專利名稱：噻唑烷酮酰胺、噻唑烷羧酸酰胺、其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的噻唑烷酮酰胺，新的噻唑烷羧酸酰胺，這些化合物的制備方法，以及它們的用途，特別是用于治療各種癌癥，包括，但不局限于前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌。
背景技術(shù)：
在美國的男性當(dāng)中，前列腺癌占所有新診斷惡性腫瘤的33％(American Cancer SocietyCancer Facts and Figures(2003))。根據(jù)美國癌癥學(xué)會(huì)，在2004年大概有230,110名男性被診斷為前列腺癌，并且有29,900名男性死于前列腺癌(American Cancer SocietyCancerFacts and Figures(2004))。前列腺癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)是不同的，在美國、加拿大和斯堪的納維亞最高，在中國和亞洲的其它國家最低。(Quinn and Babb，″Patterns and Trends in Prostate CancerIncidence，Survival，Prevalence and Mortality.PartInternationalComparisons，″BJU Int.90162-173(2002)；Gronberg，″ProstateCancer Epidemiology，″Lancet 361859-864(2003))。這些差異是由遺傳敏感性、于對(duì)未知的外部危險(xiǎn)因素的暴露、衛(wèi)生保健和癌癥登記差異或這些因素的綜合所引起的。前列腺癌是由多種病灶引起的，通常注意到癌性腺體含有多處獨(dú)立損傷，表明所述疾病的異質(zhì)性(Foster等，″Cellular and MolecularPathology of Prostate Cancer Precursors，″Scand.J.Urol.Nephrol.20519-43(2000))。造成前列腺病理性生長(zhǎng)的決定因素目前還了解不多，雖然已經(jīng)涉及甾體雄激素和肽生長(zhǎng)因子(Agus等，″ProstateCancer Cell Cycle RegulatorsResponse to Androgen Withdrawal andDevelopmentof Androgen Independence，″J.Natl.Cancer.fast.911869-1876(1999)；Djakiew，″Dysregulated Expression of GrowthFactors and Their Receptors in the Development of Prostate Cancer，″Prostate 42150-160(2000))。只要癌癥限制于前列腺，它就可以成功地通過手術(shù)或放療進(jìn)行控制，但是在轉(zhuǎn)移性疾病中，除雄激素切除外，很少有有效的選擇(Frydenberg等，″Prostate Cancer Diagnosisand Management，″Lancet 3491681-1687(1997))，在淋巴結(jié)的情況中，治療的主要依據(jù)涉及或播散性位置。一旦腫瘤細(xì)胞變成激素難治療的情況，標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞毒性試劑在減緩疾病進(jìn)展中不怎么有效，雖然它們確實(shí)也能夠提供一定程度的減輕。目前的化學(xué)治療方案，典型地兩種或多種藥劑，僅在20-30％的范圍內(nèi)提供應(yīng)答率(Beedassy等，″Chemotherapy in Advanced Prostate Cancer，″Sem.Oncol.26428-438(1999)；Raghavan等，″Evolving Strategies of CytotoxicChemotherapy for Advanced Prostate Cancer，″Eur.J.Cancer 33566-574(1997))。前列腺癌的一種有前途的藥物開發(fā)策略包括識(shí)別和測(cè)試藥劑，該藥劑阻礙干涉癌細(xì)胞信號(hào)途徑中的生長(zhǎng)因子以及其它分子。G-蛋白偶聯(lián)受體(″GPCRs″)是一族膜結(jié)合的蛋白，該蛋白涉及起源于結(jié)合溶血磷脂的前列腺癌細(xì)胞的增殖和存活(″LPLs″)(Raj等，″Guanosine Phosphate Binding Protein Coupled Receptors in ProstateCancerA Review，″J.Urol.1671458-1463(2002)；Kue等，″EssentialRole for G Proteins in Prostate Cancer Cell Growth and Signaling，″J.Urol.1642162-2167(2000)；Guo等，″Mitogenic Signaling inAndrogen Sensitive and Insensitive Prostate Cancer Cell Lines，″J.Urol.1631027-1032(2000)；Barki-Harrington等，″BradykininInduced Mitogenesis of Androgen Independent Prostate CancerCells，″J.Urol.1662121-2125(2001))。在調(diào)節(jié)體內(nèi)生長(zhǎng)和新陳代謝中，取決于G蛋白的途徑的重要性通過觀察結(jié)果得到證實(shí)，該觀察結(jié)果是在小鼠中，雄激素獨(dú)立的前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)通過用百日咳毒素、Gi/o蛋白抑制劑治療而減弱，(Bex等，″Influence of PertussisToxin on Local Progression and Metastasis After OrthotopicImplantation of the Human Prostate Cancer Cell Line PC3 in NudeMice，″Prostate Cancer Prostatic Dis.236-40(1999))。溶血磷脂酸(″LPA″)和1-磷酸-鞘氨醇(″S1P″)是脂質(zhì)調(diào)節(jié)劑，其通過已知刺激GPCR-信號(hào)的膜磷脂的調(diào)節(jié)性破壞產(chǎn)生。LPL與由Edg基因家族編碼的GPCRs結(jié)合，共同稱為L(zhǎng)PL受體，以發(fā)揮不同的生物學(xué)作用。LPA刺激磷酸脂酶D活性和PC-3前列腺細(xì)胞增殖(Qi等，″Lysophosphatidic Acid StimulatesPhospholipase D Activity and Cell Proliferation in PC-3 HumanProstate Cancer Cells，″J.Cell.Physiol.174261-272(1998))。此外，之前的研究已經(jīng)表明，LPA在前列腺癌細(xì)胞中是促有絲分裂的，PC-3和DU-145表達(dá)LPA1、LPA2和LPA3受體(Daaka，″MitogenicAction of LPA in Prostate，″Biochim.Biophys.Acta.1582265-269(2002))。晚期前列腺癌表達(dá)LPL受體并取決于磷脂酰肌醇3-激酶(″PI3K″)后者為生長(zhǎng)和進(jìn)展發(fā)非雄激素依賴性信號(hào)(Kue和Daaka，″Essential Role for G Proteins in Prostate Cancer Cell Growth andSignaling，″J.Urol.1642162-2167(2000))。因此，這些途徑被廣泛看作最有希望的治療癌癥的新方法之一(Vivanco等，″ThePhosphatidylinositol 3-Kinase AKT Pathway in Human Cancer，″Nat.Rev.Cancer 2489-501(2002))并且提供一種晚期的、雄激素難治療的前列腺癌的尤其新的療法。雖然這種方法是有前途的，但是目前在臨床上還沒有治療方法以選擇性地開發(fā)或抑制LPA或PI3K信號(hào)。本發(fā)明是要克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的這些以及其它缺陷。
發(fā)明概述本發(fā)明的第一方面涉及式(I)和式(II)的化合物
其中X1和X2每個(gè)是任選的，并且每個(gè)可以是氧；X3和X4每個(gè)是任選的，并且每個(gè)可以是氧或硫；l是1-12的整數(shù)；R1選自飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)、飽和或不飽和混合雜環(huán)、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、或 或-(CH2)m-Y1其中m是0-10的整數(shù)以及Y1是飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)或飽和或不飽和混合雜環(huán)；R2是氫、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、R10-N(Z)-烴-或R10-烴-其中所述的烴基是脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)、飽和或不飽和混合雜環(huán)，或 或-(CH2)n-Y2其中n是0-10的整數(shù)和Y2是飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)或飽和或不飽和混合雜環(huán)；R3是氫或脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10烴；R4是任選的，或者可以是氫、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10烴、酰基、乙酰基或甲磺?；籖5、R6、R7、R8、R9、R11、R12、R13、R14和R15獨(dú)立地選自氫、羥基、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10烴、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、氯、氟、溴、碘、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、?；坊⒎及被?、酰氨基、烷基酰氨基、二烷基酰氨基、芳基酰氨基、芳基、C5-C7環(huán)烷基、芳烷基；R10是H(Z)N-、H(Z)N-烴-、H(Z)N-烴-N(Z)-烴-、H(Z)N-烴-O-烴-、烴-O-烴-、烴-N(Z)-烴-、H(Z)N-烴-羰基-烴-、烴-羰基-烴-、H(Z)N-苯基-、H(Z)N-苯基烷基-、H(Z)N-苯基烷基-N(Z)-烴-、H(Z)N-苯基烷基-O-烴-、苯基烷基-O-烴-、苯基烷基-N(Z)-烴-、H(Z)N-苯基烷基-羰基-烴-或苯基烷基-羰基-烴-，其中每個(gè)烴獨(dú)立地是脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10基團(tuán)，以及其中每個(gè)烷基是C1-C10烷基；和Z獨(dú)立地是氫或叔丁氧羰基。本發(fā)明的第二方面涉及一種包括藥學(xué)上可接受的載體和本發(fā)明第一方面的化合物的藥物組合物。本發(fā)明的第三方面涉及一種破壞癌細(xì)胞的方法，該方法包括步驟提供本發(fā)明第一方面的化合物并在有效破壞該接觸的癌細(xì)胞的條件下將該化合物與癌細(xì)胞接觸。本發(fā)明的第四方面涉及一種治療或預(yù)防癌癥的方法，該方法包括步驟提供本發(fā)明第一方面的化合物并以治療或預(yù)防癌癥的有效方式給予患者一定量的該化合物。本發(fā)明的第五方面涉及一種制備式(I)化合物的方法，包括式(III)的中間體， 其中l(wèi)、R1、X3和X4如上所定義，與(i)式(HNR2R3)的合適伯胺或仲胺反應(yīng)，其中R2和R3如上所定義，或與(ii)氨在含R2-H化合物存在下，在有效條件下進(jìn)行反應(yīng)以制備式(I)的化合物。本發(fā)明的第六方面涉及一種制備式(II)化合物的方法，包括步驟式(IV)的中間體，
其中R1和X3如上所定義，與式(HNR2R3)的伯胺或仲胺其中R2和R3如上所定義，在有效條件下反應(yīng)以制備式(II)的化合物。本發(fā)明的第七方面涉及式(III)和式(IV)的中間體化合物。與之前已知的用于抑制前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的癌癥治療法相比，本發(fā)明的癌癥治療法得到顯著改善。在之前的一篇報(bào)告中已經(jīng)表明，在5種前列腺癌細(xì)胞系中，通過用絲氨酸酰胺代替LPA中的甘油骨架，可以獲得細(xì)胞毒性化合物(Gududuru等，″Synthesis and BiologicalEvaluation of Novel Cytotoxic Phospholipids for Prostate Cancer，″Bioorg.Med.Chem.Lett.144919-4923(2004)，其在此整個(gè)引入作為參考)。Gududuru等人(上文所引述)報(bào)道的最有效化合物是非選擇性的并且有效力殺死前列腺癌和對(duì)照細(xì)胞系。本發(fā)明提供的化合物具有類似的或者甚至改善的效力，但是更重要地，本發(fā)明提供的化合物具有改善的選擇性，特別是對(duì)于前列腺癌細(xì)胞系。本發(fā)明的化合物被證明可以有效地抗前列腺癌細(xì)胞和卵巢癌細(xì)胞。
附圖的簡(jiǎn)要說明

圖1說明合成噻唑烷羧酸酰胺的一種方法(方案1)。L-半胱氨酸與各種醛在所述條件下反應(yīng)制得噻唑烷羧酸中間體(2a-v)(Seki等，″A Novel Synthesis of(+)-Biotin fromL-Cysteine，″J.Org.Chem.675527-5536(2002)，其在此整個(gè)引入作為參考)。所述的中間體羧酸與胺反應(yīng)以制備相應(yīng)的酰胺(3-27)。圖2說明合成噻唑烷羧酸酰胺的N-?；蚇-磺?；苌锏囊环N方法(方案2)。N-?；蚇-磺酰基衍生物(化合物28和29)由化合物5通過標(biāo)準(zhǔn)方法合成。圖3說明合成噻唑羧酸酰胺的一種方法(方案3)。按照所報(bào)道的方法將噻唑烷羧酸甲酯轉(zhuǎn)化為噻唑羧酸甲酯(Badr等，″Synthesis ofOxazolidines，Thiazolidines，and 5，6，7，8-Tetrahydro-1H，3H-pyrrolo[1，2-c]Oxazole(or Thiazole)-1，3-diones from(3-Hydroxy-or P-Mercapto-a-amino Acid Esters，″Bull.Chem.Soc.Jpn.541844-1847(1981)，其在此整個(gè)引入作為參考)，然后轉(zhuǎn)化為所述的烷基酰胺。圖4A-B說明用噻唑烷化合物4(圖4A)和5(圖4B)處理24-108小時(shí)后從2×106LNCaP細(xì)胞中提取的總DNA的瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果表示對(duì)DNA斷裂的治療作用，表示細(xì)胞死亡的進(jìn)展。在圖4A中，化合物4的劑量和曝露時(shí)間如下所示帶1，100bp DNA標(biāo)記；帶2，5μM 36h；帶3，3μM 24h；帶4，3μM 24h；帶5，3μM48h；帶6，3μM 72h；帶7，3μM 108h；以及帶8，50μM 36h。在圖4B中，化合物5的劑量和曝露時(shí)間如下所示帶1，100bp DNA標(biāo)記；帶2，5μM 24h；帶3，5μM 48h；帶4，5μM 72h；帶5，5μM 96h；帶6，3μM 96h；帶7，8μM 48h；以及帶8，8μM 72h。圖5A-B表明噻唑烷化合物的AKT抑制作用，通過抑制AKT磷酸化作用測(cè)得。圖5A表示使用抗磷酸基AKT(S473)或抗AKT抗體得到的免疫印跡結(jié)果。該免疫印跡通過增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光顯象，與通過類似治療的總AKT相比的磷酸基AKT相對(duì)水平的變化用密度分析確定。圖5B圖解說明使用抗AKT的AKT的免疫檢測(cè)，圖5A表示使用抗磷酸基AKT進(jìn)行的AKT的免疫檢測(cè)。圖6說明合成4-噻唑烷酮羧酸類的一種方法(方案4)，通過與伯胺或仲胺(HNR2R3)反應(yīng)將它們轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰胺。如此反應(yīng)方案中所示，不同的起始物質(zhì)(其中l(wèi)不同)可以用于制備各種本發(fā)明的化合物。圖7說明合成4-噻唑烷酮羧酸類的第二種方法(方案5)，通過與R2-CNO反應(yīng)將它們轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰胺。圖8說明對(duì)本發(fā)明的噻唑烷酮化合物的核心結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾(方案6)的三種方法，以得到與環(huán)連接的砜或亞砜基團(tuán)(分別是步驟a和b)，以及羰基的完全還原(步驟c)。圖9說明合成噻唑烷酮酰胺的多胺共軛物的一種方法。
