專利名稱：三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽、其制備以及包含它們的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及如下面<式1>所示的三環(huán)衍生物，或其藥學上可接受的鹽，它們的制備以及包含它們的藥物組合物。
<式1>
(其中，R1、R2、R3、R4和X如說明書中所定義。)背景技術(shù)秋水仙堿，一種假生物堿(pseudo-alkaloid)化合物，具有抗炎作用，這使之成為類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療劑[Internal Medicine，86，No.2，342-345，2000]。秋水仙堿和硫代秋水仙堿(thiocolchicine)衍生物具有松弛肌肉和抗炎的功能(USP 5 973204，EP 0870761 A1)。硫代秋水仙苷(Thiocolchicoside)已經(jīng)被用于治療骨骼肌攣縮和炎癥。而且，在動物試驗中，秋水仙堿抑制移植器官中的單核細胞和T細胞浸潤，而且同時抑制TNF-α、IL-1和IL-6、炎癥細胞因子的產(chǎn)生，這表明了其對免疫應(yīng)答的抑制作用[J.Am.Soc.Nephrol.，4(6)，1294-1299，1993；TransplantationProceedings，32，2091-2092，2002]。因此，對于免疫應(yīng)答抑制劑的開發(fā)，秋水仙堿是極具吸引力的候選化合物(WO 02/100824)。
通過與微管蛋白相互作用，秋水仙堿抑制微管裝配，這導致了對細胞分裂的抑制[The Alkaloids，1991，41，125-176；USP 4 533 675]。這樣的秋水仙堿已被用于治療痛風以及與痛風有關(guān)的其它炎癥性疾病。然而，秋水仙堿的應(yīng)用限于急性炎癥，原因在于治療指數(shù)(therapeutic index)上的限制和對胃腸道的毒性[Pharmacotherapy，11，3，196-211，1991]。
迄今為止，將秋水仙堿衍生物開發(fā)作為抗癌藥劑的所有努力都還未獲得成功[USP 3 222 253；USP 00/6080739；WO 97/01570]，而且只有脫羰秋水仙堿(demecolcine)被用于治療白血病。然而，對胃腸道的毒性以及在治療指數(shù)上的限制依舊是脫羰秋水仙堿面臨的難題。
通過開發(fā)秋水仙堿衍生物，本發(fā)明人完成了本發(fā)明，所述衍生物具有極佳的抗癌、抗增殖和血管生成抑制活性，由于毒性降低，這些衍生物具有穩(wěn)定的治療指數(shù)。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個目的是提供三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽，它們具有極佳的抗癌、抗增殖和血管生成抑制活性，并由于降低的毒性而具有穩(wěn)定的治療指數(shù)。
提供所述三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽的制備方法也是本發(fā)明的目的。
本發(fā)明進一步的目的是提供含有所述三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽作為有效成分的藥物組合物。


圖1中的圖表顯示了，在給予本發(fā)明的三環(huán)衍生物之后，移植有人肺癌細胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠體內(nèi)的腫瘤體積變化(實施例8)；圖2中的圖表顯示了，在給予本發(fā)明的三環(huán)衍生物之后，移植有人肺癌細胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠的體重變化(實施例8)；圖3中的圖表顯示了，在以不同濃度(1、3、10mg/kg)給予本發(fā)明的三環(huán)衍生物之后，移植有人肺癌細胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠體內(nèi)的腫瘤體積變化(實施例12)；圖4中的圖表顯示了，在以不同濃度(1、3、10mg/kg)給予本發(fā)明的三環(huán)衍生物之后，移植有人肺癌細胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠的體重變化(實施例12)；圖5為一組照片，顯示了在移植有人肺癌細胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠體內(nèi)生長的腫瘤的體積，這些腫瘤是在給予本發(fā)明的三環(huán)衍生物之后的第十四天被分離；圖6是一組照片，顯示了本發(fā)明的三環(huán)衍生物抑制HUVEC細胞中血管生成的活性。
優(yōu)選實施方案詳述本發(fā)明涉及由下面<式1>所示的三環(huán)衍生物，或其藥學上可接受的鹽。
<式1>
(其中，(1)R1是-T1-B1；其中T1為-X1-、-X1-C(X2)-、-N(R5)-、-N(R5)C(X2)-、-N(R5)S(O)n1-、-N(R5)C(O)-X1-或-N(R5)C(X1)NH-，其中X1和X2各自為O或S，R5為H或C1～C5烷基，n1是1-2的整數(shù)；和B1選自下面的(a)～(j) -Z1-R7(c) -Z1-T2-B2(h) 其中，R6和R8各自為H、鹵素、羥基、C1～C3烷氧基、氨基、硝基、氰基或C1～C3低級烷基；R7和R9各自獨立地為鹵素、羥基、巰基、-ONO、-ONO2或SNO，其中R7和R9為相同或者不同；
是含有1～2個雜原子的C5～C6元飽和或不飽和雜環(huán)，其中，雜原子選自O(shè)、S和N，優(yōu)選為 更優(yōu)選為，在2位和6位或2位和5位被取代的C1(吡啶基)、在2位和5位或2位和4位被取代的C7(吡咯基)、C11(噻吩基)或C12(呋喃基)；Z1為C1～C10直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選為C2～C5直鏈或支鏈烷基或環(huán)烷基，其具有取代基；Z2和Z3各自獨立地為H或甲基，其中當Z2為甲基時Z3是H，當Z3為甲基時Z2是H；T2是-X1-或-X1-C(X2)-，其中X1和X2各自獨立地為O或S；B2選自所述(a)、(b)、(c)、(d)或(e)；n2為0～3的整數(shù)，n3為0～5的整數(shù)，n4為1～5的整數(shù)，n5和n6各自獨立地為1～6的整數(shù)；(2)R2和R3每個各自地獨立為H、-PO3H2、膦酸酯基團(phosphonate)、硫酸酯基團(sulfate)、C3～C7環(huán)烷基、C2～C7鏈烯基、C2～C7炔基、C1～C7烷?；1～C7直鏈或支鏈烷基或糖，其中糖為單糖，例如葡糖醛酸基、葡糖基或半乳糖基；(3)R4為OCH3、SCH3或NR10R11，其中R10和R11各自獨立地為H或C1～5烷基；(4)X為O或S。)優(yōu)選地，在<式1>的化合物中，(1)R1是-T1-B1；其中T1為-N(R5)C(X2)-、-N(R5)C(O)-X1-或-N(R5)C(X1)NH-，其中X1和X2各自為O，R5各自為H或C1～C5烷基，和B1選自下面的(a)～(j)，
-Z1-R7(c) -Z1-T2-B2(h) 其中，R6和R8各自為H、鹵素、羥基、C1～C3烷氧基、氨基、硝基、氰基或C1～C3低級烷基；R7和R9各自獨立地為鹵素、羥基、巰基(硫醇)、-ONO、-ONO2或SNO，其中R7和R9為相同或不同； 為含有1～2個雜原子的C5～C6元飽和或不飽和雜環(huán)，其中雜原子選自O(shè)、S和N，優(yōu)選為 更優(yōu)選在2位和6位或2位和5位被取代的C1(吡啶基)、在2位和5位或2位和4位被取代的C7(吡咯基)、C11(噻吩基)或C12(呋喃基)，取代基的鍵接可以在對稱或不對稱位置；Z1為C1～C10直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選為C2～C5直鏈或支鏈烷基或環(huán)烷基，其具有取代基；Z2和Z3各自獨立地為H或甲基，其中當Z2為甲基時Z3為H，當Z3為甲基時Z2為H；T2是-X1-或-X1-C(X2)-，其中X1和X2各自為O或S；B2選自所述的(a)、(b)、(c)、(d)或(e)；n2為0～3的整數(shù)，n3為0～5的整數(shù)，n4為1～3的整數(shù)，n5和n6各自獨立為1～3的整數(shù)；(2)R2和R3各自獨立地為C3～C7環(huán)烷基或C1～C7烷基；(3)R4為SCH3或OCH3；(4)X為O或S。
優(yōu)選地，<式1>的化合物包括1)6-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基(methylsulfanyl)-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯(heptalen)-7-基]-煙酰胺(nicotineamide)；2)5-硝基氧甲基-呋喃-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；3)N-[(7S)-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；4)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；5)6-硝基氧甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；6)5-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；7)N-[(7S)-3-環(huán)戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；8)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；9)2-氟-N-[(7S)-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；10)2-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；11)N-[(7S)-3-環(huán)戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；12)3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；13)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；14)3-氟-N-[(7S)-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；
15)N-[(7S)-3-環(huán)戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；16)4-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；17)2-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；18)3-羥基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；19)3，5-二-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；20)2-羥基-4-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；21)4-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；22)3-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；23)2-(3-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺；24)3-(2-硝基氧-乙基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；25)3-硝基氧苯甲酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-吡啶-2-基-甲酯；26)4-硝基氧丁酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-吡啶-2-基-甲酯；27)3-硝基氧甲基-苯甲酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-吡啶-2-基-甲酯；28)4-硝基氧丁酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-吡啶-2-基-甲酯；29)3-硝基氧甲基-苯甲酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；30)4-硝基氧丁酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；31)3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；32)4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-苯酯；
33)3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-芐基酯；34)4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-芐基酯；35)2-亞硝基硫代-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；36)3-亞硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；37)3-氟-5-亞硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；38)3-亞硝基硫甲基(thiomethyl)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；39)3-氟-5-亞硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-苯甲酰胺；40)3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；41)3-硝基氧甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；42)3-氟-N-甲基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-苯甲酰胺；43)2-(3-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺；或44)2-(2-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺。
本發(fā)明也提供了<式1>所示化合物的藥學上可接受的鹽。當本發(fā)明的化合物完全為堿性時，本發(fā)明的藥學上可接受的鹽可以包括該化合物的酸加成鹽。這樣的酸加成鹽包括含有無機酸的鹽，所述無機酸可提供藥學上可接受的陰離子，例如鹵化氫，或者，這樣的酸加成鹽含有機酸，或者為含有硫酸或磷酸的鹽，或者含有三氟乙酸、檸檬酸或馬來酸的鹽。例如，通過構(gòu)成合適的鹽，它可以包括氫氯化物、氫溴化物、膦酸鹽、硫酸鹽、烷基磺酸鹽、芳基磺酸鹽、醋酸鹽、苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽和酒石酸鹽(tartarates)。當本發(fā)明的化合物完全為酸性時，其藥學上可接受的鹽可包括提供了藥學上可接受的陽離子的無機鹽或有機鹽。所述無機鹽包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽或鎂鹽等，所述有機酸鹽包括甲胺鹽、二甲胺鹽、三甲胺鹽、哌啶鹽或嗎啉鹽等。
本發(fā)明也提供了<式1>所示三環(huán)衍生物的制備方法。本發(fā)明三環(huán)衍生物的制備方法在下列方案1～方案8中被描述。具體而言，在<式1>中，當R1為-T1-B1和B1為所述(a)、(b)、(c)、(d)和(e)之一時，按照方案1～方案6制備所述衍生物。同時，在<式1>中，當R1為-T1-B1和B1為所述(f)、(g)、(h)、(i)和(j)之一時，按照方案7和方案8制備所述衍生物。在方案1～方案8中，<式1>的具體化合物由通式(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf、(IIg)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)、(IIl)、(IIm)、(IIn)、(IIo)和(IIp)表示。
<方案1>
<方案2>
<方案3>
<方案4>
<方案5>
<方案6>
<方案7>
<方案8>
在上述方案中，E分別為下面的E1～E6；
其中，X1、X2和X3各自為O或S。
在上述方案中，D為 和R2、R3、R4和X與在<式1>中的定義相同；R5為H或低級烷基(lower alkyl)；X1、X2和X3各自獨立地為O或S；Hal1和Hal2為鹵素；通式(IV)和(IX)的Hal1和Hal2各自為相同或者不同的鹵素，例如F、Cl、Br或I；P為常規(guī)的羥基保護基，例如甲氧基甲基、叔丁基二甲基甲硅烷基或苯甲基；Y和Y′為相同或不同，并分別地表示下面的通式(a′)、(b′)、(c′)、(d′)和(e′)， 其中， R6、R8、R9、Z1、Z2、Z3、n2、n3、n4、n5和n6均與在<式1>中的定義相同，n7和n8為1～2的整數(shù)。
本發(fā)明的三環(huán)衍生物的制備方法被更具體地在下面予以闡述。
<方法1>
根據(jù)用于制備式(IIa)和(IIb)的化合物的本發(fā)明方法1，通過使式(III)的胺化合物與式(IV)的鹵素化合物進行酰胺化反應(yīng)，制備由式(V)所示的化合物，此為步驟1。在步驟1中，可以不用堿，但是反應(yīng)一般是在有溶劑例如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙醚、甲苯或或二甲基甲酰胺等的情況下進行，在吡啶、三乙胺、二乙基異丙基胺(diethylisopropylamine)或N-甲基嗎啉等存在時，這些溶劑對酰胺化反應(yīng)沒有影響，通常上述堿是對于酰胺化反應(yīng)可接受的。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通?？梢栽诘蜏鼗蚋邷叵逻M行，優(yōu)選在室溫下進行。
在步驟2中，分別通過硝化反應(yīng)和亞硝化反應(yīng)，完成在上述步驟1中制備的式(V)化合物向式(IIa)的硝基氧化合物(nitrooxy compound)(n7＝2)和式(IIa)的亞硝基氧化合物(nitrosooxy compound)(n7＝1)的轉(zhuǎn)化。硝化反應(yīng)需要可以將鹵素轉(zhuǎn)化為硝酸根的化合物，并且在存在氯仿、乙腈、乙腈和水溶液的混合物或二氯甲烷的條件下-這些都是不影響反應(yīng)的溶劑，使用硝酸銀(AgNO3)、t-丁基硝酸胺(Bu4NNO3)等，進行此反應(yīng)。亞硝化反應(yīng)也可以使用可以將鹵素轉(zhuǎn)化為硝肟酸酯(nitrosate)的化合物，在存在氯仿、乙腈、乙腈和水溶液的混合物、水溶液或二氯甲烷的條件下-這些也是不影響反應(yīng)的溶劑，優(yōu)選使用亞硝酸銀(AgNO2)或亞硝酸鈉(NaNO2)進行此反應(yīng)。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通常在低溫或高溫下進行，優(yōu)選在室溫下進行。
