專利名稱：1,3－二苯基丙－2－烯－1－酮衍生化合物、其制備方法以及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及取代的1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮衍生物、包括該衍生物的藥物和/或化妝品組合物、以及其在治療和/或化妝品中的應(yīng)用，尤其在人類和動物健康領(lǐng)域的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及制備所述衍生物的方法。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的化合物代表了用于改善與脂類和/或葡萄糖代謝的失調(diào)相關(guān)的各種病征(高血脂癥、糖尿病、肥胖癥等)的一種有利治療工具，尤其可用于預(yù)防或治療各種心血管疾病(特別是冠心病、腦缺血以及各種外圍動脈疾病)、各種血脂障礙(dyslipidemias)、與X綜合征相關(guān)的各種病征、糖尿病、肥胖癥、高血壓、各種炎性疾病、各種皮膚病(銀屑病、特應(yīng)性皮炎、痤瘡等)、哮喘、與氧化性應(yīng)激有關(guān)的各種障礙、一般性老化(例如皮膚老化)的效應(yīng)，尤其用于化妝品領(lǐng)域(出現(xiàn)皺紋等)。根據(jù)本發(fā)明的化合物能夠在神經(jīng)保護(hù)方面施加預(yù)防性效能，并且還能夠在腦缺血事件的急性期中提供活性神經(jīng)保護(hù)，這些腦缺血事件是心血管疾病的主要并發(fā)癥之一。
通過同時作用于幾個心血管危險因子，本發(fā)明化合物能夠造成整體的心血管危險的降低。
根據(jù)國際動脈粥樣硬化協(xié)會(the International AtherosclerosisSociety)(Harmonized Clinical Guidelines on Prevention ofAtherosclerotic Vascular Disease，2003)，冠心病、腦缺血和外周動脈疾病是最常見的心血管疾病。
心血管疾病是當(dāng)前在多數(shù)工業(yè)化國家和部分發(fā)展中國家中成人死亡的首要原因之一。在心血管疾病中，腦血管疾病是成人中第三位的首要死亡原因和導(dǎo)致殘疾的首要原因。在世界范圍迫切需要有效地預(yù)防和/或治療這些疾病的對策。
各種血脂障礙(高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥)、糖尿病以及高血壓是已清楚確定的各心血管危險因子(IAS，2003)中的一部分。看來不充分地保護(hù)脂蛋白免于氧化也是一個被確定的危險因子。
流行病學(xué)研究已經(jīng)揭示了這些不同因子之間的協(xié)同效應(yīng)。幾個因子的同時存在導(dǎo)致心血管危險的顯著增大。因此，談?wù)撔难芗膊〉恼w性危險是適當(dāng)?shù)摹?br> 所以，現(xiàn)在真正的需要的產(chǎn)品是能夠同時對這些不同危險因子起作用并由此降低心血管疾病的危險，但也能夠以獨(dú)立的方式治療每一種失調(diào)以及其后果(各種血脂障礙、糖尿病、高血壓、腦缺血、與X綜合征相關(guān)的病癥、肥胖癥等)。
諸位發(fā)明人已經(jīng)以令人驚奇的方式表明了根據(jù)本發(fā)明的化合物是PPAR(過氧化物酶體增殖物激活受體)激活劑，因此它們代表了一種有利的治療工具。
確實(shí)，眾所周知PPAR與脂質(zhì)和葡萄糖代謝有關(guān)。PPAR激活劑，例如貝特類(fibrates)，通過PPARα的激活而調(diào)節(jié)血清膽固醇和甘油三酯的濃度(Hourton，Delerive et al.2001)。Fibrate治療導(dǎo)致肝臟中的脂肪酸氧化增加。這些化合物還降低甘油三酯的合成和表達(dá)的水平(Staels and Auwerx 1998)。PPARα激活劑還可糾正高血糖和胰島素水平。貝特類還通過獨(dú)立于食物攝入和萊普亭基因表達(dá)的一種機(jī)制減少脂肪組織的總量(Guerre-Millo，Gervois et al.2000)。
在2型糖尿病中已經(jīng)廣泛研究了PPARγ促效藥的治療益處(Spiegelman 1998)。已經(jīng)表明PPARγ促效藥可恢復(fù)靶組織中的胰島素敏感性，并且在動物模型和人類2型糖尿病二者中均降低血漿葡萄糖、脂質(zhì)以及胰島素水平(Ram 2003)。
借助配體的PPAR激活還在調(diào)節(jié)參與處理類似炎癥、血管生成、細(xì)胞增殖和分化、細(xì)胞凋亡的基因的表達(dá)中，以及調(diào)節(jié)iNOS、MMP酶(MMPase)以及TIMP的活性中起作用。在角質(zhì)形成細(xì)胞中PPARα的激活導(dǎo)致阻止其增殖并促進(jìn)涉及細(xì)胞分化的基因表達(dá)(Komuves，Hanley et al.2000)。
同樣已經(jīng)表明，PPAR激活干擾了樹突細(xì)胞的分化、成熟、遷移以及免疫原性，這些樹突細(xì)胞是最有效的抗原呈遞細(xì)胞(Gosset et al.2001；Nencioni et al.2002；Angeli et al.2003)。
PPAR具有抗炎性能，因?yàn)樗鼈冊谏婕捌渌T如NF-κB的轉(zhuǎn)錄因子或轉(zhuǎn)錄激活劑(STAT)以及AP-1的轉(zhuǎn)錄機(jī)制中表現(xiàn)出負(fù)干擾(Desvergne and Wahli 1999)。所述抗炎和抗增殖性能使PPAR成為有意義的治療靶標(biāo)，用于治療各種疾病，如血管堵塞疾病(動脈粥樣硬化癥等)、腦缺血、高血壓、與新血管形成有關(guān)的疾病(糖尿病性視網(wǎng)膜病等)、炎性疾病(鮑恩病、銀屑病等)、哮喘以及腫瘤性疾病(癌發(fā)生等)。
另外，根據(jù)本發(fā)明的化合物具有作為抗氧化劑的優(yōu)點(diǎn)。
事實(shí)上，自由基在很大的一系列病征中起作用，這樣的病征包括心血管疾病(動脈粥樣硬化癥等)、腦缺血、遺傳和代謝性障礙(糖尿病等)、以及傳染病和變性疾病(阿爾茨海默病、帕金森病、普利朊病(Prion)等)、眼科障礙、老化、變態(tài)反應(yīng)、癌癥引發(fā)和促進(jìn)(Mates，Perez-Gomez et al.1999)。
在常規(guī)細(xì)胞起作用的過程中產(chǎn)生活性氧物種(ROS)。ROS包括羥基自由基(OH)、超氧陰離子(O2-)、過氧化氫(H2O2)以及一氧化氮(NO)。所述活性氧物種極不穩(wěn)定，并且由于其高化學(xué)反應(yīng)活性，它們通過誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化作用、某些酶的氧化作用以及導(dǎo)致自身降解的非常廣泛的蛋白質(zhì)氧化作用而對細(xì)胞的生物功能構(gòu)成危害。
ROS是通過包括酶組分(超氧化物歧化酶、過氧化氫酶以及谷胱甘肽過氧化物酶)和非酶組分(主要是類胡蘿卜素、維生素C以及維生素E)的一個抗氧化劑體系來進(jìn)行處理(Gilgun-Sherki，Melamed et al.2001)。
此外，許多體內(nèi)和體外的研究描述了氧化的LDL(低密度脂蛋白)可能參與動脈粥樣硬化。緩慢發(fā)展的動脈粥樣硬化斑塊具有一個由纖維狀帽包圍的富膽固醇核。越來越多的人認(rèn)為斑塊破損是由纖維狀帽區(qū)中的慢性炎性變化引起的。象細(xì)胞因子的炎性介質(zhì)影響該纖維狀帽內(nèi)的幾個生物過程，從而降低其對破損的抵抗力。
動脈粥樣斑塊中的炎性細(xì)胞因子，包括白細(xì)胞介素1、腫瘤壞死因子(TNF-α和稱為CD-40配體的TNFα的表面同源物(homolog))，導(dǎo)致通過巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生能減弱細(xì)胞外基質(zhì)的酶。該纖維狀帽的破損可由閉塞性血栓所引起。
根據(jù)它們的藥理學(xué)性能，尤其是抗炎性能，本發(fā)明的化合物還是用于治療和/或預(yù)防腦缺血的有利治療工具。
腦缺血中的初始事件發(fā)生在最初的幾小時內(nèi)，并且包括大量釋放谷氨酸鹽(酯)，這就導(dǎo)致神經(jīng)元去極化和細(xì)胞水腫。鈣流入細(xì)胞引起線粒體損傷，這導(dǎo)致自由基釋放和促進(jìn)神經(jīng)元膜降解的酶的誘導(dǎo)。鈣流入和自由基產(chǎn)生繼而激活某些轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB。所述激活作用誘導(dǎo)炎性過程如內(nèi)皮粘連蛋白的誘導(dǎo)、局部缺血病灶的多核嗜中性粒細(xì)胞浸潤、小膠質(zhì)細(xì)胞激活、象一氧化氮(NO)合成酶II型或環(huán)加氧酶II型的各種酶的誘導(dǎo)。這些炎性過程導(dǎo)致對細(xì)胞有毒的NO或前列腺素類化合物的釋放。這些過程一起導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象引起不可逆的損傷(Dirnagl，ladecola et al.1999)。
預(yù)防性神經(jīng)保護(hù)的概念是基于表明局部缺血耐受性的動物模型中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。已經(jīng)確定了腦缺血耐受性的不同機(jī)制細(xì)胞因子、發(fā)炎途徑、自由基、NO、依賴ATP的鉀通道、腺嘌呤核苷。本發(fā)明的化合物因此具有起神經(jīng)保護(hù)作用的優(yōu)點(diǎn)。
最后，根據(jù)本發(fā)明的化合物對炎性病的治療，尤其哮喘的治療特別有益。事實(shí)上，變應(yīng)性紊亂，尤其是哮喘的發(fā)病率在工業(yè)化國家持續(xù)上升并且成為主要公眾健康的焦點(diǎn)。不考慮病因機(jī)制，變應(yīng)性紊亂的共同特性是由抗原呈遞樹突細(xì)胞引發(fā)的炎性反應(yīng)。諸位發(fā)明人已經(jīng)證實(shí)本發(fā)明的化合物干擾所述樹突細(xì)胞的分化和成熟，并且抑制其遷移到二級淋巴器官。同樣，已經(jīng)證實(shí)本發(fā)明的化合物是幼稚 CD4+T細(xì)胞增殖的較弱的誘導(dǎo)物。
因此，根據(jù)本發(fā)明的化合物干擾免疫應(yīng)答的啟動，從而成為用于治療哮喘的有利治療工具。
本發(fā)明涉及新穎的取代的1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮衍生物、包括該衍生物的藥物和/或化妝品組合物、以及其治療和/或化妝品用途，尤其是在人和動物健康領(lǐng)域中的用途。本發(fā)明還涉及制備所述衍生物的方法。
諸位發(fā)明人以一種令人驚奇的方式已經(jīng)證明，根據(jù)本發(fā)明的化合物呈現(xiàn)出PPAR促效藥活性和抗氧化性能。因此，本發(fā)明的化合物可干擾至少兩個尤其在發(fā)炎過程中激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑細(xì)胞因子產(chǎn)生和自由基產(chǎn)生。通過協(xié)同地作用，本發(fā)明的化合物提供一種有利的治療和/或美容手段，其用于治療各種心血管疾病、與X綜合征有關(guān)的各病征、各種血脂障礙、糖尿病、肥胖癥、高血壓、炎性疾病、皮膚病(銀屑病、特應(yīng)性皮炎、痤瘡等)、哮喘、與氧化性應(yīng)激有關(guān)的病癥、一般性老化(例如皮膚老化)，尤其在美容領(lǐng)域(出現(xiàn)皺紋等)。
此外，根據(jù)本發(fā)明的化合物能夠在神經(jīng)保護(hù)方面施加預(yù)防性作用，并且還能夠在腦缺血的急性期提供活性神經(jīng)保護(hù)。
最后，根據(jù)本發(fā)明的化合物代表了用于預(yù)防和/或治療幾種心血管危險因子的有利治療工具，這些危險因子與脂質(zhì)和/或葡萄糖代謝失調(diào)(高血脂癥、糖尿病、肥胖癥等)有關(guān)。它們能夠降低整體性危險。
因此，本發(fā)明涉及提供具有改進(jìn)的化學(xué)式和滿意的治療效能的新穎的取代的1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮衍生物。
這些和其他目的可通過本發(fā)明來實(shí)現(xiàn)，尤其是本發(fā)明具有作為目標(biāo)的取代的1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮衍生物，其用以下通式(I)表示
其中X7表示一對應(yīng)于下式的基團(tuán)G7-R7，其中G7是一氧或硫原子而R7是一如下文所定義的烷基鏈，其用一來自組1的取代基或一來自組2的取代基取代，可選地R7也可被一芳基基團(tuán)取代，來自組1的取代基選自由具有化學(xué)式-COORa的羧基基團(tuán)、具有化學(xué)式-CONRbRc的氨基甲酰基基團(tuán)或四唑基基團(tuán)構(gòu)成的組，來自組2的取代基選自由磺酸基(-SO3H)和具有化學(xué)式-SO2NRbRc的磺酰胺基團(tuán)構(gòu)成的組，其中相同或不同的Ra、Rb以及Rc表示一氫原子或者一取代或未取代的烷基基團(tuán)，相同或不同的Xi基團(tuán)(i＝1、2、3、4或5)表示一鹵原子或硫代亞硝基基團(tuán)或分別對應(yīng)于式(Gi-Ri)n-G’i-R’i，其中■n可以具有為0或1的值；■相同或不同的Gi和G’i表示一單鍵、氧原子和硫原子；■相同或不同的Ri和R’i表示一烷基、鏈烯基、芳基基團(tuán)或雜環(huán)；■R’i也可以表示一氫原子；相同或不同的Xi基團(tuán)(i＝6或i＝8)表示一鹵原子、或?qū)?yīng)于式G’i-R’i，G’i和R’i如上文所定義，X6和X8不同時表示一氫原子，Xi(i＝1、2、3、4、5、6或8)不能表示直接鍵接到1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮的芳環(huán)上的一個雜環(huán)；
除了用式(I)表示的化合物，其中同時地■基團(tuán)X1、X2、X3、X41或X5中的一個是一羥基基團(tuán)；■G7是一氧原子；■并且基團(tuán)X6或X8中的一個是一氫原子或鹵素或羥基或烷氧基基團(tuán)，除了用式(I)表示的化合物，其中同時地■X1、X2和X4基團(tuán)同時表示一氫原子；■X6和X8基團(tuán)表示G’iR’i；■X5基團(tuán)表示一硫代亞硝基基團(tuán)或G’iR’i基團(tuán)；■X3基團(tuán)表示一鹵素或G’iR’i基團(tuán)；其中，G’i表示一氧原子、硫原子或單鍵而R’i表示一飽和的、直鏈、支鏈或環(huán)狀的鹵化或未被鹵化的烷基基團(tuán)，或者一氫原子。
根據(jù)一特定的實(shí)施例，用化學(xué)式(I)表示的化合物如上文所定義，并且不包括用化學(xué)式(I)表示的這樣的化合物，其中同時地■X1、X2和X4基團(tuán)同時表示一氫原子，■并且基團(tuán)X3或X5中的一個表示一氫原子或鹵素或烷基基團(tuán)或烷氧基基團(tuán)或烷硫基基團(tuán)或羥基基團(tuán)或硫羥基團(tuán)或硫代亞硝基基團(tuán)。
在一種優(yōu)選方式中，本發(fā)明的一特定目的涉及用通式(Ia)表示的化合物，而通式(Ia)所對應(yīng)的化合物具有通式(I)，其中X1和X5是氫原子。
在一種優(yōu)選方式中，本發(fā)明的一特定目的涉及用通式(Ib)表示的化合物，而通式(Ib)所對應(yīng)的化合物具有通式(I)，其中X2和X4是烷基基團(tuán)，更有利地其中X1和X5是氫原子。
本發(fā)明的一特定目的涉及用通式(Ic)表示的化合物，而通式(Ic)所對應(yīng)的化合物具有通式(I)，其中X1、X3和X4是烷基基團(tuán)。
本發(fā)明的另一特定目的涉及用通式(Id)表示的化合物，而通式(Id)所對應(yīng)的化合物具有通式(I)，其中X1、X2、X4和X5是氫原子。
本發(fā)明的另一特定目的涉及用通式(II)表示的化合物，而通式(II)所對應(yīng)的化合物具有通式(1)，其中X6和X8是烷基基團(tuán)。
甚至更優(yōu)選地，用通式(II)表示的化合物是那些其中X1和X5是氫原子且有利地其中X2和X4是烷基基團(tuán)的化合物。
本發(fā)明的另一特定目的涉及用通式(II)表示的化合物，其中X1、X3、X4、X6以及X8是烷基基團(tuán)。
本發(fā)明的另一特定目的涉及用通式(II)表示的化合物，其中X6和X8是烷基基團(tuán)并且X1、X2、X4和X5是氫原子。
根據(jù)本發(fā)明的一特定方面，用化學(xué)式(I)表示的化合物是如上定義的那些化合物，其中X3表示一鹵原子或硫代亞硝基基團(tuán)、或?qū)?yīng)于如前面定義的化學(xué)式(Gi-Ri)n-G’i-R’i(其中，G’i表示一氧原子或硫原子)。
本發(fā)明還包含本發(fā)明的化合物的光學(xué)和幾何異構(gòu)體、外消旋體、互變異構(gòu)體、鹽、水合物以及混合物。
本發(fā)明還包含本發(fā)明的化合物的前藥，其在給予受試者后轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的化合物和/或轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的化合物的代謝物，其表現(xiàn)出與本發(fā)明的化合物類似的治療活性。
在一優(yōu)選方式中，基團(tuán)Gi或G’i中的至少一個表示一硫原子，其中i采用值1、2、3、4、5、6、7或8中的一個。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的如上所述的衍生物可采用順式或反式構(gòu)象。
具體實(shí)施例方式
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“烷基”是指一直鏈、支鏈或環(huán)狀的鹵化或未被鹵化的、具有更具體為1～24(優(yōu)選為1～10)個碳原子的飽和烴官能團(tuán)，如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、新戊基、正己基或環(huán)己基。含有1個或2個碳原子或含有2～7個碳原子的基團(tuán)是特別優(yōu)選的。尤其特別優(yōu)選的是甲基和乙基基團(tuán)。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“烯基”是指一直鏈、支鏈或環(huán)狀的鹵化或未被鹵化的、具有更具體為1～24(優(yōu)選為1～10)個碳原子的不飽和烴官能團(tuán)。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“芳基”是指一取代或未取代的(尤其用至少一個鹵原子、烷基、羥基、硫羥基、烷氧基、烷硫基、肟或硫代亞硝基基團(tuán)取代的)芳烴基團(tuán)。苯基基團(tuán)是尤其特別優(yōu)選的。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“雜環(huán)”是指一飽和或不飽和的、或包含一個或多個諸如氮、硫和氧的雜原子的芳族的環(huán)狀基團(tuán)。它們可被取代，有利地被至少一個如上文所定義的烷基基團(tuán)所取代。雜環(huán)如二硫雜環(huán)戊環(huán)、吡啶、呋喃、噻吩或嗎啉是特別優(yōu)選的。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，雜環(huán)哌啶和哌嗪有利地用至少一個如上所定義的烷基基團(tuán)所取代。
術(shù)語硫代亞硝基是指通過一硫原子鍵接于芳環(huán)的一個亞硝基基團(tuán)。
術(shù)語烷氧基是指通過一氧原子鍵接于環(huán)的一個烷基鏈。烷基鏈在前面已經(jīng)定義。
術(shù)語烷硫基指的是通過一硫原子(硫醚鍵)鍵接于芳環(huán)的一個烷基鏈。烷基鏈在前面已經(jīng)定義。
