專利名稱：治療心血管疾病的供氧化氮衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及合成和使用適用于加到食品、藥品、保健品(nutraceuticals)的黃酮類化合物(flavonoids)及其衍生物的領(lǐng)域，和用此類物質(zhì)治療有需要個體的方法。
背景技術(shù)：
心血管疾病是用于說明一類心臟和血管疾病的通用術(shù)語，包括高血壓、冠心病、腦血管疾病、周圍血管疾病、心力衰竭、風濕性心臟病、先天性心臟病和心肌病。心血管疾病的主要原因是動脈粥樣硬化、動脈壁上的脂質(zhì)沉淀蓄積。高血液膽固醇水平與發(fā)生動脈粥樣硬化的風險密切相關(guān)，因此在開發(fā)降血液膽固醇的療法中投入巨大的醫(yī)學研究。
動脈粥樣硬化與內(nèi)皮功能障礙有關(guān)，內(nèi)皮功能障礙是其中血管系統(tǒng)內(nèi)層正常功能受損的疾病，除了是多種其它心血管疾病，例如心絞痛、心肌梗塞和腦血管疾病的主要風險因素外，它還是動脈粥樣硬化的發(fā)病機制。內(nèi)皮功能障礙的特征包括氧化性血管應激反應提高和血管收縮，以及高血液膽固醇水平，它們均促使相互加速發(fā)生心血管疾病。為最有效阻止疾病發(fā)生，需要改進抗多種心血管疾病病因風險因素的治療策略。
膽固醇代謝由于其不溶性，膽固醇在血中通過稱為脂蛋白的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的復合物轉(zhuǎn)運。據(jù)認為，低密度脂蛋白(LDL)負責將膽固醇從肝臟轉(zhuǎn)運至身體的其它組織，因而變?yōu)樗追Q的“壞膽固醇”。LDL顆粒由中密度脂蛋白(IDL)轉(zhuǎn)化而來，中密度脂蛋白本身通過從極低密度脂蛋白(VLDL)中除去甘油三酸酯而生成。VLDL在肝臟中由甘油三酸酯和幾種載脂蛋白合成，然后由此它們直接分泌到血流中。
據(jù)認為，高密度脂蛋白(HDL)是將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運到肝臟的主要載體分子，它在肝臟中發(fā)生分解代謝，然后在稱為膽固醇逆轉(zhuǎn)運(RCT)的過程中消除，因而HDL獲得“好膽固醇”的綽號。在肝臟發(fā)生的消除過程中，膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸，然后排出體外。
目前治療高脂血癥的方法目前批準的降膽固醇的藥物通過攻擊正常膽固醇代謝途徑上的多個不同點提供治療益處。膽汁酸結(jié)合樹脂，例如考來烯胺吸附到膽汁酸，排出體外，導致膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸增加，結(jié)果降低血液膽固醇。樹脂僅降低最大20％血清膽固醇，引起胃腸副作用，并且不能與其它藥物同時給藥，因為樹脂會結(jié)合，導致此類其它藥物排泄。
煙酸抑制脂蛋白合成，減少制備LDL所需要的VLDL顆粒生成。當需要高濃度給藥以增加HDL水平時，發(fā)生嚴重的副作用，例如潮紅。
據(jù)認為，貝特類藥物(Fibrates)，例如氯貝特和非諾貝特激活屬于核激素受體的過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)家族的轉(zhuǎn)錄因子。這些轉(zhuǎn)錄因子上調(diào)涉及HDL生成的基因，下調(diào)涉及LDL生成的基因。貝特類藥物用于治療高脂血癥，因為它們通過降低VLDL部分減少血清甘油三酸酯。但是，由于其在患者中脂質(zhì)反應的異種性質(zhì)和缺乏在冠心病患者中觀測到的效力，它們在美國尚未批準為高膽固醇血癥的治療藥物。貝特類藥物的使用也與嚴重的副作用有關(guān)，例如胃腸癌、膽囊疾病和高非冠心病死亡發(fā)生率。
他汀類藥物(Statins)，又稱為HMG CoA還原酶抑制劑通過阻斷肝膽固醇合成限速酶減少VLDL、LDL和IDL膽固醇。他汀類藥物僅少量增加HDL水平，且許多肝和腎功能障礙副作用與使用這些藥物有關(guān)。
依澤替米貝是一類新心血管治療藥物中的第一個批準的藥物，它通過抑制腸中膽固醇攝取起作用。依澤替米貝降低LDL，但基本上不增加HDL水平，不涉及身體中合成的膽固醇，也不涉及在血流中循環(huán)或存在于動脈粥樣硬化斑塊的膽固醇。還發(fā)現(xiàn)影響膽固醇吸收的其它化合物，包括膽汁酸結(jié)合劑考來烯胺和植物甾醇。
盡管已開發(fā)出這些治療方法，但在增加血液HDL水平方面幾乎沒有進展，目前批準的所有藥物的療效受到副作用和效力的限制。因此，需要改進治療方法以安全地提高HDL，因而增加膽固醇逆轉(zhuǎn)運的速率，以降低血液膽固醇的水平。
內(nèi)皮功能障礙和動脈粥樣硬化內(nèi)皮功能受損發(fā)生在動脈粥樣硬化發(fā)生的早期，實際上發(fā)生在檢測到脂質(zhì)沉淀前。內(nèi)皮功能障礙的特征癥狀在于血管收縮，并導致高血壓，它是其它心血管疾病，例如中風和心肌梗塞的熟知風險因素。研究發(fā)現(xiàn)動脈粥樣硬化患者的內(nèi)皮功能降低與氧化氮(NO)的生物利用度減少有關(guān)，氧化氮是誘導血管舒張的信號分子。
NO的生物利用度減少還激活在動脈粥樣硬化發(fā)病中起作用的其它機制。例如，熟知NO抑制以動脈粥樣硬化為特征的脂質(zhì)斑塊發(fā)展必要步驟的血小板凝集。NO也是抑制白細胞粘著的重要內(nèi)源性介質(zhì)，白細胞粘著是動脈粥樣硬化發(fā)展的主要步驟，并可能是高脂血癥患者血管氧化性應激反應增加的結(jié)果。粘著白細胞還通過釋放大量活性氧類物質(zhì)增加氧化劑應激反應。
血管氧化性應激反應增加和高膽固醇血癥被分別鑒定為造成NO生物利用度減少的原因。氧化增加還導致動脈粥樣硬化損害形成的另一個誘導物，即自由基介導的脂質(zhì)過氧化。總之，將會出現(xiàn)正反饋環(huán)，其中這三種主要因素高膽固醇血癥、血管氧化性應激反應和NO生物利用度減少中的每一種增加其它因素的程度和病理嚴重性。
用于動脈粥樣硬化-內(nèi)皮功能障礙的氧化氮療法使用提供NO的已知化合物的治療模式已用于臨床，試圖打破動脈粥樣硬化-內(nèi)皮功能障礙循環(huán)，但未獲成功。已證實供NO藥物釋放的外源性NO不僅生成NO，而且生成為活性氧化劑的過亞硝酸陰離子，它進一步增加氧化性應激反應。通過NO供體產(chǎn)生的過亞硝酸鹽和由氧化性應激反應增加導致的隨后下調(diào)對NO的反應，可能是在用有機硝酸酯長期治療患者中產(chǎn)生良好耐受性記錄的基礎(chǔ)。據(jù)認為，供NO藥物在它們釋放NO前還需要通過硫醇中間體過渡，硫醇的生物利用度在此類氧化性應激反應條件下顯著減少。
抗氧化劑/氧化氮聯(lián)合療法在試圖減輕供NO藥物造成的血管氧化性應激反應惡化，聯(lián)合提供給患者抗氧化劑和NO供體。某些研究證明抗氧化劑和NO供體聯(lián)合顯著增加高膽固醇血癥患者的內(nèi)皮依賴性血管舒張。
但是，這些結(jié)果受到用該治療方法未發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮依賴性血管舒張改善的其他人的質(zhì)疑，可能由于難以達到足夠的胞內(nèi)劑量所致，和NO供體治療遠未與任何延遲動脈粥樣硬化發(fā)展或活動動脈粥樣硬化患者的壽命增加相關(guān)的事實。另外，NO供體和NO供體/抗氧化劑聯(lián)合療法均不直接針對動脈粥樣硬化-內(nèi)皮功能障礙循環(huán)的高膽固醇血癥方面。
供NO和抗氧化劑與治療基于動脈粥樣硬化的高膽固醇血癥的現(xiàn)有療法聯(lián)合也不是很理想的方法，因為目前批準的藥物不能有效地利用HDL增加將膽固醇有效地轉(zhuǎn)運出身體。
但是，人們可能假設(shè)優(yōu)選的抗氧化劑和/或NO供體組合會確?？寡趸瘎┖蚇O供體在身體中在相同時間存在于相同位置，以便使抗氧化劑最有效地抵消NO潛在的氧化性副作用。用不同釋放速率和生物利用度的幾種不同藥物組合滿足該需求的問題在于很可能由于NO一旦從供體分子中釋放，其在細胞環(huán)境中的半衰期短并加劇。
1，2-二苯乙烯(stilbenes)、多元酚和黃酮類化合物抗氧化劑可通過正常細胞呼吸產(chǎn)生的活性氧類物質(zhì)(ROS)是身體中氧化性損傷的主要原因。最有效抗ROS的方法之一是通過提供與ROS結(jié)合的抗氧化劑化合物“清除”活性基團，從而防止它們與細胞中的關(guān)鍵蛋白和DNA不適當?shù)慕Y(jié)合。能消除ROS的非常有效的抗氧化劑化合物通常含至少一種酚環(huán)結(jié)構(gòu)。酚環(huán)是活性結(jié)構(gòu)，ROS和酚環(huán)可形成共價鍵，因而它消除ROS的強氧化活性。1，2-二苯乙烯、多元酚和黃酮類化合物都含有至少兩個酚環(huán)結(jié)構(gòu)，因而使它們成為潛在有效的抗氧化劑。
白藜蘆醇(resveratrol)、其它1，2-二苯乙烯和多元酚以及黃酮類化合物促載脂蛋白A1劑除它們的抗氧化劑活性外，1，2-二苯乙烯、多元酚和黃酮類化合物還具有用于治療高膽固醇血癥的活性。例如，有人提出在某些植物中發(fā)現(xiàn)的天然多元酚，即一種熟知的1，2-二苯乙烯，白藜蘆醇(3，4′，5-三羥基反式1，2-二苯乙烯)是稱為“法國矛盾(French Paradox)”的流行病學觀察的基礎(chǔ)。該矛盾是指不考慮可比較的高脂肪飲食，觀察到法國人口患心血管疾病的機率是北美人口的1/3。與北美人口消耗的紅酒相比，法國矛盾與法國人口消耗大量紅酒有關(guān)。白藜蘆醇在紅葡萄皮中很豐富，因此發(fā)現(xiàn)它在紅酒中的量顯著，而在白酒或其它酒精飲料中幾乎不存在。
白藜蘆醇減少心血管疾病發(fā)生機率的機制仍是爭論想當多的題目，有幾個競爭的假設(shè)。已證實白藜蘆醇是有效的抗氧化劑，它表明導致較低LDL顆粒過氧化水平，和隨后抑制動脈粥樣硬化形成。白藜蘆醇還推斷為白細胞粘附和血小板凝集的抑制劑。此外，由于所述它調(diào)節(jié)P21和p53活性水平的能力，正在研究白藜蘆醇作為潛在抗癌治療藥物的可能性。
白藜蘆醇已鑒定為抗炎藥物，提出的機理包括抑制環(huán)加氧酶-1酶(參見美國專利6,541,045；Jayatilake等J Nat Prod.1993年10月；56(10)1805-10；美國專利6,414,037)和抑制蛋白激酶(美國專利申請0030171429)。因此，白藜蘆醇可能具有作為鎮(zhèn)痛劑、解熱藥治療藥使用治療關(guān)節(jié)炎、哮喘病、銀屑病、腸胃病、眼病、肺炎性疾病、癌癥或治療與血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂和細菌、真菌和病毒感染有關(guān)炎癥的潛力。
近年來，將白藜蘆醇描述為激活sirtuin的化合物，提示通過直接與SirT1相互作用增長壽命，導致下調(diào)p53。也已知白藜蘆醇拮抗芳烴受體，興奮雌激素受體，和描述為通過激活ERK 1/2途徑和通過增加轉(zhuǎn)錄因子egr-1活性介導活性。
更近年來，我們證實白藜蘆醇具有增加載脂蛋白A1轉(zhuǎn)錄的能力，推斷通過在ApoA-1基因的啟動子區(qū)域中的核苷酸序列S位點介導(PCT/CA 03/01220)。
將在S位點中發(fā)現(xiàn)的序列AGCCCCCGC描述為“Egr-1反應元件”共有序列。該基元包含在人APO AI啟動子的跨越-196至-174核苷酸中(Kilbourne等1995，JBC，270(12)7004-10)。不受任何具體理論約束，提出發(fā)現(xiàn)包含在S位點的該AGCCCCCGC元件是白藜蘆醇通過其介導其活性的序列，但這不排除其它潛在需要的元件。
據(jù)認為，當與異源啟動子進行連接以調(diào)節(jié)報道基因表達時，包含S位點的核苷酸序列或AGCCCCCGC元件的約任何8個相鄰堿基起增強子元件作用。
1，2-二苯乙烯、黃酮類化合物和其它多元酚治療應用的缺點不幸地是，作為治療藥物使用1，2-二苯乙烯例如白藜蘆醇和其它多元酚以及黃酮類化合物可能有問題。
每日不能大量消費最豐富和可供消費者利用的白藜蘆醇資源，即紅酒，因為過量酒精消耗的有害作用有許多記載。就是說，不存在酒精時，白藜蘆醇的作用可能更好或更安全。
可制備許多具有潛在有益品質(zhì)的1，2-二苯乙烯、多元酚和黃酮類化合物，它們不能天然合成，且尚未描述或制備以供測試。在人臨床研究測試前，必須在實驗室制備此類化合物，在合適的體外和體內(nèi)測定中測試以證明有益治療活性。
已知許多生物來源的1，2-二苯乙烯、多元酚和黃酮類化合物，因為它們通常通過植物合成。已測試過許多這些化合物的潛在有益特性，例如它們已知的在體外抗氧化能力、推斷的它們抗癌效力和它們對心血管疾病的表觀有益作用。雖然對此類化合物作過一些人研究，但是結(jié)果很不明確，而且有時還是矛盾的。例如，人臨床研究的發(fā)現(xiàn)還必須證明對主要臨床終點有益的明確證據(jù)，例如動脈粥樣硬化斑塊大小或減少例如心臟病發(fā)作的心血管事件。在某些動物研究中發(fā)現(xiàn)的情形中，用例如兔或大鼠的研究與人研究結(jié)果無關(guān)聯(lián)。例如，雖然在人研究中觀察到給予柚苷配基(作為給予柑桔(Citrus)汁中發(fā)現(xiàn)的許多黃酮類化合物組分的一個實例)增加HDL，但對LDL或甘油三酸酯無影響，但發(fā)現(xiàn)當給予兔柚苷配基時，減少LDL，但對HDL無影響。
另外，至今沒有臨床研究描述用于治療人心血管疾病的黃酮類化合物例如柚苷配基或1，2-二苯乙烯例如白藜蘆醇或其它多元酚的合適劑量。
具有保護基團的化合物可經(jīng)歷更長的血清半衰期、增加效力、減少毒性和提高治療效果作為治療藥物給予有需要個體的化合物通常在排泄前在身體中代謝為多種代謝物。此類代謝物通常在毒性、效力和駐留在血清中的時間方面與母體化合物不同。對于許多化合物，代謝物不如母體化合物有效，而且毒性可能更大。
在代謝外源給予的治療化合物中，可能發(fā)生多種不同的變化，例如加入各種化學部分或除去關(guān)鍵基團。發(fā)生在體內(nèi)的一個代謝反應是除去羥基。從具有黃酮類化合物、1，2-二苯乙烯和其它多元酚化合物、包括本發(fā)明化合物的供氧化氮衍生物的母核結(jié)構(gòu)的化合物中除去羥基，可顯著減少這些化合物對膽固醇代謝的正影響的能力，因為前述羥基是此類分子的活性部位的主要部分。因此，如果利用某些保護羥基以降低代謝速率從而增加化合物駐留在身體中的時間的機理，有利于改善給予本發(fā)明化合物的有益作用。
常用于實驗室化學反應的一種保護機理是使用保護基團，它與大分子的容易修飾的不穩(wěn)定化學基團連接，以便防止不穩(wěn)定基團變性或失去?？蓪⒈Ｗo基團以后除去以恢復原始分子，不改變整個分子中的任何共價鍵?？蓪︻A定給予患者的化合物使用類似的保護形式，其中已知身體中很可能發(fā)生重新組成活性分子的反應。可控制保護基團從分子中釋放的速度，以影響藥物的釋放速度。本發(fā)明的目的是提供在體內(nèi)半衰期延長和/或延遲排泄的有效化合物。
存在改善心血管疾病療法的需要鑒于以上所述，很明顯，需要開發(fā)可安全和有效地降低血液膽固醇，同時減少內(nèi)皮功能障礙和減少血管氧化性應激反應的改進療法和化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個方面是提供各類新化合物，這些新化合物具有同時供給氧化氮并隨清除自由基的抗氧化劑分子釋放而共同定位(co-localized)的能力；以及用它們治療的方法。這些新化合物同時具有誘導ApoAl表達的能力，并因而增加血液HDL水平和降低血液膽固醇水平。此外，這些化合物具有其它有益的活性，包括抑制HMG-CoA還原酶、增加PPAR活性、抑制ACAT、增加ABCA-1活性和降低血液LDL和甘油三酸酯的活性水平。這些化合物的聯(lián)合多重作用可用于減少內(nèi)皮功能障礙、減少血管氧化性應激反應和降低高脂血癥，因而治療心血管疾病，例如動脈粥樣硬化、高血壓、冠狀動脈疾病、腦血管疾病等。
根據(jù)本發(fā)明的各個方面和原理，提供以下化合物。
含以下結(jié)構(gòu)的1，2-二苯乙烯化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯(glucoronidate)[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2，和其中X可為單、雙或三鍵。
含以下結(jié)構(gòu)的黃酮類化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10或R13或R14中至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示
且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2；X可為O、CR13或NR13；Y可為CO[仍然保留6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR14或NR14；和Z可為單鍵或雙鍵。
含以下結(jié)構(gòu)的異黃酮類化合物(isoflavonoid) 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10或R13或R14中至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，
其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2；X可為O、CR13或NR13；Y可為CO[仍然保留6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR14或NR14；和Z可為單鍵或雙鍵。