產(chǎn)生式(IIa)的化合物的另一個方法如下；將式(III)的化合物與式(VI)的化合物進行反應(yīng)，生成式(VII)的化合物，然后，完成式(VII)的化合物向式(IIa)的化合物的轉(zhuǎn)化。式(III)的化合物與式(VI)的化合物的反應(yīng)在偶聯(lián)劑存在下進行，例如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDCI)、1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)或1，3-雙環(huán)乙基碳二亞胺(DCC)。該反應(yīng)可以在沒有溶劑的情況下進行，但是，通常，在對反應(yīng)沒有負效應(yīng)的溶劑中，例如乙腈、二甲基甲酰胺、二氯甲烷等，在有堿的情況下進行該反應(yīng)，例如4-二甲基氨基吡啶、吡啶、三乙胺、二乙基異丙胺、N-甲基嗎啉或二甲基苯胺等，這些堿可以被用在酰胺化反應(yīng)中。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通常在低溫或高溫下進行，優(yōu)選在室溫下進行。通過將醇與三苯基膦(PPh3)、溴代琥珀酰亞胺(N-bromosuccineimide)(NBS)和硝酸銀或亞硝酸銀反應(yīng)，完成式(VII)的化合物向式(IIa)的化合物的直接轉(zhuǎn)化。在對反應(yīng)無影響的溶劑中進行此反應(yīng)，所述溶劑例如氯仿、乙腈、二氯甲烷、乙腈與二氯甲烷的混合物等。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通常在低溫或室溫下進行。用于將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIa)的化合物的另一個方法如下；首先完成式(VII)的化合物向式(V)的鹵素化合物的轉(zhuǎn)化，然后再完成式(V)的鹵素化合物向式(IIa)的轉(zhuǎn)化。此時，在氯仿、乙腈、二氯甲烷等存在的條件下-這些是對反應(yīng)沒有負效應(yīng)的溶劑，通過使用一般將羥基轉(zhuǎn)化為鹵素的試劑，進行向鹵素化合物的轉(zhuǎn)化，所述試劑例如三溴膦(tribromophosphin)、四溴甲烷等。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通常在低溫或室溫下進行。
本發(fā)明方法1的用于制備式(IIb)化合物的過程如下；將式(VII)的醇中的氫轉(zhuǎn)化為離去基團例如甲磺酸(mesylate)、甲苯磺酸酯(tosylate)或triplate，然后與硫代乙酸鉀反應(yīng)，生成硫代乙酸酯化合物。在堿存在下，將此化合物水解，生成式(VIII)的化合物。此時，堿選自可以水解酯化合物的常規(guī)堿，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀或硫代甲醇鈉(sodium thiomethoxide)。優(yōu)選醇溶液例如甲醇或乙醇作為該反應(yīng)的溶劑。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通?？梢栽诘蜏鼗蚋邷叵逻M行，優(yōu)選在室溫下進行。在酸性環(huán)境下，式(VIII)的化合物與亞硝酸鈉反應(yīng)，導致式(VIII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIb)的亞硝基硫代化合物。所述反應(yīng)的溶劑選自甲醇、乙醇、乙腈、乙腈和水溶液的混合物或二氯甲烷等，這些溶劑都不影響反應(yīng)。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通?？梢栽诘蜏鼗蚋邷叵逻M行，優(yōu)選在室溫下進行。
<方法2>
根據(jù)本發(fā)明的方法2，制備式(IIc)和(IId)的化合物。具體而言，在步驟1中，完成式(III)的化合物與式(IX)的化合物的反應(yīng)，以生成式(X)的化合物。進行本反應(yīng)，其類似于方法1中所述的步驟-其中通過酰胺化反應(yīng)完成式(III)的化合物向式(V)的化合物的轉(zhuǎn)化。
在步驟2中，通過硝化反應(yīng)與亞硝化反應(yīng)，完成在步驟1中制備的式(X)的化合物向式(IIc)的化合物的轉(zhuǎn)化。進行本反應(yīng)，其類似于方法1中所述的步驟-其中完成了式(V)的化合物向式(IIa)的化合物的轉(zhuǎn)化。
生成(IIc)的化合物的另一種方法如下；將式(III)的化合物與式(XI)的化合物反應(yīng)，生成式(XII)的化合物，然后完成式(XII)的化合物向式(IIc)的化合物的轉(zhuǎn)化。將式(XI)的化合物與式(III)的化合物進行反應(yīng)，其類似于方法1中所述的步驟-其中通過酰胺化反應(yīng)完成式(III)的化合物向式(V)的化合物的轉(zhuǎn)化。完成式(XII)的化合物向式(IIc)的化合物的轉(zhuǎn)化，其反應(yīng)條件與在與方法1中式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIa)的化合物時的反應(yīng)條件相同。
完成式(XII)的化合物向式(IId)的化合物的轉(zhuǎn)化，其反應(yīng)條件與在方法1中式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIb)的化合物時的反應(yīng)條件相同。
<方法3>
按照本發(fā)明的方法3，制備式(IIe)和式(IIf)的化合物。具體而言，在步驟1中，完成式(XIV)的化合物與式(IV)的化合物的反應(yīng)，生成式(XV)的化合物。本方法中的該反應(yīng)為醇(X2＝O)或硫醇(X2＝S)與?；蛄蝓；u化物的酯化反應(yīng)，此反應(yīng)在酯化反應(yīng)通常可接受的堿的存在下進行。優(yōu)選的堿為吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三乙胺、二乙基異丙基胺(diethylisopropylamine)、2，6-二甲基吡啶、氫化鈉(NaH)、碳酸銫或氫氧化鈉，而且可以與相轉(zhuǎn)移催化劑例如芐基三乙基氯化銨(benzyltriethylammoniumchloride)一起被使用。同樣，上述反應(yīng)優(yōu)選在對反應(yīng)沒有負效應(yīng)的溶劑中進行，例如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙醚、甲苯、二甲基甲酰胺、乙腈或水溶液。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通常在低溫或高溫下進行，優(yōu)選在室溫下進行。
在步驟2中，通過硝化反應(yīng)與亞硝化反應(yīng)，完成在步驟1中制備的式(XV)的化合物向式(IIe)的化合物的轉(zhuǎn)化。按類似于方法1中所述的步驟-其中完成了式(V)的化合物向式(IIa)的化合物的轉(zhuǎn)化-進行此反應(yīng)。
制備式(IIe)的化合物的另一個方法如下；將式(XIV)的化合物與在醇基上具有保護基團的式(VI’)的化合物進行反應(yīng)，生成式(XVII)的化合物，然后通過去保護反應(yīng)，生成式(XVIII)的化合物。完成所生成的化合物向式(IIe)的化合物的轉(zhuǎn)化。通過醇(X2＝O)或硫醇(X2＝S)與羧酸或硫代羧酸的酯化反應(yīng)，進行式(XIV)的化合物與式(VI’)的化合物的反應(yīng)。在補充有酸例如鹽酸、硫酸、十二烷基苯磺酸或p-甲苯磺酸的水溶液中，在室溫或者高溫(elevated temperature)下，進行此反應(yīng)，或者，在與方法1中式(III)的化合物轉(zhuǎn)化為式(VII)的化合物時的反應(yīng)條件相同的條件下進行此反應(yīng)。另一種酯化反應(yīng)是在不影響反應(yīng)的溶劑中，通過Misunobu反應(yīng)，使用三苯基膦和偶氮二甲酸二乙酯來進行。溶劑優(yōu)選選自二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙醚、甲苯或乙腈。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通常在低溫或室溫下進行。通過在普通有機合成中已知的方法進行醇基的保護和去保護反應(yīng)。
將式(XIV)的化合物和式(XVI)的化合物進行反應(yīng)，生成式(XVIII)的化合物，其類似于方法3中描述的另一步驟-其中完成了式(XIV)的化合物向式(XV)的化合物的轉(zhuǎn)化。
在與方法1中式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIa)的化合物時的條件相同的條件下，進行式(XVIII)的化合物向式(IIe)的化合物的轉(zhuǎn)化。
在與方法1中將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIb)的化合物時的條件相同的條件下，進行式(XVIII)的化合物向式(IIf)的化合物的轉(zhuǎn)化。
<方法4>
按照本發(fā)明的方法4，制備式(IIg)和式(IIh)的化合物。具體而言，在步驟1中，完成式(III)的化合物與式(XX)的化合物的反應(yīng)，生成式(XXI)的化合物。
當式(IIg)的化合物為亞磺酰胺(sulfinylamide)(n8＝1)時，在對反應(yīng)沒有負效應(yīng)的溶劑例如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙醚、甲苯或二甲基甲酰胺中，在沒有堿或在存在可用于酰胺化反應(yīng)的堿例如吡啶、三乙胺、二乙基異丙基胺、N-甲基嗎啉或二甲苯胺的條件下，將式(III)的化合物與式(XX)的亞磺酰鹵(sulfinylhalide)進行反應(yīng)。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通常可以在低溫或高溫下進行，優(yōu)選在室溫下進行。
當式(IIg)的化合物為磺酰胺(sulfonylamide)(n8＝2)時，在對反應(yīng)沒有負效應(yīng)的溶劑例如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙醚、甲苯或二甲基甲酰胺中，在沒有堿或在存在一般可用于酰胺化反應(yīng)的堿例如吡啶、三乙胺、二乙基異丙基胺、N-甲基嗎啉、氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸鉀的條件下，將式(III)的化合物與式(XX)的磺酰鹵(sulfonylhalide)進行反應(yīng)。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通?？梢栽诘蜏鼗蚋邷叵逻M行，優(yōu)選在室溫下進行。
在步驟2中，在與方法1中將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIa)的化合物時的條件相同的條件下，將步驟1中制備的式(XXI)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIg)的化合物。
在與方法1中將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIb)的化合物時的條件相同的條件下，將步驟1中制備的式(XXI)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIh)的化合物。
<方法5>
按照本發(fā)明的方法5，式(IIi)和式(IIj)的化合物被制備如下。在步驟1中，將式(III)的化合物與醇基上具有保護基的式(XXIII)的化合物反應(yīng)，隨后進行去保護反應(yīng)。將來自上述反應(yīng)的式(XXIV)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIi)的化合物。此時，利用偶聯(lián)劑，例如碳酰二氯(carbonyl dichloride)、triphosgen、二碳酸二叔丁酯或1，1’-羰基二咪唑等，將式(III)的化合物與式(XXIII)的化合物進行反應(yīng)。所述反應(yīng)可以在沒有堿或有堿存在的條件下進行，所述堿一般是酰胺化反應(yīng)可以接受的，例如吡啶、三乙胺、二乙基異丙基胺、N-甲基嗎啉或二甲苯胺，在對反應(yīng)沒有負效應(yīng)的溶劑中進行，所述溶劑例如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙醚、乙醇和二甲基甲酰胺。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通常在低溫或室溫下進行。通過一般的有機合成中已知的方法進行去保護反應(yīng)。
在步驟2中，在與方法1中將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIa)的化合物時的條件相同的條件下，將步驟1中制備的式(XXIV)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIi)的化合物。
在與方法1中將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIb)的化合物時的條件相同的條件下，將步驟1中制備的式(XXIV)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIj)的化合物。
<方法6>
按照本發(fā)明的方法6，式(IIk)和式(IIl)的化合物被制備如下。在步驟1中，將式(III)的化合物與醇基上具有保護基的式(XXVI)的化合物進行反應(yīng)，隨后進行去保護反應(yīng)。然后，將式(XXVII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIk)的化合物。此時，在對反應(yīng)沒有負效應(yīng)的溶劑例如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙醚、苯、乙腈等中，在沒有堿或有酰胺化反應(yīng)可接受的堿的條件下，所述的堿例如吡啶、三乙胺、二乙基異丙基胺或N-甲基嗎啉等，進行式(III)的化合物與式(XXVI)的化合物的反應(yīng)。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通常在低溫或室溫下進行。通過一般的有機合成中已知的方法進行醇基的保護和去保護反應(yīng)。
在步驟2中，在與方法1中將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIa)的化合物的條件相同的條件下，將步驟1中制備的式(XXVII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIk)的化合物。
在與方法1中將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIb)的化合物的條件相同的條件下，將步驟1中制備的式(XXVII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIl)的化合物。
<方法7>
按照本發(fā)明的方法7，按類似于在方法3中所述的步驟，由式(XXIX)的化合物制備式(IIm)和式(IIn)的化合物。
<方法8>
按照本發(fā)明的方法8，式(IIo)和式(IIp)的化合物被制備如下。在步驟1中，將式(XXIX)的化合物與式(IX’)的化合物進行反應(yīng)，生成式(XXXIV)的化合物。在醚化反應(yīng)可接受的堿存在的條件下，通過醇(X2＝O)或硫醇(X2＝S)與烷基鹵(alkylhalide)的醚化反應(yīng)進行此反應(yīng)。作為適合此目的的堿，氫化鈉(NaH)、叔丁醇鉀(t-BuOK)、n-BuLi、氫氧化鈉、氫氧化鉀，以及相轉(zhuǎn)移催化劑例如芐基三乙基氯化銨等，或冠醚是優(yōu)選的。優(yōu)選在對反應(yīng)無負效應(yīng)的溶劑中進行所述反應(yīng)，所述溶劑例如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、二乙醚、甲苯、二甲基甲酰胺、水溶液、二甲亞砜或苯等。反應(yīng)溫度不受具體限制，但通?？梢栽诘蜏鼗蚋邷叵逻M行，在低溫或室溫下進行所述反應(yīng)。
在步驟2中，通過硝化反應(yīng)或亞硝化反應(yīng)，完成在上述步驟1中制備的(XXXIV)的化合物向式(IIo)的化合物的轉(zhuǎn)化。按類似于在方法1中描述的步驟進行此反應(yīng)，在所述方法1的步驟中完成了式(V)的化合物向式(IIa)的化合物的轉(zhuǎn)化。
制備式(IIo)的化合物另一個方法如下。將式(XXIX)的化合物與醇基上具有保護基的式(XI’)的化合物進行反應(yīng)，隨后進行去保護反應(yīng)，生成式(XXXV)的化合物。完成式(XXXV)的化合物向式(IIo)的化合物的轉(zhuǎn)化。在與方法8中通過醚化反應(yīng)完成的式(XXIX)的化合物向式(XXXIV)的化合物的轉(zhuǎn)化反應(yīng)的條件相同的條件下，將式(XXIX)的化合物與式(XI’)的化合物進行反應(yīng)。
將式(XXXV)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIo)的化合物，其反應(yīng)條件與方法1中用于將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIa)的化合物的反應(yīng)條件相同。
將式(XXXV)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIp)的化合物，其反應(yīng)條件與方法1中用于將式(VII)的化合物轉(zhuǎn)化為式(IIb)的化合物的反應(yīng)條件相同。
可以通過常用的方法分離和純化由上述反應(yīng)獲得的靶化合物，所述方法例如柱色譜法、重結(jié)晶等。
本發(fā)明也提供含有<式1>所示的三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽作為有效成分的藥物組合物。
本發(fā)明的三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽對癌細胞系顯示出非常強的細胞毒性，而其對試驗動物具有比秋水仙堿或紫杉醇注射劑低得多的毒性。
當將本發(fā)明的三環(huán)衍生物施用于移植了人肺癌細胞系NCI-H460的BALB/c裸鼠時，腫瘤的大小和重量依照劑量成比例地顯著減少。
對于HUVEC細胞，本發(fā)明的三環(huán)衍生物也具有強的抗血管生成活性。
因此，本發(fā)明的三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽可以被有效地用作抗癌劑、抗增殖劑和血管生成抑制劑。
除三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽之外，本發(fā)明的組合物另外可以包括至少一種活性組分，其與所述的三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽具有相同或相似的功能。
