專利名稱:一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及植物有效成分提取和生產(chǎn)方法,特別是一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù):
石杉堿甲是一種很有發(fā)展前途的治療AD的藥物。對老年性癡呆癥,單純記憶障礙以及重癥肌無力癥治療有顯著療效,且藥效持續(xù)時間長,無嚴重不良反應(yīng),是國內(nèi)外上述病癥最有效的藥物,深受關(guān)注,國內(nèi)已批準上市,并被列入醫(yī)保目錄。在國際上已被列為第二代膽堿酯酶的抑制劑之一。石杉堿甲(huperzine A)為我國首創(chuàng)的可逆性強效乙酰膽堿酯酶(AChE)抑制劑,是近年來從石杉屬植物千層塔Huperzia serrata(Thunb.)Tre V.中分離到的一種新的生物堿。
石杉堿甲的結(jié)構(gòu)式如下 化學(xué)名稱為(5R,9R,11E)-5-氨基-11-乙叉基-5,6,9,10-四氫-7-甲基-5,9-甲撐環(huán)辛并(6)吡啶-2(1H)酮。
分子式C15H18N2O,分子量242.32
由于人工合成石杉堿甲的成本太高,目前主要還是依靠從石杉屬植物千層塔中提取,然而石杉堿甲在天然植物中含量極低,而且存在形式多樣,同時還伴有一些成分復(fù)雜、結(jié)構(gòu)類似的共生生物堿,因此運用常規(guī)方法想獲得大量的天然石杉堿甲相當困難,至今國內(nèi)外有大量研究人員在探索尋找理想的方法。目前主要有以下幾種生產(chǎn)方法使用硅膠柱層析法進行分離提取用酸液浸泡千層塔干粉→提取液經(jīng)堿酸處理,反復(fù)用氯仿萃取→濃縮成流浸膏→硅膠柱層析→多相溶劑洗脫并收集餾分→濃縮干燥→重結(jié)晶→成品。該方法雖然能獲得少量產(chǎn)品,但很費時(一個生產(chǎn)周期超過一個月)而且得率低(低于百萬分之五),純度不高(95%),難以應(yīng)用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
使用稀酸反萃取和活性炭脫色用稀酸加熱充分浸泡千層塔干燥粉→稀堿酸處理氯仿萃取→濃縮→稀堿萃取除雜→稀酸反萃取→活性炭脫色→堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干→丙酮重結(jié)晶→成品。由于該方法不用過硅膠柱,避免了柱填料對石杉堿甲的吸附損失,因而得率可略高。然而,由于萃取技術(shù)本身的回收率并不很高,使用次數(shù)過多必然對得率有一定影響,加上該工藝得到的粗品純度不夠高(90%),不得不多次使用重結(jié)晶以得到純品,對得率也有一定影響,因而其最后得率并不很高,作為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn),不夠經(jīng)濟。
使用制備高效液相色譜法用原料處理粉碎→浸漬→濃縮→反復(fù)萃取→柱層析→結(jié)晶→高效液相色譜選段→濃縮干燥→成品。由于對石杉堿甲粗品進行精制,將石杉堿甲與石杉堿乙完全分離,從而避免了反復(fù)重結(jié)晶,提高了得率,另外,該方法采用超微粉碎技術(shù)粉碎藥材,可使石杉堿甲的溶出更徹底,對得率的提高也有一定貢獻,可比使用硅膠柱層析法進行分溶出更徹底,對得率的提高也有一定貢獻,可比使用硅膠柱層析法進行分離提取方法提高約60%,純度達到98%以上,基本上可用于石杉堿甲的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。然而,該方法仍然使用了硅膠柱層析,柱填料對石杉堿甲的吸附損耗較大,一部分吸附到柱上的石杉堿甲無法洗脫下來。另外,洗脫下來的石杉堿甲也沒有全部回收,石杉堿甲含量低的流份由于含大量雜質(zhì),不得不被棄去;同時制備高效液相色譜精制步驟中的制備柱也為硅膠柱,同樣會有部分石杉堿甲吸附到柱上難以洗脫下來,所以該方法的得率仍然比較低,難以滿足工業(yè)化生產(chǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服傳統(tǒng)分離技術(shù)的缺陷,用高速逆流色譜法(HSCCC),提供一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法。該方法具有收率高,成本低的優(yōu)點。本發(fā)明的技術(shù)方案包括如下步驟1.前處理采用常規(guī)方法將千層塔干粉用1.2%酒石酸液充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性,用氯仿反復(fù)萃取,將萃取液濃縮蒸干后,得到石杉堿甲粗品.將粗品用適量固定相溶液溶解后過即可用于下一步的進樣。