含以下結(jié)構(gòu)的查爾酮(chalcone)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R13可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10或R13中至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，
其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2；X可為單鍵或雙鍵；Y可為單鍵或雙鍵；和Z可為CO[酮]、CR13或NR13；條件是X和Y不都為雙鍵，和如果Z為CO，則Y不為雙鍵。
含以下結(jié)構(gòu)的多元酚化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，
其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2；和X可為C、S、(CO)、SO、AKA酮、(SO2)N、(CO)C、(CO)N、(CO)O、C-N[單鍵]、C＝N[雙鍵]、C-O、N-O、N-N[單鍵]或N＝N[雙鍵]。
此外，還提供治療患者的與心血管、膽固醇或脂質(zhì)有關(guān)的疾病的方法，該方法包括給予需要治療的患者治療有效量的任何前述化合物。另一種優(yōu)選的用于誘導患者的ApoA1表達，同時提供抗氧化劑活性的治療方法包括給予所述患者任何前述化合物。其它本發(fā)明優(yōu)選的用于降低患者血清膽固醇的方法還包括給予所述患者任何前述化合物。
此外，還提供治療或預防患者的早老性癡呆、糖尿病、肥胖癥、缺血性再灌注損傷、充血性心力衰竭和相關(guān)疾病的方法，該方法包括給予需要治療的患者治療有效量的任何前述化合物。低血清HDL水平與早老性癡呆風險增大有關(guān)(Suryadevara等2003 J.Gerontol ABiol.Sci.Med.Sci.58(9)M859-61)。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物調(diào)節(jié)PPARγ活性；PPARγ功能障礙與糖尿病、肥胖癥、缺血性再灌注損傷、充血性心力衰竭和有關(guān)疾病有關(guān)(Ferre等2004 Diabetes 53增補版1S43-50；Yue 2003 Drugs Today(Bare)39(12)949-60)。
本發(fā)明和最佳模式詳述按照本發(fā)明的原理和各方面，提供關(guān)于使用1，2-二苯乙烯、多元酚和黃酮類化合物及其衍生物的供NO類似物治療心血管疾病的方法、化合物和描述潛在作用機理的詳細說明。理解潛在的作用機理可導致增加開發(fā)更多具有治療益處進一步提高的衍生物和類似物，它們也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
很明顯有許多因素影響心血管疾病的發(fā)病。現(xiàn)代藥物中缺乏同時治療發(fā)生疾病的三個主要方面，即血管氧化性應激反應增加、氧化氮的生物利用度減少和高膽固醇血癥的方法也是顯而易見的。因此，本發(fā)明通過提供單一新的具有抗氧化劑活性、氧化氮釋放活性和誘導膽固醇逆轉(zhuǎn)運能力的分子，詳述同時針對所有三個因素的方法。根據(jù)氧化氮釋放時，抗氧化能力和氧化氮供給同時發(fā)生的事實，使得本發(fā)明化合物和治療方法更有效，因此尤其優(yōu)選它們。本發(fā)明提供與以下的物質(zhì)有任何類型有利連接的并仍保留本發(fā)明提供活性的供NO部分形成本發(fā)明期望化合物母核的1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黃酮類化合物的幾乎任何部分，或保留抗氧化性質(zhì)和誘導載脂蛋白A1轉(zhuǎn)錄能力或具有增加膽固醇逆轉(zhuǎn)運或降低血清膽固醇活性的此類化合物的任何衍生物，或甚至有抗氧化劑和降低血清膽固醇能力的任何化合物。
本發(fā)明提供的化合物包括具有當給予患者時，能夠釋放氧化氮的連接部分的白藜蘆醇、其它1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黃酮類化合物的類似物。此類化合物包括但不限于白藜蘆醇、其它1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黃酮類化合物的類似物，其中供氧化氮部分屬于有機硝酸酯、烷氧基硝酸酯、diazeniumdiolate、硫代硝基氧基(thionitroxy)等類型化學結(jié)構(gòu)。
實施本發(fā)明不需要理解通過其改變本發(fā)明化合物的確切機理。本文中公開的機理是非限制性的，僅用于更好地描述本發(fā)明。雖然不受理論限制，據(jù)認為，由于由至少一個芳環(huán)結(jié)構(gòu)組成的活性和必需母核，并且芳環(huán)上具有至少一個羥基的分子結(jié)構(gòu)，白藜蘆醇產(chǎn)生前述作用。天然產(chǎn)生的白藜蘆醇本身尤其由兩個芳環(huán)組成，兩個羥基位于一個環(huán)的3和5位，一個羥基位于另一個環(huán)的4′位，兩個芳環(huán)通過兩個碳原子連接，兩個碳原子之間有雙鍵。據(jù)認為，該大類的其它化合物，所述類是含有至少一個芳環(huán)結(jié)構(gòu)，且環(huán)上至少有一個羥基的那些化合物，具有與列舉的白藜蘆醇那些相同的能力和產(chǎn)生相同的結(jié)果。
因此，含有通過兩個碳原子連接的兩個芳環(huán)的1，2-二苯乙烯；其它多元酚，例如含有通過1、2或3個原子連接的兩個或多個優(yōu)選兩個芳環(huán)的那些多元酚，所述原子獨立選自氮、碳、氧和硫，它們可以或不可以被側(cè)基例如酮的氧獨立取代；和黃酮類化合物，例如但不限于天然存在的黃酮類化合物，例如但不限于柚苷配基、槲皮素、piceatannol、紫鉚因、非瑟酮、異甘草素和橙皮素(hesperitin)，是具有類似于所述白藜蘆醇的那些性質(zhì)的所有化合物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當用于預防或治療疾病、障礙或病癥，尤其但不限于與膽固醇、心血管疾病、高血壓、氧化性損害、異常脂血癥、載脂蛋白A1或apoB調(diào)節(jié)有關(guān)的那些疾病、障礙或病癥，或在改變或調(diào)節(jié)膽固醇代謝的其它方面，例如抑制HMG CoA還原酶、增加PPAR活性、抑制ACAT、增加ABCA-1活性、升高HDL或降低LDL或甘油三酸酯，可認為任何這些化合物與白藜蘆醇功能可互換。例如在美國專利5,877,208、6,455,577、5,763,414、5,792,461、6,165,984和6,133,241中已說明不含與供氧化氮部分連接的黃酮類化合物具有潛在降低血清膽固醇的活性。
類似的，當用于從S位點，從AGCCCCCGC元件調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄，或當用于抑制白細胞粘附或血小板凝集，或抑制COX-1時，可認為該類任何1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黃酮類化合物與白藜蘆醇功能可互換。這并不意味所有化合物在這些功能或能力的每一頂，或體內(nèi)毒性或效力或生物利用度的活性水平方面相同。在簡單試驗的過程中，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員容易操作而不需要過度的實驗，這些化合物證明其中某些化合物提供相當于其它化合物提高的能力或功能，因此比其它的化合物優(yōu)選作為治療藥物。
還已知酚羥基，例如在本發(fā)明改進的堿化合物中發(fā)現(xiàn)的那些酚羥基易于發(fā)生促使排泄的葡糖醛酸酯化(glucoronidation)和硫酸酯化反應。通過阻斷酚羥基與其它化學基團，例如硝酸酯(又稱為有機硝酸酯或ONO2)基、烷氧基硝基氧基或反向酯硝基氧基反應來阻止這些反應的保護進一步延長分子在身體中的半衰期和延遲排泄。
作為實例，白藜蘆醇所含的三個推斷重要和治療活性羥基可通過用硝酸酯(又稱為硝基氧基或ONO2，偶爾稱為“硝氧基”，但它不應與NO2混淆)、烷氧基硝基氧基或反向酯硝基氧基替換來保護，而在體內(nèi)，隨時間推移它們被羥基置換重新組成白藜蘆醇活性化合物。因為在一定時間內(nèi)，供氧化氮基團每次被一個羥基置換，而含一個或兩個供氧化氮基團的白藜蘆醇分子仍然有部分活性，因此在體內(nèi)的白藜蘆醇活性有效半衰期延長。這種策略還允許使用相對于羥基化形式的白藜蘆醇母體化合物更低劑量的硝酸酯形式的白藜蘆醇，然后硝酸酯形式的白藜蘆醇對患者造成的副作用較小。顯然，這種方法對本發(fā)明期望的其它1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黃酮類化合物也有效，因為期望它們也包含可形成分子活性部位主要部分的一個或多個羥基。
本發(fā)明提供上述1，2-二苯乙烯、多元酚和黃酮類化合物以外化合物的硝基氧基衍生物的合成、組合物和處理方法，其中由其合成硝基氧基衍生物的所述化合物含芳環(huán)或雜芳環(huán)、一個或多個羥基，和已知調(diào)節(jié)血清膽固醇水平。含芳環(huán)或雜芳環(huán)、一個或多個羥基，和已知調(diào)節(jié)血清膽固醇水平的這類化合物的一個實例包括HMG CoA還原酶抑制劑，又稱為他汀類藥物。本發(fā)明提供市售他汀類藥物的硝基氧基衍生物，市售他汀類藥物包括阿托伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀和羅蘇伐他汀。在本說明書范圍內(nèi)的含芳環(huán)或雜芳環(huán)、一個或多個羥基和已知調(diào)節(jié)血清膽固醇水平的兩種其它化合物是依澤替米貝和煙酸。因此，本發(fā)明還提供依澤替米貝和煙酸的硝基氧基衍生物。
合成1，2-二苯乙烯、多元酚、黃酮類化合物、他汀類藥物和依澤替米貝的供氧化氮衍生物用已知方法，例如其中硝基氧基取代母體分子上羥基的Hakimelahi法可將有機硝酸酯(又稱為硝基氧基、硝酸酯、ONO2，偶爾稱為“硝氧基”，但它不應與NO2混淆)基加到化合物上(Hakimelahi等1984.Helv.Chim.Acta.67906-915)。
用例如美國專利5,861,426中說明的方法可將烷氧基硝基氧基加到化合物上。可通過各種方法，包括例如美國專利4,954,526、5,039,705、5,155,137、5,405,919和6,232,336中說明的方法合成Diazeniumdolates，所有這些專利通過引用結(jié)合到本文中。
供氧化氮部分最好可通過共價鍵或離子鍵與1，2-二苯乙烯例如白藜蘆醇、多元酚或黃酮類化合物例如柚苷配基或本發(fā)明中所述和提供的其它化合物，例如他汀類藥物成員或其衍生物或類似物連接。優(yōu)選供氧化氮部分或各部分通過一個或多個共價鍵連接。供氧化氮部分可與分子的任何部分有利地連接。在一個實施方案中，供氧化氮部分置換了一個或多個羥基。在一個優(yōu)選的實施方案中，是有機硝酸酯基代替羥基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，是與酯或反向酯連接的有機硝酸酯基代替羥基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，各供氧化氮部分置換了1，2-二苯乙烯例如白藜蘆醇、多元酚或黃酮類化合物例如柚苷配基或本發(fā)明所述和提供的其它化合物例如他汀類藥物任何成員的所有羥基或其衍生物或類似物的所有羥基。
對于本發(fā)明所有化合物，還期望和提供被氟離子、氯離子、溴離子、CF3基團、CCl3基團、CBr3、任選取代的任選支鏈的1-18個碳原子烷基鏈、或任選取代的任選支鏈的1-18個碳原子烷氧基鏈取代的羥基，如此修飾母體化合物是已知增加藥物穩(wěn)定性而不改變作用機理的通常作法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地完成。
對于所有本發(fā)明化合物，還期望和提供化合物的乙?；苌铮绱诵揎椖阁w化合物是已知提高藥物的有益作用而不改變作用機理的通常作法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地完成。乙酰化衍生物包括酯、反向酯、具有連接供氧化氮部分(包括但不限于硝基氧基)的酯和連接供氧化氮部分(包括但不限于硝基氧基)的反向酯。
對于所有本發(fā)明化合物，還期望和提供化合物的磷酸酯化衍生物，如此修飾母體化合物是已知提高藥物的有益作用而不改變作用機理的通常作法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地完成。
本文中還期望本發(fā)明期望化合物的葡糖醛酸酯化衍生物，因為葡糖醛酸酯化是作為體內(nèi)1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黃酮類化合物代謝一部分的自然發(fā)生過程。一旦提供給患者，多數(shù)本發(fā)明化合物會在體內(nèi)被修飾，因此會以葡糖醛酸酯化的形式存在于體內(nèi)。因此，在給藥前，葡萄糖醛酸與本發(fā)明化合物的綴合不排除體內(nèi)研究測得的化合物功能或治療效用。因此，認為與另外的糖部分連接的本發(fā)明化合物的功能可與母體化合物相比，因此本發(fā)明提供它們。例如在Otake方法中使用人肝微粒體(Otake等2002.Drug Metab.Disp.30(5)576-581)，可實現(xiàn)本發(fā)明期望的使任何1，2-二苯乙烯、多元酚或黃酮類化合物衍生物的葡糖醛酸酯化。
類似地，本文中還期望本發(fā)明期望的化合物的硫酸酯化衍生物，因為硫酸酯化是作為體內(nèi)1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黃酮類化合物代謝一部分的自然發(fā)生過程。一旦提供給患者，某些本發(fā)明化合物會在體內(nèi)被修飾，因此會以硫酸酯化的形式存在于體內(nèi)。因此，硫酸酯化不排除體內(nèi)研究測得的化合物功能或治療效用。因此，認為經(jīng)硫酸酯化反應的本發(fā)明化合物的功能可與母體化合物相比，因此本發(fā)明提供它們。例如可用Varin的離子-空氣(ion-air)萃取方法(Varin等1987.Anal.Biochem.161176-180)，實現(xiàn)本發(fā)明期望的使任何1，2-二苯乙烯、多元酚或黃酮類化合物衍生物硫酸酯化。
本發(fā)明還提供包括優(yōu)選用于藥物制劑的那些鹽的本文中所述化合物的鹽。
本發(fā)明期望的化合物為明確，本發(fā)明提供的化合物提供說明性化學結(jié)構(gòu)，但這不會將本發(fā)明范圍限制在下列化合物。當使用術(shù)語“硝基氧基”時，它表示硝酸酯基-ONO2。當使用術(shù)語“羥基”時，它表示基團-OH。當使用術(shù)語“反向酯”時，它表示基團 其中O-鍵與黃酮類化合物、1，2-二苯乙烯或多元酚結(jié)構(gòu)的母體化合物連接，且R為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，和可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子。
當使用術(shù)語“反向酯硝基氧基”時，它表示基團 其中O-鍵與黃酮類化合物、1，2-二苯乙烯或多元酚結(jié)構(gòu)的母體化合物連接，且R為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，和可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，并含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明提供具有1，2-二苯乙烯通用結(jié)構(gòu)的化合物
其可進一步劃分為以下結(jié)構(gòu) 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供以下通用結(jié)構(gòu)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代、任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2；且X和Y可各自獨立為C、N、O，條件是如果X或Y的任一個為C，則另一個不為C。
本發(fā)明還提供以下通用結(jié)構(gòu)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供具有多元酚通用結(jié)構(gòu)的化合物 其可進一步分為以下結(jié)構(gòu) 其中X為C或S，和R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，
其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供具有黃酮類化合物通用結(jié)構(gòu)的化合物
其可進一步分為以下結(jié)構(gòu)

本發(fā)明還提供具有異黃酮類化合物通用結(jié)構(gòu)的化合物 其可進一步分為以下結(jié)構(gòu)

其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R15和R16可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R13、R14、OR13、OR14、OCOR13、OCOR14、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R12或R15或R16中至少一個為硝基氧基、R14、OR14或OCOR14；和其中OCOR表示 且R為R13或R14，其中R13為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R14為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2；X可為O、CR15或NR15；Y可為CO[仍然保留6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR16或NR16；和Z可為單鍵或雙鍵。
