專利名稱：一種制備脯組環(huán)二肽的新方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種肽類藥物的制備方法，特別涉及一種制備脯組環(huán)二肽的新方法。
背景技術：
脯組環(huán)二肽是人體內(nèi)一種活性二肽，廣泛存在于體液及組織液中。脯組環(huán)二肽能對抗某些中樞抑制藥的作用，可以影響人體的某些行為，對體溫、催乳素水平、血糖及動物的攝食飲水都具有調(diào)節(jié)作用，有望成為藥物投入市場。
現(xiàn)在有關脯組環(huán)二肽的合成方法很少，且所報道的L-L型脯組環(huán)二肽、D-L型脯組環(huán)二肽、L-D型脯組環(huán)二肽和D-D型脯組環(huán)二肽收率極低，只有8％～30％(文獻報道見Kukla，M.J.；Breslin，H.J.；Bowden，C.R.Synthesis，characterization，andanorectic testing of the four stereoisomers of cyclo(histidylproline).J.Med.Chem.1985，28(11)，1745-1747)。
本發(fā)明提出了一條新的合成路線，使用液相合成法制備脯組環(huán)二肽，較之以前的方法，收率有明顯提高，最高總收率達86％。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種制備脯組環(huán)二肽的新方法。
本發(fā)明的制備脯組環(huán)二肽的方法，包括以下步驟1)由脯氨酸甲脂和N-叔丁氧羰基-Nim-三苯甲基組氨酸出發(fā)，得到保護的脯組二肽甲酯；2)去氨基保護后直接環(huán)化到脯組環(huán)二肽，是將保護的脯組二肽甲酯在氯化氫的乙酸乙酯液作用下，脫保護后直接生成脯組環(huán)二肽。
反應過程見下面的反應方程式
其中Nim代表組氨酸咪唑基需保護氮原子Boc代表叔丁氧羰基Trt代表三苯甲基Me代表甲基DDC代表二環(huán)己基碳二亞胺DCM代表二氯甲烷EtOAc代表乙酸乙酯式V即本發(fā)明的目的產(chǎn)物脯組環(huán)二肽。
其中所述保護的脯組二肽甲酯，是處理后的脯氨酸甲酯與保護的組氨酸在二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)的作用下生成的。其中所述處理后的脯氨酸甲酯是指其氨基端沒有保護基團也沒有成鹽。
所述去氨基保護后直接環(huán)化到脯組環(huán)二肽，是將保護的脯組二肽甲酯在氯化氫的乙酸乙酯液作用下，脫保護后直接生成脯組環(huán)二肽。
用本發(fā)明的方法可以得到任何構型組合的脯組環(huán)二肽，即L-L型脯組環(huán)二肽、D-L型脯組環(huán)二肽、L-D型脯組環(huán)二肽和D-D型脯組環(huán)二肽，如下式I-式IV所示， 本發(fā)明所得異構體只需要使用不同構型的初始原料脯氨酸甲脂和N-叔丁氧羰基-Nim-三苯甲基組氨酸即可，不同的初始原料，得到不同的異構體。如使用L構型的脯氨酸甲脂和L構型的N-叔丁氧羰基-Nim-三苯甲基組氨酸得到L-L型脯組環(huán)二肽，具體描述在本發(fā)明實施例中。
本發(fā)明的新方法，包括以下步驟1)由脯氨酸甲脂和N-叔丁氧羰基-Nim-三苯甲基組氨酸出發(fā)，得到保護的脯組二肽甲酯；2)將保護的脯組二肽甲酯在酸性條件下，脫保護后直接生成脯組環(huán)二肽。本發(fā)明使用液相合成法制備脯組環(huán)二肽，總收率比文獻報道的高出很多，最高總收率可達86％，且該工藝具有反應時間短、后處理簡單、對環(huán)境的污染較小、成本低等特點，具有可觀的經(jīng)濟使用價值。
具體實施例方式
以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
實施例1、L-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L型的脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和744毫克Boc保護的L型的組氨酸(Boc-His-OH)，滴加10毫升含有1150毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)的DCM溶液，室溫下攪拌20小時。過濾后減壓濃縮反應液并經(jīng)硅膠柱層析分離得到保護的脯組二肽甲酯(Boc-His-Pro-OMe)210毫克，產(chǎn)率20.5％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯150毫克溶于5毫升乙酸乙酯液中，加入2毫升三氟乙酸液，攪拌1小時。減壓濃縮反應液得脯組二肽甲酯的三氟乙酸鹽119毫克，產(chǎn)率96.9％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
