專利名稱：一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及磷脂類，尤其涉及一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法。
背景技術：
磷脂普遍存在于動植物細胞的原生質(zhì)和生物膜中，對生物膜的生理活性和機體的正常代謝有重要的調(diào)節(jié)功能，同時它具有良好的乳化性和抗氧化性，因而被廣泛應用于食品、醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)。卵磷脂和腦磷脂是其中兩種重要的磷脂，化學名稱分別為磷脂酰膽堿(phosphotidylcholine，簡稱PC)和磷脂酰乙醇胺(Phosphatidyl Ethanolamine，簡稱PE)。
卵磷脂是構(gòu)成人體細胞膜的主要成份，是保持細胞正常形態(tài)和功能的生命基礎物質(zhì)之一，對人體的正常代謝有重要的調(diào)節(jié)作用。它對心、腦血管的作用是保持血管壁的彈性和滲透性，軟化血管，增加高密度脂蛋白的含量，減少或清除血管內(nèi)壁沉積物，防止血液凝聚；對神經(jīng)系統(tǒng)的作用是使神經(jīng)反應敏銳，提高記憶力，預防健忘癥和老年癡呆癥；可有效地防治肝功能疾病和緩解糖尿?。豢纱龠M損傷細胞的更新，提高人體免疫力。70年代以來，世界上就把卵磷脂用于保健食品，總銷售量僅次于復合維生素C和維生素E，名列第三位。卵磷脂的缺乏是造成心腦血管疾病等現(xiàn)代文明病的主要原因之一。
卵磷脂分子結(jié)構(gòu)中同時具有親水基和疏水基，這種雙極性質(zhì)使卵磷脂表現(xiàn)出優(yōu)良的表面活性，屬于應用較廣的磷酸型兩性表面活性劑，具有乳化、增稠、穩(wěn)定、分散、增溶、濕潤、潤滑等功能，可廣泛應用于食品、飼料、醫(yī)藥、化妝品、涂料、油墨、紡織、皮革、石油制品及植物保護等工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。
高純度卵磷脂產(chǎn)品是指含PC大于95％的卵磷脂產(chǎn)品。由于高純度卵磷脂產(chǎn)品純度高，無異味、乳化性強，不僅在食品工業(yè)中可較大量地添加使用，還可做成保健品、醫(yī)藥品等。特別是在醫(yī)藥上，卵磷脂在水中可自動形成顆粒狀的脂質(zhì)體，因此高純度卵磷脂可用作靜脈注射用水包油型乳液的乳化劑；由卵磷脂形成的脂質(zhì)體用作活性組分的載體，可降低藥物毒性，增加藥效。目前純度大于95％的磷脂產(chǎn)品我國尚依賴進口，因此，開發(fā)出適合我國國情的、低成本、高純度卵磷脂制備方法，具有重要的經(jīng)濟和社會價值。
卵磷脂的精制方法主要有萃取法、柱層析法、沉淀法、膜分離法等。柱層析法由于具有操作簡便、分離效果好、不需昂貴設備、處理量大等優(yōu)點，因而倍受關注。在柱層析法研究中，目前主要集中在價廉的氧化鋁和硅膠。對于氧化鋁通常是PC先出峰，而對于硅膠通常是PE先出峰。為了得到高純度的PC，本專利采用氧化鋁作為吸附劑，同時選用除PC和PE外其它磷脂較少的蛋黃作為原料。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法。
方法的步驟如下1)新鮮蛋黃先用丙酮脫脂，真空抽濾，濾餅用酒精提取，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂；2)經(jīng)鈍化的氧化鋁用甲醇濕法裝柱，先用甲醇沖洗；3)粗磷脂用甲醇溶解后加入層析柱，并開始收集流出液；4)待卵磷脂開始穿透后用純甲醇沖洗，收集流出液；5)流出液經(jīng)薄層色譜TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后可得到純度大于95％的卵磷脂；6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子，再用甲醇沖洗后可重新進樣。
本發(fā)明的具有以下優(yōu)點1)工藝簡單，操作方便，較適合于大規(guī)模工業(yè)化制備；2)氧化鋁可循環(huán)使用，成本較低；3)氧化鋁柱層析過程可在室溫下進行；4)產(chǎn)品純度高，經(jīng)本工藝精制后可得純度大于95％的卵磷脂產(chǎn)品；5)柱層析過程處理量大、產(chǎn)率高；6)為近年來雞蛋豐產(chǎn)、供過于求、難以存放等問題的解決提供新方法，為雞蛋的深加工開辟一條新路，促進禽蛋行業(yè)的發(fā)展。
具體實施例方式
溶劑提取法得到的粗磷脂，用甲醇混合溶劑溶解后在室溫下過氧化鋁柱，待PE開始流出后改用純甲醇沖洗，收集流出液，經(jīng)TLC分析后合并卵磷脂的餾份，再經(jīng)濃縮、冷凍干燥后可得卵磷脂產(chǎn)品。柱子經(jīng)含氨水的甲醇溶液再生、甲醇沖洗后可循環(huán)使用。
氧化鋁鈍化方法氧化鋁在120℃下脫水活化12小時，活化好的氧化鋁轉(zhuǎn)移至干燥器中，冷卻后，加入一定量的去離子水。密封存放72小時以上，以備柱層析用。
實施例1新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中PC含量為79.6％(wt％)，PE含量為14.8％(wt％)。取含水量為8％的氧化鋁用甲醇濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進110ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.5g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中卵磷脂的含量為96.0％。柱子用含氨2％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗150ml，再用甲醇沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例2新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中PC含量為79.6％(wt％)，PE含量為14.8％(wt％)。取含水量為10％的氧化鋁用甲醇濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進110ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.6ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.7g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中卵磷脂的含量為95.2％。柱子用含氨1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗200ml，再用甲醇沖洗100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例3新鮮蛋黃先用丙酮脫脂二次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC76.0％(wt％)、PE15.0％(wt％)。取含水量為12％的氧化鋁用甲醇濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進200ml濃度為50mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.8ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.0g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中卵磷脂的含量為95.0％。柱子用含氨0.5％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗300ml，再用甲醇沖洗100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例4新鮮蛋黃先用丙酮脫脂二次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC76.0％(wt％)、PE15.0％(wt％)。