專利名稱：一種由金銀花粗提物制備高純度綠原酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種綠原酸的制備方法，尤其是涉及一種由金銀花粗提物制備高純度綠原酸的方法。
背景技術(shù)：
金銀花是忍冬科忍冬植物的干燥花蕾，是常用中藥材。綠原酸是金銀花中重要的生理活性物質(zhì)，具有清熱解毒、抗菌、抗病毒、升高白細(xì)胞、保肝利膽、抗腫瘤、降血壓血脂、清除自由基等顯著藥理活性，可應(yīng)用于食品工業(yè)、化妝品工業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)中。隨著中藥現(xiàn)代化進(jìn)程的加快，制藥廠家對(duì)金銀花等的提取物要求越來越高，特別是歐、美國(guó)家制藥企業(yè)要求中藥提取物中的單體成份越純?cè)胶茫员愣ㄐ远糠治?、使用。比如發(fā)明名稱為“高純度綠原酸制劑”的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)第200410022438.6號(hào)涉及的就是以含量大于95％的綠原酸為原料，制成用于臨床的各種劑型的藥品。
目前生產(chǎn)醫(yī)用或化學(xué)純綠原酸的廠家非常少見。純品綠原酸主要依靠進(jìn)口，價(jià)格十分昂貴。高純度的綠原酸產(chǎn)品上市量很少，遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需求和出口需要，主要瓶頸就是制取工藝落后，缺乏大規(guī)模生產(chǎn)高純度綠原酸的綜合技術(shù)。
中國(guó)是金銀花種植大國(guó)，然而以金銀花為原料加工制成的市售產(chǎn)品除復(fù)方制劑外，多為浸膏或粗粉，其中綠原酸含量較低，僅為15％～30％左右(紫外分光光度計(jì)測(cè)定)，影響了產(chǎn)品的應(yīng)用范圍和附加值。美、日、德等國(guó)綠原酸多是從咖啡豆中提取，其產(chǎn)品純度可達(dá)90％至99％以上。根據(jù)相關(guān)的美國(guó)專利US4872987、日本專利JP4145049和JP4145048所揭露的內(nèi)容，國(guó)外制備純品綠原酸均是在粗提的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用現(xiàn)代先進(jìn)分離手段，如制備色譜、離子交換柱分離等進(jìn)行精提。
從金銀花中提取綠原酸，常用方法有石硫醇法、異戊醇法、鉛沉法、醇沉法等。對(duì)綠原酸進(jìn)行提純工藝研究的有關(guān)報(bào)道有中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)第99115374.X號(hào)提供了一種以杜仲葉為原料分離高純綠原酸的工藝，由于杜仲葉與金銀花中組分存在有較大差異，該工藝不適宜于從金銀花中提取綠原酸。而中國(guó)發(fā)明專利第ZL99114969.6號(hào)則揭示了利用超臨界萃取可從杜仲葉中提取含量大于90％的綠原酸，但是該方法僅限于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用，無法規(guī)?；a(chǎn)。中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)第97109109.9號(hào)揭示了將金銀花加酸性乙醇浸泡回流提取綠原酸，但是該方法的收率為5～8％，無法制得高純度綠原酸產(chǎn)品。而中國(guó)發(fā)明專利第ZL02133448.X號(hào)公布了利用大孔樹脂直接吸附分離金銀花提取液，可得到純度40％的綠原酸。中國(guó)發(fā)明專利第ZL01144170.4號(hào)提供的方法是對(duì)金銀花進(jìn)行稀醇回流提取、絮凝除雜，隨后采用大孔樹脂法或酸性乙酸乙酯萃取法純化精制綠原酸。該方法較普通酸醇法制得的綠原酸純度有較大提高，但仍難以制取高純度的綠原酸。
