專利名稱：抗冠狀病毒劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗冠狀病毒劑、抗SARS劑及SARS的治療方法。
背景技術(shù)：
2003年，嚴(yán)重急性呼吸道癥候群(SARSSevere Acute RespiratorySyndrome)(請參照感染癥學(xué)雜志第77卷第5號第303～309頁)在亞洲各國大面積流行。然而，引發(fā)SARS的原因的冠狀病毒(與SARS有關(guān)的冠狀病毒；以下稱為“SARS病毒”)是一種新型病毒，對這種病毒有效的治療藥物尚未發(fā)現(xiàn)。
Rockefeller大學(xué)的David Ho.教授們報導(dǎo)了他們的發(fā)現(xiàn)，即，HIV的融合阻礙劑T20(Fuseon)對抗SARS冠狀病毒也是有效的。
然而，包括T20的各種抗HIV劑適用于SARS病毒時，幾乎得不到任何效果。另外，雖然還報導(dǎo)了這樣一種發(fā)現(xiàn)，即，甘草酸對SARS病毒有效(參見Lancet，361，p.2045-46，2003)，但其效果極其微弱。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供一種抗冠狀病毒活性高的化合物或藥劑。
本發(fā)明人使用生物信息技術(shù)對由CDC解讀的SARS冠狀病毒的基因組進(jìn)行了獨(dú)自的解析，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)HIV(人類免疫缺陷病毒)對人類的感染機(jī)理與SARS病毒對人類感染的機(jī)理相似?；谶@樣的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人反復(fù)進(jìn)行了深入的研究，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)，作為抗HIV藥已知的化合物中的特定的某些化合物顯示出高的抗冠狀病毒效果，并至此完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明是提供如下的抗冠狀病毒劑，抗SARS劑、及SARS的治療方法。
1、一種以通式(1)式表示的化合物或它的藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分的抗冠狀病毒劑，通式(1)為
[式中，R1由通式(2)或通式(3)來表示， [Y表示S、O、或NH。R3表示C1-C4的烷基、C1-C4的烷氧基、C1-C4的烷氨基、酰胺基、羧基、氨基、羥基、鹵原子。m表示0或1；p表示0或1～5的整數(shù)。] [Y、R3和m的意義與上述相同。p表示0或1；r表示0或1～6的整數(shù)。]R2表示C1-C4的烷基、C1-C4的烷氧基、C1-C4的烷氨基、酰胺基、羧基、氨基、羥基、鹵原子。n表示0或1～3的整數(shù)。]2、根據(jù)第1項(xiàng)記載的抗冠狀病毒劑，通式(1)中的R1由通式(4)來表示。
[Y表示S、O、或NH。m表示0或1。]3、根據(jù)第1項(xiàng)記載的抗冠狀病毒劑，通式(1)表示的化合物是通式(5)表示的化合物。
4、根據(jù)上述1～3項(xiàng)中的任何一項(xiàng)記載的抗冠狀病毒劑，冠狀病毒是有關(guān)SARS的冠狀病毒。
5、根據(jù)上述1～4項(xiàng)中的任何一項(xiàng)記載的抗冠狀病毒劑，以通式(1)表示化合物的在藥學(xué)上允許的鹽是甲磺酸鹽。
6、一種抗SARS劑，以上述1～5項(xiàng)中的任一項(xiàng)記載的抗冠狀病毒劑作為有效成分，含有藥學(xué)上允許的載體、賦形劑或稀釋劑。
7、一種使用上述6項(xiàng)中記載的抗SARS劑的SARS治療方法。


圖1是表示在存在或者不存在奈非那韋的情況下的SARS病毒培養(yǎng)結(jié)果。A是不存在奈非那韋時的志賀樣毒素電子顯微鏡照片；B是存在奈非那韋時的志賀樣毒素電子顯微鏡照片；C是不存在奈非那韋時，利用免疫熒光法染色的結(jié)果；D是存在奈非那韋時，利用免疫熒光法染色的結(jié)果；E是志賀樣毒素中的SARS病毒的RNA量(E)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的抗冠狀病毒劑的特征在于，以通式(1)表示的化合物或它的藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分，通式(1)為
