乙腈和丙腈，酯如乙酸甲酯和乙酸乙酯，或其合適的混合物。反應(yīng)溫度從肽連接形成反應(yīng)中使用的公知的溫度范圍之內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)?shù)剡x擇，并且通常在約-20℃至50℃的溫度范圍之內(nèi)選擇?；罨陌被嵫苌锿ǔ＿^量1.5～6-倍使用。在固相合成的情形下，當(dāng)縮合不足以用茚三酮反應(yīng)判斷結(jié)果的時候，足夠的縮合可通過不去除保護(hù)基的反復(fù)進(jìn)行縮合反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)。當(dāng)利用反復(fù)的反應(yīng)不能實(shí)現(xiàn)足夠的縮合的時候，未反應(yīng)的氨基酸可利用乙酸酐或乙?；溥蜻M(jìn)行酰化，不對后續(xù)反應(yīng)帶來任何影響。
可用于原料的氨基的保護(hù)基的實(shí)例包括Z、Boc、叔戊基氧基羰基、異龍腦基氧基羰基、4-甲氧基芐基氧基羰基、Cl-Z、Br-Z、金剛烷基氧基羰基、三氟乙酰基、鄰苯二甲?；?、甲?；?、2-硝基苯基亞磺?；?、二苯基硫膦基(phosphinothioyl)、Fmoc或本領(lǐng)域中公知的其他基團(tuán)。羧基保護(hù)基的實(shí)例包括，除了前述的C1-6烷基以外，C3-8環(huán)烷基和C7-14芳烷基作為R，烯丙基、2-金剛烷基、4-硝基芐基、4-甲氧基芐基、4-氯芐基、苯甲酰甲基、芐基氧基羰基肼、叔丁氧基羰基肼、三苯甲基肼、或本領(lǐng)域中公知的其他基團(tuán)。
絲氨酸和蘇氨酸的羥基可進(jìn)行保護(hù)，例如，通過酯化或醚化。適合該酯化反應(yīng)的基團(tuán)的實(shí)例包括衍生自低級(C2-4)烷?；缫阴；?，以及芳酰基如苯甲?；幕鶊F(tuán)，或本領(lǐng)域中公知的其他基團(tuán)。此外，醚化合適的基團(tuán)的實(shí)例包括芐基、四氫吡喃基、叔丁基以及三苯甲基(Trt)。
酪氨酸的酚羥基保護(hù)基的實(shí)例包括Bzl、2，6-二氯芐基、2-硝基芐基、Br-Z、叔丁基，或本領(lǐng)域中公知的其他基團(tuán)。
組氨酸的咪唑的保護(hù)基的實(shí)例包括Tos、4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺?；?Mtr)、DNP、Bom、Bum、Boc、Trt、Fmoc或本領(lǐng)域中公知的其他基團(tuán)。
精氨酸的胍基的保護(hù)基的實(shí)例包括Tos、Z、4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺?；?Mtr)、對甲氧基苯磺?；?MBS)、2，2，5，7，8-五甲基色滿-6-磺?；?Pmc)、三苯甲基-2-磺?；?Mts)、2，2，4，6，7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺?；?Pbf)、Boc、Z、NO2或本領(lǐng)域中公知的其他基團(tuán)。
賴氨酸側(cè)鏈氨基保護(hù)基的實(shí)例包括Z、Cl-Z、三氟乙?；?、Boc、Fmoc、Trt、Mtr、4，4-二甲基-2，6-二氧代環(huán)己亞基(2，6-dioxocyclohexylideneyl，Dde)，或本領(lǐng)域中公知的其他基團(tuán)。
色氨酸的吲哚基保護(hù)基的實(shí)例包括甲?；?For)、Z、Boc、Mts、Mtr或本領(lǐng)域中公知的其他基團(tuán)。
天冬酰胺和谷酰胺的保護(hù)基包括Trt、氧雜蒽基(xanthyl)(Xan)、4，4’-二甲氧基二苯甲基(Mbh)和2，4，6-三甲氧基芐基(Tmob)或本領(lǐng)域中公知的其他基團(tuán)。
活化原料羧基的實(shí)例包括相應(yīng)的酸酐、疊氮化物以及活化的酯(與醇(如五氯苯酚、2，4，5-三氯苯酚、2，4-二硝基苯酚、氰基甲基醇、對硝基苯酚、HONB、N-羥基琥珀酰亞胺、1-羥基苯并三唑(HOBt)、1-羥基1-7-氮雜苯并三唑(HOAt)形成的酯))?；罨习被鶊F(tuán)的實(shí)例包括相應(yīng)的亞磷酸酰胺。
脫去(去除)保護(hù)基方法的實(shí)例包括在催化劑如Pd黑或Pd碳存在下在氫氣流中的催化還原，用無水氟化氫、甲烷磺酸、三氟甲烷磺酸、三氟乙酸、溴化三磺?；柰?trimesylsilane bromide，TMSBr)、三甲基甲硅基三氟甲烷磺酸酯、四氟硼酸、三(三氟)硼、三溴化硼或其混合溶液進(jìn)行的酸處理，用二異丙基乙基胺、三乙基胺、哌啶或哌嗪以及用鈉/液氨的還原進(jìn)行的堿處理。利用前述酸處理去除反應(yīng)通常在溫度-20℃～40℃之間進(jìn)行，并且，在酸處理中，記入酸捕集劑如苯甲醚、苯酚、茴香硫醚、間甲酚和對甲酚或二甲基硫醚、1，4-丁二硫醇或1，2-乙二硫醇是有效的。此外，用作組氨酸的咪唑的保護(hù)基的2，4-二硝基苯基利用苯硫酚處理去除，并且用作色氨酸的吲哚保護(hù)基的甲?；ㄟ^用稀氫氧化鈉或稀氨水的堿處理而除去，除了利用在前述1，2-乙二硫醇或1，4-丁二硫醇存在下的酸處理脫保護(hù)以外。
用于不涉及原料反應(yīng)的官能團(tuán)保護(hù)的保護(hù)基可方便地根據(jù)已知的保護(hù)基或其他方式進(jìn)行選擇。類似地，參與反應(yīng)的保護(hù)基的去除以及官能團(tuán)的活化可通過本領(lǐng)域中公知的方法實(shí)現(xiàn)。
為了得到肽的酰胺，酰胺利用酰胺合成樹脂進(jìn)行固相合成，或羧基-端氨基酸的α-羧基被酰胺化，肽鏈在氨基側(cè)被延伸至需要的鏈長，并且只有肽鏈的N-端α-氨基的保護(hù)基被去除以制備肽，以及只有C-端羧基的保護(hù)基被去除以制備肽(或氨基酸)，并且兩種肽在前述的混合溶劑中縮合。縮合反應(yīng)的細(xì)節(jié)與上述描述的方法相同。純化利用縮合得到的保護(hù)的肽并利用前述的方法去除所有的保護(hù)基，從而得到需要的粗肽。該粗肽可利用公知的多種純化方式進(jìn)行純化，并且主要的級分可進(jìn)行凍干得到需要肽的酰胺。
當(dāng)本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)以構(gòu)象異構(gòu)體、消旋體、構(gòu)象異構(gòu)體等存在的時候，需要的時候，各異構(gòu)體可通過前述分離和純化手段分離得到。此外，當(dāng)本發(fā)明的化合物未消旋體的時候，可通過常規(guī)的光學(xué)拆分手段分離成S異構(gòu)體和R異構(gòu)體。
當(dāng)本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)具有立體異構(gòu)體的時候，本發(fā)明包括單獨(dú)異構(gòu)體的情形以及異構(gòu)體以混合物存在的情形。
此外，本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)可為水合的或未被水合的。
本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)可利用同位素(如3H、14C、35S)等進(jìn)行標(biāo)記。
在這里描述的肽中，根據(jù)常規(guī)的肽標(biāo)示方法，左端為N-端(氨基端)并且右端為C-端(羧基端)。肽的C-端可為酰胺(-CONH2)、羧基(-COOH)、羧酸根(-COO-)、烷基酰胺(-CONRR)或酯(-COOR)以及，尤其是，酰胺(-CONH2)是優(yōu)選的。酯或烷基酰胺的R的實(shí)例包括C1-6烷基如甲基、乙基、正丙基、異丙基和正丁基，C3-8環(huán)烷基如環(huán)戊基和環(huán)己基、C6-12芳基如苯基和α-萘基，苯基-C1-2烷基如芐基、苯乙基和二苯甲基和C7-14芳烷基如α-萘基-C1-2烷基如α-萘基甲基以及，另外地，通常用作口服酯的新戊酰氧基甲基。
本發(fā)明轉(zhuǎn)移素衍生物(I)鹽的實(shí)例包括金屬鹽、與銨形成的鹽、與有機(jī)堿形成的鹽、與無機(jī)酸形成的鹽、與有機(jī)酸形成的鹽、與堿性或酸性氨基酸形成的鹽等。優(yōu)選的金屬鹽的實(shí)例包括堿金屬鹽如鈉鹽、鉀鹽等；堿土金屬鹽如鈣鹽、鎂鹽、鋇鹽等；鋁鹽等。優(yōu)選的與有機(jī)堿形成的鹽的實(shí)例包括與三甲基胺、三乙基胺、吡啶、甲基吡啶、2，6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、環(huán)己基胺、二環(huán)己基胺、N，N’-二芐基乙二胺等形成的鹽。優(yōu)選的與無機(jī)酸形成的鹽的實(shí)例包括與氫氯酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的鹽。優(yōu)選的與有機(jī)酸形成的鹽的實(shí)例包括與甲酸、乙酸、三氟乙酸、酞酸、富馬酸、草酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、琥珀酸、蘋果酸、甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸等形成的鹽。優(yōu)選的與堿性氨基酸形成的鹽的實(shí)例包括與精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸等形成的鹽，并且優(yōu)選的與酸性氨基酸形成的鹽的實(shí)例包括與天冬氨酸、谷氨酸等形成的鹽。
其中，藥用鹽是優(yōu)選的。例如，當(dāng)化合物具有酸性官能團(tuán)的時候，無機(jī)鹽如堿金屬鹽(如鈉鹽、鉀鹽等)、堿土金屬鹽(如鈣鹽、鎂鹽、鋇鹽等)、銨鹽等是優(yōu)選的。當(dāng)化合物具有堿性官能團(tuán)的時候，與無機(jī)酸如與鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的鹽，以及與有機(jī)酸如乙酸、鄰苯二甲酸、富馬酸、草酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、琥珀酸、甲烷磺酸、對甲苯磺酸等形成的鹽是優(yōu)選的。
轉(zhuǎn)移素衍生物(I)或其鹽的前藥(下文中指為本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I))指在活體內(nèi)在生理?xiàng)l件下或由于與酶、胃酸等的反應(yīng)轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的化合物。即，本發(fā)明的前藥是由于，如，酶或胃酸等的氧化、還原、水解等轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的化合物。
本發(fā)明轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的前藥的實(shí)例包括(a)化合物，其中本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的氨基被?；?、烷基、磷酸等取代(如，化合物，其中本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的氨基被二十烷酰、丙氨?；?、戊基氨基羰基(5-甲基-2-氧代-1，3-二氧代戊烯-4-基)甲氧基羰基、四氫呋喃基、吡咯烷基甲基、新戊酰氧基甲基、叔丁基等取代)；(b)化合物，其中本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的羥基被?；?、烷基、磷酸、硼酸等取代(如化合物，其中本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的羥基被乙酰基、棕櫚?；?、丙酰基、新戊酰、琥珀酰基、富馬?；⒈滨；?、二甲基氨基甲基羰基等取代)；以及(c)化合物，其中本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的羧基被酯、酰胺等取代(如，化合物，其中本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的羧基被乙基酯、苯基酯、羧基甲基酯、二甲基氨基甲基酯、新戊酰氧基甲基酯、乙氧基羰基氧基乙基酯、2-苯并[c]呋喃酮基酯、(5-甲基-2-氧代-1，3-二氧代戊烯-4-基)甲基酯、環(huán)己基氧基羰基乙基酯、甲基酰胺等取代)。
