專利名稱：2－(3,4－二甲基苯基)－4－{[2－羥基－3′－(1h－四唑－5－基)聯(lián)苯基－3－基]－亞 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及改善的血小板生成素(此后簡(jiǎn)稱為TPO)擬似物(mimetic)，2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基(hydrazono)}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮的膽堿鹽。該化合物由式I表示 本發(fā)明化合物適用于作為TPO受體激動(dòng)劑，具體是用于促進(jìn)血小板的生成。
發(fā)明詳述用于TPO受體激動(dòng)劑，特別是用于促進(jìn)血小板生成及治療血小板減少癥的2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑合物和酯，已經(jīng)公開在國(guó)際申請(qǐng)PCT/US01/16863中并且要求保護(hù)，該申請(qǐng)的國(guó)際申請(qǐng)日為2001年5月24日，國(guó)際公開號(hào)為WO 01/89457，國(guó)際
公開日為2001年11月29日(實(shí)施例12的化合物)，其全部公開在此引入作為參考。國(guó)際申請(qǐng)PCT/US01/16863沒有具體公開其中任何一個(gè)化合物的鹽的形式。
現(xiàn)在，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮的膽堿鹽比其游離酸具有許多優(yōu)點(diǎn)。游離酸水溶性很差，其不利于被制備成藥物劑型，并降低了化合物在體內(nèi)的生物利用度和口服暴露率。
然而，該游離酸作為TPO受體的激動(dòng)劑特別有用，特別是用于促進(jìn)血小板的生成及治療血小板減少癥。2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮的膽堿鹽具有溶解度及生物利用度提高的其他優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明化合物2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮膽堿(此后簡(jiǎn)稱為-“活性成分”或“化合物A”)適用于作為TPO受體激動(dòng)劑，特別是用于促進(jìn)血小板的生成及治療血小板減少癥。活性成分可以按照常規(guī)劑型進(jìn)行給藥，所述劑型的制備可按照本領(lǐng)域已知的技術(shù)，如國(guó)際申請(qǐng)PCT/US01/16863所述，通過將活性成分與常用藥用載體或稀釋劑結(jié)合而進(jìn)行。
適當(dāng)?shù)?，本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括藥物組合物，其含有作為活性成分的2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮膽堿，并聯(lián)合有藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明化合物A可通過經(jīng)口、胃腸外、皮內(nèi)或局部給藥途徑給藥。本文所用術(shù)語胃腸外包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、陰道內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥。通常優(yōu)選經(jīng)口給藥。化合物A可被配制成適于各種給藥途徑的劑型，包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑或顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物通常與至少—種惰性稀釋劑混合。經(jīng)口劑型還可含有在通常實(shí)踐中的除惰性稀釋劑外的其它物質(zhì)，如潤(rùn)滑劑、助流劑和抗氧化劑。在膠囊、片劑和丸劑中，其劑型還可含有緩沖劑。片劑和丸劑還可被制備為緩釋劑型。
本發(fā)明用于胃腸外給藥的制劑包括無菌水溶液，也可采用無水懸浮乳劑。這些劑型還可包含助劑如防腐劑、潤(rùn)濕劑、等滲劑、緩沖劑、乳化劑和分散劑。它們可通過例如細(xì)菌截留器過濾、向組合物中加入滅菌劑、射線照射組合物或加熱組合物而滅菌。
本文所用“膽堿”意指(2-羥基乙基)三甲基銨。
上述藥物劑量單元中本發(fā)明活性成分的劑量為有效、無毒劑量，優(yōu)選在0.001-100mg/kg總體重的范圍，更優(yōu)選0.001-50mg/kg。當(dāng)治療需要TPO擬似物的患者時(shí)，優(yōu)選每日1-6次地經(jīng)口或非腸胃給藥選定劑量。優(yōu)選的非腸胃給藥包括局部、直腸，經(jīng)皮、注射或持續(xù)輸液。人類經(jīng)口給藥劑量單元優(yōu)選包括0.05-3500mg活性成分，最優(yōu)選0.5-1,000mg活性成分。優(yōu)選使用較低劑量的經(jīng)口給藥。然而，在對(duì)于患者是安全和方便的情況，也可以施用高劑量非腸胃給藥。上述劑量涉及以游離酸表示的活性成分的優(yōu)選量。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)肯定，活性成分個(gè)體劑量的最佳給藥數(shù)量及間隔視治療疾病的性質(zhì)及程度，給藥劑型、途徑及部位，治療的具體患者而定，并且該最佳方案可通過常用技術(shù)確定。本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)當(dāng)明白，最佳療程，即既定時(shí)間內(nèi)每天給予活性成分劑量的次數(shù)可經(jīng)本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常用的確定療程的試驗(yàn)進(jìn)行確定。