[式中，R1由通式(2)或通式(3)來表示， [Y表示S、O、或NH。R3表示C1-C4的烷基、C1-C4的烷氧基、C1-C4的烷氨基、酰胺基、羧基、氨基、羥基、鹵原子。m表示0或1；p表示0或1～5的整數(shù)。] [Y、R3和m的意義與上述相同。p表示0或1；r表示0或1～6的整數(shù)。]R2表示C1-C4的烷基、C1-C4的烷氧基、C1-C4的烷氨基、酰胺基、羧基、氨基、羥基、鹵原子。n表示0或1～3的整數(shù)。]另外，本發(fā)明的抗SARS劑的特征在于，以本發(fā)明的抗冠狀病毒劑作為有效成分，含有藥學(xué)上允許的載體，賦形劑或稀釋劑。另外本發(fā)明的SARS治療方法的特征在于，使用本發(fā)明的抗SARS劑。
通式(1)中，R1優(yōu)選以下述通式(4)表示。
[Y表示S、O或NH。m表示0或1。]
R1更優(yōu)選以下述通式(6)表示。
在上述通式(1)～(5)中，分別地，當(dāng)存在多個R2時，可以是相同的取代基也可以是不同的取代基。另外，分別地，當(dāng)存在多個R3以及R4時，同樣地，可以是相同的取代基也可以是不同的取代基。
C1-C4的烷基可以是直鏈的，也可以是支鏈的。優(yōu)選地，可舉例甲基、乙基、n-丙基、異丙基、n-丁基、異丁基、sec-丁基、t-丁基等。
C1-C4的烷氧基可以是直鏈的，也可以是支鏈的。優(yōu)選地，可舉例甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、t-丁氧基等。
C1-C4的烷氨基可以是直鏈的，也可以是支鏈的。優(yōu)選地，可舉例甲氨基、乙氨基、丙氨基、異丙氨基、丁氨基、異丁氨基、t-丁氨基等。
另外，作為鹵原子可舉例F、Cl、Br或I。
本發(fā)明中，以通式(1)表示的化合物最優(yōu)選為以下述通式(5)表示的奈非那韋(Nelfinavir)。
由于通式(1)表示的化合物或它的鹽能抑制冠狀病毒的增殖，可治療或者預(yù)防SARS，尤其是對SARS病毒具有高效果。只要SARS病毒是引起SARS或與其類似的病患的冠狀病毒或它的近似種，其種類沒有任何限定。
本發(fā)明中，作為藥學(xué)上允許的鹽，只要該鹽能顯示出抗SARS病毒效果，就沒有任何限定。例如，可舉例鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、磺酸鹽、溴化氫酸鹽等無機(jī)酸鹽，醋酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸、安息香酸鹽、苯磺酸鹽、p-甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽等有機(jī)酸鹽。其中，優(yōu)選有機(jī)酸鹽，更優(yōu)選甲磺酸鹽。
以通式(1)表示的化合物或其鹽，可通過常規(guī)方法來制造(例如，Journal of Medicinal Chemistry，1997，Vol.40，No.24，p.3979-3985等)。另外，作為本發(fā)明的化合物的一例的奈非那韋或奈非那韋·甲磺酸鹽是公知的化合物，可使用常規(guī)方法(例如，Journal of Medicinal Chemistry，1997，Vol.40，No.24，p.3979-3985等)來制造，也可使用市售產(chǎn)品。
在制造以通式(1)表示的化合物或其鹽時，可利用通常的分離手段很容易地單獨(dú)分離精制。作為該手段，例如，可列舉出吸附色譜法、制備性的薄層色譜法、再結(jié)晶、溶劑萃取等方法。另外，可利用NMR等通常的確認(rèn)手段來確認(rèn)得到的本發(fā)明的化合物。
進(jìn)一步，以通式(1)表示的化合物或其鹽中，具有游離羥基的可按照常規(guī)方法使其成為堿金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽等，堿土類金屬鹽、例如鈣鹽、鎂鹽等，以及銅鹽等，這些也具有與游離形態(tài)的本發(fā)明化合物一樣的藥理活性，被包含在本發(fā)明中。
以通式(1)表示的化合物或其鹽，根據(jù)需要，可與藥學(xué)上允許的載體、賦形劑、稀釋劑等一起使用，用作治療SARS的抗SARS劑(以下稱作“本發(fā)明醫(yī)藥組合物”)。
