專利名稱：具有免疫抑制作用的青蒿素衍生物及藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及萜類化合物的化學(xué)合成及其免疫抑制作用，具體涉及新的青蒿素類化合物和作為免疫抑制劑的藥物組合物。
背景技術(shù)：
青蒿素是從中藥青蒿(植物黃花蒿Artemisia annua L.)提取出的抗瘧有效成分，一種罕見的含有過氧基團(tuán)的倍半萜內(nèi)酯。它不但具有卓越的抗瘧作用，對其他寄生蟲(如血吸蟲，華支睪吸蟲等)也有效。還發(fā)現(xiàn)它具有免疫抑制作用，曾用于紅斑狼瘡臨床試驗(yàn)[莊國康等。青蒿治療盤形紅斑狼瘡臨床研究。中華醫(yī)學(xué)雜志1982；6365]。隨著研究工作的深入，發(fā)現(xiàn)青蒿素的衍生物-青蒿琥酯具有更強(qiáng)的免疫抑制作用，可治療紅斑狼瘡和某些皮膚病，取得較好療效[余其斌等，青蒿琥酯治療紅班狼瘡56例，中華皮膚科雜志，1997，3951；陳華等，青蒿琥酯治療濕疹-皮炎及光敏性皮膚病臨床觀察，蚌埠醫(yī)學(xué)院院報(bào)，1991，16251]。這些臨床試驗(yàn)說明青蒿琥酯比青蒿素的免疫抑制作用更強(qiáng)，但病人需要長期靜脈注射，使用十分不便。當(dāng)前臨床常用免疫抑制劑環(huán)孢素A價(jià)格昂貴，而且對腎、神經(jīng)系統(tǒng)、胃腸道有毒性，導(dǎo)致有些病人不能堅(jiān)持用藥。因此，本發(fā)明者展開了尋找更高效、更安全的免疫抑制劑的研究。
青蒿素 青蒿琥酯發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的是提供新的青蒿素衍生物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含該類衍生物的藥物組合物及用途。
本發(fā)明提供如下式(1)所示化合物、其異構(gòu)體及藥用鹽 式(1)中X＝O、O(CH2)n或OCHR，其中R代表C1-C4烴基和CN，COOH，COOMe，COOEtAr＝苯基，萘基Y＝單鍵、O(CH2)n，OCHMe和取代或未取代的C1-C4烴基Z＝H、鹵素、OR’、COOR’或CONHR”，其中R’＝H、C1-C4烷基、鄰甲氧基苯基或C1-C4烷胺基，R”＝CH2COOR’；和n＝1-4。
式(1)所示化合物的異構(gòu)體包括但不限于立體異構(gòu)體和光學(xué)異構(gòu)體。
式(1)所示化合物的藥用鹽包括但不限于與碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、甲胺、乙胺、二甲胺、二乙胺、乙醇胺、堿性胺基酸等或鹽酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、馬來酸、草酸、酒石酸、枸櫞酸等的加成鹽。
本發(fā)明的式(1)化合物中較佳的為如下式(1)化合物，其中，-X＝O；-Ar＝苯基；-Y＝O(CH2)n，OCHMe，取代或未取代的C1-C4烴基；-Z＝COOR’其中R’＝H、Me、Et或鄰甲氧基苯基；和-n＝1-2。
本發(fā)明取代的二氫青蒿素醚主要包括4-甲氧羰甲基苯基-二氫青蒿素醚；4-羧基甲基苯基-二氫青蒿素醚；3-羧基甲氧基苯基-二氫青蒿素醚；4-甲氧羰甲氧基苯基-二氫青蒿素醚；4-乙氧羰甲氧基苯基-二氫青蒿素醚；4-甲氧羰乙基苯基-二氫青蒿素醚；4-羧基乙基苯基-二氫青蒿素醚；
3-琥珀酸單?；交?二氫青蒿素醚；4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氫青蒿素醚；4-甲氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚；4-鄰甲氧基苯氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚；4-乙氧羰基(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚；4-羧基(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚；4-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚；3-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚；本發(fā)明提供式(1)所示化合物、其異構(gòu)體及藥用鹽。它們均以二氫青蒿素(2)或乙酰二氫青蒿素(3)為原料，在酸催化條件下與含有羧酸酯的酚或醇反應(yīng)，然后將其水解，得到游離酸；或在酸催化條件下將它們與二元酚或三元酚反應(yīng)，然后進(jìn)一步修飾，生成目標(biāo)化合物(1)。含有游離酸的目標(biāo)化合物可在水或含水的有機(jī)溶劑中與無機(jī)堿或有機(jī)堿制成相應(yīng)的鹽。含有游離胺的目標(biāo)化合物可在醇等有機(jī)溶劑中與無機(jī)酸或有機(jī)酸制成相應(yīng)的鹽。具體制備方法可參照本發(fā)明者以前的專利ZL 94113982.4，ZL01113407.0和專利申請?zhí)枮?9807416中的內(nèi)容。
本發(fā)明方法所制得的式(1)化合物都可以用常規(guī)的技術(shù)進(jìn)行精制。
下列化合物的理化數(shù)據(jù)已在專利ZL 01113407.0中報(bào)道，但免疫抑制作用屬首次報(bào)道 4a n＝0，R＝H 5a R＝H6a R＝OCH2COOH(m)4b n＝0，R＝CH35b R＝CH36b R＝OCH2COOCH3(m)4c n＝2，R＝H 6c R＝OCH2COOH(p)40 n＝2，R＝CH36d R＝R＝OCH2COOCH3(p)本發(fā)明進(jìn)一步提供一種具有免疫抑制作用的藥物組合物，所述藥物組合物包含安全、有效劑量范圍內(nèi)的式(1)所示化合物或其藥用鹽和藥學(xué)上可接受的載體。
