專利名稱：：用于抑制chk1的化合物的制作方法用于抑制CHK1的化合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于抑制保持和修復(fù)遺傳物質(zhì)完整性的酶的化合物。更具體地說，本發(fā)明涉及一系列芳基和雜芳基取代的脲化合物，涉及制造該等化合物的方法，和其作為治療劑在治療例如癌癥和特征為脫氧核糖核酸(DNA)復(fù)制、染色體分離或細(xì)胞分裂缺陷的其他疾病中的用途。
背景技術(shù)：
：大量疾病、病癥和病況(下文稱為"適應(yīng)癥")特征為涉及異常增生細(xì)胞。本文所用術(shù)語"異常增生細(xì)胞，，(或"異常細(xì)胞增生")意即偏離正常、適當(dāng)或預(yù)期進(jìn)程的細(xì)胞增生。舉例而言，異常細(xì)胞增生包括不適當(dāng)?shù)募?xì)胞增殖，其中DNA或其他細(xì)胞成分受到損傷或有缺P產(chǎn)'白的適應(yīng)癥不適當(dāng)?shù)母咚郊?xì)胞分裂、不適當(dāng)?shù)牡退郊?xì)胞死亡(例如細(xì)胞凋亡)或二者都有。舉例而言，此等適應(yīng)癥特征為細(xì)胞、細(xì)胞群或組織的單個(gè)或多個(gè)局部異常增殖，包括癌性(良性或惡性)和非癌性適應(yīng)癥。就定義而言，所有癌癥(良性和惡性)都涉及某些異常細(xì)胞增生形式。非限制性實(shí)例包括癌和肉瘤。其他的在下面討論。某些非癌性適應(yīng)癥也涉及異常細(xì)胞增生。涉及異常細(xì)胞增生的非癌性適應(yīng)癥的非限制性實(shí)例包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、白癜風(fēng)、Wegener肉芽腫病和系統(tǒng)性紅斑狼疳。其他的在下面討論。治療涉及異常增生細(xì)胞的適應(yīng)癥的一種方法涉及4吏用DNA損傷劑。這些損傷劑設(shè)計(jì)為通過干擾重要的細(xì)胞過程(例如DNA代謝、DNA合成、DNA轉(zhuǎn)錄和微管紡錘體形成)來殺傷異常增生細(xì)胞。舉例而言，他們也可通過將損傷引入到擾亂染色體結(jié)構(gòu)完整性的DNA來起作用。DNA損傷劑以多種方式來設(shè)計(jì)和給予，以嘗試在異常增生細(xì)胞中誘導(dǎo)最大損傷并隨后使細(xì)胞死亡，而對(duì)正常健康細(xì)胞產(chǎn)生最小的損傷。迄今業(yè)已開發(fā)了大量DNA損傷劑。其他的也正在開發(fā)中。DNA損傷劑包括化療劑和輻射。很不幸，DNA損傷劑治療涉及異常細(xì)胞增生的病癥的效力一直比所期需的低，尤其是在治療癌癥方面。相對(duì)于健康細(xì)胞而言，此等損傷劑針對(duì)異常增生細(xì)胞的選擇性(有時(shí)稱為治療指數(shù))通常勉強(qiáng)夠格。此外，所有細(xì)胞都具有感覺機(jī)制和修復(fù)機(jī)制，其對(duì)DNA損傷劑的處理可能是相互矛盾的。此等感覺機(jī)制稱作細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，幫助維持各個(gè)細(xì)胞復(fù)制階段的次序，確保每一步以高度保真度來執(zhí)行(Hartwell等，ScZe"ce，246:629-634(1989);Weinert等，Ge腦Z)ev.,8:652(1994))。當(dāng)細(xì)胞探測(cè)到DNA損傷、包括由DNA損傷劑有目的地誘導(dǎo)的損傷時(shí)，某些信號(hào)途徑激活細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，則細(xì)胞復(fù)制周期暫時(shí)停止("停滯")。這種停滯使得異常增生細(xì)胞有時(shí)間修復(fù)其DNA,通常修復(fù)到足以使受影響的細(xì)胞繼續(xù)存活和增殖的程度。這種不想要的修復(fù)往往暗中破壞將DNA損傷誘導(dǎo)到足以殺傷異常增生細(xì)胞的努力。舉例而言，稱為Gemzar(吉西他濱或2',2'二氟-2'-脫氧胞苷)的化療劑通過在DNA合成期間將其自身摻入到DNA中來損傷DNA。未經(jīng)修復(fù)的損傷DNA通常變得不能維持生命。然而，在很多靶細(xì)胞中，細(xì)胞周期檢查點(diǎn)探測(cè)到這種不恰當(dāng)?shù)刂圃斓?或相反為損傷的)DNA。激活的細(xì)胞周期檢查點(diǎn)引發(fā)細(xì)胞周期停滯一段足以使損傷的DNA得到修復(fù)的時(shí)間。這是一種其中異常增生細(xì)胞理論上能抵抗DNA損傷劑(例如化療劑、輻射和其他治療)的細(xì)胞殺傷作用的方式。其他DNA損傷劑引起腫瘤細(xì)胞停滯在S期。業(yè)已觀察到當(dāng)給予某些化療劑時(shí)，肺瘤細(xì)胞簡(jiǎn)單地通過停滯在s期來抵抗這些化療劑。那么，一旦除去藥物，馬上修復(fù)DNA損傷，細(xì)胞周期停滯終止，細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行余下的細(xì)胞周期(Shi等，Ca"cw61:1065-1072，2001)。其他治療劑引起細(xì)胞周期停滯在包括Gl和G2在內(nèi)的其他檢查點(diǎn)(在下面更詳細(xì)地闡述)。本文通常將激活細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的DNA損傷劑稱為"檢查點(diǎn)激活劑"。本文將激活叫做"Chkl"(讀作"檢查點(diǎn)-l")的檢查點(diǎn)的DNA損傷劑稱作"Chkl激活劑，，。