作為載體，可舉出根據(jù)制劑的使用形態(tài)而通常使用的填充劑、增量劑、粘合劑、增濕劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑等稀釋劑或賦形劑等，這些可根據(jù)所得制劑的劑量單位而適當(dāng)選擇并使用。
該制劑的形態(tài)可根據(jù)治療目的選擇各種形態(tài)，作為其代表性形態(tài)，可舉出片劑、丸劑、散劑、液劑、懸浮劑、膠囊劑、栓劑、注射劑(液劑、懸浮劑等)、噴霧劑、氣溶膠劑、吸入劑、持續(xù)釋放性微膠囊劑等。
本發(fā)明醫(yī)藥組合物中所含的有效成分的量，可從很寬的范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪x擇，其范圍通常為0.00001～70重量％、優(yōu)選為0.0001～5重量％。
另外，本發(fā)明醫(yī)藥組合物中還可添加各種添加劑，例如緩沖劑、等張劑、螯合劑等。作為緩沖劑，可舉出磷酸、醋酸、檸檬酸、ε-氨基已酸、谷氨酸和/或它們對應(yīng)的鹽(例如，它們的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽等堿金屬鹽和堿土金屬鹽)等。作為等張劑可舉出，例如，氯化鈉、氯化鉀、糖類、甘油等。作為螯合劑可舉出，例如，依地酸鈉、檸檬酸等。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可以以溶液制劑使用，除此之外，還可將其冷凍干燥并保存，以后使用時，用含有水、生理食鹽水等的緩沖液等溶解，調(diào)制成適當(dāng)濃度后使用。
另外，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可調(diào)制成片劑、丸劑、散劑、粉末劑、顆粒劑、膠囊劑等固體給藥形態(tài)，也可以調(diào)制成溶液、懸浮劑、乳劑、糖漿劑、酏劑等液體給藥形態(tài)。這些進(jìn)一步可根據(jù)服用途徑分類為經(jīng)口劑、非經(jīng)口劑、經(jīng)鼻劑、經(jīng)陰道劑、栓劑、舌下劑、軟膏劑等，各自可按照通常方法進(jìn)行調(diào)合、成形以及調(diào)制。
例如，成形為片劑形態(tài)時，作為上述制劑載體，可使用乳糖、白糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸鈣、高嶺土、結(jié)晶纖維素、硅酸、硅酸鈣、磷酸鉀等賦形劑；水、乙醇、丙醇、單糖漿劑、葡萄糖液、淀粉液、明膠溶液、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等粘合劑；羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、低取代度羥丙基纖維素、干燥淀粉、海藻酸鈉、瓊脂粉末、昆布多糖粉末、碳酸氫鈉、碳酸鈣、交聯(lián)聚維酮(crosspovidone)等崩解劑；聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯類、月桂基硫酸鈉、硬脂酸單甘油脂等表面活性劑；白糖、硬脂精、可可脂、加氫油等崩解抑制劑；季銨堿、月桂基硫酸鈉等吸收促進(jìn)劑；甘油、淀粉等保濕劑；淀粉、乳糖、高嶺土、彭潤土、膠體狀硅酸等吸附劑；精制滑石、硬脂酸鎂等硬脂酸鹽、硼酸粉末、聚乙二醇等潤滑劑等。
另外，片劑可以根據(jù)需而被通常的包衣所包圍，例如，可以是糖衣片、明膠薄膜衣片、腸溶片、薄膜衣片、或雙層片、乃至多層片。
成形為丸劑形態(tài)時，作為制劑載體例如可以使用葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化植物油、高嶺土、滑石等賦形劑；阿拉伯膠粉末、黃芪膠粉末、明膠、乙醇等粘合劑；昆布多糖、瓊脂等崩解劑等。
膠囊劑可按照常規(guī)方法制備，即，將本發(fā)明的有效成分與上述示例的各種制劑載體混合，并將其填充到硬質(zhì)明膠膠囊、軟質(zhì)膠襄等中。
經(jīng)口給藥的液體給藥形態(tài)包括，含有常用的惰性稀釋劑例如水的醫(yī)藥上允許的溶液，乳液、懸浮液、糖漿、酏劑等，進(jìn)一步，還可以含有潤滑劑、乳劑、懸浮劑等助劑。這些可按照常規(guī)方法來調(diào)制。