“安全、有效劑量”指的是化合物的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用?；衔锏陌踩?、有效劑量根據(jù)治療對象的年齡、體重、治療適應(yīng)癥、給藥途徑、療程及任何相關(guān)的治療等具體情況來確定。成人一般為0.1mg/天至500mg/天，分一次或多次給藥。兒童酌減。
本發(fā)明所指的組合物均以重量百分比計(jì)取代的二氫青蒿素醚10-55％賦形劑15-40％輔助劑20-50％本發(fā)明的組合物可用于口服、胃腸外、經(jīng)鼻、經(jīng)舌、經(jīng)眼、經(jīng)呼吸道或經(jīng)直腸給藥，尤其是片劑或腸溶丸、舌下片劑、貼劑、栓劑、霜?jiǎng)⒂透鄤?、皮膚用凝膠劑等。
“藥學(xué)上可以接受的載體”指的是一種或多種相容性固體或液體填充劑或賦形劑，它們適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性?！跋嗳菪浴痹诖酥傅氖墙M合物中各組份能和本發(fā)明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥學(xué)上可以接受的載體部分例子有糖(如葡萄糖、蔗糖、乳糖等)，淀粉(如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉等)，纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯、微晶纖維等)，聚乙二醇、明膠，滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、硫酸鈣，植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等)。還可以是乳化劑(如吐溫)、潤濕劑(如十二烷基硫酸鈉)，著色劑，調(diào)味劑，穩(wěn)定劑，防腐劑，無熱原水等。本發(fā)明的組合物對載體的選擇取決于化合物的給藥方式。
本發(fā)明者采用下列方法，對本發(fā)明的化合物進(jìn)行了體外和體內(nèi)的免疫抑制活性的篩選和研究(現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法，張均田主編，北京醫(yī)科大學(xué)/中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998年出版)。
一.實(shí)驗(yàn)材料試驗(yàn)動(dòng)物純系Balb/c雄性小鼠，6-8周齡。
RPMI-1640培養(yǎng)液(Gibco，pH7.2)添加10％胎牛血清(FBS)，100｀U/mL青霉素，100μg/mL鏈霉素，10mM HEPES，及50μM 2-ME。
刺激劑伴刀豆蛋白(ConA)，細(xì)菌脂多糖(LPS，來自Escherichia Coli 055:B5)，臨用前以RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋至合適濃度。
二.實(shí)驗(yàn)方法[一]淋巴細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)1.脊椎處死小鼠，無菌取其脾臟，磨碎制成單細(xì)胞懸液，用MTT溶解液(10％SDS，50％二甲基甲酰胺；pH7.2)去除紅細(xì)胞后，用含10％FBS的RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度調(diào)成5×106/mL。
2.96孔培養(yǎng)板中加入80μL的細(xì)胞懸液，40μL的樣品，40μL含10％FBS的培養(yǎng)液；對照加80μL培養(yǎng)液，總體積為160μL。并設(shè)空白對照。
3.放入37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。在結(jié)束培養(yǎng)前6-7小時(shí)，每孔加5mg/mLMTT 16μL。
4.結(jié)束培養(yǎng)時(shí)，每孔加80μL MTT溶解液(10％SDS，50％二甲基甲酰胺；pH7.2)，在培養(yǎng)箱中放置6-7小時(shí)后，用酶標(biāo)儀于570nm處測定OD570值。
淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)1.脫脊椎處死小鼠，無菌取脾臟制成單細(xì)胞懸液，用含10％FBS的RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度調(diào)成4×106/mL。
2.于96孔板中加入100μL的細(xì)胞懸液，50μL的樣品溶液，50μL ConA或LPS溶液，對照孔加50μL含10％FBS的培養(yǎng)液?？傮w積為200μL。
3.于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。在結(jié)束培養(yǎng)前7-8小時(shí)，每孔加0.5μCi[3H]-胸腺嘧啶核苷(25μL/孔)。
4.結(jié)束培養(yǎng)，用細(xì)胞收集儀(HARVESTER96，TOMTEC)收集細(xì)胞于玻璃纖維膜上，加入閃爍液，用液體閃爍記數(shù)儀(MicroBeta Trilux，PerkinElmer)檢測細(xì)胞DNA中[3H]-胸腺嘧啶核苷的摻入量，反映細(xì)胞增殖情況。
同種異體混合淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)(MLR)1.脫脊椎處死C57BL/6和Balb/c小鼠，無菌取其脾臟，磨碎制成單細(xì)胞懸液，去除紅細(xì)胞后，用含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度調(diào)成6×106/mL。
2.C57BL/6脾細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞，Balb/c脾細(xì)胞(經(jīng)鈷60照射，3000rads)為刺激細(xì)胞，兩種細(xì)胞等體積混合。