發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明的一個(gè)方面是下式(I)和(II)的化合物 其中X1和X2每個(gè)是任選的，并且每個(gè)可以是氧；X3和X4每個(gè)是任選的，并且每個(gè)可以是氧或硫；l是1-12的整數(shù)；R1選自飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)、飽和或不飽和混合雜環(huán)、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、或 或-(CH2)m-Y1其中m是0-10的整數(shù)以及Y1是飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)或飽和或不飽和混合雜環(huán)；R2是氫、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、R10-N(Z)-烴-或R10-烴-其中所述的烴基是脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)、飽和或不飽和混合雜環(huán)，或 或-(CH2)n-Y2其中n是0-10的整數(shù)和Y2是飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)或飽和或不飽和混合雜環(huán)；R3是氫或脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10烴；R4是任選的，或者可以是氫、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10烴、?；?、乙?；蚣谆酋；籖5、R6、R7、R8、R9、R11、R12、R13、R14和R15獨(dú)立地選自氫、羥基、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10烴、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、氯、氟、溴、碘、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、酰胺基、芳氨基、酰氨基、烷基酰氨基、二烷基酰氨基、芳基酰氨基、芳基、C5-C7環(huán)烷基、芳烷基；R10是H(Z)N-、H(Z)N-烴-、H(Z)N-烴-N(Z)-烴-、H(Z)N-烴-O-烴-、烴-O-烴-、烴-N(Z)-烴-、H(Z)N-烴-羰基-烴-、烴-羰基-烴-、H(Z)N-苯基-、H(Z)N-苯基烷基-、H(Z)N-苯基烷基-N(Z)-烴-、H(Z)N-苯基烷基-O-烴-、苯基烷基-O-烴-、苯基烷基-N(Z)-烴-、H(Z)N-苯基烷基-羰基-烴-或苯基烷基-羰基-烴-，其中每個(gè)烴獨(dú)立地是脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10基團(tuán)，以及其中每個(gè)烷基是C1-C10烷基；和Z獨(dú)立地是氫或叔丁氧羰基。在此所使用的″脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈烴″是指含有1個(gè)至規(guī)定上限的碳原子的亞烷基，以及含有兩個(gè)至規(guī)定上限的碳原子的鏈烯基和炔基，不管所述的碳原子位于單一鏈上還是支鏈上。除非另有說明，烴可以包括至高達(dá)約30個(gè)碳原子，或至高達(dá)約20個(gè)碳原子，或至高達(dá)約10個(gè)碳原子。除非另有說明，在此所使用的術(shù)語″烷基″可以是含有至高達(dá)約30個(gè)碳原子的任何直鏈或支鏈烷基。所述的烷基可以是單獨(dú)的部分或者它可以是更大基團(tuán)中的一個(gè)部分，所述的更大基團(tuán)例如是烷氧基、芳烷基、烷基氨基等。在此所使用的″飽和或不飽和環(huán)烴″可以是任何這樣的環(huán)烴，包括，但不局限于苯基、聯(lián)苯基、三苯基、萘基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)二烯基等；″飽和或不飽和N-雜環(huán)″可以是任何這樣的含N雜環(huán)，包括，但不局限于氮雜-和二氮雜-環(huán)烷基如氮丙啶基、氮雜環(huán)丁烷基、二氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和azocanyl、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、四嗪基、吡咯嗪基(pyrrolizinyl)、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、吲唑基、喹嗪基、噌啉基、quinalolinyl、2，3-二氮雜萘基、萘啶基、喹喔啉基等；″飽和或不飽和O-雜環(huán)″可以是任何這樣的含O雜環(huán)，包括，但不局限于，環(huán)氧乙烷基、氧雜環(huán)丁烷基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、二烷基、呋喃基、吡喃、苯并呋喃基等；″飽和或不飽和S-雜環(huán)″可以是任何這樣的含S雜環(huán)，包括，但不局限于，thiranyl、硫雜環(huán)丁烷基、四氫噻吩基、二硫代環(huán)戊基、四氫噻喃基、噻吩基、噻庚英基、硫茚基等；″飽和或不飽和混合雜環(huán)″可以是含兩個(gè)或多個(gè)S-、N-或O-雜原子的任何雜環(huán)，包括，但不局限于氧硫戊環(huán)基、嗎啉基、噻烷基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、唑基、異唑基、oxadiaziolyl等。優(yōu)選的R1基團(tuán)包括芐基、呋喃基、吲哚基、吡啶基、苯基或取代苯基(被如上所定義的R5-R9取代)。優(yōu)選的R2基團(tuán)包括脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、苯基、苯基烷基、被如上所定義的R11-R15基團(tuán)取代的苯基和取代的苯基烷基。優(yōu)選的脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈烴是C8-C24烴，包括C10-C20烷基類，更優(yōu)選C14-C18烷基類。優(yōu)選的R3基團(tuán)包括氫和C1-C10烷基類。優(yōu)選的R4基團(tuán)包括氫、?；?、乙酰基和甲磺?；?。優(yōu)選的R10基團(tuán)是多胺。整數(shù)l優(yōu)選是1-10，更優(yōu)選1-8、1-6或1-4。整數(shù)m優(yōu)選是0-8，0-6、0-4或0-2。整數(shù)n優(yōu)選是0-8，0-6、0-4或0-2。式(I)的示范性化合物包括，但不限于2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物65)、N-癸基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物66)、N-十四烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物67)、N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物68)、N-十八烷基-2-(4-氧代-2-聯(lián)苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物69)、2-(2-(1-(二甲氨基)萘-4-基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物70)、2-(2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物71)、2-(2-(2，6-二氯苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物72)、N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-亞砜-噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物80)、N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-磺?；?噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物81)、N-(3，5-二氟苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物73)、N-(3，5-二氟苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙烷硫代酰胺、N-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物74)、N-(3，5-二氯苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物75)、N-(2，4-二甲氧基苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物76)、N-(萘-1-基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物77)、3-(2-(十八烷基氨基)乙基)-2-苯基噻唑烷-4-酮(化合物79)、N-(2-(2-苯基噻唑烷-3-基)乙基)十八烷-1-胺、及其鹽。式(I)的優(yōu)選化合物包括化合物68、71、80和81。式(II)的示范性化合物包括，但不限于(4R)-2-(4-甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物15)；(4R)-2-(4-乙氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺；N-十八烷基-2-苯基噻唑-4-羧酰胺(化合物34)；(4R)-2-(3，5-二氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物23)；(4R)-2-(4-氰基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物22)；(4R)-N-十八烷基-N-甲磺?；?2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物29)；(4R)-N-十八烷基-N-乙?；?2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物28)；(4R)-N-庚基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物3)；(4R)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物5，R-異構(gòu)體)；(4S)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物5，S-異構(gòu)體)；(4R)-N-十四烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺鹽酸鹽(化合物4)；(4R)-N-十八烷基-2-聯(lián)苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物27)；(4R)-2-十二烷基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物7)；(4R)-N-十八烷基-2-(吡啶-3-基)噻唑烷-4-羧酰胺(化合物11)；2-(呋喃-3-基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物12)；(4R)-N-十九烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物6)；(4R)-2-(4-羥基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺；2-(3-羥基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物14)；(4R)-2-(2，4，6-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺；2-(3，4-二甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物16)；2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物17)；2-(4-乙酰胺基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物18)；(4R)-2-(4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物19)；(4R)-2-(2，6-二氯苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物24)；(4R)-2-(4-溴苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物20)；(4R)-N-十八烷基-2-對(duì)甲苯基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物26)；(4R)-2-環(huán)己基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物8)；2-(4-硝基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物21)；(4R)-2-(4-(二甲氨基)苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物13)；(4R)-2-(1H-吲哚-3-基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物10)；(4R)-2-芐基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物9)；(4R)-2-(3-溴-4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺(化合物25)；(4R)-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-N，N-二辛基噻唑烷-4-羧酰胺；及其鹽。式(II)的優(yōu)選化合物包括化合物5(R-異構(gòu)體)、13、14、16、17、18、19、25和26。本發(fā)明的化合物和它們的中間體可以使用市場(chǎng)上可買到的或很容易合成的反應(yīng)物進(jìn)行合成。例如，式(I)的化合物可以根據(jù)圖6中所示的方案4進(jìn)行合成。根據(jù)一種方法，式(III)的中間體酸 (其中l(wèi)、R1、X3和X4如上所定義)與合適的胺在EDC/HOBt存在下在標(biāo)準(zhǔn)條件下反應(yīng)。所述的中間體酸可以如下制得首先將巰基乙酸、甘氨酸甲酯和芳醛在一鍋反應(yīng)中縮合，接著對(duì)該酯進(jìn)行堿性水解(Holmes等，″Strategies for Combinatorial Organic SynthesisSolution and Polymer-Supported Synthesis of 4-Thiazolidinones and 4-Metathiazanones Derived from Amino Acids，″J.Org.Chem.607328-7333(1995)，其在此整個(gè)引入作為參考)。通過用含更長(zhǎng)碳骨架的類似物代替甘氨酸甲酯，有可能制得式(III)的化合物，并且最終制得l大于1的式(I)化合物(即，含有比亞甲基更長(zhǎng)的亞烷基)。根據(jù)第二種方法，式(I)的噻唑烷酮酰胺也可以通過簡(jiǎn)單直接的方法進(jìn)行制備(Schuemacher等，″Condensation Between Isocyanates andCarboxylic Acids in the Presence of 4-Dimethylaminopyridine(DMAP)，a Mild and Efficient Synthesis of Amides，″Synthesis 22243-246(2001)，其在此整個(gè)引入作為參考)，其包括所述的中間體酸與所需的異氰酸酯在催化量的DMAP存在下進(jìn)行反應(yīng)(圖7)(方案5)。所述的噻唑烷酮化合物的其它改變例如可以通過如下實(shí)現(xiàn)在回流條件下使用BH3·THF進(jìn)行完全還原以除去羰基或亞砜基團(tuán)X3和X4(圖8)(方案6c)，以及如方案6a和6b所示，使用H2O2和KMnO4氧化化合物分別得到亞砜或砜。此外，例如，式(II)的化合物可以通過式(IV)的中間體酸 其中化合物(IV)可以是R-或S-立體異構(gòu)體以及R1和X3如上所定義，與合適的胺在EDC/HOBt存在下在標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行反應(yīng)而制備。