一般而言，本發(fā)明化合物的制備可通過將游離酸-2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮溶解于適當(dāng)有機(jī)溶劑如乙醇和乙酸乙酯混合物中，過濾所得化合物以除去雜質(zhì)，然后向該溶液中加入例如1.5當(dāng)量氫氧化膽堿(choline hydroxide)在有機(jī)溶劑(優(yōu)選與水混溶的溶劑如MeOH或THF)中的溶液。通常經(jīng)過3-24小時(shí)，將沉淀出本發(fā)明的化合物。然后過濾并干燥，例如真空干燥或高溫空氣干燥。
氫氧化膽堿的50wt.％甲醇溶液購自Aldrich Chemical Company，Milwaukee，Wisconsin。
有機(jī)溶劑可購自Aldrich Chemical Company，Milwaukee，Wisconsin。
由于本發(fā)明的藥學(xué)活性化合物具有TPO擬似物活性，其在治療血小板減少癥以及其它伴有血小板生成減少的病情中顯示了治療用途。
如本文所述，血小板減少癥的治療伴隨著提高血小板的產(chǎn)生。
如本文所用的術(shù)語“血小板減少癥”及其衍生疾病廣義地解釋為血小板低于所認(rèn)為的正常數(shù)目或健康個(gè)體所需數(shù)目的任何疾病。已知血小板減少癥的許多誘發(fā)因素，包括但不限于放療、化療、免疫治療、免疫血小板生成紫癜(immune thrombocytopenic purpura)(ITP，Bussel J.B.，Seminars inHematology，2000，37，Suppl 1，1-49)、脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)、先天性貧血、AML、CML、病毒感染(包括但不限于HIV、肝炎C、細(xì)小病毒)、肝病、脊髓切除(myeloablation)、骨髓移植、干細(xì)胞移植、外周血干細(xì)胞移植、祖細(xì)胞缺乏(progenitor cell defect)、干細(xì)胞和祖細(xì)胞中的多態(tài)性(polymorphisms)、Tpo缺乏、嗜中性白血球減少癥(Sawai，N.J.Leukocyte Biol.，2000，68，137-43)、樹狀細(xì)胞轉(zhuǎn)移(Kuter D.J.Seminars in Hematology，2000，37，Suppl 4，41-49)、增殖、激活或分化。無論引起疾病的單個(gè)因素或多個(gè)因素為何，本發(fā)明的藥物活性化合物適用于治療血小板減少癥。本發(fā)明藥物活性化合物也可在疾病起因未知或還未確認(rèn)時(shí)，用于治療血小板減少癥。
已證明TPO作為動(dòng)員劑(mobilizer)促使干細(xì)胞分化為外周血(NeumannT.A.etal.，Cvtokines.Cell.& Mol.Ther.，2000，6，47-56)。該活性可以與干細(xì)胞動(dòng)員劑如G-CSF產(chǎn)生協(xié)同作用(Somolo et al.，Blood，1999，93，2798-2806)。因此，本發(fā)明的化合物適用于在對(duì)接受脊髓切除化療的患者進(jìn)行用于造血干細(xì)胞移植的白細(xì)胞分離(leukapheresis)之前增加供體循環(huán)中干細(xì)胞的數(shù)量。
同樣地，TPO刺激骨髓細(xì)胞，特別是粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞系(lineage)的生長(zhǎng)(Holly et al.，US-5989537)。粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞祖細(xì)胞(progenitor)是骨髓細(xì)胞系的細(xì)胞，其成熟為嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞(basophils)和嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils)。本發(fā)明所述化合物因此在患中性白細(xì)胞減少疾病的患者中具有刺激嗜中性白細(xì)胞增殖的治療應(yīng)用。
本發(fā)明化合物的預(yù)防用途是在當(dāng)血液或血小板預(yù)計(jì)要降低時(shí)而產(chǎn)生的用途。本發(fā)明化合物A的預(yù)防用途是在預(yù)計(jì)血液或血小板損失之前，產(chǎn)生血小板的積累或開始產(chǎn)生血小板。本發(fā)明化合物的預(yù)防用途包括但不限于外科移植、外科手術(shù)、在生孩子和腸保護(hù)前的麻醉。
已經(jīng)有顯示人樹狀細(xì)胞(human dendritic cells)可表達(dá)TPO受體(Kumamoto et al.，Br.J.Haem，1999，105，1025-1033)，且TPO是樹狀細(xì)胞的有效動(dòng)員劑。本發(fā)明的TPO擬似化合物由于可以增加樹狀細(xì)胞的活性和轉(zhuǎn)移性，也可以用作疫苗佐劑(vaccine adjuvant)?；衔顰通過增加樹狀細(xì)胞的活性和轉(zhuǎn)移力也可用作免疫佐劑，可以與經(jīng)口、經(jīng)皮或皮下遞送的疫苗和/或免疫調(diào)節(jié)劑進(jìn)行聯(lián)合給藥。
已知TPO具有各種效果，包括對(duì)巨核細(xì)胞、血小板和干細(xì)胞的抗-細(xì)胞凋亡/生存的效果，以及對(duì)干細(xì)胞和巨核細(xì)胞的增殖的效果(Kuter D.J.Seminars in Hematology，2000，37，41-9)。這些TPO活性有效地增加了干細(xì)胞和祖細(xì)胞的數(shù)量，因此當(dāng)將TPO與其它引導(dǎo)分化的細(xì)胞因子聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，具有協(xié)同作用。
本發(fā)明另一方面提供了在需要其的哺乳動(dòng)物包括人體內(nèi)治療變性疾病的方法，其包括向該哺乳動(dòng)物給予治療有效量的本發(fā)明化合物A。