3.于96孔板中加入細(xì)胞混合液100μL，樣品100μL，對照加100μL含10％血清的培養(yǎng)液。并做兩種細(xì)胞的單獨(dú)培養(yǎng)對照。
4.37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3，4，5天。在結(jié)束培養(yǎng)前1天，加入3H稀釋液25μL(即，3.8×1010Bq的[3H]-胸腺嘧啶核苷)。
5.結(jié)束培養(yǎng)時(shí)，將培養(yǎng)板凍存于-20℃冰箱。
6.細(xì)胞收集儀(HARVESTER96，TOMTEC)收集細(xì)胞于玻璃纖維膜上，用液閃記數(shù)儀(MicroBeta Trilux，PerkinElmer)檢測DNA對[3H]-胸腺嘧啶核苷的摻入量，反映細(xì)胞增殖情況。
細(xì)胞因子產(chǎn)生的誘導(dǎo)和檢測1.脫脊椎處死小鼠，無菌取其脾臟，磨碎制成單細(xì)胞懸液，去除紅細(xì)胞后，用含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度調(diào)成5×106/mL。
2.于24孔板中加入細(xì)胞懸液1mL，樣品及ConA(終濃度5μg/mL)或Sac(終濃度0.01％)各0.5mL，對照加0.5mL含10％小牛血清的培養(yǎng)液，終體積2mL。
3.37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24或48小時(shí)后，收集培養(yǎng)上清，凍存于-20℃冰箱，細(xì)胞因子待測。
4.雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA法)檢測細(xì)胞因子的產(chǎn)生，以TMB作為酶反應(yīng)底物，OD450nM檢測吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算樣品細(xì)胞因子生成量。
遲發(fā)性超敏反應(yīng)動(dòng)物模型(DTH)1.Day 0，Balb/c小鼠(雌性，6-8周齡)每只后腳以20μL 0.5％DNFB致敏。次日加強(qiáng)。(DNFB溶于[丙酮∶橄欖油＝4∶1]油劑中)；2.Day(7-9)，鼠左耳內(nèi)外兩側(cè)各10μL 0.4％DNFB進(jìn)行攻擊；3.攻擊前1小時(shí)腹腔注射或灌胃一次。12小時(shí)后，再給藥一次；4.攻擊后24-48小時(shí)，檢測各指標(biāo)。
注Balb/c小鼠(雌性，6-8周齡)，致敏劑濃度為0.7％，攻擊劑濃度為0.6％。
小鼠B細(xì)胞抗羊紅細(xì)胞特異性抗體的產(chǎn)生1.新鮮羊紅血細(xì)胞(SRBC)經(jīng)pH7.2PBS洗3次，1∶20稀釋；2.新鮮豚鼠血清1∶10稀釋；3.配制2×107/mL小鼠脾臟細(xì)胞懸液；
4.三者分別取1mL混合，37℃，1.5小時(shí)；2500rpm×15min離心，取上清，520nM測OD值。
Balb/c小鼠在給藥后第三天致敏將羊紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌三次，按5％比例稀釋SRBC壓積，每只小鼠腹腔注射0.2mL，于致敏后第六天解剖取脾臟細(xì)胞測定其抗體生成量。
大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分成5組，將滅活的BCG用滅菌的液體石蠟配成10g/L，震蕩混勻，皮內(nèi)注射0.1mL于大鼠左后足墊內(nèi)。注射后連續(xù)觀察28天，以注射對側(cè)繼發(fā)性足腫脹為關(guān)節(jié)炎發(fā)生的指征。從第12天起每隔四天用排水法測踝關(guān)節(jié)以下足體積。同時(shí)，對多發(fā)性關(guān)節(jié)炎病變的嚴(yán)重程度按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分0無紅腫；1小趾關(guān)節(jié)稍腫；2趾關(guān)節(jié)和足跖腫脹；3踝關(guān)節(jié)以下的足爪腫脹；4包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)全部足爪腫脹。每只大鼠的最大得分為16。從免疫前2天開始腹腔注射給藥，一直持續(xù)至免疫后第28天。觀察藥物對佐劑性大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的誘發(fā)及防治。
實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這一系列化合物的淋巴細(xì)胞毒性較低，有的比對照品青蒿素和青蒿琥酯的毒性更低。同時(shí)，這一系列化合物都能顯著抑制T和B淋巴細(xì)胞受絲裂原誘導(dǎo)而引發(fā)的增殖反應(yīng)。附表中列出了一些化合物的半數(shù)淋巴細(xì)胞毒性值(CC50其數(shù)值越大毒性越低)，以及在抑制ConA誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞和LPS抑制B淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)的半數(shù)抑制活性濃度(IC50其數(shù)值越小抑制活性就越強(qiáng))，可以看出有些化合物的免疫抑制活性明顯好于對照品青蒿素和青蒿琥酯。


有多個(gè)化合物經(jīng)體內(nèi)用藥(腹腔用藥)后可顯著抑制二硝基氟苯誘發(fā)的小鼠耳腫脹反應(yīng)和綿羊紅細(xì)胞引起的小鼠特異性抗羊紅細(xì)胞抗體的分泌，表明這些化合物在體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中顯示了良好的免疫抑制活性。