采用單一提純方法制備的綠原酸中仍含有多種雜質(zhì)，有多糖、蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽以及綠原酸的異構(gòu)體等，存在產(chǎn)品純度低、處理成本過高的問題，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)生產(chǎn)。截至目前，利用粗品綠原酸進(jìn)行活性萃取、柱層析技術(shù)綜合處理精制，得到高純度綠原酸產(chǎn)品的工業(yè)生產(chǎn)工藝在國(guó)內(nèi)、外尚未見到報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種由金銀花粗提物制備高純度綠原酸的方法，其能提高產(chǎn)品的純度、收率和生產(chǎn)規(guī)模，降低提取分離成本。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案提供一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，包括如下步驟A)醇沉步驟將金銀花粗提物用去離子水溶解，充分?jǐn)嚢韬螅渲瞥山疸y花粗提物的水溶液，然后加入乙醇進(jìn)行醇沉，醇沉后過濾；B)逆流萃取步驟將得到的過濾液加熱蒸去乙醇，剩余溶液用酸將pH值調(diào)節(jié)至1～4范圍內(nèi)，然后用混合溶劑進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，混合溶劑包括第一組分及第二組分，其中第一組分為乙酸乙酯，第二組分為低碳的醇、烷烴、酮中任何一種或兩種物質(zhì)；C)濃縮步驟合并萃取液并濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮至釜底殘留的固含物與乙酸乙酯之比為1g∶5～20mL，得到濃縮液S1；D)配制水相步驟將濃縮液S1加水靜置1～8小時(shí)、在4～25℃條件下分出水相，濃縮液S1與加水量的體積比為1∶1～3.5；E)柱析步驟將上述水相流過裝有吸附材料的層析柱，隨后用不同濃度的洗脫液進(jìn)行洗脫，分段收集解吸液，洗脫液為低碳的醇、酮、酸中的一種物質(zhì)配制而成的水溶液，濃度為10～90％；F)結(jié)晶干燥步驟將分段收集到的上述解吸液濃縮、結(jié)晶、干燥后得到綠原酸含量50～92％的產(chǎn)品。
上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于醇沉步驟中，去離子水的加入量與金銀花粗提物固體粉末的質(zhì)量比為3～1∶1，溶解溫度25～60℃。
上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于醇沉步驟中，乙醇加入量與去離子水溶液的體積比為2.5～6.5∶1，醇沉靜置時(shí)間為1～8小時(shí)，醇沉溫度為4～25℃。
上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于逆流萃取步驟中，蒸去乙醇是在40～80℃，10～400mmHg壓力條件下進(jìn)行，調(diào)節(jié)PH值所采用的酸為硫酸、鹽酸、磷酸、草酸中的任何一種，多級(jí)逆流萃取的級(jí)數(shù)為5～20級(jí)。
上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于逆流萃取步驟中，混合溶劑的用量為過濾液體積的1～10倍，混合溶劑的第一組分與第二組分的混合比為10∶1～10，混合溶劑的第二組分為正己烷、異丙醇、丙酮中任何一種或兩種物質(zhì)，且混合溶劑的組成為乙酸乙酯∶正己烷∶異丙醇∶丙酮＝10∶0～5∶0～5∶0～5。
上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于濃縮步驟中，在50～80℃，10～400mmHg壓力的條件下進(jìn)行濃縮。
上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)在于層析柱中所裝填的材料為NKA型、D130型大孔樹脂或具有離子交換功能的D280型、D390型樹脂中的一種，洗脫液為乙醇、甲醇、丙酮、草酸中的一種所配制而成的水溶液。
此外，本發(fā)明還提供一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其包括如下步驟A)醇沉步驟將金銀花粗提物用去離子水溶解，充分?jǐn)嚢韬螅渲瞥山疸y花粗提物的水溶液，然后加入乙醇進(jìn)行醇沉，醇沉后過濾；B)逆流萃取步驟將得到的過濾液加熱蒸去乙醇，剩余溶液用酸將pH值調(diào)節(jié)至1～4范圍內(nèi)，然后用混合溶劑進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，混合溶劑包括第一組分及第二組分，其中第一組分為乙酸乙酯，第二組分為低碳的醇、烷烴、酮中任何一種或兩種物質(zhì)；C)濃縮步驟合并萃取液，在50～80℃，10～400mmHg的壓力下進(jìn)行濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮至乙酸乙酯被全部回收，得到中間產(chǎn)物S2；