本文所用的術(shù)語變性疾病或其衍生詞，意指選自下列的疾病狀態(tài)神經(jīng)系統(tǒng)病癥，包括橫貫性脊髓炎(transverse myelitis)、多發(fā)性硬化(multiplesclerosis)、腦或脊髓創(chuàng)傷后的脫髓鞘(demyelination)、急性腦損傷(acute braininjury)、頭部創(chuàng)傷(head trauma)、外周神經(jīng)損傷(peripheral nerve injury)、缺血性腦損傷(ischaemic brain inury)、脊髓損傷(spinal cord injury)、CNS的遺傳性髓磷脂疾病(hereditary myelin disorder of the CNS)、癲癇(epilepsy)、圍產(chǎn)期窒息(perinatal asphyxia)、窒息(asphyxia)、缺氧癥(anoxia)、癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus)和中風(fēng)(stroke)；神經(jīng)變性疾病如阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease)、帕金森病(Parkinson disease)、亨延頓氏舞蹈病(Huntington’sdisease)、肌萎縮性側(cè)索硬化(amyotrophic lateral sclerosis)；在治療、修復(fù)和/或再生組織中，例如在心血管病癥、心肌梗塞和心血管疾病/組織中，以及治療、修復(fù)和/或再生肝疾病/組織、胃腸疾病/組織以及腎疾病/組織中；在治療AIDS中；以及在治療糖尿病/糖尿病癥(diabetes/diabetes mellitus)中。
中風(fēng)是指腦血管意外(cerebral vascular incident，CVI)并包括急性血栓栓塞性中風(fēng)。中風(fēng)包括病灶式缺血或全身缺血。還包括暫時(shí)的腦缺血性發(fā)作和其它伴隨腦缺血的腦血管問題。患者特別地經(jīng)歷了頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)，或經(jīng)歷了其它一般性腦血管或血管外科過程，或診斷血管過程包括腦血造影等。
其它意外是頭部創(chuàng)傷、脊髓創(chuàng)傷或一般性缺氧癥、氧不足、低血糖、血壓過低引起的損傷以及在內(nèi)褶(embole)、過融合(hyperfusion)和氧不足過程期間所見的類似損傷。
化合物A適用于許多意外，例如在心臟旁路手術(shù)期間、在顱內(nèi)出血意外中、在圍產(chǎn)期窒息中、在心跳停止中以及癲癇持續(xù)狀態(tài)。
本發(fā)明由此提供了治療下列疾病狀態(tài)的方法，所述疾病選自神經(jīng)系統(tǒng)病癥，包括橫貫性脊髓炎、多發(fā)性硬化、腦或脊髓創(chuàng)傷后的脫髓鞘、急性腦損傷、頭部創(chuàng)傷、脊髓損傷、外周神經(jīng)損傷、缺血性腦損傷、CNS的遺傳性髓磷脂疾病、癲癇、圍產(chǎn)期窒息、窒息、缺氧癥、癲癇持續(xù)狀態(tài)和中風(fēng)；神經(jīng)變性疾病如阿爾茨海默病、帕金森病、亨延頓氏舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索硬化；提供了例如在心血管病癥、心肌梗塞和心血管疾病/組織中治療、修復(fù)和/或再生組織的方法；以及治療、修復(fù)和/或再生肝疾病/組織、胃腸疾病/組織以及腎疾病/組織的方法；治療AIDS的方法；以及治療糖尿病的方法；該方法包括給予有效量的化合物A。
如本文所述，變性疾病的治療是通過給予化合物A而實(shí)現(xiàn)的，且不限于任何特別的作用機(jī)理。如本文所述的治療變性疾病的作用機(jī)理是通過刺激存活和/或產(chǎn)生干細(xì)胞和/或提高干細(xì)胞功能和/或壽命而進(jìn)行的。
已知變性疾病具有許多誘發(fā)因素，包括但不限于，病毒感染(包括但不限于HIV、肝炎C，細(xì)小病毒)和肝病、老年化、自身免疫疾病、神經(jīng)疾病/損害、肝病/損害、腎病/損害、胃腸疾病/損害、心血管疾病/損害和胰病/損害。本發(fā)明涉及變性疾病的治療，而不考慮引起病情的因素。本發(fā)明化合物，化合物A，還適用于治療病情未知或仍有待確定的變性疾病。
當(dāng)患者被懷疑或存在患變性疾病如中風(fēng)的危險(xiǎn)、或者正患有中風(fēng)，通過本發(fā)明的方法，熟練的醫(yī)師將能夠確定給藥的適當(dāng)情況。
無論何時(shí)預(yù)見到將患變性疾病時(shí)，均可以考慮本發(fā)明化合物在預(yù)防上的應(yīng)用。
化合物A在治療變性疾病上的能力可以由在CD34+祖細(xì)胞分化測(cè)試中的活性證明。
CD34+祖細(xì)胞分化測(cè)試測(cè)試化合物A在刺激來自人骨髓的早期CD34+祖細(xì)胞存活和分化上的能力。在該測(cè)試中，將純化的人CD34+祖細(xì)胞與化合物A一起在液體培養(yǎng)基中孵育7天，然后通過流式細(xì)胞儀測(cè)量表達(dá)早期干細(xì)胞標(biāo)記物CD34的細(xì)胞數(shù)目，并與未處理的細(xì)胞進(jìn)行比較(參見Liu et al.Bone MarrowTransplantation.24247-52，1999)。
本發(fā)明因此提供了一種治療變性疾病的方法，包括向需要其的受試者給予有效量的化合物A。由于化合物A具有治療變性疾病的能力，因此其提供了治療上述疾病狀態(tài)的方法。
作為該發(fā)現(xiàn)的一部分，在體內(nèi)給予化合物A適用于治療帕金森病、亨廷頓氏病、多發(fā)性硬化病和缺血性腦損傷。表明干細(xì)胞，包括成年骨髓干細(xì)胞，可有效治療多發(fā)性硬化病；Stangel M.Et al.，Progress in Neurobiology，68(5)361-76，2002Dec。神經(jīng)干細(xì)胞及其在帕金森病、亨廷頓氏病、多發(fā)性硬化病和缺血性腦損傷中的應(yīng)用描述于Ostenfield T.et al.，Advances &Technical standards in Neurosurgery，283-89，2003中。