例如，本發(fā)明化合物中的實(shí)施例33-琥珀酸單?；交?二氫青蒿素醚(β型)具有如下體內(nèi)外免疫抑制活性；1)非特異性淋巴細(xì)胞毒性非常低，IC50為27μg/mL；2)強(qiáng)烈抑制ConA誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖反應(yīng)，IC50為0.13μg/mL；3)強(qiáng)烈抑制LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞增殖反應(yīng)，IC50為0.12μg/mL；4)強(qiáng)烈抑制同種異體混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)引起增殖反應(yīng)，IC50為2.1μg/mL；5)對淋巴細(xì)胞激活時(shí)細(xì)胞因子的分泌有抑制作用，用PMA刺激時(shí)，對TNF-α，尤其是IL-6的產(chǎn)生抑制明顯，呈劑量依賴性，對IFN-γ和IL-12這兩種重要的Th1型T細(xì)胞分化促進(jìn)因子的產(chǎn)生也有抑制作用；6)在體內(nèi)用藥可抑制小鼠B細(xì)胞(抗體形成細(xì)胞)的抗體和補(bǔ)體產(chǎn)生；7)能抑制DNFB誘導(dǎo)DTH反應(yīng)；8)在佐劑性大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型中有一定的防治作用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但這些實(shí)施例絕不是對本發(fā)明的任何限制。
在下列實(shí)施例中青蒿素母核用Q代表 波紋線 代表β取代或/和α取代直線 代表β取代虛線 代表α取代實(shí)施例1 4-甲氧羰甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型) 將乙酰二氫青蒿素和4-羥基苯乙酸甲酯溶解于二氯甲烷中，滴加酸，反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)常規(guī)處理，用硅膠柱層析分離，再重結(jié)晶，得到白色結(jié)晶標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)108-112℃。
元素分析(C24H32O7)計(jì)算值C 66.65 H 7.45實(shí)測值C 67.03 H 7.21。
實(shí)施例2 4-羧甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例1所得化合物倒入KOH/C2H5OH溶液中進(jìn)行水解反應(yīng)，然后粗產(chǎn)品經(jīng)重結(jié)晶得到白色結(jié)晶標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)154-156℃。
元素分析(C23H30O7)計(jì)算值C 66.01 H 7.23實(shí)測值C 65.95 H 7.29。
實(shí)施例3 3-琥珀酸單酰基苯基-二氫青蒿素醚(β型)
3-酚基苯基-二氫青蒿素醚和丁二酸酐反應(yīng)，經(jīng)硅膠柱層析分得白色無定型固體。
元素分析(C25H32O9·1/2H2O)計(jì)算值C 61.84 H 6.85實(shí)測值C 62.09 H 6.86。
實(shí)施例4 4-(二甲胺基乙氧羰甲氧基)苯基-二氫青蒿素醚(β型) 4-羧甲氧基苯基-二氫青蒿素醚與N，N-二甲基乙醇胺縮合得標(biāo)題化合物。
元素分析(C27H39NO8)計(jì)算值C 64.14 H 7.77 N 2.77實(shí)測值C 64.30 H 7.79 N 2.65。
實(shí)施例5 4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氫青蒿素醚(β型) 4-羧基苯基-二氫青蒿素醚和甘胺酸乙酯縮合，得到標(biāo)題化合物。
元素分析(C26H35NO8)計(jì)算值C 63.78 H 7.21 N 2.96實(shí)測值C 64.04 H 7.26 N 3.30。
實(shí)施例6 4-乙酰氧基(α-甲基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 二氫青蒿素和4-乙酰氧基-α-甲基芐醇縮合，得到標(biāo)題化合物。
元素分析(C25H34O7)計(jì)算值C 67.24 H 7.67實(shí)測值C 67.14 H 7.61。
實(shí)施例7 4-羥基(α-甲基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例6所得化合物進(jìn)行堿性水解，得到標(biāo)題化合物。
元素分析(C23H32O6)計(jì)算值C 68.29 H 7.97實(shí)測值C 68.23 H 8.27。
實(shí)施例8 4-乙氧羰甲氧基(α-甲基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例7所得化合物與氯甲酸乙酯反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物。
元素分析(C27H38O8)計(jì)算值C 66.10 H 7.81實(shí)測值C 65.91 H 8.17。
實(shí)施例9 4-羧甲氧基(α-甲基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例9所得化合物進(jìn)行堿性水解，得到標(biāo)題化合物。
元素分析(C25H34O8)計(jì)算值C 64.92 H 7.41實(shí)測值C 64.66 H 7.50。
實(shí)施例10 4-羥基(α-氰基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 二氫青蒿素與4-乙酰氧基-α-氰基芐醇縮合，然后進(jìn)行堿性水解，生成標(biāo)題化合物。
元素分析(C23H29NO6)計(jì)算值C 66.49 H 7.04 N 3.37實(shí)測值C 66.53 H 7.04 N 3.16。