該中間體酸可以通過L-半胱氨酸與所需的醛在所報(bào)道的條件下反應(yīng)而制備。(Seki等，″A Novel Synthesis of(+)-Biotin from L-Cysteine，″J.Org.Chem.675527-5536(2002)，其在此整個(gè)引入作為參考)。還可以將本發(fā)明的化合物進(jìn)行修飾以含有聚合共軛物。合適的聚合共軛物包括，但不限于，聚(烷基)胺、聚(烷氧基)胺、聚胺等。同樣公知的是，含聚胺的化合物表現(xiàn)出許多生物學(xué)活性并且已經(jīng)用作化療劑。示范性的共軛物包括含天然存在的聚胺的那些如腐胺、亞精胺、精胺以及合成聚胺。根據(jù)一種方法，本發(fā)明的化合物可以通過下面方法與聚胺形成共軛所述的中間體酸或其硝基苯基衍生物與聚胺NH2-R2反應(yīng)，其中R2是R10-N(Z)-烴-或R10-烴-以及R10和Z如上所定義，示范性的合成方案在圖9中給出。所述的化合物還可以是鹽的形式，優(yōu)選藥學(xué)上可接受的鹽。術(shù)語″藥學(xué)上可接受的鹽″是指保留生物有效性以及游離堿或游離酸的性質(zhì)的那些鹽，其在生物學(xué)上是受歡迎的。所述鹽是與無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等以及與有機(jī)酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、肉鐵質(zhì)酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸、N-乙酰半胱氨酸等形成的。其它鹽是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員公知的，并且可以很容易地用于本發(fā)明。本發(fā)明的化合物可以以外消旋混合物的形式存在，基本上含有當(dāng)量數(shù)的立體異構(gòu)體。在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可以使用已知方法制備或分離，獲得一種立體異構(gòu)體(其基本上不含相應(yīng)的立體異構(gòu)體)(即，基本上純的)。術(shù)語“基本上純的”是指立體異構(gòu)體至少約95％純度，更優(yōu)選至少約98％純度，最優(yōu)選至少約99％純度。本發(fā)明的另一方面涉及含有一種或多種上述確定的本發(fā)明化合物的藥物組合物。典型地，本發(fā)明的藥物組合物將包括本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上可接受的載體。術(shù)語″藥學(xué)上可接受的載體″是指任何合適的佐劑、載體、賦形劑或穩(wěn)定劑，并且可以是固體或液體形式例如，片劑、膠囊、粉劑、溶液、懸浮液或乳液。典型地，所述的藥物組合物含有約0.01-99％，優(yōu)選約20-75％的活性化合物以及含有佐劑、載體和/或賦形劑。例如，應(yīng)用于粘膜可以通過氣溶膠噴霧劑實(shí)現(xiàn)，所述的氣溶膠噴霧劑以噴霧或干粉形式中含有小顆粒的本發(fā)明化合物。固體單位劑型可以是常規(guī)類型。所述的固體形式可以是膠囊等，例如含有本發(fā)明的化合物和載體(例如，潤(rùn)滑劑和惰性填料(例如，乳糖、蔗糖或玉米淀粉))的常規(guī)明膠型。在另一種實(shí)施方案中，這些化合物是用常規(guī)片劑基質(zhì)如乳糖、蔗糖或玉米淀粉與粘合劑如阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠、崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或褐藻酸以及潤(rùn)滑劑如硬脂酸或硬脂酸鎂一起制得的片劑。所述的片劑、膠囊等還可以含有粘合劑如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑如磷酸氫鈣；崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、褐藻酸；潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂；以及甜味劑如蔗糖、乳糖或糖精。當(dāng)劑量單位形式是膠囊時(shí)，除上述類型的材料外，它可以含有液體載體如脂肪油。各種其它物質(zhì)可以以包衣的形式存在或者用于修飾該劑量單位的物理形式。例如，片劑可以用蟲膠、糖或蟲膠和糖包衣。除活性組分外，糖漿可以含有作為甜味劑的蔗糖、作為防腐劑的對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯、染料以及調(diào)味劑如櫻桃或甜橙調(diào)味劑。對(duì)于口服治療給藥，這些活性化合物可以與賦形劑混合在一起，并且以片劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿等形式使用。這些組合物和制劑應(yīng)含有至少0.1％的活性化合物。當(dāng)然，在這些組合物中所述化合物的百分比可以改變并且可以方便地在約2％-約60％單位位劑量重量之間。這些治療有用的組合物中活性化合物的數(shù)量使得可以獲得合適的劑量。這樣制備本發(fā)明的優(yōu)選組合物，以便使口服劑量單位含有約1mg至800mg的活性化合物。本發(fā)明的活性化合物可以口服給藥，例如，與惰性稀釋劑或與可同化食用載體一起，或者它們可以裝入到硬殼膠囊或軟殼膠囊中，或者它們可以壓縮成片劑，或者它們可以直接與食物混合。適合于注射用途的藥物形式包括無菌水溶液或分散液以及無菌粉劑，所述的無菌粉劑在臨用時(shí)再配制成無菌可注射溶液或分散液。在所有情況中，該形式應(yīng)該是無菌的并且其流動(dòng)程度應(yīng)該便于很容易進(jìn)行注射。它在制備和貯存條件下應(yīng)該是穩(wěn)定的，并且應(yīng)該在抗微生物如細(xì)菌和真菌污染的條件下貯存。所述載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，例如，含有水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)、它們的合適混合物以及植物油。本發(fā)明的化合物或藥物組合物還可以以可注射劑型給藥，這些物質(zhì)在生理學(xué)可接受的稀釋劑中與藥物佐劑、載體或賦形劑一起以溶液或懸浮液的形式給藥。這些佐劑、載體和/或賦形劑包括，但不局限于，無菌液體，例如水和油類，有或者沒有加入表面活性劑以及其它藥學(xué)上和生理學(xué)上可接受的組分。說明性的油類是石油、動(dòng)物油、植物油或人造油，例如，花生油、豆油或礦物油。通常，水、鹽水、含水葡萄糖和相關(guān)糖的溶液以及二醇如丙二醇或聚乙二醇是優(yōu)選的液體載體，特別是對(duì)于可注射溶液來說。這些活性化合物也可以通過胃腸外給藥。這些活性化合物的溶液或懸浮液可以在水中與表面活性劑如羥丙基纖維素合適地混合來制備。分散液還可以在甘油、液體聚乙二醇及其在油類中的混合物中制備。說明性的油類是石油、動(dòng)物油、植物油或人造油，例如，花生油、豆油或礦物油。通常，水、鹽水、含水葡萄糖和相關(guān)糖的溶液以及二醇如丙二醇或聚乙二醇是優(yōu)選的液體載體，特別是對(duì)于可注射溶液來說。在常規(guī)儲(chǔ)存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑以避免微生物的生長(zhǎng)。當(dāng)以氣霧劑的形式使用時(shí)，可以將在溶液或懸浮液中的本發(fā)明化合物與合適的推進(jìn)劑一起包裝在加壓噴霧劑容器中，所述的推進(jìn)劑例如是烴推進(jìn)劑如含常規(guī)佐劑的丙烷、丁烷或異丁烷。本發(fā)明的化合物還可以以常壓形式給藥，如在噴霧器或霧化器中。本發(fā)明的化合物特別是用于治療或預(yù)防各種形式的癌癥，特別是前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌。有理由相信，當(dāng)給予患者本發(fā)明的化合物或組合物時(shí)，其同樣可以治療或預(yù)防其它形式的癌癥。本發(fā)明的優(yōu)選化合物選擇性地破壞癌細(xì)胞，使癌細(xì)胞而不是正常細(xì)胞消除。顯著地，對(duì)正常細(xì)胞的損害降到最低，因?yàn)榘┘?xì)胞在非常低濃度的本發(fā)明化合物存在下就容易被破壞。因此，本發(fā)明的另一方面涉及一種破壞癌細(xì)胞的方法，包括提供本發(fā)明的化合物，然后在有效條件下將該化合物與癌細(xì)胞接觸以破壞該接觸的癌細(xì)胞。根據(jù)破壞癌細(xì)胞的各種實(shí)施方案，待破壞的細(xì)胞可以位于體內(nèi)或體外(即，在培養(yǎng)物中)。本發(fā)明的還有另一方面涉及一種治療或預(yù)防癌癥的方法，包括提供本發(fā)明的化合物，然后給予患者有效量的該化合物以治療或預(yù)防癌癥。根據(jù)一種實(shí)施方案，其中待治療的患者的特征為存在癌癥前期病癥，并且所述的給予該化合物可有效地預(yù)防癌癥前期病癥發(fā)展成癌癥。這可以在進(jìn)一步發(fā)展成癌癥之前或發(fā)展成癌癥的同時(shí)，通過破壞癌癥前期細(xì)胞實(shí)現(xiàn)。根據(jù)另一種實(shí)施方案，待治療的患者的特征為存在癌癥病癥，并且所述的給予該化合物可有效地使癌癥病癥衰退或抑制癌癥病癥的生長(zhǎng)。這優(yōu)選通過破壞癌細(xì)胞實(shí)現(xiàn)，不管它們?cè)诨颊呱眢w的哪個(gè)部位。即，不管所述的癌細(xì)胞位于原發(fā)性腫瘤部位或不管所述的癌細(xì)胞已經(jīng)轉(zhuǎn)移并在患者體內(nèi)產(chǎn)生繼發(fā)性腫瘤。如在此所使用的，患者是指任何哺乳動(dòng)物患者，包括，但不限于，人以及其它靈長(zhǎng)目動(dòng)物、狗、貓、馬、牛、羊、豬、大鼠、小鼠以及其它嚙齒類動(dòng)物。當(dāng)給予本發(fā)明的化合物時(shí)，它們可以全身性給藥，或者它們可以直接給予存在癌細(xì)胞或癌癥前期細(xì)胞的特定部位。因此，給予可以以任何有效的方式進(jìn)行，以將所述的藥物組合物或化合物釋放至癌細(xì)胞或癌癥前期細(xì)胞。示范性的給藥方式包括，但不限于，口服、局部、經(jīng)皮、胃腸外、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)滴注、腔內(nèi)或膀胱內(nèi)滴注、眼內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、內(nèi)損部位或粘膜(例如，鼻、咽喉和支氣管的粘膜)給予該化合物或組合物。當(dāng)本發(fā)明的化合物或藥物組合物用于治療或預(yù)防癌癥時(shí)，所述的藥物組合物還可以含有，或可以一起給予，目前已知的或?qū)黹_發(fā)的治療各種類型癌癥的其它藥物或治療方案。其它藥物或治療方案的實(shí)例包括，但不限于，放射治療、化療、外科手術(shù)以及它們的組合。在本發(fā)明范圍內(nèi)的組合物包括所有組合物，其包含有效量的本發(fā)明的化合物以獲得它指定的目的。個(gè)體需要可以改變，每種組分有效量的最佳范圍可以由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員確定。典型劑量包含約0.01-約100mg/kg體重。優(yōu)選劑量包含約0.1-約100mg/kg體重。最優(yōu)選劑量包含約1-約100mg/kg體重。給予本發(fā)明化合物的治療方案還可以很容易由本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員確定。也就是說，給藥的頻率和劑量大小可以通過常規(guī)優(yōu)化確定，優(yōu)選同時(shí)使任何副作用最小化。
實(shí)施例下列闡述的實(shí)施例僅僅是用于說明性目的，而不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1-噻唑烷羧酸酰胺的合成所使用的所有試劑和溶劑是試劑級(jí)的或在使用前用標(biāo)準(zhǔn)方法提純。對(duì)水分敏感的反應(yīng)在氬氣氛中進(jìn)行。反應(yīng)進(jìn)程用薄層層析(TLC)分析監(jiān)測(cè)。快速柱色譜使用由Fisher供應(yīng)的硅膠(200-425目)。熔點(diǎn)使用Thomas-Hoover熔點(diǎn)測(cè)定儀在開口毛細(xì)管中測(cè)定并且是未校準(zhǔn)的。所有化合物用NMR和MS(ESI)表征。1H NMR光譜在Varian 300儀上記錄?；瘜W(xué)位移相對(duì)于作為內(nèi)標(biāo)的Me4Si并且以δ值的形式給出。質(zhì)譜以電噴霧(ES)方式并使用Esquire-LC(Bruker)光譜儀獲得。元素分析由Atlantic Microlab Inc.(Norcross，GA)提供的儀器進(jìn)行。在本研究中所述的所有化合物按照簡(jiǎn)單化學(xué)進(jìn)行制備。L-半胱氨酸與各種醛在所報(bào)道條件下的反應(yīng)(Seki等，″A Novel Synthesis of(+)-Biotin from L-Cysteine，″J.Org.Chem.675527-5536(2002)，其在此整個(gè)引入作為參考)得到相應(yīng)的酸(圖1，2a-v)，所述酸以非對(duì)映體混合物的形式被分離。使用EDC/HOBt如方案1中所示那樣通過與合適的烷基胺反應(yīng)，這些混合物直接用于制備相應(yīng)的酰胺。由此制得的所有化合物以非對(duì)映體混合物的形式進(jìn)行表征(表1)。將合適的羧酸(圖1，2a-2v，0.3-0.5g)、EDC(1.25當(dāng)量)和HOBt(1當(dāng)量)在CH2Cl2(25-50mL)中的混合物攪拌10min。向這種溶液中加入合適的烷基胺(1當(dāng)量)并在室溫下繼續(xù)攪拌6-8h。反應(yīng)混合物用CH2Cl2(100-150mL)稀釋并依次用水、飽和NaHCO3和鹽水洗滌，接著在Na2SO4中干燥。在減壓下除去溶劑，得到一粗固體，將該粗固體用柱色譜提純。使用2M的HCl/Et2O將提純后的化合物(3-6、12、15-18&27)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的鹽酸鹽。(2RS，4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸庚基酰胺鹽酸鹽(化合物3·HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ8.72(s，1H)，7.65(m，2H)，7.43(m，3H)，5.89(s，0.6H)，5.84(s，0.4H)，4.66(t，J＝6.3Hz，0.6H)，4.46(t，J＝6.9Hz，0.4H)，3.55-3.71(m，1H)，3.24-3.34(m，1H)，3.13(d，J＝5.7Hz，2H)，1.44(m，2H)，1.25(s，8H)，0.83(t，J＝6.9Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C17H27N2OS307.47(N+1)，實(shí)測(cè)307.10.(2RS，4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸十四烷基酰胺鹽酸鹽(化合物4·HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ8.69(m，1H)，7.64-7.71(m，2H)，7.45(m，3H)，5.89(s，0.6H)，5.84(s，0.4H)，4.67(t，J＝6.6Hz，0.6H)，4.47(t，J＝7.2Hz，0.4H)，3.55-3.71(m，1H)，3.25-3.35(m，1H)，3.10-3.16(m，2H)，1.44(m，2H)，1.23(s，22H)，0.85(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C24H40N2OS404.65(M+)，實(shí)測(cè)427.30(M+Na).(2RS，4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺鹽酸鹽(化合物5·HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ8.59(d，J＝5.1Hz，1H)，7.63(d，J＝3.9Hz，2H)，7.42-7.47(m，3H)，5.86(s，0.6H)，5.81(s，0.4H)，4.60(t，J＝6.3Hz，0.6H)，4.39(t，J＝6.9Hz，0.4H)，3.52-3.66(m，1H)，3.24-3.30(m，1H)，3.10-3.16(m，2H)，1.42(m，2H)，1.23(s，30H)，0.85(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H49N2OS 461.76(M+1)，實(shí)測(cè)461.50.