術(shù)語鹵素表示一氯、溴、碘或氟原子。
根據(jù)本發(fā)明的一具體實(shí)施例，以下指出優(yōu)選的化合物以及它們對應(yīng)的化學(xué)式1-(4-((R，S)-5-[1，2]-二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-巰基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-環(huán)己基乙硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(2，5-二羥基-3，4，6-三甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(2，5-二甲氧基-3，4，6-三甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(2，5-二羥基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-苯基乙氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-(嗎啉-4-基乙氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-(戊硫基乙氧基)苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-4-(戊硫基乙氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二溴苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二溴苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-環(huán)己基乙氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-環(huán)己基乙氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-丙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-丙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-己氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-己氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-環(huán)己基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-環(huán)己基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-環(huán)己硫基乙氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-環(huán)己硫基乙氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(2，4，5-三甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(2，4，5-三甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-環(huán)己硫基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-環(huán)己硫基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3-氟苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3-氟苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(2，3，4，5，6-五甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(2，3，4，5，6-五甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-苯氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-苯氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲氧基-3-氟苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲氧基-3-氟苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-己硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-己硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(3，5-二甲基-4-(嗎啉-4-基乙氧基)苯基)-3-(4-乙氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮鹽酸鹽 1-(3，5-二甲基-4-(嗎啉-4-基乙氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-溴苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮
1-(4-溴苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲氧基-3-三氟甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 1-(4-甲氧基-3-三氟甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 本發(fā)明還具有作為目的的一種用于制備用化學(xué)式(I)表示的化合物的方法。所述制備方法具有許多優(yōu)點(diǎn)。其在工業(yè)規(guī)模上簡單可行并提供用化學(xué)式(I)表示的化合物的高產(chǎn)率。
根據(jù)本發(fā)明的方法包括在堿性介質(zhì)或酸性介質(zhì)中將至少一種用化學(xué)式(A)表示的化合物與至少一種用化學(xué)式(B)表示的化合物相接觸，化學(xué)式(A)和(B)為 在化學(xué)式中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7以及X8如上文所定義，X7也可表示一羥基或硫羥基團(tuán)。用于在酸性或堿性介質(zhì)中進(jìn)行所述反應(yīng)的條件在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識范圍內(nèi)，并且可能有較寬的變化。
有利地，所述兩種化合物以化學(xué)計(jì)量比進(jìn)行接觸。優(yōu)選在室溫下(在約18℃至25℃之間)及大氣壓力下進(jìn)行接觸。
在堿性介質(zhì)中，該反應(yīng)優(yōu)選在強(qiáng)堿(如，堿金屬氫氧化物，象氫氧化鈉；或堿金屬醇化物，象乙醇鈉)存在下進(jìn)行。
在酸性介質(zhì)中，該反應(yīng)優(yōu)選在強(qiáng)酸(如鹽酸)存在下進(jìn)行。
該反應(yīng)方案可描述如下
在堿性介質(zhì)中的合成可以由以下方式進(jìn)行將1摩爾當(dāng)量的酮(化合物(A))和1摩爾當(dāng)量的醛(化合物(B))溶解在20摩爾當(dāng)量的氫氧化鈉的水醇(hydroalcoholic)溶液中。將該混合物在室溫下(在18℃至25℃之間)攪拌約18小時。然后尤其是用鹽酸使該介質(zhì)酸化(尤其使pH為約2)。所預(yù)期的取代的1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮可以通過沉淀或在反應(yīng)介質(zhì)蒸發(fā)以后的固/液提取而獲得。然后可通過硅膠層析法或通過結(jié)晶法進(jìn)行純化。
在酸性介質(zhì)中的合成可以以下面的方式進(jìn)行將1摩爾當(dāng)量的酮(化合物(A))和1摩爾當(dāng)量的醛(化合物(B))溶解在用氣態(tài)氫氯酸飽和的乙醇溶液中。將該混合物在室溫下攪拌約6小時，并除去溶劑，尤其通過真空蒸發(fā)除去溶劑。將取代的1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮進(jìn)行純化，尤其通過在硅膠上的層析法。
用于制備用化學(xué)式(I)表示的化合物的方法允許制備在下文中被稱為中間體的化合物。作為目的，本發(fā)明還具有某些起始材料和由本發(fā)明所提供的方式而獲得的中間體化合物。
所述中間體化合物更具體地選自由下述化合物構(gòu)成的組1-(4-(戊硫基乙氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二溴苯基)丙-2-烯-1-酮；
1-(4-(環(huán)己基乙氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(環(huán)己基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(環(huán)己硫基乙氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，4，5-三甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(環(huán)己硫基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羥基-3-氟苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，3，4，5，6-五甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-苯氧基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-氟苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-己硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-4-溴苯基)-3-(4-羥基-3，5-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮；
1-(4-甲氧基-3-三氟甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮。
作為目的，本發(fā)明還具有用如上所述的通式(I)表示的作為藥物的化合物。
本發(fā)明的另一目的涉及藥物和/或化妝品組合物，其包括在一種藥物可接受載體中的至少一種用如上定義的通式(I)表示的化合物，可能與另一種治療和/或化妝品活性劑結(jié)合。
在一有利的方式中，它是一種藥物和/或化妝品組合物，用于治療各種心血管疾病、各種血脂障礙、與X綜合征有關(guān)的各種病征、糖尿病、肥胖癥、高血壓、各種炎性疾病、各種皮膚病(銀屑病、特應(yīng)性皮炎、痤瘡等)、哮喘、與氧化性應(yīng)激有關(guān)的各種障礙、一般性老化，例如尤其在化妝領(lǐng)域的皮膚老化(出現(xiàn)皺紋等)。
而且，根據(jù)本發(fā)明的藥物和/或化妝品組合物能夠在神經(jīng)保護(hù)方面施加預(yù)防性作用，并且還能夠在腦缺血的急性期中提供活性神經(jīng)保護(hù)。有利地，它是一種藥物和/或化妝品組合物，其通過確保減少整體危險而用于預(yù)防和/或治療與脂質(zhì)和/或葡萄糖代謝失調(diào)有關(guān)的幾種心血管危險因子(高脂血癥、糖尿病、肥胖癥等)的出現(xiàn)。
本發(fā)明還涉及用化學(xué)式(I)表示的至少一種化合物在制備用于實(shí)施一種人或動物體的治療或預(yù)防方法的藥物和/或化妝品組合物中的用途。
本發(fā)明還涉及一種用于治療與脂質(zhì)和/或葡萄糖代謝有關(guān)的病征的方法，包括將有效劑量的如上文定義的化合物或藥物組合物給予一受試者，尤其是人。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物有利地包括一種或多種藥物可接受的賦形劑或載體。實(shí)例包括鹽溶液、生理溶液、等滲溶液、緩沖溶液等等，其適于藥物用途并且對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。該組合物可包含一種或多種藥劑或載體，其選自由分散劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、防腐劑等構(gòu)成的組。在配方中(液體和/或可注射的和/或固體)可使用的藥劑或載體尤其是甲基纖維素、羥甲基纖維素、羧甲基纖維素、聚山梨醇酯-80、甘露醇、明膠、乳糖、植物油、阿拉伯樹膠等等。該組合物可配制成用于注射的混懸劑、凝膠劑、油劑、片劑、栓劑、散劑、膠囊劑、軟膠囊劑等等，可能通過藥物形式或裝置的方式確保延長的和/或延遲的釋放。對于這類配方，有利地利用諸如纖維素、碳酸鹽(酯)或淀粉的配劑。
根據(jù)本發(fā)明的化合物或組合物可以由不同途徑和不同形式給藥。例如，它們可通過口服或全身途徑(如，例如通過靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、經(jīng)皮、動脈內(nèi)途徑等)給藥。為了注射，該化合物通常制成液體混懸劑，其可通過例如注射器或輸注進(jìn)行注射。應(yīng)該理解，注射速度和/或注射劑量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)患者、病征、給藥方法等而調(diào)整。通常地，將該化合物給藥的劑量范圍為每次給藥在1μg到2g，優(yōu)選每次給藥0.1mg到1g。根據(jù)病情而定，給藥可以每天一次或每天重復(fù)幾次。此外，根據(jù)本發(fā)明的組合物可另外包括其他的活性成分或藥劑。


圖1a、1b、1c圖示說明了本發(fā)明化合物2(Cpd 2)在10-4M的濃度下測試的抗氧化特性。
圖1a示出了共軛二烯形成隨時間的動力學(xué)。當(dāng)LDL單獨(dú)用銅孵育(incubated)時，遲滯期為120分鐘，與之相比當(dāng)培養(yǎng)基還含有化合物2時為314分鐘。
圖1b圖示了二烯形成的速率，其在銅單獨(dú)存在下為1.8nmol/min/mg的LDL，而當(dāng)培養(yǎng)基中存在化合物2時僅為0.1nmol/min/mg的LDL。
圖1c表示隨時間形成的共軛二烯的最大量。銅單獨(dú)誘導(dǎo)形成372nmol/mg的共軛二烯，相比之下當(dāng)培養(yǎng)基還含有化合物2時為35nmol/mg，其相當(dāng)于形成的共軛二烯的量降低90％。
圖2a、2b、2c圖示說明了本發(fā)明化合物4(Cpd 4)、化合物6(Cpd 6)和化合物8(Cpd 8)在10-4M的濃度下測試的抗氧化特性。
圖2a示出了共軛二烯形成的動力學(xué)。當(dāng)LDL單獨(dú)用銅孵育時，遲滯期為132分鐘，相比之下在化合物4、6以及8存在下分別為401、205和以及169分鐘。
圖2b圖示了二烯形成的速率，其在銅單獨(dú)存在下為2.2nmol/min/mg的LDL。化合物4、6以及8的存在將二烯氧化反應(yīng)的速率降低到在化合物4存在下的0.2nmol/min/mg以及在化合物6或8存在下的1.7nmol/min/mg。
在銅單獨(dú)存在下形成的二烯總量為511nmol/mg的LDL(圖2c)，對應(yīng)于化合物4、6以及8存在下分別為138、443以及474nmol/mg。
圖3a圖示說明了本發(fā)明化合物11(Cpd 11)的抗氧化特性。
對于包括10-6M至3.5×10-5M之間的不同濃度展示了化合物11的抗氧化特性。在沒有化合物11存在下，遲滯期為87.2分鐘。從10-6M的濃度開始，遲滯期相對于對照增加到101.5分鐘。遲滯期以劑量相關(guān)的方式增加，在3.3×10-5M的濃度時達(dá)到最大的210分鐘。
圖4a、4b、4c圖示說明了本發(fā)明化合物19(Cpd 19)和化合物23(Cpd 23)在10-4M的濃度下測試的抗氧化特性。
圖4a示出了共軛二烯形成的動力學(xué)。在銅單獨(dú)存在下的遲滯期為61分鐘，相比之下在化合物19和23存在下分別為92.5和96.4分鐘?；衔?9和23的抗氧化特性還表現(xiàn)為二烯形成速率的降低以及所形成二烯總量的降低。
在沒有化合物存在下，二烯形成速率為1.9nmol/min/mg的LDL(圖4b)，相比之下化合物19和23存在下為1.6nmol/min/mg和1.3nmol/min/mg的LDL。在沒有化合物存在時，形成的二烯總量為370.9nmol/mg的LDL(圖4c)，對應(yīng)于在化合物19和23存在下的346.6和340.3nmol/mg的LDL。
圖5a、5b、5c圖示說明了本發(fā)明化合物25(Cpd 25)、化合物27(Cpd 27)、化合物29(Cpd 29)以及化合物31(Cpd 31)在10-4M的濃度下測試的抗氧化特性。
圖5a示出了在不同化合物存在下的LDL氧化的動力學(xué)，其在不同的抗氧化化合物存在下增加。在化合物29存在下為54.9分鐘，在化合物25存在下增加到87.6分鐘，在化合物31存在下增加到124.5分鐘，并且在化合物27存在下達(dá)到170.8分鐘。
所述化合物的抗氧化特性還通過LDL氧化速率(圖5b)以及通過形成的二烯總量(圖5c)來說明。LDL氧化速率在沒有化合物存在下為2nmol/min/mg的LDL(圖5b)。這些化合物誘導(dǎo)氧化速率降低，在化合物25存在下降低到1.6nmol/min/mg，而在化合物31存在下降低到1.4nmol/min/mg。在化合物27存在下氧化速率最小并達(dá)到0.8nmol/min/mg。
形成的二烯總量在沒有化合物存在下為386nmol/mg的LDL(圖5c)，而在化合物27存在下為374nmol/mg、在化合物25存在下為365nmol/mg以及在化合物31存在下為352nmol/mg。
圖6a、6b、6c圖示說明了本發(fā)明化合物37(Cpd 37)在10-4M的濃度下測試的抗氧化特性。
圖6a示出了LDL氧化的動力學(xué)。培養(yǎng)基中化合物的存在誘導(dǎo)了遲滯期的增加，在化合物37存在下達(dá)到106分鐘，而在沒有所述化合物存在下僅為56分鐘。
LDL氧化速率的降低和所形成二烯量的降低也說明了試驗(yàn)化合物的抗氧化特性。在沒有化合物存在時，氧化速率為2nmol/min/mg的LDL(圖6b)，相比之下當(dāng)存在化合物時為1.8nmol/min/mg的LDL。在沒有化合物存在時，形成的二烯總量為360.0nmol/mg的LDL，而在化合物37存在下僅為326.9nmol/mg的LDL(圖6c)。
圖7a、7b、7c圖示說明了本發(fā)明化合物13(Cpd 13)、化合物33(Cpd 33)、化合物41(Cpd 41)、化合物47(Cpd 47)在10-4M的濃度下測試的抗氧化特性。
圖7a示出了LDL氧化的動力學(xué)。在沒有抗氧化化合物存在時，遲滯期為67.3分鐘，在不同的化合物存在下該值增加，在化合物41存在下為100分鐘、對于化合物47為126.5分鐘、對于化合物33為148分鐘以及對于化合物13為219分鐘。
培養(yǎng)基中這些化合物的存在也對LDL氧化速率和形成的二烯總量產(chǎn)生影響。
化合物13和33誘導(dǎo)二烯氧化速率的顯著降低(圖7b)，從在沒有化合物存在時2.5nmol/min/mg的LDL分別降低到在化合物13和33存在下的1.5和1.4nmol/min/mg的LDL。
只有化合物33和41誘導(dǎo)了二烯形成總量的降低(圖7c)，在沒有化合物存在時為432.5nmol/mg的LDL，相比之下化合物33和41分別為399和403nmol/mg的LDL。