這些前藥可利用已知的方法從本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)制備得到。
本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的前藥可為在生理?xiàng)l件下轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)的化合物，如″Pharmaceutical Research and Development″，Vol.7(Drug Design)，第163-198頁，1990年由Hirokawa PublishingCo.(Tokyo，Japan)出版中所記載。
本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)或其鹽或其前藥(下文指本發(fā)明的化合物)具有癌癥轉(zhuǎn)移抑制活性或癌癥增殖抑制活性。因此，本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素化合物可用于制備藥物組合物，如預(yù)防或治療所有的癌癥(如，肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、大腸癌、直腸癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮子宮頸癌、乳腺癌、腎臟癌、膀胱癌、腦瘤等)的藥物。
本發(fā)明的化合物也具有調(diào)節(jié)胰腺功能的活性并因此可用作藥物組合物，所述的組合物可用作預(yù)防或治療一些類型的胰腺疾病(如，急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥等)的治療藥物。
本發(fā)明的化合物也具有胎盤功能調(diào)節(jié)活性并因此可用作藥物組合物，將可用作用于預(yù)防或治療纖毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂質(zhì)代謝障礙或引產(chǎn)的藥物。
包括本發(fā)明的化合物的藥物組合物具有低毒性，并可根據(jù)制藥領(lǐng)域通常使用的公知的方法進(jìn)行配制，以其自身或與可藥用載體一起，制備成例如片劑(包括糖-包衣片劑和膜-包衣片劑)、散劑、顆粒、膠囊(包括軟膠囊)、液體、注射劑、栓劑、緩釋制劑等，并安全地經(jīng)口服或腸胃外給藥(如，局部、直腸、靜脈內(nèi)給藥等)。本發(fā)明的化合物在本發(fā)明制劑中的含量為約0.01～約100wt％，基于整個制劑。本發(fā)明的化合物的劑量隨給藥的對象、靶器官、病癥、給藥途徑等而變化；在口服給藥中，如，對癌癥病人，劑量通常為約0.1mg～約100mg，優(yōu)選地約1.0～約50mg，并且更優(yōu)選地為約1.0～約20mg每天(對60kg體重)。在腸胃外給藥中，單一劑量隨給藥對象、靶器官、病癥、給藥途徑等而變化，但是有利地，如，對于癌癥病人，以約0.01～約30mg，優(yōu)選地約0.1～約20mg，并且更優(yōu)選地約0.1～約10mg(對60kg體重)的日劑量靜脈內(nèi)施用本發(fā)明的化合物。劑量可按照本領(lǐng)域中已知的方法根據(jù)患者的體重進(jìn)行調(diào)整。
可用于本發(fā)明制劑的可藥用載體包括多種常規(guī)的有機(jī)或無機(jī)載體物質(zhì)。制劑物質(zhì)還包括，如，在固體制劑中的賦形劑、增白劑、粘合劑和崩解劑，以及在液體制劑中的溶劑、助溶劑、助懸劑、等張劑、緩沖劑、撫慰劑等。此外，如果必要，常規(guī)的添加劑如防腐劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑、吸附劑、潤濕劑等可以適當(dāng)?shù)牧考尤搿?br> 有用的賦形劑的實(shí)例包括，但不限于，乳糖、蔗糖、D-甘露醇、淀粉、玉米淀粉、結(jié)晶纖維素、輕質(zhì)無水硅酸等。
有用的增白劑的實(shí)例包括，但不限于，硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石、膠體二氧化硅等。
有用的粘合劑的實(shí)例包括，但不限于，結(jié)晶纖維素、蔗糖、D-甘露醇、糊精、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、蔗糖、明膠、甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉等。
有用的崩解劑的實(shí)例包括，但不限于，淀粉、羧基甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈣、羧基甲基淀粉鈉和L-羥基丙基纖維素。
有用的溶劑的實(shí)例包括，但不限于，注射劑水、醇、丙二醇、Macrogol、芝麻油、玉米油和橄欖油。
有用的溶解助劑的實(shí)例包括，但不限于，聚乙二醇、丙二醇、D-甘露醇、苯甲酸芐基酯、乙醇、三氨基甲烷、膽固醇、三乙醇胺、碳酸鈉和檸檬酸鈉。
有用的助懸劑的實(shí)例包括，但不限于，表面活性劑如硬脂酰三乙醇胺、月桂基硫酸鈉、月桂基氨基丙酸、卵磷脂、氯化苯甲烴銨、氯化芐乙氧銨、甘油單硬脂酸等；親水聚合物如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥基甲基纖維素、羥基乙基纖維素、羥基丙基纖維素等。
有用的等張劑的實(shí)例包括，但不限于，葡萄糖、D-山梨醇、氯化鈉、甘油和D-甘露醇。
有用的緩沖劑的實(shí)例包括，但不限于，磷酸鹽、乙酸鹽、碳酸鹽和檸檬酸鹽的緩沖溶液。
有用的撫慰劑的實(shí)例包括，但不限于，芐基醇等。
有用的防腐劑的實(shí)例包括，但不限于，對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、芐基醇、苯乙基醇、脫氫醋酸和山梨酸。
有用的抗氧化劑的實(shí)例包括，但不限于，亞硫酸鹽、抗壞血酸和α-生育酚。
有用的本發(fā)明化合物的實(shí)例可與本發(fā)明的化合物以外的藥物同時使用。可與本發(fā)明的化合物同時使用的藥物(下文指組合藥物)的實(shí)例包括治療癌癥的藥物如化療藥物、激素治療劑以及免疫治療劑。
化療藥物的實(shí)例包括，但不限于，烷化劑、抗代謝物拮抗劑、抗癌癥抗生素以及衍生自植物的抗癌藥物。
烷化劑的實(shí)例包括，但不限于，氮芥、鹽酸氮芥-N-氧化物、苯丁酸氮芥(chloram butyl)、環(huán)磷酰胺、異磷酰胺、塞替派、卡波醌、甲磺酸英丙舒凡、白消安、鹽酸尼莫司丁、二溴甘露醇、美法蘭、達(dá)卡巴嗪、雷莫司汀、雌莫司汀磷酸鈉、三亞胺嗪、卡莫司汀、洛莫司汀、鏈唑霉素、哌泊溴烷、依托格魯、卡鉑、順鉑、米鉑、奈達(dá)鉑、奧沙利鉑、六甲蜜胺、氨莫司汀、螺溴丙酰胺、福莫司汀、潑尼莫司汀、嘌嘧替派、威他霉素、替莫唑胺、蘇消安(treosulphan)、氯乙環(huán)磷酰胺、凈司他丁斯酯、卡波醌、阿多來新、半胱胺亞硝脲和比折來新。
抗代謝物的實(shí)例包括，但不限于，巰嘌呤、6-硫代肌苷、琉嘌呤苷、甲氨蝶呤、依諾他濱、阿糖胞苷、阿糖胞酯、鹽酸安西他濱、5-FU藥物(如，氟尿嘧啶、替加氟、UFT、脫氧氟尿苷、嘧福祿、gallocitabine、emmitefur)、氨蝶呤鈉、亞葉酸鈣、tabloid、甘氨硫嘌呤、亞葉酸鈣、左亞葉酸鈣、克拉屈濱、乙嘧替氟、氟達(dá)拉濱、吉西他濱、羥基脲、噴司他丁、吡曲克辛、碘苷、米托胍腙、thiazophrine和氨莫司汀。
抗癌癥抗生素的實(shí)例包括，但不限于，放線菌素-D、放線菌素-C、絲裂霉素-C、色霉素-A3、鹽酸博來霉素、硫酸博來霉素、硫酸培洛霉素、鹽酸柔紅霉素、鹽酸多柔比星、鹽酸阿柔比星、鹽酸吡柔比星、鹽酸表柔比星、新制癌菌素、光輝霉素、肉瘤霉素、嗜癌霉素、米托坦、鹽酸佐柔比星、鹽酸米托蒽醌和鹽酸伊達(dá)比星。
衍生自植物的抗癌藥的實(shí)例包括，但不限于，依托泊苷、磷酸依托泊苷、長春花堿、硫酸長春新堿、硫酸長春地辛、替尼泊苷、紫杉醇、多西他賽和長春瑞濱。
激素治療劑的實(shí)例包括，但不限于，磷雌酚、己烯雌酚、氯烯雌醚、醋酸甲羥孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸環(huán)丙氯地孕酮、達(dá)那唑、烯丙雌醇、孕三烯酮、美帕曲星、雷洛昔芬、奧美昔芬、左美洛昔芬、抗雌激素藥(如，枸櫞酸他莫昔芬、枸櫞酸托瑞米芬)、pill preparations、美雄烷、testrolactone、氨魯米特、LH-RH激動劑(如，醋酸性瑞林、布舍瑞林、亮丙瑞林)、屈洛昔芬、表硫雄醇、硫酸炔雌醇、芳香酶抑制劑(如，鹽酸法倔唑、阿那曲唑、retrozole、依西美坦、伏氯唑、福美坦)、抗雄激素藥(如，氟他胺、bicartamide、尼魯米特)、5α-還原酶抑制劑(如，非那司提、依立雄胺)、adrenocorticohormone藥(如，地塞米松、氫化潑尼松、倍他米松、曲安西龍)、雄激素合成抑制劑(如，阿比特龍)、和維生素A類以及阻滯維生素A類代謝的藥物(如，利阿唑)。LH-RH激動劑(如，醋酸性瑞林、布舍瑞林、亮丙瑞林)是優(yōu)選的。
免疫治療劑(BRM)的實(shí)例包括，但不限于，溶鏈菌、云芝多糖、西佐糖、香菇多糖、烏苯美司、干擾素、白細(xì)胞介素、巨噬細(xì)胞集落-刺激因子、粒細(xì)胞集落-刺激因子、促紅細(xì)胞生成素、淋巴細(xì)胞毒素、BCG疫苗、短小棒狀桿菌、左旋咪唑、多糖K和丙考達(dá)唑。
本發(fā)明的化合物與組合藥物的聯(lián)用提供了下述有益的效果(1)劑量減少，與本發(fā)明的化合物或組合藥物單獨(dú)給藥的情形相比；(2)與本發(fā)明的化合物聯(lián)用的藥物可根據(jù)病人的癥狀(輕度、嚴(yán)重等)進(jìn)行選擇；(3)通過選擇與本發(fā)明的化合物具有不同作用機(jī)制的組合藥物，可延長治療期；(4)通過選擇與本發(fā)明的化合物具有不同作用機(jī)制的組合藥物，可使治療效果持續(xù)；以及(5)通過使本發(fā)明的化合物和組合藥物聯(lián)用，能得到協(xié)同效果。
下文中，本發(fā)明的化合物(I)與組合藥物的聯(lián)用稱為“本發(fā)明的聯(lián)用藥”。
當(dāng)利用本發(fā)明的聯(lián)用藥的時候，本發(fā)明的化合物和組合藥物的給藥時間沒有限制，并且本發(fā)明的化合物或其藥物組合物以及組合藥物或其藥物組合物可以對給藥對象同時給藥，或在不同的時間給藥。組合藥物的劑量可根據(jù)臨床給藥量進(jìn)行確定，并可根據(jù)給藥對象、給藥途徑、疾病、組合等進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪x擇。