本發(fā)明還提供具有查爾酮(chalcone)通用結(jié)構(gòu)的化合物 其某些結(jié)構(gòu)由以下結(jié)構(gòu)代表
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R13、R12、OR13、OR12、OCOR13、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R11中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R12或R13，其中R13為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2；和其中X可為單鍵或雙鍵；Y可為單鍵或雙鍵；和Z可為CO[酮]、CR11或NR11；本發(fā)明中提供的降膽固醇化合物的其它供NO衍生物包括本發(fā)明還提供以下通式化合物 其中
R1、R2、R3、R4可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R4中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供化合物 其中R1為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R12，其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供化合物 其中R1為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R12，其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供以下通式化合物 其中R1、R2、R3可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R3中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供以下通式化合物 其中R1、R2、R3可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R3中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供以下通式化合物 其中R1、R2、R3可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R3中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供以下通式化合物 其中R1、R2、R3可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R3中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供以下通式化合物 其中R1、R2可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R2中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
本發(fā)明還提供化合物 其中R1為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R12，其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含有一個或多個ONO2。
合成1、2-二苯乙烯、多元酚和黃酮類化合物的供NO衍生物的方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，存在許多合成1，2-二苯乙烯例如白藜蘆醇、多元酚或黃酮類化合物例如柚苷配基或其它抗氧化劑、降血清膽固醇或激活膽固醇逆轉(zhuǎn)運或升HDL化合物的供氧化氮類似物或衍生物的方法是顯而易見的。盡管有已知方法，但此類化合物以前從未描述或合成過。優(yōu)選此類化合物是與供氧化氮部分結(jié)合的1，2-二苯乙烯例如白藜蘆醇、多元酚或黃酮類化合物例如柚苷配基或其它抗氧化劑、降血清膽固醇或激活膽固醇逆轉(zhuǎn)運或升HDL的化合物的類似物或衍生物。最優(yōu)選此類化合物是用一個或多個ONO2基團(又稱為硝酸酯基、有機硝酸酯基或硝基氧基)替代母體化合物羥基的l，2-二苯乙烯例如白藜蘆醇、多元酚或黃酮類化合物例如柚苷配基或其它抗氧化劑、降血清膽固醇或激活膽固醇逆轉(zhuǎn)運或升HDL的化合物的類似物或衍生物。
本發(fā)明提供的化合物的一個實例是用代替存在于天然白藜蘆醇的3個羥基的有機硝酸酯基取代的白藜蘆醇。該化合物命名為3，4′，5-三硝基氧基反式1，2-二苯乙烯或白藜蘆醇三硝酸酯，或用IUPAC命名法為1，3-二-硝基氧基-5-[2-(4-硝基氧基-苯基)-乙烯基]-苯。本發(fā)明提供的這種化合物的另一個實例是用代替存在于天然柚苷配基的3個羥基的有機硝酸酯基取代的柚苷配基。該化合物命名為柚苷配基三硝酸酯，或用IUPAC命名法為5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氫吡喃-4-酮。本發(fā)明提供的化合物的另一個實例是柚苷配基的反向酯硝基氧基類似物，其三個羥基被取代，為5-硝基氧基-戊酸4-[5，7-二-(5-硝基氧基-戊?；趸?-4-氧代-苯并二氫吡喃-2-基]-苯基酯。盡管不受本文中示例描述的那些化合物的限制，但在本發(fā)明實施例部分提供更多的實例。
用于反應的反式白藜蘆醇原料可從Bio-Stat Limited(Stockport，U.K.)或Sigma Chemical Co.(St.Louis，MO，USA)購買得到，用Goldberg等的方法(1995)Am.J.Enol.Vitic.46(2)159-165，從葡萄酒中分離。或者，可按Toppo在美國專利6,048,903中說明的方法，或通過Waterhouse由Moreno-Manas和Pleixats方法改良的Wittig反應，由適當取代的苯酚為原料，合成反式白藜蘆醇。
用作合成反應成分的柚苷配基是天然存在的化合物，容易從廣泛的市場來源得到，或者可用熟知方法從天然來源例如柑桔汁中分離，無需過度的實驗。
給藥為治療以上提及的疾病，可單獨使用化合物，但更優(yōu)選提供含有可接受的載體或賦形劑的藥學上可接受的制劑形式。盡管在任何具體情況中，最適合的給藥形式取決于所治療疾病的程度和嚴重性以及使用具體化合物的性質(zhì)，但這些制劑包括適用于口服、直腸、局部、口頰和腸胃外(例如皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)或靜脈內(nèi))給藥的那些制劑。
適用于口服給藥的制劑可以不連續(xù)單位提供，例如膠囊劑、扁囊劑、錠劑或片劑，各自含預定量化合物粉末或顆粒；為水或非水液體溶液或混懸液；或為水包油或油包水乳劑。按說明，可通過任何合適的藥劑方法制備此類制劑，這些方法包括使活性化合物與載體或賦形劑(它們可組成一種或多種附加組分)組合的步驟。按照與制劑中的其它組分相容和必須對接受者無害的原則，載體必須是可接受的。載體可以是固體或液體或兩者，優(yōu)選與化合物一起配制成單位劑量制劑，例如片劑，它可含0.05％-95％(重量)活性化合物。也可使用包括其它化合物的其它藥理活性物質(zhì)。可通過任何熟知的藥劑技術(shù)制備基本上由混合各組分組成的本發(fā)明制劑。
對于固體組合物，常規(guī)無毒固體載體包括例如藥用級甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石粉、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂等?？赏ㄟ^例如將本文中所述活性化合物和任選的藥用助劑溶解、分散等在賦形劑，例如水、鹽水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等中，從而形成溶液或混懸液，制備藥理學上可使用的液體組合物。一般而言，最好通過將活性化合物與液體或固體載體細粉或兩者均勻和充分地混合，然后如需要使產(chǎn)物成形，制備合適的制劑。例如，可通過將化合物和任選與一種或多種輔助組分的粉末或顆粒壓縮或模制制備片劑?？赏ㄟ^在合適的機器上，壓縮任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑和/或表面活性劑/分散劑混合的自由流動形式例如粉末或顆粒狀化合物，制備壓制片?？赏ㄟ^在合適的機器上，將化合物粉末用惰性液體稀釋劑潤濕，通過模制制備模制片。
適用于口頰(舌下)給藥的制劑包括含矯味基質(zhì)通常為蔗糖和阿拉伯膠(atacia)或黃芪膠和化合物的錠劑，和含化合物和惰性基質(zhì)例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠的軟錠劑(pastilles)。
適用于腸胃外給藥的本發(fā)明制劑包括化合物的無菌水性制劑，它們與接受者的血液基本等滲。這些制劑經(jīng)靜脈內(nèi)給予，也可通過皮下、肌內(nèi)或皮內(nèi)注射給予?？赏ㄟ^使化合物與水混合，將得到的溶液滅菌并使其與血液等滲，便利地制備此類制劑。本發(fā)明注射用組合物通常含0.1-5％w/w活性化合物。
以單位劑量栓劑提供適用于直腸給藥的制劑?？赏ㄟ^將化合物與一種或多種常規(guī)固體載體例如可可脂混合，然后使得到混合物成形，制備這些制劑。
適用于皮膚局部應用的制劑優(yōu)選采用軟膏、霜劑、洗劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油的形式。可使用的載體和賦形劑包括凡士林、羊毛脂(lanoline)、聚乙二醇、醇和其中兩種或多種的組合。通常存在的活性化合物的濃度以組合物計為0.1-15％w/w，例如0.5-2％。
給予活性化合物的量自然取決于待治療的患者、患者的體重、給藥的方式和處方醫(yī)師的判斷。在本發(fā)明方法中，給藥方案通常涉及每天或每半天給予可理解的1μg-1000mg劑量的封囊化合物。封囊化幫助進入作用部位，允許同時給予各活性成分，理論上產(chǎn)生協(xié)同作用。按照標準給藥方案，醫(yī)師容易確定最佳劑量，能容易地改進給藥以達到這樣的劑量。
實施例提出以下實施例以幫助理解本發(fā)明，但不應理解為對本文所述和要求保護的發(fā)明的具體限定。在本領(lǐng)域技術(shù)人員認識范圍內(nèi)的本發(fā)明的此類變化形式，包括現(xiàn)已知或其后開發(fā)等同化合物的取代，包括制劑改變或?qū)嶒炘O(shè)計的較小改變，認為在結(jié)合在本文中的本發(fā)明范圍內(nèi)。
對于本文中提供的所有實施例，除另有說明外，術(shù)語“各種化合物”或“化合物”是指本發(fā)明中提供的任何化合物。
實施例1制備1，3-二-硝基氧基-5-[2-(4-硝基氧基-苯基)-乙烯基]-苯在25℃下，向1mmol 5-[(E)-2-(4-羥基-苯基)-乙烯基]-苯-1，3-二酚(同義詞白藜蘆醇；3，4′，5-三羥基反式1，2-二苯乙烯)的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物(1，3-二-硝基氧基-5-[(E)-2-(4-硝基氧基-苯基)-乙烯基]-苯)和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例2制備piceatannol四硝酸酯在25℃下，向1mmol(E)-4-(2-(3，5-二羥基苯基)乙烯基)-1，2-苯二酚(同義詞piceatannol)的5ml無水THF溶液中加入4mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物(piceatannol四硝酸酯)和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例3制備紫鉚因四硝酸酯在25℃下，向1mmol 3，4，2′，4′-四羥基查爾酮(同義詞紫鉚因)的5ml無水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，使溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物紫鉚因四硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例4制備異甘草素三硝酸酯在25℃下，向1mmol 4，2′，4′-三羥基查爾酮(同義詞異甘草素)的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物異甘草素四硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例5制備非瑟酮四硝酸酯在25℃下，向1mmol 3，7，3′，4′-四羥基黃酮(同義詞非瑟酮)的5ml無水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物非瑟酮四硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例6制備槲皮素五硝酸酯在25℃下，向1mmol 3，5，7，3′，4′-五羥基黃酮(同義詞槲皮素)的5ml無水THF溶液中加入5mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物槲皮素五硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例7制備N-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-N′-(4-硝基氧基-苯基)-肼在25℃下，向1mmol 5-[N′-(4-羥基-苯基)-肼基]-苯-1，3-二酚的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物N-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-N′-(4-硝基氧基-苯基)-肼和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例8制備1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基二硫基)-苯在25℃下，向1mmol 5-(4-羥基-苯基二硫基)-苯-1，3-二酚的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基二硫基)-苯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例9制備1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基過氧基)-苯在25℃下，向1mmol 5-(4-羥基-苯基過氧基)-苯-1，3-二酚的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基過氧基)-苯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例10制備1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基硫基甲基)-苯在25℃下，向1mmol 5-(4-羥基-苯基硫基甲基)-苯-1，3-二酚的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基硫基甲基)-苯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例11制備N-(3，5-二-硝基氧基-苯基-O-(4-硝基氧基-苯基)-羥基胺在25℃下，向1mmol 5-(4-羥基-苯氧氨基)-苯-1，3-二酚的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物N-(3，5-二-硝基氧基-苯基-O-(4-硝基氧基-苯基)-羥基胺和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例12制備芐基-(4-硝基氧基-苯基)-胺在25℃下，向1mmol 4-芐基氨基-苯酚的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物芐基-(4-硝基氧基-苯基)-胺通過硅膠層析純化和分離。