圖8a、8b、8c圖示說明了本發(fā)明化合物17(Cpd 17)、化合物21(Cpd 21)、化合物39(Cpd 39)以及化合物43(Cpd 43)在10-4M的濃度下測試的抗氧化特性。
圖8a示出了LDL氧化的動力學(xué)。在沒有化合物的情況下，遲滯期為67.3分鐘，對于化合物43、17以及39分別增加到97、148以及133分鐘。
圖8b表示LDL的氧化速率，在沒有化合物的情況下為2.5nmol/min/mg，相比之下在化合物17、39以及43存在下分別為1.8、1.2以及2.2nmol/min/mg。
圖8c示出了在氧化期間形成的二烯總量。只有化合物39誘導(dǎo)了二烯形成總量的顯著降低，在沒有化合物的情況下為432.3nmol/mg而在化合物39存在下為371.2nmol/mg。
共軛二烯形成的遲滯期的延長、二烯形成速率的降低以及二烯形成總量的減少是確定本發(fā)明化合物的抗氧化特性的三個參數(shù)。
圖9a和9b示出了利用RK13細(xì)胞中的PPARα/Gal4和PPARγ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活(transactivation)體系對本發(fā)明化合物的PPARα和PPARγ促效藥性能的評價。
用濃度在0.01至10μM之間的化合物2對RK13細(xì)胞孵育24小時。在不同的處理之后，將結(jié)果表示為誘導(dǎo)因數(shù)(有化合物的情況下獲得的發(fā)光信號與沒有化合物的情況下觀測到的發(fā)光信號的比率)。誘導(dǎo)因數(shù)越高，PPARα或PPARγ促效藥活性越強(qiáng)。
圖9a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物2的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

化合物2的誘導(dǎo)因數(shù)在10μM濃度時為最大，其值達(dá)到18.49。
圖9b示出了在PPARγ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物2的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在PPARγ/Gal4體系中，誘導(dǎo)因數(shù)在1.31到31.00的范圍內(nèi)，并隨著培養(yǎng)基中化合物2濃度的增大而增加。
圖10a、10b、11a、11b、11c、12a、12b、13a、13b、14a、14b、14c、15a、15b、15c、16a、17a、18a、18b示出了在COS-7細(xì)胞中的PPARα/Gal4、PPARγ/Gal4以及PPARδ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系中本發(fā)明化合物的PPARα、PPARγ以及PPARδ促效藥性能的評價。
用不同濃度的本發(fā)明化合物孵育COS-7細(xì)胞24小時。在不同的處理之后，將結(jié)果表示為誘導(dǎo)因數(shù)(有化合物的情況下獲得的發(fā)光信號與沒有化合物的情況下觀測到的發(fā)光信號的比率)。
圖10a和10b示出了本發(fā)明化合物4(Cpd 4)、化合物6(Cpd 6)以及化合物8(Cpd 8)的誘導(dǎo)因數(shù)。
圖10a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物4(Cpd 4)、化合物6(Cpd 6)以及化合物8(Cpd 8)的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

化合物4的最大誘導(dǎo)因數(shù)為10μM濃度下的9.92，化合物6的最大誘導(dǎo)因數(shù)為7.01(10μM)以及化合物8的最大誘導(dǎo)因數(shù)為15.67(1μM)。
圖10b示出了在PPARγ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物4、化合物6以及化合物8的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在10μM濃度下化合物4具有最大誘導(dǎo)因數(shù)5.82。對于化合物6最大誘導(dǎo)因數(shù)為6.83(10μM)，而對于化合物8最大誘導(dǎo)因數(shù)為2.74(10μM)。
圖11a、11b以及11c圖示說明了本發(fā)明化合物13(Cpd 13)的誘導(dǎo)因數(shù)。
圖11a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物13的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在1μM濃度處觀測到最大誘導(dǎo)因數(shù)為17.05。
圖11b示出了在PPARγ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物13的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在1μM濃度處觀測到最大值為4.03。
圖11c示出了在PPARδ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物13的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在1μM濃度處觀測到最大值為28.75。
圖12a和12b圖示說明了本發(fā)明化合物23(Cpd 23)的誘導(dǎo)因數(shù)。
圖12a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物23的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在1μM濃度處觀測到最大值為8.35。
圖12b示出了在PPARγ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物23的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在1μM濃度處觀測到最大值為7.24。
圖13a和13b圖示說明了本發(fā)明化合物29(Cpd 29)的誘導(dǎo)因數(shù)。
圖13a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物29的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在3μM濃度處觀測到最大值為15.75。
圖13b示出了在PPARδ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物29的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在10μM濃度處觀測到最大值為87.56。
圖14a、14b以及14c示出了本發(fā)明化合物31(Cpd 31)的誘導(dǎo)因數(shù)。
圖14a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物31的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在10μM濃度處觀測到最大值為6.03。
圖14b示出了在PPARγ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物31的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在3μM濃度處觀測到最大值為7.79。
圖14c示出了在PPARδ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物31的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在10μM濃度處觀測到最大值為11.70。
圖15a、15b以及15c圖示說明了本發(fā)明化合物33(Cpd 33)的誘導(dǎo)因數(shù)。
圖15a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物33的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在0.3μM濃度處觀測到最大值為20.82。
圖15b示出了在PPARγ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物33的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在3μM濃度處觀測到最大值為7.99。
圖15c示出了在PPARδ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物33的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在3μM濃度處觀測到最大值為90.84。
圖16a圖示說明了本發(fā)明化合物35(Cpd 35)的誘導(dǎo)因數(shù)。
圖16a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下本發(fā)明化合物35的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在1μM濃度處觀測到最大值為24.33。
圖17a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下本發(fā)明化合物37(Cpd 37)的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在1μM濃度處觀測到最大值為19.77。
圖18a和18b示出了本發(fā)明化合物39(Cpd 39)的誘導(dǎo)因數(shù)。
圖18a示出了在PPARα/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物39的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在1μM濃度處觀測到最大值為10.42。
圖18b示出了在PPARγ/Gal4轉(zhuǎn)錄激活體系的情況下化合物39的誘導(dǎo)因數(shù)。這些誘導(dǎo)因數(shù)的值在下表中給出

在0.3μM濃度處觀測到最大值為4.86。
圖中示出的這些結(jié)果證實(shí)了所測試的本發(fā)明化合物表現(xiàn)出PPARα、PPARγ和/或PPARδ配體活性，并因此能夠轉(zhuǎn)錄激活這些核受體。
圖19a、19b、19c、19d、20a、20b、20c以及20d圖示說明了用化合物2(Cpd 2)、化合物13(Cpd 13)、化合物33(Cpd 33)以及化合物39(Cpd 39)處理對于Apo E2/E2轉(zhuǎn)基因小鼠中甘油三酯和膽固醇代謝的影響，這些Apo E2/E2轉(zhuǎn)基因小鼠通過管飼法用化合物以50mg/kg/天的劑量處理7天。
圖19a和19b圖示說明了由化合物2誘導(dǎo)的血漿甘油三酯和膽固醇的降低。
圖20a和20b圖示說明了由化合物13、33以及39誘導(dǎo)的血漿甘油三酯和膽固醇的降低。
圖19c和19d圖示說明了通過排阻色譜法評價的由用化合物2處理誘導(dǎo)的脂微粒(lipoparticle)中甘油三酯和膽固醇的分布。
圖20c和20d圖示說明了通過排阻色譜法評價的由用化合物13、33以及39處理誘導(dǎo)的脂微粒中甘油三酯和膽固醇的分布。
主要在大脂粒中觀測到了的甘油三酯和膽固醇的典型分布。在用不同的試驗(yàn)化合物處理之后，可見該類脂粒中甘油三酯和膽固醇的降低。
圖21圖示說明了本發(fā)明化合物對樹突細(xì)胞分化的干擾。
將化合物39(10-6M)在單核細(xì)胞分化的D0加入到樹突細(xì)胞中。在分化(在細(xì)胞因子GM-CSF和IL-4存在下)六天之后，利用流式細(xì)胞儀對樹突細(xì)胞進(jìn)行分析。
(---)帶有對照同種型的熒光色素偶聯(lián)的Ab；(黑色部分)FITC(熒光素異硫氰酸酯)-偶聯(lián)的抗-CD1a Ab或PE(藻紅蛋白)-偶聯(lián)的抗-CD86 Ab。
圖22圖示說明了本發(fā)明化合物對于LPS(脂多糖)誘導(dǎo)的樹突細(xì)胞成熟的干擾。
將樹突細(xì)胞用化合物31、13或39孵育4小時，然后用LPS刺激16小時。通過定量RT-PCR對CCR7和ELC轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行分析，并通過ELISA對細(xì)胞因子TNFα進(jìn)行分析。
圖23圖示說明了在增加量的樹突細(xì)胞存在下進(jìn)行的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)，這些樹突細(xì)胞用或未用化合物31處理過、并與幼稚CD4+T細(xì)胞一起孵育7天。T細(xì)胞增殖通過BrdU(溴脫氧尿苷)摻入(incorporation)來確定。
本發(fā)明的其他方面和優(yōu)點(diǎn)在下面的實(shí)施例中將變得顯而易見，給出的這些實(shí)施例的目的是用于說明而非作為限制。
實(shí)施例實(shí)施例1根據(jù)本發(fā)明的化合物的合成根據(jù)本發(fā)明的化合物根據(jù)以下概述的一般方法進(jìn)行制備。
本發(fā)明的一般合成方法的描述1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮的合成一般方法1在酸性介質(zhì)中1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮的合成
將酮(1當(dāng)量，1eq)和醛(1當(dāng)量，1eq)溶解在用氣態(tài)氫氯酸飽和的乙醇溶液中。反應(yīng)在室溫下攪拌6小時，然后通過真空蒸發(fā)除去溶劑。通過硅膠層析法或重結(jié)晶法使1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮純化。
一般方法2氫氧化鈉存在下1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮的合成將酮(1eq)和醛(1eq)溶解在氫氧化鈉(20當(dāng)量)的水醇溶液中。將該混合物在室溫下攪拌18小時。將介質(zhì)用鹽酸酸化到pH＝2。
在蒸發(fā)反應(yīng)介質(zhì)之后，通過沉淀或固/液提取而獲得1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮。將其通過硅膠層析法或重結(jié)晶法純化。
一般方法3乙醇鈉存在下取代的1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮的合成將鈉(1eq)溶解在無水乙醇中。加入酮(1eq)和醛(1eq)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時，然后加入2N氫氧化鈉(5eq)。將該混合物在100℃保持12小時。通過加入6N鹽酸水溶液將反應(yīng)介質(zhì)酸化。通過真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘留物通過硅膠層析法或重結(jié)晶法純化。
苯酚或苯硫酚的O-烷基化一般方法4將苯酚(1eq)或苯硫酚(1eq)溶解在乙腈和鹵化衍生物(1到10eq)中，并加入碳酸鉀(5eq)。將反應(yīng)介質(zhì)在回流下輕快地(briskly)攪拌約10小時。將鹽過濾除去，將溶劑和過量的反應(yīng)物通過真空蒸發(fā)除去，并將預(yù)期的產(chǎn)物通過硅膠層析法純化。
一般方法5將醇(1eq)、苯酚(1eq)以及三苯基膦溶解在二氯甲烷中。加入偶氮二羧酸二異丙酯(1eq)，然后在室溫下攪拌混合物12小時。用水洗滌反應(yīng)介質(zhì)，用硫酸鎂干燥然后真空蒸發(fā)。將蒸發(fā)殘余物通過硅膠層析法純化。
叔丁基酯的酸水解一般方法6將叔丁基酯(1eq)溶解在二氯甲烷中，加入三氟乙酸(10eq)，并將混合物在室溫下攪拌12小時。將所得產(chǎn)物通過硅膠層析法或重結(jié)晶純化。
用于合成本發(fā)明化合物的起始材料的合成起始材料14’-(溴乙氧基)苯乙酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由4’-羥基苯乙酮和二溴乙烷合成。其通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm2.55(s，3H)，3.66(t，2H，J＝6.50Hz)，4.35(t，2H，J＝6.50Hz)，6.94(d，2H，J＝7.23Hz)，7.94(d，2H，J＝7.23Hz)
起始材料24’-(戊硫基乙氧基)苯乙酮 在三乙胺(2eq)存在下，將起始材料1(1eq)和戊硫醇(1eq)溶解在甲醇中。將反應(yīng)介質(zhì)回流18小時，并通過真空蒸發(fā)除去溶劑。油狀物用乙酸乙酯吸收(taken up)，并用2N鹽酸水溶液洗滌。在硅膠上(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)純化后獲得4’-(戊硫基乙氧基)苯乙酮。
1H NMR CDCl3δppm0.85(m，3H)，1.24-1.39(m，4H)，1.52-1.62(m，2H)，2.50(s，3H)，2.64(t，2H，J＝7.2Hz)，2.94(t，2H，J＝6.8Hz)，4.14(t，2H，J＝6.8Hz)，6.88(d，2H，J＝8.7Hz)，7.89(d，2H，J＝8.7Hz)起始材料33，5-二甲基-4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基苯甲醛 該化合物根據(jù)一般方法4由4-羥基-3，5-二甲基苯甲醛和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.43(s，6H)，1.49(s，9H)，2.28(s，6H)，7.53(s，2H)，9.88(s，1H)
起始材料44’-羥基-3’，5’-苯乙酮 將2，6-二甲基苯酚(1eq)溶解在二氯甲烷中，并將溶液冷卻到0℃。然后加入氯化鋁(3eq)和乙酰溴(2eq)。將該混合物在室溫下攪拌3小時，然后倒到冰上。用二氯甲烷萃取水相，用水洗滌有機(jī)相直至中性，在硫酸鎂上干燥并通過真空蒸發(fā)除去溶劑。獲得的中間體酯通過硅膠層析法(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)純化，然后用2N氫氧化鈉水溶液(2.5eq)吸收。將該混合物在室溫下攪拌48小時，然后用稀鹽酸酸化。用水洗滌沉淀物直至洗滌水達(dá)到中性pH。
1H NMR CDCl3δppm2.30(s，6H)，2.54(s，3H)，7.65(s，2H)起始材料54’-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯乙酮 該化合物根據(jù)前述一般方法5由4’-羥基苯乙酮和(R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊醇合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯95∶5)。
