專利名稱：一種丹參總酚酸的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹參總酚酸的制備方法。
背景技術(shù)：
丹參是臨床上常用的治療心腦血管病的中藥，且療效顯著，有悠久的臨床應(yīng)用歷史。
近年來，對丹參的水溶性成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，分離得到丹酚酸A(1)、B(2)、C(3)、D(4)、E(5)、F(8)、G(9)、H(11)、I(12)、J(13)，迷迭香酸(6)、紫草素(7)、異丹酚酸(10)、迷迭香酸的葡萄糖甙(14)等酚酸類化合物。(Lian-niang.Li，J.chinesepharmacentical sciences 1997.6，57～64)。藥理實(shí)驗(yàn)表明丹參水溶性成分是丹參的重要活性成分，在丹參的作用中占重要地位，其最突出的作用特點(diǎn)是具有很強(qiáng)的清除自由基和抗氧化作用。根據(jù)近年研究結(jié)果，自由基參與機(jī)體多種疾病包括衰老的發(fā)生和發(fā)展過程，清除自由基、提高機(jī)體抗氧化能力，是防治多種疾病的重要途徑之一。丹酚酸可以清除自由基、減少自由基對機(jī)體的損傷，而產(chǎn)生保護(hù)作用，同時(shí)通過廣泛的藥理作用，調(diào)節(jié)和改善機(jī)體的機(jī)能狀態(tài)，促進(jìn)受損機(jī)體組織的修復(fù)和復(fù)原，達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。
目前，國內(nèi)廠家基本上都選取丹參素和原兒茶醛作為控制丹參制劑質(zhì)量的指標(biāo)成分，但原兒茶醛有毒副作用，丹參素代表丹參的活性不甚合理。且國內(nèi)丹參制劑的質(zhì)量和效果得不到保障，不同廠家的產(chǎn)品或同一廠家的不同批號產(chǎn)品臨床效果差異較大，缺乏可靠的質(zhì)控依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是通過對丹參的提取工藝研究，提供一種簡易、高效制備丹參總酚酸的方法，并以丹酚酸B為對照品測定總酚酸作為質(zhì)量控制指標(biāo)，提高其治療心腦血管疾病的臨床療效。
為達(dá)到發(fā)明目的本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種丹參總酚酸的制備方法，所述的方法步驟如下(1)初提丹參飲片或丹參粗粉用水或稀堿于30～99℃下保溫浸漬1～4次，合并提取液，除去固體雜質(zhì)，得丹參中的水溶性成分，所述稀堿PH7.5～12，總浸漬時(shí)間為0.5～6小時(shí)；(2)酸化步驟(1)所得提取液加酸調(diào)PH1～6，沉淀去除雜質(zhì)；(3)干燥將步驟(2)所得提取液直接干燥或濃縮后干燥，得浸膏粉末；(4)醇提步驟(3)干燥所得浸膏粉末用50～90％乙醇水溶液回流提取1～4次，合并提取液，靜置，取上清液，即得高純度丹參總酚酸溶液；(5)干燥將步驟(4)所得溶液直接干燥或濃縮后干燥，即得所述的丹參總酚酸浸膏粉末。
優(yōu)選的，所述的步驟(4)中所用乙醇為75～85％乙醇溶液，更優(yōu)選為80％乙醇溶液。
所述的步驟(1)中稀堿為下列之一①氫氧化鈉水溶液；②碳酸氫鈉水溶液；③碳酸鈉水溶液。步驟(3)或(5)中所述干燥優(yōu)選為噴霧干燥。
具體的，所述的方法步驟如下(1)初提丹參飲片或丹參粗粉，加入質(zhì)量為藥材量6～14倍的水，于90℃下保溫浸漬2次，每次1～2小時(shí)，合并提取液，過濾，得丹參中的水溶性成分；(2)酸化步驟(1)所得提取液加入1～3％的鹽酸調(diào)PH為1.5，靜置后離心，得澄清的酸化液；(3)干燥將步驟(2)所得酸化液在60℃減壓濃縮后噴霧干燥，得丹參總酚酸浸膏粉；(4)醇提步驟(3)干燥所得浸膏粉用質(zhì)量為浸膏粉3～4倍的85％乙醇水溶液回流提取3次，每次1～2小時(shí)，合并提取液，靜置8小時(shí)以上，取上清液，得高純度丹參總酚酸溶液；(5)干燥將步驟(4)所得溶液在60℃減壓濃縮后噴霧干燥，得丹參總酚酸浸膏粉末。