D)干燥步驟，將中間產(chǎn)物S2經(jīng)冷凍干燥后得到綠原酸含量30～70％的產(chǎn)品。
由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明具有如下有益效果本發(fā)明利用醇沉除去大部分多糖類物質(zhì)，隨后采用混合溶劑進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，去除80％～90％的雜質(zhì)，綠原酸收率不低于75％。萃取后的提取物中僅富含綠原酸等酚酸類物質(zhì)，還可利用顆粒狀具有選擇性功能基團(tuán)的吸附材料進(jìn)行柱層析，而得到高純綠原酸(經(jīng)HPLC檢測(cè)，含量可達(dá)30～90％)。與現(xiàn)有提取技術(shù)相比，該方法可兼顧產(chǎn)品收率和純度，生產(chǎn)成本低，適宜于規(guī)模化生產(chǎn)。

圖1是本發(fā)明一種由金銀花粗提物制備高純度綠原酸的方法的工藝流程示意圖。
圖2是本發(fā)明一種由金銀花粗提物制備高純度綠原酸的方法的另一種工藝流程示意圖。
具體實(shí)施方式
如圖1所示，本發(fā)明提供一種由金銀花粗提物制備高純度綠原酸的方法，其對(duì)綠原酸粗提物的純化主要原理包括以下幾個(gè)方面1、醇沉對(duì)高分子物質(zhì)如蛋白質(zhì)、多糖等的影響非常顯著，醇沉極易使這些成分沉淀；2、利用綠原酸在不同溶劑中溶解性的差異，選擇有機(jī)溶劑作為萃取劑，利用活性萃取，去除大部分粘膠、無機(jī)鹽等雜質(zhì)。
3、選擇適當(dāng)?shù)碾x子交換劑作為柱填料，選擇適當(dāng)?shù)慕馕?，通過吸附、解吸工藝條件的控制進(jìn)行綠原酸異構(gòu)體的分離純化，制得高純綠原酸。
本發(fā)明一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法的工藝流程包括以下幾個(gè)步驟A)醇沉步驟將金銀花粗提物用去離子水溶解，水的加入量與固體粉末的質(zhì)量比為3～1∶1，溶解溫度25～60℃，充分?jǐn)嚢韬螅尤胍掖歼M(jìn)行醇沉，乙醇加入量與溶液體積比為2.5～6.5∶1，醇沉靜置時(shí)間為1～8小時(shí)，醇沉溫度為4～25℃，醇沉后過濾；B)逆流萃取步驟上述過濾液在40～80℃，10～400mmHg的壓力下蒸去乙醇，剩余溶液用硫酸、鹽酸、磷酸、草酸中的任何一種將pH值調(diào)節(jié)至1～4范圍，然后用含乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，混合溶劑包括第一組分及第二組分，其中，第一組分為乙酸乙酯，第二組分為低碳的醇、烷烴、酮中任何一種或兩種物質(zhì)，第一組分與第二組分的混合比為10∶1～10，混合溶劑的用量為過濾液體積的1～10倍，多級(jí)逆流萃取的級(jí)數(shù)為5～20級(jí)。
C)濃縮步驟合并萃取液，在50～80℃，10～400mmHg的壓力下進(jìn)行濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮到釜底殘留的固含物與乙酸乙酯之比為1g∶5～20mL，得到濃縮液S1。
D)配制水相步驟將濃縮液S1加水靜置1～8小時(shí)、4～25℃條件下分出水相，濃縮液S1與加水量的體積比為1∶1～3.5。
E)柱析步驟將上述水相流過裝有吸附材料的層析柱，隨后用不同濃度的洗脫液進(jìn)行洗脫，分段收集流出液。洗脫液為低碳的醇、酮、酸中的一種物質(zhì)配制而成的水溶液，濃度為10～90％。
F)結(jié)晶干燥步驟分段收集上述解吸液，濃縮，結(jié)晶，干燥后得到綠原酸含量50～92％的產(chǎn)品。
上述步驟中，混合溶劑中的第二組分為正己烷、異丙醇、丙酮中任何一種或兩種物質(zhì)，混合溶劑組成為乙酸乙酯∶正己烷∶異丙醇∶丙酮＝10∶0～5∶0～5∶0～5。
層析柱中所裝填的材料為NKA型、D130型大孔樹脂或具有離子交換功能的D280型、D390型樹脂中的一種，洗脫液為乙醇、甲醇、丙酮、草酸中的一種所配制而成的水溶液。