此外，作為該發(fā)現(xiàn)的一部分，在體內(nèi)給予化合物A適用于再生和修復(fù)應(yīng)答干細(xì)胞治療的組織。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易知曉或易于獲知這些組織。例如，表明干細(xì)胞適用于治療心肌梗塞、心血管病癥和心血管疾病的患者；Stamm C.et al.，Lancet.361(9351)45-6，2003and Semsarian C.，InternalMedicine Journal.32(5-6)259-65，2002。表明干細(xì)胞可治療、修復(fù)和/或再生肝病/組織、胃腸疾病/組織和腎病/組織；Choi D.et al.，Cell transplantation，11(4)359-68，2002，Poulsom R.et al.，Journal of Pathology，197(4)441-56，2002andAlison M.et al.，Journal of Pathology.197(4)419-23，2002。
此外，作為該發(fā)現(xiàn)的一部分，在體內(nèi)給予化合物A適用于治療糖尿病。表明干細(xì)胞可治療糖尿病，Berna G，et al.，Biomedicine & Pharmacotherapy，55(4)206-12，2001 and Beilhack GF.，et al.，Diabetes，52(1)59-68，2003。
本發(fā)明另一方面提供了將本發(fā)明化合物A與其它活性成分的聯(lián)合給藥(co-administrating)的方法，該其它活性成分例如其它已知的治療變性疾病和/或血小板減少癥的化合物，或已知的與TPO擬似物聯(lián)合使用時(shí)有效的其它化合物，其中所述變性疾病和/或血小板減少癥包括化療誘發(fā)的血小板減少癥以及骨髓移植和其它伴有抑制血小板生成的病情。
本文所用術(shù)語“聯(lián)合給藥”或其衍生詞，是指同時(shí)給予或以任何單獨(dú)的相繼方式給予化合物A和已知治療變性疾病和/或血小板減少癥的其它活性成分，其中所述的變性疾病和/或血小板減少癥包括化療誘發(fā)的血小板減少癥以及骨髓移植和其它伴有抑制血小板生成的病情。如本文所用的術(shù)語其它活性成分包括在與TPO或TPO擬似物一起給藥時(shí)，已知具有或證明具有優(yōu)勢(shì)的任何化合物或藥物。優(yōu)選地，如果不是同時(shí)給藥時(shí)，將化合物在相互接近的時(shí)間內(nèi)給藥。此外，化合物是否以相同劑型給藥并不重要，即一種化合物可以局部給藥而另一種化合物可以經(jīng)口給藥。
本發(fā)明的TPO擬似化合物還可以與其它已知的、在生存或增殖上對(duì)細(xì)胞有作用的藥物聯(lián)合，而用于在生存或增殖上對(duì)細(xì)胞發(fā)生作用。這些其它藥劑包括但不限于G-CSF，GM-CSF，TPO，M-CSF，EPO，Gro-β，IL-11，SCF，F(xiàn)LT3配體，LIF，IL-3，IL-6，IL-1，祖細(xì)胞生成素(Progenipoietin)，NESP，SD-01或IL-5或任何前述藥物的生物活性衍生物，KT6352(Shiotsu Y.et al.，Exp.Hemat.1998，26，1195-1201)，子宮褐質(zhì)(uteroferrin)(Laurenz JC.，et al.Comp.Biochem.& Phys.，Part A.Physiology.，1997，116，369-77)，F(xiàn)K23(Hasegawa T.，et al.Int.J.Immunopharm.，1996，8103-112)，和其它被認(rèn)為對(duì)干細(xì)胞、祖細(xì)胞或其表達(dá)TPO受體的細(xì)胞具有抗細(xì)胞凋亡、生存或增殖特性的分子。
用于與本發(fā)明化合物A聯(lián)合的其它活性成分例如包括但不限于化學(xué)保護(hù)或脊髓保護(hù)劑如G-CSF，BB 10010(Clemons et al.，Breast Cancer Res.Treatment，1999，57，127)、依硫磷酸(amifostine)(Ethyol)(Fetscher et al.，Current Opinion in Hemat.，2000，7，255-60)，SCF，IL-11，MCP-4，IL-1-β，AcSDKP(Gaudron et al.，Stem Cells，1999，17，100-6)，TNF-a，TGF-b，MIP-la(Egger et al.，Bone Marrow Transi.，1998，22(Suppl.2)，34-35)和其他被確認(rèn)具有抗細(xì)胞凋亡、生存或增殖性能的分子。
此外用于與本發(fā)明TPO擬似化合物聯(lián)合用藥的其它活性成分包括但不限于干細(xì)胞(stem cell)，巨核細(xì)胞(mygakaryocyte)，嗜中性白細(xì)胞動(dòng)員劑(neutrophil mobilizer)如化學(xué)治療劑(即，環(huán)磷酰胺(cytoxan)，依托泊甙(etoposide)，順氯氨鉑(cisplatin)，Ballestrero A.et al.，Oncology，2000，59，7-13)，趨化因子，IL-8，Gro-β(King，A.G et al.J.Immun.，2000，164，3774-82)，受體激動(dòng)劑或拮抗劑抗體，小分子的細(xì)胞因子或受體激動(dòng)劑或拮抗劑，SCF，F(xiàn)lt3配體，粘附分子抑制劑或抗體，如抗-VLA-4(Kikuta T.et al.，Exp.Hemat.，2000，28，311-7)或抗-CD44(Vermeulen M.et al.，Blood，1998，92，894-900)，細(xì)胞因子/趨化因子/白細(xì)胞介素或受體激動(dòng)劑或拮抗劑抗體，MCP-4(Berkhout TA.，et al.，J.Biol.Chem.，1997，272，16404-16413；UguccioniM.et al.，J.Exp.Med.，1996，183，2379-2384)。