或者，所述的方法步驟如下a)初提丹參飲片或丹參粗粉先加量6～14倍質(zhì)量的1％碳酸鈉溶液于90℃下保溫浸漬2次，每次1～2小時(shí)，合并提取液，過濾，得丹參中的水溶性成分；b)酸化步驟(1)所得提取液加入1～3％的鹽酸調(diào)PH為1.5，靜置后離心，得澄清的酸化液；c)干燥將步驟(2)所得酸化液在60℃減壓濃縮后噴霧干燥，得丹參總酚酸浸膏粉；d)醇提步驟(3)干燥所得浸膏粉用質(zhì)量為浸膏粉3～4倍的85％乙醇水溶液回流提取3次，每次1～2小時(shí)，合并提取液，靜置8小時(shí)以上，取上清液，得高純度丹參總酚酸溶液；e)干燥將步驟(4)所得溶液在60℃減壓濃縮后噴霧干燥，得丹參總酚酸浸膏粉末。
利用本發(fā)明方法得到的丹參總酚酸不但質(zhì)量穩(wěn)定，而且富含中藥丹參的活性成分，具有抗腦缺血，抗細(xì)胞凋亡等藥理作用，因此可以用來制備療效好，安全可靠的防治心腦血管疾病藥物。
本發(fā)明所述的丹參總酚酸的制備方法的有益效果主要體現(xiàn)在(1)由于采用水提取，使丹酚酸B、丹參素等水溶性成份提取的比較充分；(2)提取溫度低于100℃，可減少丹酚酸B的破壞；(3)加酸酸化可將丹酚酸從不同鹽類轉(zhuǎn)化為游離的丹酚酸，同時(shí)可以沉淀除去從丹參原藥材中提取出的雜質(zhì)；(4)酸化后所得的浸膏粉用醇提取，進(jìn)一步除去提取液中的雜質(zhì)，最終得到純度較高的總酚酸，可使丹參提取物中總酚酸的含量達(dá)到了80％以上；(5)工藝過程簡單，安全，易于操作，且成本低，可以得到除去大量蛋白質(zhì)，糖類，淀粉等雜質(zhì)，總酚酸的含量高，雜質(zhì)少，得率高，其有效部位(酚酸類成分)含量在80％以上，生理活性強(qiáng)。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1步驟如下(1)初提10kg丹參飲片加水在90℃浸漬提取2次。第一次加70L水，加熱2小時(shí)，第二次加50L水，90℃浸漬1.5小時(shí)，分離提取液，將兩次提取液合并，用過濾方法除去提取液中的固體雜質(zhì)；(2)酸化在濾液中加入濾液量1～3％的鹽酸調(diào)PH，邊加邊攪拌，至濾液的PH值為1.5，然后靜置提取液約8小時(shí)，使析出物充分沉降，離心，得澄清的酸化液；(3)干燥酸化液在60℃減壓濃縮至適量，噴霧干燥，即得丹參總酚酸浸膏粉；(4)醇提丹參總酚酸浸膏粉加85％乙醇回流提取3次。第一次加4倍浸膏量的85％乙醇，回流1.5小時(shí)，第二、三次各加3倍浸膏量的85％乙醇，分別回流1.5小時(shí)，合并提取液，靜置8小時(shí)以上，吸取上清液；(5)干燥酸化液在60℃減壓濃縮至適量，噴霧干燥，即得丹參總酚酸浸膏粉末1.2Kg，按生藥材計(jì)得率為12％。
總酚酸和丹酚酸B的檢測方法(1)丹酚酸B用HPLC法測定，檢測波長285nm，標(biāo)準(zhǔn)品丹酚酸B由中國藥品生物制品檢定所提供。
(2)丹參總酚酸含量＝F(A-B)-B其中A為分光光度法測定以丹酚酸B為對照計(jì)算的總酚酸含量B為高效液相色譜法測定的丹酚酸B含量F為校正因子總酚酸除了丹酚酸B(分子量718)外，還含有原兒茶醛(分子量138)、丹參素(分子量162)、紫草酸(分子量538)、咖啡酸(分子量180)等酚酸類化合物，他們之間的分子量相差較大。以丹酚酸B為對照用分光光度法測定的總酚酸含量結(jié)果偏高，主要是由于其他酚酸類化合物的分子量低于丹酚酸B的分子量所致。因此，用上述6個(gè)酚酸類化合物平均分子量與丹酚酸B分子量的比值作為校正因子，以此校正后的總酚酸含量與用HPLC法分別測定原兒茶醛等5個(gè)酚酸類化合物含量之和基本一致。
原兒茶醛、丹參素、咖啡酸、紫草酸、丹酚酸B由中國藥品生物制品檢定所提供。