此外，在上述的濃縮步驟中，若將乙酸乙酯全部回收，可得到中間產(chǎn)品S2；將中間產(chǎn)品S2直接進(jìn)行干燥步驟，經(jīng)冷凍干燥后即得到綠原酸含量30％～70％的產(chǎn)品。從而不需再進(jìn)行前述工藝流程中后續(xù)的D)、E)、F)步驟，而是采用了如圖2所示的工藝流程。
下面通過三個(gè)實(shí)施例來分別說明本發(fā)明一種由金銀花粗提物制備高純度綠原酸的方法的具體實(shí)施過程實(shí)施例一參見附圖，取金銀花粗粉100g，加100mL去離子水常溫溶解，加入400mL乙醇醇沉，25℃靜置4小時(shí)后離心過濾，過濾液加濃鹽酸調(diào)pH值為2.5，用乙酸乙酯與異丙醇的混合溶液(體積比為10∶3)進(jìn)行8級(jí)逆流萃取，萃取相濃縮至80mL，加100mL水轉(zhuǎn)溶至水相，將其通過裝有NKA吸附樹脂的層析柱，用100mL濃度為10％甲醇洗脫后，再用45％甲醇洗脫，收集650mL解析液，濃縮，結(jié)晶，干燥，得到產(chǎn)品5.2g，經(jīng)HPLC測(cè)定，收率為82％，純度為90.0％。
實(shí)施例二取金銀花粗粉50g，加150mL去離子水常溫溶解，加入180mL乙醇醇沉，4℃靜置12小時(shí)后離心過濾，過濾液加6M硫酸調(diào)pH值為2.0，用乙酸乙酯與正己烷、丙酮的混合溶液(體積比為10∶1.5∶2)進(jìn)行12級(jí)逆流萃取，萃取相蒸干溶劑，經(jīng)水轉(zhuǎn)溶至水相，濃縮冷凍干燥，得到產(chǎn)品5.5g，經(jīng)HPLC測(cè)定，收率為86％，純度為45.0％。
實(shí)施例三取金銀花粗粉500g，加入60℃，800mL去離子水溶解，涼至室溫后加入1200mL乙醇醇沉，在4℃靜置10小時(shí)后離心過濾，過濾液滴加草酸調(diào)pH值為1.0，用乙酸乙酯與正己烷的混合溶液(體積比為10∶5)進(jìn)行18級(jí)逆流萃取，萃取相濃縮至800mL，加450mL去離子水轉(zhuǎn)溶至水相，將其通過裝有D280型吸附樹脂的層析柱，用300mL去離子水洗脫后，再用60％乙醇洗脫，收集400mL解析液，濃縮，結(jié)晶，干燥，得到產(chǎn)品23.8g，經(jīng)HPLC測(cè)定，收率為94％，純度為90.6％。
權(quán)利要求
1.一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，包括如下步驟A)醇沉步驟將金銀花粗提物用去離子水溶解，充分?jǐn)嚢韬?，配制成金銀花粗提物的水溶液，然后加入乙醇進(jìn)行醇沉，醇沉后過濾；B)逆流萃取步驟將得到的過濾液加熱蒸去乙醇，剩余溶液用酸將pH值調(diào)節(jié)至1～4范圍內(nèi)，然后用混合溶劑進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，混合溶劑包括第一組分及第二組分，其中第一組分為乙酸乙酯，第二組分為低碳的醇、烷烴、酮中任何一種或兩種物質(zhì)；C)濃縮步驟合并萃取液并濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮至釜底殘留的固含物與乙酸乙酯之比為1g∶5～20mL，得到濃縮液S1；D)配制水相步驟將濃縮液S1加水靜置1～8小時(shí)、在4～25℃條件下分出水相，濃縮液S1與加水量的體積比為1∶1～3.5；E)柱析步驟將上述水相流過裝有吸附材料的層析柱，隨后用不同濃度的洗脫液進(jìn)行洗脫，分段收集解吸液，洗脫液為低碳的醇、酮、酸中的一種物質(zhì)配制而成的水溶液，濃度為10～90％；F)結(jié)晶干燥步驟將分段收集到的上述解吸液濃縮、結(jié)晶、干燥后得到綠原酸含量50～92％的產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其特征在于醇沉步驟中，去離子水的加入量與金銀花粗提物固體粉末的質(zhì)量比為3～1∶1，溶解溫度25～60℃。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其特征在于醇沉步驟中，乙醇加入量與去離子水溶液的體積比為2.5～6.5∶1，醇沉靜置時(shí)間為1～8小時(shí)，醇沉溫度為4～25℃。
4.如權(quán)利要求1所述的一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其特征在于逆流萃取步驟中，蒸去乙醇是在40～80℃，10～400mmHg壓力條件下進(jìn)行，調(diào)節(jié)PH值所采用的酸為硫酸、鹽酸、磷酸、草酸中的任何一種，多級(jí)逆流萃取的級(jí)數(shù)為5～20級(jí)。