在調(diào)制成非經(jīng)口給藥的液體給藥形態(tài)，例如，滅菌水性乃至非水性溶液、乳液、懸浮液等時，作為稀釋劑例如可使用水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、乙氧化異硬脂醇、聚氧異硬脂醇(polyoxylated isostearylalkohol)、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、以及橄欖油等植物油等，另外，可配合注入有機(jī)酯類，例如油酸乙酯等。其中還可再添加通常的溶解輔助劑、緩沖劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、保存劑、分散劑等。滅菌可通過以下操作來實(shí)施，例如，使上述物質(zhì)通過細(xì)菌過濾器的過濾作業(yè)、與殺菌劑混合、照射處理以及加熱處理等。另外，這些在使用前也可溶解在滅菌水或適當(dāng)?shù)哪軠缇慕橘|(zhì)中，調(diào)制成滅菌固體組合物的形態(tài)。
成形為栓劑或陰道給藥制劑的形態(tài)時，作為制劑載體可使用例如聚乙二醇、可可脂、高級醇、高級醇的酯類、明膠、以及半合成的甘油酯等。
噴霧劑、氣溶膠劑、吸入劑、經(jīng)鼻劑或舌下給藥組合物，可使用公知的標(biāo)準(zhǔn)賦形劑按照常規(guī)方法來調(diào)制。
另外，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中，根據(jù)需要也可含有著色劑、保存劑、香料、風(fēng)味劑、甜味劑等，或其他的醫(yī)藥品等。
對于上述醫(yī)藥制劑的給藥方法沒有特殊限制，可根據(jù)各種制劑形態(tài)、患者的年齡、性別、其他條件、疾患程度等來決定。例如，片劑、丸劑、液劑、懸浮劑、乳劑、顆粒劑和膠囊劑可經(jīng)口給藥；注射劑可單獨(dú)、或與葡萄糖和氨基酸等通常的輔助液混合后，進(jìn)行靜脈注射；進(jìn)一步，可根據(jù)需要單獨(dú)在肌肉內(nèi)，皮內(nèi)、皮下或腹腔內(nèi)給藥；栓劑經(jīng)直腸內(nèi)給藥；陰道劑經(jīng)陰道給藥；經(jīng)鼻劑在鼻腔內(nèi)給藥；舌下劑在口腔內(nèi)給藥。
上述醫(yī)藥制劑的給藥量沒有特殊限定，可根據(jù)所希望的治療效果、給藥方法、治療期限、患者的年齡、性別、其他條件等，從很寬的范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)選擇，一般來講，對于成年人，每1天每1kg體重的給藥的有效成分量約為0.01mg～100mg程度，優(yōu)選為0.1mg～50mg，該制劑每1天可給藥1次，或分成幾次給藥。
另外，在本發(fā)明的治療方法中，抗SARS劑也可與，例如，其他抗病毒劑并用。
實(shí)施例以下使用實(shí)施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明不被這些實(shí)施例所限定。
實(shí)施例1將從法蘭克福大學(xué)的Dr.Doerr處得到的綠猴腎臟細(xì)胞(Vero cell)放置在96穴的盤中培養(yǎng)1天，使其融合。之后，替換培養(yǎng)液，分別添加各種濃度(40nM、200nM、1μM、5μM、10μM、50μM)的市售奈非那韋·甲磺酸鹽以及各種濃度(1μM、10μM、100μM)的市售甘草酸。
添加奈非那韋或甘草酸1小時之后，綠猴腎臟細(xì)胞被感染了SARS病毒。綠猴腎臟細(xì)胞被感染了SARS病毒36小時之后，使用MTT測定法根據(jù)綠猴腎臟細(xì)胞的生存率確認(rèn)本發(fā)明化合物的效果，求出EC50(將病毒感染所引起的細(xì)胞病變效應(yīng)抑制在控制值的50％所需要的化合物的濃度)、CC50(破壞50％的綠猴腎臟細(xì)胞的化合物的細(xì)胞毒性濃度)以及SI(＝CC50/EC50)。結(jié)果示于表1。
表1

從該表可知，奈非那韋比正控制的甘草酸顯示出非常高的抗SARS病毒效果。并且，還知道了，奈非那韋的細(xì)胞毒性也遠(yuǎn)低于甘草酸的細(xì)胞毒性。