實(shí)施例11 3-羥基(α-氰基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 二氫青蒿素與3-乙酰氧基-α-氰基芐醇縮合，然后進(jìn)行堿性水解，生成標(biāo)題化合物。
元素分析(C23H29NO6)計(jì)算值C 66.49 H 7.04 N 3.37實(shí)測值C 66.38 H 6.84 N 3.01。
實(shí)施例12 (S)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)芐基-二氫青蒿素醚和(R)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 二氫青蒿素和2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)芐醇縮合。待反應(yīng)結(jié)束，經(jīng)常規(guī)處理后用硅膠柱層析分離。
第一流份為(S)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)芐基-二氫青蒿素醚，白色結(jié)晶，熔點(diǎn)70-71℃。
元素分析計(jì)算值C 64.65 H 7.03 N 2.79實(shí)測值C 64.63 H 7.33 N 2.85。
第二流份為(R)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)芐基-二氫青蒿素醚，白色結(jié)晶，熔點(diǎn)88-90℃。
元素分析計(jì)算值C 64.65 H 7.03 N 2.79實(shí)測值C 65.08 H 7.33 N 2.71。
實(shí)施例13 (S)-2-羧甲氧基(α-氰基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例12所得化合物(S)-2-乙氧羰甲氧基(α-氰基)芐基-二氫青蒿素醚進(jìn)行堿性水解，得到白色結(jié)晶標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)143-144℃。
元素分析(C25H31NO8)
計(jì)算值C 63.41 H 6.60 N 2.96實(shí)測值C 63.27 H 6.52 N 2.97。
實(shí)施例14 2-溴-5-羥基(α-氰基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 以二氫青蒿素與2-溴-5-乙酰氧基(α-氰基)芐醇為原料，經(jīng)二步反應(yīng)，制得白色結(jié)晶標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)90-92℃。
元素分析(C23H28BrNO6)計(jì)算值C 55.88 H 5.71 N 2.83實(shí)測值C 55.52 H 5.76 N 2.82。
實(shí)施例15 4-氟(α-甲酸甲酯基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 二氫青蒿素與4-氟(α-甲酸甲酯基)芐醇縮合生成標(biāo)題化合物。
元素分析(C24H31FO7)計(jì)算值C 63.99 H 6.93實(shí)測值C 64.29 H 6.98。
實(shí)施例16 4-溴(α-甲酸乙酯基)芐基-二氫青蒿素醚(β型) 二氫青蒿素與4-溴(α-甲酸乙酯基)芐醇進(jìn)行縮合，生成標(biāo)題化合物。
元素分析(C25H33BrO7)計(jì)算值C 57.15 H 6.33實(shí)測值C 56.87 H 6.16。
實(shí)施例17 (S)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氫青蒿素醚和(R)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氫青蒿素醚(β型) 二氫青蒿素與α-甲酸甲酯基萘甲醇-1縮合生成，經(jīng)柱層析分離得到二個(gè)標(biāo)題化合物。
(S)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氫青蒿素醚，無定型固體。
元素分析(C28H34O7)計(jì)算值C 69.69 H 7.10實(shí)測值C 69.72 H 7.17。
(R)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氫青蒿素醚，無定型固體。
元素分析(C28H34O7)計(jì)算值C 69.69 H 7.10實(shí)測值C 70.06 H 6.97。
實(shí)施例18 (S)-α-羧基-1-萘甲基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例17所得化合物(S)-α-甲酸甲酯基-1-萘甲基-二氫青蒿素醚進(jìn)行堿性水解，得到無定型固體標(biāo)題化合物。
元素分析(C27H32O7)計(jì)算值C 69.21 H 6.88實(shí)測值C 69.29 H 6.90。
實(shí)施例19 4-甲氧羰基-(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型) 乙酰二氫青蒿素和2-(4-羥基苯基)異丙酸甲酯縮合，經(jīng)常規(guī)處理后用硅膠柱層析分離，得到無色油狀標(biāo)題化合物。
元素分析(C25H34O7)計(jì)算值C 67.24 H 7.67實(shí)測值C 67.05 H 7.82。
實(shí)施例20 4-羧基-(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例19所得化合物進(jìn)行堿性水解，經(jīng)重結(jié)晶，得到白色結(jié)晶標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)152-154℃。