(2RS，4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸十九烷基酰胺鹽酸鹽(化合物6.HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ8.51(s，1H)，7.62(m，2H)，7.41-7.46(m，3H)，5.83(s，0.6H)，5.78(s，0.4H)，4.53(m，0.6H)，4.32(m，0.4H)，3.48-3.61(m，1H)，3.24-3.29(m，1H)，3.11-3.15(m，2H)，1.43(m，2H)，1.23(s，32H)，0.85(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C29H50N2OS 474.79(M+)，實(shí)測(cè)497.40(M+Na).(2RS，4R)-2-十二烷基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物7)1H NMR(CDCl3)δ7.18(m，1H)，4.20-4.27(m，1H)，3.79(m，0.3H)，3.54-3.59(m，0.7H)，3.08-3.34(m，4H)，1.65-1.78(m，2H)，1.43-1.51(m，4H)，1.27(brs，48H)，0.89(t，J＝6Hz，6H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C34H69N2OS 553.98(M+1)，實(shí)測(cè)553.60.(2RS，4R)-2-環(huán)己基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物8)1H NMR(CDCl3)δ7.17(m，1H)，4.10-4.20(m，1H)，3.76(m，0.3H)，3.54(dd，J＝11.1，3.6Hz，0.7H)，2.97-3.34(m，4H)，2.02(m，1H)，1.68-1.78(m，4H)，1.48-1.54(m，2H)，1.27(brs，36H)，0.87(t，J＝6.9Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H55N2OS 467.81(M+1)，實(shí)測(cè)467.60.(2RS，4R)-2-芐基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物9)1H NMR(CDCl3)δ7.28-7.33(m，5H)，7.03(s，0.7H)，6.48(s，0.3H)，4.55(brs，0.5H)，4.18(brs，0.5H)，3.82(brs，0.3H)，3.54(dd，J＝11.1，3.6Hz，0.7H)，2.99-3.31(m，6H)，1.46-1.51(m，2H)，1.27(brs，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C29H50N2OS 475.79(M+1)，實(shí)測(cè)475.50.(2RS，4R)-2-(1H-吲哚-3-基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物10)
1H NMR(CDCl3)δ7.86(m，0.6H)，7.77(m，0.4H)，7.41-7.48(m，4H)，7.29-7.34(m，1H)，6.0(s，0.3H)，5.69(s，0.7H)，4.37-4.41(m，0.5H)，3.76(dd，J＝11.1，4.2Hz，0.5H)，3.23-3.52(m，3H)，2.79-3.04(m，1H)，1.43(m，2H)，1.27(s，30H)，0.89(t，J＝6.6Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C30H50N3OS500.80(M+1)，實(shí)測(cè)500.60.(2RS，4R)-2-吡啶-3-基-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物11)1H NMR(CDCl3)δ8.74(d，J＝2.1Hz，1H)，8.60(d，J＝4.8Hz，1H)，7.84(d，J＝7.8Hz，1H)，7.31-7.36(m，1H)，7.08(m，1H)，5.44(s，0.5H)，5.40(s，0.5H)，4.28-4.35(m，1H)，3.72(dd，J＝11.1，4.2Hz，1H)，3.27-3.45(m，3H)，2.57(m，1H)，1.53-1.57(m，2H)，1.26(s，30H)，0.89(t，J＝6.6Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C27H49N3OS 462.75(M+1)，實(shí)測(cè)462.40.(2RS，4R)-2-呋喃-3-基-噻唑烷-4-羧酸鹽酸鹽(化合物12·HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ8.59(d，J＝15.6Hz，1H)，7.89(d，J＝8.1Hz，1H)，7.72(s，1H)，5.86(s，0.7H)，5.78(s，0.3H)，4.37-4.56(m，1H)，3.50-3.63(m，1H)，3.11-3.23(m，3H)，1.43(m，2H)，1.23(s，30H)，0.85(t，J＝6.6Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C26H48N2O2S 451.72(M+1)，實(shí)測(cè)451.60.(2RS，4R)-2-(4-二甲氨基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物13)1H MR(CDCl3)δ7.34-7.41(m，2H)，6.70-6.74(m，2H)，5.57(s，0.3H)，5.28(s，0.7H)，4.34(m，0.7H)，3.90(m，0.3H)，3.69(dd，J＝11.1，4.2Hz，1H)，3.41-3.47(m，1H)，3.20-3.33(m，2H)，2.97(d，J＝3.6Hz，6H)，1.48-1.55(m，2H)，1.27(s，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C30H54N3OS 504.83(M+1)，實(shí)測(cè)504.60.(2RS，4R)-2-(3-羥基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物14)1H NMR(DMSO-d6)δ8.59(s，1H)，7.22(t，J＝6.6Hz，1H)，7.02(d，J＝6.3Hz，2H)，6.82(d，J＝7.5Hz，1H)，5.77(s，0.7H)，5.71(s，0.3H)，4.545(m，0.7H)，4.37(m，0.3H)，3.49-3.59(m，1H)，3.13-3.27(m，3H)，1.43(brs，2H)，1.23(s，30H)，0.85(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H49N2O2S 477.76(M+1)，實(shí)測(cè)477.60.(2RS，4R)-2-(4-甲氧基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺鹽酸鹽(化合物15·HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ8.61(m，1H)，7.57(d，J＝8.4Hz，2H)，6.98(d，J＝9Hz，2H)，5.83(s，0.7H)，5.78(s，0.3H)，4.61(t，J＝6.3Hz，0.7H)，4.40(m，0.3H)，3.77(s，3H)，3.51-3.70(m，1H)，3.22-3.31(m，1H)，3.11(m，2H)，1.43(m，2H)，1.23(s，30H)，0.84(t，J＝6.6Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C29H51N2O2S 491.79(M+1)，實(shí)測(cè)491.60.(2RS，4R)-2-(3，4-二甲氧基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺鹽酸鹽(化合物16·HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ8.58(m，1H)，7.33(d，J＝4.2Hz，1H)，7.14(t，J＝7.5Hz，1H)，6.97(d，J＝8.4Hz，1H)，5.81(s，0.8H)，5.77(s，0.2H)，4.62(m，0.7H)，4.40(m，0.3H)，3.78(d，J＝7.8Hz，6H)，3.52-3.68(m，1H)，3.23-3.29(m，1H)，3.12-3.13(m，2H)，1.43(m，2H)，1.23(s，30H)，0.85(t，J＝6.6Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C30H53N2O3S 521.81(M+1)，實(shí)測(cè)521.60.(2RS，4R)-2-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺鹽酸鹽(化合物17·HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ8.59(m，1H)，7.01(d，J＝5.7Hz，2H)，5.80(s，0.8H)，5.76(s，0.2H)，4.63(m，0.7H)，4.37(m，0.3H)，3.80(d，J＝5.7Hz，6H)，3.66(s，3H)，3.23-3.28(m，1H)，3.12-3.13(m，2H)，1.43(m，2H)，1.23(s，30H)，0.85(t，J＝6Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C31H55N2O4S 551.84(M+1)，實(shí)測(cè)551.60.(2RS，4R)-2-(4-乙酰氨基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺鹽酸鹽(化合物18·HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ10.18(s，1H)，8.61(m，1H)，7.54-7.64(m，4H)，5.82(s，0.7H)，5.77(s，0.3H)，4.60(m，0.8H)，4.42(m，0.2H)，3.56-3.64(m，1H)，3.12-3.26(m，3H)，2.05(s，3H)，1.43(m，2H)，1.23(s，30H)，0.84(t，J＝6Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C30H52N3O2S518.81(M+1)，實(shí)測(cè)518.70.(2RS，4R)-2-(4-氟-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物19)
1H NMR(CDCl3)δ7.46-7.54(m，2H)，7.13-7.20(m，1H)，7.01-7.08(m，2H)，5.60(s，0.3H)，5.34(s，0.7H)，4.76(m，0.3H)，4.34(m，0.7H)，3.69(dd，J＝11.1，6.9Hz，1H)，3.21-3.52(m，3H)，1.49(m，2H)，1.26(s，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H48FN2OS 479.75(M+1)，實(shí)測(cè)479.60.(2RS，4R)-2-(4-溴-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物20)1H NMR(CDCl3)δ7.48-7.62(m，2H)，7.36-7.42(m，2H)，7.14(m，0.7H)，6.40(m，0.3)，5.57(d，J＝10.2Hz，0.3H)，5.33(d，J＝11.1Hz，0.7H)，4.32(m，0.7H)，3.94(m，0.3H)，3.70(dd，J＝11.1，4.2Hz，1H)，3.20-3.44(m，3H)，1.49(m，2H)，1.27(s，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H47BrN2OS 539.66(M+)，實(shí)測(cè)539.70.(2RS，4R)-2-(4-硝基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物21)1H NMR(CDCl3)δ8.24(d，J＝8.7Hz，2H)，7.67(d，J＝8.7Hz，2H)，6.92(m，1H)，5.54(s，0.5H)，5.50(s，0.5H)，4.24-4.31(m，1H)，3.67(dd，J＝10.8，4.8Hz，1H)，3.27-3.44(m，3H)，1.55(m，2H)，1.26(s，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H47N3O3S 506.76(M+1)，實(shí)測(cè)506.60.(2RS，4R)-2-(4-氰基-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物22)1H NMR(CDCl3)δ7.60-7.70(m，4H)，6.94(m，0.6H)，6.37(m，0.4)，5.64(s，0.4H)，5.46(s，0.6H)，4.27(m，0.6H)，3.96(m，0.4H)，3.65-3.70(m，1H)，3.20-3.45(m，3H)，1.54(m，2H)，1.26(s，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C29H47N3OS 485.77(M+)，實(shí)測(cè)508.50(M+Na).(2RS，4R)-2-(3，5-二氟-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物23)1H NMR(CDCl3)δ7.04-7.08(m，2H)，6.97(m，1H)，6.79(m，1H)，5.40(s，0.5H)，5.36(s，0.5H)，4.23-4.30(m，1H)，3.66(dd，J＝11.1，4.5Hz，1H)，3.26-3.42(m，3H)，1.33(m，2H)，1.26(s，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H47F2N2O2S 497.74(M+1)，實(shí)測(cè)497.50.(2RS，4R)-2-(2，6-二氯-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物24)1H NMR(CDCl3)δ7.34-7.38(m，2H)，7.15-7.28(m，2H)，6.29(s，0.5H)，6.25(s，0.5H)，4.25(t，J＝5.7Hz，1H)，3.94(dd，J＝10.5，1.8Hz，1H)，3.26-3.52(m，3H)，1.52(m，2H)，1.26(s，30H)，0.89(t，J＝6Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H46Cl2N2O2S 529.65(M+)，實(shí)測(cè)529.70.(2RS，4R)-2-(3-溴-4-氟-苯基)-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物25)1H NMR(CDCl3)δ7.71(m，1H)，7.42(m，1H)，7.06-7.16(m，2H)，5.56(d，J＝9.3Hz，0.2H)，5.34(d，J＝10.2Hz，0.8H)，4.29(d，J＝4.5Hz，0.8H)，3.94(m，0.2H)，3.69(dd，J＝11.1，4.2Hz，1H)，3.21-3.41(m，3H)，1.52(m，2H)，1.26(s，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H47BrFN2OS 558.65(M+1)，實(shí)測(cè)558.70.(2RS，4R)-2-對(duì)甲苯基-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物26)1H NMR(CDCl3)δ7.34-7.43(m，2H)，7.14-7.21(m，3H)，5.59(s，0.2H)，5.32(s，0.8H)，4.76(m，0.2H)，4.35(m，0.8H)，3.70(dd，J＝11.1，3.9Hz，1H)，3.21-3.43(m，3H)，2.36(d，J＝2.7Hz，3H)，1.51(m，2H)，1.27(s，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C29H51N2OS 475.79(M+1)，實(shí)測(cè)475.60.(2RS，4R)-2-聯(lián)苯-4-基-噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺鹽酸鹽(化合物27·HCl)1H NMR(DMSO-d6)δ8.59(m，1H)，7.66-7.73(m，5H)，7.37-7.51(m，4H)，5.92(s，0.7H)，5.87(s，0.3H)，4.62(m，0.7H)，4.41(m，0.3H)，3.53-3.64(m，1H)，3.26-3.32(m，1H)，3.13-3.17(m，2H)，1.44(m，2H)，1.22(s，30H)，0.84(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C34H53N2OS537.86(M+1)，實(shí)測(cè)537.70.