本發(fā)明化合物A適用于在需要其的哺乳動(dòng)物特別是人體內(nèi)作為TPO擬似物。
在包括人的哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)TPO模擬活性的本發(fā)明方法，包括向需要該活性的受試者給予有效TPO模擬量的本發(fā)明化合物A。
本發(fā)明還提供了化合物A在制備用于治療的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了化合物A在制備用作TPO擬似物的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了化合物A在制備用于增加血小板生成的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了化合物A在制備用于治療血小板減少癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了化合物A在制備用于治療變性疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了用于治療變性疾病的藥物組合物，其含有化合物A和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還提供了用作TPO擬似物的藥物組合物，其含有化合物A和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還提供了用于治療血小板減少癥的藥物組合物，其含有化合物A和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還提供了用于增加血小板生成的藥物組合物，其含有化合物A和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還提供了用于治療變性疾病的藥物組合物，其含有化合物A和藥學(xué)上可接受的載體。
本文所用術(shù)語“治療”及其衍生詞意指預(yù)防性和治療性的治療(prophylactic and therapeutic therapy)。
本說明書中所引用的所有出版物，包括但不限于專利和專利申請(qǐng)，在此被全文引入作為參考。
當(dāng)根據(jù)本發(fā)明給予本發(fā)明化合物時(shí)，預(yù)期沒有不可接受的毒性作用。
所考慮的等價(jià)物-本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解為，化合物A還可存在互變異構(gòu)體的形式。化合物A的互變形式可包括但不限于由下式(II和III)表示的結(jié)構(gòu) 所有這些化合物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)并固有地包括在化合物A定義中。
下面的實(shí)施例進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明。這些實(shí)施例并非意在限制如上所定義的以及如權(quán)利要求所定義的本發(fā)明范圍。
實(shí)施例12-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮膽堿的制備 將2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮，1.1g粗橙色固體，在7mL乙酸乙酯和12mL乙醇(190proof)中于約40℃進(jìn)行攪拌。向該懸浮液中加入2.5ml氫氧化膽堿(1N)的甲醇溶液得到深橙褐色溶液。將水(1ml)加入該深色溶液并于約35℃攪拌該混合物約3小時(shí)。期間，溶液中出現(xiàn)沉淀。再于約20℃攪拌該懸浮液72小時(shí)，然后通過過濾分離固體并于約40℃干燥12小時(shí)得到1.2克(87％收率)標(biāo)題化合物，為淺橙色結(jié)晶固體。
在Philips X′Pert Pro衍射儀上通過X-射線粉末衍射證明該固體為結(jié)晶。樣品經(jīng)下面參數(shù)掃描掃描范圍2-35°2-θ；發(fā)生器功率40kV，40mA；射線源Cu Kα；掃描類型持續(xù)掃描；每步時(shí)間10.16秒；步徑0.0167°2-θ每步；樣品旋轉(zhuǎn)速度25rpm。下面是X-射線粉末圖樣和峰值。

DSC數(shù)據(jù)表明固體熔融分解的吸熱端點(diǎn)約為235.3℃。
Proton NMR(400MHz，MeOH-d4參照于MeOH-d4δ3.32)δ2.28(s，3H)，2.31(s，3H)，2.39(s，3H)，3.21(s，9H)，3.47-3.49(t，2H)，3.99-4.01(t，2H)，7.10-7.13(dd，1H)，7.17-7.18(d，1H)，7.20-7.21(dd，1H)，7.55-7.60(m，3H)，7.68(br.s，1H)，7.76-7.77(dd，1H)，8.06-8.07(dd，1H)，8.21(s，1H)IR Data(DATR)3023，2920，2853，1648，1606，1541，1503，1457，1410，1367，1334，1267，1257，1224，1191，1155，1135，1117，1097，1054，1024，1000，958，920，904，874，851，806，784，773，760，726，708，681cm-1實(shí)施例22-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮膽堿的制備將2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞聯(lián)氨基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮(2.0g，4.29mmole)懸浮于乙醇(17ml)和水(1.85ml)中。在環(huán)境溫度下用氫氧化膽堿(2.68ml，2.2當(dāng)量)(以45％wt甲醇溶液提供)處理該棕色漿液，形成深紫色溶液，將該溶液攪拌30分鐘。過濾該溶液，并經(jīng)乙醇(4ml)漂洗。將三氟乙酸(0.36ml，1當(dāng)量)在水(1.85ml)中的溶液加入濾液中形成橙紅色漿液，然后將該漿液于78℃(回流)加熱并攪拌30分鐘。然后將該反應(yīng)冷卻至60℃并經(jīng)乙醇(25ml，12.5體積)處理，于60℃再攪拌1小時(shí)。將懸浮液冷至環(huán)境溫度并攪拌17小時(shí)。過濾后，用乙醇(8ml，4體積)洗滌濾餅。所得固體于50℃真空干燥得到2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮膽堿，為橙色固體(2.02g，83％)。