取含水量為6％的氧化鋁用甲醇濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進70ml濃度為150mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.4g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中卵磷脂的含量為94.8％。柱子用含氨3％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗150ml，再用甲醇沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例5新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取三次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC77.5％(wt％)、PE15.2％(wt％)。取含水量為8％的氧化鋁用甲醇濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進200ml濃度為50mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在1.0ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.3g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中卵磷脂的含量為95.1％。柱子用含氨0.1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗500ml，再用甲醇沖洗100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例6新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取三次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC77.5％(wt％)、PE15.2％(wt％)。取含水量為10％的氧化鋁用甲醇濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進110ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.6ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.8g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中卵磷脂的含量為95.9％。柱子用含氨0.5％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗300ml，再用甲醇沖洗100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例7新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用無水酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC77.0％(wt％)、PE15.5％(t％)。取含水量為10％的氧化鋁用甲醇濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進110ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.8ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.5g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中卵磷脂的含量為95.7％。柱子用含氨1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗200ml，再用甲醇沖洗100ml后可重新進樣，沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例8新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用無水酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC77.0％(wt％)、PE15.5％(wt％)。取含水量為8％的氧化鋁用甲醇濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用甲醇沖洗50ml。進70ml濃度為150mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為甲醇)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得卵磷脂6.3g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中卵磷脂的含量為95.0％。柱子用含氨2％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗150ml，再用甲醇沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
權利要求
1.一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法，其特征在于，方法的步驟如下1)新鮮蛋黃先用丙酮脫脂，真空抽濾，濾餅用酒精提取，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂；2)經(jīng)鈍化的氧化鋁用甲醇濕法裝柱，先用甲醇沖洗；3)粗磷脂用甲醇溶解后加入層析柱，并開始收集流出液；4)待卵磷脂開始穿透后用純甲醇沖洗，收集流出液；5)流出液經(jīng)薄層色譜TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后可得到純度大于95％的卵磷脂；6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子，再用甲醇沖洗后可重新進樣。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法，其特征在于所說的經(jīng)鈍化的氧化鋁是指通過加入少量水以減少氧化鋁的活性，經(jīng)鈍化后的氧化鋁含水量為重量百分比6％～12％。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法，其特征在于所說的含氨水的甲醇溶液中氨的含量為重量百分比0.1～3％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法。方法的步驟如下1)新鮮蛋黃先用丙酮脫脂，真空抽濾，濾餅用酒精提取，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂；2)經(jīng)鈍化的氧化鋁用甲醇濕法裝柱，先用甲醇沖洗；3)粗磷脂用甲醇溶解后加入層析柱，并開始收集流出液；4)待卵磷脂開始穿透后用純甲醇沖洗，收集流出液；5)流出液經(jīng)薄層色譜TLC分析后合并卵磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后可得到純度大于95％的卵磷脂；6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子，再用甲醇沖洗后可重新進樣。本發(fā)明具有工藝簡單、操作方便、處理量大、產(chǎn)率高、產(chǎn)品純度高、成本較低、較適合于大規(guī)模工業(yè)化制備等優(yōu)點。
文檔編號C07F9/00GK1733777SQ200510060250
公開日2006年2月15日 申請日期2005年8月2日 優(yōu)先權日2005年8月2日
發(fā)明者呂秀陽 申請人:浙江大學