2.制備型高速逆流色譜儀分離選取溶劑體系,采用制備型高速逆流色譜系統(tǒng)分離。溶劑體系由A、B、C三個組分構(gòu)成,A組分可選自正庚烷、正己烷、正戊烷等正構(gòu)烷烴,B組分可選自甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮等脂肪醇及脂肪酮,C組分為水。三個組分的體積比依次為1-10∶0.1-3∶1-10。使用前將溶劑體系按上述體積比置于分液漏斗中,搖勻靜置分層。待平衡一定時間后,將上相和下相分開,上相作為固定相使用,下相作為流動相使用。進樣前,先用固定相存滿整個柱子,調(diào)整主機轉(zhuǎn)速,將流動相泵入柱內(nèi);待整個體系建立動態(tài)平衡后,由進樣閥進樣,根據(jù)檢測器紫外圖譜接收目標成分。
3.后處理將收集到的石杉堿甲的溶液減壓濃縮至干,得到類白色固體,然后用適量丙酮溶解,于0~10℃下結(jié)晶,將結(jié)晶干燥后得到白色粉末狀固體。
經(jīng)HPLC檢測,純度在99%以上。
高速逆流色譜是一種連續(xù)的無需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術(shù),其原理是利用螺旋柱在行星運動時產(chǎn)生的離心力,使互不相溶的兩相不斷混合,同時保留其中的一相(固體相),利用恒流泵連續(xù)輸入另一相(流動相),隨流動相進入螺旋柱的溶質(zhì)在兩相之間反復(fù)分配,按分配系數(shù)的次序,被依次洗脫。在流動相中分配比例大的先被洗脫,反之,在固定相中分配比例大的后被洗脫。該技術(shù)可以在短時間內(nèi)實現(xiàn)待分離物質(zhì)的高效分離和制備。與高效液相色譜不同的是,它不使用固相載體作固定相,克服了固相載體帶來的樣品吸附、損失、污染和峰形拖尾等缺點,因而具有很高的回收率(理論上可達100%)。另外,該技術(shù)還具有分離量大、分離效率高、分離環(huán)境緩和,節(jié)約溶劑等優(yōu)點。
本發(fā)明采用高速逆流色譜對石杉堿甲粗品進行精制,有很高的回收率,石杉堿甲的收率比使用制備高效液相色譜法高出70%左右,而且產(chǎn)品純度達到99%以上,由于大量節(jié)省千層塔原料,這對于保護我國日益稀少的千層塔資源無疑具有重大的意義,而且單臺儀器一次分離粗品可得克量級以上的石杉堿甲純品。一個生產(chǎn)周期只需1.5個工作日,完全滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需要。
具體實施例方式
實施例1將千層塔干粉用1.2%酒石酸充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性,用氯仿反復(fù)萃取,將萃取液濃縮蒸干后,得到石杉堿甲粗品;將粗品用適量固定相溶液溶解后即可用于進樣,選取適當?shù)娜軇w系,采用柱容積為1000ml的高速逆流色譜系統(tǒng)分離。溶劑體系由A、B、C三個組分構(gòu)成,A組分可選自正庚烷、正己烷、正戊烷等正構(gòu)烷烴,B組分可選自甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮等脂肪醇及脂肪酮,C組分為水。三個組分的體積比依次為1-4∶0.2-2∶1-3。使用前將溶劑體系按上述體積比置于分液漏斗中,搖勻靜置分層。待平衡一定時間后,將上相和下相分開,上相作為固定相使用,下相作為流動相使用。進樣前,先用固定相存滿整個柱子,調(diào)整主機轉(zhuǎn)速,將流動相泵入柱內(nèi);待整個體系建立動態(tài)平衡后,由進樣閥進樣,根據(jù)檢測器紫外圖譜接收目標成分;將收集到的石杉堿甲的溶液置于圓底燒瓶中減壓濃縮至干,得到類白色固體;然后用丙酮溶解,于0~10℃下結(jié)晶,將結(jié)晶干燥后得到的白色粉末狀固體即為成品。
實施例2將千層塔干粉用1.2%酒石酸充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性,用氯仿反復(fù)萃取,將萃取液濃縮干后得到石杉堿甲粗品;
將粗品用適量固定相溶液溶解后即可用于進樣;選取溶劑體系,采用柱容積為5000ml的高速逆流色譜系統(tǒng)分離。溶劑體系由A、B、C三個組分構(gòu)成,A組分可選自正庚烷、正己烷、正戊烷等正構(gòu)烷烴,B組分可選自甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮等脂肪醇及脂肪酮,C組分為水。三個組分的體積比依次為1.2-3∶0.3-2∶1.2-3。使用前將溶劑體系按上述體積比置于分液漏斗中,搖勻靜置分層。待平衡一定時間后,將上相和下相分開,上相作為固定相使用,下相作為流動相使用。進樣前,先用固定相存滿整個柱子,調(diào)整主機轉(zhuǎn)速,將流動相泵入柱內(nèi);待整個體系建立動態(tài)平衡后,由進樣閥進樣,根據(jù)檢測器紫外圖譜接收目標成分;將收集到的石杉堿甲的溶液置于圓底燒瓶中減壓濃縮至干,得到類白色固體;然后將上述類白色固體用適量丙酮溶解,于0~10℃下結(jié)晶,將結(jié)晶干燥后得到的白色粉末狀固體即為成品。