3、將得到的脯組二肽甲酯的三氟乙酸鹽119毫克溶于10毫升DCM液中，慢慢滴加2毫升三乙胺(TEA)，攪拌2小時完成環(huán)化反應。濾去三乙胺鹽酸鹽，減壓濃縮后經(jīng)柱層析分離得到L-L型的脯組環(huán)二肽100毫克，產(chǎn)率為84.6％。1HNMR(D2O，500MHz)1.95(m，2H)，2.2(m，2H)，3.0(t，H)，3.4(d，2H)，3.5(d，1H)，4.65(d，1H)，7.4(s，1H)，8.25(s，1H)；13C NMR(D2O，500MHz)135.5，133.5，119.6，169.1，168.4，63.4，52.4，45.6，30.3，29.2，22.2；ESI MS/MS(rel.int.)m/z 234(100)，154(54)，81(63)，70(18)；mp 163.5℃；[α]D20(CH3OH，c＝1.0)-119.15，證明所得產(chǎn)物正確。HPLCtR＝5.560，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為ChromasilKR100-SC18 Column。
實施例2、L-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L型的脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和744毫克Boc保護的L型的組氨酸(Boc-His-OH)，320毫克4-二甲基氨基吡啶(DMAP)加入到15毫升二氯甲烷(DCM)中室溫下攪拌溶解，再滴加10毫升含有1150毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)的DCM溶液，室溫下攪拌18小時。過濾后減壓濃縮反應液并經(jīng)硅膠柱層析分離得到保護的脯組二肽甲酯(Boc-His-Pro-OMe)270毫克，產(chǎn)率26.3％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯150毫克溶于5毫升乙酸乙酯液中，加入2毫升三氟乙酸液，攪拌1小時。減壓濃縮反應液得脯組二肽甲酯的三氟乙酸鹽123毫克，產(chǎn)率100.0％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
3、將得到的脯組二肽甲酯的三氟乙酸鹽123毫克溶于10毫升DCM液中，慢慢滴加2毫升三乙胺(TEA)，攪拌2小時完成環(huán)化反應。濾去三乙胺鹽酸鹽，減壓濃縮后經(jīng)柱層析分離得到L-L型的脯組環(huán)二肽103毫克，產(chǎn)率為86.3％。HPLCtR＝5.570，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為ChromasilKR100-SC18 Column；mp 164.1℃；[α]D20(CH3OH，c＝1.0)-119.10，證明所得產(chǎn)物正確。
實施例3、L-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L型的脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和744毫克Boc保護的L型的組氨酸(Boc-His-OH)，440毫克1-羥基苯并三氮唑(HOBt)加入到20毫升二氯甲烷(DCM)中室溫下攪拌溶解，再滴加10毫升含有1150毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)的DCM溶液，室溫下攪拌4小時。過濾后減壓濃縮反應液并經(jīng)硅膠柱層析分離得到保護的脯組二肽甲酯(Boc-His-Pro-OMe)550毫克，產(chǎn)率52.3％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯150毫克溶于5毫升乙酸乙酯液中，加入2毫升三氟乙酸液，攪拌1小時。減壓濃縮反應液得脯組二肽甲酯的三氟乙酸鹽120毫克，產(chǎn)率97.5％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
3、將得到的脯組二肽甲酯的三氟乙酸鹽120毫克溶于10毫升DCM液中，慢慢滴加2毫升三乙胺(TEA)，攪拌2小時完成環(huán)化反應。濾去三乙胺鹽酸鹽，減壓濃縮后經(jīng)柱層析分離得到L-L型的脯組環(huán)二肽102毫克，產(chǎn)率為86.7％。HPLCtR＝5.582，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為ChromasilKR100-SC18 Column；mp 162.9℃；[α]D20(CH3OH，c＝1.0)-118.91，證明所得產(chǎn)物正確。