實(shí)施例2-N-酰基和N-磺?；苌镟邕蛲轸人狨０返暮铣蒒-酰基和N-磺?；苌?化合物28和29)由化合物5通過標(biāo)準(zhǔn)方法(方案2)合成。簡(jiǎn)要地說，(2RS，4R)-2-苯基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物5)與乙酸酐或甲磺酰氯在吡啶中反應(yīng)，生成所需的衍生物。(2RS，4R)-3-乙?；?2-苯基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物28)1H NMR(CDCl3)δ7.31-7.41(m，5H)，6.01(s，1H)，5.12(s，1H)，3.73(m，1H)，3.40(m，1H)，3.31(m，1H)，3.11-3.17(m，1H)，2.00(s，3H)，1.27-1.33(m，32H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C30H50N2O2S 502.80(M+)，實(shí)測(cè)502.60.(2RS，4R)-3-甲磺?；?2-苯基噻唑烷-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物29)1H NMR(CDCl3)δ7.65-7.68(m，2H)，7.32-7.36(m，3H)，6.20(s，1H)，4.63(dd，J＝9，6Hz，1H)，3.67(dd，J＝12，6Hz，1H)，3.47(dd，J＝12.3，8.1Hz，1H)，3.04-3.13(m，2H)，3.02(s，3H)，1.27(m，32H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C29H50N2O3S2538.85(M+)，實(shí)測(cè)538.70.基于上述合成，可以預(yù)見其它酰基酸酐(例如，含有更大的烷基)和其它磺酰氯(例如，含有更大的烷基)也可以依據(jù)這種相同的合成方法進(jìn)行制備(Badr等，″Synthesis of Oxazolidines，Thiazolidines，and 5，6，7，8-Tetrahydro-1H，3H-pyrrolo[1，2-c]oxazole(or thiazole)-1，3-diones fromβ-Hydroxy-orβ-Mercapto-α-a mino AcidEsters，″Bull.Chem.Soc.Jpn.541844-1847(1981)，其在此整個(gè)引入作為參考)。
實(shí)施例3-噻唑羧酸酰胺的合成噻唑衍生物(化合物34)的合成由半胱氨酸如方案3中所示的方法進(jìn)行。在0℃下，向DL-半胱氨酸(3g，24.76mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中緩慢加入SOCl2(2.76mL，37.14mmol)接著溫?zé)嶂潦覝兀缓蠡亓?h。將反應(yīng)混合物在真空中濃縮，得到一殘余物。將此殘余物吸收到含水EtOH(1∶1，30mL)中，加入NaHCO3(2.28g，27.23mmol)，10min后加入苯甲醛(2.5mL，24.76mmol)并繼續(xù)攪拌3h。將CHCl3(200mL)加入到反應(yīng)混合物中并用水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，接著在真空中除去溶劑。粗產(chǎn)物用柱色譜提純，得到2-苯基噻唑烷-4-羧酸甲酯(化合物31)收率4.7g，85％；
1H NMR(CDCl3)δ7.51-7.62(m，2H)，7.32-7.42(m，3H)，5.84(s，0.4H)，5.58(s，0.6H)，4.24(t，J＝6.3Hz，0.4H)，4.01(t，J＝7.5Hz，0.6H)，3.83(s，3H)，3.39-3.55(m，1H)，3.10-3.26(m，1H)；MS(ESI)m/z 224(M+1).用化合物31作為起始化合物，按照所報(bào)道的方法合成2-苯基噻唑-4-羧酸甲酯(化合物32)(Kue等，″Essential Role for G Proteins inProstate Cancer Cell Growth and Signaling，″Urol.1642162-2167(2000)，其在此整個(gè)引入作為參考)。收率0.33g，68％；1H NMR(CDCl3)δ8.20(s，1H)，8.0-8.04(m，2H)，7.45-7.50(m，3H)，4.0(s，3H)；MS(ESI)m/z 220(M+1).在0℃下，向化合物32(0.5g，2.28mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入1N NaOH(5mL)并攪拌2h。向該反應(yīng)混合物中加入EtOAc(30mL)并用1N HCl酸化。用EtOAc(3×50mL)萃取，合并的萃取液用水和鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)接著在真空中除去溶劑，得到粗酸(化合物33)，按照上面實(shí)施例1中所述的一般方法將該粗酸轉(zhuǎn)化為2-苯基噻唑-4-羧酸十八烷基酰胺(化合物34)。收率0.30g，68％；1H NMR(CDCl3)δ8.10(s，1H)，7.96-7.93(m，2H)，7.46-7.50(m，3H)，3.49(dd，J＝13.5，6.9Hz，2H)，1.69(m，2H)，1.27(m，30H)，0.89(t，J＝6.3Hz，3H)；MS(ESI)m/z計(jì)算C28H45N2OS 457.73(M+1)，實(shí)測(cè)457.60.
表1合成了的化合物的結(jié)構(gòu)和物理數(shù)據(jù)
實(shí)施例4-通過RT-PCR對(duì)所選擇的前列腺癌細(xì)胞系進(jìn)行LPA受體表達(dá)分析DU-145、PC-3和LNCaP人前列腺癌細(xì)胞和RH7777大鼠肝癌細(xì)胞從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(manassas，VA)處獲得。Universityof Tennessee Health Science Center的Mitchell Steiner博士友好地提供PPC-1和TSU-Pr1細(xì)胞。前列腺癌細(xì)胞和RH7777細(xì)胞在5％CO2/95％空氣濕潤(rùn)的大氣壓中在37℃下分別供養(yǎng)在補(bǔ)充有10％胎牛血清(Gibco，Grand Island，NY)的RPMI 1640培養(yǎng)基和DMEM(Mediatech，Inc.，Herndon，VA)。使用TRIzol試劑(Invitrogen Corp.，Carlsbad，CA)根據(jù)廠家的指示萃取總RNA。使用帶PlatinumTaq(Invitrogen Corp.，Carlsbad，CA)以及0.2μM引物的SuperScriptTM一步RT-PCR，使用0.5μg(LPA1)或1μg(LPA2和LPA3)總RNA進(jìn)行RT-PCR。
使用以下引物對(duì)LPA1前5′-GCTCCACACACGGATGAGCAACC-3′(SEQ ID NO1)，和LPA1反5′-GTGGTCATTGCTGTGAACTCCAGC-3′(SEQ ID NO2)；LPA2前5′-CTGCTCAGCCGCTCCTATTTG-3′(SEQ ID NO3)，和LPA2反5′-AGGAGCACCCACAAGTCATCAG-3′(SEQ ID NO4)；LPA3前5′-CCATAGCAACCTGACCAAAAAGAG-3′(SEQ ID NO5)，和LPA3反5′-TCCTTGTAGGAGTAGATGATGGGG-3′(SEQ IDNO6)；β-肌動(dòng)蛋白前5′-GCTCGTCGTCGACAACGGCTC-3′(SEQ IDNO7)，和β-肌動(dòng)蛋白反5′-CAAACATGATCTGGGTCATCTTCTC-3′(SEQ IDNO8)。
PCR條件如下所示在94℃變性步驟2min后，將樣品在94℃34-40周期30秒，60℃(LPA1)或58℃(LPA2和LPA3)30秒，以及72℃1min，接著在72℃額外的延長(zhǎng)步驟7min。選擇引物，橫跨基因組序列的至少一個(gè)內(nèi)含子以檢測(cè)基因組DNA污染。在1.5％瓊脂糖凝膠上分離PCR產(chǎn)物，用溴化乙錠染色，使用Quantity One軟件(Bio-RadLaboratories，Inc.，Hercules，CA)確定譜帶強(qiáng)度。在不同細(xì)胞系中每個(gè)受體亞型的表達(dá)水平用與β-肌動(dòng)蛋白mRNA水平相比的比值來表示。測(cè)定這些細(xì)胞系中的LPL受體表達(dá)，以證實(shí)在體外模型中的作用(參見下表2)。將1μg總RNA進(jìn)行RT-PCR，在瓊脂糖凝膠上分離PCR產(chǎn)物，與β-肌動(dòng)蛋白相比的每個(gè)受體亞型的相對(duì)表達(dá)水平通過Quantity One軟件(Bio-Rad)確定。LPA1是在這些細(xì)胞系中表達(dá)的主要LPL受體。然而，LNCaP細(xì)胞不表達(dá)這種受體亞型。LPA3受體僅在前列腺癌細(xì)胞系中表達(dá)。RH7777細(xì)胞不表達(dá)任何已知的LPL受體。
表2LPL受體mRNA表達(dá)
aUD＝低于檢測(cè)極限實(shí)施例5-前列腺癌細(xì)胞中的細(xì)胞毒性試驗(yàn)對(duì)于體外細(xì)胞毒性篩選，將1000-5000細(xì)胞根據(jù)生長(zhǎng)率平鋪到96孔板的每個(gè)孔中，接著以3-5平行測(cè)定暴露于各種濃度的測(cè)試化合物96h。所有化合物都以5-20mM溶于二甲亞砜中，并在完全培養(yǎng)液中稀釋至所需濃度。通過SRB分析測(cè)定在藥物治療結(jié)束時(shí)的細(xì)胞數(shù)目(Gududuru等，″Synthesis and Biological Evaluation of NovelCytotoxic Phospholipids for Prostate Cancer，″Bioorg.Med.Chem.Lett.144919-4923(2004)；Rubinstein等，″Comparison of in vitroAnticancer-Drug-Screening Data Generated with a Tetrazolium AssayVersus a Protein Assay Against a Diverse Panel of Human Tumor CellLines，″J.Natl.Cancer Inst.821113-1118(1990)，其每個(gè)在此整個(gè)引入作為參考)。簡(jiǎn)言之，細(xì)胞用10％三氯乙酸固定，用0.4％SRB染色，接著使用板讀數(shù)器(DYNEX Technologies，Chantilly，VA)測(cè)定在540nm的吸光度。將細(xì)胞存活率百分比對(duì)藥物濃度繪圖，使用WinNonlin(Pharsight Corporation，Mountain View，CA)通過非線性回歸分析獲得IC50值(抑制50％的未治療對(duì)照組的細(xì)胞生長(zhǎng)所需濃度)。5-氟尿嘧啶被用作陽性對(duì)照以比較新化合物的效力。夾心ELISA(Roche，Mannheim，Germany)(利用對(duì)DNA和組蛋白特異性的單克隆抗體)被用來確定曝露72h后由類似物誘導(dǎo)的細(xì)胞程序死亡的程度。本試驗(yàn)測(cè)定在細(xì)胞程序死亡期間由核釋放到細(xì)胞質(zhì)中的DNA-組蛋白絡(luò)合物(單-和寡-核小體)。使用RH7777細(xì)胞是因?yàn)榛衔?在受體-陰性細(xì)胞中和在受體-陽性前列腺癌細(xì)胞中的非特異性細(xì)胞毒性。2-芳基-噻唑烷衍生物(ATCAAs)抑制5種人前列腺癌細(xì)胞系(DU-145、PC-3、LNCaP、PPC-1和TSU-PR1)生長(zhǎng)的能力使用磺基若丹明B(SRB)分析(如上所述)進(jìn)行評(píng)價(jià)。