本發(fā)明的聯(lián)用藥的給藥方式?jīng)]有具體的限制，只要本發(fā)明的化合物和組合藥物聯(lián)合給藥。所述的給藥方式的實(shí)例包括下述方法(1)本發(fā)明的化合物和組合藥物同時制備得到單一的制劑進(jìn)行給藥；(2)本發(fā)明的化合物和組合藥物單獨(dú)制備以得到兩種制劑，利用同樣的途徑同時給藥；(3)本發(fā)明的化合物和組合藥物單獨(dú)制備以得到兩種制劑，可利用同樣的給藥途徑進(jìn)行給藥，只是給藥的時間不同；(4)本發(fā)明的化合物和組合藥物單獨(dú)制備以得到兩種制劑，利用不同的給藥途徑同時給藥；以及(5)本發(fā)明的化合物和組合藥物單獨(dú)制備以得到兩種制劑，在不同的時間利用不同的給藥途徑給藥(例如，以本發(fā)明的化合物和組合藥物這種順序，或以相反的順序給藥)。
本發(fā)明的聯(lián)用藥具有低毒性。因此，本發(fā)明的化合物和/或上述組合藥物可根據(jù)本領(lǐng)域中已知的方法進(jìn)行混和，用可藥理上允許的載體以得到藥物組合物，例如，片劑(包括糖-包衣的片劑、膜包衣的片劑)、散劑、顆粒、膠囊(包括軟膠囊)、溶液、注射劑、栓劑、緩釋制劑等，可經(jīng)口服或腸胃外途徑(如，局部、直腸、靜脈等)安全地給藥。注射劑可經(jīng)靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下或器官內(nèi)途徑給藥，或直接對受損部位給藥。
任何本領(lǐng)域中公知的藥理允許載體可用于制備本發(fā)明藥物組合物的聯(lián)用藥中，如，常規(guī)使用的多種有機(jī)或無機(jī)載體物質(zhì)。其他成分的實(shí)例包括固體制劑中的賦形劑、潤滑劑、粘合劑和崩解劑，或液體制劑中的溶劑、溶解助劑、助懸劑、等張劑、緩沖劑、撫慰劑等。此外，如果需要，常規(guī)的添加劑如防腐劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑、吸附劑、潤濕劑等也可以適當(dāng)?shù)牧亢线m地使用。
有用的賦形劑的實(shí)例包括，但不限于，乳糖、蔗糖、D-甘露醇、淀粉、玉米淀粉、結(jié)晶纖維素、輕質(zhì)無水硅酸等。
有用的潤滑劑包括的實(shí)例，但不限于，硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石、膠體二氧化硅等。
有用的粘合劑的實(shí)例包括，但不限于，結(jié)晶纖維素、蔗糖、D-甘露醇、糊精、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、蔗糖、明膠、甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉等。
有用的崩解劑的實(shí)例包括淀粉、羧基甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈣、羧基甲基淀粉鈉、L-羥基丙基纖維素等。
有用的溶劑的實(shí)例包括注射劑用水、醇、丙二醇、macrogol、芝麻油、玉米油、橄欖油等。
公開作為溶解助劑的實(shí)例為聚乙二醇、丙二醇、D-甘露醇、芐基苯甲酸酯、乙醇、三氨基甲烷、膽固醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉等。
公開的助懸劑的實(shí)例為表面活性劑如硬脂酰三乙醇胺、月桂基硫酸鈉、月桂基氨基丙酸、卵磷脂、氯芐烷銨、benzetonium chloride、甘油單硬脂酸酯等；親水聚合物如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥基甲基纖維素、羥基乙基纖維素、羥基丙基纖維素等。
有用的等張劑的實(shí)例包括，但不限于，葡萄糖、D-山梨醇、氯化鈉、甘油、D-甘露醇等。
有用的緩沖劑的實(shí)例包括，但不限于，磷酸鹽、乙酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽等的緩沖溶液。
有用的撫慰劑的實(shí)例包括，但不限于，芐基醇等。
防腐劑的實(shí)例包括對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、芐基醇、苯乙醇(phenetylalcohol)、脫氫醋酸、山梨酸等。
抗氧化劑的實(shí)例包括亞硫酸鹽、抗壞血酸、α-生育酚等。
本發(fā)明的化合物與組合藥物在本發(fā)明的聯(lián)用藥中的混和比率根據(jù)給藥對象、給藥途徑、疾病等進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪x擇。
例如，本發(fā)明的化合物在本發(fā)明的聯(lián)用藥中的含量根據(jù)劑型而不同，并通常為約0.01～100％重量，優(yōu)選地從約0.1～50％重量，還優(yōu)選地從約0.5～20％重量，基于制劑。
組合藥物在本發(fā)明的聯(lián)用藥中的含量隨制劑形式不同而異，并通常為約0.01～100％重量，優(yōu)選地約0.1～50％重量，還優(yōu)選地約0.5～20％重量，基于制劑。
添加劑如載體等在本發(fā)明的聯(lián)用藥中的含量隨制劑形式不同而異，并通常為約1～99.99％重量，優(yōu)選地為約10～90％重量，基于制劑。
當(dāng)本發(fā)明的化合物和組合藥物分開制劑的時候，可采用同樣的含量。
這些制劑可利用本領(lǐng)域中已知的方法進(jìn)行制備。例如，本發(fā)明的化合物和組合藥物可與下列成分一起配制成水性注射劑分散劑(如，Tween80(由Atlas Powder制造，US)、HCO 60(由Nikko Chemicals制造)、聚乙二醇、羧基甲基纖維素、藻酸鈉、羥基丙基甲基纖維素、糊精等)、穩(wěn)定劑(如，抗壞血酸、焦亞硫酸鈉等)、表面活性劑(如，聚山梨醇酯80、macrogol等)、助溶劑(如，甘油、乙醇等)、緩沖劑(如，磷酸及其堿金屬鹽、檸檬酸及其堿金屬鹽等)、等張劑(如，氯化鈉、氯化鉀、甘露醇、山梨醇、葡萄糖等)、pH調(diào)節(jié)劑(如，鹽酸、氫氧化鈉等)、防腐劑(如，對羥基苯甲酸乙基酯、苯甲酸、對羥基苯甲酸甲基酯、對羥基苯甲酸丙基酯、芐基醇等)、助溶劑(如，濃甘油、甲葡胺等)、溶解助劑(如，丙二醇、蔗糖等)、撫慰劑(如，葡萄糖、芐基醇等)等，或在植物油如橄欖油、芝麻油、玉米籽油、玉米油等或溶解助劑如丙二醇中溶解、懸浮或乳化并加工成油性注射劑。
當(dāng)制劑為口服給藥給藥的情形，賦形劑(如，乳糖、蔗糖、淀粉等)、崩解劑(如，淀粉、碳酸鈣等)、粘合劑(如、淀粉、阿拉伯膠、羧基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、羥基丙基纖維素等)、潤滑劑(如，滑石、硬脂酸鎂、聚乙二醇6000等)等，例如，可加入到本發(fā)明的化合物或組合藥物中，根據(jù)本身已知的方法，并將混合物壓制成型，然后如果需要，為了掩蓋味道、獲得腸溶特性或持久性，將成型產(chǎn)品利用本身已知的方法進(jìn)行包衣，以得到口服給藥的制劑。作為包衣劑，例如，羥基丙基甲基纖維素、乙基纖維素、羥基甲基纖維素、羥基丙基纖維素、聚氧乙二醇、Tween 80、PluronicF68、醋酸酞酸纖維素、酞酸羥基丙基甲基纖維素、醋酸琥珀酸羥基甲基纖維素、Eudoragit(甲基丙烯酸·丙烯酸共聚物，由Rohm，DE制造)、顏料(如，黃氧化鐵、二氧化鈦等)等可以使用?？诜o藥的制劑可為快速釋放制劑和緩釋制劑中的任一種。
例如，在為栓劑的情形下，本發(fā)明的化合物和組合藥物可根據(jù)本領(lǐng)域中公知的方法配制成油性或水性固體、半固體或液體栓劑。作為用于上述組合物中的油性基質(zhì)，例如，高級脂肪酸甘油酯[如，可可脂，Witebsols(由Dynamite Novel，DE制造)等]、中級脂肪酸甘油酯[如，Myglyols(由DynamiteNovel，DE制造)等]、或植物油(如，芝麻油、大豆油、玉米籽油等)等可以使用。此外，作為水性基質(zhì)，例如，聚乙二醇、丙二醇可以使用，并且作為水性凝膠基質(zhì)，例如，天然樹膠、纖維素衍生物、乙烯基聚合物、丙烯酸聚合物等可以使用。
緩釋劑的實(shí)例包括但不限于緩釋微膠囊。為了得到緩釋微膠囊，可以采用本領(lǐng)域中公知的方法，并且例如，優(yōu)選在給藥前加工成下面部分(2)中顯示的緩釋制劑。
本發(fā)明的化合物優(yōu)選加工成口服給藥制劑如固體制劑(如，散劑、顆粒、片劑、膠囊)等，或加工成直腸給藥制劑如栓劑。具體地，口服給藥制劑是優(yōu)選的。
取決于藥物的種類，組合藥物可加工成上述藥物形式。
本發(fā)明的化合物或組合藥物的注射劑及其制備、本發(fā)明的化合物或組合藥物的緩釋制劑或快速釋放制劑及其制備，以及本發(fā)明的化合物或組合藥物的舌下、含服或口內(nèi)快速崩解劑及其制備，都描述在下面。
(1)注射劑及其制備通過將本發(fā)明的化合物或組合藥物溶解在水中制備的注射劑是優(yōu)選的。注射劑可包含苯甲酸鹽和/或水楊酸鹽。
通過將本發(fā)明的化合物或組合藥物以及如果合適，苯甲酸鹽和/或水楊酸鹽溶解在水中得到注射劑。
作為上述的苯甲酸和水楊酸鹽，例如，堿金屬鹽如鈉、鉀等，堿土金屬鹽如鈣、鎂等，銨鹽、甲葡胺鹽、有機(jī)酸鹽如氨基丁三醇等可以使用。
本發(fā)明的化合物或組合藥物在注射劑中的濃度為0.5～50w/v％，優(yōu)選地約3～20w/v％。苯甲酸鹽或/和水楊酸鹽的濃度為0.5～50w/v％，優(yōu)選地3～20w/v％。
為了制備本發(fā)明的制劑，適當(dāng)?shù)鼗旌屯ǔＳ糜谥苽渥⑸鋭┑奶砑觿?。例如，穩(wěn)定劑(抗壞血酸、焦亞硫酸鈉等)、表面活性劑(聚山梨醇酯80、macrogol等)、助溶劑(甘油、乙醇等)、緩沖劑(磷酸及其堿金屬鹽、檸檬酸及其堿金屬鹽等)、等張劑(氯化鈉、氯化鉀等)、分散劑(羥基丙基甲基纖維素、糊精)、pH調(diào)節(jié)劑(鹽酸、氫氧化鈉等)、防腐劑(對羥基苯甲酸乙基酯、苯甲酸等)、助溶劑(濃甘油、甲葡胺等)、溶解助劑(丙二醇、蔗糖等)、撫慰劑(葡萄糖、芐基醇等)等可以加入。這些添加劑一般以通常用于注射劑的比例進(jìn)行混和。
有利地，通過加入pH調(diào)節(jié)劑，注射劑的pH控制為2～12，優(yōu)選地2.5～8.0。
通過將本發(fā)明的化合物或組合藥物以及如果需要，苯甲酸鹽和/或水楊酸鹽，并且如果必要，上述添加劑溶解在水中得到注射劑。這些成分可以任何順序溶解，并且可以制備注射劑的常規(guī)方法的同樣的方式進(jìn)行適當(dāng)?shù)厝芙狻?br> 可以常規(guī)注射劑使用的同樣的方式，將注射劑的水溶液可有利地進(jìn)行加熱，或者，例如，過濾滅菌、高壓加熱滅菌等以提供注射劑。
有利地，注射水溶液在100～121℃進(jìn)行高壓熱滅菌5～30分鐘。
此外，也可制備具有抗菌特性的溶液制劑以使其用作制劑，其可分開并可多次給藥。
(2)緩釋制劑或快速釋放制劑以及其配制緩釋制劑優(yōu)選地通過下述方式得到，如果需要，用膜劑如水-不溶物質(zhì)、可溶脹的聚合物等包衣包含本發(fā)明的化合物或組合藥物的核。例如，每天口服給藥一次的緩釋制劑是優(yōu)選的。
作為用于膜劑的水-不溶物質(zhì)，可以使用，例如，纖維素醚如乙基纖維素、丁基纖維素等，纖維素酯如硬脂酸纖維素、丙酸纖維素等、聚乙烯酯如聚乙烯乙酸酯、聚乙烯丁酸酯等、丙烯酸/甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲基酯共聚物、乙氧基乙基甲基丙烯酸酯/肉桂乙基甲基丙烯酸酯/氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲基酯)、聚甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酰胺、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物、聚(甲基丙烯酸酐)、甘油基甲基丙烯酸酯共聚物，具體地，基于丙烯酸的聚合物如Eudoragits(Rhom Farma)如Eudoragit RS-100、RL-100、RS-30D、RL-30D、RL-PO、RS-PO(丙烯酸乙基酯·甲基丙烯酸甲酯·三甲基氯化物甲基丙烯酸酯·銨甲基共聚物)、Eudoragit NE-30D(甲基丙烯酸甲基酯·丙烯酸乙基酯共聚物)等，氫化油如氫化蓖麻油(如，Lovery wax(Freunt)等)，蠟如巴西棕櫚蠟、脂肪酸甘油酯、石蠟等、聚甘油脂肪酯等。