元素分析(C24H32O7)計(jì)算值C 66.65 H 7.46實(shí)測值C 66.63 H 7.53。
實(shí)施例21 4-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例20所得化合物和2-甲氧基酚縮合得標(biāo)題化合物，白色無定型固體。
元素分析(C31H38O8)計(jì)算值C 69.13 H 7.11實(shí)測值C 69.08 H 7.00。
實(shí)施例22 4-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚(β型) 乙酰二氫青蒿素和2-(4-羥基苯氧基)丙酸乙酯縮合，待反應(yīng)結(jié)束，經(jīng)常規(guī)處理后用硅膠柱層析分離，得到無色油狀標(biāo)題化合物。
元素分析(C26H36O8)計(jì)算值C 65.53 H 7.61實(shí)測值C 65.46 H 7.66。
實(shí)施例23 4-羧基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例22所得化合物進(jìn)行堿性水解，得到白色無定型固體標(biāo)題化合物。
元素分析(C24H32O8)計(jì)算值C 64.27 H 7.19實(shí)測值C 64.25 H 7.40。
實(shí)施例24 4-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚(β型) 將4-羧基-(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚進(jìn)行羧基的芳香酯化，得到標(biāo)題化合物。白色結(jié)晶，熔點(diǎn)，142-144℃。
元素分析(C31H38O9)
計(jì)算值C 67.13 H 6.91實(shí)測值C 67.09 H 6.92。
實(shí)施例25 3-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚(β型) 將3-羧基-(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚進(jìn)行羧基的芳香酯化，得到標(biāo)題化合物。白色無定型固體。
元素分析(C31H38O9)計(jì)算值C 67.13 H 6.91實(shí)測值C 67.12 H 7.04。
實(shí)施例26 3-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚(α型) 乙酰二氫青蒿素和2-(3-羥基苯氧基)丙酸乙酯縮合，待反應(yīng)結(jié)束，經(jīng)常規(guī)處理后用硅膠柱層析分離，得到無色油狀標(biāo)題化合物。
元素分析(C26H36O8)計(jì)算值C 65.53 H 7.61實(shí)測值C 65.17 H 7.76。
實(shí)施例27 3-羧基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚(α型) 將實(shí)施例26所得化合物進(jìn)行堿性水解，得到白色無定型固體標(biāo)題化合物。
元素分析(C24H32O8)計(jì)算值C 64.27 H 7.19實(shí)測值C 64.42 H 7.50。
實(shí)施例28 3-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚(α型)
將實(shí)施例27所得游離酸酯化得標(biāo)題化合物，白色無定型固體。
元素分析(C31H38O9)計(jì)算值C 67.13 H 6.91實(shí)測值C 67.52 H 7.33。
實(shí)施例29 3-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(β型)和3-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(α型) 二氫青蒿素和2-(3-羥甲基苯氧基)丙酸乙酯縮合，常規(guī)處理后用硅膠柱層析分離，得到兩個(gè)無色油狀標(biāo)題化合物。
元素分析(C27H38O8)計(jì)算值C 66.10 H 7.81(β型)實(shí)測值C 66.31 H 7.67。
(α型)實(shí)測值C 66.15 H 7.91。
實(shí)施例30 3-羧基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(β型)和3-羧基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(α型) 將實(shí)施例29所得化合物進(jìn)行堿性水解，得到兩個(gè)標(biāo)題化合物，均為白色無定型固體。
元素分析(C25H34O8)計(jì)算值C 64.92 H 7.41(β型)實(shí)測值C 64.64 H 7.61。
(α型)實(shí)測值C 66.76 H 7.66。
實(shí)施例31 3-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(β型)
將實(shí)施例30所得β-標(biāo)題化合物進(jìn)行羧基的芳香酯化，得到無色油狀標(biāo)題化合物。
計(jì)算值C 67.59 H 7.09實(shí)測值C 67.54 H 7.17。
實(shí)施例32 4-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(β型)和4-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(α型) 二氫青蒿素和2-(4-羥甲基苯氧基)丙酸乙酯縮合，常規(guī)處理后用硅膠柱層析分離，得到兩個(gè)無色油狀標(biāo)題化合物。
元素分析(C27H38O8)計(jì)算值C 66.10 H 7.81(β型)實(shí)測值C 66.03 H 7.70(α型)實(shí)測值C 66.18 H 7.49。