本文將此等檢查點(diǎn)抑制劑分別概括地和具體地稱為"檢查點(diǎn)抑制劑"和"Chkl抑制劑"。因此，預(yù)期抑制各個(gè)DNA損傷檢查點(diǎn)有助于防止細(xì)胞修復(fù)治療性誘導(dǎo)的DNA損傷，并且使靶細(xì)胞對(duì)DNA損傷劑敏感。進(jìn)而預(yù)期此等敏化作用提高這些治療的治療指數(shù)。為了更好地理解本發(fā)明，下面更詳細(xì)地討論細(xì)胞周期各期和Chkl:的作用。對(duì)于所有真核物種，細(xì)胞周期在其基本過程和調(diào)節(jié)模式方面在結(jié)構(gòu)和功能上是相同的。有絲分裂(體細(xì)胞)細(xì)胞周期由四期組成Gl(間隙)期、S(合成)期、G2(間隙)期和M(有絲分裂)期。Gl、S和G2期統(tǒng)稱為細(xì)胞周期的間期。在G1期期間，細(xì)胞的生物合成活動(dòng)高速進(jìn)行。當(dāng)DNA合成開始時(shí)，S期開始；當(dāng)細(xì)胞核的DNA內(nèi)容物業(yè)已復(fù)制并形成了2套相同的染色體時(shí)，S期結(jié)束。然后細(xì)胞進(jìn)入G2期，該期持續(xù)到有絲分裂開始。在有絲分裂中，染色體配對(duì)、分離，形成2個(gè)新細(xì)胞核，出現(xiàn)胞質(zhì)分裂，其中細(xì)胞分裂為2個(gè)子細(xì)胞，每一個(gè)得到一個(gè)含有2套染色體中的1套的細(xì)胞核。胞質(zhì)分裂結(jié)束了M期，標(biāo)志下一細(xì)胞周期的間期開始。細(xì)胞周期事件發(fā)生的次序受到嚴(yán)格調(diào)控，如此一個(gè)細(xì)胞周期事件的開始由前面細(xì)胞周期事件的完成來決定。這使得遺傳物質(zhì)可從一代體細(xì)胞到下一代體細(xì)胞忠實(shí)地復(fù)制并分離。業(yè)已才艮道，細(xì)胞周期檢查點(diǎn)包含至少3類不同的多肽，其對(duì)細(xì)胞周期信號(hào)或染色體機(jī)制缺陷反應(yīng)而依次發(fā)揮作用(Carr，A.M.,Sc/e"ce,271:314-315(1996))。第一類為探測(cè)或感覺DNA損傷或細(xì)月包周期異常的蛋白質(zhì)家族。這些探測(cè)器包括共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張突變蛋白(Atm)和共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張Rad相關(guān)蛋白(Atr)。第二類多R^大并傳導(dǎo)由探測(cè)器探測(cè)的信號(hào)，以Rad53(Alen等，Dev.8:2416-2488(1994))和Chkl為例。第三類多肽包括細(xì)胞周期效應(yīng)器，例如p53，其介導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)，例如有絲分裂停滯和細(xì)胞凋亡。當(dāng)前對(duì)細(xì)胞周期檢查點(diǎn)功能的理解大多來自對(duì)腫瘤來源的細(xì)胞系的研究。在很多情況下，腫瘤細(xì)胞喪失了關(guān)鍵的細(xì)胞周期檢查點(diǎn)(Hartwell等，Sczewce266:1821-28,1994)。據(jù)報(bào)道，細(xì)胞發(fā)展為瘤狀態(tài)的關(guān)鍵步驟是獲得使細(xì)胞周期檢查點(diǎn)途徑失活的突變，例如涉及p53的突變(Weinberg,R.A.,Ce〃81:323330,1995;Levine,A.J.,Ce〃88:3234331,1997)。喪失這些細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，導(dǎo)致盡管有DNA損傷但腫瘤細(xì)胞仍復(fù)制。具有完整細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的非癌性組織通常因單個(gè)檢查點(diǎn)途徑暫時(shí)中斷而絕緣。然而，胂瘤細(xì)胞在控制細(xì)胞周期進(jìn)展的途徑中具有缺陷，由此對(duì)另外檢查點(diǎn)的干擾使得他們對(duì)DNA損傷劑特別敏感。舉例而言，含有p53突變體的腫瘤細(xì)胞在GlDNA損傷檢查點(diǎn)和維持G2DNA損傷檢查點(diǎn)能力兩方面都有缺陷(Bunz等，S"'e"ce,282:1497-1501,1998)。預(yù)期靶向啟動(dòng)G2檢查點(diǎn)或S期檢查點(diǎn)的檢查點(diǎn)抑制劑可進(jìn)一步削弱這些腫瘤細(xì)胞修復(fù)DNA損傷的能力，因此，它們是提高輻射和全身化療二者之治療指數(shù)的候選者(Gesner,T.,SRIConference摘要ProteinPhosphorylationandDrugDiscoveryWorldSummit,March2003)。當(dāng)有DNA損傷或?qū)NA復(fù)制的任何妨礙存在時(shí)，檢查點(diǎn)蛋白Atm和Atr啟動(dòng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯。業(yè)已表明Atm在對(duì)電離輻射應(yīng)答的DNA損傷檢查點(diǎn)中起作用。Atr受到引起雙鏈DNA斷裂、單鏈DNA斷裂的作用劑和封阻DNA輻射的作用劑所刺激。Chkl是在DNA損傷檢查點(diǎn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中位于Atm和/或Atr下游的蛋白激酶(Sanchez等，Sc/e"ce,277:1497-1501,1997;美國(guó)專利第6,218,109號(hào))。