實施例4、L-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L型的脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和744毫克Boc保護的L型的組氨酸(Boc-His-OH)，440毫克1-羥基苯并三氮唑(HOBt)加入到20毫升二氯甲烷(DCM)中室溫下攪拌溶解，再滴加10毫升含有1150毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)的DCM溶液，室溫下攪拌4小時。過濾后減壓濃縮反應液并經(jīng)硅膠柱層析分離得到保護的脯組二肽甲酯(Boc-His-Pro-OMe)550毫克，產(chǎn)率52.3％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯150毫克溶于5毫升HCl的乙酸乙酯液中，加，攪拌10分鐘。減壓濃縮反應液得脯組二肽甲酯的鹽酸鹽118毫克，產(chǎn)率95.9％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
3、將得到的脯組二肽甲酯的鹽酸鹽118毫克溶于10毫升DCM液中，慢慢滴加2毫升三乙胺(TEA)，攪拌2小時完成環(huán)化反應。濾去三乙胺鹽酸鹽，減壓濃縮后經(jīng)柱層析分離得到L-L型的脯組環(huán)二肽102毫克，產(chǎn)率為69.1％。HPLC tR＝5.571，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為ChromasilKR100-SC18 Column；mp 165.1℃；[α]D20(CH3OH，c＝1.0)-119.08，證明所得產(chǎn)物正確。
實施例5、L-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L型的脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和744毫克Boc保護的L型的組氨酸(Boc-His-OH)，440毫克1-羥基苯并三氮唑(HOBt)加入到20毫升二氯甲烷(DCM)中室溫下攪拌溶解，再滴加10毫升含有1150毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)的DCM溶液，室溫下攪拌4小時。過濾后減壓濃縮反應液并經(jīng)硅膠柱層析分離得到保護的脯組二肽甲酯(Boc-His-Pro-OMe)550毫克，產(chǎn)率52.3％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯150毫克溶于5毫升HCl的乙酸乙酯液中，加，攪拌10分鐘。減壓濃縮反應液得脯組二肽甲酯的鹽酸鹽118毫克，產(chǎn)率95.9％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
3、將得到的脯組二肽甲酯的鹽酸鹽118毫克溶于10毫升DCM液中，加入20毫克無水碳酸鈉，攪拌4小時完成環(huán)化反應。過濾，減壓濃縮后經(jīng)柱層析分離得到L-L型的脯組環(huán)二肽108毫克，產(chǎn)率為73.2％。HPLC tR＝5.562，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為Chromasil KR100-SC18 Column；mp 162.5℃；[α]D20(CH3OH，c＝1.0)-120.20，證明所得產(chǎn)物正確。
實施例6、L-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L型的脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和744毫克Boc保護的L型的組氨酸(Boc-His-OH)，440毫克1-羥基苯并三氮唑(HOBt)加入到20毫升二氯甲烷(DCM)中室溫下攪拌溶解，再滴加10毫升含有1150毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)的DCM溶液，室溫下攪拌4小時。過濾后減壓濃縮反應液并經(jīng)硅膠柱層析分離得到保護的脯組二肽甲酯(Boc-His-Pro-OMe)550毫克，產(chǎn)率52.3％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯150毫克溶于5毫升HCl的乙酸乙酯液中，加，攪拌10分鐘。減壓濃縮反應液得脯組二肽甲酯的鹽酸鹽110毫克，產(chǎn)率89.4％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