實(shí)施例33 4-羧基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(β型)和4-羧基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(α型) 將實(shí)施例32所得化合物進(jìn)行堿性水解，得到兩個(gè)標(biāo)題化合物。均為白色無定型固體。
元素分析(C25H34O8)計(jì)算值C 64.92 H 7.41(β型)實(shí)測值C 64.72 H 7.67(α型)實(shí)測值C 64.56 H 7.75。
實(shí)施例34 4-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧芐基-二氫青蒿素醚(β型) 將實(shí)施例33所得β-標(biāo)題化合物進(jìn)行羧基的芳香酯化，得到無色油狀標(biāo)題化合物。元素分析(C32H40O9)
計(jì)算值C 67.59 H 7.09實(shí)測值C 67.55 H 7.21。
實(shí)施例354-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧(α-甲基)芐基-二氫青蒿素醚(β型)和4-乙氧羰基-(α-甲基)次甲基氧(α-甲基)芐基-11-α甲基二氫青蒿素醚 二氫青蒿素和2-[4-(α-甲基)羥甲基苯氧基]丙酸乙酯縮合，經(jīng)常規(guī)處理后用硅膠柱層析分離，得到兩個(gè)無色油狀標(biāo)題化合物。
元素分析(C28H40O8)計(jì)算值C 66.65 H 7.99(11-β)實(shí)測值C 66.60 H 7.88(11-α)實(shí)測值C 66.77 H 8.11。
實(shí)施例36 4-乙氧羰基甲氧苯基-二氫青蒿素醚(β型) 將4-羧甲氧苯基-二氫青蒿素醚乙酯化，得到白色無定型固體標(biāo)題化合物。
元素分析(C25H34O8)計(jì)算值C 64.92 H 7.41實(shí)測值C 64.62 H 7.40實(shí)施例37 4-羧基(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型)片劑處方如下4-羧基(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型)35％淀粉25％羥甲基纖維素鈉 30％淀粉漿(10％)9％硬脂酸 1％
將活性成分粉碎，100目過篩，與羥甲基纖維素鈉、10％淀粉漿混合，制粒、干燥，加入干淀粉、潤滑劑混勻，壓片。
實(shí)施例38 3-琥珀酸單?；交?二氫青蒿素醚(β型)的片劑處方如下3-琥珀酸單?；交?二氫青蒿素醚(β型) 30％微晶纖維素 65％微粉化的聚乙二醇40005％將活性成分粉碎，過篩，與微晶纖維素、潤滑劑混合均勻后直接壓片。
實(shí)施例39 4-(2-甲氧基苯氧)羰基(α-甲基)次甲氧基苯基-二氫青蒿素醚鹽腸衣片處方如下4-(2-甲氧基苯氧)羰基(α-甲基)次甲氧基苯基-二氫青蒿素醚35％淀粉 20％干淀粉35％淀粉漿(10％) 8％滑石粉2％將活性成分及淀粉混合均勻，加10％淀粉漿制成軟材，制粒，干燥，整粒，加入干淀粉、滑石粉混勻，壓片，包腸溶衣。
實(shí)施例40 4-甲氧羰甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型)的硬膠囊處方如下4-甲氧羰甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型)50％微晶纖維素 30％聚乙二醇1500 20％把活性成分及輔料充分混合均勻，裝入空膠囊中。
實(shí)施例41 4-乙氧羰甲氧基苯基-二氫青蒿素醚(β型)的軟膠囊處方如下
4-乙氧羰甲氧基苯基-二氫青蒿素醚(β型)45％聚乙二醇400-1000 30％助懸劑(10～30％油臘混合物) 25％將活性成分研磨過篩，加其余成分充分混和，于制丸機(jī)中制成軟膠囊。實(shí)施例424-甲氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型)的凝膠劑處方如下4-甲氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型) 35％聚乙二醇 65％將聚乙二醇300和聚乙二醇1500(1∶1)攪拌加熱，熔合后，加入研磨過篩的活性成分，充分?jǐn)嚢璩赡z。
實(shí)施例43 3-(2-甲氧基苯氧)羰基(α-甲基)次甲氧基苯基-二氫青蒿素醚栓劑處方如下3-(2-甲氧基苯氧)羰基(α-甲基)次甲氧基苯基-二氫青蒿素醚 15％半合成脂肪酸酯 85％將活性成分研磨過篩，先加少量熔融的基質(zhì)，充分研磨混和后，再與其余熔融的基質(zhì)混和，然后注入栓劑模中。
實(shí)施例44 4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氫青蒿素醚乳膏劑處方如下4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氫青蒿素醚2.5％單硬脂酸甘油酯 8.5％硬脂酸 15％白凡士林 10％甘油 8％吐溫-803水 53％
將活性成分溶入少量的丙酮中，加入單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林-起加熱熔融，并保持80℃，另將吐溫-80、甘油和水也加熱至80℃，然后慢慢加入到上述油相中，按同一方向攪拌至呈白色細(xì)膩乳膏。
實(shí)施例45 4-(二甲胺基乙氧羰甲氧基)苯基-二氫青蒿素醚(β型)的貼劑處方如下4-(二甲胺基乙氧羰甲氧基)苯基-二氫青蒿素醚(β型) 15％丙烯酸樹脂 55％癸二酸二丁酯 25％丙酮 5％以丙烯酸樹脂為基質(zhì)，加入處方量的增塑劑癸二酸二丁酯，并以適量丙酮為溶劑，使之混合均勻；隨后再加入分散在丙酮中的活性成分，在微熱條件下攪拌均勻，使成澄明溶液，均勻涂布在基材或防粘層上，60℃下烘干，按劑量分割，即得。
實(shí)施例46 4-羧基甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型)鈉鹽將4-羧基甲基苯基-二氫青蒿素醚(β型)加入到等當(dāng)量的碳酸鈉的水溶液中，成透明溶液。