作為可溶脹的聚合物，具有酸性離解基團(tuán)并且顯示pH依賴性溶脹的聚合物是優(yōu)選的，并且在酸性區(qū)域如在胃中顯示小的溶脹并且在中性區(qū)域如在小腸和大腸中顯示大的溶脹的聚合物是優(yōu)選的。
作為如此的具有酸性離解基團(tuán)并且顯示pH依賴性溶脹的聚合物，可交聯(lián)的聚丙烯酸共聚物如，例如，Carbomer 934P、940、941、974P、980、1342等，聚卡波非，聚卡波非鈣(后兩種由BF Goodrich制造)、Hibiswako103、104、105、304(都由Wako Purechemical Co.，Ltd.制造)等可以使用。
用于緩釋制劑的膜劑還可包含親水物質(zhì)。作為親水物質(zhì)，例如，可以使用包含磺酸基的聚糖類如pullulan、糊精、藻酸堿金屬鹽等，具有羥基烷基或羧基烷基的聚糖類如羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉等，甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇等。
緩釋制劑的膜劑中的水-不溶物質(zhì)的含量為約30～90％(w/w)，優(yōu)選地約35～80％(w/w)，還優(yōu)選地約40～75％(w/w)，可溶脹的聚合物的含量為約3～30％(w/w)，優(yōu)選地約3～15％(w/w)。膜劑還可包含親水物質(zhì)，并且在這種情形下，親水物質(zhì)在膜劑中的含量為約50％(w/w)或更少，優(yōu)選地約5～40％(w/w)，還優(yōu)選地約5～35％(w/w)。％(w/w)表示基于膜劑組合物的％重量，所述的膜劑組合物通過從膜劑溶液去除溶劑(如，水、低級醇如甲醇、乙醇等)而得到。
緩釋制劑制備如下通過制備如下例舉的包含藥物的核，然后，用膜劑溶液包衣得到的核，所述的膜劑溶液通過熱溶水-不溶物質(zhì)、可溶脹的聚合物等或通過將其溶解或分散在溶劑中進(jìn)行制備。
I.包含藥物的核制備將用膜劑包衣的包含藥物的核(下文中，有時簡單稱為核)沒有具體地限制，并優(yōu)選地，核形成為顆粒如顆?；蚣?xì)顆粒。當(dāng)核由顆?；蚣?xì)顆粒組成的時候，其平均粒徑優(yōu)選為約150～2000μm，還優(yōu)選地，約500～1400μm。
核的制備可利用常規(guī)的制備方法進(jìn)行，例如，合適的賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、穩(wěn)定劑等混和到藥物中，并將混合物進(jìn)行濕法擠出制粒方法、流化床制粒方法等以制備核。
在核中的藥物含量為約0.5～95％(w/w)，優(yōu)選地約5.0～80％(w/w)，還優(yōu)選地約30～70％(w/w)。
作為包含在核中的賦形劑，例如，糖類如蔗糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖等、淀粉、結(jié)晶纖維素、磷酸鈣、玉米淀粉等可以使用。其中，結(jié)晶纖維素、玉米淀粉是優(yōu)選的。
作為粘合劑，例如，使用聚乙烯醇、羥基丙基纖維素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、Pluronic F68、阿拉伯膠、明膠、淀粉等。作為崩解劑，使用例如，羧基甲基纖維素鈣(ECG505)、crosscarmelose鈉(Ac-二-Sol)、交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮(Crosspovidone)、低取代羥基丙基纖維素(L-HPC)等。其中，羥基丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥基丙基纖維素是優(yōu)選的。作為潤滑劑和凝結(jié)抑制劑，使用例如，滑石、硬脂酸鎂和無機(jī)鹽，并且作為潤滑劑，使用聚乙二醇等。作為穩(wěn)定劑，使用酸如酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸等。
除了上述方法以外，核還可通過例如，旋轉(zhuǎn)制粒方法(其中藥物或藥物與賦形劑、潤滑劑等的混合物部分地加入到為核的核心的惰性載體顆粒上，同時噴灑溶解在合適的溶劑如水、低級醇(如，甲醇、乙醇等)等中的粘合劑)、鍋包衣方法、流化床包衣方法或熔融制粒方法進(jìn)行制備。作為惰性載體顆粒，例如，可以使用由蔗糖、乳糖、淀粉、結(jié)晶纖維素、蠟制備的那些，并且其平均粒徑優(yōu)選為約100μm～1500μm。
為了將包含在核中地藥物以及膜劑分開，核的表面可用保護(hù)劑進(jìn)行包衣。作為保護(hù)基，使用例如，上述親水物質(zhì)、水-不溶物質(zhì)等。作為保護(hù)劑，優(yōu)選地聚乙二醇和具有羥基烷基或羧基烷基的多糖，更優(yōu)選地，使用羥基丙基甲基纖維素和羥基丙基纖維素。保護(hù)劑可包含，作為穩(wěn)定劑，酸如酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸等，以及潤滑劑如滑石等。當(dāng)使用保護(hù)劑的時候，包衣量為約1～15％(w/w)，優(yōu)選地約1～10％(w/w)，還優(yōu)選地約2～8％(w/w)，基于核。
保護(hù)劑可利用常規(guī)的包衣方法進(jìn)行包衣，并且具體地，保護(hù)劑可利用例如，流化床包衣方法、鍋包衣方法等進(jìn)行包衣。
II.用膜劑包衣核上述步驟I中得到的核用膜劑溶液進(jìn)行包衣以得到緩釋制劑，膜劑溶液通過將上述水-不溶物質(zhì)和pH-依賴性可溶脹的聚合物和親水物質(zhì)進(jìn)行熱融或通過將它們?nèi)芙饣蚍稚⒃谌軇┲小?br> 作為用膜劑溶液包衣核的方法，例如，噴霧包衣方法等可以使用。
水-不溶物質(zhì)、可溶脹的聚合物和親水物質(zhì)在膜劑溶液中的混和比例進(jìn)行適當(dāng)?shù)剡x擇以使這些成分在包衣膜中的含量分別為上述含量。
膜劑的包衣量為約1～90％(w/w)，優(yōu)選地約5～50％(w/w)，還優(yōu)選地約5～35％(w/w)，基于核(不包括保護(hù)劑的包衣量)。
作為膜劑溶液中的溶劑，水或有機(jī)溶劑可以單獨(dú)或以混合物的形式使用。在以混合物使用的時候，水與有機(jī)溶劑的混合比(水/有機(jī)溶劑重量)可在1～100％范圍內(nèi)變化，并優(yōu)選地1～約30％。有機(jī)溶劑沒有具體地限制只要其溶解水-不溶物質(zhì)，并且例如，低級醇如甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇等，低級烷酮如丙酮等、乙腈、氯仿、二氯甲烷等可以使用。其中，低級醇是優(yōu)選的，并且乙醇和異丙醇是具體地優(yōu)選的。水，以及水和有機(jī)溶劑的混合物優(yōu)選用作膜劑的溶劑。在這種情形下，如果必要，酸如酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸等也可加入到膜劑溶液中以穩(wěn)定膜劑溶液。
通過噴霧包衣的包衣操作可利用常規(guī)的包衣方法進(jìn)行實(shí)現(xiàn)，并且具體地，可以利用流化床包衣方法、鍋包衣方法等將膜劑溶液噴霧到核上。在這種情形下，如果必要，滑石、二氧化鈦、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、輕質(zhì)無水硅酸等也可加入作為潤滑劑，并且甘油脂肪酯、氫化蓖麻油、三乙基檸檬酸酯、十六烷醇、硬脂酰醇等也可加入作為增塑劑。
用膜劑包衣后，如果必要，抗靜電劑如滑石等可以混和。
快速釋放制劑可為液體(溶液、懸浮劑、乳劑等)或固體(顆粒、丸劑、片劑等)?？诜┖湍c胃外劑如注射劑等可以使用，并且口服劑是優(yōu)選的。
除活性成分藥物以外，快速釋放制劑可包含，還有載體、添加劑和常規(guī)用于制劑領(lǐng)域的賦形劑(下文中，有時簡稱為賦形劑)。使用的制劑賦形劑沒有具體的限制只要其為通常用作制劑賦形劑的賦形劑。例如，作為口服固體制劑的賦形劑，乳糖、淀粉、玉米淀粉、結(jié)晶纖維素(Avicel PH101，由Asahi Chemical Industry Co.，Ltd.制造，等)、粉末糖、顆粒糖、甘露醇、輕質(zhì)無水硅酸、碳酸鎂、碳酸鈣、L-半胱氨酸等可以使用，并且優(yōu)選地，玉米淀粉和甘露醇等可以使用。這些賦形劑可單獨(dú)使用或以兩種或多種組合使用。賦形劑的含量為，例如，約4.5～99.4w/w％，優(yōu)選地約20～98.5w/w％，還優(yōu)選地約30～97w/w％，基于快速釋放制劑的總量。
快速釋放制劑的藥物的含量可在約0.5～95％，優(yōu)選地約1～60％的范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)?shù)剡x擇，基于快速釋放制劑的總量。
當(dāng)快速釋放制劑為口服固體制劑的時候，其通常包含，除上述成分以外，還有崩解劑。作為崩解劑，可以使用，例如，羧基甲基纖維素鈣(ECG-505，由Gotoku Yakuhin制造)、crosscarmelose鈉(例如，Actisol，由AsahiChemical Industry Co.，Ltd.制造)、crosspovidone(例如，Kollidon CL，由BASF制造)、低取代羥基丙基纖維素(由Shin-Etsu Chemical Co.，Ltd.制造)、羧基甲基淀粉(由Matsutani Kagaku K.K.制造)、羧基甲基淀粉鈉(Exprotab，由Kimura Sangyo制造)、部分微粉化的(α-nized)淀粉(PCS，由Asahi Chemical Industry Co.，Ltd.制造)等可以使用，并且例如，可以使用崩解顆粒的下述這些崩解劑與水接觸后吸收水引起膨脹或構(gòu)成核的有效成分和賦形劑之間產(chǎn)生通道。這些崩解劑可單獨(dú)使用或以兩種或多種組合使用。崩解劑的用量適當(dāng)?shù)馗鶕?jù)使用化合物的種類以及混合量、釋放特性的設(shè)計(jì)等進(jìn)行選擇，并且例如，從約0.05～30w/w％，優(yōu)選地從約0.5～15w/w％，基于快速釋放劑的總量。
當(dāng)快速釋放制劑為口服固體制劑的時候，除上述組合物以外，如果需要其還可包含，固體制劑中常規(guī)使用的添加劑。作為添加劑，可以使用，例如，粘合劑(如，蔗糖、明膠、阿拉伯膠粉末、甲基纖維素、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧基甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、pluran、糊精等)、潤滑劑(如，聚乙二醇、硬脂酸鎂、滑石、輕質(zhì)無水硅酸(例如，aerosil(Nippon Aerosil))、表面活性劑(如，陰離子表面活性劑如烷基硫酸鈉等、非離子性表面活性劑如聚氧乙烯脂肪酸酯和聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物等)、著色劑(如，焦油著色物質(zhì)(tar coloringmatter)、焦糖、紅氧化鐵、二氧化鈦、核黃素)，如果必要，食欲促進(jìn)劑(如，甜味劑、香味劑等)、吸附劑、防腐劑、潤濕劑、抗靜電劑等。此外，作為穩(wěn)定劑，有機(jī)酸如酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、富馬酸等也可加入。
作為上述的粘合劑，羥基丙基纖維素、聚乙二醇和聚乙烯吡咯烷酮等優(yōu)選地使用。