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，Chkl對(duì)引起DNA損傷的作用劑，包括電離輻射、紫外(UV)線和羥基脲(Sanchez等，見上述；Lui等，Ge"^Dev.,14:1448-1459，2000)應(yīng)答而被磷酸化。這種激活哺乳動(dòng)物細(xì)胞的Chkl的磷酸化作用依賴于Atm(Chen等，O"coge"e,18:249-256，1999)和Atr(Lui等，見上述)。另外，業(yè)已表明Chkl使weel(0'Connell等，5M^9丄，16:545-554,1997)和Pdsl(Sanchez等，Sc/e"ce，286:1166-1171,1999)兩者磷酸化，后兩者是已知在細(xì)胞周期控制中很重要的基因產(chǎn)物。這些研究證明，哺乳動(dòng)物Chkl在導(dǎo)致停滯于S期的Atm依賴性DNA損傷檢查點(diǎn)中起作用。最近已闡明Chkl在S期哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的作用(Feijoo等，Ce〃.5/o/.，154:913-923,2001;Zhao等，/WAS[7&4,99:14795-800,2002;Xiao等，J說o/C/^w.,278(24):21767-21773,2003;Sorensen等，C朋cwCe〃,3(3):247-58,2003)，強(qiáng)調(diào)Chkl在監(jiān)測(cè)DNA合成完整性中的作用。Chkl通過使Cdc25A磷酸化來引起S期停滯，Cdc25A調(diào)控細(xì)胞周期蛋白A/cdk2活性(Xiao等，見上述；和Sorensen等，見上述)。Chkl也通過使Cdc25C磷酸化并使其失活來引起G2停滯，Cdc25C是一種雙特異性磷酸酶，通常當(dāng)細(xì)胞從G2進(jìn)展到有絲分裂時(shí)使細(xì)胞周期蛋白B/cdc2(也稱為Cdkl)脫磷酸化(Fernery等，Sc/e"ce,277:1495-7,1997;Sanchez等，見上述；Matsuoka等，Sc/e"ce,282:1893-1897，1998;和Blasina等，C群.A'o/.,9:1-10,1999)。在這兩種情況下，當(dāng)存在DNA損傷或未經(jīng)復(fù)制的DNA時(shí)，對(duì)Cdk活性的調(diào)控誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯，以防止細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂。其他種類的細(xì)胞周期檢查點(diǎn)抑制劑在Gl或G2/M期發(fā)揮作用。UCN-01或7-羥基星形孢菌素最初作為主要作用于蛋白激酶C的非特異性激酶抑制劑4皮分離出來，但近來已發(fā)現(xiàn)其能抑制Chkl活性并取消G2細(xì)胞周期檢查點(diǎn)(Shi等，見上述)。因此，UCN-01為非特異性Chkl抑制劑，并且在高劑量時(shí)對(duì)細(xì)胞有毒。在低劑量時(shí)，其非特異性地抑制很多細(xì)胞激酶，也抑制Gl檢查點(diǎn)(Tenzer和Pruschy,Cwrr.臉dC7e肌顛Z-Ca匿Mge他，3:35-46,2003)。業(yè)已將UCN-Ol與癌癥療法聯(lián)合應(yīng)用，例如與輻射、抗癌藥喜樹堿(Tenzer和Pruschy，見上述)和吉西他濱(Shi等，見上述)聯(lián)合，取得有限的成功。另外，也已將UCN-Ol用于成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞中加強(qiáng)替莫唑胺(TMZ)誘導(dǎo)的DNA錯(cuò)配修復(fù)(MMR)的作用(Hirose等，C朋ceri仏，61:5843-5849,2001)。在臨床上，UCN-01并非如預(yù)期的那才羊?yàn)橛行Щ焺?，可能是由于不能制作治療方案和無法鑒別具體的關(guān)鍵分子革巴(Grant和Roberts,i^wstowceC/;ctoes,6:15-26,2003)。因此，Mack等報(bào)道，UCN-01在培養(yǎng)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中細(xì)月包周期依賴性地增強(qiáng)順鉑的作用，但未鑒別出UCN-01所靶向的關(guān)鍵細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的特異性(Mack等，Ca"cerC/emo^er.尸/^rmaco/.,51(4):337-348,2003)。有幾種使腫瘤細(xì)胞對(duì)影響細(xì)胞周期的化療劑的治療敏感的策略。舉例而言，給予2-氨基-嗓呤可取消多種細(xì)胞周期檢查點(diǎn)機(jī)制，例如含羞草氨酸誘導(dǎo)的Gl停滯或羥基脲誘導(dǎo)的S期停滯，使得細(xì)月包繼續(xù)進(jìn)入并通過有絲分裂(Andreassen等，尸raciV加/Sc/86:2272-2276,1992)。也已將咖啡因即曱基黃嘌呤用于通過介導(dǎo)穿越G2檢查點(diǎn)的進(jìn)程并由此誘導(dǎo)細(xì)胞死亡(Bmcey等，C"力.OwcerRes.,3:1371-1381,1997)，增強(qiáng)DNA損傷劑(例如順鉑和電離輻射)的細(xì)胞毒性。