實(shí)施例47 3-琥珀酸單酰基苯基-二氫青蒿素醚賴胺酸鹽將3-琥珀酸單?；交?二氫青蒿素醚加入到等當(dāng)量的賴胺酸的水溶液中，加熱攪拌成透明溶液。
實(shí)施例48 4-(二甲胺基乙氧羰甲氧基)苯基-二氫青蒿素醚的順丁烯二酸鹽將等當(dāng)量的4-(二甲胺基乙氧羰甲氧基)苯基-二氫青蒿素醚(β型)和順丁烯二酸加到有機(jī)溶劑中，生成的鹽用丙酮重結(jié)晶，熔點(diǎn)162-164℃實(shí)施例49水針劑將實(shí)施例48制備的鹽用注射用水溶解，過濾，灌封，滅菌。
權(quán)利要求
1.一類如下結(jié)構(gòu)式的青蒿素衍生物 式(1)中X＝O、O(CH2)n或OCHR，其中R代表C1-C4、烴基、CN、COOH、COOMe、COOEtAr＝苯基、萘基Y＝單鍵、O(CH2)n、OCHMe、取代或未取代的C1-C4烴基Z＝H、鹵素、OR’、COOR’或CONHR”，其中R’＝H、C1-C4烷基、鄰甲氧基苯基或C1-C4烷胺基，R”＝CH2COOR’；和n＝1-4及它們的異構(gòu)體和藥用鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿素衍生物，其特征在于該類衍生物的藥效好的化合物，其中-X＝O；-Ar＝苯基；-Y＝O(CH2)n、OCHMe、取代或未取代的C1-C4烴基；-Z＝COOR’其中R’＝H、Me、Et或鄰甲氧基苯基；和-n＝1-2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿素衍生物，其特征在于取代的二氫青蒿素醚為4-甲氧羰甲基苯基-二氫青蒿素醚；4-羧基甲基苯基-二氫青蒿素醚；3-羧基甲氧基苯基-二氫青蒿素醚；4-甲氧羰甲氧基苯基-二氫青蒿素醚；4-乙氧羰甲氧基苯基-二氫青蒿素醚；4-甲氧羰乙基苯基-二氫青蒿素醚；4-羧基乙基苯基-二氫青蒿素醚；3-琥珀酸單酰基苯基-二氫青蒿素醚；4-乙氧羰甲胺基羰基苯基-二氫青蒿素醚；4-甲氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚；4-鄰甲氧基苯氧羰基(α-甲基)次甲基苯基-二氫青蒿素醚；4-乙氧羰基(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚；4-羧基(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚；4-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚；3-鄰甲氧基苯氧羰基-(α-甲基)次甲基氧苯基-二氫青蒿素醚。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿素衍生物，其特征在于它們的藥用鹽包括碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、甲胺、乙胺、二甲胺、二乙胺、乙醇胺、堿性胺基酸等或鹽酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、馬來酸、草酸、酒石酸、枸櫞酸等的加成鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青蒿素衍生物，其特征在于它的藥物組合物(以重量百分比計(jì))為取代的二氫青蒿素醚(以重量百分比計(jì))10-55％賦形劑15-40％輔助劑20-50％。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的青蒿素衍生物，其特征在于它的藥學(xué)上可接受的載體部分按不同的制劑要求選擇有糖(如葡萄糖、蔗糖、乳糖等)，淀粉(如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉等)，纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯、微晶纖維等)，聚乙二醇、明膠，滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、硫酸鈣，植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油)；還可以是乳化劑(如吐溫)、潤濕劑(如十二烷基硫酸鈉)，著色劑，調(diào)味劑，穩(wěn)定劑，防腐劑，無熱原水。
7.如權(quán)利要求1所述的青蒿素衍生物用途，在制備預(yù)防治療人體免疫功能亢進(jìn)引起的疾病的藥物中應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的青蒿素衍生物用途，其特征在于，其中還包括如下結(jié)構(gòu)式同樣具有在制備預(yù)防、治療人體免疫功能亢進(jìn)引起的疾病的藥物中應(yīng)用 4a n＝0，R＝H 5a R＝H6a R＝OCH2COOH(m)4b n＝0，R＝CH35b R＝CH36b R＝OCH2COOCH3(m)4c n＝2，R＝H 6c R＝OCH2COOH(p)4d n＝2，R＝CH36d R＝R＝OCH2COOCH3(p)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新的青蒿素衍生物及其藥物組合物，它們具有免疫抑制作用，可成為治療人體免疫功能亢進(jìn)引起的疾病(如腎炎、紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等)的新型藥物。
文檔編號C07D323/00GK1814601SQ20051002382
公開日2006年8月9日 申請日期2005年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月4日
發(fā)明者李英, 左建平, 楊忠順, 周文亮, 隋毅, 王峻霞, 張瑜, 周宇, 吳錦明 申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所