快速釋放制劑可基于制劑的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行配制，混和上述成分，并且如果必要，進(jìn)一步揉捏混合物，并模壓成型。上述混和利用通常使用的方法進(jìn)行，例如，混和、揉捏等。具體地，當(dāng)快速釋放制劑形成為例如顆粒的時候，可根據(jù)與上述制備緩釋制劑的核的方法同樣的方法進(jìn)行配制，利用立式制粒機(jī)、通用揉捏機(jī)(由Hata Tekkosho制造)、流化床制粒機(jī)FD-5S(由Pulek制造)等混和各成分，然后，將混合物進(jìn)行濕法擠出制粒方法、流化床制粒方法等。
由此得到的快速釋放制劑和緩釋釋放制劑可分別地利用通常的方法以其自身制成產(chǎn)品或與制劑賦形劑等適當(dāng)?shù)刂苽涑僧a(chǎn)品，然后，同時給藥或以任何給藥間隔聯(lián)合給藥，或它們可以自身制成一種口服制劑(如，顆粒、細(xì)顆粒、片劑、膠囊等)或與制劑賦形劑等一起加工成口服制劑。也可加工成顆粒或細(xì)顆粒，并填充在同樣的膠囊中用作口服給藥的制劑。
(3)舌下、含服或口內(nèi)快速崩解劑及其制備。
舌下、含服或口內(nèi)快速崩解劑可為固體制劑如片劑等，或可為口服粘膜貼片(膜)。
作為舌下、含服或口內(nèi)快速崩解劑、包含本發(fā)明的化合物或組合藥物以及賦形劑的制劑是優(yōu)選的。其還可包含佐劑如潤滑劑/等張劑/親水載體/水-可分散聚合物/穩(wěn)定劑等。此外，為了易于吸收以及增加體內(nèi)使用效率，β-環(huán)糊精或β-環(huán)糊精衍生物(如，羥基丙基-β-環(huán)糊精等)等也可以包括在其中。
作為上述的賦形劑、乳糖、蔗糖、D-甘露醇、淀粉、結(jié)晶纖維素、輕質(zhì)無水硅酸等可以使用。作為潤滑劑，硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石、膠體二氧化硅等可以使用，并且具體地，硬脂酸鎂和膠體二氧化硅是優(yōu)選的。作為等張劑，氯化鈉、葡萄糖、果糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、甘油、脲等可以使用，并且具體地，甘露醇是優(yōu)選的。作為親水載體，可溶脹的親水載體如結(jié)晶纖維素、乙基纖維素、可交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、輕質(zhì)無水硅酸、硅酸、磷酸氫鈣、碳酸鈣等可以使用，并且具體地，結(jié)晶纖維素(如，細(xì)結(jié)晶纖維素等)是優(yōu)選的。作為水-可分散聚合物，膠(如，西黃蓍膠、阿拉伯膠、瓜爾膠)、藻酸鹽(如，藻酸鈉)、纖維素衍生物(如，甲基纖維素、羧基甲基纖維素、羥基甲基纖維素、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素)、明膠、水溶淀粉、聚丙烯酸(如，卡波姆)、聚甲基丙烯酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚卡波非、抗壞血酸棕櫚酸鹽等可以使用，以及羥基丙基甲基纖維素、聚丙烯酸、藻酸鹽、明膠、羧基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮/聚乙二醇等是優(yōu)選的。具體地，羥基丙基甲基纖維素是優(yōu)選的。作為穩(wěn)定劑，半胱氨酸、硫代山梨醇、酒石酸、檸檬酸、碳酸鈉、抗壞血酸、甘氨酸、亞硫酸鈉等可以使用，并且具體地，檸檬酸和抗壞血酸是優(yōu)選的。
舌下、含服或口內(nèi)快速崩解劑可利用本領(lǐng)域中已知的方法通過混和本發(fā)明的化合物或組合藥物和賦形劑進(jìn)行制備。此外，如果需要，佐劑如潤滑劑、等張劑、親水載體、水-可分散聚合物、穩(wěn)定劑、著色劑、甜味劑、防腐劑等可進(jìn)行混和。舌下、含服或口內(nèi)快速崩解劑按照下述方法得到通過同時或以一定的時間間隔混和上述成分，然后將混合物在壓力下按照片劑模壓成型。為了得到合適的硬度，也可以利用溶劑如水、醇等濕潤物質(zhì)，如果需要在制片前或后以及模壓成型后，將物質(zhì)干燥得到產(chǎn)品。
在模壓成型成粘膜貼片(膜)的情形下，本發(fā)明的化合物或組合藥物以及上述水-可分散聚合物(優(yōu)選地，羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素)、賦形劑等溶解在溶劑如水等中，并將得到的溶液拋射得到膜。此外，添加劑如增塑劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑、著色劑、緩沖劑、甜味劑等也可加入。為了使膜具有合適的彈性，二醇如聚乙二醇、丙二醇等也可包含在其中，或?yàn)榱颂岣吣趦?nèi)粘膜的粘附，生物粘附聚合物(如，聚聚卡波非、聚羧乙烯)也可包含在其中。在拋射的情形下，溶液傾倒在非粘附表面上，利用工具如醫(yī)生刀片等延伸至勻一的厚度(優(yōu)選地，約10～1000微米)，然后，將溶液干燥成膜。有利地將如此形成的膜在室溫或在加熱下干燥并切割成給定的面積。
作為優(yōu)選的口內(nèi)快速崩解劑，列出的有由網(wǎng)狀體組成的固體快速分散劑量劑，所述的網(wǎng)狀體包括本發(fā)明的化合物或組合藥物以及對本發(fā)明的化合物或組合藥物呈惰性的水溶或水-可擴(kuò)散載體。這種網(wǎng)狀體通過從固體組合物中升華溶劑得到，所述的固體組合物通過將本發(fā)明的化合物或組合藥物溶解在合適的溶劑而制備得到的溶液構(gòu)成。
除了本發(fā)明的化合物或組合藥物以外，優(yōu)選地口內(nèi)快速崩解劑組合物包含基質(zhì)形成劑和次級成分。
基質(zhì)形成劑的實(shí)例包括動物蛋白或植物蛋白如明膠、糊精以及大豆、小麥以及psyllium種子蛋白等；橡膠物質(zhì)如阿拉伯膠、瓜爾膠、瓊脂、xathanegum等；聚糖類；藻酸類；羧基甲基纖維素；鹿角菜膠；葡聚糖；pectines；合成的聚合物如聚乙烯吡咯烷酮等；衍生自明膠-阿拉伯膠復(fù)合物的物質(zhì)等。此外，糖類如甘露醇、葡聚糖、乳糖、半乳糖、海藻糖等；環(huán)狀糖類如環(huán)糊精等；無機(jī)鹽如磷酸鈉、氯化鈉和硅酸鋁等；具有2～12碳原子的氨基酸如甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-羥基脯氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-苯基丙氨酸等可以使用。
在固化前，可將一或多種基質(zhì)形成劑導(dǎo)入到溶液或懸浮劑中?；|(zhì)形成劑可與表面活性劑一起存在，或在排除表面活性劑的情形下存在。除了形成基質(zhì)以外，基質(zhì)形成劑有助于保持本發(fā)明的化合物或組合藥物在溶液或懸浮劑中的分散狀態(tài)。
組合物可包含次級成分如防腐劑、抗氧化劑、表面活性劑、增稠劑、著色劑、pH控制劑、調(diào)味劑、甜味劑、食品遮味劑等。作為合適的著色劑，可以有，黑色的和黃氧化鐵以及由Elis and Eberald制造的FD & C染料如FD & C藍(lán)2、FD & C紅40等。合適的調(diào)味劑的實(shí)例包括薄荷、黑莓、甘草、柑桔、檸檬、葡萄、焦糖、香草、櫻桃、葡萄香味及其組合。合適的pH控制劑的實(shí)例包括檸檬酸、酒石酸、磷酸、鹽酸和馬來酸。合適的甜味劑的實(shí)例包括阿司帕坦、乙酰舒泛K和索馬汀等。合適的食品遮味劑的實(shí)例包括碳酸氫鈉、離子交換樹脂、環(huán)糊精-包含化合物、吸附劑物質(zhì)和微囊封化合物。
所述的制劑包含本發(fā)明的化合物或組合藥物的量通常為從約0.1～50％重量，優(yōu)選地從約0.1～30％重量并優(yōu)選地為下述制劑(如上述的舌下劑、含服劑等)，其可在約1～60分鐘的范圍內(nèi)，優(yōu)選地約1～16分鐘，更優(yōu)選地約2～5分鐘溶解90％或更多的本發(fā)明的化合物或組合藥物(進(jìn)入水)，以及口內(nèi)快速崩解制劑，其在放置在口腔之后在1～60秒，優(yōu)選地1～30秒，還優(yōu)選地1～10秒內(nèi)崩解。
上述賦形劑在整個制劑中的含量為約10～99％重量，優(yōu)選地約30～90％重量。β-環(huán)糊精或β-環(huán)糊精衍生物在整個制劑中的含量為0～約30％重量。在整個制劑中潤滑劑的含量為約0.01～10％重量，優(yōu)選地約1～5％重量。等張劑在整個制劑中的含量為約0.1～90％重量，優(yōu)選地，約10～70％重量。親水載體劑在整個制劑中的含量為約0.1～50％重量，優(yōu)選地，約10～30％重量。水-可分散聚合物在整個制劑中的含量為約0.1～30％重量，優(yōu)選地，約10～25％重量。穩(wěn)定劑在整個制劑中的含量為約0.1～10％重量，優(yōu)選地，約1～5％重量。如果必要，上述制劑還可包含添加劑如著色劑、甜味劑、防腐劑等。
本發(fā)明的化合物的劑量隨給藥對象、靶器官、疾病、給藥途徑等而變化；在口服給藥中，如，對于癌癥病人，劑量通常為約0.1mg～約100mg，優(yōu)選地約1.0～約50mg，并且更優(yōu)選地約1.0～約20mg每天(對60kg體重)。在腸胃外給藥中，單劑量隨給藥對象、靶器官、疾病、給藥途徑等而變化，但是有利地，如，對于癌癥病人，以約0.01～約30mg，優(yōu)選地約0.1～約20mg，并且更優(yōu)選地約0.1～約10mg(對60kg體重)的日劑量經(jīng)靜脈內(nèi)施用本發(fā)明的化合物。劑量可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法依照給藥對象的體重進(jìn)行調(diào)整。當(dāng)然，由于上述劑量隨多種條件而變，小于上述劑量的量有時候也是足夠的。此外，有時候也必須給予大于上述劑量范圍的量。
除非副作用成為問題，組合藥物的量可設(shè)定為任何值。組合藥物的日劑量隨疾病的嚴(yán)重程度、年齡、性別、體重、對象敏感性差異、給藥時期、間隔以及藥用制劑的性質(zhì)、藥物以及種類、有效成分的種類等而不同，并且沒有具體地限制，在口服給藥的情形下，藥物的量通常為，例如，從約0.001～2000mg，優(yōu)選地從約0.01～500mg，還優(yōu)選地從約0.1～100mg/kg哺乳動物，并且通常一天給藥一次或分成每天4-次給藥。
在本發(fā)明的藥物組合物給藥中，本發(fā)明的化合物可在給藥組合藥物之后給藥或組合藥物，在給藥本發(fā)明的化合物之后給藥?；蛘?，它們可以同時給藥。當(dāng)以時間間隔給藥的時候，時間間隔隨有效成分、藥物形式以及給藥方法而不同，并且例如，當(dāng)組合藥物首先給藥的時候，舉例性的給藥方法為其中本發(fā)明的化合物在給藥組合藥物以后的1分鐘～3天，優(yōu)選地10分鐘～1天，更優(yōu)選地15分鐘～1小時的時間范圍內(nèi)給藥。當(dāng)本發(fā)明的化合物的首先給藥的時候，舉例性的給藥方法為其中組合藥物在給藥本發(fā)明的化合物以后的1分鐘～1天，優(yōu)選地10分鐘～6小時，更優(yōu)選地15分鐘～1小時的時間范圍內(nèi)給藥。
在優(yōu)選的給藥方法中，例如，加工成口服給藥制劑的組合藥物以約0.001～200mg/kg的日劑量經(jīng)口服給藥，并在15分鐘之后，加工成腸胃外給藥制劑的本發(fā)明的化合物以約0.005～0.5mg/kg的日劑量經(jīng)腸胃外給藥。
本發(fā)明還將利用下述參考例、實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)例進(jìn)行詳細(xì)解釋，但是這些實(shí)施例只是舉例性的并不限制本發(fā)明，并且在不偏離本發(fā)明范圍的基礎(chǔ)上，可能有變化。