未表達(dá)LPL受體的對(duì)照細(xì)胞系(RH7777)(Svetlov等，″EDG Receptors and HepaticPathophysiology of LPA and SIPEDG-ology of Liver Injury，″Biochimica et Biophysica ACT 1582251-256(2002)，其在此整個(gè)引入作為參考)也用于理解這些衍生物的抗增殖活性是否通過抑制LPL受體進(jìn)行介導(dǎo)。使用目標(biāo)化合物3-29的非對(duì)映體混合物來評(píng)價(jià)它們抗前列腺癌細(xì)胞系的體外抑制活性，結(jié)果概括在下表3和4中。5-氟尿嘧啶被用作對(duì)照藥物。為了推導(dǎo)出良好的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系，原則上IC50s應(yīng)該針對(duì)純異構(gòu)體測(cè)定。測(cè)試立體異構(gòu)體的混合物的一個(gè)缺點(diǎn)，在這種情況下是不可避免的，是不能評(píng)價(jià)每種立體異構(gòu)體對(duì)生物學(xué)活性的作用。另一方面，計(jì)算得到的IC50值可以用作一種篩選方法用于選擇有前途的選擇性細(xì)胞毒性試劑以及用于具有最好利用度的非對(duì)映體混合物以抑制前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。許多這些噻唑烷類似物在處死前列腺癌細(xì)胞系中是非常有效的，其IC50值在低/亞微摩爾的范圍內(nèi)(表3)?；衔?-5的細(xì)胞毒性作用實(shí)驗(yàn)表明，鏈長(zhǎng)從C7增加到C18，所述的效力也增加了。然而，烷鏈長(zhǎng)度再增加一個(gè)碳單位(即，C18至C19)將導(dǎo)致細(xì)胞毒性顯著降低。有趣地是，C14衍生物(化合物4)表現(xiàn)出比化合物5更高的效力，但是抗RH7777細(xì)胞系的選擇性減少8倍。因此，對(duì)于在此系列化合物中觀察到的保持效力和選擇性來說，C18單元的烷基鏈?zhǔn)亲罴训?。N-酰基和N-磺?；苌?化合物28和29)比母體化合物5的細(xì)胞毒性低。相對(duì)于噻唑烷(化合物5)衍生物，用烷基或環(huán)己基代替苯基環(huán)降低了效力(化合物7和8)。在苯環(huán)和噻唑烷環(huán)之間引入亞甲基間隔基團(tuán)得到化合物9，其比母體化合物5的活性低。
表3化合物3-17對(duì)前列腺癌細(xì)胞系的抗增殖作用
a對(duì)照細(xì)胞系。b前列腺癌細(xì)胞系。ND＝未檢出。NA＝?jīng)]有活性。
表4化合物18-29和34對(duì)前列腺癌細(xì)胞系的抗增殖作用
a對(duì)照細(xì)胞系。b前列腺癌細(xì)胞系。為了理解不飽和度對(duì)效力和選擇性的影響，以及為了克服與立體異構(gòu)體有關(guān)的問題，將化合物5中的中心噻唑烷核用噻唑環(huán)替換。然而，噻唑衍生物(化合物34)在低于20μM時(shí)對(duì)前列腺和RH7777細(xì)胞都沒有表現(xiàn)出任何活性，這表明具有兩個(gè)手性中心的噻唑烷環(huán)在提供效力和選擇性方面起重要的作用。研究了用雜環(huán)如吲哚、吡啶或呋喃環(huán)代替苯環(huán)后合成的類似物(化合物10-12)。呋喃基衍生物(化合物12)表現(xiàn)出與化合物5同等的細(xì)胞毒性，但是抗RH7777細(xì)胞的選擇性低3倍?；衔?3-27的細(xì)胞毒性數(shù)據(jù)提供了苯環(huán)取代的類似物的廣泛調(diào)查概述。考察這些類似物的IC50值，對(duì)于苯環(huán)上的不同取代基表現(xiàn)出更大的耐受性。通常，最有效的類似物具有供電子取代基，例如化合物13和化合物16-18比化合物5更有效。與RH7777細(xì)胞相比，最大活性化合物之一(化合物18)(IC50值為0.55μM)在PPC-1細(xì)胞中的選擇性高38倍。另一方面，具有吸電子取代基的噻唑烷類似物(化合物19-25)表現(xiàn)出較低的細(xì)胞毒性。通過比較化合物26和化合物27的效力，可以表明苯環(huán)被大體積基團(tuán)取代降低了活性。從LPL受體mRNA表達(dá)研究(表2)中可以清楚，這些細(xì)胞系可以作為極好的模型體系用于研究LPL受體的作用。考慮到SAPs與神經(jīng)酰胺的結(jié)構(gòu)相似性(以及神經(jīng)酰胺誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡的已知能力)，然后測(cè)定噻唑烷類似物的抗增殖作用是否通過細(xì)胞程序死亡事件介導(dǎo)。使用定量夾心ELISA(測(cè)定在細(xì)胞程序死亡期間DNA-組蛋白絡(luò)合物的釋放)研究類似物誘導(dǎo)LNCaP、PC-3和RH7777細(xì)胞程序死亡的能力。計(jì)算得到的濃縮因子(治療細(xì)胞和未治療細(xì)胞中OD405的比值)提供了對(duì)誘導(dǎo)的細(xì)胞程序死亡程度的定量評(píng)價(jià)。最初，僅僅兩個(gè)化合物(4和5)用于此研究。類似物(化合物4)的細(xì)胞凋亡活性在前列腺癌細(xì)胞中是選擇性的，雖然在RH7777陰性對(duì)照細(xì)胞中是非選擇性的(參見下表5)。類似化合物5在PC-3和LNCaP細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡，但是在PC-3細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡的程度更低，這也許是由于在此細(xì)胞系中的效力較低的原因。此數(shù)據(jù)表明，噻唑烷類似物可以作為細(xì)胞程序死亡的有效誘導(dǎo)劑并選擇性地殺死各種前列腺癌細(xì)胞系。
表5噻唑烷酰胺誘導(dǎo)的細(xì)胞程序死亡 這些結(jié)果與通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行的DNA斷裂的分析測(cè)試LNCaP細(xì)胞一致。LNCaP細(xì)胞用噻唑烷衍生物(化合物4或5)處理24-108小時(shí)，然后，通過簡(jiǎn)單的離心方法從2×106細(xì)胞中提取總DNA，用核糖核酸酶和蛋白酶K處理。在乙醇中沉淀后，將DNA重新溶解在Tris-EDTA緩沖液中，在瓊脂糖凝膠上分離，接著通過溴化乙錠染色顯像(Herrmann等，″A Rapid and Simple Method for theIsolation of Apoptotic DNA Fragments，″Nucl.Acids Res.225506-5507(1994)，其在此整個(gè)引入作為參考)。圖4A-B所示的結(jié)果表明，這些化合物在LNCaP前列腺癌細(xì)胞系中都誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡。作為細(xì)胞毒性的另一種評(píng)價(jià)，測(cè)定AKT抑制。將來自未處理的對(duì)照細(xì)胞和用化合物處理的細(xì)胞的30μg總細(xì)胞蛋白通過SDS-PAGE分離，轉(zhuǎn)入到硝化纖維素膜，分別用在Ser 473對(duì)AKT磷酸化特異性的抗-AKT和抗-磷酸基AKT抗體探測(cè)總AKT和磷酸基-AKT(CellSignaling Technology，Beverly，MA)免疫印跡通過增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光顯象，與通過類似物處理的總AKT相比的磷酸基-AKT相對(duì)水平的變化用密度分析確定。圖5B圖解說明使用抗AKT的AKT的免疫檢測(cè)，圖5A表示使用抗磷酸基AKT進(jìn)行的AKT的免疫檢測(cè)。從上文中可以理解，在苯環(huán)上引入環(huán)活化基團(tuán)將導(dǎo)致對(duì)前列腺癌細(xì)胞系的效力增加。上述結(jié)果證明了數(shù)個(gè)具有低/亞微摩爾細(xì)胞毒性和高選擇性的新抗癌劑(由化合物16、17和18表示)。從本研究中，化合物18是最有效的和對(duì)細(xì)胞毒性選擇性最好的化合物，其IC50為0.55μM，在PPC-1細(xì)胞中的選擇性是38倍。此外，這些類似物在LNCaP、PC-3和RH7777細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡的能力提供了了解它們作用機(jī)理的重要線索。
實(shí)施例6-噻唑烷酮酰胺的合成如方案4(圖6)中所示，使用簡(jiǎn)單的化學(xué)方法合成噻唑烷酮衍生物(化合物65-72)，其中l(wèi)是1。各種4-噻唑烷酮可以通過如下合成根據(jù)所報(bào)道的方法將巰基乙酸、甘氨酸甲酯和芳醛在一鍋反應(yīng)中縮合，接著對(duì)該酯進(jìn)行堿性水解(Holmes等，″Strategies forCombinatorial Organic SynthesisSolution and Polymer-supportedSynthesis of 4-thiazolidinones and 4-metathiazanones Derived fromAmino Acids，″J.Org.Chem.607328-7333(1995)，其在此整個(gè)引入作為參考)。通過在EDC/HOBt存在下在標(biāo)準(zhǔn)條件下用合適的胺進(jìn)行處理，獲得噻唑烷酮酰胺。沒有側(cè)鏈的化合物65由相應(yīng)的酸如圖6所示(方案4)合成。噻唑烷酮酰胺(化合物73-77)通過一種直截了當(dāng)?shù)姆椒ê铣?Schuemacher等，″Condensation Between Isocyanatesand Carboxylic Acids in the Presence of 4-dimethylaminopyridine(DMAP)，a Mild and Efficient Synthesis of Amides，″Synthesis 22243-246(2001)，其在此整個(gè)引入作為參考)，其包括所述的酸化合物64a與不同的異氰酸酯在催化量的DMAP存在下進(jìn)行反應(yīng)(圖7)(方案5)?；衔?8使用BH3·THF在條件回流下進(jìn)行徹底還原，得到化合物79(圖8)(方案6)。如方案6所示，使用H2O2和KMnO4對(duì)化合物68進(jìn)行氧化，分別得到亞砜(化合物80)和砜(化合物81)。所有化合物都通過1H NMR和13C NMR、質(zhì)譜以及在某些情況下通過元素分析進(jìn)行表征?；衔镆苑菍?duì)映異構(gòu)體混合物的形式獲得并且以這種形式用于生物學(xué)研究。示范性的化合物68、71、72和81的表征數(shù)據(jù)在下面給出。N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物68)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.89(t，J＝6.0Hz，3H)，1.26(br s，30H)，1.46(m，2H)，3.16-3.29(m，3H)，3.82(d，J＝1.5Hz，2H)，4.20(s，0.5H)，4.25(s，0.5H)，5.83-5.85(m，2H)，7.27-7.41(m，5H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ13.55，22.13，26.30，28.69，28.80，28.88，28.99，29.03，29.10，29.14，31.37，32.13，39.08，45.88，63.67，127.05，128.58，128.96，137.61，166.30，171.61；MS(ESI)m/z 511[M+Na].
