專利名稱：犬尿氨酸酶的特異性抑制劑l－鄰甲氧基苯甲?；彼岬暮铣煞椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本專利涉及一種犬尿氨酸酶的特異性抑制劑L-鄰甲氧基苯甲酰基丙氨酸(o-MBA)新的合成方法。
背景技術(shù)：
人體內(nèi)的必須氨基酸色氨酸代謝生成犬尿氨酸7后，有三條代謝途徑1)通過犬尿氨酸羥化酶催化生成3-羥基犬尿氨酸，再由犬尿氨酸酶KYNU催化水解成3-羥基鄰氨基苯甲酸。
2)通過犬尿氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶KAT-1生成犬尿酸KA(犬尿喹啉酸)。
3)通過犬尿氨酸酶KYNU的作用生成鄰氨基苯甲酸。
其中，第一條犬尿氨酸途徑是主要的代謝途徑。這條途徑在很多基礎(chǔ)的生理過程中扮演了重要的角色，例如神經(jīng)元興奮性，抗氧化狀態(tài)，細(xì)胞生長及分裂等。對犬尿氨酸途徑的詳細(xì)研究，以及在此基礎(chǔ)上對一系列相關(guān)疾病的治療方法的研究，使人們對犬尿氨酸7及其一系列相關(guān)的芳酰基丙氨酸化合物(如下圖)的合成產(chǎn)生了濃厚的興趣。
近年來，人們又發(fā)現(xiàn)一些芳?；彼峄衔锸侨虬彼嵬緩街械拿傅倪x擇性抑制劑。如本專利涉及的化合物6(o-MBA)選擇性的抑制犬尿氨酸羥化酶，而化合物8則是犬尿氨酸酶的抑制劑。這些發(fā)現(xiàn)更促使人們希望能夠通過簡短高效的合成這類化合物，以便應(yīng)用于生理方面的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種合成犬尿氨酸酶的特異性抑制劑L-鄰甲氧基苯甲?；彼?o-MBA)的全新方法，也是迄今為止最短的合成路線。
本發(fā)明涉及的尿氨酸酶的特異性抑制劑o-MBA的結(jié)構(gòu)如下 本發(fā)明的方法是從Boc-保護(hù)氨基的天冬氨酸芐酯1出發(fā)，通過5步反應(yīng)合成了目標(biāo)化合物6尿氨酸酶的特異性抑制劑o-MBA，所述的Boc是叔丁氧羰基。典型的反應(yīng)式如下
其中試劑1的合成反應(yīng)式為； 本發(fā)明的方法具體地說從叔丁氧羰基(Boc)-保護(hù)氨基的天冬氨酸芐酯1出發(fā)，通過下述5步反應(yīng)合成了目標(biāo)化合物61)，在醇溶劑中和0℃～室溫下，化合物1、2-二甲氨基吡啶(DMAP)和叔丁基碳酸酐((Boc)2O)反應(yīng)13～12小時(shí)活動(dòng)化合物2；其中，化合物1、DMAP和叔丁基碳酸酐(Boc)2O的摩爾比為1∶0.1～0.2∶1.0～1.5。建議反應(yīng)在惰性氣體保護(hù)下進(jìn)行，如氮?dú)獗Ｗo(hù)下。
2)，在有機(jī)溶劑中、過量氫氣存在和0℃～35℃下，化合物2、氫氣和催化劑Pd/C(10％)，在400～600MPa壓力下氫化1～8小時(shí)獲得化合物3。其中化合物2和催化劑Pd/C(10％)的重量比為1∶0.008～0.002。推薦在500Mpa壓力下反應(yīng)。
3)，在有機(jī)溶劑中和室溫，化合物3、1，1′-羰基二咪唑(CDI)、NHCH3(OCH3).HCl和Et3N反應(yīng)2～8小時(shí)獲得化合物4。其中，化合物3、1，1′-羰基二咪唑(CDI)、NHCH3(OCH3).HCl和Et3N的摩爾比為1∶1～1.5∶1～1.5∶1～5。
4)，在有機(jī)溶劑中和-30～-20℃，化合物4和試劑1反應(yīng)1～2小時(shí)獲得化合物5。所述的化合物4和試劑1的摩爾比是1∶1～1∶2。建議該反應(yīng)在惰性氣體保護(hù)下進(jìn)行，如氮?dú)獗Ｗo(hù)下。
所述的試劑1是由如下方法合成獲得在有機(jī)溶劑中、-5℃～室溫和氮?dú)獗Ｗo(hù)下，鄰溴苯甲醚和正丁基鋰(n-BuLi)反應(yīng)2～5小時(shí)獲得試劑1。然后可以經(jīng)過溶液提取和洗滌純化。
5)，將化合物5和三氟醋酸(TFA)在室溫反應(yīng)1～5小時(shí)獲得化合物6。其中化合物5和三氟醋酸的摩爾比可以是1∶1～1∶100。反應(yīng)獲得化合物6粗產(chǎn)物，可以進(jìn)一步用有機(jī)溶劑提取和離子交換柱進(jìn)行提純。
上述的有機(jī)溶劑可以是甲醇、乙醇、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、石油醚、正戊烷或乙醚等。
本發(fā)明的方法是一種方法簡便、合成路線短、經(jīng)濟(jì)的合成方法。