在下述實(shí)施例中，“室溫”通常表示約10℃～約35℃。％在為產(chǎn)率的情形下表示mol/mol％，在為層析中使用的溶劑的情形下表示體積％，并且在其他的情形下表示重量％。在質(zhì)子NMR譜中，由于較寬而不能證實(shí)的質(zhì)子如OH和NH質(zhì)子，在數(shù)據(jù)中沒有記載。
用于說明書的其他縮寫表示下述含義。
DMFN，N-二甲基甲酰胺BisPyN，N-雙(2-吡啶基甲基)TFA三氟乙酸Gu-Amb4-(胍基甲基)苯甲?；鵓ic2-哌啶酸在說明書中，氨基酸、肽、保護(hù)基、活化基以及其他基團(tuán)的代碼按照IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature表示或利用本領(lǐng)域中的通用代碼表示，代碼實(shí)例顯示在下面。對于可能具有光學(xué)異構(gòu)體的氨基酸，除非另有指明，為L形式。
Gly甘氨酸Ala丙氨酸Val纈氨酸Leu亮氨酸Ile異亮氨酸Ser絲氨酸Thr蘇氨酸Met蛋氨酸Glu谷氨酸Asp天冬氨酸Lys賴氨酸Arg精氨酸His組氨酸Phe苯基丙氨酸Tyr酪氨酸Trp色氨酸Pro脯氨酸Asn天冬酰胺Gln谷酰胺Cys半胱氨酸NIe正亮氨酸Orn鳥氨酸Asx天冬酰胺或天冬氨酸Glx谷酰胺或谷氨酸Amb4-(氨基甲基)苯甲酸ATP腺苷三磷酸在說明書中的序列識別號(SEQ ID NO)表示了下述序列。人轉(zhuǎn)移素的氨基酸序列下述實(shí)施例更詳細(xì)地舉例說明了本發(fā)明，但是這些并不限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例保護(hù)的肽樹脂合成的一般步驟。
保護(hù)的肽-樹脂利用基于Fmoc的固相肽合成通過手工構(gòu)建。Pbf用于Arg側(cè)鏈保護(hù)。Fmoc脫保護(hù)利用20％哌啶的DMF溶液實(shí)現(xiàn)(2×1分鐘，1×20分鐘)。Fmoc-氨基酸按照下述方法偶聯(lián)相對于游離的氨基利用5當(dāng)量的試劑(Fmoc-氨基酸、N，N’-二異丙基碳二亞胺(DIPCDI)和HOBt·H2O)在DMF中反應(yīng)1.5小時。
制備例1BisPy-Amb-Phe-Gly-Leu-Arg-Trp-NH2(FM052a)(SEQ ID NO4).
利用通常的偶聯(lián)步驟將Trp、Arg(Pbf)、Leu、Gly、Phe、Amb殘基依次偶聯(lián)在Fmoc-Rink樹脂(0.51mmol/g，78.4mg，0.04mmol)上。用20％哌啶處理后，N-端氨基按照下述方法進(jìn)行修飾用2-吡啶甲醛(32μL，0.338mmol)和NaBH(OAc)3(112mg，0.528mmol)在DMF-二氯甲烷在25℃反應(yīng)2小時處理保護(hù)的肽樹脂。將樹脂用TFA/茴香硫醚/m-甲酚/1，2-乙二硫醇/H2O(160∶10∶10∶5∶10∶4，5mL)在0℃處理2小時。通過過濾從反應(yīng)混合物中分離出樹脂，用TFA洗滌兩次，并將濾液和洗液合并以在減壓下濃縮。在減壓下濃縮后，加入冰冷的Et2O。離心收集得到的粉末并傾析以與上清液分離，并將粉末用Et2O洗滌三次，溶解在1N乙酸中，并用蒸餾水稀釋。經(jīng)制備性HPLC(Cosmosil 5C18 AR-II柱，Nacalai Tesque乙腈∶水)純化后，得到單峰多肽并凍干。肽的純度用HPLC測定。由此得到的標(biāo)題肽FM052a為四-TFA鹽的形式(8.43mg，15％產(chǎn)率)，為無色凍干粉末。
制備例2Gu-Amb-Phe-Gly-Leu-Arg-Trp-NH2(FM053a)(SEQ ID NO3)利用基本上類似于上述針對FM052a制備的步驟進(jìn)行FM053a的合成，除了吡啶-2-甲醛和氫化的三乙酰氧基硼鈉。N-端氨基的修飾利用1H-吡唑-1-甲酰胺-鹽酸鹽(29mg，0.200mmol)和N，N-二異丙基乙基胺(70mL，0.400mmol)在DMF中處理進(jìn)行以得到目標(biāo)肽FM053a的二-TFA鹽(5.96mg，14％產(chǎn)率)的無色凍干粉末。
縮寫Pbf＝2，2，4，6，7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺?；籇MF＝N，N-二甲基甲酰胺；BisPy＝N，N-雙(2-吡啶基甲基)；TFA＝三氟乙酸；Gu-Amb＝4-(胍基甲基)苯甲?；粚?shí)驗(yàn)例轉(zhuǎn)移素衍生物FM052a和FM053a對胰腺癌癥細(xì)胞遷移的影響(i)細(xì)胞培養(yǎng)胰腺癌癥細(xì)胞系A(chǔ)sPC-1、BxPC-3、Capan-2、CFPAC-1、Panc-1和Suit-2從American Type Culture Collection購得。將細(xì)胞在補(bǔ)充有10％胎牛血清、100單位/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的適當(dāng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)成單層，在37℃在5％CO2/95％空氣的濕度下。對于AsPC-1和Panc-1，一旦達(dá)到80％融合，去除培養(yǎng)基，將細(xì)胞在磷酸-緩沖鹽(PBS)中洗滌，并用帶有10％胎牛血清的漸增劑量的轉(zhuǎn)移素(Takeda Chemical Industries，Osaka，Japan)處理，并在15分鐘后按照如下的方法分離蛋白。
(ii)病人以及腫瘤樣品本研究中包括患有胰腺十二指腸腺癌的30位病人，他們?yōu)樵?998年1月和2001年6月間在我們部門接受胰腺切除術(shù)的患者。排除患有其他胰腺惡性疾病如管內(nèi)乳突粘蛋白腺癌、腺泡細(xì)胞癌以及內(nèi)分泌腫瘤的病人。組織病理學(xué)診斷由Department of Pathology of Kyoto University Hospital證實(shí)。胰腺癌癥根據(jù)pTNM(UICC)系統(tǒng)進(jìn)行分期(Sobin，L.H.和Fleming，I.D.TNM Classification of Malignant Tumors，fifth edition(1997).UnionInternationale Contre le Cancer and the American Joint Committee on Cancer，Cancer.801803-4.，1997)。在獲得病人知情同意后按照制度規(guī)定收集腫瘤標(biāo)本。用于測定mRNA表達(dá)的樣品在手術(shù)時立即在液氮中冷凍并在-80℃儲存。
(iii)定量RT-PCR為了監(jiān)測基因表達(dá)，進(jìn)行定量實(shí)時RT-PCR分析。該方法使用DNA聚合酶(AmpliTaq Gold)的5’核酸外切酶活性(Bieche，I.等，Cancer Res.592759-65.，1999；Schmittgen，T.D.等，Anal Biochem.285194-204.，2000；and Yuan，A.等，Lab Invest.801671-80.，2000)。
簡言之，在基因特異性PCR引物對限定的擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)，構(gòu)建用兩種熒光染料標(biāo)記的寡核苷酸探針并指定為TaqMan探針。只要探針是完整的，在5’端報(bào)告染料(6-羧基-熒光素，F(xiàn)AM)的發(fā)射被在3’端的第二種熒光染料(6-羧基-四甲基-羅丹明，TAMRA)所淬滅。在PCR的延伸期，聚合酶斷裂TaqMan探針，導(dǎo)致報(bào)告染料的釋放。報(bào)告染料發(fā)射的增加量利用組合分析軟件的自動序列檢測器(ABI Prism 7700 Sequence Detection System；PEApplied Biosystems)進(jìn)行檢測。反應(yīng)條件按照廠商的步驟。5μl的cDNA(反轉(zhuǎn)錄混合物)與25μl TaqMan Universal PCR Master Mix(PE AppliedBiosystems)和寡核苷酸(對引物終濃度為0.3μM；對TaqMan雜交探針終濃度為0.2μM)在50μl體積中進(jìn)行分析。
下述引物和TaqMan探針用于分析(TAKEDA)。
對KiSS-1上游引物5’-ACTCACTGGTTTCTTGGCAGC-3’(SEQ ID NO5)下游引物5’-ACCTTTTCTAATGGCTCCCCA-3’(SEQ ID NO6)TaqMan探針5’(FAM)-ACTGCTTTCCTCTGTGCCACCCACT-(TAMRA)3’(SEQ IDNO7)以及，對于hOT7T175，上游引物5’-CGACTTCATGTGCAAGTTCGTC-3’(SEQ ID NO8)下游引物5’-CACACTCATGGCGGTCAGAG-3’(SEQ ID NO9)TaqMan探針5’(FAM)-ACTACATCCAGCAGGTCTCGGTGCAGG-(TAMRA)3’(SEQ IDNO10)熱循環(huán)參數(shù)為95℃進(jìn)行10分鐘(熱活化Taq-聚合酶)、然后40個循環(huán)的95℃15sec以及60℃1分鐘。GAPDH RNA的質(zhì)量以及標(biāo)準(zhǔn)化評價(jià)用TaqMan GAPDH Control Reagent kit(PE Applied Biosystems)進(jìn)行，后者使用標(biāo)準(zhǔn)的TaqMan探針化學(xué)方法。
(iv)蛋白提取以及蛋白印跡用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞收集到微管中并在包含50mM HEPES(pH 7.0)、250mM NaCl、0.1％Nonidet對40、1mM苯基甲基磺酰基氟(PMSF)和20μg/ml加貝酯的磷酸化-抑制性RIPA緩沖劑中裂解60分鐘，然后將裂解液超聲處理10秒。在4℃在12,000rpm離心10分鐘純化總提取物，收集上清液。利用蛋白分析試劑盒(Tonein-TP，Otsuka Pharmaceutical，Tokyo，Japan)測量蛋白濃度。裂解液再懸浮于1體積的凝膠負(fù)載緩沖液中，所述的負(fù)載緩沖液包含50mM Tris-HCl(pH 6.7)、4％SDS、0.02％溴酚藍(lán)、20％甘油和4％2-巰基乙醇，并且然后在95℃煮沸90秒。將提取的蛋白如前所述的方法(Wada，M.等，Pancreas.15176-82.，1997)進(jìn)行蛋白印跡。簡言之，將30μg等分的蛋白利用SDS-PAGE(12％凝膠)進(jìn)行在一維上大小-分級并在半干電轉(zhuǎn)印跡儀器(Bio-Rad，Richmond，CA)上轉(zhuǎn)印跡至0.45-μm聚二氟乙烯膜(Bio-Rad，Richmond，CA)上。然后將印跡利用TBST緩沖液洗滌三次并在室溫在第一抗體溶液中孵育2小時，所述的第一抗體溶液包含抗-磷酸ERK抗體(#pTEpY，Promega，Madison，WI)、抗-磷酸p38 MAPK(#pTGpY，Promega，Madison，WI)或抗-磷酸JNK(#pTPpY，Promega，Madison，WI)、0.2％I-block(Promega，Madison，WI)。在TBST緩沖液中洗滌3次后，將印跡與用TBST緩沖液以1∶2000稀釋的辣根過氧化酶偶聯(lián)的抗-兔IgG在室溫孵育1小時。在TBST緩沖液中洗滌3次后，將膜用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光試劑(AmershamLife Sciences，Amersham，UK)根據(jù)廠家的方案進(jìn)行處理。將膜曝光X-射線膜5-60秒。利用ATTO密度-分析系統(tǒng)AE-6920M(ATTO Corporation，TokyoJapan)測定蛋白表達(dá)并將定量表述成數(shù)字的形式。靶蛋白的量除以β肌動蛋白并得到相對強(qiáng)度。