計(jì)算C29H48N2O2SC，71.26；H，9.90；N，5.73.實(shí)測(cè)C，71.18；H，10.03；N，5.79.2-(2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物71)
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.89(t，J＝6.0Hz，3H)，1.26(br s，30H)，1.33(s，2H)，3.16-3.19(m，1H)，3.2-3.29(m，2H)，3.80(d，J＝0.9Hz，2H)，3.83(s，3H)，4.16(s，0.5H)，4.21(s，0.47H)，5.82(s，1H)，6.9(dd，J＝1.8Hz，2H)，7.29(dd，J＝1.5Hz，2H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ13.53，22.12，26.31，28.70，28.74，28.79，28.89，28.99，29.03，29.09，29.13，31.36，32.23，39.06，45.74，54.79，63.44，128.64，129.11，159.97，166.41，171.47；MS(ESI)m/z 541[M+Na].
計(jì)算C30H50N2O3SC，69.45；H，9.71；N，5.40.實(shí)測(cè)C，69.30；H，9.86；N，5.43.2-(2-(2，6-二氯苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺(化合物72)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.54(d，J＝15.3Hz，1H)，3.87(s，2H)，4.25(d，J＝15.3Hz，1H)，5.88(s，1H)，7.10(t，J＝1.8Hz，1H)，7.36-7.43(m，7H)，8.29(s，1H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ32.35，46.73，64.40，117.37，123.85，127.29，128.74，129.32，134.59，136.87，138.61，165.14，172.60；MS(ESI)m/z 403[M+Na].計(jì)算C17H14Cl2N2O2SC，53.55；H，3.70；N，7.35.實(shí)測(cè)C，53.39；H，3.47；N，7.36.N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-磺酰基-噻唑烷-3-基)乙酰胺(化合物81)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.89(t，J＝6.0Hz，3H)，1.26(br s，32H)，3.19-3.34(m，3H)，3.88-4.03(dd，J＝16.5Hz，2H)，4.66(s，0.5H)，4.72(s，0.5H)，5.67(br s，1H)，5.95(s，1H)，7.38(m，2H)，7.50-7.53(m，3H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ13.54，22.12，26.26，28.66，28.79，28.96，29.02，29.09，29.14，31.36，39.30，44.35，49.85，81.32，125.77，128.43，128.91，130.55，163.23，165.30；MS(ESI)m/z 519[M-H].計(jì)算C29H48N2O4SC，66.88；H，9.29；N，5.38.實(shí)測(cè)C，66.68；H，9.27；N，5.41實(shí)施例7-細(xì)胞毒性試驗(yàn)使用磺基若丹明B(SRB)分析(參見上面實(shí)施例5中的說明)，評(píng)價(jià)所有合成的化合物對(duì)5種人前列腺癌細(xì)胞系以及在RH7777細(xì)胞(陰性對(duì)照)中的抗增殖活性。5-氟尿嘧啶(5-FU)被用作對(duì)照藥物。如表6所示，在小于50μM時(shí)，4-噻唑烷酮羧酸(化合物64a和64b)不能抑制5種前列腺癌細(xì)胞中任何一種的生長(zhǎng)。然而，相應(yīng)的酰胺(化合物66-68)表現(xiàn)出較高的活性。人們觀察到，烷鏈長(zhǎng)度增加[化合物66(C10)、67(C14)和68(C18)]增加了這些類似物在前列腺癌細(xì)胞中的抗增殖活性。有趣地是，簡(jiǎn)單的酰胺65(沒有任何長(zhǎng)的烷基鏈)在低于100μM時(shí)沒有細(xì)胞毒性，這表明沒有烷基側(cè)鏈將造成抗增殖作用的顯著降低。另一方面，用各種芳基側(cè)鏈替換烷基鏈(化合物73-78)將降低生物學(xué)活性。在此系列當(dāng)中，化合物73是具有中等細(xì)胞毒性的，而其類似物(化合物76-78)在若干前列腺癌細(xì)胞系中表現(xiàn)出弱的細(xì)胞毒性。然而，值得一提的是，在芳環(huán)上具有吸電子取代基的噻唑烷酮酰胺(化合物74和75)在13-29μM的范圍內(nèi)對(duì)所有5種前列腺癌細(xì)胞系都表現(xiàn)出細(xì)胞毒性。
表6化合物64a-64b和65-78的抗增殖作用
a對(duì)照細(xì)胞系；b前列腺癌細(xì)胞系。
表7化合物79-81的抗增殖作用
a對(duì)照細(xì)胞系；b前列腺癌細(xì)胞系。與化合物68(表6)相比，具有大體積的聯(lián)苯基或萘基的噻唑烷酮衍生物(化合物69和70)表現(xiàn)出較低的細(xì)胞毒性。合成化合物71和72以了解化合物68中芳環(huán)取代的作用。人們觀察到，供電子取代基保持了這些衍生物的良好抗增殖活性，而鄰位吸電子取代基顯著降低這些衍生物的抗增殖活性(表6)?；衔?9，其沒有酰胺基，在所有5種前列腺癌細(xì)胞系中都表現(xiàn)出非常好的效力。值得注意的是，與對(duì)照藥物5-FU相比，帶亞砜或砜部分的化合物80和81抗PC-3和PPC-1細(xì)胞系都表現(xiàn)出更高的細(xì)胞毒性效力(表7)。總之，制備并識(shí)別了一系列新的和細(xì)胞毒性的4-噻唑烷酮酰胺。在此系列當(dāng)中，對(duì)I型化合物(圖6)詳細(xì)研究了構(gòu)效關(guān)系以評(píng)價(jià)它們抗5種前列腺癌細(xì)胞系和RH7777細(xì)胞(陰性對(duì)照)的抗增殖活性。該細(xì)胞毒性研究表明，所述的抗增殖活性對(duì)2-芳環(huán)取代、烷基側(cè)鏈的長(zhǎng)度以及親脂性烷基側(cè)鏈的除去或替換敏感。硫氧化是可以很好地接受的，因?yàn)榕c5-FU相比，化合物80和81表現(xiàn)出顯著的細(xì)胞毒性。此研究導(dǎo)致發(fā)現(xiàn)了有效細(xì)胞毒性的4-噻唑烷酮(化合物68、80和81)，其抑制所有5種人前列腺癌細(xì)胞系(DU-145、PC-3、LNCaP、PPC-1和TSU)的生長(zhǎng)，與RH7777細(xì)胞系相比，其具有2-5-倍更低的選擇性。這些4-噻唑烷酮衍生物對(duì)SAP部分具有明顯改善，因?yàn)樗鼈冊(cè)诜悄[瘤細(xì)胞中具有更低的細(xì)胞毒性但表現(xiàn)出改善的選擇性。
實(shí)施例8-乳腺癌細(xì)胞和卵巢癌細(xì)胞中的細(xì)胞毒性試驗(yàn)選擇每一結(jié)構(gòu)式的最有效化合物并測(cè)試它們?cè)谌巳橄侔┘?xì)胞系(MCF-7)和3種人卵巢癌細(xì)胞系(CHO-1、CaOv-3、SKOv-3和OVCAR-3)中的生長(zhǎng)抑制活性。通過相同的磺基若丹明B(SRB)分析(如上所述)進(jìn)行體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)。測(cè)試下表8中所示的化合物抗乳腺癌細(xì)胞系和卵巢癌細(xì)胞系的活性。
表8化合物對(duì)乳腺癌細(xì)胞系和卵巢癌細(xì)胞系的抗增殖作用
a乳腺癌細(xì)胞系；b卵巢癌細(xì)胞系；NT＝未試驗(yàn)。在CaOV-3和SKOv-3細(xì)胞中觀察化合物5的立體選擇性(比較(R)異構(gòu)體和(S)異構(gòu)體)。2-苯基環(huán)上的取代通常將增加該化合物的細(xì)胞毒性。
實(shí)施例9-精胺-共軛的噻唑烷酰胺的合成和試驗(yàn)如圖9所示，將4-噻唑烷酮酸(其中R1是苯基以及l(fā)是1)(1.5g，6.32mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.51g，7.9mmol)和1-羥基苯并三唑(0.85g，6.32mmol)在CH2Cl2中的混合物在冰浴中冷卻并攪拌10min。向這種溶液中加入4-硝基苯酚(0.78g，5.61mmol)并攪拌2h。反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，接著依次用冷的5％HCl、飽和NaHCO3、水和鹽水洗滌，然后干燥(無水Na2SO4)，接著在真空中除去溶劑。該硝基苯基酯產(chǎn)物(化合物100)用快速色譜(硅膠)提純，使用EtOAc/己烷洗脫，得到1.76g(78％)。
1HNMR(CDCl3)δ3.70(d，J＝18Hz，1H)，3.85(d，J＝1.2Hz，2H)，4.64(d，J＝17.7Hz，1H)，5.88(s，1H)，7.24(d，J＝2.1Hz，1H)，7.26(d，J＝2.4Hz，1H)，7.40-7.46(m，5H)，8.26(d，J＝1.8Hz，1H)，8.28(d，J＝2.1Hz，1H).在室溫下，向該硝基苯基酯(化合物100)(0.5g，1.39mmol)在CH3OH(35mL)中的溶液中緩慢地加入精胺溶液(0.33g，1.63mmol，在CH3OH中)并攪拌1h。將所述的反應(yīng)混合物在真空中進(jìn)行濃縮，向該濃縮后的反應(yīng)混合物中加入1∶1的(CHCl3∶CH3OH)，接著通過硅藻土過濾。在真空中除去溶劑，殘余物用快速色譜(硅膠)提純，使用CHCl3/CH3OH/i-PrNH2洗脫，得到0.2g(50％)精胺共軛物(化合物101)，其使用2M HCl/Et2O轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的鹽酸鹽。
1HNMR(DMSO-d6)δ1.71-1.76(m，6H)，1.95-2.0(m，2H)，2.89-3.0(m，10H)，3.0-3.15(m，4H)，3.74(d，J＝15.6Hz，1H)，3.87(d，J＝15.3Hz，1H)，4.10(d，J＝16.5Hz，1H)，7.35-7.44(m，5H)，8.0-8.18(m，4H)，8.89(brs，2H)，9.15(brs，2H).ESIMS m/z 422.4(M++1).與卵巢癌細(xì)胞和MCF-7乳腺癌細(xì)胞相比，化合物101對(duì)前列腺癌細(xì)胞表現(xiàn)出更有效的活性，其IC50(μM)值如下RH7777(＞100)，DU145(12.4)，PC-3(11.1)，LNCaP(26.2)，PPC-1(11.7)，TSU-Pr1(5.0)，MCF-7(＞100)，CaOv-3(39.3)，OVCAR-3(39.7)和SKOv-3(＞100)。雖然在本文中已經(jīng)對(duì)優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行了詳細(xì)描述，但是在不脫離本發(fā)明精神的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然可以進(jìn)行各種修飾、加成、取代等，因此，這些經(jīng)過修飾、加成、取代等得到的實(shí)施方案也包括在由下面權(quán)利要求所限定的本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.式(I)或式(II)的化合物 其中X1和X2每個(gè)是任選的，并且每個(gè)可以是氧；X3和X4每個(gè)是任選的，并且每個(gè)可以是氧或硫；l是1-12的整數(shù)；R1選自飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)、飽和或不飽和混合雜環(huán)、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、或 或-(CH2)m-Y1，其中m是0-10的整數(shù)以及Y1是飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)、或飽和或不飽和混合雜環(huán)；R2是氫、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、R10-N(Z)-烴-或R10-烴-，其中所述的烴基是脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C30烴、飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)、飽和或不飽和混合雜環(huán)，或 或-(CH2)n-Y2，其中n是0-10的整數(shù)和Y2是飽和或不飽和環(huán)烴、飽和或不飽和N-雜環(huán)、飽和或不飽和O-雜環(huán)、飽和或不飽和S-雜環(huán)或飽和或不飽和混合雜環(huán)；R3是氫或脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10烴；R4是任選的，或者可以是氫、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10烴、?；?、乙?；蚣谆酋；?；R5、R6、R7、R8、R9、R11、R12、R13、R14和R15獨(dú)立地選自氫、羥基、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10烴、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、氯、氟、溴、碘、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、酰胺基、芳氨基、酰氨基、烷基酰氨基、二烷基酰氨基、芳基酰氨基、芳基、C5-C7環(huán)烷基、芳烷基；R10是H(Z)N-、H(Z)N-烴-、H(Z)N-烴-N(Z)-烴-、H(Z)N-烴-O-烴-、烴-O-烴-、烴-N(Z)-烴-、H(Z)N-烴-羰基-烴-、烴-羰基-烴-、H(Z)N-苯基-、H(Z)N-苯基烷基-、H(Z)N-苯基烷基-N(Z)-烴-、H(Z)N-苯基烷基-O-烴-、苯基烷基-O-烴-、苯基烷基-N(Z)-烴-、H(Z)N-苯基烷基-羰基-烴-，或苯基烷基-羰基-烴-，其中每個(gè)烴獨(dú)立地是脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C1-C10基團(tuán)，以及其中每個(gè)烷基是C1-C10烷基；和Z獨(dú)立地是氫或叔丁氧羰基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其具有式(I)的結(jié)構(gòu)。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中X1和X2中的一個(gè)或兩個(gè)是氧。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中X1和X2都不是氧。
5.權(quán)利要求2的化合物，其中X3和X4都不是氧。
6.權(quán)利要求2的化合物，其中X3是氧。