實施例13制備2-(亞水楊基氨基)苯酚二硝酸酯在25℃下，向1mmol 2-(亞水楊基氨基)苯酚的5ml無水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2-(亞水楊基氨基)苯酚二硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例14制備(2，4-二-硝基氧基-苯基)-(2-硝基氧基-苯基)-二氮烯在25℃下，向1mmol 4-(2-羥基-苯基偶氮基)-苯-1，3-二酚(同義詞4-((2-羥基苯基)偶氮基)-1，3-苯二酚)的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2，4-二-硝基氧基-苯基)-(2-硝基氧基-苯基)-二氮烯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例15制備二-(2，2′-硝基氧基-苯基)-二氮烯在25℃下，向1mmol二-(2，2′-羥基-苯基)-二氮烯(同義詞1-羥基-2-(2-羥基苯基偶氮基)苯)的5ml無水THF溶液中加入2mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物二-(2，2′-硝基氧基-苯基)-二氮烯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例16制備N-(3-硝基氧基-苯基)-苯磺酰胺在25℃下，向1mmol N-(3-羥基-苯基)-苯磺酰胺(同義詞N-(3-羥基苯基)苯磺酰胺)的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物N-(3-硝基氧基-苯基)-苯磺酰胺通過硅膠層析純化和分離。
實施例17制備N-(4-硝基氧基-苯基)-苯磺酰胺在25℃下，向1mmol N-(4-羥基-苯基)-苯磺酰胺(同義詞N-(4-羥基苯基)苯磺酰胺)的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物N-(4-硝基氧基-苯基)-苯磺酰胺通過硅膠層析純化和分離。
實施例18制備3，3′，4，5′-四硝基氧基聯(lián)芐在25℃下，向1mmol 3，3′，4，5′-四羥基聯(lián)芐的5ml無水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物3，3′，4，5′-四硝基氧基聯(lián)芐和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例19制備1-芐氧基-2-硝基氧基-苯在25℃下，向1mmol 2-芐氧基-苯酚的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物1-芐氧基-2-硝基氧基-苯通過硅膠層析純化和分離。
實施例20制備苯甲酸3-硝基氧基-苯基酯在25℃下，向1mmol苯甲酸3-羥基-苯基酯(同義詞間苯二酚單苯甲酸酯)的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物苯甲酸3-硝基氧基-苯基酯通過硅膠層析純化和分離。
實施例21制備2-硝基氧基-苯甲酸苯酯在25℃下，向1mmol 2-羥基-苯甲酸苯酯(同義詞水楊酸苯酯)的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物2-硝基氧基-苯甲酸苯酯通過硅膠層析純化和分離。
實施例22制備2-硝基氧基-N-(4-硝基氧基-苯基)-苯甲酰胺在25℃下，向1mmol 2-羥基-N-(4-羥基-苯基)-苯甲酰胺(同義詞柳胺酚(osalmid))的5ml無水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2-硝基氧基-N-(4-硝基氧基-苯基)-苯甲酰胺和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例23制備2-硝基氧基-N-(3-硝基氧基-苯基)-苯甲酰胺在25℃下，向1mmol 2-羥基-N-(3-羥基-苯基)-苯甲酰胺的5ml無水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2-硝基氧基-N-(3-硝基氧基-苯基)-苯甲酰胺和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例24制備3，4，5-三-硝基氧基-N-苯基-苯甲酰胺在25℃下，向1mmol 3，4，5-三羥基-N-((Z)-1-亞甲基-丁-2-烯基)-苯甲酰胺(同義詞沒食子酰苯胺)的5ml無水THF溶液中加入3mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物3，4，5-三-硝基氧基-N-苯基-苯甲酰胺和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例25制備1-(2，4-二-硝基氧基-苯基)-2-苯基-乙酮在25℃下，向1mmol 1-(2，4-羥基-苯基)-2-苯基-乙酮(同義詞芐基2，4-二羥基苯基酮)的5ml無水THF溶液中加入2mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物1-(2，4-二-硝基氧基-苯基)-2-苯基-乙酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例26制備1，2-二-硝基氧基-3-苯氧基-苯在25℃下，向1mmol 3-苯氧基-苯-1，2-二酚的5ml無水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物1，2-二-硝基氧基-3-苯氧基-苯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例27制備1，2-二-硝基氧基-3-(2-硝基氧基-苯氧基)-苯在25℃下，向1mmol 3-(2-羥基-苯氧基)-苯-1，2-二酚的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物1，2-二-硝基氧基-3-(2-硝基氧基-苯氧基)-苯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例28制備1-硝基氧基-2-苯氧基-苯在25℃下，向1mmol 2-苯氧基-苯酚的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物1-硝基氧基-2-苯氧基-苯通過硅膠層析純化和分離。
實施例29制備5，5-亞磺酰基雙間苯二酚四硝酸酯在25℃下，向1mmol 5，5-亞磺?；p間苯二酚的5ml無水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物5，5-亞磺?；p間苯二酚四硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例30制備4，4′-硫代雙1，3-苯二酚四硝酸酯在25℃下，向1mmol 4，4′-硫代雙1，3-苯二酚的5ml無水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物4，4′-硫代雙1，3-苯二酚四硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例31制備2，2′-硫代雙苯酚二硝酸酯在25℃下，向1mmol 2，2′-硫代雙苯酚的5ml無水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2，2′-硫代雙苯酚二硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例32制備1-芐基-2，4-二-硝基氧基-苯在25℃下，向1mmol 4-芐基-苯-1，3-二酚(同義詞3-苯基甲基-1，3-苯二酚)的5ml無水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物1-芐基-2，4-二-硝基氧基-苯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例33制備2-芐基-1，4-二-硝基氧基-苯在25℃下，向1mmol 2-芐基-苯-1，4-二酚(同義詞4-苯基甲基-1，4-苯二酚)的5ml無水THF溶液中加入2mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2-芐基-1，4-二-硝基氧基-苯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例34制備(2，3，4-三-硝基氧基-苯基)-(3，4，5-三-硝基氧基-苯基)-甲酮在25℃下，向1mmol(2，3，4-三羥基-苯基)-(3，4，5-三羥基-苯基)-甲酮(同義詞依昔苯酮)的5ml無水THF溶液中加入6mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物(2，3，4-三-硝基氧基-苯基)-(3，4，5-三-硝基氧基-苯基)-甲酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例35制備(2-硝基氧基-苯基)-苯胺在25℃下，向1mmol 2-苯基氨基-苯酚的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物(2-硝基氧基-苯基)-苯胺通過硅膠層析純化和分離。
實施例36制備2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-4H-苯并吡喃在25℃下，向1mmol 5-(6-羥基-4H-苯并吡喃-2-基)-苯-1，3-二酚的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-4H-苯并吡喃和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例37制備2-(3，5-二-2硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-1，4-二氫-萘在25℃下，向1mmol 5-(6-羥基-1，4-二氫-萘-2-基)-苯-1，3-二酚的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-1，4-二氫-萘和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例38制備2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-1，2，3，4-四氫-萘在25℃下，向1mmol 5-(6-羥基-1，2，3，4-四氫-萘-2-基)-苯-1，3-二酚的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-1，2，3，4-四氫-萘和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例39制備5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氫吡喃-4-酮在25℃下，向1mmol 5，7-二羥基-2-(4-羥基-苯基)-苯并二氫吡喃-4-酮(同義詞柚苷配基)的5ml無水THF溶液中加入3mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氫吡喃-4-酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例40制備5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并吡喃-4-酮在25℃下，向1mmol 5，7-二羥基-2-(4-羥基-苯基)-苯并吡喃-4-酮(同義詞芹黃素)的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并吡喃-4-酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例41制備5，7-二-硝基氧基-3-(4-硝基氧基-苯基)-苯并吡喃-4-酮在25℃下，向1mmol 5，7-二羥基-3-(4-羥基-苯基)-苯并吡喃-4-酮(同義詞染料木黃酮)的5ml無水THF溶液中加入3mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物5，7-二-硝基氧基-3-(4-硝基氧基-苯基)-苯并吡喃-4-酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例42制備2-(3，4-二-硝基氧基-苯基)-3，4，5，7-四-硝基氧基-苯并二氫吡喃在25℃下，向1mmol 2-(3，4-二羥基-苯基)-苯并二氫吡喃-3，4，5，7-四醇(同義詞白西尼多)的5ml無水THF溶液中加入6mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2-(3，4-二-硝基氧基-苯基)-3，4，5，7-四-硝基氧基-苯并二氫吡喃和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例43制備6-羥基-7-硝基氧基-3-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氫吡喃-4-酮在25℃下，向1mmol 6，7-二羥基-3-(4-羥基-苯基)-苯并二氫吡喃-4-酮(同義詞6，7，4′-三羥基異黃烷酮)的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物6-羥基-7-硝基氧基-3-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氫吡喃-4-酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例44制備Quracol B四硝酸酯在25℃下，向1mmol Quracol B的5ml無水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物Quracol B四硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例45制備1-(4-羥基-2，6-二-硝基氧基-苯基)-3-(4-硝基氧基-苯基)-丙-1-酮在25℃下，向1mmol 3-(4-羥基-苯基)-1-(2，4，6-三羥基-苯基)-丙-1-酮(同義詞根皮素)的5ml無水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物1-(4-羥基-2，6-二-硝基氧基-苯基)-3-(4-硝基氧基-苯基)-丙-1-酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例46制備1-硝基氧基-4-((Z)-3-苯基-烯丙基)-苯在25℃下，向1mmol 4-((Z)-3-苯基-烯丙基)-苯酚(同義詞(E)-4-(3-苯基-2-丙烯基)-苯酚)的5ml無水THF溶液中加入1mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物1-硝基氧基-4-((Z)-3-苯基-烯丙基)-苯通過硅膠層析純化和分離。
實施例47制備1-硝基氧基-4-((E)-3-苯基-丙烯基)-苯在25℃下，向1mmol 4-((E)-3-苯基-丙烯基)-苯酚的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物1-硝基氧基-4-((E)-3-苯基-丙烯基)-苯通過硅膠層析純化和分離。
實施例48制備5，6，7-三-硝基氧基-2-苯基-苯并吡喃-4-酮在25℃下，向1mmol 5，6，7-三羥基-2-苯基-苯并吡喃-4-酮(同義詞貝加因)的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物5，6，7-三-硝基氧基-2-苯基-苯并吡喃-4-酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例49制備蘆丁四硝酸酯在25℃下，向1mmol 2-(3，4-二羥基-苯基)-5，7-二羥基-3-[(2S，3R，5S，6R)-3，4，5-三羥基-6-((2R，3R，4R，5R，6S)-3，4，5-三羥基-6-甲基-四氫-吡喃-2-基氧基甲基)-四氫-吡喃-2-基氧基]-苯并吡喃-4-酮(同義詞蘆丁)的5ml無水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2-(3，4-二-硝基氧基-苯基)-5，7-二-硝基氧基-3-[(2S，3R，5S，6R)-3，4，5-三羥基-6-((2R，3R，4R，5R，6S)-3，4，5-三羥基-6-甲基-四氫-吡喃-2-基氧基甲基)-四氫-吡喃-2-基氧基]-苯并吡喃-4-酮(蘆丁四硝酸酯)和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例50制備5-羥基-2-(4-羥基苯基)-7-(2-O-α-L-鼠李吡喃糖基-β-D-吡喃葡萄糖基氧基)-4-苯并二氫吡喃酮(chromanon)二硝酸酯在25℃下，向1mmol 5-羥基-2-(4-羥基苯基)-7-(2-O-α-L-鼠李吡喃糖基-β-D-吡喃葡萄糖基氧基)-4-苯并二氫吡喃酮(同義詞柚皮苷)的5ml無水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物5-羥基-2-(4-羥基苯基)-7-(2-O-α-L-鼠李吡喃糖基-β-D-吡喃葡萄糖基氧基)-4-苯并二氫吡喃酮二硝酸酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任一羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例51制備(E)-(3S，5R)-7-[3-(4-氟-苯基)-1-異丙基-1H-吲哚-2-基]-1，3，5-三-硝基氧基-庚-6-烯-1-酮在25℃下，向1mmol(E)-(3S，5R)-7-[3-(4-氟-苯基)-1-異丙基-1H-吲哚-2-基]-3，5-二羥基-庚-6-烯酸(同義詞氟伐他?。