3、將得到的脯組二肽甲酯的鹽酸鹽110毫克溶于15毫升甲醇液中，加入20毫克無水碳酸氫鈉，攪拌12小時完成環(huán)化反應。過濾，減壓濃縮后經(jīng)柱層析分離得到L-L型的脯組環(huán)二肽89毫克，產(chǎn)率為67.7％。HPLC tR＝5.567，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為Chromasil KR100-SC18 Column；mp162.1℃；[α]D20(CH3OH，c＝1.0)-120.07，證明所得產(chǎn)物正確。
實施例7、L-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L型的脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和744毫克Boc保護的L型的組氨酸(Boc-His-OH)，440毫克1-羥基苯并三氮唑(HOBt)加入到20毫升二氯甲烷(DCM)中室溫下攪拌溶解，再滴加10毫升含有1150毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)的DCM溶液，室溫下攪拌4小時。過濾后減壓濃縮反應液并經(jīng)硅膠柱層析分離得到保護的脯組二肽甲酯(Boc-His-Pro-OMe)550毫克，產(chǎn)率52.3％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯150毫克溶于5毫升HCl的乙酸乙酯液中，加，攪拌10分鐘。減壓濃縮反應液得脯組二肽甲酯的鹽酸鹽110毫克，產(chǎn)率89.4％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
3、將得到的脯組二肽甲酯的鹽酸鹽110毫克溶于15毫升HCl的乙酸乙酯液中，常溫攪拌48小時完成環(huán)化反應。過濾，減壓濃縮后經(jīng)乙醇—石油醚重結(jié)晶得到L-L型的脯組環(huán)二肽102毫克，產(chǎn)率為89.3％。HPLC tR＝5.576，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為Chromasil KR100-SC18 Column；mp 164.7℃；[α]D20(CH3OH，c＝1.0)-118.174，證明所得產(chǎn)物正確。
實施例8、L-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L型的脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和744毫克Boo保護的L型的組氨酸(Boc-His-OH)，440毫克1-羥基苯并三氮唑(HOBt)加入到20毫升二氯甲烷(DCM)中室溫下攪拌溶解，再滴加10毫升含有1150毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)的DCM溶液，室溫下攪拌4小時。過濾后減壓濃縮反應液并經(jīng)硅膠柱層析分離得到保護的脯組二肽甲酯(Boc-His-Pro-OMe)550毫克，產(chǎn)率52.3％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯150毫克溶于5毫升HCl的乙酸乙酯液中，加，攪拌10分鐘。減壓濃縮反應液得脯組二肽甲酯的鹽酸鹽105毫克，產(chǎn)率85.3％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
3、將得到的脯組二肽甲酯的鹽酸鹽105毫克溶于15毫升HCl的乙酸乙酯液中，70℃加熱回流1小時，過濾，減壓濃縮后經(jīng)乙醇—石油醚重結(jié)晶得到L-L型的脯組環(huán)二肽77毫克，產(chǎn)率為63.3％。HPLC tR＝5.561，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為Chromasil KR100-SC18 Column；mp 163.8℃；[α]D20(CH3OH，c＝1.0)-121.18，證明所得產(chǎn)物正確。
實施例9、L-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L型的脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和1544毫克Boc保護的L型的組氨酸(Boc-His(Trt)-OH)，1230毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)全部混合后，加入DCM(20ml)，室溫下攪拌45分鐘，TLC跟蹤反應完成，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸掉溶劑，用乙酸乙酯(15ml)溶解，過濾得無色清液，然后分別用飽和NaHCO3(5mlx3)，1MHC1(5mlx3)，飽和NaCl(5mlx3)洗滌后，無水Na2SO4干燥過夜。