所述三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽可以口服或者腸胃外給藥，而且可以被制備成藥物制劑的一般形式。通過與常用的填料、增量劑(entenders)、粘結(jié)劑、濕潤劑、崩解劑、稀釋劑例如表面活性劑或賦形劑混合，本發(fā)明的三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽可以被制備以用于口服或腸胃外給藥。用于口服的固態(tài)制劑為片劑、丸藥、粉劑、粒劑和膠囊。通過混合一種或多種合適的賦形劑，例如淀粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖和明膠等，制備這些固態(tài)制劑。除簡單的賦形劑之外，可以使用潤滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石粉等。用于口服的液態(tài)制劑為懸液、溶液、乳劑和糖漿，而且除通常所使用的簡單的稀釋劑例如水和液體石蠟之外，上述制劑可以含有各種不同的賦形劑，例如濕潤劑、增甜劑、芳香劑和防腐劑。用于腸胃外給藥的制劑為滅菌水溶液、水不溶性賦形劑、懸液、乳劑、凍干劑(lyophilizedagent)和栓劑。除含有活性化合物之外，水不溶性賦形劑和懸液也可以含有丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄欖油、可注射酯如ethylolate等。栓劑可含有witepsol、macrogol、吐溫61(tween61)、可可脂、月桂油(laurin butter)、甘油和明膠。
本發(fā)明的組合物可以被制備為口服或腸胃外給藥(例如靜脈注射、皮下注射、腹膜腔注射或局部注射)，根據(jù)重量、年齡、性別、健康狀況和患者的飲食以及給藥方法、排泄率和疾病嚴重程度來決定劑量。本發(fā)明的三環(huán)衍生物優(yōu)選的有效劑量為3～300mg/kg(體重)，給藥次數(shù)為每天一次或幾次。
實施例本發(fā)明的這些實踐性的且目前為優(yōu)選的實施方案是闡述性的，如下列實施例所示。
然而，本發(fā)明并不限于下列實施例。
按照在[EP 0493064；Synthetic Communications 1997，27(2)，293-296]中所述的方法制備用于下列實施例的7-脫乙酰秋水仙堿(7-Deacetylcolchicine)。
按照在(WO 9421598；Bioorganic & Medicinal Chemistry，Vol 5，No.12，pp2277-2282，1997)中所述的方法制備7-氨基-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氫-5H-苯并[a]-庚搭烯-9-酮。
按照在(J.Med.Chem，1985，28，1204-1208)中所述的方法制備硫代脫羰秋水仙堿(Thiodemecolcine)。
按照在(WO 9611184)中所述的方法制備(7S)-7-氨基-3-環(huán)戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氫-5H-苯并[a]庚搭烯-9-酮、(7S)-7-氨基-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氫-5H-苯并[a]庚搭烯-9-酮、(7S)-7-氨基-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氫-5H-苯并[a]庚搭烯-9-酮。
實施例16-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-煙酰胺的制備<步驟1>6-羥甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-煙酰胺的制備 按照在(Bioorg.Med.Chem.Lett，1996，6，3025-3028)中所述的方法合成6-羥甲基-煙酸。
在0℃，將EDCI(308mg，1.60mmol)加入到7-氨基-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氫-5H-苯并[a]-庚搭烯-9-酮(300mg，0.80mmol)、6-羥甲基煙酸(135mg，0.88mmol)和DMAP(60mg，0.48mmol)溶于10ml乙腈的溶液中。在室溫下將反應(yīng)化合物攪拌2小時。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取水層。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(乙酸乙酯∶甲醇＝8∶1)純化殘余物，生成244mg靶化合物(收率60％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.07-2.15(m，1H)，2.31-2.44(m，2H)，2.45(s，3H)，2.56-2.59(m，1H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.66(q，J＝10.2Hz，2H)，4.90-4.93(m，1H)，6.56(s，1H)，7.13(t，J＝9.1Hz，2H)，7.40(d，J＝10.2Hz，1H)，7.52(s，1H)，8.15(dd，J＝2.2，5.8Hz，1H)，8.80(d，J＝6.9Hz，1H)，8.96(s，1H)
<步驟2>6-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-煙酰胺的制備 在-35℃，將在實施例1的步驟1制備的化合物(100mg，0.19mmol)和三苯基膦(57mg，0.21mmol)溶于乙腈/二氯甲烷(1.25ml/0.5ml)中，將NBS(42mg，0.23mmol)加入其中。反應(yīng)混合物被攪拌20分鐘。然后，在室溫下將硝酸銀(40mg，0.23mmol)逐滴緩慢加入此反應(yīng)混合物中，在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌18小時。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用氯仿萃取水層。通過無水硫酸鈉干燥合并的有機層，過濾并減壓濃縮。通過柱色譜法(氯仿∶甲醇＝10∶1)純化殘余物，生成18mg靶化合物(收率35％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.09-2.13(m，1H)，2.31-2.43(m，2H)，2.46(s，3H)，2.55-2.64(m，1H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.93-4.98(m，1H)，5.50(s，2H)，6.56(s，1H)，7.16(t，J＝10.9Hz，1H)，7.26(d，J＝8.8Hz，1H)，7.40(d，J＝10.6Hz，1H)，7.59(s，1H)，8.27(dd，J＝2.2，5.8Hz，1H)，8.77(d，J＝7.3Hz，1H)，9.08(s，1H)實施例2～4按類似于實施例1中所述的過程合成實施例2-實施例4的化合物，并通過如下所述的方法制備中間體。
<中間體1>5-羥甲基-呋喃-2-羧酸的制備按照在(Helv.Chim.Acta，1926，9，1068)中所述的方法合成5-羥甲基-呋喃-2-羧酸。
<中間體2>3-羥甲基苯甲酸的制備
將間苯二甲酸二乙酯(9.100g，40.95mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中。然后，將硼氫化鋰(lithiumborohydride)(11.26ml，22.52mmol，2M四氫呋喃溶液)逐滴緩慢加入其中，并將反應(yīng)混合物回流3小時。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取水層。通過無水硫酸鎂干燥組合的有機層，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化殘余物，生成5.76g 3-羥甲基苯甲酸乙酯(收率77.1％，無色液體)。
將上述制備的酯化合物(1.317g，7.311mmol)溶于乙醇(6ml)中。然后將2NNaOH水溶液(11.0ml，21.93mmol)逐滴緩慢加入其中，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時。用1％HCl水溶液中和此反應(yīng)混合物，用乙酸乙酯萃取，并用飽和NaCl溶液洗滌。將組合的有機層通過無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(乙酸乙酯∶甲醇＝5∶1)純化殘余物，生成1.03g靶化合物(收率99.2％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ4.66(s，2H)，7.44(t，J＝7.7Hz，1H)，7.58(d，J＝7.7Hz，1H)，7.92(d，J＝7.7Hz，1H)，8.04(s，1H)實施例25-硝基氧甲基-呋喃-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.37-2.51(m，3H)，2.46(s，3H)，2.61-2.92(m，1H)，3.74(s，3H)，3.93(s，3H)，3.98(s，3H)，4.82-4.85(m，1H)，4.85(d，J＝13.2Hz，1H)，4.90(d，J＝13.2Hz，1H)，6.39(s，1H)，6.58(s，1H)，6.64(s，1H)，7.16(d，J＝10.6Hz，1H)，7.42(d，J＝10.2Hz，1H)，7.72(s，1H)，8.99(s，1H)
實施例3N-[(7S)-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.42(t，J＝6.6Hz，6H)，2.22-2.27(m，1H)，2.34-2.49(s，2H)，2.54-2.57(m，1H)，3.75(s，3H)，3.96(s，3H)，4.59-4.63(m，1H)，4.93-4.97(m，1H)，5.23(q，J＝13.0Hz，2H)，6.56(s，1H)，7.15(d，J＝10.6Hz，1H)，7.18-7.25(m，1H)，7.33(d，J＝8.0Hz，2H)，7.46(d，J＝10.2Hz，1H)，7.64(s，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，7.88(s，1H)，8.40(s，1H)實施例4N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.49(t，J＝6.9Hz，3H)，2.17-2.24(m，1H)，2.34-2.47(m，2H)，2.45(s，3H)，2.49-2.58(m，1H)，3.75(s，3H)，3.97(s，3H)，4.12-4.15(m，2H)，4.89-4.96(m，1H)，5.24(q，J＝12.0Hz，2H)，6.56(s，1H)，7.15(d，J＝10.2Hz，1H)，7.21-7.25(m，1H)，7.31-7.35(m，1H)，7.41(d，J＝10.6Hz，1H)，7.60(s，1H)，7.71(d，J＝7.3Hz，1H)，7.78(s，1H)，8.23(s，1H)
實施例56-硝基氧甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺的制備<步驟1>6-羥甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺的制備 按照與實施例1的步驟1相似的過程，通過使用6-羥甲基吡啶-2-羧酸(23mg，0.17mmol)，獲得35mg靶化合物(收率53％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.45(s，3H)，2.33-2.50(m，3H)2.52-2.73(m，1H)，3.75(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(S，3H)，4.28(d，J＝14Hz，1H)，4.44(d，J＝14Hz，1H)4.86-4.92(m，1H)，6.57(s，1H)，7.13(d，J＝10.4Hz，1H)，7.37-7.48(m，4H)，7.73(s，1H)，9.80(d，J＝8Hz，1H)<步驟2>6-溴甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺的制備 將在步驟1制備的化合物(50mg，0.098mmol)溶于二氯甲烷(6ml)中。然后，在0℃，將三溴膦(PBr3，0.005ml，0.05mmol)逐滴緩慢加入其中，并將反應(yīng)化合物在室溫下攪拌3小時。加入甲醇結(jié)束反應(yīng)。將組合的有機層通過無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(氯仿∶甲醇＝99∶1)純化殘余物，生成40mg靶化合物(收率71％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.06-2.14(m，1H)，2.33-2.41(m，1H)，2.41(s，3H)，2.46-2.54(m，1H)2.58-2.63(m，1H)，3.72(s，3H)，3.90(s，3H)，3.95(S，3H)，4.55(d，J＝2.8Hz，2H)，4.77-4.83(m，1H)，6.57(s，1H)，7.04(d，J＝10.4Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.31(d，J＝10.4Hz，1H)，7.58(d，J＝7.6Hz，1H)，7.78(t，J＝7.6Hz，1H)，7.90(d，J＝8.0Hz，1H)，8.53(d，J＝7.6Hz，1H)
<步驟3>6-硝基氧甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺的制備 將在步驟2中制備的化合物(40mg，0.070mmol)溶解在乙腈中(3ml)。然后，將硝酸銀(23mg，0.14mmol)逐滴緩慢加入其中，并將反應(yīng)化合物在室溫下攪拌12小時。用水洗滌此反應(yīng)混合物，并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(氯仿∶甲醇＝99∶1)純化殘余物，生成17mg靶化合物(收率44.7％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.03-2.10(m，1H)，2.33-2.41(m，1H)，2.43(s，3H)，2.46-2.54(m，1H)2.58-2.65(m，1H)，3.73(s，3H)，3.92(s，3H)，3.95(S，3H)，4.77-4.83(m，1H)，5.63(d，J＝3.2Hz，2H)，6.58(s，1H)，7.06(d，J＝10.4Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.31(d，J＝10.4Hz，1H)，7.53(d，J＝7.6Hz，1H)，7.88(t，J＝8.0Hz，1H)，8.02(d，J＝7.2Hz，1H)，8.39(d，J＝7.2Hz，1H)實施例6～24按類似于在實施例5中所述的過程合成實施例6-實施例24的化合物，并通過如下所述的方法制備中間體。
<中間體3>6-羥甲基-吡啶-2-羧酸的制備 將6-羥甲基-吡啶-2-羧酸乙酯(200mg，1.1mmol)(J.Amer.Chem.Soc，1982，104，2251-2257)溶解在甲醇(1ml)中。然后，將2N NaOH水溶液(1ml)逐滴緩慢加入其中，并將反應(yīng)化合物在室溫下攪拌1小時。用2N HCl將此反應(yīng)混合物酸化(pH＝3)。將溶劑減壓濃縮，然后將其溶于甲醇，并過濾。減壓濃縮濾液，生成150mg靶化合物(收率89％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ5.05(s，2H)，8.34(d，J＝8.0Hz，1H)，8.47(d，J＝8.0Hz，1H)8.73(d，J＝8.0Hz，1H)<中間體4>5-羥甲基-噻吩-2-羧酸的制備 將噻吩-2，5-二羧酸(4g，23.3mmol)溶于甲醇(300ml)中。將催化量的硫酸緩慢加入其中?；亓鞣磻?yīng)混合物，生成3.8g噻吩-2，5-二羧酸二甲酯(收率81.7％，白色固體)。在氮氣氛，室溫下，將噻吩-2，5-二羧酸二甲酯(3.7g，18.84mmol)溶于無水四氫呋喃(50ml)中。在0℃，將2.0M硼氫化鋰四氫呋喃溶液(5.5ml，11mmol)逐滴緩慢加入其中。反應(yīng)混合物被回流3小時，生成2.1g5-羥甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(收率64.7％，白色固體)。將5-羥甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(2.1g，12.2mmol)溶解在甲醇(20ml)中。將2N NaOH水溶液(15ml)緩慢加入其中。反應(yīng)混合物在室溫下被攪拌1小時，生成1.75g靶化合物(收率89％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.90(Br，1H)，4.79(d，J＝0.8Hz，2H)，6.97(d，J＝4Hz，1H)，7.66(d，J＝4Hz，1H)<中間體5>2-氟-3-羥甲基-苯甲酸的制備 將2-氟間苯二甲酸(3g，16.3mmol)(J.Amer.Chem.Soc.，1943，65，2308)溶于甲醇(150ml)中。向其中緩慢加入催化量的硫酸?；亓鞣磻?yīng)混合物。減壓濃縮生成物以去除溶劑，并將其溶于乙酸乙酯。用飽和碳酸鈉洗滌合并的有機層，通過無水硫酸鈉進行干燥，并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(乙酸乙酯∶己烷＝1∶2)純化殘余物，生成3.1g2-氟-間苯二甲酸二甲酯(收率88％，白色固體)。在氮氣氛，室溫下，將噻吩-2，5-二羧酸二甲酯(3.1g，14.6mmol)溶于無水四氫呋喃(50ml)中。在0C，將2.0M硼氫化鋰四氫呋喃溶液(4.4ml，8.7mmol)緩慢加入其中。將反應(yīng)混合物回流3小時。用1N HCl水溶液酸化此反應(yīng)混合物，減壓濃縮以去除溶劑，并用氯仿萃取。通過無水硫酸鈉干燥合并的有機層，過濾，并減壓濃縮溶劑。經(jīng)柱色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝99∶1)純化殘余物，生成1.5g2-氟-3-羥甲基-苯甲酸甲酯(收率58％，白色固體)。將2-氟-3-羥甲基-苯甲酸甲酯(1.3g，7.6mmol)溶于甲醇(20ml)中。向其中緩慢加入2N NaOH水溶液(14ml)。反應(yīng)混合物在室溫下被攪拌1小時。用2N HCl酸化(pH＝3)此反應(yīng)混合物。溶劑被減壓濃縮，然后溶于甲醇中并過濾。減壓濃縮濾液，生成1.15g靶化合物(收率88％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.58(d，J＝5.2Hz，2H)，5.37(t，J＝5.2Hz，1H)7.28(t，J＝8Hz，1H)，7.68(t，J＝8Hz，1H)，7.74(t，J＝8Hz，1H)<中間體6>3-氟-5-羥甲基-苯甲酸的制備<步驟1>3-氟-5-羥甲基-苯甲酸甲酯的制備 將5-氟間苯二甲酸二甲酯(1.6g，7.54mmol)(J.Org.Chem；1969，34，1960-1961)溶于四氫呋喃(15ml)中。然后，在0℃將2.0M硼氫化鋰四氫呋喃溶液(2.6ml，5.27mmol)逐滴緩慢加入其中，并將反應(yīng)混合物回流3小時。用1N HCl水溶液酸化此反應(yīng)混合物，將其減壓濃縮，以去除溶劑，并用氯仿萃取。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾，并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝99∶1)純化殘余物，生成800mg靶化合物(收率57％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.92(d，J＝1.6Hz，3H)，4.75(d，J＝4Hz，2H).7.29-7.32(m，1H)，7.61(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，7.8(d，J＝0.8Hz，1H)<步驟2>3-氟-5-羥甲基-苯甲酸的制備 按照與在中間體3的方法中相似的過程，通過使用在步驟1中制備的化合物，獲得1.6g靶化合物(收率94％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ4.66(d，J＝0.8Hz，2H)，7.33-7.36(m，1H)，7.56-7.59(m，1H)，7.83-7.84(m，1H)<中間體7>4-氟-3-羥甲基-苯甲酸的制備<步驟1>4-氟-間苯二甲酸的制備 將4-氟-3-甲基-苯甲酸(2.52g，16.346mmol)和高錳酸鉀(10.33g，65.382mmol)溶于水溶液中(300ml)，并將該混合物回流1天。將反應(yīng)混合物過濾，并在室溫下冷卻所生成的溶液，然后將濃HCl溶液加入其中。加熱所生成的固體，直到它被完全熔化為止。將溫度再次降至室溫，然后過濾該固體，生成2.08g靶化合物(收率69.1％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.32(dd，J＝10.4，8.6Hz，1H)，8.21-8.25(m，1H)，8.59(dd，J＝7.0，2.4Hz，1H)<步驟2>4-氟-間苯二甲酸二甲酯的制備 將在步驟1中制備的化合物(2.08g，11.29mmol)溶于甲醇(30ml)中。然后，向其中加入10滴濃硫酸。將反應(yīng)混合物回流1天，用飽和碳酸氫鈉水溶液中和，并用氯仿萃取。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾，并減壓濃縮，生成2.21g靶化合物(收率92.2％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.96(s，3H)，3.97(s，3H)，7.22(dd，J＝10.3，8.8Hz.1H)，8.20-8.23(m，1H)，8.64(dd，J＝7.0，2.2Hz，1H)<步驟3>4-氟-3-羥甲基-苯甲酸甲酯和2-氟-5-羥甲基-苯甲酸甲酯的制備