然而，用于實(shí)現(xiàn)取消細(xì)胞周期的咖啡因劑量超過臨床上可接受水平，因而不能作為可使用的治療選擇。另外，已將Chkl激酶的反義核苦酸用于增加對(duì)拓樸異構(gòu)酶抑制劑BNP1350的敏感性(Yin等,說oc;ew.A'o;/2^s.Cowmw".,295:435-44,2002)，4旦證明存在有通常與反義治療和基因治療相關(guān)的問題。Chkl抑制劑也已揭示于WO02/070494、WO04/014876和WO03/101444中。另外的Chkl抑制劑包括二芳基脲化合物，例如揭示于美國(guó)專利公開號(hào)2003-0069284Al中的芳基和雜芳基取代的脲化合物；曱基黃嘌呤和相關(guān)的化合物(Fan等，C^cw55:1649-54(1995);脲基噻吩(WO03/029241);N-吡咯并吡啶曱酰胺(WO03/28724);反義Chkl核苷酸(WO01/57206);Chkl受體拮抗劑(WO00/16781);芳雜基羧酰胺衍生物(WOO3/037886》氨基蓉吩(WO03/029242);(吲唑基)苯并咪唑(WO03/004488);雜環(huán)-羥基亞^J^國(guó)藥(WO02/16326);含scytoneman主鏈的衍生物(scytonemin)(美國(guó)專利第6,495,586號(hào))；雜芳基苯曱酰胺(WO01/53274);吲唑化合物(WO01/53268);吲咮并?？ㄟ?參見Tenzer等，見上述)；苯并二氬吡喃書亍生物(WO02/070515);paullones(Schultz等，《/.A/W.C/^m.，42:2909-2919(1999》；茚并吡唑(WO99/17769);黃酮(Sedlacek等，/脫/C>"co/.,9:1143-1168(1996);絲氨酸蘇氨酸激酶肽環(huán)的肽衍生物(WO98/53050);和羥叼l咮(WO03/051838)。然而，本領(lǐng)域仍需要有效和具有選擇性的Chkl抑制劑。本發(fā)明致力解決這一問題和滿足其他需要。發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明涉及檢查點(diǎn)激酶Chkl的有效并具有選擇性的抑制劑。本發(fā)明Chkl抑制劑用于治療涉及異常細(xì)胞增生的適應(yīng)癥，并且在治療與DNA損傷或DNA復(fù)制中的損害有關(guān)的適應(yīng)癥中用作化療每文化劑和放射敏化劑。因此，本發(fā)明一方面提供結(jié)構(gòu)式(I)化合物。該等化合物用于抑制Chkl的方法，該方法包括將有效量的結(jié)構(gòu)式(I)化合物給予個(gè)體這一步驟。式(I)化合物具有下面的結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>其中X'為不存在、-O-、-S-、-012-或-1^(111)-;乂2為-0-、-S-或-N(R。-;Y為O或S;或=丫代表2個(gè)連接到共用碳原子的氬原子；W選自雜芳基、芳基和被雜芳基或芳基取代的C^烷基，其中(a)所述W的芳基或雜芳基用CF3和雜芳基中的至少一個(gè)取代；(b)所述基團(tuán)W的芳基任選被由W代表的1-3個(gè)取代基取代；和(c)所述基團(tuán)W的雜芳基任選被由115代表的1-3個(gè)取代基取代；R'選自氫、C"6烷基、(:2.6烯基、<:2.6炔基和芳基；W選自雜芳基、鹵素、任選取代的&.6烷基、C^烯基、OCF3、N02、CN、NC、N(R3)2、OR3、C02R3、C(0)N(R3)2、C(O)R3、N(R"COR3、N(R"C(0)OR3、N(R》C(0)C卜6亞烷基C(O)R3、N(R')C(0)C卜6亞烷基C(O)OR3、N(R')C(0)CV6亞烷基OR3、N(R》C(0)C,.6亞烷基NHC(O)OR3、N(R》C(0)C"6亞烷基S02NR3、(^6亞烷基OR3和SR3;W選自氫、鹵素、C^烷基、(:2.6烯基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、C02R4、S02R4;被鹵素、羥基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基、N(R4)2和S02R4中的一個(gè)或多個(gè)取代的<^.6烷基；C^亞烷基芳基、C卜6亞烷基雜芳基、(^.6亞烷基(:3.8雜環(huán)烷基、Cw亞烷基S02芳基、任選取代的CV6亞烷基(R4)2、OCF3、CV6亞烷基N(R4)3+、C3.8雜環(huán)烷基和CH(C^亞烷基N(R4)2)2，或2個(gè)R基共同形成任選取代的3-6元脂肪族環(huán)；R4選自氬、Cl6坑基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、C^亞烷基芳基和S02Cw烷基，或2個(gè)W基共同形成任選取代的3-6元環(huán)；R5選自C^烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基、N(R3)2、OR3、卣素、N3、CN、Cw亞烷基芳基、CL6亞烷基N(R3)2、C(O)R3、C(O)OR3、C(0)N(R3)2、N(R"C(0)R3、N(R"C(0)OR3、CF,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>R6選自O(shè)R11、-OC-R7和雜芳基；R7選自氫、(^.6烷基、芳基、C^亞烷基芳基、雜芳基、C^亞烷基雜芳基、烷氧基；R8、R9和R"獨(dú)立選自氫、鹵素、任選取代的CV6烷基、(^2.6烯基、Q-6炔基、0CF3、CF3、N02、CN、NC、N(R3)2、OR3、C02R3、C(0)N(