1H NMR CDCl3δppm1.42-1.62(m，4H)，1.62-1.75(m，2H)，1.75-1.89(m，2H)，1.89-1.98(m，1H)，2.42-2.51(m，1H)，2.56(s，3H)，3.08-3.21(m，2H)，3.55-3.61(m，1H)，4.06(t，2H，J＝6.2Hz)，6.92(d，2H，J＝8.7Hz)，7.93(d，2H，J＝8.7Hz)起始材料6(R，S)-2-苯基-2-(4-甲酰-1，6-二甲基苯氧基)乙酸乙酯 該化合物根據(jù)前述一般方法5由4-羥基-3，5-二甲基苯甲醛和2-羥基-2-苯基乙酸乙酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm1.22(t，3H，J＝7.35Hz)，2.20(s，6H)，4.16-4.28(m，2H)，5.3(s，1H)，7.38-7.51(m，7H)，9.87(s，1H)起始材料74’-(環(huán)己基乙基)苯乙酮 該化合物根據(jù)前述一般方法5由4’-羥基苯乙酮和2-環(huán)己基乙醇合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm0.90-1.80(m，13H)，2.56(s，3H)，4.07(t，2H，J＝6.45Hz)，6.92(d，2H，J＝8.80Hz)，7.93(d，2H，J＝8.80Hz)
起始材料82，6-二甲基苯硫基甲烷 該化合物根據(jù)前述一般方法4由2，6-二甲基苯硫酚和甲基碘合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm2.28(s，3H)，2.62(s，6H)，7.16(m，3H)起始材料93’，5’-二甲基-4’-甲硫基苯乙酮 將起始材料8(1eq)溶解在二氯甲烷中，將溶液冷卻到0℃然后加入氯化鋁(2.5eq)和乙酰溴(2eq)。將該混合物在室溫下攪拌72小時，然后倒到冰上。用二氯甲烷萃取水相，用水洗滌有機(jī)相直至中性，在硫酸鎂上進(jìn)行干燥并通過真空蒸發(fā)除去溶劑。
通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm2.23(s，3H)，2.54(s，3H)，2.56(s，6H)，7.63(s，2H)起始材料104’-甲氧基-3’5’-二甲基苯乙酮
該化合物根據(jù)前述一般方法4由起始材料4和甲基碘合成。
將在通過過濾除去碳酸鉀并通過真空蒸發(fā)除去溶劑之后獲得的粗產(chǎn)物用于相應(yīng)的中間體化合物的合成。
1H NMR CDCl3δppm2.31(s，6H)，2.54(s，3H)，3.74(s，3H)，7.63(s，2H)起始材料114’-環(huán)己基乙基-3’，5’-二甲基苯乙酮 該化合物根據(jù)前述一般方法5由起始材料4和2-環(huán)己基乙醇合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯85∶15)。
1H NMR CDCl3δppm0.92-1.80(m，13H)，2.31(s，6H)，2.55(s，3H)，3.86(t，2H，J＝7.05Hz)，7.63(s，2H)起始材料124’-(溴乙氧基)-3’，5’-二甲基苯乙酮
該化合物根據(jù)如前所述的一般方法4由起始材料4和二溴乙烷合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯85∶15)。
1H NMR CDCl3δppm2.36(s，6H)，2.56(s，3H)，3.68(t，2H，J＝6.21Hz)，4.14(t，2H，J＝6.21Hz)，7.65(s，2H)起始材料134’-(環(huán)己硫基乙氧基)苯乙酮 該化合物根據(jù)如前所述的一般方法4由起始材料1和環(huán)己硫醇合成。
1H NMR CDCl3δppm1.08(m，5H)，1.40(m，1H)，1.56(m，2H)，1.80(m，2H)，2.30(s，3H)，2.53(m，1H)，2.69(t，2H，J＝6.96Hz)，3.95(t，2H，J＝6.96Hz)，6.68(d，2H，J＝8.88Hz)，7.69(d，2H，J＝8.88Hz)起始材料144’-(環(huán)己硫基乙氧基)-3’，5’-二甲基苯乙酮 該化合物根據(jù)如前所述的一般方法4由起始材料12和環(huán)己硫醇合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm1.26-1.42(m，5H)，1.59-1.65(m，1H)，1.80(m，2H)，2.00(m，2H)，2.35(s，6H)，2.56(s，3H)，2.75(m，1H)，2.95(t，2H，J＝6.81Hz)，3.96(t，2H，J＝6.81Hz)，7.64(s，2H)起始材料154’-甲氧基-3’-甲基苯乙酮 該化合物根據(jù)如前所述的一般方法4由4’-羥基-3-甲基苯乙酮和甲基碘合成。
將在通過過濾除去碳酸鉀和通過真空蒸發(fā)除去溶劑之后獲得的粗產(chǎn)物用于相應(yīng)的中間體化合物的合成。
1H NMR CDCl3δppm2.53(s，3H)，2.56(s，3H)，3.90(s，3H)，6.85(d，1H，J＝8.46Hz)，7.78(s，1H)，7.82(d，1H，J＝8.46Hz)起始材料161，3-二甲基-2-己硫基苯 該化合物根據(jù)如前所述的一般方法4由2，6-二甲基苯硫酚和己基碘合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷)。
1H NMR CDCl3δppm0.90(t，3H，J＝6.57Hz)，1.27-1.58(m，8H)，2.57(s，6H)，2.66(t，2H，J＝7.11Hz)，7.12(m，3H)
起始材料173’，5’-二甲基-4’-己硫基苯乙酮 將起始材料16(1eq)溶解在二氯甲烷中，將溶液冷卻到0℃然后加入氯化鋁(1eq)和乙酰溴(1eq)。將該混合物在室溫下攪拌2小時，然后倒到冰上。用二氯甲烷萃取水相，用水洗滌有機(jī)相直至中性，在硫酸鎂上進(jìn)行干燥并通過真空蒸發(fā)除去溶劑。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷)。
1H NMR CDCl3δppm0.87(t，3H，J＝6.72Hz)，1.22-1.53(m，8H)，2.58(s，3H)，2.59(s，6H)，2.68(t，2H，J＝7.23Hz)，7.66(s，2H)起始材料183’，5’-二甲基-4’-(嗎啉-4-基乙氧基)苯乙酮 將起始材料12(1eq)和嗎啉(0.7eq)溶解在丙酮中，并加入碳酸鉀(1eq)。將該混合物回流72小時。通過過濾除去碳酸鉀，通過真空蒸發(fā)除去溶劑。殘留油狀物用1N鹽酸水溶液吸收，并用乙酸乙酯洗滌。通過加入碳酸鉀對水相進(jìn)行堿化(pH 9)，然后用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相在硫酸鎂上干燥，并通過真空蒸發(fā)除去溶劑。
1H NMR CDCl3δppm2.33(s，6H)，2.54(s，3H)，2.60(t，4H，J＝4.70Hz)，2.81(t，2H，J＝5.76Hz)，3.76(t，4H，J＝4.70Hz)3.93(t，2H，J＝5.76Hz)，7.62(s，2H)起始材料193，5-二氟-4-羥基苯甲醛 將2，6-二氟苯酚(1eq)和六亞甲基四胺(2eq)溶解在水/乙酸混合物(10∶90)中。將反應(yīng)混合物回流18小時，然后冷卻到室溫。用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物，合并有機(jī)相，在硫酸鎂上進(jìn)行干燥，并通過真空蒸發(fā)除去溶劑。
1H NMR CDCl3δppm7.35(dd，2H，J＝6.57Hz，J＝2.82Hz)，9.67(s，1H)起始材料204’-甲氧基-3’-三氟甲基苯乙酮 將4-甲氧基-3-三氟甲基芐腈(1eq)溶解在無水THF中。在THF中加入甲基氯化鎂溶液(1eq)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時，然后在加入更多甲基氯化鎂(1eq)后在回流下攪拌1小時。
將反應(yīng)混合物倒入1N鹽酸水溶液中，并用二氯甲烷萃取。用碳酸氫鉀水溶液中和有機(jī)相，然后用水洗滌并在硫酸鎂上干燥。通過真空蒸發(fā)除去溶劑。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm2.60(s，3H)，3.99(s，3H)，7.07(d，1H，J＝8.79Hz)，8.14(d，1H，J＝8.79Hz，J＝1.77Hz)，8.19(s，1H)用于合成本發(fā)明化合物的中間體化合物的合成中間體化合物11-(4-(戊硫基乙氧基)苯基-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)如上所述的一般方法1由起始材料2和4-羥基-3，5-二甲基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯85∶15)。
1H NMR CDCl3δppm0.91(m，3H)，1.33-1.42(m，4H)，1.59-1.67(m，2H)，2.29(s，6H)，2.64(t，2H，J＝7.60Hz)，2.96(t，2H，J＝6.80Hz)，4.24(t，2H，J＝6.80Hz)，6.97(d，2H，J＝8.70Hz)，7.31(s，2H)，7.37(d，1H，J＝15.54Hz)，7.72(d，1H，J＝15.54Hz)，8.03(d，2H，J＝8.70Hz)中間體化合物21-(4-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)如上所述的一般方法1由起始材料5和4-羥基-3，5-二甲基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.45-1.65(m，4H)，1.65-1.77(m，2H)，1.77-1.87(m，2H)，1.87-2.0(m，1H)，2.30(s，6H)，2.43-2.51(m，1H)，3.09-3.22(m，2H)，3.56-3.62(m，1H)，4.04(t，2H，J＝6.40Hz)，6.96(d，2H，J＝8.50Hz)，7.31(s，2H)，7.41(d，1H，J＝15.40Hz)，7.73(d，1H，J＝15.40Hz)，8.04(d，2H，J＝8.50Hz)中間體化合物31-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二溴苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)如上所述的一般方法1由4’-甲硫基苯乙酮和3，5-二溴-4-羥基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm2.55(s，3H)，6.19(s，1H)，7.32(d，2H，J＝8.70Hz)，7.41(1H，J＝15.40Hz)，7.63(d，1H，J＝15.40Hz)，7.75(s，2H)，7.96(d，2H，J＝8.70Hz)
中間體化合物41-(4-(環(huán)己基乙氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)如上所述的一般方法1由起始材料7和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。該產(chǎn)物在反應(yīng)介質(zhì)中結(jié)晶并被瀝干(essoré)，用預(yù)先冷卻到0℃的乙醇洗滌并真空干燥。
1H NMR CDCl3δppm0.90-1.80(m，13H)，2.30(s，6H)，4.08(t，2H，J＝6.54Hz)，6.97(d，2H，J＝9.00Hz)，7.30(s，2H)，7.42(d，1H，J＝15.50Hz)，7.73(d，1H，J＝15.50Hz)，8.03(d，2H，J＝9.00Hz)中間體化合物51-(4-甲硫基-3，5-二甲基-苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)如上所述的一般方法1由起始材料9和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm2.28(s，3H)，2.30(s，6H)，2.64(s，6H)，7.32(s，2H)，7.36(d，1H，J＝15.76Hz)，7.72(s，2H)，7.73(d，1H，J＝15.76Hz)
中間體化合物61-(4-甲氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)如上所述的一般方法1由起始材料10和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。該產(chǎn)物在反應(yīng)介質(zhì)中結(jié)晶并被瀝干，用預(yù)先冷卻到0℃的乙醇洗滌并真空干燥。
1H NMR CDCl3δppm2.28(s，6H)，2.35(s，6H)，3.77(s，3H)，7.30(s，2H)，7.35(d，1H，J＝15.63Hz)，7.70(d，1H，J＝15.63Hz)，7.72(s，2H)中間體化合物71-(4-(環(huán)己基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)如上所述的一般方法1由起始材料11和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm0.94-1.05(m，2H)，1.16-1.31(m，4H)，1.57-1.82(m，7H)，2.30(s，6H)，2.35(s，6H)，3.86(t，2H，J＝7.08Hz)，7.32(s，2H)，7.38(d，1H，J＝15.81Hz)，7.71(s，2H)，7.72(d，1H，J＝15.81Hz)
中間體化合物81-(4-(環(huán)己硫基乙氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)如上所述的一般方法1由起始材料13和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。該產(chǎn)物在反應(yīng)介質(zhì)中結(jié)晶并被瀝干，然后用預(yù)先冷卻到0℃的乙醇洗滌。
1H NMR CDCl3δppm1.23-1.42(m，5H)，1.63-1.65(m，1H)，1.79-1.81(m，2H)，2.01-2.08(m，2H)，2.29(s，6H)，2.73-2.81(m，1H)，2.96(t，2H，J＝7.08Hz)，4.20(t，2H，J＝7.08Hz)，6.97(d，2H，J＝8.73Hz)，7.30(s，2H)，7.41(d，1H，J＝15.53Hz)，7.73(d，1H，J＝15.53Hz)，8.04(d，2H，J＝8.73Hz)中間體化合物91-(2，4，5-三甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由2’，4’，5’-三甲基苯乙酮和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯7∶3)。
1H NMR CDCl3δppm2.27(s，9H)，2.29(s，3H)，2.38(s，3H)，7.00(d，1H，J＝15.90Hz)，7.04(s，1H)，7.23(s，2H)，7.27(s，1H)，7.39(d，1H，J＝15.90Hz)中間體化合物101-(4-(環(huán)己硫基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由起始材料14和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯7∶3)。
1H NMR CDCl3δppm1.32(m，5H)，1.63(m，1H)，1.79(m，2H)，2.03(m，2H)，2.29(s，6H)，2.37(s，6H)，2.75(m，1H)，2.97(t，2H，J＝7.05Hz)，3.97(t，2H，J＝7.05Hz)，7.30(s，2H)7.37(d，1H，J＝15.70Hz)，7.70(d，1H，J＝15.70Hz)，7.71(s，2H)中間體化合物111-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羥基-3-氟苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由4’-甲硫基苯乙酮和3-氟-4-羥基苯甲醛合成。該產(chǎn)物在反應(yīng)介質(zhì)中結(jié)晶并被瀝干，然后真空干燥。
1H NMR CDCl3δppm2.55(s，3H)，7.04(t，1H，J＝8.37Hz)，7.30-7.42(m，5H)，7.73(d，1H，J＝15.54Hz)，7.95(d，2H，J＝8.40Hz)中間體化合物121-(2，3，4，5，6-五甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由五甲基苯乙酮和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。該產(chǎn)物在反應(yīng)介質(zhì)中結(jié)晶并被瀝干，然后通過在乙醇中重結(jié)晶而加以純化。
1H NMR CDCl3δppm2.09(s，6H)，2.20(s，6H)，2.22(s，6H)，2.26(s，3H)，6.83(d，1H，J＝16.11Hz)，7.05(d，1H，J＝16.11Hz)，7.16(s，2H)中間體化合物131-(4-苯氧基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由4’-苯氧基苯乙酮和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯7∶3)。
1H NMR CDCl3δppm2.30(s，6H)，7.05(d，2H，J＝8.67Hz)，7.1(d，2H，J＝8.47Hz)，7.21(t，1H，J＝7.30Hz)，7.31(s，2H)，7.43-7.38(m，3H)，7.75(d，1H，J＝15.36Hz)，8.05(d，2H，J＝8.47Hz)中間體化合物141-(4-甲氧基-3-氟苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由4’-甲氧基-3’-氟苯乙酮和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。該產(chǎn)物在反應(yīng)介質(zhì)中結(jié)晶并被瀝干，然后用庚烷洗滌。
1H NMR CDCl3δppm2.30(s，6H)，3.98(s，3H)，7.04(t，1H，J＝8.30Hz)，7.31(s，2H)，7.35(d，1H，J＝15.69Hz)，7.74(d，1H，J＝15.69Hz)，7.79-7.87(m，2H)中間體化合物151-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由起始材料15和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。該產(chǎn)物在反應(yīng)介質(zhì)中結(jié)晶并被瀝干，然后用庚烷洗滌。
1H NMR CDCl3δppm2.30(s，9H)，3.92(s，3H)，6.90(d，1H，J＝8.45Hz)，7.31(s，2H)，7.43(d，1H，J＝15.52Hz)，7.73(d，1H，J＝15.52Hz)，7.88(s，1H)，7.93(d，1H，J＝8.45Hz)中間體化合物161-(4-己硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由起始材料17和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm0.88(t，3H，J＝6.90Hz)，1.20-1.50(m，8H)，2.30(s，6H)，2.63(s，6H)，2.70(t，2H，J＝6.9Hz)，7.32(s，2H)，7.36(d，1H，J＝15.51Hz)，7.72(s，2H)，7.73(d，1H，J＝15.51Hz)中間體化合物171-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由2’，5’-二甲氧基苯乙酮和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯7∶3)。