具體實(shí)施例方式
通過下述實(shí)施例將有助于理接解本發(fā)明，但并不能限制本發(fā)明的內(nèi)容。
本發(fā)明從購得的Boc-保護(hù)氨基的天冬氨酸芐酯1出發(fā)，通過5步反應(yīng)合成了目標(biāo)化合物6o-MBA。
實(shí)施實(shí)例1 室溫?cái)嚢?，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，化合物1(3.233g，10mmol)，DMAP(122mg，1mmol)溶于叔丁醇(20mL)中配成溶液，然后向其中滴入(Boc)2O(2.728g，12.5mmol，2.5M)的叔丁醇溶液。滴加完畢后室溫?cái)嚢柽^夜。反應(yīng)結(jié)束后，先將反應(yīng)液旋干，得到的粘稠液體溶于250mL乙醚中，用飽和氯化銨溶液(200mL)，飽和碳酸氫鈉溶液(200mL)，飽和食鹽水(200mL)各洗滌1遍，無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，柱層析，用石油醚∶乙酸乙酯＝15∶1淋洗，得到產(chǎn)物1.976g，產(chǎn)率52％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.34(m，5H)，5.46(d，1H)，5.12(dd，2H，)，4.44(t，1H)，3.00(AB，1H)，2.82(AB，1H)，1.43(s，9H)，1.40(s，9H)ppm。
實(shí)施實(shí)例2 化合物2(3.952g)溶于20mL乙醇中，加入400mg Pd/C(10％)，在5atmH2，30℃條件下氫化6h。停止反應(yīng)，過濾，旋干，得到3.307g白色固體產(chǎn)物3，定量反應(yīng)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.50(d，1H)，4.46(t，1H)，3.02(AB，1H，)，2.82(AB，1H)，1.45(S，18H)ppm。
實(shí)施實(shí)例3 室溫?cái)嚢柘拢衔?(3.307g，11.4mmol)溶于22mL CH2Cl2中，依次向其中加入CDI(2.039g，12.5mmol)，NHCH3(OCH3).HCl(1.227g，12.5mmol)，Et3N(1.7mL，12.5mmol)，室溫?cái)嚢?h。停止反應(yīng)，依次用飽和氯化銨溶液，飽和碳酸氫鈉溶液，飽和食鹽水洗滌，有機(jī)相合并，用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，得到油狀產(chǎn)物2.028g，收率54％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ5.66(d，1H)，4.44(t，1H)，3.67(s，3H)，3.17(s，3H)，3.12(AB，1H，)，2.86(AB，1H)，1.44(S，9H)，1.42(S，9H)ppm。
實(shí)施實(shí)例4 在冰鹽浴冷卻，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向鄰溴苯甲醚(50mmol，5.8mL)的無水正戊烷(n-Pentane 50mL)溶液中緩慢滴加n-BuLi(1.6M，hexane)(50mmol，31mL)。滴加完畢后，自然升至室溫，攪拌3h。然后向反應(yīng)溶液中加入50mL無水正戊烷，攪拌5min，靜置沉淀。用針筒移走上層溶液，留下白色沉淀。反復(fù)洗滌3次。洗滌結(jié)束后，加入60mL無水乙醚(ether)，得到深黃色溶液試劑(Angent)1(溶液濃度約為0.5M)，用于下一步反應(yīng)。
實(shí)施實(shí)例5 在-30℃，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向化合物4(1.742g，5.24mmol)的脫水脫氧乙醚(16mL)溶液中，緩慢滴入Angent 1(33mL)。滴加完畢后，維持-30℃，反應(yīng)1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，向體系中加入40mL乙醚，一次用飽和氯化銨溶液(40mL)，飽和碳酸氫鈉溶液，飽和食鹽水洗滌，得到無色油狀產(chǎn)物5(1.240g，)收率62％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.79(d，1H)，7.50(m，1H)，7.00(dd，2H)，5.59(d，1H)，4.51(t，1H)，3.93(s，3H)，3.69(AB，1H)，3.50(AB，1H)，1.47(s，18H)ppm。