將在步驟2中制備的化合物(104.5mg，0.493mmol)溶于四氫呋喃溶液(4ml)中。然后，將2M硼氫化鋰四氫呋喃溶液(0.123ml，0.246mmol)緩慢加入其中。將反應(yīng)混合物回流1天。用水結(jié)束反應(yīng)。然后，在0℃，用1M HCl溶液將pH調(diào)整為5。用乙酸乙酯萃取。將組合的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾，并減壓濃縮。通過柱色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化殘余物，生成4-氟-3-羥甲基-苯甲酸甲酯(45.4mg，收率50.1％，無色液體)和2-氟-5-羥甲基-苯甲酸甲酯(15.4mg，收率17.0％，無色液體)。
4-氟-3-羥甲基-苯甲酸甲酯1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.73(t，J＝5.1Hz，1H)，3.90(s，3H)，4.78(d，J＝5.1Hz，2H)，7.07(dd，J＝9.2，9.2Hz，1H)，7.93-7.97(m，1H)，8.14(dd，J＝7.1，2.2Hz，1H)2-氟-5-羥甲基-苯甲酸甲酯1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.96(t.J＝4.4Hz，1H)，3.94(s，3H)，4.70(d，J＝4.4Hz，2H)，7.13(dd，J＝10.6，8.4Hz，1H)，7.52-7.56(m，1H)，7.92(dd，J＝7.0，2.2Hz，1H)<步驟4>4-氟-3-羥甲基-苯甲酸的制備 按照與在中間體3的方法中相似的過程，通過使用在步驟3中制備的化合物(1.074g，5.380mmol)，獲得0.906g靶化合物(收率91.3％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ4.69(s，2H)，7.13(dd，J＝9.9，8.8Hz，1H)，7.90-7.97(m，1H)，8.16(dd，J＝7.3，2.2Hz，1H)<中間體8>2-氟-5-羥甲基-苯甲酸的制備 按照與在中間體3的方法中相似的過程，通過使用在中間體7的步驟3中制備的2-氟-5-羥甲基-苯甲酸甲酯，獲得靶化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ4.61(s，2H)，7.17(dd，J＝11.0，8.4Hz，1H)，7.55-7.59(m，1H)，7.93(dd，J＝7.1，2.4Hz，1H)<中間體9>3-羥基-5-羥甲基-苯甲酸的制備 在氮氣氛，0℃下，將5-羥基-間苯二甲酸甲酯(300mg，1.42mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中。將硼氫化鋰(30mg，0.7mmol)加入其中。在室溫下，反應(yīng)混合物被攪拌3小時。加入水結(jié)束反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取水層。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)純化殘余物。將所得到的3-羥基-5-羥甲基-苯甲酸甲酯(170mg，0.93mmol)溶于甲醇(1ml)中。向其中加入1N NaOH水溶液(1ml)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時。用2N HCl酸化此反應(yīng)混合物(pH＝3)。將溶劑減壓濃縮，然后溶于甲醇中并過濾。將濾液減壓濃縮，生成150mg靶化合物(收率96％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ3.87(s，3H)，4.57(s，2H)，7.02(s，1H)，7.31(s，1H)，7.48(s，1H)<中間體10>3，5-二-羥甲基-苯甲酸的制備<步驟1>3，5-二-羥甲基-苯甲酸甲酯的制備 將苯-1，3，5-三羧酸三甲酯(1.010g，4.003mmol)溶于四氫呋喃(15ml)中。然后，降溫至0℃，并向其中緩慢加入硼氫化鋰(0.160g，4.003mmol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時。緩慢加入水(0.15ml)和15％NaOH水溶液(0.15ml)，以結(jié)束反應(yīng)。再次加入水溶液(0.45ml)。減壓濃縮溶劑。經(jīng)柱色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)純化殘余物，生成0.34g靶化合物(收率43.1％，無色液體)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ3.91(s，3H)，4.66(s，4H)，7.59(s，1H)，7.93(s，2H)
<步驟2>3，5-二-羥甲基-苯甲酸的制備 按照與在中間體3的方法中相似的過程，通過利用在步驟1中制備的化合物(1.50g，7.65mmol)，獲得0.617g靶化合物(收率44.3％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ5.21(s，4H)，7.55(s，1H)，7.92(s，2H)<中間體11>2-羥基-4-羥甲基-苯甲酸的制備<步驟1>2-羥基-4-羥甲基-苯甲酸甲酯的制備 將2-羥基-4-甲基-苯甲酸甲酯(166mg，1mmol)溶于CCl4(1.5ml)中。向其中加入NBS(177mg，1mmol)和過氧化苯甲酰(benzoyl peroxide)(5mg，0.02mmol)。將反應(yīng)混合物在70℃攪拌12小時。然后，用水洗滌反應(yīng)混合物，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，并過濾。將溶劑減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(二氯甲烷∶己烷＝1∶4)純化殘余物，生成4-溴甲基-2-羥基-苯甲酸甲酯(130mg，收率53％，白色固體)。將所產(chǎn)生的化合物(130mg，0.53mmol)溶于水溶液(1.5ml)和1，4-二噁烷(1.5ml)中，并將混合物在90℃攪拌12小時。用氯仿萃取反應(yīng)混合物。經(jīng)無水硫酸鈉干燥合并的有機層，過濾并減壓濃縮。通過柱色譜法(乙酸乙酯∶己烷＝1∶4)純化殘余物，生成55mg靶化合物(收率57％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.95(s，3H)，4.71(d，J＝6Hz，2H)，6.88(d，J＝8Hz，1H)，6.99(s，1H)，7.82(d，J＝8Hz，1H)，10.79(s，1H)<步驟2>2-羥基-4-羥甲基-苯甲酸的制備
按照與在中間體3的方法中相似的過程，通過利用在步驟1中制備的化合物，獲得45 mg靶化合物(收率90％，白色固體)。
<中間體12>4-羥甲基-噻吩-2-羧酸的制備<步驟1>A4-甲基-噻吩-2-羧酸，B3-甲基-噻吩-2-羧酸的制備 在氮氣氛，室溫下，將2.5M n-丁基鋰(12.2ml，30.55mmol)溶于二乙醚(1ml)中。向其中緩慢加入溶于二乙醚中的3-甲基-噻吩(3g，30.55mmol)。將混合物回流2小時。使反應(yīng)室冷卻至0℃，并將干冰緩慢加入其中。用45ml水結(jié)束反應(yīng)。萃取并去除二乙醚層。用1N HCl溶液酸化水層，并用乙酸乙酯萃取。經(jīng)無水硫酸鈉干燥合并的有機層，過濾并減壓濃縮。通過柱色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝9∶1)純化殘余物，生成靶化合物A(900mg，白色固體)和B(650mg，白色固體)。
<步驟2>4-溴甲基-噻吩-2-羧酸甲酯的制備 將在步驟1中制備的4-甲基-噻吩-2-羧酸(900mg，6.33mmol)溶于甲醇(15ml)中。向其中緩慢加入催化量的硫酸?；亓鞣磻?yīng)混合物，生成4-甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(890mg，收率90％，，白色固體)。將4-甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(200mg，1.28mmol)和NBS(215mg，1.216mmol)以及催化量的過氧化苯甲酰溶于四氯化碳溶液(5ml)中。將反應(yīng)混合物回流(70℃)3小時，生成165mg靶化合物(收率55％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ3.89(s，3H)，4.46(s，2H)，7.49(s，1H)，7.80(s，1H)<步驟3>4-羥甲基-噻吩-2-羧酸的制備
將在步驟2中制備的化合物(150mg，0.638mmol)溶于1，4-二噁烷(1.5ml)和水(1.5ml)中。向其中緩慢加入硝酸銀(130mg，0.765mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時，生成4-羥甲基-噻吩-2-羧酸甲酯(60mg，收率55％，白色固體)。在室溫下將此化合物(60mg，0.348mmol)溶于甲醇(1ml)中。向其中緩慢加入1N NaOH水溶液(1ml)，并將此反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時，生成50mg靶化合物(收率95％，白色固體)。
<中間體13>3-羥甲基-噻吩-2-羧酸的制備<步驟1>3-溴甲基-噻吩-2-羧酸甲酯的制備 按照在中間體12中的步驟2的方法中相似的過程，通過使用在中間體12的步驟1中制備的3-甲基-噻吩-2-羧酸(650mg，4.57mmol)，獲得750mg靶化合物(收率79％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ3.90(s，3H)，4.91(s，2H)，7.18(d，J＝5.2Hz，1H)，7.46(d，J＝5.2Hz，1H)<步驟2>3-羥甲基-噻吩-2-羧酸的制備 按照在中間體12中的步驟3的方法中相似的過程，通過使用在步驟1中制備的化合物(750mg，3.19mmol)，獲得210mg靶化合物(收率92％，白色固體)。
<中間體14>(3-羥甲基-苯基)-乙酸的制備
將間甲苯基乙酸乙酯(1g，5.6mmol)、NBS(948mg，5.33mmol)和催化量的過氧化苯甲酰溶于四氯化碳(15ml)中。將反應(yīng)混合物回流(70℃)3小時，生成(3-溴甲基-苯基)-乙酸乙酯(600mg，收率42％，白色固體)。將(3-溴甲基-苯基)-乙酸乙酯(130mg，0.50mmol)和碳酸鈣(300mg，3mmol)溶于水(2ml)和1，4-二噁烷(2ml)中?；亓鞣磻?yīng)化合物，生成(3-羥甲基-苯基)-乙酸乙酯(85mg，收率87％，白色固體)。將(3-羥甲基-苯基)-乙酸乙酯(85mg，0.43mmol)在室溫下溶于甲醇(1ml)中。向其中加入1N NaOH水溶液(1ml)。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌1小時，生成65mg靶化合物(收率91％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ3.66(s，2H)，4.57(s，2H)，7.21-7.32(m，4H)<中間體15>3-(2-羥基-乙基)-苯甲酸的制備 將間苯二甲酸(5g，30mmol)溶于甲醇(50ml)中。向其中加入催化量硫酸。在回流下將反應(yīng)混合物攪拌12小時，生成間苯二甲酸二甲酯(5.2g，收率90％，白色固體)。將間苯二甲酸二甲酯(5.2g，26.7mmol)溶于四氫呋喃(30ml)中。將2M硼氫化鋰四氫呋喃(13ml，26.7mmol)加入其中。回流反應(yīng)混合物，生成3-羥甲基-苯甲酸甲酯(2.7g，收率63％，無色液體)，并將3-羥甲基-苯甲酸甲酯(200mg，1.20mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中。將PCC(388mg，1.8mmol)加入其中。反應(yīng)混合物在室溫下被攪拌3小時，生成3-甲酰-苯甲酸甲酯(140mg，收率72％，白色固體)。在氮氣氛下，將(甲氧基甲基)三苯基氯化鎓((methoxymethyl)triphenylphosphonium chloride)(770mg，2.24mmol)溶于四氫呋喃(5ml)中。在-78℃將1M NaHMDS四氫呋喃(2ml，2.04mmol)緩慢加入其中，并將反應(yīng)混合物攪拌1小時。將溶于四氫呋喃(2ml)的3-甲酰-苯甲酸甲酯(160mg，0.975mmol)緩慢加入其中。在室溫下，將反應(yīng)混合物攪拌24小時，生成3-(2-甲氧基乙烯基)-苯甲酸甲酯(121mg，收率65％，白色固體)。將3-(2-甲氧基乙烯基)-苯甲酸甲酯(120mg，0.63mmol)溶于四氫呋喃(3ml)中。向其中加入4M HCl(2ml)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時，生成3-(2-氧代-乙基)-苯甲酸甲酯(60mg，收率54％，白色固體)。將3-(2-氧代-乙基)-苯甲酸甲酯(60mg，0.036mmol)溶于乙醇(2ml)中。在0℃，向其中加入NaBH4(25mg，0.67mmol)，并將混合物攪拌1小時，生成3-(2-羥乙基)-苯甲酸甲酯(50mg，收率84％，白色固體)。將3-(2-羥乙基)-苯甲酸甲酯(50mg，0.28mmol)溶于甲醇(1ml)中。向其中加入1NNaOH水溶液(1ml)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時，生成43mg靶化合物(收率95％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.32(br，1H)，2.89(t，J＝6.4Hz，2H)，3.85(t，J＝6.4Hz，2H)，7.36(t，J＝7.6Hz，1H)，7.42(d，J＝5.6Hz，1H)，7.88(d，J＝8.8Hz，1H)，7.89(s，1H)實施例65-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.07-2.11(m，1H)，2.32-2.45(m，2H)，2.45(s，3H)，2.53-2.56(m，1H)，3.71(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(S，3H)，4.84-4.91(m，1H)，5.46(s，2H)，6.56(s，1H)，6.95(d，J＝3.6Hz，1H)，7.13(d，J＝10.8Hz，1H)，7.37(d，J＝10.8Hz，1H)，7.58(d，J＝4.0Hz，1H)，7.61(s，1H)，8.50(d，J＝6.8Hz，1H)
實施例7N-[(7S)-3-環(huán)戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.61-1.73(m，2H)，1.85-2.00(m，6H)，2.21-2.65(m，4H)，2.44(s，3H)，3.75(s，3H)，3.93(s，3H)，4.82-4.88(m，1H)，4.92-5.00(m，1H)，5.16(dd，J＝12，31.2Hz，2H)，6.55(s，1H)，7.13-7.17(m，2H)，7.28(d，J＝6.4Hz，1H)，7.41(d，J＝10.8Hz，1H)，7.68-7.70(m，1H)，7.72(s，1H)，7.78(s，1H)，8.78(d，J＝7.2Hz，1H)實施例8N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.49(t，J＝6.9Hz，3H)，1.93-1.98(m，1H)，2.31-2.39(m，1H)，2.43(s，3H)，2.46-2.49(m，1H)，2.51-2.59(m，1H)，3.73(s，3H)，3.96(s，3H)，4.11-4.14(m，2H)，4.83-4.86(m，1H)，5.53(d，J＝12.8Hz，1H)，5.59(d，J＝12.4Hz，1H)，6.56(s，1H)，7.07(d，J＝10.2Hz，1H)，7.10-7.15(m，1H)，7.20-7.28(m，1H)，7.31(d，J＝10.2Hz，1H)，7.57(t，J＝6.4Hz，1H)，7.97(t，J＝6.9Hz，1H)