R3)2、C(O)R3、N(R"COR3、N(R')C(0)OR3、N(R8)C(0)OR3、N(R')C(0)C"6亞烷基C(O)R3、N(R"C(0)Cl6亞烷基C(O)OR3、N(R"C(0)Cl6亞烷基OR3、N(R"C(0)Cl6亞烷基NHC(O)OR3、N(R')C(0)C,.6亞烷基S02NR3、Cw亞烷基OR3和SR3;R"選自氬、C^烷基、C^烯基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、S02R4;被卣素、羥基、芳基、雜芳基、N(R、和S02^中的一個(gè)或多個(gè)取代的C^烷基；C^亞烷基芳基、C^亞烷基雜芳基、Cl6亞烷基C3_8雜環(huán)烷基、Cl6亞烷基S02芳基、任選取代的Cl6亞烷基N(R4)2、OCF3、CV6亞烷基N(R4)3+、C3.8雜環(huán)烷基和CH(Cw亞烷基-N(R4)2)2;或其藥物上可接受鹽或前藥或溶劑化物。本發(fā)明另一方面提供包含一種或多種結(jié)構(gòu)式(I)化合物的藥物組合物和該組合物在治療性治療疾病或病況中的用途，其中體內(nèi)或離體抑制Chkl提供治療益處，或具有研究或診斷利益。本發(fā)明再一方面提供使正經(jīng)受化療或放療治療醫(yī)學(xué)病癥的個(gè)體的細(xì)胞敏化的方法，包括將結(jié)構(gòu)式(I)化合物與化療劑、放療劑或這二者聯(lián)合給予該個(gè)體。由該方法治療的非限制性適應(yīng)癥為癌癥。本發(fā)明另一方面提供抑制或預(yù)防異常細(xì)胞增生的方法。在一實(shí)施方案中，方法包括使包含異常增生細(xì)胞的細(xì)胞群與至少一種Chkl激活劑接觸，激活劑的量和作用時(shí)間足以使異常增生細(xì)胞的細(xì)胞周期停滯基本上同步。一旦在細(xì)胞群中達(dá)到細(xì)胞周期停滯基本同步，則使該細(xì)胞群與至少一種Chkl抑制劑接觸，抑制劑的量和作用時(shí)間足以基本上取消該細(xì)胞周期停滯。本發(fā)明這些和其他方面將從下面詳述的優(yōu)選實(shí)施方案中明顯可見。其中X'為不存在、-O-、-S-、-012-或^(111)-;乂2為-0-、-3-或-:^(111)-;Y為O或S;或-Y代表2個(gè)連接到共用碳原子的氫原子；W選自雜芳基、芳基和被雜芳基或芳基取代的C"6烷基，其中(a)所述基團(tuán)W的芳基或雜芳基被C&和雜芳基中的至少一個(gè)取代；(b)所述基團(tuán)W的芳基任選被由RM氣表的1-3個(gè)取代基取代；和(c)所述基團(tuán)W的雜芳基任選被由Rs代表的1-3個(gè)取代基取代；W選自氫、C^烷基、C^烯基、C^炔基和芳基；W選自雜芳基、卣素、任選取代的C^烷基、<:2.6烯基、OCF3、N02、CN、NC、N(R3)2、OR3、C02R3、C(0)N(R3)2、C(O)R3、N(R!)COR3、N(R')C(0)OR3、N(R')C(0)CV6亞烷基C(O)R3、N(R。C(0)Cl6亞烷基C(O)OR3、N(R"C(0)C,.6亞烷基OR3、N(R')C(0)Cl6亞烷基NHC(O)OR3、N(R')C(0)CV6亞烷基S02NR3、亞烷基OR3和SR3;W選自氫、鹵素、C"6烷基、C^烯基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、C02R4、S02R4;被卣素、羥基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基、N(R4)2優(yōu)選實(shí)施方案詳述本發(fā)明化合物具有結(jié)構(gòu)式(I):和S02R4中的一個(gè)或多個(gè)取代的C^烷基；C^亞烷基芳基、C^亞烷基雜芳基、<:1.6亞烷基。3.8雜環(huán)烷基、c^亞烷基so2芳基、任選取代的Cw亞烷基(R4)2、OCF3、Cw亞烷基N(R4)/、C3.8雜環(huán)烷基和CHCC^亞烷基N(R4)^,或2個(gè)RS基共同形成任選取代的3-6元脂肪族環(huán)；!^選自氫、C^烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、&.6亞烷基芳基和S02Cw烷基，或2個(gè)R"基共同形成任選取代的3-6元環(huán)；R5選自C^烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基、N(R3)2、OR3、卣素、N3、CN、Cw亞烷基芳基、Cw亞烷基N(R3)2、C(O)R3、C(O)OR3、C(0)N(R3)2、卿)C(0)R3、N(R!)C(0)OR3、CF,R6選自O(shè)R11、-(^0117和雜芳基；R選自氫、C^烷基、芳基、C卜6亞烷基芳基、雜芳基、C^亞烷基雜芳基、烷氧基；R8、R9和R^獨(dú)立選自氫、卣素、任選取代的C^烷基、(:2.6烯基、(32-6炔基、OCF3、CF3、N02、CN、NC、尊3)2、OR3、C02R3、C(0)N(R3)2、C(O)R3、N(R')COR3、N(R)C(0)OR3、N(R8)C(0)OR3、N(R!)C(0)Cl6亞烷基C(O)R3、N(R"C(0)Cl6亞烷基C(O)OR3、N(R!)C(0)Cl6亞烷基OR3、N(R"C(0)Cl6亞烷基NHC(O)OR3、N(R》C(0)CV6亞烷基S02NR3、亞烷基OR3和SR3;R"選自氬、C^烷基、。2.6烯基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、S02R4;被卣素、羥基、芳基、雜芳基、N(R和302114中的一個(gè)或多個(gè)取代的C^烷基；C^亞烷基芳基、C^亞烷基雜芳基、CV6亞烷基C3.8雜環(huán)烷基、Cw亞烷基S02芳基、任選取代的Cw亞烷基N(R4)2、OCF3、CV6亞烷基N(R4)3+、C3.8雜環(huán)烷基和CH(Cw亞烷基-N(R4)2)2;和其藥物上可接受鹽或前藥或溶劑化物。