籒ovartis)的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物(E)-(3S，SR)-7-[3-(4-氟-苯基)-1-異丙基-1H-吲哚-2-基]-1，3，5-三-硝基氧基-庚-6-烯-1-酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例52制備N-苯基-[5-(4-氟-苯基)-2-異丙基-4-苯基-1-((3R，5R)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚基)-1H-吡咯-1-基]-3-甲酰胺在25℃下，向1mmol(3R，5R)-7-[2-(4-氟-苯基)-5-異丙基-3-苯基-4-苯基氨基甲酰基-吡咯-1-基]-3，5-二羥基-庚酸(同義詞阿托伐他??；Parke-Davis)的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物N-苯基-[5-(4-氟-苯基)-2-異丙基-4-苯基-1-((3R，5R)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚基)-1H-吡咯-1-基]-3-甲酰胺和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例53制備(E)-(3R，5S)-7-[4-(4-氟-苯基)-2，6-二異丙基-5-甲氧基甲基-吡啶-3-基]-1，3，5-三-硝基氧基-庚-6-烯-1-酮在25℃下，向1mmol(E)-(3R，5S)-7-[4-(4-氟-苯基)-2，6-二異丙基-5-甲氧基甲基-吡啶-3-基]-3，5-二羥基-庚-6-烯酸(同義詞西立伐他??；Bayer)的5ml無水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物(E)-(3R，5S)-7-[4-(4-氟-苯基)-2，6-二異丙基-5-甲氧基甲基-吡啶-3-基]-1，3，5-三-硝基氧基-庚-6-烯-1-酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例54制備(S)-2-甲基-丁酸(1S，3S，7S，8S，8aR)-7-甲基-3-硝基氧基-8-((4R，6R)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚基)-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯在25℃下，向1mmol(2R，4R)-3，5-二羥基-7-[(1S，2S，6S，8S，8aR)-6-羥基-2-甲基-8-((S)-2-甲基-丁?；趸?-1，2，6，7，8，8a-六氫-萘-1-基]-庚酸(同義詞普伐他??；Bristol-Myers Squibb)的5ml無水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物(S)-2-甲基-丁酸(1S，3S，7S，8S，8aR)-7-甲基-3-硝基氧基-8-((4R，6R)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚基)-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例55制備2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧基-6-氧代-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯在25℃下，向1mmol 2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-8-[2-((2R，4R)-4-羥基-6-氧代-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-3，7-二甲基-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯(同義詞辛伐他??；Merck)的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧基-6-氧代-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯通過硅膠層析純化和分離。
實施例56制備(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧基-6-氧代-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯在25℃下，向1mmol(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-8-[2-((2R，4R)-4-羥基-6-氧代-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-3，7-二甲基-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯(同義詞洛伐他??；Merck)的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧基-6-氧代-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯通過硅膠層析純化和分離。
實施例57制備N-[4-(4-氟-苯基)-6-異丙基-5-((E)-(3R，SR)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚-1-烯基)-嘧啶-2-基]-N-甲基-甲磺酰胺在25℃下，向1mmol(E)-(3R，SR)-7-[4-(4-氟-苯基)-6-異丙基-2-(甲磺酰基-甲基-氨基)-嘧啶-5-基]-3，5-二羥基-庚-6-烯酸(同義詞羅蘇伐他汀；Astra-Zeneca)的5ml無水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物N-[4-(4-氟-苯基)-6-異丙基-5-((E)-(3R，SR)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚-1-烯基)-嘧啶-2-基]-N-甲基-甲磺酰胺通過硅膠層析純化和分離。
實施例58制備硝基氧基-吡啶-3-基-甲酮在25℃下，向1mmol煙酸的5ml無水THF溶液中加入1mmolSOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使硝酸酯化產(chǎn)物硝基氧基-吡啶-3-基-甲酮通過硅膠層析純化和分離。
實施例59制備(S)-1-(4-氟-苯基)-3-[(S)-3-(4-氟-苯基)-3-硝基氧基-丙基]-4-(4-硝基氧基-苯基)-氮雜環(huán)丁-2-酮在25℃下，向1mmol(S)-1-(4-氟-苯基)-3-[(S)-3-(4-氟-苯基)-3-羥基-丙基]-4-(4-羥基-苯基)-氮雜環(huán)丁-2-酮(同義詞依澤替米貝；Merck)的5ml無水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO3)或SO(NO3)2。1h后，加入Et2O(乙醚)，將溶液用水洗滌，干燥，蒸發(fā)。使完全硝酸酯化產(chǎn)物(S)-1-(4-氟-苯基)-3-[(S)-3-(4-氟-苯基)-3-硝基氧基-丙基]-4-(4-硝基氧基-苯基)-氮雜環(huán)丁-2-酮和部分硝酸酯化產(chǎn)物(其中任何羥基獨立被ONO2基團置換)通過硅膠層析純化和分離。
實施例60使本發(fā)明化合物葡糖醛酸酯化的方法該實施例描述制備本發(fā)明葡糖醛酸酯化化合物的方法。在該具體實施例中，將二硝酸酯化形式的白藜蘆醇(按實施例1制備的3，4′-硝基氧基-5-羥基白藜蘆醇)(50-1000μM)和10μl人腸、25μl結(jié)腸或10μl肝微粒體(分別為200、400、200μg蛋白質(zhì))、20μl重組UDP-葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶(400μg蛋白)在含10mM MgCl2的50mM Tris HCl緩沖液(pH 7.8)溶液的最終體積為500μl溶液，在37℃下預溫育5min。加入1mM 5′-二磷酸葡糖醛酸引發(fā)反應。將反應混合物在37℃下溫育60min。將樣品在冰上冷卻，用合適(oasis)親水-親油平衡值的1cc C18萃取柱(Waters Corp，Milford，MA)進行固相萃取。將柱用1-ml甲醇沖洗，用1-ml水平衡。加載0.5ml樣品后，將柱用5％甲醇沖洗，用2ml 100％甲醇洗脫。在40℃、氮氣下將甲醇洗脫液干燥，將樣品再溶于250μl流動相，用于HPLC分析。
實施例61使本發(fā)明化合物硫酸酯化的方法該實施例描述制備本發(fā)明硫酸酯化化合物的方法。在該具體的實施例中，用前述離子對萃取方法(Varin等1987.Anal.Biochem.161176-180)，通過磺基轉(zhuǎn)移酶將二硝酸化形式的白藜蘆醇，即按實施例1制備的3，4′-硝基氧基-5-羥基白藜蘆醇硫酸酯化?？傮w積100μl的典型反應混合物含0.1-200μM 3，4′-硝基氧基-5-羥基白藜蘆醇、1μM[35S]PAPS和2.5μl混合人肝細胞溶膠(50μg蛋白)、2.5μl人空腸細胞溶膠(30μg)、Caco-2細胞溶膠(225μg)或0.25μl重組磺基轉(zhuǎn)移酶和33mM Tris-HCl緩沖液(pH 7.4)以及8mM二硫蘇糖醇和0.0625％牛血清白蛋白。將樣品在37℃下溫育30min，加入10μl 2.5％乙酸、20μl 0.1μM四丁基硫酸氫銨和500μl乙酸乙酯終止反應。經(jīng)過混合和離心后，加入可生物降解的計數(shù)閃爍體(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)后，使400μl乙酸乙酯萃取液經(jīng)歷液體閃爍計數(shù)。
實施例62測定ACAT抑制可通過已知方法，例如在美國專利6,165,984說明的和以下所述的方法，測定作為ACAT抑制劑的本發(fā)明化合物的活性。
首先，通過斷頭處死大鼠，切除肝臟。每個肝取1g，放入5ml勻化介質(zhì)(0.1M KH2PO4，pH 7.4，0.1mM EDTA和10mM β-巰基乙醇)中勻化。在4℃下，以3,000次.g將勻漿離心10min，在4℃下，以15,000次.g將得到的上清液離心15min，得到上清液。在4℃下，將上清液放入超速離心管(Beckman)中，以100,000次.g離心1小時，得到微粒體沉淀，然后將其懸浮于3ml勻化介質(zhì)中，在4℃下，以100,000次.g離心1小時。將如此得到的沉淀懸浮于1ml勻化介質(zhì)中。通過Lowry氏法測定得到的懸浮液中的蛋白質(zhì)濃度，然后調(diào)至4-8mg/ml。將得到的懸浮液儲存在冷藏箱(Biofreezer，F(xiàn)orma ScientificInc.)。
將6.67μl 1mg/ml膽固醇的丙酮溶液與6μl 10％Triton WR-1339(Sigma Co.)的丙酮溶液混合，然后用氮氣通過蒸發(fā)除去混合物中的丙酮。將蒸餾水加入得到的混合物中，加入的量將膽固醇的濃度調(diào)至30mg/ml。
向10μl得到的膽固醇水溶液中加入10μl 1M KH2PO4(pH 7.4)、5μl 0.6mM牛血清白蛋白(BSA)、在(步驟1)中得到的10μl微粒體溶液和55μl蒸餾水(總計90μl)。在水浴中，在37℃下，將混合物預溫育30min。
將10μl(1-14C)油?；?CoA溶液(0.05μCi，終濃度10μM)加入預溫育的混合物中，在37℃下，將得到的混合物用水浴溫育30min。向混合物中加入500μl異丙醇∶庚烷混合物(4∶1(v/v))、300μl庚烷和200μl 0.1M KH2PO4(pH 7.4)，通過旋轉(zhuǎn)劇烈混合混合物，然后在室溫下靜置2min。
將得到的200μl上清液放入閃爍瓶中，向其中加入4ml閃爍液(Lumac)。用液體閃爍計數(shù)器測定混合物的放射性。按每mg蛋白每min.合成的油酸膽甾醇微微摩爾數(shù)計算ACAT活性(pmole/min/mg蛋白)。觀測到給予本發(fā)明化合物的大鼠組的ACAT活性小于對照組。
實施例63測定HMG-CoA還原酶抑制可用已知方法，例如在美國專利5,877,208中說明的方法測定本發(fā)明化合物抑制HMG-CoA還原酶的效力。該方法概述如下。
通過斷頭處死大鼠，切除肝臟，立即放入冰冷卻勻化介質(zhì)(50mMKH2PO4(pH 7.0)、0.2M蔗糖、2mM二硫蘇糖醇(DTT))中。用Waring混合器(在Potter-Elvehjem型玻璃勻化器中用發(fā)動機驅(qū)動的Teflon槌撞擊3次)將肝臟在勻化介質(zhì)(2ml介質(zhì)/g肝)中勻化15秒。以15,000次.g將勻漿離心10min，將得到的上清液以100,000次.g離心75min，得到微粒體沉淀，然后將其再懸浮于含50mM EDTA的勻化介質(zhì)中，以100,000次.g離心60min。含微粒體的上清液用作酶源。
按如下Shapiro等的方法(Biochemica et Biophysica Acta，370，369-377(1974))，用放射性標記的14C HMG-CoA測定HMG-CoA還原酶的活性。
在37℃下，將在(步驟1)中得到的含微粒體上清液中的酶活化30min。加入到內(nèi)含20μl HMG-CoA還原酶測定緩沖液(0.25M KH2PO4(pH 7.0)，8.75mM EDTA，25mM DTT，0.45M KCl和0.25mg/mlBSA)、5μl 50mM NADPH、5μl放射性標記的14C HMG-CoA(0.05μCi/管，終濃度120μM)和10μl活化微粒體酶(0.03-0.04mg)的反應管中，將混合物在37℃下溫育30min。通過將10μl 6M HCl加入到混合物中終止反應，將混合物在37℃下溫育15min，使產(chǎn)物完全內(nèi)酯化。通過以10,000次.g離心1min除去沉淀，將上清液點在硅膠60G TLC板(Altech，Inc.，Newark，U.S.A.)上，然后用苯∶丙酮(1∶1，v/v)展開。用一次性蓋片(cover slips)刮去適當?shù)膮^(qū)域，用1450 Microbeta液體閃爍計數(shù)器(Wallacoy，F(xiàn)inland)測定放射性。按每mg蛋白每min.合成的甲羥戊酸微微摩爾數(shù)計算酶活性(pmol/min/mg蛋白)。對照大鼠顯示相對高的HMG-CoA還原酶活性，而觀測到給予本發(fā)明化合物的大鼠的HMG-CoA活性比對照組低。
實施例64測定本發(fā)明化合物激活PPAR通過幾種已知方法，例如在美國專利6,369,098已說明過的下述那些方法測定本發(fā)明化合物調(diào)節(jié)PPARγ和PPARα活性的能力。
基于抑制NF-κB活化篩選調(diào)節(jié)PPARγ和PPARα活性的化合物的方法測試本發(fā)明化合物抑制NF-κB活性的能力。已知人內(nèi)皮細胞和血管平滑肌細胞(VSMC)表達PPARγ和PPARα(Neve BP等BiochemPharmacol.，601245-1250(2000))?；蛘撸哉＝】等斯w分離的人外周T淋巴細胞或用PPARγ和/或PPARα表達載體轉(zhuǎn)染的哺乳動物細胞系例如Jurkat T細胞系可用于這些實驗。用以下一種或多種刺激這些選擇的細胞類型之一植物凝集素/佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PHA/PMA)，TNF-α，干擾素-γ或激活NF-κB的其它因子。可通過與前述(Rossi A等Proc Natl Acad Sci USA，94746-50(1997))相似的電泳遷移率變動分析測定NF-κB的激活。將相同細胞用5μmol本發(fā)明化合物預溫育2小時，然后加入NF-κB活化劑，在這些化合物不存在時觀測到NF-κB激活受到抑制。
基于抑制NFAT活化篩選調(diào)節(jié)PPARγ和PPARα活性的化合物的方法用PHA/PMA、TNF-α、干擾素-γ或其它激活NFAT的因子中的一種或多種刺激自正常健康人供體分離的人外周T淋巴細胞或PPARγ和/或PPARα表達載體轉(zhuǎn)染的哺乳動物細胞系例如Jurkat T細胞系?？赏ㄟ^與前述Yang等J Biol Chem.；2754541-4(2000)相似的電泳遷移率變動分析測定NFAT的轉(zhuǎn)錄激活。將相同細胞與5μmol本發(fā)明化合物預溫育2小時，然后加入NFAT活化劑，在無所述化合物存在時觀測到的NFAT激活受到抑制。
基于抑制IL-2產(chǎn)生篩選調(diào)節(jié)PPARγ和PPARα活性的化合物的方法用PHA/PMA、TNF-α、干擾素-γ或其它激活誘導IL-2基因表達的因子中的一種或多種刺激分離的人T淋巴細胞或用PPARα和/或PPARγ表達載體轉(zhuǎn)染的哺乳動物細胞系如Jurkat T細胞系。按Yang等J Biol Chem.，2754541-4(2000)所述，用Endogen試劑盒(Wolbum)測量細胞上清液中IL-2的濃度，測定產(chǎn)生的IL-2。將相同細胞與5μmol本發(fā)明化合物預溫育12小時，然后加入IL-2產(chǎn)生活化劑，在無所述化合物存在時觀測到的IL-2產(chǎn)生活化受到抑制。
實施例65測定本發(fā)明化合物激活ABCA-1能力的方法用美國專利6,548,548說明的已知方法，該測試證實本發(fā)明化合物對ABCA-1基因表達的有效性。簡單地說，用pGL3螢光素酶報道基因載體系統(tǒng)(Promega，Madison，Wis.)構(gòu)建重組質(zhì)粒，以測量在ABCA-1啟動子控制下報道基因表達。