1H NMR CDCl3δppm2.27(s，6H)，3.74(s，3H)，3.82(s，3H)，6.93(d，1H，J＝8.73Hz)，7.02(dd，1H，J＝8.73Hz，J＝3.27Hz)，7.14(d，1H，J＝3.27Hz)，7.22(d，1H，J＝15.81Hz)，7.25(s，2H)，7.53(d，1H，J＝15.81Hz)中間體化合物181-(4-溴苯基)-3-(4-羥基-3，5-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由4’-溴苯乙酮和起始材料19合成。通過真空蒸發(fā)除去乙醇，并用無水乙醇洗滌固體。
1H NMR CDCl3δppm5.97(s，1H)，7.18(d，2H，J＝8.30Hz)，7.35(d，1H，J＝15.36Hz)，7.65(m，3H)，7.89(d，2H，J＝8.30Hz)中間體化合物191-(4-甲氧基-3-三氟甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由起始材料20和3，5-二甲基-4-羥基苯甲醛合成。通過真空蒸發(fā)除去乙醇，并用無水乙醇洗滌固體。
1H NMR DMSOd6δppm2.22(s，6H)，4.01(s，3H)，7.41(d，1H，J＝9.00Hz)，7.52(s，2H)，7.64(d，1H，J＝15.40Hz)，8.96(s，1H)，7.76(d，1H，J＝15.40Hz)，8.29(d，1H，J＝1.60Hz)，8.49(dd，1H，J＝9.00Hz，J＝1.60Hz)本發(fā)明化合物的合成本發(fā)明化合物11-(4-(戊硫基乙氧基)苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物1和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm0.91(t，3H，J＝7.10Hz)，1.37-1.69(m，21H)2.27(s，6H)，2.63(t，2H，J＝7.10Hz)，2.93(t，2H，J＝7.10Hz)，4.21(t，2H，J＝7.10Hz)，6.97(d，2H，J＝8.70Hz)，7.28(s，2H)，7.44(d，1H，J＝15.81Hz)，7.70(d，1H，J＝15.81Hz)，8.03(d，2H，J＝8.70Hz)本發(fā)明化合物21-(4-(戊硫基乙氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物1合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷-甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm0.84-0.89(m，3H)，1.39-1.24(m，4H)，1.39(s，6H)，1.50-1.57(m，2H)，2.22(s，6H)，2.61(t，2H，J＝7.40Hz)，2.90(t，2H，J＝6.20Hz)，4.26(t，2H，J＝6.20Hz)，7.09(d，2H，J＝8.50Hz)，7.57(s，2H)，7.59(d，1H，J＝15.40Hz)，7.83(d，1H，J＝15.40Hz)，8.15(d，2H，J＝8.50Hz)，12.90(s，1H)MS(ES-MS)483.2(m-1)MP℃＝85.2-89.8本發(fā)明化合物31-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法1由起始材料3和起始材料4合成。
通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇95∶5)。
1H NMR CDCl3δppm1.46(s，6H)，1.53(s，9H)，2.27(s，6H)，2.33(s，6H)，7.28(s，2H)，7.43(d，1H，J＝15.81Hz)，7.69(d，1H，J＝15.81Hz)，7.74(s，2H)本發(fā)明化合物41-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物3合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.39(s，6H)，2.22(s，6H)，2.25(s，6H)，7.33(s，2H)，7.45(d，1H，J＝15.5Hz)，7.69(d，1H，J＝15.5Hz)，7.75(s，2H)MS(ES-MS)381.3(m-1)MP℃＝199.3-199.8本發(fā)明化合物51-(4-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物2和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯85∶15)。
1H NMR CDCl3δppm1.43(s，6H)，1.53(m，13H)，1.65-1.75(m，2H)，1.75-1.85(m，2H)，1.85-1.97(m，1H)，2.28(s，6H)，1.46-1.52(m，1H)，3.12-3.21(m，2H)，3.58-3.63(m，1H)，4.05(t，2H，J＝6.21Hz)，6.97(d，2H，J＝8.30Hz)，7.29(s，2H)，7.45(d，1H，J＝15.50Hz)，7.70(d，1H，J＝15.50Hz)，8.03(d，2H，J＝8.30Hz)
本發(fā)明化合物61-(4-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物5合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.56(m，10H)，1.67-1.77(m，2H)，1.77-1.90(m，2H)，1.90-1.97(m，1H)，2.30(s，6H)，2.43-2.52(m，1H)，3.11-3.22(m，2H)，3.58-3.63(m，1H)，4.05(t，2H，J＝6.20Hz)，6.98(d，2H，J＝8.80Hz)，7.31(s，2H)，7.46(d，1H，J＝15.80Hz)，7.71(d，1H，J＝15.80Hz)，8.03(d，2H，J＝8.80Hz)MS(ES-MS)529.1(M+1)MP℃182.7-186.6℃本發(fā)明化合物71-(4-甲硫基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二溴苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物3和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm1.54(s，9H)，1.63(s，6H)，2.56(s，3H)，7.33(d，2H，J＝8.50Hz)，7.44(d，1H，J＝15.70Hz)，7.62(d，1H，J＝15.70Hz)，7.78(s，2H)，7.96(d，2H，J＝8.50Hz)本發(fā)明化合物81-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二溴苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物7合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.54(s，6H)，2.51(s，3H)，7.41(d，2H，J＝8.5Hz)，7.64(d，1H，J＝15.4Hz)，8.04(d，1H，J＝15.4Hz)，8.15(d，2H，J＝8.5Hz)，8.29(s，2H)，12.93(s，1H)MS(ES-MS)513.2(m-1)本發(fā)明化合物101-(4-環(huán)己基乙氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物4和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/環(huán)己烷7∶3)。
1H NMR CDCl3δppm0.90-1.30(m，5H)，1.50(m，16H)，1.73(m，7H)，2.28(s，6H)，4.08(t，2H，J＝6.54Hz)，6.97(d，2H，J＝8.70Hz)，7.29(s，2H)，7.45(d，1H，J＝15.75Hz)，7.70(d，1H，J＝15.75Hz)，8.03(d，2H，J＝8.70Hz)本發(fā)明化合物111-(4-環(huán)己基乙氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物10合成。通過在二氯甲烷/庚烷的混合物中沉淀的方法純化。
1H NMR CDCl3δppm0.90-1.30(m，5H)，1.56(m，7H)，1.70(m，7H)，2.30(s，6H)，4.09(t，2H，J＝6.57Hz)，6.98(d，2H，J＝9.09Hz)，7.32(s，2H)，7.4(d，1H，J＝15.60Hz)，7.71(d，1H，J＝15.60Hz)，8.04(d，2H，J＝9.09Hz)MS(ES-MS)465.3(m+1)MP℃134.8-135.3本發(fā)明化合物121-(4-甲硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物5和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.50(s，6H)，1.51(s，3H)，1.53(s，9H)，2.28(s，6H)，2.63(s，6H)，7.30(s，2H)，7.39(d，1H，J＝15.69Hz)，7.69(d，1H，J＝15.69Hz)，7.72(s，2H)本發(fā)明化合物131-(4-甲硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物12合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR DMSOd6δppm1.39(s，6H)，2.22(s，6H)，2.28(s，3H)，2.59(s，6H)，7.56(s，2H)，7.62(d，1H，J＝15.37Hz)，7.79(d，1H，J＝15.37Hz)，7.89(s，2H)，12.95(s，1H)MS(ES-MS)412.9(m+1)MP℃177.0-179.0
本發(fā)明化合物141-(4-丙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由化合物3和丙基溴合成。將在除去碳酸鉀并通過真空蒸發(fā)除去溶劑后獲得的粗產(chǎn)物用于化合物15的合成。
1H NMR CDCl3δppm1.09(t，3H，J＝7.41Hz)，1.46(s，6H)，1.58(s，9H)，1.83(m，2H)，2.27(s，6H)，2.35(s，6H)，3.78(t，2H，J＝6.09Hz)，7.29(s，2H)，7.41(d，1H，J＝15.32Hz)，7.68(d，1H，J＝15.32Hz)，7.70(s，2H)本發(fā)明化合物151-(4-丙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物14合成。通過硅膠層析法純化(冼脫二氯甲烷/甲醇95∶5)。
1H NMR CDCl3δppm1.05(t，3H，J＝7.29Hz)，1.39(s，6H)，1.78(m，2H)，2.23(s，6H)，2.32(s，6H)，3.78(m，2H)，7.56(s，2H)，7.58(d，1H，J＝16.26Hz)，7.80(d，1H，J＝16.26Hz)，7.86(s，2H)MS(ES-MS)424.9(m+1)MP℃188.5-189.7本發(fā)明化合物161-(4-甲氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物6和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯95∶5)。
1H NMR CDCl3δppm1.47(s，9H)，1.53(s，6H)，2.29(s，6H)，2.31(s，6H)，3.79(s，3H)，7.30(s，2H)，7.40(d，1H，J＝15.50Hz)，7.70(d，1H，J＝15.50Hz)，7.71(s，2H)本發(fā)明化合物171-(4-甲氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物16合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.57(s，6H)，2.31(s，6H)，2.38(s，6H)，3.79(s，3H)，7.33(s，2H)，7.43(d，1H，J＝15.81Hz)，7.71(d，1H，J＝15.81Hz)，7.72(s，2H)MS(ES-MS)396.9(m+1)MP℃166.6-168.8本發(fā)明化合物181-(4-己氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由化合物3和己基溴合成。將在除去碳酸鉀并通過真空蒸發(fā)除去溶劑后獲得的粗產(chǎn)物用于化合物19的合成。
1H NMR CDCl3δppm0.93(t，3H，J＝8.58Hz)，1.37(m，4H)，1.47(s，6H)，1.53(m，11H)，1.83(m，2H)，2.28(s，6H)，2.36(s，6H)，3.82(t，2H，J＝6.54Hz)，7.29(s，2H)，7.40(d，1H，J＝15.57Hz)，7.70(d，1H，J＝15.57Hz)，7.71(s，2H)本發(fā)明化合物191-(4-己氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物18合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇95∶5)。
1H NMR CDCl3δppm0.93(t，3H，J＝7.02Hz)，1.37(m，4H)，1.50(m，2H)，1.56(s，6H)，1.83(m，2H)，2.30(s，6H)，2.34(s，6H)，3.82(t，2H，J＝6.57Hz)，7.32(s，2H)，7.42(d，1H，J＝15.48Hz)，7.69(d，1H，J＝15.48Hz)，7.71(s，2H)MS(ES-MS)466.9(m+1)MP℃171.0-172.0本發(fā)明化合物201-(4-環(huán)己基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物7和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯85∶15)。
1H NMR CDCl3δppm0.94-1.53(m，28H)，2.28(s，6H)，2.35(s，6H)，3.86(t，2H，J＝6.75Hz)，7.29(s，2H)，7.41(d，1H，J＝15.76Hz)，7.70(d，1H，J＝15.76Hz)，7.71(s，2H)
本發(fā)明化合物211-(4-環(huán)己基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物20合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm0.97-1.04(m，2H)，1.16-1.34(m，4H)，1.56(s，6H)，1.63-1.82(m，7H)，2.30(s，6H)，2.35(s，6H)，3.86(t，2H，J＝6.60Hz)，7.32(s，2H)，7.43(d，1H，J＝15.81Hz)，7.70(d，1H，J＝15.81Hz)，7.71(s，2H)MS(ES-MS)492.9(m+1)MP℃166.4-167.7本發(fā)明化合物221-(4-環(huán)己硫基乙氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物8和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯7∶3)。
1H NMR CDCl3δppm1.29(m，5H)，1.46(s，6H)，1.53(s，9H)，1.62(m，1H)，1.80(m，2H)，2.03(m，2H)，2.27(s，6H)，2.75(m，1H)，2.95(t，2H，J＝6.81Hz)，4.20(t，2H，J＝6.81Hz)，6.97(d，2H，J＝9.24Hz)，7.28(s，2H)，7.43(d，1H，J＝15.78Hz)，7.70(d，1H，J＝15.78Hz)，8.03(d，2H，J＝9.24Hz)本發(fā)明化合物231-(4-環(huán)己硫基乙氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物22合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.27-1.38(m，4H)，1.56(s，6H)，1.63-1.66(m，2H)，1.79-1.81(m，2H)，2.01-2.04(m，2H)，2.30(s，6H)，2.76-2.77(m，1H)，2.96(t，2H，J＝7.08Hz)，4.21(t，2H，J＝7.08Hz)，6.97(d，2H，J＝8.61Hz)，7.31(s，2H)，7.41(d，1H，J＝15.60Hz)，7.73(d，1H，J＝15.60Hz)，8.04(d，2H，J＝8.61Hz)MS(Maldi-Tof)496.67(m+1)MP℃112.3-114本發(fā)明化合物241-(2，4，5-三甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物9和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.40-1.65(m，15H)，2.22(s，6H)，2.25(s，3H)，2.28(s，3H)，2.35(s，3H)，7.00(s，1H)，7.01(d，1H，J＝15.70Hz)，7.18(s，2H)，7.24(s，1H)，7.35(d，1H，15.70Hz)本發(fā)明化合物251-(2，4，5-三甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物24合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.55(s，6H)，2.27(s，6H)，2.27-2.30(m，6H)，2.39(s，3H)，7.05(s，1H)，7.07(d，1H，J＝15.24Hz)，7.24(s，2H)，7.28(s，1H)，7.4(d，1H，J＝15.78Hz)MS(ES-MS)381.2(m+1)MP℃168.7-173.3
本發(fā)明化合物261-(4-環(huán)己硫基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物10和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯95∶5)。