實施例92-氟-N-[(7S)-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.41(q，J＝6.0Hz，6H)，1.92-1.99(m，1H)，2.31-2.40(m，1H)，2.43(s，3H)，2.46-2.52(m，1H)，2.55-2.60(m，1H)，3.72(s，3H)，3.94(s，3H)，4.57-4.63(m，1H)，4.83-4.89(m，1H)，5.53(d，J＝12.8Hz，1H)，5.59(d，J＝12.4Hz，1H)，6.57(s，1H)，7.07(d，J＝10.6Hz，1H)，7.15-7.19(m，1H)，7.23-7.27(m，1H)，7.34(d，J＝10.2Hz，1H)，7.56(t，J＝7.1Hz，1H)，7.7(t，J＝7.5Hz，1H)實施例102-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.95-2.02(m，1H)，2.31-2.54(m，2H)，2.43(s，3H)，2.59-2.63(m，1H)，3.73(s，3H)，3.87(s，3H)，3.92(s，3H)，4.82-4.88(m，1H)，5.51(d，J＝12.8Hz，1H)，5.60(d，J＝12.8Hz，1H)，6.58(s，1H)，7.06(d，J＝10.6Hz，1H)，7.22-7.27(m，2H)，7.28(s，1H)，7.32(d，J＝10.6Hz，1H)，7.54-7.58(m，1H)，7.93-7.98(m，1H)
實施例11N-[(7S)-3-環(huán)戊氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.61-1.73(m，2H)，1.85-2.00(m，6H)，2.35-2.52(m，4H)，2.42(s，3H)，3.72(s，3H)，3.93(s，3H)，4.82-4.88(m，2H)，5.57(dd，J＝12.8，37.6Hz，2H)，6.55(s，1H)，7.05(d，J＝10.4Hz，1H)，7.09-7.13(m，1H)，7.26(d，J＝7.2Hz，2H)，7.32(d，J＝10.4Hz，1H)，7.55-7.59(m，1H)，7.96-8.00(m，1H)實施例123-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.31-2.45(m，3H)，2.46(s，3H)，2.59-2.63(m，1H)，3.75(s，3H)，3.93(s，3H)，3.98(S，3H)，4.90-4.95(m，1H)，5.11(dd，J＝12.8，45.6Hz，2H)，6.57(s，1H)，7.03(d，J＝7.6Hz，1H)，7.19(d，J＝8.8Hz，1H)，7.30-7.33(m，1H)，7.42(d，J＝10.8Hz，1H)，7.55(s，1H)，7.68(s，1H)，8.76(d，J＝7.2Hz，1H)
實施例13N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基)-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.50(t，J＝6.9，3H)，2.33～2.42(m，3H)，2.46(s，3H)，2.51～2.59(m，1H)，3.75(s，3H)，3.98(s，3H)，4.11～4.16(m，2H)，4.90～4.93(m，1H)，5.05(d，J＝12.4，1H)，5.17(d，J＝12.4，1H)，6.56(s，1H)，7.03(d，J＝7.3，1H)，7.20(d，J＝10.6，1H)，7.31(d，J＝9.1，1H)，7.45(d，J＝10.6，1H)，7.55(s，1H)，7.69(s，1H)，8.88(d，J＝7.3，1H)實施例143-氟-N-[(7S)-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.37～1.44(m，6H)，2.34～2.41(m，3H)，2.46(s，3H)，2.51～2.58(m，1H)，3.75(s，3H)，3.96(s，3H)，4.57～4.62(m，1H)，4.91～4.95(m，1H)，5.05(d，J＝12.4，1H)，5.17(d，J＝12.4，1H)，6.56(s，1H)，7.03(d，J＝8.4，1H)，7.20(d，J＝10.6，1H)，7.31(d，J＝7.3，1H)，7.45(d，J＝10.6，1H)，7.55(s，1H)，7.70(s，1H)，8.91(d，J＝7.3，1H)
實施例15N-[(7S)-3-環(huán)戊氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.64～1.69(m，2H)，1.83～1.98(m，6H)，2.35～2.43(m，3H)，2.46(s，3H)，2.51～2.58(m，1H)，3.74(s，3H)，3.94(s，3H)，4.82～4.84(m，1H)，4.91～4.94(m，1H)，5.04(d，J＝12.4，1H)，5.16(d，J＝12.4，1H)，6.55(s，1H)，7.02(d，J＝8.4，1H)，7.20(d，J＝10.6，1H)，7.31(d，J＝7.3，1H)，7.45(d，J＝10.2，1H)，7.55(s，1H)，7.70(s，1H)，8.93(d，J＝6.9，1H)實施例164-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.22-2.51(m，3H)，2.46(s，3H)，2.55-2.63(m，1H)，3.76(s，3H)，3.92(s，3H)，3.98(s，3H)，4.90-4.97(m，1H)，5.10(d，J＝12.1Hz，1H)，5.35(d，J＝12.1Hz，1H)，6.57(s，1H)，6.86(dd，J＝9.2，8.8Hz，1H)，7.18(d，J＝10.3Hz，1H)，7.43(d，J＝10.3Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.76-7.80(m，1H)，7.91(dd，J＝6.80，2.2Hz，1H)，8.93(d，J＝7.2Hz，1H)實施例172-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.94-2.01(m，1H)，2.31-2.54(m，2H)，2.43(s，3H)，2.58-2.63(m，1H)，3.73(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.81-4.87(m，1H)，5.36(s，2H)，6.57(s，1H)，7.06(d，J＝10.3Hz，1H)，7.16-7.28(m，2H)，7.26(s，1H)，7.33(d，J＝10.3Hz，1H)，7.51-7.55(m，1H)，7.99(dd，J＝7.3，2.6Hz，1H)實施例183-羥基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.30-2.43(m，6H)，2.56-2.57(m，1H)，3.61(s，3H)，3.90(s，3H)，3.92(s，3H)，4.82-4.85(m，1H)，5.00(dd，J＝30.8Hz，12.8Hz，2H)，6.56(s，1H)，6.62(s，1H)，7.11(s，2H)，7.16-7.19(m，2H)，7.41(d，J＝10.8Hz，1H)，7.66(s，1H)，8.57(brs，1H，NH)，8.78(brs，1H，OH)實施例193，5-二-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.29-2.51(m，3H)，2.46(s，3H)，2.60-2.62(m，1H)，3.77(s，3H)，3.93(s，3H)，3.99(s，3H)，4.94-4.98(m，1H)，5.18(s，4H)，6.58(s，1H)，7.20(d，J＝10.6Hz，1H)，7.26(s，1H)，7.45(d，J＝10.6Hz，1H)，7.77(s，2H)，7.81(s，1H)，9.12(d，J＝7.0Hz，1H)實施例202-羥基-4-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.25-2.63(m，4H)，2.47(s，3H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(S，3H)，4.85-4.92(m，1H)，5.27(d，J＝4.8Hz，2H)，6.53(d，J＝8.4Hz，1H)，6.57(s，1H)，6.61(s，1H)，7.20(d，J＝10.4Hz，1H)，7.42(d，J＝10Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.72(d，J＝8Hz，1H)，9.13(d，J＝6.8Hz，1H)，12.29(s，1H)實施例214-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.21-2.29(m，1H)，2.34-2.46(m，5H)，2.51-2.58(m，1H)，3.71(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(S，3H)，4.88-4.95(m，1H)，5.18(dd，J＝12.8，20Hz，2H)，6.56(s，1H)，7.17(d，J＝10.4Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.41(d，J＝10.4Hz，1H)，7.61(s，1H)，7.74(s，1H)，8.81(d，J＝6.4Hz，1H)
實施例223-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.04-2.17(m，1H)，2.30-2.45(m，5H)，2.57-2.64(m，1H)，3.73(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(S，3H)，4.67-4.88(m，1H)，5.66(d，J＝13.6Hz，1H)，5.80(d，J＝13.6Hz，1H)，6.56(s，1H)，7.02(d，J＝4.4Hz，1H)，7.08(d，J＝10.4Hz，1H)，7.26(d，J＝4.4Hz，1H)，7.29(d，J＝10.4Hz，1H)，7.43(s，1H)，7.45(d，J＝7.2Hz，1H)實施例232-(3-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺 1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ1.82-1.95(m，1H)，2.21-2.28(m，1H)，2.31-2.42(m，1H)，2.45(s，3H)，2.47-2.53(m，1H)，3.51(d，J＝14.0Hz，1H)，3.64(s，3H)，3.66(d，J＝14.0Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.93(s，3H)，4.66-4.72(m，1H)，5.40(s，2H)，6.51(s，1H)，7.11(d，J＝10.4Hz，1H)，7.24-7.38(m，5H)，7.48(s，1H)，7.90(d，J＝7.2Hz，1H)實施例243-(2-硝基氧-乙基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺
1H NMR(400MHz，CDCl3)；δ2.05-2.11(m，1H)，2.17-2.56(m，2H)，2.46(s，3H)，2.56-2.60(m，1H)，2.81-2.91(m，2H)，3.69(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.45(t，J＝6.8，Hz，2H)，4.89-4.95(m，1H)，6.56(s，1H)，7.12-7.24(m，3H)，7.39(d，J＝10.4Hz，1H)，7.61-7.64(m，2H)，7.69(s，1H)，8.22(d，J＝6.8Hz，1H)實施例253-硝基氧-苯甲酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-吡啶-2-基-甲酯的制備<步驟1>3-氯甲基-苯甲酸-{5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基(carbamonyl)]-吡啶-2-基}-甲酯的制備 將在實施例1步驟1中制備的化合物(100mg，0.19mmol)溶于3ml二氯甲烷中。將3-(氯甲基)苯甲酰氯(0.030ml，0.21mmol)和三乙胺(0.082ml，0.59mmol)緩慢加入其中，并使混合物在室溫下反應(yīng)10分鐘。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用二氯甲烷萃取水層。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(乙酸乙酯)純化殘余物，生成99mg靶化合物(收率79％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.14-2.16(m，1H)，2.30-2.39(m，1H)，2.43-2.45(m，1H)，2.48(s，3H)，2.68-2.96(m，1H)，3.67(s，3H)，3.90(s，3H)，3.91(s，3H)，4.83-4.93(m，1H)，4.88(s，2H)，5.51(s，2H)，6.77(s，1H)，7.27(s，1H)，7.52(t，J＝7.7Hz，1H)，7.65-7.70(m，2H)，8.05(d，J＝7.7Hz，1H)，8.14(s，1H)，8.28(d，J＝10.6Hz，1H)，9.02(s，1H)<步驟2>3-硝基氧基-苯甲酸-{5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基}-甲酯的制備
將步驟1中制備的化合物(90mg，0.13mmol)和碘化鈉(31mg，0.20mmol)溶于3ml丙酮中，并使混合物在室溫下反應(yīng)1天。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取水層。在減壓下濃縮溶劑。將反應(yīng)濃縮物與硝酸銀(30mg，0.045mmol)溶于5ml乙腈中，并使反應(yīng)在室溫下反應(yīng)1小時。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取水層。在減壓下濃縮溶劑。經(jīng)短柱色譜(乙酸乙酯)和PLC純化殘余物，生成26mg靶化合物(收率29％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.09-2.17(m，1H)，2.35-2.41(m，2H)，2.44(s，3H)，2.55-2.58(m，1H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(s，3H)，4.92-4.95(m，1H)，5.45(s，2H)，5.47(s，2H)，6.56(s，1H)，7.13(d，J＝10.2Hz，1H)，7.35(t，J＝9.1Hz，2H)，7.50(t，J＝8.5Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.62(d，J＝7.3Hz，1H)，8.14(d，J＝8.3Hz，2H)，8.24(dd，J＝2.2，6.2Hz，1H，ArH)，8.36(d，J＝6.9Hz，1H)，9.09(s，1H)實施例26～34按類似于在實施例25中所述的過程合成實施例26-實施例34的化合物，通過如下所述的方法制備中間體。
<中間體16>2-羥基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 將2-羥基-苯甲酸(203mg，1.47mmol)、EDCI(385mg，2.01mmol)和HOBt(271mg，2.01mmol)溶于二甲基甲酰胺(10ml)中。將三乙胺(0.37ml，2.67mmol)加入其中，并將混合物在室溫下攪拌1天。將7-氨基-1，2，3-三甲氧基-10-甲磺酰-6，7-二氫-5H-苯并[a]-庚搭烯-9-酮(500mg，1.34mmol)加入其中，并將混合物在室溫下攪拌1天。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用二乙醚萃取水層。將合并的有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。通過柱色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶5)純化殘余物，并在甲醇中重結(jié)晶，生成516mg靶化合物(收率78％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.14-2.17(m，1H)，2.31-2.37(m，1H)，2.40-2.44(s，1H)，2.45(s，3H)，2.56-2.60(m，1H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.85-4.92(m，1H)，6.56(s，1H)，6.64(d，J＝7.7Hz，1H)，6.77(d，J＝8.4Hz，1H)，7.15(d，J＝10.6Hz，1H)，7.22(d，J＝7.3Hz，1H)，7.38(d，J＝10.6Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)<中間體17>3-羥基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 按照與在中間體16的制備方法中相似的過程，通過使用3-羥基苯甲酸(497mg，1.33mmol)，獲得558mg靶化合物(收率85％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.07-2.15(m，1H)，2.18-2.35(m，6H)，3.55(s，3H)，3.80(s，3H)，3.84(s，3H)，4.53-4.56(m，1H)，6.81(s，1H)，6.92(d，J＝6.8Hz，1H)，7.10(s，1H)，7.15-7.31(m，5H)，8.98(d，J＝7.6Hz，1H，-NH)，9.70(s，1H，-OH)實施例264-硝基氧丁酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6 7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.06-2.16(m，1H)，2.08-2.11(m，2H)，2.31-2.49(m，1H)，2.45(s，3H)，2.57(t，J＝7.1Hz，2H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(s，3H)，4.52(t，J＝6.4Hz，2H)，4.91-4.94(m，1H)，5.21(s，2H)，6.56(s，1H)，7.13(d，J＝10.9Hz，1H)，7.21-7.25(m，1H)，7.38(d，J＝10.6Hz，1H)，7.52(s，1H)，8.22(d，J＝8.0Hz，1H)，9.05(s，1H)