檢測結(jié)果每克干浸膏含0.35克丹酚酸B，按生藥材計(jì)得率為4.2％；每克干浸膏含0.85克總酚酸，按生藥材計(jì)得率為10.2％。
實(shí)施例2(1)初提10kg丹參飲片加1％碳酸鈉溶液在90℃浸漬提取2次第一次加70L，加熱2小時(shí)，第二次加50L，90℃浸漬1.5小時(shí)，分離提取液，將兩次提取液合并，用過濾方法除去提取液中的固體雜質(zhì)；(2)酸化在濾液中加入濾液量1～3％的鹽酸調(diào)PH，邊加邊攪拌，至濾液的PH值為1.5，然后靜置提取液約8小時(shí)，使析出物充分沉降，離心，得澄清的酸化液；(3)干燥酸化液在60℃減壓濃縮至適量，噴霧干燥，即得丹參總酚酸浸膏粉；(4)醇提丹參總酚酸浸膏粉加85％乙醇回流提取3次。第一次加4倍浸膏量的85％乙醇，回流1.5小時(shí)，第二、三次各加3倍浸膏量的85％乙醇，分別回流1.5小時(shí)，合并提取液，靜置8小時(shí)以上，吸取上清液；(5)干燥酸化液在60℃減壓濃縮至適量，噴霧干燥，即得丹參總酚酸浸膏粉末1.1Kg。
實(shí)施例3(1)初提10kg丹參粗粉加3％氫氧化鈉溶液在60℃浸漬提取3次第一次加70L，加熱3小時(shí)，第二次加50L，60℃浸漬2小時(shí)，第三次加50L，60℃浸漬2小時(shí)，分離提取液，將三次提取液合并，用過濾方法除去提取液中的固體雜質(zhì)；(2)酸化在濾液中加入濾液量1～3％的鹽酸調(diào)PH，邊加邊攪拌，至濾液的PH值為3.0，然后靜置提取液約8小時(shí)，使析出物充分沉降，離心，得澄清的酸化液；(3)干燥酸化液噴霧干燥，即得丹參總酚酸浸膏粉；(4)醇提丹參總酚酸浸膏粉加85％乙醇回流提取3次。第一次加4倍浸膏量的90％乙醇，回流1.5小時(shí)，第二、三次各加3倍浸膏量的90％乙醇，分別回流1.5小時(shí)，合并提取液，靜置12小時(shí)，吸取上清液；(5)干燥酸化液噴霧干燥，即得丹參總酚酸浸膏粉末1.0kg。
實(shí)施例4(1)初提10kg丹參粗粉加5％碳酸氫鈉溶液在40℃浸漬提取4次第一次加60L，浸漬4小時(shí)，第二次加40L，40℃浸漬3小時(shí)，第三次加40L，40℃浸漬3小時(shí)，分離提取液，將三次提取液合并，用過濾方法除去提取液中的固體雜質(zhì)；(2)酸化在濾液中加入濾液量1～3％的鹽酸調(diào)PH，邊加邊攪拌，至濾液的PH值為5.0，然后靜置提取液約10小時(shí)，使析出物充分沉降，離心，得澄清的酸化液；(3)干燥酸化液噴霧干燥，即得丹參總酚酸浸膏粉；(4)醇提丹參總酚酸浸膏粉加60％乙醇回流提取3次。第一次加5倍浸膏量的60％乙醇，回流2.5小時(shí)，第二、三次各加3倍浸膏量的60％乙醇，分別回流2.5小時(shí)，合并提取液，靜置12小時(shí)，吸取上清液；
(5)干燥酸化液噴霧干燥，即得丹參總酚酸浸膏粉末0.9Kg。
實(shí)施例5傳統(tǒng)方法提取丹參總酚酸的提取取100Kg丹參飲片加水煎煮2次。第一次加600L水，煎煮2小時(shí)，第二次加500L水，煎煮1.5小時(shí)，自然沉降12小時(shí)以上，取上清液離心，除去提取液中的固體雜質(zhì)，得澄清的藥液。濃縮至250升。將濃縮液緩緩流過裝有300立升D101大孔樹脂的吸附柱，用800立升水洗吸附柱除去雜質(zhì)后，再以600立升40％乙醇洗出丹參總酚酸。收集40％乙醇洗出液，減壓濃縮至10立升后，在攪拌下緩緩加入90立升無水乙醇，加畢放置2小時(shí)，然后傾出上清液棄去沉淀物，上清液濃縮至干，進(jìn)一步干燥并粉碎得棕褐色丹參總酚酸浸膏粉1.8公斤，按生藥材計(jì)得率為1.8％。按實(shí)施例1所述方法，檢測總酚酸和丹酚酸B含量，檢測結(jié)果每克干浸膏含0.43克丹酚酸B，按生藥材計(jì)得率為0.8％；每克干浸膏含0.86克總酚酸，按生藥材計(jì)得率為1.5％。
權(quán)利要求