(v)細(xì)胞增殖分析為了分析增殖，將AsPC-1和Panc-1細(xì)胞(1×104細(xì)胞/3cm直徑的培養(yǎng)皿)接種在10％FBS培養(yǎng)基中，并與漸增劑量的轉(zhuǎn)移素孵育48和96小時。將細(xì)胞胰蛋白酶化并用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器對細(xì)胞計(jì)數(shù)。
(vi)細(xì)胞遷移以及Matrigel侵襲分析將無聚乙烯吡咯烷酮的聚碳酸支架的濾器(8μm pores)安裝在微趨化室(Corning Coster Corp.，Cambridge，MA)中。將細(xì)胞(2×106細(xì)胞的溶液，對AsPC-1而言為200μl RPMI164O，并且對Panc-1而言為200μl DMEM)和肽加入到上室中，并在37℃孵育12小時以容許遷移至下室中，下室對于AsPC-1包含10％FBS/RPMI164O或?qū)τ赑ane-1包含5％FBS/DMEM作為趨化物。利用棉簽從膜的上表面去除未遷移的細(xì)胞后，將下表面的細(xì)胞固定，用Diff-Quick(International Reagent，Kobe，Japan)染色。定量的時候，將細(xì)胞在顯微鏡下在5個預(yù)定的區(qū)域以X200計(jì)數(shù)。
將細(xì)胞和肽(2×106細(xì)胞，對于AsPC-1為200μl RPMI164O；并且對于Panc-1為200μl DMEM)加入到Matrigel-包被的Transwell(8μm pores，BectonDickinson Labware，Bedford，MA)中，并在37℃孵育12小時，而下室對AsPC-1包含10％FBS/RPMI164O或?qū)anc-1包含5％FBS/DMEM。除去Matrigel并從膜的上表面去除細(xì)胞后，將下表面的細(xì)胞固定，用Diff-quick染色并同時定量。侵襲指數(shù)定義為侵襲細(xì)胞的數(shù)目/遷移的細(xì)胞。
(vii)統(tǒng)計(jì)分析對于重復(fù)測量，首先利用雙向變量分析(ANOVA)進(jìn)行密度計(jì)量或遷移活性組間的比較統(tǒng)計(jì)學(xué)評價(jià)，然后利用Turkey Kramer HDS進(jìn)行post-hoc檢驗(yàn)。為了比較胰腺組織中的mRNA水平，進(jìn)行Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。利用秩方檢驗(yàn)(或Fisher′s精確概率檢測)，比較帶有高和低KiSS-1或hOT7T175的30位病人中臨床病理特征。所有的分析獨(dú)立進(jìn)行三次。利用適合Macintosh的JMP統(tǒng)計(jì)軟件(版本3.02)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。概率p值＜0.05認(rèn)為統(tǒng)計(jì)顯著。
(viii)胰腺癌癥組織中的KiSS-1和hOT7T175表達(dá)首先，利用實(shí)時RT-PCR考察了在30例侵襲性十二指腸癌以及在5例鄰近正常胰腺中的KiSS1及其受體hOT7T175的mRNA水平(圖1)。在5/5正常胰腺組織中檢測到低水平的轉(zhuǎn)移素mRNA，而只有14/30的胰腺十二指腸癌組織表達(dá)轉(zhuǎn)移素。與正常胰腺組織相比，胰腺癌癥組織傾向于表達(dá)低水平的轉(zhuǎn)移素mRNA。相反，轉(zhuǎn)移素受體hOT7T175 mRNA的表達(dá)在30/30胰腺癌癥中檢測到，盡管在正常胰腺組織中沒有觀察到表達(dá)。
從統(tǒng)計(jì)學(xué)的角度講，胰腺癌癥組織可能比正常胰腺組織表達(dá)較少的轉(zhuǎn)移素(p＝0.0183)，并且與正常胰腺組織相比可能表達(dá)更高的轉(zhuǎn)移素受體hOT7T175(p＝0.0272)。在成對的5份樣品中，與鄰近的正常胰腺組織標(biāo)本相比，hOT7T175表達(dá)在所有的胰腺癌癥中過表達(dá)(數(shù)據(jù)未顯示)。沒有發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移素和hOT7T175表達(dá)水平與臨床病理因素如腫瘤大小、TNM狀態(tài)、腹膜后侵襲或神經(jīng)侵襲之間的明顯相關(guān)性。
(ix)轉(zhuǎn)移素及其受體在胰腺癌癥細(xì)胞系中的表達(dá)如上所述，轉(zhuǎn)移素mRNA及其受體hOT7T175 mRNA在6種胰腺癌癥細(xì)胞系中的的表達(dá)利用實(shí)時RT-PCR進(jìn)行檢測(圖2)。在6種胰腺癌癥細(xì)胞中，AsPC-1和Suit-2表達(dá)低水平的轉(zhuǎn)移素而其他4種細(xì)胞系沒有表達(dá)。相反，所有的細(xì)胞系表達(dá)hOT7T175，一種人轉(zhuǎn)移素受體，并且Panc-1表達(dá)最為強(qiáng)烈。根據(jù)這些結(jié)果，AsPC-1細(xì)胞系選擇作為低表達(dá)hOT7T175的代表并且Panc-1細(xì)胞系選擇作為高表達(dá)hOT7T175的代表，并將AsPC-1和Panc-1用于后續(xù)研究中。
(x)內(nèi)源性轉(zhuǎn)移素受體對增殖、遷移和侵襲的影響利用上述兩種細(xì)胞系考察了轉(zhuǎn)移素對胰腺癌癥增殖的影響。將重組的轉(zhuǎn)移素加入到指數(shù)生長期的AsPC-1細(xì)胞和Panc-1細(xì)胞中，終濃度為0、100nM、1μM和10μM并處理48小時和96小時。圖3顯示了AsPC-1細(xì)胞或Panc-1細(xì)胞在轉(zhuǎn)移素培養(yǎng)下的細(xì)胞生長曲線。無論是AsPC-1還是Panc-1都沒有顯示在轉(zhuǎn)移素孵育下的生長延遲，暗示轉(zhuǎn)移素對胰腺癌癥細(xì)胞生長沒有影響。
接著，考察在這些細(xì)胞系中轉(zhuǎn)移素對遷移活性以及對侵襲活性的影響。圖4A顯示了用漸增劑量的轉(zhuǎn)移素(0nM、100nM、1μM、10μM)處理12小時后AsPC-1和Panc-1的遷移判分。將2×106/ml細(xì)胞與轉(zhuǎn)移素在上層室中孵育以容許遷移至下層室，下層室中包含10％FBS/培養(yǎng)基作為趨化物。轉(zhuǎn)移素抑制高達(dá)40％下降的Panc-1細(xì)胞的遷移活性(p＜0.01)，但是AsPC-1顯示受到很小的影響。與AsPC-1相比，在1和10μM加入的轉(zhuǎn)移素，Panc-1的遷移評分也顯著地下降(p＜0.01，二者都)，盡管只觀察到輕微下降的AsPC-1細(xì)胞遷移。相反，當(dāng)被遷移活性補(bǔ)償?shù)臅r候，無一種細(xì)胞系顯示與轉(zhuǎn)移素伴隨孵育的任何侵襲性下降(圖4B)。圖4b顯示AsPC-1和Panc-1細(xì)胞在用轉(zhuǎn)移素處理12小時后的侵襲分析。將細(xì)胞和肽(2×106細(xì)胞/ml)加入到Matrigel-包被的Transwell中，并在37℃孵育12小時，下層室中包含10％FBS/培養(yǎng)基。加入10μM轉(zhuǎn)移素，AsPC-1和Panc-1的侵襲活性都不受影響。
(xi)通過內(nèi)源性轉(zhuǎn)移素受體的ERK激活為了評價(jià)胰腺癌癥中由內(nèi)源性轉(zhuǎn)移素受體激活的信號通路，考察了通過用轉(zhuǎn)移素處理的MAPK激活。在遷移或侵襲分析情形下，將指數(shù)期的細(xì)胞在包含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并且然后轉(zhuǎn)移到帶有轉(zhuǎn)移素的1％BSA培養(yǎng)基中。在與漸增劑量的轉(zhuǎn)移素(0μM，0.1μM，1μM，10μM)培養(yǎng)15分鐘后，利用免疫印跡測量ERK1/2、p38和JNK1/2的激活(圖5A)。蛋白印跡分析證實(shí)相應(yīng)于磷酸化ERK1(pERK1)和磷酸化ERK2(pERK2)的雙帶、磷酸化p38(pp38)的單帶以及顯示磷酸化JNK1(pJNK1)和磷酸化JNK2(pJNK2)的雙帶。在AsPC-1和在Panc-1中，pERK1都隨著附加的轉(zhuǎn)移素的劑量的增加而增加。在Panc-1中觀察到輕微的p38的激活而在AsPC-1中沒有觀察到。在加入轉(zhuǎn)移素的情形下，沒有觀察到pJNKs的下降或增加。圖5B顯示了在AsPC-1和在Panc-1細(xì)胞中的pERK1/2和pp38的相對強(qiáng)度。在Panc-1中和在AsPC-1中，轉(zhuǎn)移素都增加了ERK1的活化，并且在Panc-1中輕微活化的p38而不是JNK在這些條件下呈劑量依賴的方式(圖5B)。
(xii)KiSS-1衍生肽，F(xiàn)MO53a和FMO52a降低表達(dá)hOT7T175的癌癥細(xì)胞系的遷移利用如上的方法合成轉(zhuǎn)移素-52肽的兩個更短的變體并分別定義為FMO53a和FMO52a(圖6)。潛在的二堿斷裂位點(diǎn)(RK/RR)和裂解/酰胺化位點(diǎn)(GKR)用粗體字母表示。下劃線字母顯示預(yù)測的信號肽?？疾炝怂鼈儗?qiáng)烈表達(dá)hOT7T175的Panc-1細(xì)胞的生物活性。圖7A顯示了在兩種肽，KiSS-1短衍生物，F(xiàn)MO53a和FMO52a誘導(dǎo)下的Panc-1的增殖活性。正如所預(yù)期的，細(xì)胞生長不被這兩種衍生物所影響。在遷移活性分析中，這兩種肽降低了Panc-1細(xì)胞的遷移指數(shù)，盡管FMO53a的抑制活性弱于FMO52a，后者具有與轉(zhuǎn)移素幾乎相同的活性(圖7B)。為了比較這些肽與轉(zhuǎn)移素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，利用如上的免疫印跡考察了ERK1/2、p38和JNK的活化。利用這兩種肽以及轉(zhuǎn)移素在Panc-1細(xì)胞中觀察到ERK1的活化。但是，與FMO52a相比，帶有FMO53a接觸的Panc-1細(xì)胞顯示較少的pERK1活化，該結(jié)果與前述的遷移抑制結(jié)果一致。在與這兩種衍生物孵育后，pp38被輕微地活化并且pJNKs沒有增加(圖7C)。ERK激活速率似乎與這些的肽遷移-抑制程度緊密相關(guān)。
工業(yè)適用性本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)或其鹽或其前藥具有優(yōu)良的癌癥轉(zhuǎn)移抑制活性和癌癥增殖抑制活性，并可用作癌癥(如肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、大腸癌、直腸癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、卵巢癌、宮頸癌、乳腺癌、腎臟癌、膀胱癌、腦瘤等)的預(yù)防或治療藥物。本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物或其鹽或其前藥具有胰腺功能調(diào)節(jié)活性，并可用作預(yù)防或治療胰腺疾病(如急性或慢性胰腺炎、胰腺癌等)的藥物。本發(fā)明的轉(zhuǎn)移素衍生物或其鹽或其前藥具有胎盤功能調(diào)節(jié)活性，并且可用作絨毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂肪代謝障礙或分娩誘導(dǎo)的預(yù)防或治療藥物。