實施例273-硝基氧甲基-苯甲酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-吡啶-2-基-甲酯 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.84-1.92(m，1H)，2.33-2.60(m，1H)，2.43(s，3H)，2.46-2.54(m，1H)2.55-2.60(m，1H)，3.73(s，3H)，3.92(s，3H)，3.96(S，3H)，4.74-4.81(m，1H)，5.51(s，2H)5.57(d，J＝4.0Hz，1H)，6.56(s，1H)，7.04(d，J＝10.4Hz，1H)，7.25(d，J＝10.4Hz，1H)，7.54-7.60(m，2H)，7.65(d，J＝7.6Hz，1H)，7.87(t，J＝8.0Hz，1H)，7.99(d，J＝7.6Hz，1H)，8.21(s，2H)，8.22(s，1H)，8.41(d，J＝7.2Hz，1H)實施例284-硝基氧丁酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氧基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.02-2.09(m，1H)，2.11-2.18(m，2H)，2.21-2.40(m，2H)，2.43(s，3H)，2.47-2.56(m，1H)，2.63(t，J＝7.2Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.92(s，3H)，3.96(S，3H)，4.57(t，J＝6.4Hz，2H)，4.77-4.83(m，1H)，5.30(d，J＝4.8Hz，2H)，6.58(s，1H)，7.05(d，J＝10.4Hz，1H)，7.25(S，1H)，7.32(d，J＝10.4Hz，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H)，7.84(t，J＝8.0Hz，1H)，7.98(d，J＝8.0Hz，1H)，8.45(d，J＝6.8Hz，1H)
實施例293-硝基氧甲基-苯甲酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-苯酯 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.48-1.55(m，1H)，1.83-1.89(m，1H)，2.22-2.39(m，2H)，2.42(s，3H)，3.62(s，3H)，3.87(s，3H)，3.92(s，3H)，4.63-4.70(m，1H)，5.54(s，2H)，6.47(s，1H)，6.89(d，J＝7.4Hz，1H)，7.03(d，J＝10.2Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.23(d，J＝10.1Hz，1H)，7.35(t，J＝7.3Hz，1H)，7.54(t，J＝7.4Hz，1H)，7.58(t，J＝7.6Hz，1H)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H)，7.83(d，J＝7.7Hz，1H)，8.26(m，2H)實施例304-硝基氧丁酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-苯酯 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.60-1.90(m，1H)，2.10-2.14(m，2H)，2.26-2.39(m，1H)，2.44(s，3H)，2.46-2.51(m，1H)，2.56-2.61(m，1H)，2.80(t，J＝7.1Hz，2H)，3.70(s，3H)，3.92(s，3H)，3.96(s，3H)，4.55(t，J＝6.2Hz，2H)，4.74-4.81(m，1H)，6.57(s，1H)，6.82(d，J＝6.9Hz，1H)，7.08(d，J＝10.6Hz，1H)，7.13(d，J＝9.1Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.28-7.36(m，1H)，7.47(t，J＝9.9Hz，1H)，7.68(d，J＝9.5Hz，1H)
實施例313-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-苯酯 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.05-2.15(m，1H)，2.23-2.59(m，6H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.90-5.00(m，1H)，5.49(s，2H)，6.56(s，1H)，7.03(d，J＝10.4Hz，1H)，7.27(s，2H)，7.34(d，J＝8.8Hz，2H)7.53-7.65(m，2H)，7.76(s，1H)，7.77(d，J＝6.4Hz，1H)，8.13(m，3H)實施例324-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.04-2.18(m，3H)，2.25-2.60(m，6H)，2.65(t，J＝6.8Hz，2H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(s，3H)，4.56(t，J＝6.4Hz，2H)，4.87-4.94(m，1H)，6.56(s，1H)，7.08-7.12(m，2H)，7.26-7.35(m，2H)，7.48(s，1H)，7.59(s，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，7.75(d，J＝7.6Hz，1H，-NH)實施例333-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-芐基酯
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.05-2.18(m，1H)，2.31-2.47(m，2H)，2.40(s，3H)，2.55-2.59(m，1H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.90-4.96(m，1H)，5.24(s，2H)，5.44(s，2H)，6.56(s，1H)，7.09(d，J＝10.6Hz，1H)，7.27(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，7.36(d，J＝10.6Hz，1H)，7.44(d，J＝7.6Hz，1H)，7.45(dd，J＝8.0，7.6Hz，1H)，7.58(d，J＝8.0Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.79(d，J＝7.6Hz，1H)，7.91(s，1H)，8.05(d，J＝7.6Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.18(d，J＝7.2Hz，1H)實施例344-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-芐基酯 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.00-2.14(m，3H)，2.31-2.51(m，4H)，2.44(s，3H)，2.56-2.60(m，1H)，3.75(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.49(t，J＝6.2Hz，2H)，4.89-4.95(m，1H)，4.99(d，J＝12.4Hz，1H)，5.04(d，J＝12.4Hz，1H)，6.56(s，1H)，7.11(d，J＝10.6Hz，1H)，7.26(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，7.35-7.37(m，2H)，7.54(s，1H)，7.76(d，J＝8.0Hz，1H)，7.81(s，1H)，8.00(d，J＝7.6Hz，1H)實施例352-亞硝基硫代-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備<步驟1>2-巰基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 在硫代水楊酸(115mg，0.75mmol)中加入過量亞硫酰氯，并將混合物在加熱下攪拌1天。減壓濃縮反應(yīng)混合物以去除亞硫酰氯，從而得到氯化合物。將7-氨基-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-6，7-二氫-5H-苯并[a]-庚搭烯-9-酮(243mg，0.62mmol)溶于純化的二氯甲烷中。將三乙胺(0.26ml，1.86mmol)緩慢加入其中。在0℃，將溶于二氯甲烷的硫代水楊酸氯化物(thiosalycilic chloride)也加入其中，并將混合物攪拌30分鐘。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用氯仿萃取水層。通過無水硫酸鈉干燥合并的有機層，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(氯仿∶甲醇＝12∶1)純化殘余物，得到210mg靶化合物(收率66％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.06-2.17(m，1H)，2.33-2.49(m，2H)，2.42(s，3H)，2.54-2.59(m，1H)，3.72(s，3H)，3.92(s，3H)，3.96(s，3H)，4.86-4.93(m，1H)，6.56(s，1H)，7.06(d，J＝10.6Hz，1H)，7.14(t，J＝7.5Hz，1H)，7.24(d，J＝7.7Hz，1H)，7.31(d，J＝10.6Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.58(d，J＝7.3Hz，1H)，7.63(t，J＝8.6Hz，2H)<步驟2>2-亞硝基硫-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 將在步驟1中制備的化合物(40mg，0.078mmol)溶于甲醇中。將1N HCl水溶液(3ml)加入其中。將溶于水(1.5ml)的亞硝酸鈉(NaNO2，6.5mg，0.094mmol)也加入其中，并將化合物在室溫下攪拌1小時。加入碳酸氫鈉結(jié)束反應(yīng)，并用氯仿萃取水層。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(氯仿∶甲醇＝12∶1)純化殘余物，并在甲醇中重結(jié)晶，生成34.1mg靶化合物(收率81％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.07-2.14(m，1H)，2.31-2.37(m，1H)，2.42(s，3H)，2.45-2.48(m，1H)，2.54-2.59(m，1H)，3.72(s，3H)，3.91(s，3H)，3.96(s，3H)，4.88-4.94(m，1H)，6.56(s，1H)，7.06(d，J＝10.6Hz，1H)，7.10(t，J＝7.5Hz，1H)，7.21(t，J＝6.9Hz，1H)，7.31(d，J＝10.6Hz，1H)，7.54(s，1H)，7.64(t，J＝8.6Hz，2H)，7.72(d，J＝7.3Hz，1H)
實施例363-亞硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 將3-氯甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氫苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺(119.8mg，0.228mmol)和碘化鈉(136，5mg，0.911mmol)溶于丙酮(15ml)中，并將混合物在55℃攪拌1天。用氯仿萃取反應(yīng)混合物，并用飽和氯化鈉水溶液洗滌。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物和亞硝酸銀(125.5mg，0.812mmol)溶于乙腈(5ml)中，并將此混合物在室溫下攪拌1天。用氯仿萃取反應(yīng)混合物。通過無水硫酸鈉干燥合并的有機層，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(乙酸乙酯∶氯仿＝4∶1)純化殘余物，生成35.4mg靶化合物(收率32.4％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.35-2.55(m，3H)，2.48(s，3H)，2.62-2.66(m，1H)，3.76(s，3H)，3.84(d，J＝12.8Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.98(s，3H)，4.26(d，J＝12.8Hz，1H)，4.91-4.97(m，1H)，6.58(s，1H)，6.96(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.22(d，J＝10.6Hz，1H)，7.26-7.30(m，2H)，7.44-7.47(m，2H)，7.86(s，1H)，9.30(d，J＝6.8Hz，1H)實施例373-氟-5-亞硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺按類似于在實施例36中所述的過程合成靶化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.04～2.20(m，1H)，2.47(s，3H)，2.52～2.62(m，2H)，2.67～2.72(m，1H)，3.81(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.71(s，2H)，4.93～4.96(m，1H)，6.42(d，J＝6.2，1H)，6.58(s，1H)，7.14～7.21(m，2H)，7.30(d，J＝8.4，1H)，7.42(s，1H)，7.53(d，J＝10.6，1H)實施例383-亞硝基硫甲基N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備<步驟1>甲磺酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-芐酯的制備 將3-羥甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺(252.5mg，0.497mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，并降溫至0℃。將甲磺酰氯(42.4μl，0.547mmol)和三乙胺(0.104ml，0.745mmol)加入其中，并將混合物在室溫下攪拌2小時。用氯仿萃取反應(yīng)混合物。將合并的有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。通過柱色譜法(乙酸乙酯∶氯仿＝3∶2)純化殘余物，生成182.3mg靶化合物(收率62.6％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.14-2.21(m，1H)，2.31-2.50(m，2H)，2.46(s，3H)，2.57-2.62(m，1H)，2.85(s，3H)，3.76(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.87-4.94(m，1H)，5.06(d，J＝12.7Hz，1H)，5.10(d，J＝12.7Hz，1H)，6.57(s，1H)，7.14(d，J＝10.6Hz，1H)，7.28(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.38-7.42(m，2H)，7.56(s，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，1H)，8.24(d，J＝7.7Hz，1H)<步驟2>硫代乙酸-S-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-芐酯的制備
將在步驟1中制備的化合物(182.3mg，0.311mol)溶于丙酮(6ml)中，并降溫至0℃。在0℃向該溶液緩慢加入硫代乙酸鉀(53.2mg，0.467mmol)，并將混合物攪拌1小時。用氯仿萃取反應(yīng)混合物。將合并的有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮，生成173.6mg靶化合物(收率98.6％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.05-2.14(m，1H)，2.30(s，2H)，2.32-2.49(m，2H)，2.44(s，3H)，2.52-2.61(m，1H)，3.74(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.01(d，J＝13.9Hz，1H)，4.05(d，J＝13.9Hz，1H)，4.87-4.93(m，1H)，6.56(s，1H)，7.10(d，J＝10.3Hz，1H)，7.21(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.32-7.36(m，2H)，7.49(s，1H)，7.64-7.71(m，3H)<步驟3>3-巰基甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 將在步驟2中制備的化合物(165.2mg，0.292mol)溶于甲醇(6ml)中，并降溫至0℃。在0℃，向其中緩慢加入硫代甲醇鈉(sodium thiomethoxide)(21.5mg，0.307mmol)，并將混合物在室溫下攪拌30分鐘。通過加入0.1N HCl水溶液結(jié)束反應(yīng)。用氯仿萃取反應(yīng)混合物，并用飽和氯化鈉水溶液洗滌。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。通過柱色譜法(乙酸乙酯∶氯仿＝1∶1)純化殘余物，生成182.3mg靶化合物(收率62.6％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.70(t，J＝7.3Hz，1H)，2.12-2.19(m，1H)，2.31-2.50(m，2H)，2.18(s，3H)，2.57-2.61(m，1H)，3.58(d，J＝7.3Hz，1H)，3.74(s，3H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.89-4.95(m，1H)，6.57(s，1H)，7.12(d，J＝10.3Hz，1H)，7.19(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.34(d，J＝7.7Hz，1H)，7.37(d，J＝10.3Hz，1H)，7.55(s，1H)，7.59(d，J＝7.7Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.93(d，J＝7.3Hz，1H)<步驟4>3-亞硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 將在步驟3中制備的化合物(101.2mg，0.193mol)溶于甲醇(3ml)和二甲基甲酰胺(3ml)中，并降溫至0℃。在0℃，將0.1N HCl水溶液(3ml)和亞硝酸鈉(16.0mg)緩慢加入其中，并將混合物在室溫下攪拌2小時。用氯仿萃取反應(yīng)混合物，并用飽和碳酸鈉溶液洗滌。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(乙酸乙酯∶氯仿∶己烷＝3∶2∶1.5)純化殘余物，生成19.5mg靶化合物(收率18.3％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.08-2.16(m，1H)，2.31-2.51(m，2H)，2.45(s，3H)，2.57-2.61(m，1H)，3.57(s，3H)，3.80(s，2H)，3.92(s，3H)，3.97(s，3H)，4.89-4.96(m，1H)-6.57(s，1H)，7.10(d，J＝10.3Hz，1H)，7.25(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.36(d，J＝10.3Hz，1H)，7.38(d，J＝7.7Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.68(d，J＝7.7Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.79(d，J＝7.0Hz，1H)實施例393-氟-5-亞硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺按類似于在實施例38中所述的過程合成實施例39的靶化合物。