本發(fā)明優(yōu)選化合物為下述化合物，其中X1和X2為-N(H)-;Y為O或S;和優(yōu)選W為雜芳基。在一實(shí)施方案中，W為含有至少2個(gè)選自N、O和S的雜原子的雜芳基，所述雜芳基環(huán)任選^L一或兩個(gè)選自任選取代的C"6烷基、芳基、雜芳基、N(R3)2、OR3、C(0)N(R3)2、C02R3、CN和卣素的取代基取代，其中113如前所定義。其他優(yōu)選結(jié)構(gòu)式(I)化合物為下述化合物，其中W選自噠嗪基、嘧吱基、吡溱基和三嗪基，其任選被一或兩個(gè)選自C^烷基、芳基、雜芳基、N(R3)2、C(0)N(R3)2、C02R3、OR3和卣素的取代基取代。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，W選自下列結(jié)構(gòu)式其任選被l-4個(gè)選自(^.6烷基、C^炔基、芳基、雜芳基、CN、C02R3、N(R3)2、OR3和卣素的取^J^取代。在更優(yōu)選實(shí)施方案中，W為或N。在最優(yōu)選實(shí)施方案中，w為吡溱基，而^和x2各自為N(H)。在其他優(yōu)選實(shí)施方案中，W上的雜芳基取代基和R6的雜芳基獨(dú)立選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>本文所用術(shù)語烴基，通常為甲基烷基"包括含有指定碳原子數(shù)目的直鏈和支鏈乙基和直連與支鏈丙基和丁基。除非另外指出，否則該烴基可含有高達(dá)20個(gè)碳原子。術(shù)語"烷基"包括"橋聯(lián)烷基"，即CVC^二環(huán)或多環(huán)烴基，例如降冰片烷基、金剛烷基、二環(huán)[2.2.2]辛基、二環(huán)[2.2.1]庚基、二環(huán)[3.2.1]辛基或十氫萘基。烷基任選可4支例如羥基(OH)、鹵素、芳基、雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、氨基(N(R3)2)和磺?；?302113)取代，其中113如前所定義。術(shù)語"環(huán)烷基"定義為環(huán)狀(33.8烴基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)己基或環(huán)瓦基。除了該環(huán)含有l(wèi)-3個(gè)獨(dú)立選自氧、氮和硫的雜原子外，"雜環(huán)烷基"定義與環(huán)烷基相似。環(huán)烷基和雜環(huán)烷基可為任選被1-3個(gè)獨(dú)立選自C^烷基、C"3亞烷基OH、C(0)NH2、NH2、氧代(-O)、芳基、三氟乙酰基和OH取代的飽和或部分不飽和環(huán)系統(tǒng)。雜環(huán)烷基可任選進(jìn)一步被C^烷基、羥基C^烷基、Cl3亞烷基芳基或Cw亞烷基雜芳基進(jìn)行N-取代。除了含有碳-碳雙鍵外，術(shù)語"烯基"的定義同"烷基"。除了含有碳-碳三鍵外，術(shù)語"炔基，，的定義同"烷基，，。術(shù)語"亞烷基"是指含有取代基的烷基。舉例而言，術(shù)語"C^亞烷基C(O)OR"是指被-C(O)OR基取代的含有l(wèi)-6個(gè)碳原子的烷基。亞烷基任選被一個(gè)或多個(gè)前面列作任選為烷基取代基的取代基取代。本文術(shù)語"卣素"("halo"或"halogen")定義為氟、溴、氯和碘。單獨(dú)或聯(lián)合的本文術(shù)語"芳基"定義為單環(huán)或多環(huán)芳香基，優(yōu)選單環(huán)或二環(huán)芳香基，例如苯基或萘基。除非另外指出，否則芳基可以是未被取代的，或例如被一個(gè)或多個(gè)(尤其是1-4個(gè))獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代鹵素、cm烷基、<:2.6烯基、OCF3、N02、CN、NC、N(R3)2、OR3、C02R3、C(0)N(R3)2、C(O)R3、N(R')COR3、N(R"C(0)OR3、N(R。C(0)OR3、N(R)C(0)C卜3亞烷基C(O)R3、N(R。C(0)Cl3亞烷基C(O)OR3、N(R')C(0)Cw亞烷基OR3、N(R"C(0)Cw亞烷基NHC(O)OR3、N(R》C(0)Cw亞烷基S02NR3、C卜3亞烷基OR1和SR3，其中W和W如前所定義。例示性芳基包括但不限于苯基、萘基、四氫萘基、氯苯基、甲基苯基、甲氧基苯基、三氟甲基苯基、硝苯基基、2,4-甲氧基氯苯基等等。術(shù)語"芳基Cw烷基"和"雜芳基Q.3烷基"定義為含Cw烷基取代基的芳基或雜芳基。術(shù)語"雜芳基"定義為含有1或2個(gè)芳香環(huán)且在芳香環(huán)中含有至少1個(gè)氮、氧或硫原子的單環(huán)或二環(huán)環(huán)系統(tǒng)。除非另外指出，否則雜芳基可以是未被取代的，或例如被一個(gè)或多個(gè)(尤其是1-4個(gè))選自Cw烷基、芳基、雜芳基、CF3、CN、C(0)N(R3)2、C02R2、N(R3)2、OW和囟素的取代基取代，其中W如前所定義。雜芳基實(shí)例包括但不限于漆吩基、呋喃基、吡啶基、嚼唑基、喹啉基、異喹啉基、吲咪基、三溱基、三唑基、噻唑基、異瞎唑基、咪唑基(imidizolyl)、苯并p塞峻基、吡嗪基、嘧咬基、p塞唑基和遙二唑基。術(shù)語"氫"定義為-H。術(shù)語"羥基"定義為-OH。