實(shí)施實(shí)例6 將379mg(1mmol)化合物5置于25mL蛋形瓶中，加入5mL三氟醋酸(TFA)，室溫?cái)嚢?小時(shí)。旋干溶劑，加入10mL甲醇溶解粗產(chǎn)物，旋干，如此重復(fù)3次。然后加入10mL乙醚，產(chǎn)生沉淀，旋干，得到黃色產(chǎn)物422mg。將得到的粗產(chǎn)物用離子交換柱進(jìn)行提純。選用Dowex 50X8-400型離子交換樹脂，先將樹脂用蒸餾水浸泡一晚，倒掉，用蒸餾水洗滌3次，然后將樹脂倒入分離柱中，保持樹脂上方有蒸餾水。填好的柱子用1N鹽酸洗滌至酸性，用蒸餾水洗滌至中性，用1N氨水洗滌至堿性，重復(fù)這一過程。最后用蒸餾水洗滌至中性。用蒸餾水溶解粗產(chǎn)物，上樣，先用200mL蒸餾水淋洗，再用1N的氨水淋洗，旋掉氨水，得到208mg產(chǎn)物6，收率93％。
1H NMR(300MHz，D2O)δ7.55(m，2H)，6.98(m，2H)，4.22(t，1H)，3.77(s，3H)，3.67(m，2H)ppm。
權(quán)利要求
1，一種犬尿氨酸酶的特異性抑制劑L-鄰甲氧基苯甲?；彼岬暮铣煞椒ǎ涮卣魇峭ㄟ^下述5步合成1)，在醇溶劑中和0℃～室溫下，化合物1、2-二甲氨基吡啶和叔丁基碳酸酐反應(yīng)13～12小時(shí)活動(dòng)化合物2；其中，化合物1、2-二甲氨基吡啶和叔丁基碳酸酐的摩爾比為1∶0.1～0.2∶1.0～1.5；2)，在有機(jī)溶劑中、過量氫氣存在和0℃～35℃下，化合物2、氫氣和催化劑Pd/C(10％)，在400～600MPa壓力下氫化1～8小時(shí)獲得化合物3；其中化合物2和催化劑Pd/C(10％)的重量比為1∶0.008～0.002；3)，在有機(jī)溶劑中和室溫，化合物3、1，1’-羰基二咪唑、NHCH3(OCH3).HCl和Et3N反應(yīng)2～8小時(shí)獲得化合物4；其中，化合物3、1，1’-羰基二咪唑、NHCH3(OCH3).HCl和Et3N的摩爾比為1∶1～1.5∶1～1.5∶1～5；4)，在有機(jī)溶劑中和-30～-20℃，化合物4和試劑1反應(yīng)1～2小時(shí)獲得化合物5；所述的化合物4和試劑1的摩爾比是1∶1～2；所述的試劑1是具有 結(jié)構(gòu)式的化合物；5)，將化合物5和三氟醋酸在室溫反應(yīng)1～5小時(shí)獲得化合物6。其中化合物5和三氟醋酸的摩爾比可以是1∶1～100；其中化合物1-5的結(jié)構(gòu)式如下； 和 所述的Boc是叔丁氧羰基。
2，如權(quán)利要求1所述的一種犬尿氨酸酶的特異性抑制劑L-鄰甲氧基苯甲?；彼岬暮铣煞椒ǎ涮卣魇撬龅姆椒?)和2)是在惰性氣體保護(hù)下進(jìn)行。
3，如權(quán)利要求1所述的一種犬尿氨酸酶的特異性抑制劑L-鄰甲氧基苯甲?；彼岬暮铣煞椒?，其特征是所述的有機(jī)溶劑是乙醇、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、石油醚、正戊烷或乙醚。
4，如權(quán)利要求1所述的一種犬尿氨酸酶的特異性抑制劑L-鄰甲氧基苯甲?；彼岬暮铣煞椒?，其特征是所述的方法5)的產(chǎn)物有機(jī)溶劑提取和離子交換柱進(jìn)行提純。
5，如權(quán)利要求1所述的一種犬尿氨酸酶的特異性抑制劑L-鄰甲氧基苯甲?；彼岬暮铣煞椒?，其特征是所述的所述的試劑1是由如下方法合成獲得在有機(jī)溶劑中、-5℃～室溫和氮?dú)獗Ｗo(hù)下，鄰溴苯甲醚和正丁基鋰反應(yīng)2～5小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種犬尿氨酸酶的特異性抑制劑L－鄰甲氧基苯甲酰基丙氨酸新的合成方法，是從叔丁氧羰基－保護(hù)氨基的天冬氨酸芐酯出發(fā)，通過5步反應(yīng)合成了目標(biāo)化合物尿氨酸酶的特異性抑制劑。是一種方法簡便、合成路線短、經(jīng)濟(jì)的合成方法。
文檔編號(hào)C07C227/00GK1752068SQ20051003083
公開日2006年3月29日 申請日期2005年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月28日
發(fā)明者姚祝軍, 馬向東 申請人:中國科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所