實施例3將千層塔干粉用1.2%酒石酸充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性,用氯仿反復(fù)萃取,將萃取液濃縮蒸干后,得到石杉堿甲粗品;將粗品用適量固定相溶液溶解后即可用于進樣;采用柱容積為5000ml的高速逆流色譜系統(tǒng)分離。溶劑體系由正己烷、甲醇、水三個組分構(gòu)成,體積比依次為2∶1.5∶4。使用前將溶劑體系按上述體積比置于分液漏斗中,搖勻靜置分層。待平衡一定時間后,將上相和下相分開,上相作為固定相使用,下相作為流動相使用。進樣前,先用固定相存滿整個柱子,調(diào)整主機轉(zhuǎn)速,將流動相泵入柱內(nèi);待整個體系建立動態(tài)平衡后,由進樣閥進樣,根據(jù)檢測器紫外圖譜接收目標成分;將收集到的石杉堿甲的溶液置于圓底燒瓶中減壓濃縮至干,得到類白色固體,然后用適量丙酮溶解,于0~10℃下結(jié)晶,將結(jié)晶干燥后得到的白色粉末狀固體即為成品。
權(quán)利要求
1.一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法,包括如下步驟(1)前處理采用常規(guī)方法將千層塔干粉用1.2%酒石酸液充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性,用氯仿反復(fù)萃取,將萃取液濃縮蒸干后,得到石杉堿甲粗品;將粗品用適量固定相溶液溶解后即可用于進樣;(2)制備型高速逆流色譜儀分離選取溶劑體系,采用制備型高速逆流色譜系統(tǒng)分離;(3)后處理將收集到的石杉堿甲的溶液減壓濃縮蒸干,得到類白色固體,,然后用適量丙酮溶解,于0~10℃下結(jié)晶,將結(jié)晶干燥后得到的白色粉末狀固體即為成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法,其特征在于所述的溶劑體系由A、B、C三個組分構(gòu)成,A組分是正構(gòu)烷烴,B組分是脂肪醇或脂肪酮,C組分是水。三個組分的體積比依次為1-10∶0.1-3∶1-10。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法,其特征在于所述的溶劑體系由A、B、C三個組分構(gòu)成,A組分是正構(gòu)烷烴,B組分是脂肪醇或脂肪酮,C組分是水。三個組分的體積比依次為1-4∶0.2-2∶1-3。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法,其特征在于所述的溶劑體系由A、B、C三個組分構(gòu)成,A組分是正構(gòu)烷烴,B組分是脂肪醇或脂肪酮,C組分是水。三個組分的體積比依次為1.2-3∶0.3-2∶1.2-3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法,其特征在于所述的溶劑體系由A、B、C三個組分構(gòu)成,A組分是正構(gòu)烷烴,B組分是脂肪醇或脂肪酮,C組分是水。三個組分的體積比依次為2∶1.5∶4。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4或5所述的一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法,其特征在于所述的正構(gòu)烷烴是正庚烷、正己烷、或正戊烷,所述的脂肪醇是甲醇、乙醇或正丁醇,所述的脂肪酮是丙酮。
全文摘要
一種高純度石杉堿甲的生產(chǎn)方法,該方法包括如下步驟用常規(guī)方法制備石杉堿甲粗品,用制備型高速逆流色譜系統(tǒng)分離,濃縮、結(jié)晶后得到成品。溶劑體系由A、B、C三個組分構(gòu)成,A組分是正構(gòu)烷烴等,B組分是脂肪醇及脂肪酮等,C組分是水。三個組分的體積比依次為1-10∶0.1- 3∶1-10。本發(fā)明方法具有收率高,質(zhì)量好,節(jié)省原料,綜合成本低的特點,適用于石杉堿甲的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D221/22GK1781907SQ20051002871
公開日2006年6月7日 申請日期2005年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月12日
發(fā)明者劉麗, 鄧秋云 申請人:上海同田生化技術(shù)有限公司