用質(zhì)粒pGL3-Basic(Promega，Madison，Wis.；目錄編號#E1751)作含無啟動子螢光素酶基因的對照質(zhì)粒。通過將ABCA-1基因的5′旁側(cè)區(qū)(hAPR1 5′啟動子，對應于SEQ ID No3的核苷酸1080-1643)基因組片段克隆到GL3-Basic質(zhì)粒的SacI部位生成質(zhì)粒GL-6a，制備含ABCA-1啟動子和螢光素酶基因的報道基因構(gòu)件。下一步，用SpeI和Acc65I消化質(zhì)粒GL-6a。代表對應于SEQ ID No3的核苷酸1-1534的ABCA-1基因組序列的由λ亞克隆切除的BsiWI-SpeI片段，連接到由該消化產(chǎn)生的剩余載體/ABCA-I啟動子片段上。得到的質(zhì)粒pAPR1在1.75kb人ABCA-1啟動子序列的轉(zhuǎn)錄控制下，編碼螢光素酶報道基因。
對照或轉(zhuǎn)染到RAW 264.7細胞融合培養(yǎng)基的pAPR1質(zhì)粒wisas保存在含10％胎牛血清的DMEM中。在12孔皿中的每個孔中用pGL3-Basic、pGL3-啟動子或pAPR1 DNA(1μg)、螢光素酶質(zhì)粒DNA(1μg)和12μl Geneporter試劑(Gene Therapy Systems，San Diego，Calif.；目錄編號#T201007)轉(zhuǎn)染5小時。另外，加入0.1μg pCMVβ質(zhì)粒DNA、(Clontech，Palo Alto，Calif.，目錄編號#6177-1)用作轉(zhuǎn)染效率的對照。5小時后，在乙?；疞DL(100μg/ml)存在或不存在下，用無血清的DMEM/BSA替換培養(yǎng)基，溫育24小時。
轉(zhuǎn)染后，將各孔中的細胞在70μl細胞溶胞劑(Promega，Madison，Wis.，目錄編號#E3971)中溶解1次，經(jīng)歷1次冷凍-解凍循環(huán)，通過以12,000g離心5分鐘使溶胞物澄清。離心后，將100μl螢光素酶測定試劑(Promega，Madison，Wis.；目錄編號#E1501)加入到10μl溶胞物中。用發(fā)光計以光單位測量各溶胞物的螢光素酶活性。另外，按生產(chǎn)商(Tropix Inc.，Bedford，Mass.目錄編號#BL100G)的說明，用Galacto-light試劑盒中提供的化學發(fā)光測定試劑測量各溶胞物的β-半乳糖苷酶活性。通過螢光素酶活性值除以測得的β-半乳糖苷酶值，測定各溶胞物的歸一化的螢光素酶活性，用相對光單位報道。
在該測定中，本發(fā)明化合物證實ABCA-1基因表達增加。
實施例66測量人載脂蛋白A1蛋白表達該研究測量了本發(fā)明化合物對通過CaCO2細胞、人腸細胞系或Hep G2細胞、人肝細胞系中的內(nèi)源性APO AI基因表達的載脂蛋白A1蛋白水平的作用。將本發(fā)明化合物溶于適當?shù)娜軇┲?，然后提供給在含有血清細胞培養(yǎng)基中的CaCO2或Hep G2細胞，送回組織培養(yǎng)箱中，在37℃下培養(yǎng)12、24、36或48小時。隨后用不含血清的培養(yǎng)基沖洗細胞，將細胞固定，溶解，用市售人載脂蛋白A1抗體(例如小鼠抗人載脂蛋白A1抗體，Intracel Resources LLC，F(xiàn)rederick，MD，USA)檢測載脂蛋白A1的存在。觀測到用本發(fā)明化合物處理的細胞載脂蛋白A1蛋白表達豐度與僅用溶劑處理細胞的表達豐度之間的差異。通過用約0.1pmol至最高達約100mmol的不同濃度的各化合物按2倍濃度幅度重復實驗，測定用于檢測其載脂蛋白表達調(diào)節(jié)活性的各化合物的最佳濃度。檢測到與細胞結(jié)合的抗體次數(shù)增加證實化合物誘導載脂蛋白A1表達增加。
實施例67測量ApoA-1啟動子誘導將CaCO2或Hep G2細胞暴露于有效濃度的本發(fā)明化合物。用標準技術(shù)，用報道基因構(gòu)件、pAI.474-Luc和pRSV-B半乳糖苷酶一起轉(zhuǎn)染細胞，pRSV-B半乳糖苷酶監(jiān)控轉(zhuǎn)染效率。pAI.474-Luc是用常規(guī)分子生物技術(shù)構(gòu)建的構(gòu)件，含有融合到報道基因的-474至-7的大鼠APO AI啟動子核苷酸，該構(gòu)件是螢火蟲的螢光素酶(Luc)(美國專利申請10/222,013)。將本發(fā)明化合物溶于適當溶劑(例如DMSO)，然后加入培養(yǎng)基，保持16小時。在處理結(jié)束時，收獲細胞，用標準市售螢光素酶測定方案測量螢光素酶活性。還用蛋白質(zhì)印跡分析法測定暴露于細胞36小時后的培養(yǎng)基中其APO AI蛋白的含量。細胞溶胞物或用過的培養(yǎng)基中螢光素酶活性增加表明本發(fā)明化合物具有載脂蛋白A1表達誘導活性。
實施例68測量AGCCCCCGC序列元件誘導將CaCO2或Hep G2細胞暴露于有效濃度的本發(fā)明化合物。先用標準技術(shù)，用含用作增強子元件的9個核苷酸5′-AGCCCCCGC-3′的一個或多個模板的報道基因構(gòu)件轉(zhuǎn)染細胞(Kilbourne等，JBC，270(12)7004-7010，1995)，可與啟動子(例如胸苷激酶(TK)啟動子)連接，可和pRSV-B半乳糖苷酶一起與報道基因(例如螢光素酶，CAT或載脂蛋白A1基因)連接，pRSV-B半乳糖苷酶監(jiān)控轉(zhuǎn)染效率(如美國專利申請10/222,013說明的那樣)。然后將本發(fā)明化合物溶于適當溶劑(例如DMSO)，然后加入培養(yǎng)基，保持16小時。在處理結(jié)束時，收獲細胞，用標準市售測定方法測量報道基因活性。報道基因活性增加或減少表明本發(fā)明化合物具有調(diào)節(jié)從含9個核苷酸序列5′-AGCCCCCGC-3′的啟動子轉(zhuǎn)錄的能力，據(jù)認為其包含egr-1效應元件。因此，本發(fā)明化合物可用于治療與egr-1活性有關(guān)的病癥、疾病或障礙。
實施例69用環(huán)試驗測量化合物舒張血管的活性用標準分離的血管環(huán)確定本發(fā)明提供的化合物效能。在37℃下，將新西蘭白兔胸主動脈環(huán)懸浮于pH 7.4緩沖液中，給每條環(huán)預加10g負荷。平衡2小時后，這些環(huán)用去甲腎上腺素預收縮。通過將濃度連續(xù)遞增的本發(fā)明化合物加入器官浴測量誘導松馳的克數(shù)，建立每個化合物的劑量效應曲線。用硝普鈉和硝酸甘油作陽性對照。
還通過在按Reynolds等(J.Pharmacol.Exp.Therap.252，915，1990)所述方法制備的組織中，測量腎上腺素引起收縮的抑制，在分離大鼠主動脈中測定血管擴張活性。
通過加入本發(fā)明化合物引起的松馳增加，證明這些化合物的血管擴張活性以及治療或預防許多與高血壓有關(guān)的疾病，例如心血管疾病的有效性。
實施例70測量NO供給為證明本發(fā)明化合物作為氧化氮釋放劑的效用，將本發(fā)明化合物溶于適當溶劑和pH 7.4的磷酸鹽緩沖液，在37℃水浴中溫育。通過用惰性氮氣沖洗溶液，然后將新生成的NO吹掃進化學發(fā)光檢測器，每隔4-7分鐘將產(chǎn)生的信號積分，定期測量NO釋放速率。相對于陰性對照，NO釋放增加，潛在適當?shù)年幮詫φ帐抢缌u基化而非硝酸酯化形式的同一化合物，證實NO釋放活性和治療或預防與高血壓有關(guān)的障礙、疾病或病癥，例如心血管疾病的有效性。
實施例71測量抗氧化劑有效性通過用公開的基于染料的顏色測定法(FOX測定法，參見Zadeh，″Methods in Enzymology″，300，58(1999))測量由銅催化自氧化低密度脂蛋白過氧化氫的程度，證明本發(fā)明化合物抗氧化劑性能。用只含LDL和硫酸銅不含測試物質(zhì)的樣品作陽性對照，與含測試物質(zhì)的相同混合物對比。
將人低密度脂蛋白(Sigma Chemical Company L2139)的磷酸鹽緩沖水溶液pH-7.4與硫酸銅混合。與有效量的本發(fā)明化合物在25℃或37℃下于常壓下溫育，完成氧化，在零時間點和3-20小時溫育期間自混合物取樣，用FOX測定法測量過氧化氫。用微量滴定板讀出器閱讀樣品。FOX測定法測量的過氧化氫減少表明本發(fā)明化合物的抗氧化劑活性和它們治療或預防與氧化有關(guān)的障礙、疾病或病癥的有效性，或從使用抗氧化劑受益。從抗氧化劑治療受益的這種病癥的實例是心血管疾病。
實施例72通過LDL氧化測定法測量抗氧化劑活性可使用Esterbauer法(Esterbauer，H.，Striegl，G.，Puhl，H.，Rotheneder，M.，″Continuous monitoring of in vitro oxidation of humanlow density lipoprotein″(體外連續(xù)監(jiān)測氧化人低密度脂蛋白)，F(xiàn)reeRadic.Res.Commun，1989；6(1)67-75)，某些改進如下將化合物與適當增溶劑溶于磷酸鹽緩沖液(PBS，0.15M NaCl-0.05M磷酸鈉緩沖液-pH 7.4)。記錄確切的濃度(約30-60μg/mL待測萃取液)。向100μL該溶液中加入900μL氧化緩沖液(由人LDL(120μL5mg/mL溶液，其中d＝1.019-1.063g/mL，購自PerImmune，Rockville，Md.)和硫酸銅(20μL 10mM水溶液)的8mL PBS溶液制備)。還制備用100μL PBS和900μL氧化緩沖液制備的空白樣品。然后將各溶液轉(zhuǎn)移至1cm石英比色皿，將該比色皿放入恒溫器(37℃)。用HP-8452A二極管陣列分光光度計在234nm(OD234)測量光密度，每5分鐘測量一次。以光密度曲線的第一衍生物的最大值計算氧化的滯后時間。每次測定時測定含抗壞血酸的標準品。
實施例73測量和對比HDL、LDL、VLDL和甘油三酸酯水平每日早晨，通過經(jīng)口喂飼1.5％羧甲基纖維素/0.2％吐溫-20(給藥溶媒)給予食物飼養(yǎng)的雄性Sprague-Dawley大鼠或雌性肥胖Zucker大鼠化合物或單獨給予溶媒，連續(xù)7天。在整個研究中，每日將動物稱重，任其自由食用嚙齒動物食物和飲水。在開始給藥前禁食6小時后，采集眼框血樣，在第7次給藥后也采集血樣。在第7次給藥后，晚上處死動物，測定血清總膽固醇和甘油三酸酯、脂蛋白膽固醇曲線、VLDL加混合LDL膽固醇(又稱為含脂蛋白膽固醇的apo B或非-HDL膽固醇)、HDL膽固醇，以及HDL膽固醇與VLDL加LDL膽固醇的比率。
實施例74測量和對比人HDL、LDL、VLDL和甘油三酸酯水平對化合物給予的反應每日給予人受試者本發(fā)明化合物。監(jiān)測其它飲食攝取，個體之間保持一致。在給予化合物前，在第0日采集血樣，每周一次，持續(xù)3-6月。測定血清總膽固醇和甘油三酸酯、脂蛋白膽固醇曲線、VLDL加混合LDL膽固醇(又稱為含脂蛋白膽固醇的apo B或非-HDL膽固醇)、HDL膽固醇、HDL2和HDL3膽固醇組分，以及HDL膽固醇與VLDL加LDL膽固醇的比率，用標準的市售膽固醇測試法，例如VAP測試(Atherotech Inc，Birmingham，AL)，它可從少量人血樣品中再現(xiàn)性測量這些參數(shù)?；蛘撸赏ㄟ^Kulkarni法(Kulkarni等1997.J.LipidRes.382353-64)或通過Gidez法(Gidez等1982.J.Lipid Res.231206-23)測量血中的HDL2和HDL3。在這種血測試中測得的增加總HDL、增加HDL2、減少總LDL、減少VLDL、減少甘油三酸酯或增加HDL/總膽固醇或HDL/LDL比率的本發(fā)明化合物用于治療與膽固醇或脂質(zhì)有關(guān)的疾病。
實施例75用蛋白聚糖-結(jié)合-缺陷LDL測量動脈粥樣硬化損害大小可用核酸構(gòu)件產(chǎn)生小鼠表達蛋白聚糖-結(jié)合-缺陷LDL。連續(xù)17周給予轉(zhuǎn)基因小鼠含1.2％膽固醇、0.5％膽酸鹽和20％脂肪的食物。然后處死小鼠，將主動脈灌注固定，用en face方法分析，其中將整個主動脈平整固定，用蘇丹IV染色，用形態(tài)度量圖象分析系統(tǒng)(圖象-1/AT)分析，定量動脈粥樣硬化的程度。
實施例76測量活動物高血壓下降通過含肝素化鹽水導管將壓力傳感器與右頸動脈連接。記錄平均動脈壓和心律。用戊巴比妥，以初始劑量35mg/kg體重，如需要采用另外更小的注射劑量麻醉大鼠。將化合物溶于藥物載體(例如Abbott的5％葡萄糖USP)，通過右股骨靜脈導管注射給大鼠。可使用的陽性對照包括硝普鈉和NaNO2，而可用NaNO3作陰性對照。結(jié)果表明本發(fā)明提供的化合物是有效的降壓藥，它可顯著降壓。應在短時間內(nèi)達到血壓下降峰值，例如注射約1分鐘后，而此后血壓應很快又開始上升，應在約10-15分鐘內(nèi)血壓完全恢復。
實施例77測量高膽固醇兔動脈損傷后再狹窄的減少程度可使用美國專利號5,595,974中和Goodman在美國專利6,022,901進一步描述的Tomaru法評價本發(fā)明化合物防止高膽固醇兔再狹窄的效用。
實施例78用于預防人再狹窄可按Goodman在美國專利6,022,901中所述實施Tardif等(1997)，New England J.Med.337(6)365-67的方法，不同之處在于用我們的化合物替代反式白藜蘆醇檢驗。
實施例79測量血小板抗凝集活性可按Bertele等(Science 220，517，1983)所述方法，體外評價對凝血酶刺激人血小板的血小板抗凝集活性。
實施例80測量對ADP誘導兔血小板凝集的影響血小板凝集試驗用涂覆硅的注射器通過兔心臟穿刺采集兔血樣品。將該血樣品與3.8％檸檬酸鈉以9∶1的比率混合，按1,000rpm旋轉(zhuǎn)6分鐘。將1ml富含血小板的血漿轉(zhuǎn)移至涂覆硅的2ml小池中，混合，用分光光度計記錄透光度(Ti)。加入0.02ml ADP(10μM)，攪拌，每分鐘一次記錄含血小板血漿的透光度，在10分鐘內(nèi)得到最大透光度(Tm)。將血樣以3000rpm旋轉(zhuǎn)45分鐘，記錄透光度。
實施例81測量對體內(nèi)膠原誘導的血小板減少的影響用戊巴比妥鈉(65mg/kg，Vet Labs，Limited，Inc.，Lenexa，KA)麻醉雄性大鼠(Charles River，CRLCD(SD)，400-450g)。制備兩條切口，暴露兩條頸靜脈。用輸注泵(Harvard Apparatus，South Natick，Mass.)和5cc注射器，按0.39ml/min速度將19g蝴蝶(butterfly)，測試化合物或溶媒輸注到左頸靜脈，持續(xù)3min。輸注化合物/溶媒2min后，用1ml注射器將膠原(60μg/kg)(Helena Laboratories，Beaumont，TX)注射到右頸靜脈。打開體腔，暴露腔靜脈，采集血樣。注射膠原1min后，停止輸注化合物，用含0.3mg 4.5％EDTA/Tris(0.1M)(pH 7.35)加150μM吲哚美辛的3cc注射器從腔靜脈采集血樣(在30秒內(nèi))。通過以126次.g離心血樣10min制備富含血小板的血漿(PRP)。在Coulter記數(shù)器上，在20ml Isoton.RTM.III中對5μl PRP計數(shù)。通過將在處理動物中統(tǒng)計的血小板數(shù)與未給予膠原動物的血小板數(shù)和給予溶媒和膠原的動物的血小板數(shù)進行對比，計算膠原誘導凝集的抑制百分率。根據(jù)膠原誘導的血小板減少抑制來估計效能。
實施例82測量體內(nèi)抗銀屑病的有效性給予患有銀屑病的人患者的感染部位含本發(fā)明化合物的局部用制劑。將不含本發(fā)明化合物的對照制劑應用到該患者的同等部位上。給藥后第3天和第7天，通過分析與施用對照制劑的部位比較，施用化合物部位的炎癥改善和增殖細胞減少，測定化合物的有效性。
實施例83測量蛋白激酶抑制在適當緩沖液中，將本發(fā)明化合物與放射性標記的ATP、適當?shù)牡鞍准っ负瓦m當?shù)牡孜锘旌?。溫育后，通過點在濾紙上終止反應，用閃爍計數(shù)器定量加入底物的ATP差異，它測量與對照比較的受抑制的蛋白激酶量。
實施例84測量嗜中性粒細胞活化的抑制用Tudan方案(Tudan.1999.Biochem.Pharmacol.581869-80測試本發(fā)明化合物。該試驗證實測試化合物抑制結(jié)晶和化學引誘劑例如fMLP導致的嗜中性粒細胞活化的能力。
實施例85測量TPA引起的炎癥的抑制通過改進的Marks法(Marks等1976.Cancer Res.362636)測試本發(fā)明化合物，以證明化合物抗用12-O-十四烷?；鸩ù?13-乙酸酯(TPA)誘發(fā)的炎癥的有效性。將化合物施用在小鼠耳上，隨后施用TPA。將小鼠耳活組織檢查法穿孔，4小時后稱重，測量水腫，與未使用化合物的另一個耳的活組織檢查法穿孔對比。
實施例86測量COX-1抑制通過Van der Ouderaa法(Van der Ouderaa.1982.Methods Enzymol.8660)測試本發(fā)明化合物。通過將花生四烯酸加入含測試化合物的0.1M磷酸鈉(pH 7.4)溶液、1.0mM苯酚、0.01mM氯高鐵血紅素和COX-1酶的混合物中，引發(fā)反應。
實施例87測量角叉菜膠誘發(fā)的炎癥的抑制通過Slowing法(Slowing等1994.J.WrhnophEMxol.439)，在Wistar大鼠上測試本發(fā)明化合物。將弗氏佐劑經(jīng)皮注射到動物尾中。7天后，給予測試化合物，1小時后，將角叉菜膠的生理鹽水懸浮液給予左后爪中。通過水體積描記法測量爪體積，與對照對比。
實施例88測量癌化學預防活性通過Mondal法(Mondal等1976.Cancer Res.362254-2260)，用本發(fā)明化合物處理C3H/10T1/2克隆8細胞(ATCC)。培養(yǎng)基中的細胞用3-甲基膽蒽處理24小時，隨后在新鮮的培養(yǎng)基中溫育5天，洗滌。隨后將TPA加入含或不含測試化合物的培養(yǎng)基中。實現(xiàn)融合7周后，用甲醇固定，用Giemsa染色顯示II和III型轉(zhuǎn)化的病灶(foci)，將其評分，以證明測試化合物抑制兩期轉(zhuǎn)化的有效性。