1H NMR CDCl3δppm1.27-2.04(m，10H)，1.47(s，6H)，1.53(s，9H)，2.29(s，6H)，2.38(s，6H)，2.75(m，1H)，2.98(t，2H，J＝6.84Hz)，3.98(t，2H，J＝6.84Hz)，7.29(s，2H)，7.40(d，1H，J＝15.63Hz)，7.70(d，1H，J＝15.63Hz)，7.71(s，2H)本發(fā)明化合物271-(4-環(huán)己硫基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物26合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.26-1.42(m，5H)，1.56(s，6H)，1.62-1.64(m，1H)，1.79-1.81(m，2H)，2.03-2.00(m，2H)，2.3(s，6H)，2.38(s，6H)，2.71-2.78(m，1H)，2.97(t，2H，J＝7.00Hz)，3.98(t，2H，J＝7.00Hz)，7.32(s，2H)，7.43(d，1H，J＝15.78Hz)，7.7(d，1H，J＝15.24Hz)，7.71(s，2H)MS(MALDI-TOF)524.78(m+1)MP℃156.0-158.0本發(fā)明化合物281-(4-甲硫基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3氟苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物11和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.43(s，9H)，1.62(s，6H)，2.53(s，3H)，6.95(t，1H，J＝8.07Hz)，7.32(d，2H，J＝8.64Hz)，7.39(m，3H)，7.72(d，1H，J＝15.50Hz)，7.95(d，2H，J＝8.64Hz)本發(fā)明化合物291-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3-氟苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物28合成。通過在二氯甲烷/庚烷的70∶30混合物中沉淀的方法純化。
1H NMR CDCl3δppm1.67(s，6H)，2.56(s，3H)，7.09(t，1H，J＝8.19Hz)，7.32(m，3H)，7.43(m，2H)，7.73(d，1H，J＝15.24Hz)，8.73(d，2H，J＝8.73Hz)MS(ES-MS)375.1(m+1)MP℃142.2-144.6本發(fā)明化合物301-(2，3，4，5，6-五甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物12和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯95∶5)。
1H NMR CDCl3δppm1.44(s，6H)，1.53(s，9H)，2.11(s，6H)，2.22(s，6H)，2.23(s，6H)，2.28(s，3H)，6.84(d，1H，J＝16.26Hz)，7.06(d，1H，J＝16.26Hz)，7.16(s，2H)本發(fā)明化合物311-(2，3，4，5，6-五甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物30合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.53(s，6H)，2.11(s，6H)，2.22(s，6H)，2.24(s，6H)，2.28(s，3H)，6.87(d，1H，J＝16.20Hz)，7.08(d，1H，J＝16.20Hz)，7.19(s，2H)MS(ES-MS)409.1(m+1)MP℃192.8-194.2本發(fā)明化合物321-(4-苯氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物13和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯7∶3)。
1H NMR CDCl3δppm1.47(s，6H)，1.53(s，9H)，2.28(s，6H)，7.02(d，2H，J＝8.70Hz)，7.1(d，2H，J＝7.92Hz)，7.21(t，1H，J＝7.35Hz)，7.29(s，2H)，7.39-7.46(m，3H)，7.73(d，1H，J＝16.20Hz)，8.04(d，2H，J＝8.70Hz)本發(fā)明化合物331-(4-苯氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物32合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR DMSOd6δppm1.39(s，6H)，2.22(s，6H)，7.08(d，2H，J＝8.55Hz)，7.15(d，2H，J＝8.01Hz)，7.25(t，1H，J＝7.41Hz)，7.47(t，2H，J＝7.44Hz)，7.55(s，2H)，7.62(d，1H，J＝15.70Hz)，7.82(d，1H，J＝15.70Hz)，8.19(d，2H，J＝8.55Hz)MS(ES-MS)430.9(m+1)MP℃154.0-156.0本發(fā)明化合物341-(4-甲氧基-3-氟苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物14和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。
1H NMR CDCl3δppm1.50(s，6H)，1.53(s，9H)，2.28(s，6H)，3.98(s，3H)，7.04(t，1H，J＝8.07Hz)，7.29(s，2H)，7.39(d，1H，J＝15.70Hz)，7.73(d，1H，J＝15.70Hz)，7.78-7.86(m，2H)
本發(fā)明化合物351-(4-甲氧基-3-氟苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物34合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR DMSOd6δppm1.39(s，6H)，2.22(s，6H)，3.95(s，3H)，7.31(t，1H，J＝7.35Hz)，7.57(s，2H)，7.60(d，1H，J＝15.78Hz)，7.83(d，1H，J＝15.78Hz)，7.99-8.06(m，2H)MS(ES-MS)387.1(m+1)MP℃167.0-169.0本發(fā)明化合物361-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物15和溴異丁酸叔丁酯合成。
1H NMR CDCl3δppm1.46(s，6H)，1.52(s，9H)，2.27(s，9H)，3.90(s，3H)，6.88(d，1H，J＝8.73Hz)，7.28(s，2H)，7.45(d，1H，J＝16.11Hz)，7.70(d，1H，J＝16.11Hz)，7.87(s，1H)，7.92(dd，1H，J＝8.73Hz，J＝1.65Hz)本發(fā)明化合物371-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物36合成。通過硅膠層析法(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)接著通過在乙腈中重結(jié)晶進(jìn)行純化。
1H NMR CDCl3δppm1.39(s，6H)，2.22(s，6H)，2.24(s，3H)，3.90(s，3H)，7.08(d，1H，J＝8.55Hz)，7.56(s，2H)，7.58(d，1H，J＝16.71Hz)，7.82(d，1H，J＝15.51Hz)，7.99(s，1H)，8.06(d，1H，8.55)，12.95(s，1H)MS(ES-MS)383.2(m+1)MP℃157.0-159.0本發(fā)明化合物381-(4-己硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物16和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm0.88(t，3H，J＝6.84Hz)，1.25-1.62(m，8H)，1.47(s，6H)，1.53(s，9H)，2.29(s，6H)，2.62(s，6H)，2.70(t，2H，J＝6.96Hz)，7.30(s，2H)，7.39(d，1H，J＝15.90Hz)，7.70(d，1H，J＝15.51Hz)，7.71(s，2H)本發(fā)明化合物391-(4-己硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物38合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR DMSOd6δppm0.84(m，3H)，1.22-1.40(m，8H)，2.08(s，6H)，2.22(s，6H)，2.58(s，6H)，2.73(t，2H，J＝6.90Hz)，7.57(s，2H)，7.63(d，1H，J＝15.35Hz)，7.8(d，1H，J＝15.35Hz)，7.89(s，2H)MS(ES-MS)483.2(m+1)MP℃130.0-132.0本發(fā)明化合物401-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮
該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物17和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯7∶3)。
1H NMR CDCl3δppm1.45(s，6H)，1.52(s，9H)，2.25(s，6H)，3.81(s，3H)，3.86(s，3H)，6.93(d，1H，J＝9.24Hz)，7.01(dd，1H，J＝8.82Hz，J＝2.7Hz)，7.14(d，1H，J＝2.8Hz)，7.22(s，2H)，7.26(d，1H，J＝15.60Hz)，7.52(d，1H，J＝15.60Hz)本發(fā)明化合物411-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物40合成。通過硅膠層析法純化(洗脫二氯甲烷/甲醇98∶2)。
1H NMR DMSOd6δppm1.38(s，6H)，2.19(s，6H)，3.75(s，3H)，3.8(s，3H)，7.00(d，1H，J＝2.16Hz)，7.12(m，2H)，7.26(d，1H，J＝16.2Hz)，7.37(d，1H，J＝13.5Hz)，7.4(s，2H)MS(ES-MS)398.3(m-1)MP℃油狀產(chǎn)物本發(fā)明化合物421-(3，5-二甲基-4-(嗎啉-4-基乙氧基)苯基)-3-(4-乙氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮鹽酸鹽
該化合物根據(jù)前述一般方法1由起始材料18和起始材料3合成。通過真空蒸發(fā)除去乙醇之后，并在二乙醚中研磨殘留油狀物之后獲得化合物42。
1H NMR CDCl3δppm1.36(t，3H，J＝6.84Hz)，1.49(s，6H)，2.24(s，6H)，2.38(s，6H)，3.20(s，2H)，3.50(s，2H)，3.73(d，2H，J＝11.04Hz)，4.03(d，2H，J＝11.04Hz)，4.30-4.45(m，6H)，7.36(d，1H，J＝15.75Hz)，7.28(s，2H)，7.66(m，3H)，13.39(s，1H，N.HCl，交換/D2O)本發(fā)明化合物431-(3，5-二甲基-4-(嗎啉-4-基乙氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 將化合物42溶解在乙醇中，并加入2M的氫氧化鈉。將該混合物在室溫下攪拌18小時，然后倒入水中。用乙酸乙酯洗滌水相，通過加入乙酸進(jìn)行中和，然后用二乙醚萃取。將在醚相中形成的沉淀物瀝干，并在無水乙醇中重結(jié)晶。
1H NMR CDCl3δppm1.50(s，6H)，2.28(s，6H)，2.36(s，6H)，2.89(m，4H)，3.06(t，2H，J＝5.46Hz)，3.87(m，4H)，4.06(t，2H，J＝5.46Hz)，6.50(s，1H)，7.40(d，1H，J＝15.78Hz)，7.27(s，2H)，7.68(m，3H).
MS(MALDI-TOF)496(m+1)MP℃167-169
本發(fā)明化合物441-(4-溴苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物18和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯95∶5)。
1H NMR CDCl3δppm1.50(s，9H)，1.57(s，6H)，7.38(d，2H，J＝8.50Hz)，7.65(d，1H，J＝15.78Hz)，7.66(m，3H)，7.89(d，2H，J＝8.50Hz)本發(fā)明化合物451-(4-溴苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物44合成。通過在二異丙醚中的重結(jié)晶純化。
1H NMR CDCl3δppm1.65(s，6H)，7.24(d，2H，J＝8.50Hz)，7.41(d，1H，J＝15.84Hz)，7.66(m，3H)，7.89(d，2H，J＝8.50Hz)MS(ES-MS)425(m+1)MP℃142
本發(fā)明化合物461-(4-甲氧基-3-三氟甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法4由中間體化合物19和溴異丁酸叔丁酯合成。通過硅膠層析法純化(洗脫環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1)。
1H NMR CDCl3δppm1.47(s，6H)，1.53(s，9H)，2.29(s，6H)，4.00(s，3H)，7.10(d，1H，J＝8.65Hz)，7.30(s，2H)，7.40(d，1H，J＝15.27Hz)，7.75(d，1H)，8.25(d，1H，J＝8.65Hz)，8.28(s，1H)本發(fā)明化合物471-(4-甲氧基-3-三氟甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮 該化合物根據(jù)前述一般方法6由化合物46合成。純凈態(tài)的化合物47是通過真空蒸發(fā)除去溶劑之后獲得的。
1H NMR DMSOd6δppm1.40(s，6H)，2.23(s，6H)，4.03(s，3H)，7.43(d，1H，J＝8.7Hz)，7.60(s，2H)，7.65(d，1H，J＝15.40Hz)，7.88(d，1H，J＝15.40Hz)，8.31(s，1H)，8.51(d，1H，J＝8.70Hz)，12.80(s，1H).
MS(ES-MS)437.3(m+1)MP℃182.5實(shí)施例2本發(fā)明化合物的抗氧化性能的評價用銅防止LDL氧化所試驗(yàn)的本發(fā)明化合物為在上述實(shí)施例中描述了其制備的化合物。
LDL氧化是一種重要的改變，并在動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展中起主要作用(Jurgens，Hoff et al.1987)。下面的方案可以證實(shí)化合物的抗氧化性能。除非另有說明，各個試劑都來自Sigma公司(StQuentin，F(xiàn)rance)。根據(jù)由Lebeau等描述的方法制備LDL(Lebeau，F(xiàn)urman et al.2000)。
試驗(yàn)化合物的溶液制成在碳酸氫鹽緩沖液(pH 9)中濃度為10-2M的溶液，并在PBS中稀釋以獲得范圍在0.1到100μM的最終濃度。
在氧化之前，通過透析將EDTA從LDL制劑中除去。然后通過將100μl的16.6μM CuSO4溶液加入到160μl的LDL(125μg蛋白/ml)和20μl的試驗(yàn)化合物溶液中在30℃發(fā)生氧化。接著通過檢測用有或沒有銅存在的化合物處理的樣品在232nm處的光密度從而跟蹤受觀察二烯物種(species)的形成。在232nm處的光密度用恒溫分光光度計(jì)(Tecan Ultra 380)在8小時內(nèi)每10分鐘檢測一次。用三重測定進(jìn)行分析。當(dāng)與對照樣品相比它們誘導(dǎo)一較長的遲滯期并降低所形成的二烯的氧化速率和數(shù)量時，則認(rèn)為這些化合物具有抗氧化活性。本發(fā)明人證實(shí)本發(fā)明化合物具有至少一種上述抗氧化性能，其表明本發(fā)明化合物具有固有的抗氧化活性。
在圖示說明根據(jù)本發(fā)明化合物的抗氧化性能的圖1a、1b、1c、2a、2b、2c、3a、4a、4b、4c、5a、5b、5c、6a、6b、6c、7a、7b、7c、8a、8b、8c中給出了典型的結(jié)果。
實(shí)施例3借助細(xì)胞培養(yǎng)檢測本發(fā)明化合物的抗氧化性能培養(yǎng)方案神經(jīng)元、成神經(jīng)細(xì)胞瘤(人)以及PC12細(xì)胞(大鼠)是用于這類研究的細(xì)胞系。PC12細(xì)胞制備自大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤，并已由Greene和Tischler加以表征(Greene and Tischler，1976)。這些細(xì)胞通常用于神經(jīng)元分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及神經(jīng)元死亡的研究中。PC12細(xì)胞如以前所描述的(Farinelli，Park et al.1996)，在補(bǔ)充了10％的馬血清和5％的胎牛血清的完全RPMI培養(yǎng)基(Invitrogen)中生長。
還利用內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞的(原代，primary)培養(yǎng)。從Promocell(Promocell GmBH，Heidelberg)獲得細(xì)胞，并根據(jù)供應(yīng)商的用法說明進(jìn)行培養(yǎng)。
將細(xì)胞用不同劑量的、范圍為5到300μM的化合物處理24小時。然后回收細(xì)胞，并通過定量PCR評價靶基因表達(dá)的增加。
mRNA檢測從用本發(fā)明化合物處理或沒有用本發(fā)明化合物處理的培養(yǎng)細(xì)胞中提取mRNA。用絕對RNA RT-PCR小量制備試劑盒(AbsolutelyRNA RT-PCR miniprep kit)(Stratagene，F(xiàn)rance)的試劑并根據(jù)供應(yīng)商提供的用法說明進(jìn)行提取。然后通過光譜測定法檢測mRNA，并借助Light Cycler System(Roche，F(xiàn)rance)用Light Cycler Fast Start DNAMaster Sybr Green I試劑盒(Roche)通過定量RT-PCR進(jìn)行量化。將對于抗氧化酶(超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶以及谷胱甘肽過氧化物酶(GPx))進(jìn)行編碼的基因特異的引物對用作探針。將對于β-肌動蛋白和親環(huán)蛋白基因特異的引物對用作對照探針。
當(dāng)用本發(fā)明化合物處理細(xì)胞時，通過定量RT-PCR檢測，抗氧化酶基因的mRNA表達(dá)的增加在所使用的不同細(xì)胞型中得到了證實(shí)。
氧化性應(yīng)激的控制培養(yǎng)細(xì)胞中氧化物種的檢測這些化合物的抗氧化性能還借助熒光標(biāo)記物(其氧化伴隨熒光信號的出現(xiàn))進(jìn)行評價。以下面的方式確定用該化合物處理的細(xì)胞中發(fā)出的熒光信號強(qiáng)度的降低將如前述培養(yǎng)(黑色96孔板，透明底部，F(xiàn)alcon)的PC12細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中用增加劑量的H2O2(0.25mM-1mM)孵育2小時和24小時。在孵育之后，除去培養(yǎng)基并將細(xì)胞用PBS中的10μM的二氯二氫熒光素二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescéine diacetate)溶液(DCFDA，MolecularProbes，Eugene，USA)在5％CO2空氣中、在37℃下孵育30分鐘。然后將細(xì)胞用PBS進(jìn)行漂洗。用熒光計(jì)(Tecan Ultra 384)在495nm的激發(fā)波長和535nm的發(fā)射波長處檢測由氧化標(biāo)記物發(fā)射的熒光。將該結(jié)果表示為相對于氧化對照的保護(hù)百分?jǐn)?shù)。