質(zhì)子NMR和IR數(shù)據(jù)與標(biāo)題化合物一致。
實(shí)施例3片劑組合物將乳糖、微晶纖維素、羥基乙酸淀粉鈉、硬脂酸鎂和2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞聯(lián)氨基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮膽堿按照下表1的比例摻合。然后將混合物壓制成片劑。
表1
實(shí)施例4可注射的胃腸外組合物用于給藥的2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮膽堿的可注射形式，是通過在1.0ml生理鹽水中攪拌5.0mg的該化合物而制備。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案如上所述地進(jìn)行了舉例說明，然而應(yīng)當(dāng)明白，本發(fā)明不局限于此處公開的具體說明，并保留所有在權(quán)利要求范圍內(nèi)修改的權(quán)利。
權(quán)利要求
1.2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮膽堿。
2.藥物組合物，其含有2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3′-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]-亞肼基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮膽堿和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
3.在需要的哺乳動(dòng)物中治療血小板減少癥的方法，其包括向該哺乳動(dòng)物給予治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
5.在需要的哺乳動(dòng)物中增加血小板生成的方法，其包括向該哺乳動(dòng)物給予治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
7.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述化合物經(jīng)口給予。
8.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述化合物經(jīng)胃腸外給予。
9.激動(dòng)受試者中TPO受體的方法，其包括給予有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
10.制備藥物組合物的方法，其中該藥物組合物包含藥學(xué)上可接受載體或稀釋劑和有效量的權(quán)利要求1所述化合物，該方法包括使權(quán)利要求1所述化合物與藥學(xué)上可接受載體或稀釋劑相聯(lián)合。
11.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，進(jìn)一步包括共同給予治療有效量的選自下列的藥劑集落刺激因子、細(xì)胞因子、趨化因子、白介素或細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑或拮抗劑、可溶性受體、受體激動(dòng)劑或拮抗劑抗體、或與一種或多種所述藥劑具有同樣作用機(jī)制的小分子或肽類。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述藥物選自G-CSF、GM-CSF、TPO、M-CSF、EPO、Gro-beta、IL-11、SCF、FLT3配體、LIF、IL-3、IL-6、IL-1、Progenipoietin、NESP、SD-01、IL-8、或IL-5或任何一種所述藥物的生物活性衍生物。
13.根據(jù)權(quán)利要求2的藥物組合物，進(jìn)一步包括共同給予治療有效量的選自下列的藥劑集落刺激因子、細(xì)胞因子、趨化因子、白介素或細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述藥劑選自G-CSF、GM-CSF、TPO、M-CSF、EPO、Gro-beta、IL-11、SCF、FLT3配體、LIF、IL-3、IL-6、IL-1或IL-5或任何一種所述藥劑的生物活性衍生物。
15.增加捐獻(xiàn)者血小板生成的方法，其包括在血小板提取、獻(xiàn)血或捐獻(xiàn)血小板之前向該捐獻(xiàn)者給予治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
16.增加捐獻(xiàn)者外周血干細(xì)胞數(shù)量的方法，其包括在白細(xì)胞分離之前向該捐獻(xiàn)者給予治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其進(jìn)一步包括共同給予治療有效量的造血細(xì)胞動(dòng)員劑，該動(dòng)員劑選自集落刺激因子、細(xì)胞因子、趨化因子、白介素或細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑、粘附分子拮抗劑或抗體。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述動(dòng)員劑選自G-CSF，GM-CSF，TPO，EPO，Gro-beta，IL-8，環(huán)磷酰胺，VLA-4抑制劑，SCF，F(xiàn)LT3配體，或者G-CSF、GM-CSF、TPO、EPO、Gro-beta或IL-8的生物活性衍生物。