實施例89在一個或多個羥基被一個或多個硝基氧基置換前，合成包括1，2-二苯乙烯、多元酚和黃酮類化合物的本發(fā)明化合物的氟衍生物的方法因為可能需要用氟置換本發(fā)明化合物的一個或多個羥基以提高化合物用作治療藥物的有效性，根據(jù)Cramer和Coffman的方法(Cramerand Coffman，1961 J Org.Chem.264164)，在此提供描述如何用氟取代與芳環(huán)連接的羥基的實施例。這種方法非常適用于用氟置換本發(fā)明任何化合物的任何羥基，無需本領(lǐng)域技術(shù)人員進行過度的實驗。因為在該實施例中所述的氟化條件有些苛刻，所以可通過由構(gòu)體而非氟化制備化合物來提高某些本發(fā)明化合物的收率。當化合物用氟代替羥基，以及用一個或多個硝基氧基置換其它羥基時(例如在實施例1-59中)，應先完成氟加成反應，然后進行硝基氧基加成反應。
以下反應描述合成白藜蘆醇的氟衍生物。
在400mL容量的不銹鋼襯里的高壓釜中加入250mmol 5-[(E)-2-(4-羥基-苯基)-乙烯基]-苯-1，3-二酚(同義詞白藜蘆醇)，抽真空。加入500mmol四氟氧化硫，震動反應混合物，在150℃下加熱9小時。將主要為磺酰氟的氣體產(chǎn)物在-49℃至-44℃下蒸餾。將剩余物用5％氫氧化鈉水溶液和水洗滌。在蒸餾時，發(fā)現(xiàn)該液體含有含以下完全和部分氟化的產(chǎn)物的混合物3-氟-5-[(E)-2-(4-羥基-苯基)-乙烯基]-苯酚、5-[(E)-2-(4-氟-苯基)-乙烯基]-苯-1，3-二酚、4-[(E)-2-(3，5-二氟-苯基)-乙烯基]-苯酚和1，3-二氟-5-[(E)-2-(4-氟-苯基)-乙烯基-苯。通過硅膠層析純化和分離各種產(chǎn)物。
分離白藜蘆醇的氟衍生物后，可按實施例1-59所述進一步修飾化合物以含有硝基氧基。該方法無需過度實驗而將氟加到任何本發(fā)明化合物上。
實施例90合成含通過含-(CO)NH-的連接基團連接的兩個芳環(huán)多元酚的方法本發(fā)明期望的多元酚化合物包括含兩個通過連接基團相互連接的芳環(huán)化合物，其中所述連接基團含以下基團 通過該反應，用易于得到的原料容易地合成以下通式多元酚化合物 其中X為NH，和R1-10各自獨立選自H或OH。
本發(fā)明這些化合物用作中間體化合物，可用它們隨后合成實施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可進一步修飾以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修飾基團的硝基氧基衍生物。通過以下方法合成中間體化合物實例N-(3，5-二羥基-苯基)-4-羥基-苯甲酰胺，隨后可用它制備其硝基氧基衍生物。
向4-羥基-苯甲酸(6mmol)的無水DMF(15ml)溶液中加入EDCI(9mmol)、HOBt(9mmol)和三乙胺(12mmol)。在室溫下攪拌24小時后，滴加入5-氨基-苯-1，3-二酚，在室溫、氬氣下繼續(xù)反應48小時。然后加入水(300ml)，將混合物攪拌5min。然后將產(chǎn)物用乙酸乙酯(5*50ml)萃取。將合并的有機萃取液用鹽水(40ml)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，除去溶劑。通過硅膠層析完成純化產(chǎn)物N-(3，5-二羥基-苯基)-4-羥基-苯甲酰胺。
或者，用5-氨基甲基-苯-1，3-二酚代替5-氨基-苯-1，3-二酚進行反應，導致合成N-(3，5-二羥基-芐基)-4-羥基-苯甲酰胺。該合成證明合成該實施例的其中X為NHCH2的通式化合物的方法。類似地，作為證明，對苯酚的烷基修飾會導致對所得產(chǎn)物的連接基團的相同修飾。
通過例如氟化、溴化、氯化或乙?；蓟蛲ㄟ^雜芳族芳基，或通過C1-18烷基，或通過雙環(huán)芳基等，取代與該合成說明提供的氨基試劑連接的R基團(即取代5-氨基-苯-1，3-二酚的苯1，3-二酚基團)，會生成適當修飾的產(chǎn)物，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。
最好，通過該方法合成的產(chǎn)物可用作用于合成本發(fā)明的供NO、硝基氧基衍生物的中間體化合物。
實施例91合成含通過含-C-NH-的連接基團連接的兩個芳環(huán)多元酚的方法本發(fā)明期望的多元酚化合物包括含通過連接基團相互連接的兩個芳環(huán)的化合物，其中所述連接基團含與氮原子連接的碳原子單鍵。通過該反應，由易于得到的原料試劑容易地合成以下通式多元酚化合物。
其中X為CH2，Y為NH，或X為NH，Y為CH2，和R1-10各自獨立選自H或OH。
本發(fā)明這些化合物用作中間體化合物，可用它們隨后合成實施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可進一步修飾以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修飾基團的硝基氧基衍生物。通過以下方法合成中間體化合物實例5-(4-羥基-芐基氨基)-苯1，3-二酚，可用它制備其硝基氧基衍生物。
將5-氨基-苯-1，3-二酚(1.5mmol)加入4-羥基-苯甲醛(1.5mmol)的苯(40ml)溶液中，在氬氣下，用Dean-Stark阱將混合物加熱回流24小時。然后將反應混合物濃縮以完全除去苯，將殘渣溶于甲醇(15ml)。同時攪拌，在30min內(nèi)，分三部分加入氰基硼氫化鈉(3mmol)，在室溫下，將反應混合物再攪拌1小時。然后向反應混合物中加入含37％HCl的飽和NaCl溶液(100ml)。將反應混合物用乙酸乙酯(3*50ml)萃取。合并的有機層用鹽水(10ml)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮，得到粗產(chǎn)物5-(4-羥基-芐基氨基)-苯1，3-二酚，通過硅膠層析將它進一步純化。
或者，用4-羥基-苯基-乙醛代替4-羥基-苯甲醛進行反應，導致合成5-[2-(4-羥基-苯基)-乙基氨基]-苯-1，3-二酚。該合成證明合成該實施例的其中X為(CH2)2，Y為NH的通式化合物的方法。類似地，作為證明，對苯酚的烷基修飾會導致對所得產(chǎn)物的連接基團的相同修飾。
最好，通過該方法合成的產(chǎn)物可用作用于合成本發(fā)明的供NO、硝基氧基衍生物的中間體化合物。
實施例92合成含通過-CO-連接基團連接的兩個芳環(huán)多元酚的方法本發(fā)明期望的多元酚化合物包括含通過連接基團相互連接的兩個芳環(huán)化合物，其中所述連接基團含與氧原子連接的碳原子單鍵。通過該反應，由易于得到的原料試劑容易地合成以下通式多元酚化合物， 其中X為CH2，Y為氧，和R1-10各自獨立選自H或OH。
本發(fā)明這些化合物用作中間體化合物，可用它們隨后合成實施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可進一步修飾以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修飾基團的硝基氧基衍生物。通過以下方法合成中間體化合物實例5-(4-羥基-苯氧基甲基)-苯1，3-二酚，可用它制備其硝基氧基衍生物。
在氬氣和攪拌下，將叔丁基氯代二甲基硅烷固體(25mmol)加入4-羥基-苯甲醛(17mmol)和咪唑(42.5mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(100ml)溶液。4小時后，將反應混合物傾入水中，用乙醚萃取。將有機萃取液用水和鹽水洗滌，干燥，濃縮至有色油狀物。通過硅膠墊過濾，用20％乙酸乙酯-己烷為洗脫劑，得到甲硅烷基醚4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯甲醛。將4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯甲醛(14mmol)和間-氯過苯甲酸(20mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液加熱回流2小時，然后在室溫下放置過夜。然后將反應混合物萃取到乙醚中，隨后將有機層用氫氧化鈉水溶液(1M)、水和鹽水洗滌，干燥，減壓蒸發(fā)，得到固體。將其預吸附到硅膠上，然后通過硅膠塞經(jīng)歷快速過濾。將得到的甲酸酯，即甲酸4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯基酯的甲醇(70ml)溶液加入碳酸鉀(10mmol)中。20分鐘后，加入1-溴甲基-3，5-二-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯(14mmol，基本上按與以上甲酸4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯基酯相同的硅烷基保護方法制備)。6小時后，反應混合物的體積減少，加入水，將溶液用鹽酸水溶液(1M)酸化。將它用乙醚萃取，使乙醚萃取液通過Pearson法(Pearson等1967J Org Chem 322358)進行后處理。用2-80％乙酸乙酯-己烷作洗脫液，梯度洗脫干柱層析，得到1，3-二-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-5-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯氧基甲基]-苯。使1，3-二-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-5-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯氧基甲基]-苯的四氫呋喃溶液用四-正丁基氟化銨三水合物處理。3.5小時后，加入水和乙醚。將水層用鹽酸水溶液(1M)酸化，用乙醚再萃取。然后通過Pearson法對有機萃取液進行后處理。通過硅膠塞(20％乙酸乙酯-己烷)過濾，得到油狀物。用己烷研磨，同時在丙酮-干冰浴中冷卻，該油狀物結(jié)晶。通過二氯甲烷-己烷重結(jié)晶，得到產(chǎn)物5-(4-羥基-苯氧基甲基)-苯1，3-二酚，通過硅膠層析將其進一步純化。
最好，通過該方法合成的產(chǎn)物可用作用于合成本發(fā)明的供NO、硝基氧基衍生物的中間體化合物。
實施例93合成含通過含-C＝N-的連接基團連接的兩個芳環(huán)多元酚的方法本發(fā)明期望的多元酚化合物包括含通過連接基團相互連接的兩個芳環(huán)化合物，其中所述連接基團含與氮原子連接的碳原子雙鍵。通過該反應，由易于得到的原料試劑容易地合成以下通式多元酚化合物，
其中X為CH，Y為N，或X為N，Y為CH，和R1-10各自獨立選自H或OH。
本發(fā)明這些化合物用作中間體化合物，可用它們隨后合成實施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可進一步修飾以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修飾基團的硝基氧基衍生物。通過以下方法合成中間體化合物實例5-{[(E)-4-羥基-苯基亞氨基]-甲基}-苯1，3-二酚，可用它制備其硝基氧基衍生物。
在Dean和Stark裝置中，將3，5-二羥基-苯甲醛(1mmol)和4-氨基-苯酚(1mmol)的甲苯(5ml)溶液加熱回流16小時。將溶劑真空除去后，將產(chǎn)物5-{[(E)-4-羥基-苯基亞氨基]-甲基}-苯1，3-二酚通過甲醇重結(jié)晶，和通過硅膠層析進一步純化。
最好，通過該方法合成的產(chǎn)物可用作用于合成本發(fā)明的供NO、硝基氧基衍生物的中間體化合物。
實施例94合成含通過含-C＝C-的連接基團連接的兩個芳環(huán)的1，2-二苯乙烯(和二氫1，2-二苯乙烯)的通用方法本發(fā)明期望的1，2-二苯乙烯化合物包括含通過連接基團相互連接的兩個芳環(huán)化合物，其中所述連接基團含與另一個碳原子連接的碳原子雙鍵。通過該反應，由易于得到的原料試劑容易地合成以下通式1，2-二苯乙烯化合物，
其中X為CH，Y為CH，和R1-10各自獨立選自H或OH。
本發(fā)明這些化合物用作中間體化合物，可用它們隨后合成實施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可進一步修飾以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修飾基團的硝基氧基衍生物。通過以下方法合成中間體化合物實例白藜蘆醇(同義詞5-[(E)-2-(4-羥基-苯基)-乙烯基]-苯1，3-二酚)，可用它制備其硝基氧基衍生物。
在密封管中，將3，5-二羥基-芐基-溴(10mmol)和亞磷酸三甲酯(30mmol)的混合物在180℃油浴中加熱8小時?；旌衔锢鋮s后，將過量亞磷酸三甲酯真空除去。殘渣經(jīng)快速短柱層析純化后，得到產(chǎn)物(3，5-二羥基-芐基)-膦酸二甲酯。在室溫下，向(3，5-二羥基-芐基)-膦酸二甲酯的充分攪拌的還含新鮮粉狀KOH(2mmol)、18-冠醚-6(0.1mmol)的2ml CH2Cl2溶液的懸浮液中加入芳醛4-羥基-苯甲醛(1mmol)。將混合物攪拌6小時后，將混合物用15ml CH2Cl2稀釋，用水(10ml)和鹽水(2*10ml)洗滌。有機層經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮。將殘渣溶于2mlCH2Cl2。
向該溶液中加入Girard氏試劑T(0.5mmol)和AcOH(5mmol)，在室溫下，將得到的混合物攪拌2小時。濾除不溶物，將濾液真空濃縮，將殘渣溶于15ml EtOAc。將溶液用鹽水(3*10ml)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，將溶劑真空除去，得到白藜蘆醇的E和Z異構(gòu)體混合物。向該混合物的庚烷(5ml)溶液中加入催化量的碘，然后加熱回流12小時。將反應混合物用20ml乙醚稀釋，用飽和亞硫酸氫鈉水溶液(10ml)和鹽水(2*10ml)洗滌。有機層經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮，得到需要的E-白藜蘆醇。
最好，用該方法合成任何1，2-二苯乙烯化合物，它為合成本發(fā)明期望的供NO、硝基氧基衍生物的中間體化合物。
二氫1，2-二苯乙烯為相應1，2-二苯乙烯的衍生物，不同之處在于在連接基團的兩個碳原子之間具有單鍵，最好可由1，2-二苯乙烯母體化合物合成。通用方法如下。
在40psi下，在10％披鈀碳(60mg)存在下，使1，2-二苯乙烯(1mmol)的乙醇(120ml)溶液氫化18-24小時。使催化劑通過硅藻土墊過濾除去，將濾液中的溶劑蒸發(fā)，得到二氫1，2-二苯乙烯衍生物。
最好用該方法合成任何二氫1，2-二苯乙烯化合物，它是合成本發(fā)明期望的供NO、硝基氧基衍生物的中間體化合物。
實施例95合成本發(fā)明磷酸酯-衍生物的方法最好，可使磷酸酯基代替羥基取代某些本發(fā)明化合物，因為磷酸酯基可改變血清中化合物的代謝和半衰期。作為本文中所述合成白藜蘆醇的磷酸酯衍生物的實施例，但不限于該實施例，最好在其它羥基被氟、酯和硝基氧基(即硝酸酯或硝酸酯基)置換之后發(fā)生。
先按實施例1中所述合成、分離和純化白藜蘆醇的單一硝基氧基取代的衍生物(例如3-[(E)-2-(4-羥基-苯基)-乙烯基]-5-硝基氧基-苯酚)。將單一硝基氧基取代的衍生物(4g)和N，N-(二甲氨基)吡啶(0.2g)的無水乙腈(30ml)溶液冷卻至-10℃，加入四氯化碳(5當量)和DIEA(2當量)。在-10℃和氬氣下，將混合物攪拌30min，加入磷酸二芐酯(1當量)，將溶液攪拌12小時，然后傾入0.5M磷酸二氫鉀。將混合物用乙酸乙酯萃取，將有機相的溶劑真空除去，得到有色油狀物。使其經(jīng)歷快速柱層析(4∶1己烷/乙酸乙酯)，將磷酸酯產(chǎn)物回收，為有色油狀物。
在0℃下，向該磷酸酯產(chǎn)物的無水二氯甲烷(15ml)溶液中加入溴代三甲基硅烷(2當量)，將混合物攪拌2小時。加入水(10ml)，將溶液攪拌1小時，用乙酸乙酯洗滌，將水相冷凍干燥至白色固體。向該固體的乙醇(30ml)溶液中加入甲醇鈉(0.6g)，將懸浮液攪拌12小時。將溶劑真空除去，將得到的有色油狀物溶于水。將溶液用乙酸乙酯洗滌，然后冷凍干燥，得到高收率、高純度含具有磷酸酯基、羥基和硝基氧基的白藜蘆醇衍生物混合物的無色固體。通過硅膠層析，將需要的衍生物分離和純化。
最好，可用該合成方法使磷酸酯代替羥基取代本發(fā)明任何化合物。
實施例96合成本發(fā)明乙?；苌锏姆椒ㄗ詈?，可使乙?；媪u基取代本發(fā)明某些化合物，因為某些乙?；筛淖冇H脂性程度，因而改變血清中化合物的代謝速率和半衰期。例如，將白藜蘆醇的一個或多個羥基置換，形成白藜蘆醇的乙酸酯衍生物降低血清中的代謝速率和延長半衰期。本文中描述最好在加一個或多個硝酸酯(即ONO2或硝酸酯基)基團和在加磷酸酯基前(如果需要如此，但在氟化后)合成白藜蘆醇的乙酸酯衍生物。
將白藜蘆醇(0.5mmol)溶于無水二氯甲烷(5ml)。加入過量無水吡啶，隨后加入1mmol乙酸酐。將得到的溶液在室溫下攪拌5小時。將反應混合物濃縮，再溶于二氯甲烷(20ml)。將有機層用氯化氫溶液(0.1M，10ml)、碳酸氫鈉(飽和，10ml)和鹽水洗滌。有機層經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到高收率和純度的白藜蘆醇乙酸酯衍生物的混合物，其中1、2或所有3個羥基被乙酸酯基置換。各種產(chǎn)物通過硅膠層析純化和分離。