在用本發(fā)明化合物孵育的細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度低于未經(jīng)處理的細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度。這些發(fā)現(xiàn)表明本發(fā)明化合物可促進(jìn)抑制處于氧化性應(yīng)激的細(xì)胞中氧化性物種的產(chǎn)生。前述的抗氧化性能也有效地誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞中的抗自由基保護(hù)。
脂質(zhì)過氧化作用的檢測各化合物對培養(yǎng)細(xì)胞(上文提到的細(xì)胞模型)中的脂質(zhì)過氧化的保護(hù)效應(yīng)如下確定將不同細(xì)胞系和原代細(xì)胞培養(yǎng)基如前述進(jìn)行處理，在處理后回收細(xì)胞上清液，并將細(xì)胞溶解和回收用于蛋白濃度的確定。脂質(zhì)過氧化作用如下檢測通過利用硫巴比妥酸(TBA)來檢測脂質(zhì)過氧化作用，其中硫巴比妥酸與醛的脂質(zhì)過氧化物諸如丙二醛(MDA)進(jìn)行反應(yīng)。在處理之后，收集細(xì)胞上清液(900μl)，并加入90μl的丁羥甲苯(Morliere，Moysan et al.1991)。還向該反應(yīng)介質(zhì)中加入1毫升0.375％的TBA溶液(其在含有15％三氯乙酸的0.25M HCl中)。將該混合物在80℃加熱15分鐘，在冰上冷卻，并用丁醇萃取有機(jī)相。借助Shimazu 1501分光熒光計(jì)(ShimadzuCorporation，Kyoto，Japan)并通過分光熒光法(λexc＝515nm和λem＝550nm)對有機(jī)相進(jìn)行分析。利用四-乙氧基丙烷作為標(biāo)準(zhǔn)將TBARS表示為MDA當(dāng)量。將該結(jié)果相對于蛋白濃度進(jìn)行歸一化。
在用本發(fā)明化合物處理的細(xì)胞中觀測到的脂質(zhì)過氧化作用的降低證實(shí)了前面的結(jié)果。
本發(fā)明化合物有利地表現(xiàn)出固有的抗氧化性能，其允許減少和/或抑制氧化性應(yīng)激的效應(yīng)。諸位發(fā)明人還指出本發(fā)明化合物能夠誘導(dǎo)編碼抗氧化性酶的基因的表達(dá)。本發(fā)明化合物的這些特定的特征使得細(xì)胞更有效地對抗氧化性應(yīng)激，因此保護(hù)其免受自由基誘導(dǎo)的損害。
實(shí)施例4對用本發(fā)明化合物的體外PPAR激活的評價用于試驗(yàn)的本發(fā)明化合物是具有一羧酸官能團(tuán)的化合物，在上述實(shí)施例中描述了其制備。
由兩個主要藥物類—貝特類(fibrates)和格列酮類(glitazones)(在臨床上廣泛用于治療各種血脂障礙和糖尿病)激活的PPAR亞科的核受體在脂質(zhì)和葡萄糖內(nèi)穩(wěn)態(tài)中起重要作用。下面的試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明本發(fā)明化合物在體外激活PPARα、PPARγ以及PPARδ。
通過檢測由酵母gal4轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和不同PPAR的配體結(jié)合域構(gòu)成的嵌合體的轉(zhuǎn)錄活性，在RK13上皮樣或COS-7細(xì)胞系中進(jìn)行了PPAR激活的體外測試。這些后來的結(jié)果然后根據(jù)以下方案在細(xì)胞系中得到確認(rèn)此實(shí)施例是針對RK13細(xì)胞和COS-7細(xì)胞給出的。
培養(yǎng)方案RK13細(xì)胞是來自ECACC(Porton Down，UK)，COS-7細(xì)胞來自ATCC(American Type Culture Collection)，并在補(bǔ)充了10％(V/V)牛胎血清、100U/ml青霉素(Gibco，Paisley，UK)以及2mM的L-谷氨酰胺(Gibco，Paisley，UK)的DMEM培養(yǎng)基中生長。每兩天更換一次培養(yǎng)基。將細(xì)胞保存在37℃增濕95％空氣/5％CO2的氣氛中。
用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒的描述Raspe，Madsen等人(1999)已經(jīng)描述了質(zhì)粒pG5TkpGL3、pRL-CMV、pGal4-hPPARα、pGal4-hPPARγ、pGal4-hPPARδ以及pGal4-φ。pGal4-mPPARα、pGal4-hPPARγ和pGal4-hPPARδ構(gòu)成物(constructs)是通過克隆入PCR-擴(kuò)增的DNA片段的pGal4-φ載體而獲得的，其中該DNA片段對應(yīng)于人PPARα、PPARγ以及PPARδ核受體的DEF結(jié)構(gòu)域。
轉(zhuǎn)染將RK13細(xì)胞在24孔培養(yǎng)皿中以5×104個細(xì)胞/孔進(jìn)行接種，將COS-7細(xì)胞在96孔培養(yǎng)皿中以5×104個細(xì)胞/孔進(jìn)行接種，然后根據(jù)前述方案(Raspe，Madsen et al.1999)用報道質(zhì)粒pG5TkpGL3(50ng/孔)、表達(dá)載體pGal4-φ、pGal4-mPPARα、pGal4-hPPARα、pGal4-hPPARγ和pGal4-hPPARδ(100ng/孔)以及轉(zhuǎn)染效能對照載體pRL-CMV(1ng/孔)轉(zhuǎn)染2小時，接著用試驗(yàn)化合物孵育36小時。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將細(xì)胞溶解(Gibco，Paisley，UK)并對RK13細(xì)胞用Dual-LuciferaseTMReporter Assay System試劑盒(Promega，Madison，W1，USA)以及對COS-7細(xì)胞用Steady Glow Luciferase(Promega)根據(jù)如前所述的供應(yīng)商的用法說明來確定熒光素酶活性。然后用Bio-Rad Protein Assay(Bio-Rad，Munich，Germany)并根據(jù)供應(yīng)商的用法說明來測量細(xì)胞提取物的蛋白含量。
諸位發(fā)明人證實(shí)了在用本發(fā)明化合物處理并用pGal4-hPPARα質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中熒光素酶活性會增加。所述熒光素酶活性的誘導(dǎo)表明本發(fā)明化合物是PPARα的激活劑。在圖示說明本發(fā)明化合物的PPARα激活劑性能的圖9a、10a、11a、12a、13a、14a、15a、16a、17a以及18a中給出了結(jié)果。
諸位發(fā)明人證實(shí)了在用本發(fā)明化合物處理并用pGal4-hPPARγ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中熒光素酶活性會增加。所述熒光素酶活性的誘導(dǎo)表明本發(fā)明化合物是PPARγ的激活劑。在圖示說明本發(fā)明化合物的PPARγ激活劑性能的圖9b、10b、11b、12b、14b、15b以及18b中給出了結(jié)果。
諸位發(fā)明人證實(shí)了在用本發(fā)明化合物處理并用pGal4-hPPARδ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中熒光素酶活性會增加。所述熒光素酶活性的誘導(dǎo)表明本發(fā)明化合物是PPARδ的激活劑。在圖示說明本發(fā)明化合物的PPARδ激活劑性能的圖11c、13b、14c以及15c中給出了結(jié)果。
實(shí)施例5本發(fā)明化合物的抗炎性能的評價在包括多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病和帕金森病、腦缺血以及頭部創(chuàng)傷的許多神經(jīng)性障礙中觀察到炎性反應(yīng)，并且炎癥也是神經(jīng)變性的重要因素。在中風(fēng)中，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的初始反應(yīng)之一是釋放細(xì)胞因子和自由基。這種細(xì)胞因子和自由基的釋放導(dǎo)致腦內(nèi)炎性反應(yīng)，其可以導(dǎo)致神經(jīng)元死亡(Rothwell，1997)。
如上文所述，對細(xì)胞系和原代細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
在蒸餾水中重建LPS(脂多糖)細(xì)菌內(nèi)毒素(埃希氏桿菌0111B4)(Sigma，F(xiàn)rance)并在4℃下貯存。將細(xì)胞用1μg/ml的LPS處理24小時。為了避免來自其他因子的干擾，將培養(yǎng)基徹底更換。
TNF-α是對應(yīng)激(例如，氧化性應(yīng)激)的炎性反應(yīng)中的一個重要因子。為了評價相應(yīng)于通過增加LPS劑量的刺激而發(fā)生的TNF-α分泌，將被刺激細(xì)胞的培養(yǎng)基移出并用ELISA-TNF-α試劑盒(Immunotech，F(xiàn)rance)檢測TNF-α。將樣品稀釋50倍，以使其處于標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)(Chang，Hudson et al.2000)。
化合物的抗炎性能表征如下將細(xì)胞培養(yǎng)基徹底更換并用試驗(yàn)化合物將細(xì)胞孵育2小時，之后將LPS以1μg/ml的最終濃度加入到培養(yǎng)基中。在24小時的孵育之后，當(dāng)不直接處理時，回收細(xì)胞上清液并在-80℃下貯存。使細(xì)胞溶解并用Bio-Rad Protein Assay試劑盒(Bio-Rad，Munich，Germany)根據(jù)供應(yīng)商的用法說明對蛋白進(jìn)行量化。
將用試驗(yàn)化合物處理誘導(dǎo)的TNF-α分泌減少的測量結(jié)果表示為pg/ml/μg蛋白，以及表示為相對于對照的百分?jǐn)?shù)。這些結(jié)果顯示本發(fā)明化合物具有抗炎性能。
實(shí)施例6對體內(nèi)脂質(zhì)代謝作用的評價所測試的本發(fā)明化合物是在上述實(shí)施例中描述了其制備的化合物。
在人類藥物中廣泛用來治療涉及動脈粥樣硬化(工業(yè)化國家中發(fā)病率和死亡率的主要因素之一)發(fā)展的血脂障礙的貝特類是PPARα核受體的有效激活劑。PPARα核受體調(diào)節(jié)涉及脂質(zhì)(ACO、CPT-I或CPT-II)的轉(zhuǎn)運(yùn)(載脂蛋白如Apo AI、ApoAII以及ApoC-III，膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白如FAT)或分解代謝的基因表達(dá)。因此，在嚙齒動物體內(nèi)和人體內(nèi)，用PPARα激活劑處理會導(dǎo)致血漿膽固醇和甘油三酯水平的降低。
下面的方案設(shè)計(jì)用來證實(shí)循環(huán)甘油三酯和膽固醇水平的降低，并且還突出了本發(fā)明化合物用于預(yù)防和/或治療心血管疾病的益處。
動物處理將Apo E2/E2轉(zhuǎn)基因小鼠留置(heures)在20±3℃恒溫下的12-小時明/暗循環(huán)中。在1周的環(huán)境適應(yīng)期后，稱重小鼠并分成6只小鼠為一組的若干組，對鼠進(jìn)行選擇以使體重分布均勻。將試驗(yàn)化合物懸浮在羧甲基纖維素中并以用法說明的劑量通過胃灌洗方式給予，每天給予一次共7天。動物可隨意獲取食物和水。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，稱重動物并在麻醉下處死。將血液收集到EDTA上。將血漿通過3000rpm離心20分鐘進(jìn)行分離。將肝樣品移出并冷凍貯存在液氮中用于后面的分析。
血清脂質(zhì)和載脂蛋白的確定血漿中脂質(zhì)濃度(總膽固醇和自由膽固醇、甘油三酯以及磷脂)是根據(jù)供應(yīng)商的用法說明通過比色測定(Boehringer，Mannheim，Germany)確定的。如前所述確定了載脂蛋白AI、AII以及CIII的血漿濃度(Raspe et al.1999，Asset G et al.，Lipids，1999)。
圖19a、19b、19c以及19d給出了結(jié)果的一個實(shí)例，其中圖示說明了化合物2對甘油三酯和膽固醇代謝的活性。
圖20a、20b、20c以及20d圖示說明了化合物13、33以及39對甘油三酯和膽固醇代謝的活性。
RNA分析如前所述，總RNA是通過用硫氰酸胍/羥基芳酸/氯仿的混合物進(jìn)行提取而分離自肝碎片(Raspe et al.1999)。信使RNA是借助在Light Cycler System(Hoffman-La Roche，Basel，Switzerland)上的LightCycler Fast Start DNA Master Sybr Green I試劑盒(Hoffman-La Roche，Basel，Switzerland)并通過半定量或定量RT-PCR加以量化。將對于ACO、Apo CIII以及Apo II基因特異的引物對用作探針。將對于36B4、β-肌動蛋白以及親環(huán)蛋白基因特異的引物對用作對照探針?？商鎿Q地，總RNA可根據(jù)在前所述的方案(Raspe et al.，1999)通過Northern印跡或斑點(diǎn)印跡進(jìn)行分析。
實(shí)施例7對本發(fā)明化合物在腦缺血-再灌注模型中的神經(jīng)保護(hù)作用的評價預(yù)防性模型1.動物處理1.1動物以及化合物給予將C57黑色/6只小鼠(野生型)用于本實(shí)驗(yàn)。
將動物供養(yǎng)在20℃±3℃溫度下的12小時明-暗循環(huán)中。可隨意獲得水和食物。記錄食物攝取和重量增加。
將本發(fā)明化合物或賦形劑(0.5％羧基纖維素)在大腦中動脈(middle cerebral artery)局部缺血誘導(dǎo)前通過管飼法對動物給予14天。
1.2通過大腦中動脈的管腔內(nèi)阻塞(occlusion intraluminale)的局部缺血誘導(dǎo)-再灌注將動物通過腹膜內(nèi)注射300mg/kg的水合氯醛進(jìn)行麻醉。插入直腸探針，并將體溫保持在37℃±0.5℃。在整個實(shí)驗(yàn)過程中對血壓進(jìn)行監(jiān)測。
在外科顯微鏡下，通過在頸部正中切開而暴露右頸動脈。將翼腭動脈在其起端結(jié)扎、并在頸外動脈實(shí)施動脈切開術(shù)以便插入尼龍單絲，其逐漸前進(jìn)到達(dá)頸總動脈，然后進(jìn)入頸內(nèi)動脈，以便阻塞大腦中動脈的起端。在1小時后收回細(xì)絲以允許再灌注。
2.腦梗塞體積的測量在再灌注后24小時，將之前使用或未使用這些化合物處理的動物通過戊巴比妥過劑量安樂死。迅速將腦冷凍并切片。切片用甲酚紫染色。認(rèn)為腦切片的未染色區(qū)為由梗塞所損傷。對區(qū)域進(jìn)行測量，而兩個大腦半球的梗塞體積用以下公式計(jì)算(校正后的梗塞體積＝梗塞體積-(大腦右半球體積-大腦左半球體積))以對腦水腫進(jìn)行補(bǔ)償。
與未經(jīng)處理的動物相比，來自經(jīng)處理動物的腦切片分析揭示了梗塞體積明顯減少。當(dāng)在局部缺血之前將本發(fā)明化合物給予動物(預(yù)防作用)時，它們能夠誘導(dǎo)神經(jīng)保護(hù)。
3.抗氧化活性的測定將小鼠腦冷凍、壓碎并磨成粉末，接著再懸浮在鹽水溶夜中。然后如以下作者所述測定不同的酶活性超氧化物歧化酶(Flohe和Otting 1984)；谷胱甘肽過氧化物酶(Paglia和Valentine 1967)；谷胱甘肽還原酶(Spooner，Delides et al.1981)；谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(Habig和Jakoby 1981)；過氧化氫酶(Aebi 1984)。
所述不同的酶活性在來自用本發(fā)明化合物處理的動物的腦制品中增加。
治療或急性期處理模型1.通過大腦中動脈的管腔內(nèi)阻塞的局部缺血誘導(dǎo)/再灌注將諸如前述的那些動物用于本實(shí)驗(yàn)。
將動物通過腹膜內(nèi)注射300mg/kg的水合氯醛進(jìn)行麻醉。插入直腸探針，并將體溫保持在37℃±0.5℃。在整個實(shí)驗(yàn)過程中對血壓進(jìn)行監(jiān)測。在外科顯微鏡下，通過在頸部正中切開而暴露右頸動脈。將翼腭動脈在其起端結(jié)扎、并在頸外動脈實(shí)施動脈切開術(shù)以便插入尼龍單絲，其逐漸前進(jìn)到達(dá)頸總動脈，然后進(jìn)入頸內(nèi)動脈，以便阻塞大腦中動脈的起端。在1小時后收回細(xì)絲以允許再灌注。
2.動物處理將首先要進(jìn)行局部缺血-再灌注的動物通過口服途徑(管飼法)用本發(fā)明化合物處理24或72小時，每天兩次。
3.腦梗塞體積的測量在再灌注后24或72小時，將之前使用或未使用這些化合物處理的動物通過戊巴比妥過劑量安樂死。
迅速將腦冷凍并切片。切片用甲酚紫染色。認(rèn)為腦切片的未染色區(qū)為由梗塞所損傷。對區(qū)域進(jìn)行測量，而兩個大腦半球的梗塞體積用以下公式計(jì)算(校正后的梗塞體積＝梗塞體積-(大腦右半球體積-大腦左半球體積))以對腦水腫進(jìn)行補(bǔ)償。
在治療性處理(急性期處理)的情形下，用本發(fā)明化合物處理的動物比未經(jīng)處理的動物具有更少的腦損傷。事實(shí)上，當(dāng)在局部缺血-再灌注之后給予一次或多次本發(fā)明化合物時，梗塞體積變得更小。
實(shí)施例8對本發(fā)明化合物在動脈粥樣硬化動物模型中的保護(hù)作用的評價借助它們的PPAR激活劑和抗氧化性能，本發(fā)明化合物對粥樣斑塊的發(fā)展具有有利作用。
1.動物處理將約2月齡的雌性Apo E2/E2轉(zhuǎn)基因小鼠在整個環(huán)境適應(yīng)期和整個實(shí)驗(yàn)中供養(yǎng)在20℃±3℃恒溫下的12小時明/暗循環(huán)中。
在1周的環(huán)境適應(yīng)期后，稱重小鼠并分成8只小鼠為一組的若干組，對小鼠進(jìn)行選擇以使體重的分布均勻。動物可隨意獲取食物和水。在處理前的2周給它們喂含有21％脂肪和0.15％膽固醇的西餐式飲食。在這個時期之后，將試驗(yàn)化合物以指定劑量加入到飼料中，處理期為6周。
稱重動物，并在麻醉下通過頸脫位致死。
■在原位灌注心臟然后進(jìn)行制備用于組織學(xué)研究，將針引入右心室并將腹主動脈切片。
■在實(shí)驗(yàn)開始之前采血樣，然后一周一次并在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時采血樣。將血收集到EDTA上。通過在3000rpm離心分離20分鐘制備血漿(用于血漿膽固醇和甘油三酯的測定)。
2.用于組織學(xué)研究的切片制備加入克雷布斯-林格溶液達(dá)10分鐘。將組織在-4℃用在10mMPBS中的4％PAF固定過夜。然后用100mM的PBS洗滌樣品。將心臟在30％的蔗糖-Tris中放置1天，然后在真空下浸入OCT(TissueTeck)中30分鐘，接著放入一個含有OCT的模具(mould)中，浸入異戊烷中并在液氮中冷卻。將樣品在-80℃下貯存。
從主動脈弓切割10μm厚的低溫切片直至瓣膜消失，并收集到明膠涂敷的載玻片上。
3.組織學(xué)分析將載玻片用紅油和蘇木精染色，以便區(qū)分血管中層(media)和內(nèi)膜。不同的形態(tài)參數(shù)借助Olympus顯微鏡和聯(lián)接(hooked up)至圖像分析系統(tǒng)的彩色照像機(jī)加以確定。損傷面積用聯(lián)接至同樣的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)的一個圖形板手動進(jìn)行量化。
粥樣損傷的整個面積用μM2表示，并與對照進(jìn)行對比。試驗(yàn)的本發(fā)明化合物誘導(dǎo)了損傷面積的顯著減小，從而反映出損傷發(fā)展的降低。