1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.30～2.48(m，3H)，2.44(s，3H)，2.56～2.59(m，1H)，3.57(q，J＝13.9，16.5，2H)，3.73(s，3H)，3.91(s，3H)，3.97(s，3H)，4.97～5.03(m，1H)，6.57(s，1H)，7.02(d，J＝8.4，1H)，7.15(d，J＝10.6，1H)，7.39(d，J＝10.2，1H)，7.43(s，1H)，7.64(d，J＝9.1，1H)，7.73(s，1H)，8.96(d，J＝7.3，1H)實施例403-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備<步驟1>3-氟-5-羥甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 將脫乙酰秋水仙堿(150mg，0.42mmol)、3-氟-5-羥甲基-苯甲酸(85mg，0.50mmol)和HOBt(67mg，0.50mmol)溶于二甲基甲酰胺溶液(2ml)中，并降溫至0℃。在0℃，將EDCI(95mg，0.50mmol)緩慢加入其中，并在室溫下攪拌此混合物。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取水層。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。經(jīng)柱色譜法(氯仿∶乙酸乙酯＝2∶1)純化殘余物，生成110mg靶化合物(收率52％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.40-2.58(m，3H)，2.62-2.69(m，1H)，3.64-3.78(m，1H)，3.74(s，3H)，3.92(s，3H)，3.98(s，3H)，4.07(S，3H)，4.23-4.28(m，1H)，4.81-4.88(m，1H)，6.58(s，1H)，6.87(d，J＝9.2Hz，1H)，6.97(d，J＝9.2Hz，1H)，7.03(d，J＝10.4Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.50(d，J＝10.4Hz，1H)，7.96(s，1H)，9.64(d，J＝6.0Hz，1H)<步驟2>3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 按照與在實施例5的步驟2和3中相似的過程，通過使用在步驟1中制備的化合物(90mg，0.18mmol)，獲得30mg靶化合物(收率30％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.38-2.49(m，3H)，2.58-2.59(m，1H)，3.75(s，3H)，3.92(s，3H)，3.98(s，3H)，4.05(S，3H)，4.89-4.93(m，1H)，4.94(d，J＝12.8Hz，1H)，5.10(d，J＝12.8Hz，1H)，6.58(s，1H)，6.96(d，J＝8.4Hz，1H)，7.01(d，J＝10.4Hz，1H)，7.17(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.48(d，J＝10.4Hz，1H)，7.89(s，1H)，9.25(d，J＝6.4Hz，1H)實施例413-硝基氧甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備<步驟1>3-氯甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 將硫代脫羰秋水仙堿(50mg，0.129mmol)和吡啶(0.012ml，0.154mmol)溶于二氯甲烷中，并降溫至0℃。在0℃，向其中緩慢加入3-(氯甲基)苯甲酰氯(0.022ml，0.154mmol)，并在室溫下攪拌此混合物。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取水層。將組合的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。通過柱色譜法(氯仿∶乙酸乙酯＝2∶1)純化殘余物，生成45mg靶化合物(收率67％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.24-2.38(m，2H)，2.44(s，3H)，2.45-2.58(m，1H)，2.61-2.74(m，1H)，3.25(s，3H)，3.72(s，3H)，3.91(s，3H)，3.92(s，3H)，4.54(s，2H)，5.05(br，1H)，6.57(s，1H)，7.06(d，J＝10.0Hz，1H)，7.09(s，1H)，7.22-7.41(m，5H)<步驟2>3-硝基氧甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 按照與實施例25的步驟2相似的過程，通過使用在步驟1中制備的化合物(45mg，0.085mmol)，獲得40mg靶化合物(收率83％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.24-2.38(m，2H)，2.44(s，3H)，2.45-2.58(m，1H)，2.61-2.74(m，1H)，3.24(s，3H)，3.71(s，3H)，3.91(s，3H)，3.92(s，3H)，4.77(br，1H)，5.58(s，2H)，6.85(s，2H)，7.21(d，J＝10.0Hz，1H)，7.29(d，J＝10.4Hz，1H)，7.40-7.53(m，4H)實施例423-氟-N-甲基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備<步驟1>3-氟-5-羥甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 在氮氣氛下，將3-氟-5-羥甲基-苯甲酸(52mg，0.309mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中。在0℃，將氯甲酸乙酯(0.022ml，0.231mmol)和TEA(0.042ml，0.309mmol)緩慢加入其中，并在0℃將混合物攪拌30分鐘。將吡啶(0.012ml，0.154mmol)和硫代脫羰秋水仙堿(60mg，0.154mmol)也加入其中，并將混合物在室溫下攪拌3小時。加入水結(jié)束反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取水層。將合并的有機層通過無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮。通過柱色譜法(氯仿∶乙酸乙酯＝2∶1)純化殘余物，生成30mg靶化合物(收率21％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.76(br，1H)，2.24-2.38(m，2H)，2.44(s，3H)，2.45-2.58(m，1H)，2.61-2.74(m，1H)，3.23(s，3H)，3.72(s，3H)，3.93(s，3H)，3.97(s，3H)，4.65(s，2H)，5.02(br，1H)，6.57(s，1H)，6.92(s，1H)，6.99-7.24(m，4H)，7.34(s，1H)<步驟2>3-氟-N-甲基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺的制備 按照與實施例5的步驟2和3相似的過程，通過使用在步驟1中制備的化合物(55mg，0.101mmol)，獲得20mg靶化合物(收率37％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.22-2.41(m，2H)，2.45(s，3H)，2.45-2.58(m，1H)，2.61-2.74(m，1H)，3.24(s，3H)，3.75(s，3H)，3.91(s，3H)，3.95(s，3H)，5.02(br，1H)，5.39(s，2H)，6.57(s，1H)，7.05-7.24(m，5H)，7.34(s，1H)實施例432-(3-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺的制備<步驟1>(3-氟-5-羥甲基-苯基)-乙酸的制備 將在中間體6的步驟1中制備的化合物(2.5g，13.57mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中。向其中緩慢加入PBr3(1.15ml，12.21mmol)，并將混合物在室溫下攪拌3小時，生成3-溴甲基-5-氟-苯甲酸甲酯(1.6g，收率50％，白色固體)。將3-溴甲基-5-氟-苯甲酸甲酯(1.5g，6.1mmol)、KCN(1.6g，24.4mmol)和18-冠-6(820mg，3.1mmol)溶于乙腈(10ml)中。在室溫下，將反應(yīng)混合物攪拌18小時，生成3-氰甲基-5-氟-苯甲酸甲酯(900mg，收率77％，白色固體)。將3-氰甲基-5-氟-苯甲酸甲酯(900mg，4.65mmol)溶于四氫呋喃(10ml)中。向其中緩慢加入2M硼氫化鋰四氫呋喃(2.3ml，4.6mmol)，并回流混合物，生成(3-氟-5-羥甲基-苯基)-乙腈(430mg，收率56％，白色固體)。將(3-氟-5-羥甲基-苯基)-乙腈(400mg，2.42mmol)和氫氧化鉀(1.34g，23.8mmol)溶于乙醇(10ml)和水(5ml)中。回流反應(yīng)混合物24小時，生成356mg靶化合物(收率80％，白色固體)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)；δ3.62(s，2H)，4.59(s，2H)，6.94(d，J＝9.6Hz，1H)，7.04(d，J＝9.6Hz，1H)，7.08(s，1H)
<步驟2>2-(3-氟-5-羥甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺的制備 按照與實施例40的步驟1相似的過程，通過使用在步驟1中制備的化合物(30mg，0.16mmol)，獲得58mg靶化合物(收率70％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.92-2.01(m，1H)，2.19-2.40(m，2H)，2.41(s，3H)，2.46-2.52(m，1H)，3.46(d，J＝14.0，Hz，1H)，3.52(d，J＝14.0，Hz，1H)，3.63(s，3H)，3.89(s，3H)，3.91(s，3H)，4.64-4.74(m，1H)，4.75(s，2H)，6.53(s，1H)，6.86-6.94(m，3H)，7.07(d，J＝10.8Hz，1H)，7.13(s，1H)，7.30(d，J＝10.8Hz，1H)，7.39(s，1H)<步驟3>甲磺酸3-氟-5-[(7S)-(1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基氨基甲?；?-甲基]-芐酯的制備 按照與實施例38的步驟1相似的過程，通過使用在步驟2中制備的化合物(58mg，0.107mmol)，獲得60mg靶化合物(收率90％，黃色固體)。
<步驟4>2-(3-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺的制備 按照與實施例25的步驟2相似的過程，通過使用在步驟3中制備的化合物(60mg，0.097mmol)，獲得30mg靶化合物(收率83％，黃色固體)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.92-1.98(m，1H)，2.22-2.42(m，2H)，2.46(s，3H)，2.49-2.52(m，1H)，3.50(d，J＝14.0，Hz，1H)，3.65(s，3H)，3.66(d，J＝14.0，Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.93(s，3H)，4.64-4.74(m，1H)，5.37(s，2H)，6.52(s，1H)，6.97(d，J＝8.8Hz，1H)，7.11-7.17(m，3H)，7.35(d，J＝10.8Hz，1H)，7.50(s，1H)，8.04(d，J＝7.2Hz，1H)實施例442-(2-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺按類似于實施例43中所述的過程合成實施例44的化合物，通過如下所述的方法制備中間體。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.89-1.93(m，1H)，2.26-2.29(m，1H)，2.34-2.40(m，1H)，2.43(s，3H)，2.49-2.54(m，1H)，3.61(s，3H)，3.62(d，J＝15.2Hz，1H)，3.72(d，J＝15.2Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.92(s，3H)，4.70-4.75(m，1H)，5.49(s，2H)，6.53(s，1H)，7.06-7.11(m，2H)，7.25-7.31(m，2H)，7.35(t，J＝7.6Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.57(d，J＝7.2Hz，1H)<中間體18>(2-氟-5-羥甲基-苯基)-乙酸的制備 按照與實施例43的步驟1相似的過程，通過使用在中間體5中制備的化合物(2.2g，11.94mmol)，獲得400mg靶化合物(收率90％，白色固體)。
試驗 實施例1對癌細胞系的細胞毒性試驗通過被開發(fā)用于測量藥物的體外抗癌活性的磺酰羅丹明-B(sulforhodamine-B)(SRB)方法(1989，National Cancer Institute(NCI))，測量對A549(Korea ResearchInstitute of Chemical Technology)、SK-OV-3(Korea Research Institute of ChemicalTechnology)、SK-MEL-2(Korea Research Institute of Chemical Technology)、HCT-15(Korea Research Institute of Chemical Technology)和MCF7(Korea Cell Line Bank，Seoul National University School of medicine)細胞的細胞毒性。用0.25％胰蛋白酶-EDTA溶液分離細胞，以5×103～2×104個細胞/孔的濃度制備細胞懸液。然后，按100μl/孔將懸液分配到96孔細胞培養(yǎng)板中，將其在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。在本發(fā)明的實施例中制備的化合物被用作樣品。具體而言，在化合物被用作樣品之前，將其溶于二甲亞砜，并用RPMI 1640培養(yǎng)基稀釋。所用樣品的最終濃度在1μM～0.00001μM之間變化。從96孔細胞培養(yǎng)板移出培養(yǎng)基，然后按100μl/孔，加入稀釋的樣品溶液，之后在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中進一步培養(yǎng)48小時。從加入樣品之刻起收集Tz(零時刻)細胞培養(yǎng)板。培養(yǎng)完成時，從每個孔以及Tz板中移走培養(yǎng)基，然后按100μl/孔加入10％三氯乙酸(TCA)。細胞培養(yǎng)板在4℃被放置1小時，以使細胞固定在細胞培養(yǎng)板的底部。在細胞被完全固定之后，用水洗滌板5-6次，以完全去除殘留的三氯乙酸溶液，并在室溫下將水分完全干燥。將0.4％磺酰羅丹明-B溶于1％乙酸溶液中，制備染色溶液。用染料將細胞染色30分鐘，該染料以100μl的量加入到完全干燥的板的每個孔中。然后，用1％乙酸溶液洗滌板5-6次，以去除殘留的未與細胞結(jié)合的磺酰羅丹明-B。之后，在室溫下干燥細胞培養(yǎng)板。按100μl孔將10mM Tris溶液加入其中，以溶解染料，并用微平板讀數(shù)器測定在520nm處的光密度(OD)。
樣品對癌細胞的ED50(抑制癌細胞生長達50％時的濃度，50％有效劑量，nM/ml)被計算如下。帶著樣品開始進行培養(yǎng)之際的OD值被定為Tz(零時刻)值。在沒有樣品的情況下被培養(yǎng)的孔的OD值被定為對照值(C)。用樣品進行預處理的孔的OD值被定為試驗值(T)。在計算Tz，C和T之后，通過下面的<數(shù)學公式1>測定樣品的細胞毒性。
<數(shù)學公式1>
T≤Tz，(T-Tz)/(C-Tz)×100T＞Tz，(T-Tz)/Tz×100基于根據(jù)<數(shù)學公式1>獲得的細胞毒性程度，通過使用lotus程序的回歸分析計算ED50，其為可抑制癌細胞生長達50％的程度時的濃度。
通過與如上所述相同的方法，也計算出紫杉醇(paclitaxel)、阿霉素(doxorubicin)和秋水仙堿的各自ED50，它們被用作對照。
結(jié)果如表1所示。
<表1>
對癌細胞系的細胞毒性(NT未進行試驗)


如表1所示，本發(fā)明的三環(huán)衍生物對癌細胞系顯示出很強的細胞毒性。
試驗 實施例2本發(fā)明的三環(huán)衍生物對腫瘤生長的抑制效果為了調(diào)查本發(fā)明的三環(huán)衍生物對腫瘤生長的抑制效果，進行了下面的試驗。
試驗樣品一直被儲存在冰箱中。不同劑量的化合物被施于試驗動物；在實施例8中制備的化合物的劑量為10mg/kg，在實施例12中制備的化合物的劑量分別是1、3、10mg/kg，陽性對照的劑量為2.5mg/kg(紫杉醇(Taxol))和2mg/kg(阿霉素(Adriamycin))。將實施例12的化合物溶于4％吐溫80(tween 80)中，將陽性對照紫杉醇溶于5％乙醇+25％cremophor+75％PBS的混合溶劑中。所制備的樣品要經(jīng)歷沉淀過程，因此在給藥之前要適當?shù)剡M行探頭超聲處理(tip sonication)，以使樣品分散充分。
使用7周齡雌性S.P.F.BALB/c裸鼠作試驗動物，其由日本Charles River Co.提供。在試驗之前，試驗動物被置于高效濾網(wǎng)(Hepa-filter)室中適應(yīng)一周。在該實驗室中，溫度為21±2℃，濕度為55±5％，并自動重復12-小時光和暗循環(huán)。用放射性射線滅菌固體飼料(CheilJedang)，通過高壓滅菌滅菌飲用水。飼料和水由動物任意取食。在此試驗中被使用的癌細胞系是NCI-H460(人肺腫瘤細胞系)，由韓國生命科學與生物技術(shù)研究所(Korea Research Institute of Bioscience andBiotechnology)提供。