術(shù)語"硝基"定義為-N(V術(shù)語"氰基"定義為-CN。術(shù)語"異氰基"定義為-NC。術(shù)語"三氟甲氧基"定義為-OCF3。術(shù)語"疊氮基"定義為-N^本文所用術(shù)語"3-8元環(huán)"是指碳環(huán)和雜環(huán)脂肪族基團(tuán)或芳香基團(tuán)，包括但不限于嗎啉基、吡咬基、苯基、噻汾基(thiophenyl)、呋喃基、吡咯基、咪唑基、嗜啶基和吡啶基，任選被一個(gè)或多個(gè)(尤其是1-3個(gè))上面芳基的例示性基團(tuán)取代。含烴部分的碳原子數(shù)量由該部分碳原子下方標(biāo)定的最小和最大數(shù)目來表示，例如"CL6烷基"是指具有1-6個(gè)碳原子的烷基，包括1和6個(gè)碳原子。在本文結(jié)構(gòu)式中，對(duì)于未標(biāo)出取代基的鍵來說，該取代基為甲基，例如為當(dāng)未指出連接到環(huán)上碳原子的取代基時(shí)，應(yīng)該理解該碳原子含有適當(dāng)數(shù)目的氫原子。另外，例如當(dāng)未指出連接到羰基或氮原子的取代基時(shí)，應(yīng)該理解該取代基為氫，例如0o11為11AR-C為R-C-H，R-N為R-NH2縮寫"Me"為甲基?？s寫CO和C(O)為羰基(C-O)。符號(hào)N(R》(其中x代表字母或數(shù)字，例如Ra、Rb、R3、W等等)用于表示兩個(gè)連接到共用氮原子的Rx基。當(dāng)使用此符號(hào)時(shí)，『基可相同或不同，選自由Rx基所定義的基團(tuán)。"Chkl抑制劑"意即已知的或以后發(fā)現(xiàn)的能夠至少部分取消Chkl蛋白的細(xì)胞周期檢查點(diǎn)活性的任何化合物，不管其是天然存在或是人工合成的。當(dāng)戰(zhàn)勝細(xì)胞的檢查點(diǎn)機(jī)制，足以使細(xì)胞通過本來中斷的細(xì)胞周期的某期進(jìn)入下一期時(shí)，或使細(xì)胞直接進(jìn)行到細(xì)胞死亡時(shí)，就達(dá)到了取消細(xì)胞周期檢查點(diǎn)。取消細(xì)胞周期檢查點(diǎn)使得細(xì)胞可攜帶損傷或缺陷進(jìn)入后來的細(xì)胞周期各期，由此誘導(dǎo)或促進(jìn)細(xì)胞死亡。細(xì)胞死亡可通過任何聯(lián)合沖幾制發(fā)生，包括細(xì)胞凋亡和有絲分裂災(zāi)難。"Chkl激活劑"意即已知或以后發(fā)現(xiàn)的能夠激活DNA修復(fù)和細(xì)胞周期檢查點(diǎn)穩(wěn)態(tài)中的Chkl激酶活性，其由此誘導(dǎo)至少部分細(xì)胞周期停滯的任何作用劑。Chkl激活劑包括能夠在細(xì)胞周期的任一期停滯細(xì)胞周期的作用劑，本文可稱該期為該激活劑的"靶期"。靶期包括除有絲分裂期外的任一細(xì)胞周期的期，即Gl期、S期和G2期。用于本發(fā)明的Chkl激活劑包括DNA損傷劑，例如化療劑和/或輻射(或"放療劑")，例如電離輻射或紫外輻射。Chkl輻射激活劑包括但不限于Y輻射、X-射線輻射、紫外線、可見光、紅外輻射、微波輻射和其混合。"抑制異常細(xì)胞增生"意即減慢或消除異常增生細(xì)胞增殖的速度。這種抑制可來自復(fù)制速率降低、細(xì)胞死亡率增加或這二者。細(xì)胞死亡可通過任何機(jī)制發(fā)生，包括細(xì)胞凋亡和有絲分裂災(zāi)難。"預(yù)防異常細(xì)胞增生"意即在發(fā)生之前抑制異常細(xì)胞增生，或抑制其復(fù)發(fā)。"體內(nèi)，，意即在有生命的受治療者體內(nèi)，如在動(dòng)物或人類體內(nèi)。在該方面，作用劑可治療性用于受治療者以延遲或消除異常復(fù)制細(xì)胞的增殖。該等作用劑也可用作預(yù)防以防止異常細(xì)胞增生發(fā)生或復(fù)發(fā)，或防止與其有關(guān)的癥狀表現(xiàn)。"離體"意即在活有生命的受治療者外。離體細(xì)胞群實(shí)例包括體外細(xì)胞培養(yǎng)物和來自人類或動(dòng)物的生物樣品，例如流液樣品或組織樣品?？赏ㄟ^本技術(shù)熟知的方法獲得此等樣品。例示性生物學(xué)流液樣品包括血液、腦脊髓液、尿液、唾液。例示性組織樣品包括腫瘤和其活組織切片。在該方面，本發(fā)明化合物可在治療和實(shí)驗(yàn)兩方面有多種應(yīng)用。本文所用術(shù)語"放射敏化劑"定義為以治療有效量給予人類或其他動(dòng)物，以增加細(xì)胞對(duì)電磁輻射的敏感性和/或促進(jìn)可用電磁輻射治療的疾病的治療的化合物。本文所用術(shù)語"電磁輻射"和"輻射"包括但不限于10-20到100納米波長(zhǎng)的輻射。本發(fā)明包括結(jié)構(gòu)式(I)化合物所有可能的立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體。本發(fā)明不僅包括外消旋化合物，而且也包括旋光異構(gòu)體。當(dāng)期望結(jié)構(gòu)式(I)化合物為單對(duì)映異構(gòu)體時(shí)，可通過拆分終產(chǎn)物獲得，或通過從異構(gòu)純的原材料或使用手性輔助試劑立體定向合成，例如參見Ma等，r"ra/2^ra":As3/mme^y,8(6),第883-888頁(1997)。通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法可完成終產(chǎn)物、中間體或原材料拆分。另外，可能有結(jié)構(gòu)式(I)化合物互變異構(gòu)體的情況下，本發(fā)明意欲包括該等化合物的所有互變異構(gòu)體形式。