實(shí)施例9在體外本發(fā)明化合物對樹突細(xì)胞分化和成熟的效應(yīng)測試了化合物39對于源自單核細(xì)胞的樹突細(xì)胞分化的效應(yīng)(通過監(jiān)測樹突細(xì)胞表型的獲得)。
為了這些實(shí)驗(yàn)，來自志愿者供體的血樣(Etablissement Francaisdu Sang)和單核細(xì)胞利用抗CD14-軛合的磁性小球(Miltenyi Biotec)并通過標(biāo)準(zhǔn)方案加以分離。然后誘導(dǎo)以這種方式分離的單核細(xì)胞，以通過在含有細(xì)胞因子GM-CSF和lL-4的混合物(每種細(xì)胞因子為20ng/ml)的培養(yǎng)基中孵育6天來進(jìn)行分化。
將化合物39在t＝0時加入，并且樹突細(xì)胞表型的獲得是由細(xì)胞表面標(biāo)志物CD1a的表達(dá)來跟蹤。諸位發(fā)明人由此表明化合物39通過幾乎全部抑制在細(xì)胞表面的CD1a的表達(dá)而顯著干擾樹突細(xì)胞的分化(圖21)。共同刺激分子CD80的表達(dá)也在一個較低程度上被減少，而CD86表達(dá)輕微增多(數(shù)據(jù)未示出)。用本發(fā)明化合物13和31獲得同樣的結(jié)果。這些發(fā)現(xiàn)提示本發(fā)明化合物干擾樹突細(xì)胞的分化，并且刺激樹突細(xì)胞傾向于獲得非典型表型。
然后研究了所述化合物對于由LPS(脂多糖)誘導(dǎo)的樹突細(xì)胞成熟的效應(yīng)。為了這些實(shí)驗(yàn)，將在分化的D6獲得的源自單核細(xì)胞的樹突細(xì)胞用本發(fā)明化合物預(yù)處理4小時，然后用LPS刺激16小時。在這種方式中表明，該化合物顯著地干擾了LPS誘導(dǎo)的CCR7受體以及其ELC配體的轉(zhuǎn)錄(圖22)。圖22還表明LPS誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子TNF-α的分泌被顯著減少。
樹突細(xì)胞游動性的關(guān)鍵基因ELC和CCR7表達(dá)的降低提示本發(fā)明化合物抑制樹突細(xì)胞向二級淋巴器官遷移，從而干擾由所述細(xì)胞觸發(fā)的免疫應(yīng)答的引發(fā)。
諸位發(fā)明人因此證實(shí)了用化合物31處理的源自單核細(xì)胞的樹突細(xì)胞具有更低的通過混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)誘導(dǎo)幼稚 CD4+T細(xì)胞增殖的能力(圖23)。為了本實(shí)驗(yàn)，將增加量的成熟樹突細(xì)胞(使用或未使用該化合物處理的)與來自另一供體的固定量的幼稚CD4+T細(xì)胞一起孵育。在孵育5天后，加入BrdU(溴脫氧尿苷)達(dá)24小時并通過用具有偶聯(lián)于化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的抗-BrdU抗體的ELISA來確定BrdU在T細(xì)胞中的結(jié)合。
實(shí)施例10本發(fā)明化合物在卵清蛋白(OVA)誘導(dǎo)的變應(yīng)性哮喘的小鼠模型體內(nèi)的效應(yīng)接著，用卵清蛋白(OVA)誘導(dǎo)的變應(yīng)性哮喘的小鼠模型體內(nèi)分析了本發(fā)明化合物的效應(yīng)。
為了這些實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)的D0和D10，在氫氧化鋁存在下，通過腹膜內(nèi)注射卵清蛋白而使小鼠敏化。從D18到D22，小鼠通過管飼法每天接受本發(fā)明化合物(50mg/kg到200mg/kg)。在D20、D21和D22連續(xù)3天給予氣霧劑形式的卵清蛋白。在每次給藥前約1小時給予該化合物。在D24處死小鼠，并收集支氣管肺泡灌洗液(BAL)以確定細(xì)胞構(gòu)成(巨噬細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞)并檢測細(xì)胞因子IL-5、IL-13、IL-4。
結(jié)果表明本發(fā)明化合物干擾樹突細(xì)胞的分化和成熟，并且抑制所述細(xì)胞遷移到二級淋巴器官。此外，本發(fā)明化合物具有更低的誘導(dǎo)幼稚CD4+T細(xì)胞增殖的能力。本發(fā)明化合物因此干擾免疫應(yīng)答的引發(fā)，并從而成為用于治療哮喘的一種有利治療工具。
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權(quán)利要求
1.用以下通式(I)表示的由取代的1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮衍生的化合物 其中，X7表示對應(yīng)于下式的一個基團(tuán)G7-R7，其中G7是一個氧或硫原子而R7是由來自組1的一個取代基或來自組2的一個取代基所取代的一個烷基鏈，可選地R7也可被一芳基基團(tuán)取代，所述來自組1的取代基選自由具有化學(xué)式-COORa的羧基基團(tuán)、具有化學(xué)式-CONRbRc的氨基甲酰基基團(tuán)或四唑基基團(tuán)構(gòu)成的組，所述來自組2的取代基選自由磺酸基(-SO3H)和具有化學(xué)式-SO2NRbRc的磺酰胺基團(tuán)構(gòu)成的組，其中相同或不同的Ra、Rb和Rc表示一氫原子或一取代或未被取代的烷基基團(tuán)，相同或不同的其中i＝1、2、3、4或5的各Xi基團(tuán)表示一鹵原子或硫代亞硝基基團(tuán)、或分別對應(yīng)于化學(xué)式(Gi-Ri)n-G’i-R’i，其中·n可具有0或1的值，·相同或不同的Gi和G’i表示一單鍵、氧原子或硫原子，·相同或不同的Ri和R’i表示一烷基、鏈烯基、芳基或雜環(huán)基團(tuán)，·R’i也可表示一氫原子，相同或不同的其中i＝6或i＝8的Xi基團(tuán)表示一鹵原子、或?qū)?yīng)于化學(xué)式G’i-R’i，G’i和R’i如上文所定義，X6和X8不同時表示氫原子，i＝1、2、3、4、5、6或8的Xi不表示直接鍵接到該1，3-二苯基丙-2-烯-1-酮的芳環(huán)上的一雜環(huán)，除了用化學(xué)式(I)表示所述化合物，其中同時地·基團(tuán)X1、X2、X3、X4或X5中的一個是羥基基團(tuán)，·G7是一氧原子，·并且基團(tuán)X6或X8中的一個是一氫原子或鹵素或羥基或烷氧基基團(tuán)，除了用化學(xué)式(I)表示所述化合物，其中同時地·X1、X2和X4基團(tuán)同時表示一氫原子，·X6和X8基團(tuán)表示G’iR’i，·X5基團(tuán)表示一硫代亞硝基基團(tuán)或Gi’Ri’基團(tuán)，·X3基團(tuán)表示一鹵素或G’iR’i基團(tuán)，其中，G’i表示一氧原子、硫原子或單鍵而R’i表示一飽和的、直鏈、支鏈或環(huán)狀的鹵化或未鹵化的烷基基團(tuán)，或者一氫原子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于X1和X5是氫原子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2之一所述的化合物，其特征在于X2和X4是烷基基團(tuán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于X1、X3和X4是烷基基團(tuán)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于X1、X2、X4和X5是氫原子。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于X6和X8是烷基基團(tuán)。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求所述的化合物，其特征在于X1和X5是氫原子。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求所述的化合物，其特征在于X2和X4是烷基基團(tuán)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于X1、X3、X4、X6和X8是烷基基團(tuán)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于X6和X8是烷基基團(tuán)而X1、X2、X4和X5是氫原子。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于X3表示一鹵原子或硫代亞硝基基團(tuán)、或?qū)?yīng)于如權(quán)利要求1中所定義的化學(xué)式(Gi-Ri)n-Gi’-R’i，其中G’i表示一氧原子或硫原子。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于所述基團(tuán)Gi或G’i中的至少一個表示一硫原子，其中i取值為1、2、3、4、5、6、7或者8。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于它們選自由下列化合物構(gòu)成的組1-(4-((R，S)-5-[1，2]-二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-巰基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-環(huán)己基乙硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，5-二羥基-3，4，6-三甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，5-二甲氧基-3，4，6-三甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，5-二羥基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-苯基乙氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(嗎啉-4-基乙氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(戊硫基乙氧基)苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(戊硫基乙氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1(4-甲硫基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二溴苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二溴苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-環(huán)己基乙氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-環(huán)己基乙氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-丙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-丙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-己氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-己氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-環(huán)己基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-環(huán)己基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-環(huán)己硫基乙氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-環(huán)己硫基乙氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，4，5-三甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，4，5-三甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-環(huán)己硫基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-環(huán)己硫基乙氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3-氟苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3-氟苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，3，4，5，6-五甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，3，4，5，6-五甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-苯氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-苯氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-氟苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-氟苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-己硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-己硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(3，5-二甲基-4-(嗎啉-4-基乙氧基)苯基)-3-(4-乙氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮鹽酸鹽；1-(3，5-二甲基-4-(嗎啉-4-基乙氧基)苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-溴苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-溴苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-三氟甲基苯基)-3-(4-叔丁氧基羰基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-三氟甲基苯基)-3-(4-羧基二甲基甲氧基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮。
14.用于制備如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所定義的化學(xué)式(I)表示的化合物的方法，其特征在于包括在堿性介質(zhì)或酸性介質(zhì)中將至少一種對應(yīng)于化學(xué)式(A)的化合物和至少一種對應(yīng)于化學(xué)式(B)的化合物進(jìn)行接觸，化學(xué)式(A)和化學(xué)式(B)為 各化學(xué)式中，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7和X8如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所定義，X7還可表示一羥基或硫醇基團(tuán)。
15.中間體化合物，其特征在于它們選自由下列化合物構(gòu)成的組1-(4-(戊硫基乙氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-((R，S)-5-[1，2]二硫雜環(huán)戊-3-基戊氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二溴苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(環(huán)己基乙氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基-3，5-二甲基苯基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(環(huán)己基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(環(huán)己硫基乙氧基)苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，4，5-三甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-(環(huán)己硫基乙氧基)-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲硫基苯基)-3-(4-羥基-3-氟苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，3，4，5，6-五甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-苯氧基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-氟苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-己硫基-3，5-二甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(2，5-二甲氧基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-溴苯基)-3-(4-羥基-3，5-二氟苯基)丙-2-烯-1-酮；1-(4-甲氧基-3-三氟甲基苯基)-3-(4-羥基-3，5-二甲基苯基)丙-2-烯-1-酮。
16.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于作為藥物。
17.一種在藥物可接受載體中的藥物或化妝品組合物，包括至少一種用如權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所定義的通式(I)表示的化合物，可選結(jié)合另外的治療和/或化妝品活性劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物或化妝品組合物，旨在用于治療各種心血管疾病、各種血脂障礙、與X綜合征相關(guān)的各種病征、糖尿病、肥胖癥、高血壓、各種炎性疾病、各種皮膚病(銀屑病、特應(yīng)性皮炎、痤瘡等)、哮喘、與氧化性應(yīng)激有關(guān)的各種障礙，或用于一般性老化，尤其是皮膚老化的治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及取代的1，3－二苯基丙－2－烯－1－酮衍生化合物、含有該化合物的藥物和/或化妝品組合物、及其在治療和化妝品中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及用于制備所述衍生物的方法。
文檔編號C07C323/62GK1930122SQ200580007226
公開日2007年3月14日 申請日期2005年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月8日
發(fā)明者卡里納·科蒙-貝特朗, 讓-弗朗索瓦·德洛梅爾 申請人:基恩菲特公司