以乙醚-石油醚重結(jié)晶得到白色固體1.83g，收率97.4％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯1220毫克溶于20毫升HCl的乙酸乙酯液中，室溫下攪拌12小時后，70℃加熱回流36小時后，溶液變渾濁，TLC跟蹤反應完成，減壓旋干后，加水(10ml)溶解后過濾，清液再減壓濃縮后，經(jīng)乙醇—乙醚重結(jié)晶得到白色固體0.40g，收率88.3％。HPLC tR＝5.570，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為Chromasil KR100-SC18 Column；mp163.5℃；[α]D20(CH3OH，c＝1.0)-119.80，證明所得產(chǎn)物正確。
實施例10、L-D型脯組環(huán)二肽1、將450毫克L-脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和1544毫克Boc保護的D型的組氨酸(Boc-His(Trt)-OH)，1230毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)全部混合后，加入DCM(20ml)，室溫下攪拌45分鐘，TLC跟蹤反應完成，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸掉溶劑，用乙酸乙酯(15ml)溶解，過濾得無色清液，然后分別用飽和NaHCO3(5mlx3)，1MHCl(5mlx3)，飽和NaCl(5mlx3)洗滌后，無水Na2SO4干燥過夜。以乙醚—石油醚重結(jié)晶得到白色固體1.78g，收率94.7％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯1220毫克溶于20毫升HCl的乙酸乙酯液中，室溫下攪拌12小時后，70℃加熱回流36小時后，溶液變渾濁，TLC跟蹤反應完成，減壓旋干后，加水(10ml)溶解后過濾，清液再減壓濃縮后，經(jīng)乙醇—乙醚重結(jié)晶得到白色固體0.41g，收率90.5％。1H NMR(D2O，500MHz)1.84(m，2H)，2.24(m，2H)，3.10(t，H)，3.64(d，2H)，3.78(d，1H)，4.87(d，1H)，7.59(s，1H)，8.45(s，1H)；13C NMR(D2O，500MHz)138.5，132.5，118.6，170.2，167.2，63.9，54.3，44.7，29.8，27.2，22.0；ESI MS/MS(rel.int.)m/z 234(100)，154(54)，81(63)，70(18)；mp 185.1℃；[α]D20(CH3OH，c＝0.30)-54.71，證明所得產(chǎn)物正確。HPLC tR＝4.712，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝9010，色譜柱為Chromasil KR100-SC18Column。
實施例11、D-L型脯組環(huán)二肽1、將450毫克D-脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和1544毫克Boc保護的L型的組氨酸(Boc-His(Trt)-OH)，1230毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)全部混合后，加入DCM(20ml)，室溫下攪拌45分鐘，TLC跟蹤反應完成，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸掉溶劑，用乙酸乙酯(15ml)溶解，過濾得無色清液，然后分別用飽和NaHCO3(5mlx3)，1MHCl(5mlx3)，飽和NaCl(5mlx3)洗滌后，無水Na2SO4干燥過夜。以乙醚—石油醚重結(jié)晶得到白色固體1.77g，收率94.2％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯1220毫克溶于20毫升HCl的乙酸乙酯液中，室溫下攪拌12小時后，70℃加熱回流36小時后，溶液變渾濁，TLC跟蹤反應完成，減壓旋干后，加水(10ml)溶解后過濾，清液再減壓濃縮后，經(jīng)乙醇—乙醚重結(jié)晶得到白色固體0.39g，收率82.1％。1H NMR(D2O，500MHz)1.84(m，2H)，2.24(m，2H)，3.10(t，H)，3.64(d，2H)，3.78(d，1H)，4.87(d，1H)，7.59(s，1H)，8.45(s，1H)；13C NMR(D2O，500MHz)138.5，132.5，118.6，170.2，167.2，63.9，54.3，44.7，29.8，27.2，22.0；ESI MS/MS(rel.int.)m/z 234(100)，154(54)，81(63)，70(18)mp 194.1℃；[α]D20(CH3OH，c＝0.90)+57.80，證明所得產(chǎn)物正確。HPLC tR＝4.705，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為Chromasil KR100-SC18Column。