1.一種丹參總酚酸的制備方法，其特征在于所述的方法步驟如下(1)初提丹參飲片或丹參粗粉用水或稀堿于30～99℃下保溫浸漬1～4次，合并提取液，除去固體雜質(zhì)，得丹參中的水溶性成分，所述稀堿PH7.5～12，總浸漬時(shí)間為0.5～6小時(shí)；(2)酸化步驟(1)所得提取液加酸調(diào)PH1～6，沉淀去除雜質(zhì)；(3)干燥將步驟(2)所得提取液直接干燥或濃縮后干燥，得浸膏粉末；(4)醇提步驟(3)干燥所得浸膏粉末用50～90％乙醇水溶液回流提取1～4次，合并提取液，靜置，取上清液，即得高純度丹參總酚酸溶液；(5)干燥將步驟(4)所得溶液直接干燥或濃縮后干燥，即得所述的丹參總酚酸浸膏粉末。
2.如權(quán)利要求1所述的丹參總酚酸的制備方法，其特征在于所述的步驟(4)中所用乙醇為75～85％乙醇溶液。
3.如權(quán)利要求2所述的丹參總酚酸的制備方法，其特征在于所述的步驟(4)中所用乙醇為80％乙醇溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的丹參總酚酸的制備方法，其特征在于所述的步驟(1)中稀堿為下列之一①氫氧化鈉水溶液；②碳酸氫鈉水溶液；③碳酸鈉水溶液。
5.如權(quán)利要求1所述的丹參總酚酸的制備方法，其特征在于步驟(3)或(5)中所述干燥為噴霧干燥。
6.如權(quán)利要求1所述的丹參總酚酸的制備方法，其特征在于所述的方法步驟如下(1)初提丹參飲片或丹參粗粉，加入質(zhì)量為藥材量6～14倍的水，于90℃下保溫浸漬2次，每次1～2小時(shí)，合并提取液，過濾，得丹參中的水溶性成分；(2)酸化步驟(1)所得提取液加入1～3％的鹽酸調(diào)PH為1.5，靜置后離心，得澄清的酸化液；(3)干燥將步驟(2)所得酸化液在60℃減壓濃縮后噴霧干燥，的丹參總酚酸浸膏粉；(4)醇提步驟(3)干燥所得浸膏粉用質(zhì)量為浸膏粉3～4倍的85％乙醇水溶液回流提取3次，每次1～2小時(shí)，合并提取液，靜置8小時(shí)以上，取上清液，得高純度丹參總酚酸溶液；(5)干燥將步驟(4)所得溶液在60℃減壓濃縮后噴霧干燥，得丹參總酚酸浸膏粉末。
7.如權(quán)利要求1所述的丹參總酚酸的制備方法，其特征在于所述的方法步驟如下(1)初提丹參飲片或丹參粗粉，加入質(zhì)量為藥材量6～14倍的1％碳酸鈉溶液于90℃下保溫浸漬2次，每次1～2小時(shí)，合并提取液，過濾，得丹參中的水溶性成分；(2)酸化步驟(1)所得提取液加入1～3％的鹽酸調(diào)PH為1.5，靜置后離心，得澄清的酸化液；(3)干燥將步驟(2)所得酸化液在60℃減壓濃縮后噴霧干燥，得丹參總酚酸浸膏粉；(4)醇提步驟(3)干燥所得浸膏粉用質(zhì)量為浸膏粉3～4倍的85％乙醇水溶液回流提取3次，每次1～2小時(shí)，合并提取液，靜置8小時(shí)以上，取上清液，得高純度丹參總酚酸溶液；(5)干燥將步驟(4)所得溶液在60℃減壓濃縮后噴霧干燥，的丹參總酚酸浸膏粉末。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種丹參總酚酸的制備方法，所述的方法步驟如下丹參飲片或丹參粗粉先用水或稀堿于30～ 99℃下初提得丹參中的水溶性成分，然后提取液加酸調(diào)pH1～6，沉淀去除雜質(zhì)后，直接干燥或濃縮后干燥，得浸膏粉末；干燥所得浸膏粉末用50～90％乙醇水溶液回流提取1～4次，合并提取液，靜置，取上清液，即得高純度丹參總酚酸溶液；所得溶液直接干燥或濃縮后干燥，即得所述的丹參總酚酸浸膏粉末。利用本發(fā)明方法得到的丹參總酚酸不但質(zhì)量穩(wěn)定，而且富含中藥丹參的活性成分，具有抗腦缺血，抗細(xì)胞凋亡等藥理作用，因此可以用來制備療效好，安全可靠的防治心腦血管疾病藥物。
文檔編號C07C69/00GK1752080SQ200510061128
公開日2006年3月29日 申請日期2005年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月12日
發(fā)明者吳碧元, 桑睿, 沈瑩, 施曉萍, 林徐劍 申請人:正大青春寶藥業(yè)有限公司