將儲存在液氮中的腫瘤細胞系解凍，并于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)必需的時間。培養(yǎng)結(jié)束時，回收所有細胞，并使用PBS將培養(yǎng)液的細胞濃度調(diào)整為3×107個細胞/ml。以每只小鼠0.3ml，將調(diào)整的細胞培養(yǎng)液皮下注射入位于右肩胛帶和胸壁之間的腋窩中。從移植后第二天起，用樣品溶液，以0.2ml/20g重量，對NCI-H460異種移植裸鼠每天進行腹膜內(nèi)給藥，一天一次。
移植腫瘤細胞之后，通過使用游標卡尺，以三維測量每個個體內(nèi)的腫瘤體積，如下面的<數(shù)學公式2>所示。
<數(shù)學公式2>
腫瘤體積＝(長×寬×高)/2測量動物的體重變化，一周三次。殺掉每只異種移植的裸鼠，以分離腫瘤，然后稱重腫瘤。
通過t-檢驗，比較試驗組與對照組的所有測試結(jié)果，觀察兩組之間是否存在任何顯著差別。
腫瘤的體積變化和重量被顯示表2和圖1、3和5中，小鼠的體重變化被顯示在表3、圖2和圖4中。
<表2>

※顯著性檢驗(t-檢驗)*(p＜0.05)，**(p＜0.01)，***(p＜0.001)，V.C-14％吐溫80，V.C-25％乙醇+25％cremophor+75％PBS
<表3>

※顯著性檢驗(t-檢驗)*(p＜0.05)，**(p＜0.01)，***(p＜0.001)，V.C-14％吐溫80，V.C-25％乙醇+25％cremophor+75％PBS如表2和圖1、3和5所示，當NCI-H460異種移植的BALB/c裸鼠被施予本發(fā)明的三環(huán)衍生物(在實施例8和12中制備)時，與僅被施予溶劑(V.C-1、V.C-2)，或僅被施予陽性對照(紫杉醇、阿霉素)時比較，其腫瘤的大小和重量得以顯著減少。具體而言，在實施例12的化合物的情況中，在10mg/kg的劑量下，腫瘤的體積和重量比1mg/kg的劑量時減少很多。在實施例8的化合物的情況中，當其被施予10mg/kg的時候，腫瘤體積的抑制率顯示為85％。因此，腫瘤體積和重量的減少率可以與本發(fā)明三環(huán)衍生物的劑量成比例增長。
如表3以及圖2和圖4所示，當NCI-H460異種移植的BALB/c裸鼠被施予本發(fā)明的三環(huán)衍生物(在實施例8和12中制備)時，與僅被施予溶劑(V.C-1、V.C-2)，或被施予陽性對照(紫杉醇、阿霉素)時比較，其體重減少大約10％。
因此，本發(fā)明的三環(huán)衍生物使腫瘤的體積和重量隨劑量而變小和變輕，而且也顯示出極佳的抗癌效果。因此，本發(fā)明的三環(huán)衍生物可被有效用作抗癌劑和抗增殖劑。
試驗 實施例3本發(fā)明的三環(huán)衍生物對HUVEC細胞的毛細管樣管形成的抑制效果(毛細管樣管形成試驗(Capillary-like tube formation assay))在本試驗中使用的Matrigel是BioCoat的產(chǎn)品。使用前在冰箱中解凍Matrigel24小時。將解凍matrigel、96孔細胞培養(yǎng)板和黃色吸頭(tip)置于冰上。然后，以40μl將matrigel分配至細胞培養(yǎng)板的每個孔中。在37℃培養(yǎng)箱中，細胞培養(yǎng)板進行30分鐘的聚合。在無血清培養(yǎng)基中，細胞培養(yǎng)板各個孔被接種180μl HUVEC細胞溶液(2×104個細胞/ml)以及20μl的實施例12化合物(0.3、1、3、10和30μg/ml)，之后進一步培養(yǎng)24小時。
在顯微鏡下觀察管結(jié)構(gòu)的形成，以研究血管生成的抑制活性。
以夫馬菌素(Fumagilin)和阿霉素(doxorubicin)作陽性對照。
結(jié)果示于圖6中。
如圖6所示，在高于0.3μg/ml的劑量時，本發(fā)明的三環(huán)衍生物(在實施例12中制備)具有血管生成抑制活性，其與劑量為10μg/ml的夫馬菌素陽性對照一樣具有良好的效果。進一步地，本發(fā)明的三環(huán)衍生物(在實施例12中制備)在劑量超過10μg/ml時，完全抑制了血管生成。
因此，本發(fā)明的三環(huán)衍生物可被有效地用作血管生成抑制劑。
試驗 實施例4急性毒性試驗(Acute toxicity test)重量為25-35g(SPF，SLC Co.，日本)的5周齡ICR小鼠被用作試驗動物。對于每一種化合物的試驗，提供一對雌性和雄性小鼠。安排T2、T3、T4和T5組(每組10只動物)用于實施例12中制備的化合物的急性毒性試驗。將實施例12的化合物溶于溶劑[5％DMSO；20％吐溫80；75％PBS(-)]中，其被注射入小鼠的腹腔(劑量如表4所示)，然后觀察7天。對照組(T1)僅被施予溶劑，而沒有實施例12的化合物。結(jié)果被顯示在表4中。
為了比較，按照與上面所述相同的方法，將秋水仙堿注射入試驗動物體內(nèi)。用秋水仙堿處理的組由6只鼠組成。試驗結(jié)果被顯示在表5中。
由Bristol Myers Sqibb Co.生產(chǎn)的紫杉醇也被用于比較，按照與上面所述相同的方法進行注射和急性毒性試驗。結(jié)果被顯示在表6中。
<表4>
在實施例12中制備的化合物的急性毒性試驗

<表5>
秋水仙堿的急性毒性試驗

<表6>
紫杉醇的急性毒性試驗

如表4、5和6所示，天然秋水仙堿對小鼠的毒性經(jīng)證實為LD50＝2mg/kg，這與較早的報道值LD50＝1.6mg/kg[Medicinal Research Reviews，Vol.8，No.1，77-94(1988)]非常相似。紫杉醇注射劑，paclitaxel的毒性為LD50＝9-13mg/kg(靜脈給藥)。然而，本發(fā)明實施例12的化合物的毒性為LD50＝60mg/kg，其比秋水仙堿的毒性弱30倍，也比紫杉醇注射劑的毒性弱。因此，本發(fā)明的化合物被證明對正常細胞具有比秋水仙堿或紫杉醇注射劑低的毒性。
工業(yè)實用性本發(fā)明的三環(huán)衍生物對癌細胞系具有很強的細胞毒性，而對動物本身具有比秋水仙堿或紫杉醇注射劑低的毒性。本發(fā)明的三環(huán)衍生物進一步減少腫瘤的體積和重量，并極好地抑制HUVEC細胞的血管生成。因此，所述衍生物可有效地被用作抗癌劑、抗增殖劑以及血管生成抑制劑。另外，本發(fā)明的三環(huán)衍生物可以容易地被獲得，而且由于其具有的水可溶性，它們可以容易地被制成口服或注射用制劑。
權(quán)利要求
1.三環(huán)衍生物，或其藥學上可接受的鹽，所述三環(huán)衍生物由如下<式1>所示，<式1> (其中，(1)R1為-T1-B1；其中T1為-X1-、-X1-C(X2)-、-N(R5)-、-N(R5)C(X2)-、-N(R5)S(O)n1-、-N(R5)C(O)-X1-或-N(R5)C(X1)NH-，其中X1和X2各自為O或S，R5各自為H或C1～C5烷基，n1是1-2的整數(shù)；和B1選自下列(a)～(j)， -Z1-R7(c)-Z1-T2-B2(h) 其中，R6和R8各自為H、鹵素、羥基、C1～C3烷氧基、氨基、硝基、氰基或C1～C3低級烷基；R7和R9各自獨立地為鹵素、羥基、巰基、-ONO、-ONO2或SNO，其中R7和R9為相同或者不同； 是含有1～2個雜原子的C5～C6元飽和或不飽和雜環(huán)，其中，雜原子選自O(shè)、S和N，優(yōu)選為 更優(yōu)選為，在2位和6位或2位和5位被取代的C1(吡啶基)、在2位和5位或2位和4位被取代的C7(吡咯基)、C11(噻吩基)或C12(呋喃基)；Z1為C1～C10直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選為C2～C5直鏈或支鏈烷基或環(huán)烷基，其具有取代基；Z2和Z3各自獨立地為H或甲基，其中當Z2為甲基時Z3是H，當Z3為甲基時Z2是H；T2是-X1-或-X1-C(X2)-，其中X1和X2各自獨立地為O或S；B2選自所述(a)、(b)、(c)、(d)或(e)；n2為0～3的整數(shù)；n3為0～5的整數(shù)，n4為1～5的整數(shù)，n5和n6各自獨立地為1～6的整數(shù)；(2)R2和R3各自獨立地為H、-PO3H2、膦酸酯基團、硫酸酯基團、C3～C7環(huán)烷基、C2～C7鏈烯基、C2～C7炔基、C1～C7烷酰基、C1～C7直鏈或支鏈烷基或糖，其中糖為單糖，例如葡糖醛酸基、葡糖基或半乳糖基；(3)R4為OCH3、SCH3或NR10R11，其中R10和R11每個各自獨立地為H或C1-5烷基；(4)X為O或S。)
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽，其中所述<式1>的化合物具有如下特征(1)R1為-T1-B1；其中T1為-N(R5)C(X2)-、-N(R5)C(O)-X1-或-N(R5)C(X1)NH-，其中X1和X2各自為O，R5各自為H或C1～C5烷基；和B1選自下列(a)～(j)， -Z1-R7(c)-Z1-T2-B2(h) 其中，R6和R8各自為H、鹵素、羥基、C1～C3烷氧基、氨基、硝基、氰基或C1～C3低級烷基；R7和R9各自獨立為鹵素、羥基、巰基(硫醇)、-ONO、-ONO2或SNO，其中R7和R9為相同或不同； 為含有1～2個雜原子的C5～C6元飽和或不飽和雜環(huán)，其中雜原子選自O(shè)、S和N，優(yōu)選地為 更優(yōu)選地，為2位和6位或2位和5位取代的C1(吡啶基)、2位和5位或者2位和4位取代的C7(吡咯基)、C11(噻吩基)或C12(呋喃基)，取代基的鍵接可以在對稱或不對稱位置；Z1為C1～C10直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選C2～C5直鏈或支鏈烷基或環(huán)烷基，其具有取代基；Z2和Z3各自獨立為H或甲基，其中當Z2為甲基時Z3為H，當Z3為甲基時Z2為H；T2是-X1-或-X1-C(X2)-，其中X1和X2各自為O或S；B2選自所述(a)、(b)、(c)、(d)或(e)；n2為0～3的整數(shù)，n3為0～5的整數(shù)，n4為1～3的整數(shù)，n5和n6各自獨立為1～3的整數(shù)；(2)R2和R3各自獨立為C3～C7環(huán)烷基或C1～C7烷基；(3)R4為SCH3或OCH3；(4)X為O或S。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽，其中所述三環(huán)衍生物包括(1)6-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-煙酰胺；(2)5-硝基氧甲基-呋喃-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧-10-甲硫基-9氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；(3)N-[(7S)-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；(4)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；(5)6-硝基氧甲基-吡啶-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；(6)5-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；(7)N-[(7S)-3-環(huán)戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；(8)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；(9)2-氟-N-[(7S)-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；(10)2-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(11)N-[(7S)-3-環(huán)戊基氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-2-氟-3-硝基氧甲基-苯甲酰胺；(12)3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(13)N-[(7S)-3-乙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；(14)3-氟-N-[(7S)-3-異丙氧基-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；(15)N-[(7S)-3-環(huán)戊基氧-1，2-二甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-3-氟-5-硝基氧甲基-苯甲酰胺；(16)4-氟-3-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(17)2-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(18)3-羥基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(19)3，5-二-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(20)2-羥基-4-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(21)4-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；(22)3-硝基氧甲基-噻吩-2-羧酸[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-酰胺；(23)2-(3-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺；(24)3-(2-硝基氧-乙基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(25)3-硝基氧苯甲酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；(26)4-硝基氧丁酸-5-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；(27)3-硝基氧甲基-苯甲酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-吡啶-2-基-甲酯；(28)4-硝基氧丁酸-6-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-吡啶-2-基-甲酯；(29)3-硝基氧甲基-苯甲酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；(30)4-硝基氧丁酸-2-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-苯酯；(31)3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-苯酯；(32)4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-苯酯；(33)3-硝基氧甲基-苯甲酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲?；鵠-芐基酯；(34)4-硝基氧丁酸-3-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基-氨基甲酰基]-芐基酯；(35)2-亞硝基硫-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(36)3-亞硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(37)3-氟-5-亞硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(38)3-亞硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(39)3-氟-5-亞硝基硫甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(40)3-氟-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3，10-四甲氧基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(41)3-硝基氧甲基-N-甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(42)3-氟-N-甲基-5-硝基氧甲基-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-苯甲酰胺；(43)2-(3-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺；或(44)2-(2-氟-5-硝基氧甲基-苯基)-N-[(7S)-1，2，3-三甲氧基-10-甲硫基-9-氧代-5，6，7，9-四氫-苯并[a]庚搭烯-7-基]-乙酰胺。
4.如<方案1>所示的用于制備三環(huán)衍生物的方法，其包括下列步驟(1)進行式(III)的化合物與式(IV)的化合物或式(VI)的化合物的反應(yīng)，生成式(V)的化合物或式(VII)的化合物，或?qū)⑺傻氖?VII)的化合物與鹵素化合物反應(yīng)，生成式(V)的化合物(步驟1)；和(2)將已制備的式(V)或式(VII)的化合物進行硝化或亞硝化，以生成式(IIa)的化合物(步驟2)，<方案1> (其中，D是 并且R2、R3、R4和X與<式1>中的定義相同；R5是H或低分子量烷基；X1是O或S；Hal1和Hal2是鹵素；通式(IV)和(IX)的Hal1和Hal2各自為相同或不同的鹵素，例如F、Cl、Br或I；Y分別表示通式(a′)、(b′)、(c′)、(d′)和(e′)， 其中， R6、R8、R9、Z1、Z2、Z3、n2、n3、n4、n5和n6與在<式1>中的定義相同。)
5.抗癌劑或抗增殖劑，其含有權(quán)利要求1-3中的任何一項所述的三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽作為有效成分。
6.血管生成抑制劑，其含有權(quán)利要求1-3中的任何一項所述的三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽作為有效成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及三環(huán)衍生物或其藥學上可接受的鹽，它們的制備及含有它們的藥物組合物。更具體而言，本發(fā)明涉及三環(huán)衍生物，如秋水仙堿衍生物，其藥學上可接受的鹽，它們的制備及含有它們的藥物組合物。本發(fā)明的三環(huán)衍生物對癌細胞系顯示出非常強的細胞毒性，但經(jīng)動物毒性試驗證實，其比秋水仙堿或紫杉醇的毒性低得多。本發(fā)明的三環(huán)衍生物也減少腫瘤的體積和重量，而且對HUVEC細胞具有強的血管生成抑制活性。因此，本發(fā)明的三環(huán)衍生物可有效地用作抗癌劑、抗增殖劑及血管生成抑制劑。
文檔編號C07C381/00GK1826316SQ200480021267
公開日2006年8月30日 申請日期2004年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月25日
發(fā)明者金明華, 千廣宇, 崔裁源, 趙寶瑛, 樸祥佑, 金光希, 吳炳奎, 崔鐘熙 申請人:第一藥品(株)