另外，用光學(xué)顯微鏡觀察使用10μM濃度的奈非那韋時的綠猴腎臟細(xì)胞的形態(tài)、破壞的形態(tài)，并拍攝了電子顯微鏡照片(圖1A和圖1B)。從圖1A可知，沒有添加奈非那韋的綠猴腎臟細(xì)胞由于SARS病毒的增殖而不斷地被殺死。另外，從圖1B可知，添加了奈非那韋的綠猴腎臟細(xì)胞，由于SARS病毒的增殖被抑制，顯示出與正常細(xì)胞相同的形態(tài)。
另外，在同樣的實(shí)驗(yàn)條件下，通過免疫熒光法進(jìn)行了觀察。從圖1C可知，沒有添加奈非那韋的細(xì)胞，SARS病毒感染范圍顯著地擴(kuò)展。
另外，從圖1D可知，添加了奈非那韋的綠猴腎臟細(xì)胞，明顯地抑制住了SARS病毒感染范圍的擴(kuò)展。
接著，進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn)，利用RT-PCR測定志賀樣毒素(verotoxin)中存在的SARS病毒的RNA量，結(jié)果示于圖1的E中。從該結(jié)果可知，奈非那韋能強(qiáng)烈地抑制SARS病毒的增殖。
比較例1除了分別以通式(7)表示的沙奎那韋(saquinavir)、 通式(8)表示的利托那韋(ritonavir)、
通式(9)表示的印地那韋(crixivan)、 通式(10)表示的TYA5、 通式(11)表示的TYB5、 通式(12)表示的KNI-272 來取代奈非那韋之外，其他與實(shí)施例1同樣地進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。
其中，無論任何一種化合物，即使使用10μM的濃度，也未顯示出抗SARS病毒的效果(未顯示數(shù)據(jù))。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明提供了以通式(1)表示化合物或其鹽作為有效成分的抗冠狀病毒劑，以該抗冠狀病毒劑作為有效成分的抗SARS劑，和使用該抗SARS劑治療SARS的方法。根據(jù)本發(fā)明可治療冠狀病毒、尤其是SARS有關(guān)病毒引起的疾病。
權(quán)利要求
1.一種抗冠狀病毒劑，以通式(1)表示的化合物或它的藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分，通式(1)為， 式中，R1由通式(2)或通式(3)來表示， Y表示S、O、或NH；R3表示C1-C4的烷基、C1-C4的烷氧基、C1-C4的烷氨基、酰胺基、羧基、氨基、羥基、鹵原子；m表示0或1；p表示0或1～5的整數(shù)， Y、R3以及m的意義和上述相同；p表示0或1；r表示0或1～6的整數(shù)，R2表示C1-C4的烷基、C1-C4的烷氧基、C1-C4的烷氨基、酰胺基、羧基、氨基、羥基、鹵原子；n表示0或1～3的整數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1記載的抗冠狀病毒劑，在通式(1)中，R1由通式(4)來表示， Y表示S、O、或NH，m表示0或1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1記載的抗冠狀病毒劑，以通式(1)表示的化合物是以通式(5)表示的化合物
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中的任一項(xiàng)記載的抗冠狀病毒劑，冠狀病毒是有關(guān)SARS的冠狀病毒。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中的任一項(xiàng)記載的抗冠狀病毒劑，以通式(1)表示的化合物的在藥學(xué)上允許的鹽是甲磺酸鹽。
6.一種抗SARS劑，以權(quán)利要求1～5中的任一項(xiàng)記載的抗冠狀病毒劑作為有效成分，含有藥學(xué)上允許的載體、賦形劑或稀釋劑。
7.一種SARS的治療方法，使用權(quán)利要求6記載的抗SARS劑。
全文摘要
本發(fā)明提供以奈非那韋為代表的化合物或它的藥學(xué)上允許的鹽作為有效成分的抗冠狀病毒劑，以該抗冠狀病毒劑作為有效成分的抗SARS劑、和使用該抗SARS劑的SARS治療方法。
文檔編號C07D217/26GK1822841SQ20048002015
公開日2006年8月23日 申請日期2004年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月15日
發(fā)明者藤井信孝, 山本直樹 申請人:亞利源有限公司