還可用乙酰鹵(例如乙酰氯)或活化乙酸酯(例如N-羥基琥珀酰亞胺酯)合成乙酸酯衍生物。用相同方法，用其它活化酯或酰鹵代替乙酸酐，類似地合成本發(fā)明化合物的其它酯?？扇〈景l(fā)明期望的任何化合物上的任何羥基的此類酯的實例由下式描述 其中R可為C1-18、芳基、雜芳基及其任選取代的衍生物。
最好，可按實施例1-59中所述進行硝酸酯化合成步驟，隨后合成乙酸酯衍生物，通過硅膠層析分離和純化。
實施例97合成用作中間體化合物的本發(fā)明化合物的甲氧基和乙氧基衍生物的方法，由這些中間體化合物合成硝基氧基衍生物，它們?yōu)楸景l(fā)明期望的所有化合物。
最好本發(fā)明某些化合物可具有提供給R基團的甲氧基(OCH3)或乙氧基(OCH2CH3)，因為已知甲氧基和乙氧基為親脂性的，因而可改變體內(nèi)藥物半衰期而不降低其活性。已知芳烴(例如苯、苯酚等)的許多甲氧基和乙氧基衍生物，并容易在市場上得到，或容易通過熟知的方法合成。因此容易得到用于制備1，2-二苯乙烯類和其它多元酚類化合物的構(gòu)體，并可在例如實施例90-94中使用。因此，可合成本申請定義的多元酚和1，2-二苯乙烯，以使R基團可獨立地任選包含甲氧基(OCH3)或乙氧基(OCH2CH3)。
實施例98證明本發(fā)明化合物抗真菌活性的方法用美國專利6,165,998說明的方法證明本發(fā)明抗真菌化合物。簡單地說，將約106個白色念珠菌(C.albicans)或釀酒酵母(S.cerevisiae)細胞暴露于25μg/ml本發(fā)明抗真菌化合物中，持續(xù)45分鐘，未留下可檢測的菌落形成單位。
此外，本發(fā)明抗真菌化合物在鼠科動物全身性念珠菌病模型中有效。本發(fā)明抗真菌化合物延長治療小鼠的平均存活時間和存活時間中值。IP給予化合物，產(chǎn)生與口服陽性對照化合物氟康唑相似的存活方式。本發(fā)明抗真菌化合物和氟康唑均減少治療動物腎的可恢復菌落。當經(jīng)口給予建立的全身性念珠菌(Candida)感染的小鼠時，本發(fā)明抗真菌化合物也有效。通過測量存活時間、治愈百分率和腎負擔(burden)，證明經(jīng)口給予化合物的效力與氟康唑相似。本發(fā)明抗真菌化合物還對耐氟康唑的白色念珠菌(C.albicans)菌株引起的全身性念珠菌病有效。
實施例99證明本發(fā)明化合物抗癌活性的方法按美國專利5,145,839說明的方法，用以下動物癌癥模型和用本發(fā)明化合物治療，證明本發(fā)明化合物的抗癌活性。
按每組10只，將具有淋巴瘤YC8(腹水型)的O BALB C小鼠和具有歐利希氏(Ehrlich)腹水細胞的Swiss小鼠(20-22g，Charles River育種)隨機分組。每組分別接受組I對照，腫瘤細胞和NaCl等滲溶液(0.2ml/小鼠，2次/日，i.p.途徑)；組II具有腫瘤細胞的小鼠接受本發(fā)明化合物0.2ml/小鼠，2次/日，通過i.p給藥；組III具有腫瘤細胞的小鼠接受本發(fā)明化合物0.2ml/小鼠，2次/日，i.p.途徑和i.p給予化療藥物；組IV具有腫瘤細胞的小鼠接受本發(fā)明化合物0.2ml/小鼠，2次/日，i.m給藥。
將具有這些細胞的小鼠的腹水腫瘤細胞加入無菌培養(yǎng)基中，保持15-20天。將0.1ml腹水懸浮液與10ml緩沖液(pH 7.2)(NaCl 7.2g/l；Na2HPO44.3g/l和KH2PO40.4g/l)混合。測定細胞數(shù)目(通過Malassez細胞)，將細胞懸浮液稀釋，以便使細胞數(shù)接近40.000-50.000/ml。立即通過i.p.途徑將0.1ml該懸浮液注射到組I、II和III小鼠中，和通過i.m.途徑注射到組IV小鼠中。
注射腫瘤細胞48小時后組II小鼠接受(i.p)在37℃加熱、在微孔濾膜上過濾的本發(fā)明化合物，連續(xù)5天治療；連續(xù)5天用本發(fā)明化合物和抗生素之一的混合物處理(i.p)組III小鼠；連續(xù)5天組I小鼠(對照)只接受(i.p)等滲溶液；連續(xù)15天組IV小鼠接受(i.m)本發(fā)明化合物。停止治療后，觀察小鼠1或2個月。只考慮身體條件良好的存活動物。因此如該試驗所證實，本發(fā)明化合物可用作抗癌藥物。
實施例100證明本發(fā)明化合物抗糖尿病活性的方法用美國專利6,410,596說明的方法證明本發(fā)明化合物降糖活性。該試驗證實本發(fā)明化合物在C57BL/ks糖尿病(db/db)小鼠，即本領(lǐng)域公認的非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM)模型中降低血漿葡萄糖水平的活性。
實施例101證明本發(fā)明化合物抗病毒活性的方法在鼠流感模型中體內(nèi)評價南方貝殼杉雙黃酮(Robustaflavone)進行體內(nèi)實驗，以證明本發(fā)明化合物在無特異性病原BALB/c小鼠中抗實驗誘發(fā)的流感病毒感染有效。這些實驗基本上按美國專利6,399,654中實施例11說明的方法，用本發(fā)明化合物代替南方貝殼杉雙黃酮進行。
實施例102制備5-硝基氧基-戊酸4-[5，7-二-(5-硝基氧基-戊?；趸?-4-氧代-苯并二氫吡喃-2-基]-苯基酯 合成5-硝基氧基-戊酸在40℃下，將5-溴-戊酸(180mg，1mmol)、硝酸銀(255mg，1.5mmol)在乙腈中的混合物攪拌。通過薄層色譜法(TLC)監(jiān)測反應。結(jié)束后，加入二氯甲烷，將混合物用水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化。
合成5-硝基氧基-戊酸(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯在室溫和N2下，將5-硝基氧基-戊酸(163mg，1mmol)、N-羥基琥珀酰亞胺(173mg，1.5mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺(EDC，288mg，1.5mmol)在二氯甲烷中的混合物攪拌。通過TLC監(jiān)測反應。結(jié)束后，加入二氯甲烷，將混合物用水洗滌。有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。殘渣經(jīng)柱層析純化。
合成柚苷配基的反向酯硝基氧基類似物在室溫或40℃、N2下，將柚苷配基(758mg，1mmol)、5-硝基氧基-戊酸(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯(1.3g，5mmol)和N，N-二異丙基乙胺(646mg，5mmol)在乙腈中的混合物攪拌。通過TLC監(jiān)測反應。結(jié)束后，加入二氯甲烷，將混合物用鹽酸溶液(0.1N)、飽和碳酸氫鈉水溶液和水洗滌。有機層經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化。
或者，用其它活化羧酸類似物(酰氯、酸酐等)制備該產(chǎn)物。
可通過用于本發(fā)明期望的所有化合物的該方法合成反向酯硝基氧基衍生物，例如，提供合成柚苷配基的方法可用于實施例1-59的任何原料化合物，其然后隨后導致生成所述原料化合物的反向酯硝基氧基衍生物而非所述原料化合物的硝基氧基衍生物。
方法1建議的合成“反向酯硝基氧基”化合物的方法 方法2建議的合成“反向酯硝基氧基”化合物的方法
實施例103制備5-硝基氧基-戊酸4-[5，7-二-(5-硝基氧基-戊酰基氧基)-4-氧代-苯并二氫吡喃-2-基]-苯基酯的備選方法 合成5-溴-戊酸(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯在室溫、N2下，將5-溴-戊酸(180mg，1mmol)、N-羥基琥珀酰亞胺(173mg，1.5mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺(EDC，288mg，1.5mmol)在二氯甲烷中的混合物攪拌。通過TLC監(jiān)測反應。結(jié)束后，加入二氯甲烷，將混合物用水洗滌。有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。使殘渣通過柱層析純化。
用活化5-溴-戊酸類似物合成柚苷配基的三-(5-溴-戊酸酯)在室溫或40℃、N2下，將柚苷配基(272mg，1mmol)、5-溴-戊酸(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯(1.39g，5mmol)和N，N-二異丙基乙胺(646mg，5mmol)在乙腈中的混合物攪拌。通過TLC監(jiān)測反應。結(jié)束后，加入二氯甲烷，將混合物用鹽酸溶液(0.1N)、飽和碳酸氫鈉水溶液和水洗滌。有機層經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。使粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化。
或者，用其它活化羧酸類似物(酰氯、酸酐等)制備產(chǎn)物。

合成柚苷配基的反向酯硝基氧基類似物在40℃下，將柚苷配基的三-(5-溴-戊酸酯)(758mg，1mmol)和硝酸銀(850mg，5mmol)在乙腈中攪拌。通過TLC監(jiān)測反應。結(jié)束后，加入二氯甲烷，將混合物用水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮。使粗產(chǎn)物通過柱層析純化。
可通過用于本發(fā)明期望的所有化合物的該方法合成反向酯硝基氧基衍生物，例如，提供合成柚苷配基的方法可用于實施例1-59的任何原料化合物，然后其隨后導致生成所述原料化合物的反向酯硝基氧基衍生物而非所述原料化合物的硝基氧基衍生物。
權(quán)利要求
1.一種誘導ApoA1表達導致血液HDL水平升高而血液膽固醇水平降低的化合物，所述化合物包含可供氧化氮部分和清除自由基的抗氧化劑分子。
2.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物包括含以下結(jié)構(gòu)的黃酮類化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10或R13或R14中至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2；X可為O、CR13或NR13；Y可為CO[仍然保留6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR14或NR14；和Z可為單鍵或雙鍵。
3.一種藥用組合物，所述組合物包含權(quán)利要求2的黃酮類化合物以及組合應用的藥學上可接受的載體。
4.一種治療患者的心血管、膽固醇或脂質(zhì)相關(guān)疾病的方法，所述方法包括給予需要治療的患者治療有效量的權(quán)利要求2的黃酮類化合物。
5.一種在患者中誘導ApoA1表達同時提供抗氧化劑活性的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求2的黃酮類化合物。
6.一種降低患者血清膽固醇的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求2的黃酮類化合物。
7.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物包括含以下結(jié)構(gòu)的異黃酮類化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10或R13或R14中至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；且其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2；X可為O、CR13或NR13；Y可為CO[仍然保留6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR14或NR14；和Z可為單鍵或雙鍵。
8.一種藥用組合物，所述組合物包含權(quán)利要求7的異黃酮類化合物以及組合應用的藥學上可接受的載體。
9.一種治療患者的心血管、膽固醇或脂質(zhì)相關(guān)疾病的方法，所述方法包括給予需要治療的患者治療有效量的權(quán)利要求7的異黃酮類化合物。
10.一種在患者中誘導ApoA1表達同時提供抗氧化劑活性的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求7的異黃酮類化合物。
11.一種降低患者血清膽固醇的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求7的異黃酮類化合物。
12.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物包括含以下結(jié)構(gòu)的1，2-二苯乙烯化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2；和其中X可為單鍵、雙鍵或三鍵。
13.一種藥用組合物，所述組合物包含權(quán)利要求12的1，2-二苯乙烯化合物以及組合應用的藥學上可接受的載體。
14.一種治療患者的心血管、膽固醇或脂質(zhì)相關(guān)疾病的方法，所述方法包括給予需要治療的患者治療有效量的權(quán)利要求12的1，2-二苯乙烯化合物。
15.一種在患者中誘導ApoA1表達同時提供抗氧化劑活性的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求12的1，2-二苯乙烯化合物。
16.一種降低患者血清膽固醇的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求12的1，2-二苯乙烯化合物。
17.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物包括含以下結(jié)構(gòu)的查爾酮化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10或R13或R14中至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2；X可為單鍵或雙鍵；Y可為單鍵或雙鍵；Z可為CO[酮]、CR13或NR13。
18.一種治療患者的心血管、膽固醇或脂質(zhì)相關(guān)疾病的方法，所述方法包括給予需要治療的患者治療有效量的權(quán)利要求17的化合物。
19.一種在患者中誘導ApoA1表達同時提供抗氧化劑活性的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求17的化合物。
20.一種降低患者血清膽固醇的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求17的化合物。
21.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物包括含以下結(jié)構(gòu)的多元酚化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可各自獨立為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO2]、甲氧基[OCH3]、乙氧基[OCH2CH3]、氟[F]、氯[Cl]、CF3、CCl3、磷酸酯基、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯綴合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)綴合物]，條件是R1-R10中的至少一個為硝基氧基、R12、OR12或OCOR12；和其中OCOR表示 且R為R11或R12，其中R11為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代和任選為支鏈，并可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，和其中R12為C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述衍生物任選被取代，任選為支鏈，可具有一個或多個被S、N或O置換的C原子，且含一個或多個ONO2；和X可為C、S、(CO)、SO、AKA酮、(SO2)N、(CO)C、(CO)N、(CO)O、C-N[單鍵]、C＝N[雙鍵]、C-O、N-O、N-N[單鍵]或N＝N[雙鍵]。
22.一種治療患者的心血管、膽固醇或脂質(zhì)相關(guān)疾病的方法，所述方法包括給予需要治療的患者治療有效量的權(quán)利要求21的化合物。
23.一種在患者中誘導ApoA1表達同時提供抗氧化劑活性的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求21的化合物。
24.一種降低患者血清膽固醇的方法，所述方法包括給予所述患者權(quán)利要求21的化合物。
全文摘要
誘導ApoAl表達的化合物，該化合物包含可供氧化氮部分和清除自由基部分。優(yōu)選，提供用于治療患者的包括高膽固醇血癥、血管氧化性應激反應和內(nèi)皮功能障礙的疾病的1，2－二苯乙烯、多元酚、黃酮類化合物和異黃酮類化合物的氧化氮衍生物及其使用方法。
文檔編號C07D215/233GK1893957SQ200480036099
公開日2007年1月10日 申請日期2004年10月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月7日
發(fā)明者N·黃, J·塔克, D·R·麥卡弗里 申請人:雷斯弗洛吉克斯公司