19.提高刺激巨核細(xì)胞成熟和/或血小板生成的體外或離體的方法，其包括向表達(dá)TPO受體的細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
20.提高刺激巨核細(xì)胞成熟和/或血小板生成的體外或離體的方法，其包括向干細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、臍血細(xì)胞或外周血細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中在化療或放療后將巨核細(xì)胞或血小板返回到哺乳動(dòng)物中。
22.促進(jìn)培養(yǎng)物中的干細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、臍血細(xì)胞、外周血細(xì)胞或表達(dá)TPO受體的其它類型的細(xì)胞的存活和/或增殖的體外或離體方法，其包括在含有有效量的權(quán)利要求1所述化合物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述細(xì)胞。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其進(jìn)一步包括共同給予治療有效量的集落刺激因子、細(xì)胞因子、趨化因子、白介素或細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其中在化療或放療后將干細(xì)胞返回到哺乳動(dòng)物中。
25.治療需要的哺乳動(dòng)物包括人中的中性白細(xì)胞減少癥的方法，其包括向該哺乳動(dòng)物給予治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
26.促進(jìn)刺激中性粒細(xì)胞生成的體外或離體的方法，其包括向干細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、臍血細(xì)胞、外周血細(xì)胞或表達(dá)TPO受體的其它類型的細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中在化療或放療后將中性粒細(xì)胞返回到哺乳動(dòng)物中。
28.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述血小板減少癥是由于由化療或放療引起的骨髓抑制導(dǎo)致的。
29.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的血小板減少癥是由于器官移植導(dǎo)致的。
30.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的血小板減少癥是由于骨髓、干細(xì)胞或肝移植導(dǎo)致的。
31.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的血小板減少癥是由于特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)導(dǎo)致的。
32.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的血小板減少癥是由于骨髓異常增生綜合征(MDS)、再生障礙性貧血或白血病導(dǎo)致的。
33.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的血小板減少癥是由于病毒、真菌、微生物或寄生蟲感染導(dǎo)致的。
34.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的血小板減少癥是由于肝功能障礙導(dǎo)致的。
35.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的血小板減少癥是由于外科手術(shù)導(dǎo)致的。
36.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述的血小板減少癥是藥物-誘發(fā)的。
37.制備權(quán)利要求1所述化合物的方法，該方法包括i)將2-(3，4-二甲基苯基)-4-{[2-羥基-3’-(1H-四唑-5-基)聯(lián)苯基-3-基]亞聯(lián)氨基}-5-甲基-2，4-二氫吡唑-3-酮溶解在一種或多種有機(jī)溶劑中以形成溶液；ii)向該溶液中加入一或更多當(dāng)量的氫氧化膽堿；以及iii)分離制備的化合物。
38.治療需要的哺乳動(dòng)物中變性疾病的方法，其包括向該哺乳動(dòng)物體內(nèi)給予治療有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
39.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
40.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中所述變性疾病選自橫貫性脊髓炎、多發(fā)性硬化、腦或脊髓創(chuàng)傷后的脫髓鞘、急性腦損傷、頭部創(chuàng)傷、脊髓損傷、外周神經(jīng)損傷、缺血性腦損傷、CNS的遺傳性髓磷脂疾病、癲癇、圍產(chǎn)期窒息、窒息、缺氧癥、癲癇持續(xù)狀態(tài)、中風(fēng)、阿爾茨海默病、帕金森病、亨延頓氏舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、心血管病癥、心肌梗塞、心血管疾病、肝疾病、胃腸疾病、腎疾病、AIDS、糖尿病和糖尿病癥。
41.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中所述變性疾病是變性神經(jīng)疾病。