7.權(quán)利要求6的化合物，其中X4是氧。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中R3是氫。
9.權(quán)利要求8的化合物，其中R2是C8-C24直鏈或支鏈、脂肪族或非脂肪族烴。
10.權(quán)利要求8的化合物，其中R2是C10-C20直鏈或支鏈、脂肪族或非脂肪族烴。
11.權(quán)利要求8的化合物，其中R2是C14-C18直鏈或支鏈、脂肪族或非脂肪族烴。
12.權(quán)利要求8的化合物，其中R1是苯基、吡啶基、吲哚基、呋喃基、環(huán)烷基、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C10-C20烴、或 其中m是0-10的整數(shù)。
13.權(quán)利要求1的化合物，其中所述的化合物選自2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-癸基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-十四烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-十八烷基-2-(4-氧代-2-聯(lián)苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，2-(2-(1-(二甲氨基)萘-4-基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺，2-(2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺，2-(2-(2，6-二氯苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺，N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-亞砜-噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-磺?；?噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-(3，5-二氟苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-(3，5-二氟苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙烷硫代酰胺，N-(3，5-二(三氟甲基)苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-(3，5-二氯苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-(2，4-二甲氧基苯基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-(萘-1-基)-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，3-(2-(十八烷基氨基)乙基)-2-苯基噻唑烷-4-酮，N-(2-(2-苯基噻唑烷-3-基)乙基)十八烷-1-胺，及其鹽。
14.權(quán)利要求1的化合物，其中所述的化合物選自N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基噻唑烷-3-基)乙酰胺，2-(2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代噻唑烷-3-基)-N-十八烷基乙酰胺，N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-亞砜-噻唑烷-3-基)乙酰胺，N-十八烷基-2-(4-氧代-2-苯基-1-磺酰基-噻唑烷-3-基)乙酰胺，及其鹽。
15.權(quán)利要求1的化合物，其中R2是R10-N(Z)-烴-或R10-烴-以及R10選自H(Z)N-烴-、H(Z)N-烴-N(Z)-烴-、H(Z)N-烴-羰基-烴-、H(Z)N-苯基-、H(Z)N-苯基烷基-和H(Z)N-苯基烷基-N(Z)-烴-。
16.權(quán)利要求1的化合物，其中l(wèi)是1-8的整數(shù)。
17.權(quán)利要求1的化合物，其具有式(II)的結(jié)構(gòu)。
18.權(quán)利要求17的化合物，其中X1和X2中的一個(gè)或兩個(gè)是氧。
19.權(quán)利要求17的化合物，其中X1和X17都不是氧。
20.權(quán)利要求17的化合物，其中X3不是氧。
21.權(quán)利要求17的化合物，其中X3是氧。
22.權(quán)利要求17的化合物，其中R3是氫。
23.權(quán)利要求22的化合物，其中R2是C8-C24直鏈或支鏈、脂肪族或非脂肪族烴。
24.權(quán)利要求22的化合物，其中R2是C10-C20直鏈或支鏈、脂肪族或非脂肪族烴。
25.權(quán)利要求22的化合物，其中R2是C14-C18直鏈或支鏈、脂肪族或非脂肪族烴。
26.權(quán)利要求22的化合物，其中R1是苯基、吡啶基、吲哚基、呋喃基、環(huán)烷基、脂肪族或非脂肪族的直鏈或支鏈C10-C20烴、或 其中m是0-10的整數(shù)。
27.權(quán)利要求17的化合物，其中所述的化合物選自(4R)-2-(4-甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(4-乙氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，N-十八烷基-2-苯基噻唑-4-羧酰胺，(4R)-2-(3，5-二氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(4-氰基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-N-十八烷基-N-甲磺酰基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-N-十八烷基-N-乙?；?2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-N-庚基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4S)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-N-十四烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-N-十八烷基-2-聯(lián)苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-十二烷基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-N-十八烷基-2-(吡啶-3-基)噻唑烷-4-羧酰胺，2-(呋喃-3-基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-N-十九烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(4-羥基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，2-(3-羥基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(2，4，6-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，2-(3，4-二甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，2-(4-乙酰胺基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(2，6-二氯苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(4-溴苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-N-十八烷基-2-對(duì)甲苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-環(huán)己基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，2-(4-硝基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(4-(二甲氨基)苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(1H-吲哚-3-基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-芐基-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(3-溴-4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-N，N-二辛基噻唑烷-4-羧酰胺，及其鹽。
28.權(quán)利要求17的化合物，其中所述的化合物選自(4R)-N-十八烷基-2-苯基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(4-(二甲氨基)苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，2-(3-羥基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，2-(3，4-二甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，2-(4-乙酰胺基苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，(4R)-2-(4-氟苯基)-N-十八烷基噻唑烷-4-羧酰胺，及其鹽。
29.權(quán)利要求1的化合物，其中所述的化合物以外消旋混合物的形式存在。
30.權(quán)利要求1的化合物，其中所述的化合物以基本上純的立體異構(gòu)體的形式存在。
31.權(quán)利要求1的化合物，其中所述的化合物以藥學(xué)上可接受的鹽的形式存在。
32.藥物組合物，包含藥學(xué)上可接受的載體和權(quán)利要求1的化合物。
33.權(quán)利要求32的藥物組合物，其中所述的化合物具有式(I)的結(jié)構(gòu)。
34.權(quán)利要求32的藥物組合物，其中所述的化合物具有式(II)的結(jié)構(gòu)。
35.權(quán)利要求34的藥物組合物，進(jìn)一步包含具有式(I)的化合物。
36.破壞癌細(xì)胞的方法，包括提供權(quán)利要求1的化合物，將所述的化合物與癌細(xì)胞在有效的條件下接觸以破壞所接觸的癌細(xì)胞。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所述的接觸發(fā)生在體外。
38.權(quán)利要求36的方法，其中所述的接觸發(fā)生在體內(nèi)。
39.權(quán)利要求36的方法，其中所述的提供是提供式(I)的化合物。
40.權(quán)利要求36的方法，其中所述的提供是提供式(II)的化合物。
41.權(quán)利要求36的方法，其中所述的癌細(xì)胞是前列腺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞或卵巢癌細(xì)胞。
42.治療或預(yù)防癌癥的方法，包括提供權(quán)利要求1的化合物，并以有效方式給予患者一定量的該化合物以治療或預(yù)防癌癥。
43.權(quán)利要求42的方法，其中所述的提供是提供式(I)的化合物。
44.權(quán)利要求42的方法，其中所述的提供是提供式(II)的化合物。
45.權(quán)利要求42的方法，其中所述的癌癥是前列腺癌、乳腺癌或卵巢癌。
46.權(quán)利要求42的方法，其中所述患者的特征為存在癌癥前期癥狀，以及所述的給藥可以有效地預(yù)防癌癥前期病癥發(fā)展成癌癥。
47.權(quán)利要求42的方法，其中所述患者的特征為存在癌癥，以及所述的給藥可以有效地使癌癥消退或者可有效地抑制癌癥的生長(zhǎng)。
48.權(quán)利要求42的方法，其中所述的給藥全身性地進(jìn)行。
49.權(quán)利要求42的方法，其中所述的給藥直接給予到癌細(xì)胞或癌癥前期細(xì)胞存在的部位上。
50.權(quán)利要求42的方法，其中所述的給藥通過口服、局部、經(jīng)皮、胃腸外、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)滴注、腔內(nèi)或膀胱內(nèi)滴注、眼內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、病損內(nèi)、或應(yīng)用于粘膜如鼻、咽喉和支氣管的粘膜上給藥。
51.權(quán)利要求42的方法，其中有效量包含約0.01-約100mg/kg體重的劑量率。
52.權(quán)利要求42的方法，其中所述的給藥周期性地重復(fù)。
53.權(quán)利要求42的方法，其中所述的給藥與另一種癌癥療法結(jié)合。
54.制備權(quán)利要求1的式(I)化合物的方法，包括式(III)的中間體 與(i)式(HNR2R3)的伯胺或仲胺，或與(ii)氨在含R2-H的化合物存在下，在有效生成式(I)化合物的條件下進(jìn)行反應(yīng)。
55.權(quán)利要求54的方法，其中R2是R10-N(Z)-烴-或R10-烴-。
56.權(quán)利要求54的方法，進(jìn)一步包括將該化合物徹底還原以完全還原X3和X4。
57.權(quán)利要求54的方法，進(jìn)一步包括將該化合物用H2O2和/或KMnO4氧化，得到環(huán)亞砜，其中X1是氧，或砜基團(tuán)，其中X1和X2都是氧。
58.權(quán)利要求54的方法，進(jìn)一步包括所述的化合物與酰基酸酐或甲磺酰氯反應(yīng)，以形成選自?；⒁阴；蚣谆酋；腞4基團(tuán)。
59.制備權(quán)利要求1的式(II)化合物的方法，包括式(IV)的中間體 與式(HNR2R3)的伯胺或仲胺在有效生成式(II)化合物的條件下反應(yīng)。
60.權(quán)利要求59的方法，其中R2是R10-N(Z)-烴-或R10-烴-。
61.權(quán)利要求59的方法，進(jìn)一步包括將該化合物徹底還原以完全還原X3和X4。
62.權(quán)利要求59的方法，進(jìn)一步包括將該化合物用H2O2和/或KMnO4氧化，得到環(huán)亞砜，其中X1是氧，或砜基團(tuán)，其中X1和X2都是氧。
63.權(quán)利要求59的方法，進(jìn)一步包括所述的化合物與?；狒蚣谆酋Ｂ确磻?yīng)，以形成選自?；⒁阴；蚣谆酋；腞4基團(tuán)。
全文摘要
公開了式(I)和(II)的取代噻唑烷酮羧酸酰胺和取代噻唑烷羧酸酰胺，其中各種取代基團(tuán)如說明書中所定義。還公開了這些化合物的制備方法，含有所述化合物的藥物組合物，以及它們的用途，特別是用于治療或預(yù)防癌癥。
文檔編號(hào)C07D277/14GK1902184SQ200480040231
公開日2007年1月24日 申請(qǐng)日期2004年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月18日
發(fā)明者D·D·米勒, V·古杜杜魯, J·T·多爾頓, E·赫哈 申請(qǐng)人:田納西大學(xué)研究基金會(huì), 俄亥俄州立大學(xué)研究基金會(huì)