實施例12、D-D型脯組環(huán)二肽1、將450毫克D-脯氨酸甲酯(Pro-OMe)和1544毫克Boc保護的D型的組氨酸(Boc-His(Trt)-OH)，1230毫克二環(huán)己基炭二亞胺(DCC)全部混合后，加入DCM(20ml)，室溫下攪拌45分鐘，TLC跟蹤反應完成，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸掉溶劑，用乙酸乙酯(15ml)溶解，過濾得無色清液，然后分別用飽和NaHCO3(5mlx3)，1MHCl(5mlx3)，飽和NaCl(5mlx3)洗滌后，無水Na2SO4干燥過夜。以乙醚—石油醚重結(jié)晶得到白色固體1.80g，收率95.8％。經(jīng)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)以及核磁共振譜(1H NMR13C NMR)測定，證明所得產(chǎn)物正確。
2、將得到的保護的脯組二肽甲酯1220毫克溶于20毫升HCl的乙酸乙酯液中，室溫下攪拌12小時后，70℃加熱回流36小時后，溶液變渾濁，TLC跟蹤反應完成，減壓旋干后，加水(10ml)溶解后過濾，清液再減壓濃縮后，經(jīng)乙醇—乙醚重結(jié)晶得到白色固體0.40g，收率84.2％。1H NMR(D2O，500MHz)1.95(m，2H)，2.2(m，2H)，3.0(t，H)，3.4(d，2H)，3.5(d，1H)，4.65(d，1H)，7.4(s，1H)，8.25(s，1H)；13C NMR(D2O，500MHz)135.5，133.5，119.6，169.1，168.4，63.4，52.4，45.6，30.3，29.2，22.2；ESIMS/MS(rel.int.)m/z 234(100)，154(54)，81(63)，70(18)；mp 160.5℃；[α]D20(CH3OH，c＝0.90)+120.20，證明所得產(chǎn)物正確。HPLC tR＝5.579，流動相為PBS(pH＝7.0)緩沖鹽溶液∶CH3OH＝90∶10，色譜柱為Chromasil KR100-SC18 Column。
權利要求
1.一種制備脯組環(huán)二肽的新方法，包括以下步驟1)由脯氨酸甲脂和N-叔丁氧羰基-Nim-三苯甲基組氨酸出發(fā)，得到保護的脯組二肽甲酯；2)去氨基保護后直接環(huán)化得到脯組環(huán)二肽。
2.根據(jù)權利要求1所述方法，其特征在于所述保護的脯組二肽甲酯，是處理后的脯氨酸甲酯與保護的組氨酸在二環(huán)己基碳二亞胺的作用下生成的。
3.根據(jù)權利要求1所述方法，其特征在于所述去氨基保護后直接環(huán)化到脯組環(huán)二肽，是將保護的脯組二肽甲酯在氯化氫的乙酸乙酯液作用下，脫保護后直接高收率生成脯組環(huán)二肽。
4.根據(jù)權利要求1所述方法，其特征在于所述處理后的脯氨酸甲酯是指其氨基端沒有保護基團也沒有成鹽。
5.根據(jù)權利要求1-4中任意一項所述方法，其特征在于所述脯組環(huán)二肽為L-L型脯組環(huán)二肽、D-L型脯組環(huán)二肽、L-D型脯組環(huán)二肽和D-D型脯組環(huán)二肽。
6.根據(jù)權利要求5所述方法，其特征在于所述L-L型脯組環(huán)二肽的初始原料為L構型的脯氨酸甲脂和L構型的N-叔丁氧羰基-Nim-三苯甲基組氨酸。
7.根據(jù)權利要求5所述方法，其特征在于所述L-D型脯組環(huán)二肽的初始原料為L構型的脯氨酸甲脂和D構型的N-叔丁氧羰基-Nim-三苯甲基組氨酸。
8.根據(jù)權利要求5所述方法，其特征在于所述D-L型脯組環(huán)二肽的初始原料為D構型的脯氨酸甲脂和L構型的N-叔丁氧羰基-Nim-三苯甲基組氨酸。
9.根據(jù)權利要求5所述方法，其特征在于所述D-D型脯組環(huán)二肽的初始原料為D構型的脯氨酸甲脂和D構型的N-叔丁氧羰基-Nim-三苯甲基組氨酸。
10.根據(jù)權利要求1所述方法，其特征在于反應在二氯甲烷中進行的。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備脯組環(huán)二肽的新方法，本發(fā)明的技術方案包括以下步驟1)由脯氨酸甲脂和N－叔丁氧羰基－N
文檔編號C07K5/12GK1951954SQ200510109439
公開日2007年4月25日 申請日期2005年10月20日 優(yōu)先權日2005年10月20日
發(fā)明者馬亞平, 白威, 鐘飛, 崔學云 申請人:海南和信堂藥業(yè)有限公司