42.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述化合物經(jīng)口給予。
43.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述化合物經(jīng)胃腸外給予。
44.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其進(jìn)一步包括共同給予治療有效量的選自下列的藥劑集落刺激因子、細(xì)胞因子、趨化因子、白介素或細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑或拮抗劑、可溶性受體、受體激動(dòng)劑或拮抗劑抗體、或與一種或多種所述藥劑具有同樣作用機(jī)制的小分子或肽類。
45.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中藥劑選自G-CSF、GM-CSF、TPO、M-CSF、EPO、Gro-beta、IL-11、SCF、FLT3配體、LIF、IL-3、IL-6、IL-1、Progenipoietin、NESP、SD-01、IL-8、或IL-5或任何一種所述藥劑的生物活性衍生物。
46.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其進(jìn)一步包括共同給予治療有效量的造血細(xì)胞的動(dòng)員劑，該動(dòng)員劑選自集落刺激因子、細(xì)胞因子、趨化因子、白介素或細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑、粘附分子拮抗劑或抗體。
47.根據(jù)權(quán)利要求46的方法，其中動(dòng)員劑選自G-CSF，GM-CSF，TPO，EPO，Gro-beta，IL-8，環(huán)磷酰胺，VLA-4抑制劑，SCF，F(xiàn)LT3配體，或者G-CSF、GM-CSF、TPO、EPO、Gro-beta或IL-8的生物活性衍生物。
48.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中變性疾病是由于病毒、真菌、微生物或寄生蟲感染導(dǎo)致的。
49.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述變性疾病是由于肝功能障礙導(dǎo)致的。
50.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述變性疾病是由于外科手術(shù)導(dǎo)致的。
51.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述變性疾病是由于用抗病毒或抗生素藥物進(jìn)行的治療導(dǎo)致的。
52.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中所述變性疾病是由于脊髓損傷導(dǎo)致的。
53.治療疾病狀態(tài)的方法，所述疾病狀態(tài)選自橫貫性脊髓炎、多發(fā)性硬化、腦或脊髓創(chuàng)傷后的脫髓鞘、急性腦損傷、頭部創(chuàng)傷、脊髓損傷、外周神經(jīng)損傷、缺血性腦損傷、CNS的遺傳性髓磷脂疾病、癲癇、圍產(chǎn)期窒息、窒息、缺氧癥、癲癇持續(xù)狀態(tài)、中風(fēng)、阿爾茨海默病、帕金森病、亨延頓氏舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、心血管病癥、心肌梗塞、心血管疾病、肝疾病、胃腸疾病、腎疾病、AIDS、糖尿病和糖尿病癥，該方法包括體內(nèi)給予有效量的權(quán)利要求1化合物。
54.治療變性神經(jīng)疾病的方法，其包括體內(nèi)給予有效量的權(quán)利要求1所述化合物。
55.治療疾病狀態(tài)的方法，所述疾病狀態(tài)選自橫貫性脊髓炎、多發(fā)性硬化、腦或脊髓創(chuàng)傷后的脫髓鞘、急性腦損傷、頭部創(chuàng)傷、脊髓損傷、外周神經(jīng)損傷、缺血性腦損傷、CNS的遺傳性髓磷脂疾病、癲癇、圍產(chǎn)期窒息、窒息、缺氧癥、癲癇持續(xù)狀態(tài)、中風(fēng)、阿爾茨海默病、帕金森病、亨延頓氏舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、心血管病癥、心肌梗塞、心血管疾病、肝疾病、胃腸疾病、腎疾病、AIDS、糖尿病和糖尿病癥，該方法包括體內(nèi)給予有效量的權(quán)利要求2所述組合物。
56.治療變性神經(jīng)疾病的方法，其包括體內(nèi)給予有效量的權(quán)利要求2所述組合物。
57.治療需要的哺乳動(dòng)物中的變性疾病的方法，其包括向該哺乳動(dòng)物給予治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
58.根據(jù)權(quán)利要求57的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
59.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中所述溶液包含乙酸乙酯和乙醇的混合物。
60.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中所述溶液包含四氫呋喃。
全文摘要
一種改善的血小板生成素?cái)M似物，2－(3，4－二甲基苯基)－4－{[2－羥基－3′－(1H－四唑－5－基)聯(lián)苯基－3－基]－亞肼基}－5－甲基－2，4－二氫吡唑－3－酮的膽堿鹽。
文檔編號(hào)C07D403/10GK1897937SQ200480038488
公開日2007年1月17日 申請(qǐng)日期2004年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月22日
發(fā)明者克里斯托弗·S·布魯克, 平立仁 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司