5.如權(quán)利要求1或4所述的一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其特征在于逆流萃取步驟中，混合溶劑的用量為過濾液體積的1～10倍，混合溶劑的第一組分與第二組分的混合比為10∶1～10，混合溶劑的第二組分為正己烷、異丙醇、丙酮中任何一種或兩種物質(zhì)，且混合溶劑的組成為乙酸乙酯∶正己烷∶異丙醇∶丙酮＝10∶0～5∶0～5∶0～5。
6.如權(quán)利要求1所述的一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其特征在于濃縮步驟中，在50～80℃，10～400mmHg壓力的條件下進(jìn)行濃縮。
7.如權(quán)利要求1所述的一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其特征在于層析柱中所裝填的材料為NKA型、D130型大孔樹脂或具有離子交換功能的D280型、D390型樹脂中的一種，洗脫液為乙醇、甲醇、丙酮、草酸中的一種所配制而成的水溶液。
8.一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其包括如下步驟A)醇沉步驟將金銀花粗提物用去離子水溶解，充分?jǐn)嚢韬?，配制成金銀花粗提物的水溶液，然后加入乙醇進(jìn)行醇沉，醇沉后過濾；B)逆流萃取步驟將得到的過濾液加熱蒸去乙醇，剩余溶液用酸將pH值調(diào)節(jié)至1～4范圍內(nèi)，然后用混合溶劑進(jìn)行多級(jí)逆流萃取，混合溶劑包括第一組分及第二組分，其中第一組分為乙酸乙酯，第二組分為低碳的醇、烷烴、酮中任何一種或兩種物質(zhì)；C)濃縮步驟合并萃取液，在50～80℃，10～400mmHg的壓力下進(jìn)行濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮至乙酸乙酯被全部回收，得到中間產(chǎn)物S2；D)干燥步驟將中間產(chǎn)物S2經(jīng)冷凍干燥后得到綠原酸含量30～70％的產(chǎn)品。
9.如權(quán)利要求8所述的一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其特征在于醇沉步驟中，去離子水的加入量與金銀花粗提物固體粉末的質(zhì)量比為3～1∶1，溶解溫度25～60℃。
10.如權(quán)利要求8所述的一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，其特征在于逆流萃取步驟中，蒸去乙醇是在40～80℃，10～400mmHg壓力條件下進(jìn)行，調(diào)節(jié)PH值所采用的酸為硫酸、鹽酸、磷酸、草酸中的任何一種，多級(jí)逆流萃取的級(jí)數(shù)為5～20級(jí)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由金銀花粗提物制備高純綠原酸的方法，包括如下步驟醇沉步驟將金銀花粗提物用去離子水溶解、充分?jǐn)嚢瑁渲瞥山疸y花粗提物的水溶液，再加入乙醇進(jìn)行醇沉，再過濾；逆流萃取步驟將過濾液加熱蒸去乙醇，剩余溶液將pH值調(diào)節(jié)至1～4，然后用含乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行多級(jí)逆流萃取；濃縮步驟合并萃取液并濃縮回收乙酸乙酯，得到濃縮液S1；配制水相步驟將濃縮液S1加水配制成水相；柱析步驟將上述水相流過層析柱，隨后用洗脫液進(jìn)行洗脫，分段收集解吸液；結(jié)晶干燥步驟將分段收集到的解吸液濃縮、結(jié)晶、干燥后得到綠原酸含量50～92％的產(chǎn)品。本發(fā)明兼顧產(chǎn)品收率和純度，生產(chǎn)成本低，適宜于規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07C67/58GK1746149SQ200510105658
公開日2006年3月15日 申請(qǐng)日期2005年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月29日
發(fā)明者陳福明, 楊海燕, 孫海峰, 汪愛國(guó) 申請(qǐng)人:深圳清華大學(xué)研究院