序列表<110>武田藥品工業(yè)株式會社(TAKEDA PHARMACEUTICAL COMPANYLIMITED)<120>轉(zhuǎn)移素衍生物及其用途<130>
<160>1<210>1<211>54<212>PRT<213>人<400>1Gly Thr Ser Leu Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser Arg Gln Gln1 5 10 15Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gln Ile Pro Ala Pro Gln Gly2025 30Ala Val Leu Val Gln Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr Asn Trp Asn3540 45Ser Phe Gly Leu Arg Phe50<210>2<211>145<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>2Met Asn Ser Leu Val Ser Trp Gln Leu Leu Leu Phe Leu Cys Ala Thr1 5 10 15His Phe Gly Glu Pro Leu Glu Lys Val Ala Ser Val Gly Asn Ser Arg20 25 30
Pro Thr Gly Gln Gln Leu Glu Ser Leu Gly Leu Leu Ala Pro Gly Glu35 40 45Gln Ser Leu Pro Cys Thr Glu Arg Lys Pro Ala Ala Thr Ala Arg Leu50 55 60Ser Arg Arg Gly Thr Ser Leu Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser65 70 75 80Arg Gln Gln Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gln Ile Pro Ala85 90 95Pro Gln Gly Ala Val Leu Val Gln Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr100 105 110Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe Gly Lys Arg Glu Ala Ala Pro115 120 125Gly Asn His Gly Arg Ser Ala Gly Arg Gly Trp Gly Ala Gly Ala Gly130 135 140Gln145<210>3<211>5<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述合成的肽FMO53a<220>
<223>C-端酰胺化<400>3Phe Gly Leu Arg Trp1 5
<210>4<211>5<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述合成的肽FMO52a<220>
<223>C-端酰胺化<400>4Phe Gly Leu Arg Trp1 5<210>5<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述引物<400>5actcactggt ttcttggcag c 21<210>6<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述引物
<400>6accttttcta atggctcccc a 21<210>7<211>25<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述探針<400>7actgctttcc tctgtgccac ccact 25<210>8<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述引物<400>8cgacttcatg tgcaagttcg tc 22<210>9<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述引物<400>9cacactcatg gcggtcagag 20<210>10<211>27<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述探針<400>10actacatcca gcaggtctcg gtgcagg 2權(quán)利要求
1.下式表示的轉(zhuǎn)移素衍生物，或其鹽X-AA1-AA2-AA3-AA4-Z(I)其中X為下式表示的基團(tuán) 其中Y為下式表示的基團(tuán) 或 其中R1、R2、R3和R4各自選自氫原子或C1-6烷基，W1和W2各自選自氫原子、C1-6烷基、C6-14芳基或雜環(huán)基，R為下式表示的基團(tuán) 或 n為0、1或2，AA1為天然或非天然的芳香族氨基酸，AA2為Gly、Ala、Pro或Pic，AA3為脂肪族氨基酸，AA4為堿性氨基酸或瓜氨酸，以及Z選自(i)天然或非天然的芳香族氨基酸，或其酰胺，或其酯，(ii)下式表示的基團(tuán) 其中n1為0、1或2，(iii)下式表示的基團(tuán) 其中n2為0、1或2，或(iv)下式表示的基團(tuán) 其中n2為0、1或2。
2.權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，選自4-[N，N-雙(2-吡啶基甲基)氨基甲基]苯甲?；?Phe-Gly-Leu-Arg-Trp-NH2(FM052a)(SEQ ID NO4)、4-(胍基甲基)苯甲?；?Phe-Gly-Leu-Arg-Trp-NH2(FM053a)(SEQ ID NO3)或其鹽。
3.權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)或其鹽的前藥。
4.一種藥物組合物，包括藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其為抑制癌癥轉(zhuǎn)移的藥物或抑制癌癥增殖的藥物。
6.權(quán)利要求4的藥物組合物，其為預(yù)防或治療癌癥的藥物。
7.權(quán)利要求4的藥物組合物，其為調(diào)節(jié)胰腺功能的藥物。
8.權(quán)利要求4的藥物組合物，其為預(yù)防或治療急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥的藥物。
9.權(quán)利要求4的藥物組合物，其為調(diào)節(jié)哺乳動物胎盤功能的藥物。
10.權(quán)利要求4的藥物組合物，其為預(yù)防或治療纖毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂質(zhì)代謝障礙或引產(chǎn)的藥物。
11.一種抑制哺乳動物中癌癥轉(zhuǎn)移或癌癥增殖的方法，所述的方法包括向哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
12.一種預(yù)防或治療哺乳動物中癌癥的方法，包括向哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
13.一種調(diào)節(jié)哺乳動物中胰腺功能的方法，包括向哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
14.一種預(yù)防或治療哺乳動物中急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥的方法，包括向哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
15.一種調(diào)節(jié)哺乳動物胎盤功能的方法，包括向哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
16.一種預(yù)防或治療哺乳動物中下列疾病的方法纖毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂質(zhì)代謝障礙或引產(chǎn)，所述的方法包括向哺乳動物施用有效量的權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
17.一種用于抑制癌癥轉(zhuǎn)移或抑制癌癥增殖的藥物，包括權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
18.一種用于預(yù)防或治療癌癥的藥物，包括權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
19.一種用于調(diào)節(jié)哺乳動物胰腺功能的藥物，包括權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
20.一種用于預(yù)防或治療哺乳動物急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥的藥物，包括權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
21.一種用于調(diào)節(jié)哺乳動物胎盤功能的藥物，包括權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
22.一種用于預(yù)防或治療哺乳動物中纖毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂質(zhì)代謝障礙或引產(chǎn)的藥物，包括權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥。
23.權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于抑制癌癥轉(zhuǎn)移或抑制癌癥增殖的藥物中的用途。
24.權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于預(yù)防或治療癌癥增殖的藥物中的用途。
25.權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于調(diào)節(jié)哺乳動物胰腺功能的藥物中的用途。
26.權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于預(yù)防或治療哺乳動物急性或慢性胰腺炎或胰腺癌癥的藥物中的用途。
27.權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于調(diào)節(jié)哺乳動物胎盤功能的藥物中的用途。
28.權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)移素衍生物(I)，或其鹽或其前藥在制備用于預(yù)防或治療哺乳動物中纖毛癌癥、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、流產(chǎn)、胎兒發(fā)育不全、糖代謝障礙、脂質(zhì)代謝障礙或引產(chǎn)的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及由式X－AA
文檔編號C07K7/06GK1756765SQ200480006089
公開日2006年4月5日 申請日期2004年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月6日
發(fā)明者藤井信孝, 土井隆一郎, 大石真也 申請人:武田藥品工業(yè)株式會社