如下文所證明，定向立體異構(gòu)體與化療或放療聯(lián)合可表現(xiàn)出異常的抑制Chkl的能力。結(jié)構(gòu)式(I)化合物的前藥也可作為本發(fā)明方法中的化合物。已完全確定，，將化合物衍生為適于配制和/或給予的形式然后作為藥物在體內(nèi)釋放的前藥途徑，已成功地用于暫時(shí)(例如生物可逆地)改變?cè)摶衔锏奈锢砘瘜W(xué)特性(參見H.Bimdgaard編者"DesignofProdrugs,"Elsevier,Amsterdam,(1985);Silverman,"TheOrganicChemistryofDrugDesignandDrugAction,"AcademicPress,SanDiego，chapter8,(1992);Hillgren等,MM.M版,15,83(1995》。本發(fā)明化合物可含有一種或多種官能團(tuán)。需要或必要時(shí)，可修飾該官能團(tuán)以提供前藥。舉例而言，合適的前藥包括酸衍生物，例如酰胺和酯類。本領(lǐng)域技術(shù)人員也會(huì)認(rèn)識(shí)到，N-氧化物可用作前藥。'本文所用術(shù)語"藥物上可接受鹽"是指含有酸性部分并形成具有合適陽離子鹽的結(jié)構(gòu)式(I)化合物。合適的藥物上可接受陽離子包括堿金屬離子(例如鈉或鉀)和堿土金屬(例如釣或鎂)陽離子。另外，含有堿性中心的結(jié)構(gòu)式(I)化合物的藥物上可接受鹽為與藥物上可接受酸形成的酸加成鹽。非限制性實(shí)例包括鹽酸鹽、氪溴酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、乙酸鹽、苯曱酸鹽、琥珀酸鹽、延胡索酸鹽、馬來酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽葡糖酸鹽、曱磺酸鹽、苯磺酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽。根據(jù)前述，只要提及本文出現(xiàn)的本發(fā)明化合物，意欲包括結(jié)構(gòu)式(I)化合物以及其藥物上可接受鹽或溶劑化物。本發(fā)明化合物可作為純化學(xué)藥品治療性給予，但也可作為藥物組合物或制劑來給予結(jié)構(gòu)式(I)化合物。因此，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含式(I)化合物與藥物上可接受稀釋劑或載體。也提供制備藥物組合物的方法，包括將式(I)化合物與藥物上可接受稀釋劑或栽體混合。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供藥物制劑，其包含結(jié)構(gòu)式(I)化合物或其藥物上可接受鹽、前藥或溶劑化物與一種或多種藥物上可接受栽體和任選其他治療組分和/或預(yù)防組分。該等載體在與該制劑的其他組分相容并對(duì)其接受者無毒的意義上為"可接受"。舉例而言，此等載體可在尺em/"gtow's尸/2armacew"C(3/S"'ewces,MackPublishingCo.,Easton,PA.(1985)中找到。通常用劑量反應(yīng)測(cè)定測(cè)量檢查點(diǎn)激酶的抑制，其中讓敏感的測(cè)定系統(tǒng)與一定濃度范圍的目的化合物接觸，所述濃度范圍包括未觀查到效果的濃度或觀察到最小效果的濃度，經(jīng)由觀察到部份效果的較高濃度，到觀察到最大效果的飽和濃度。理論上，抑制劑化合物的劑量反應(yīng)效果的此等測(cè)定可描述為S形曲線，其表示作為濃度函數(shù)的抑制程度。該曲線理論上也通過濃度足以降低檢查點(diǎn)酶活性到測(cè)定的最小和最大酶活性差額的50%的水平的點(diǎn)。該濃度定義為"抑制濃度(50%)"或"IC5。"值。可用常規(guī)生化(非細(xì)胞)測(cè)定技術(shù)或基于細(xì)胞的測(cè)定技術(shù)來完成IC5。值的測(cè)定。抑制劑功效的比較通常參考對(duì)比ICs。值來提供，其中較高IC5Q表明該試驗(yàn)化合物比參比化合物物的功效小，而較低1。5。表明該化合物比參比化合物物的功效大。當(dāng)用劑量反應(yīng)測(cè)定測(cè)量時(shí)，本發(fā)明化合物表現(xiàn)出ICs。值小于5|iM,低至0.1nM。優(yōu)選化合物表現(xiàn)出500nM的ICs。值或更小。更優(yōu)選本發(fā)明化合物表現(xiàn)出ICs。值小于250nM或更小，100nM或更小，50nM或更小，20nM或更小。優(yōu)選的本發(fā)明Chkl抑制劑具有選擇性，即在抑制Chkl方面表現(xiàn)出至少為下列蛋白激酶20倍的選擇性蛋白激酶A、蛋白激酶C、cdc2和pp60v-src。更優(yōu)選的本發(fā)明Chkl抑制劑在抑制Chkl方面優(yōu)選表現(xiàn)出至少為下列蛋白激酶75倍的選擇性蛋白激酶A、蛋白激酶C、cdc2和pp60v-src。最優(yōu)選的本發(fā)明Chkl抑制劑表現(xiàn)出至少為蛋白激酶A、蛋白激酶C、cdc2、pp60v-src、蛋白激酶B/Akt-1、p38MapK、ERK1、p70S6K、cdc2、cdk2、Chk2和abl酪氨酸激酶的100倍的選擇性。"倍選擇性"定義為用于比較的激酶的Chkl抑制劑的iq。除以作用于Chkl的Chkl抑制劑的IC50。適用于本發(fā)明的化合物和藥物組合物包括其中給予有效量的活性組分以達(dá)到其計(jì)劃目的的化合物和藥物組合物。更具體地講，"治療有效量，，意即足以治療患有適應(yīng)癥的個(gè)體或減輕該適應(yīng)癥現(xiàn)有癥狀的量。測(cè)定治療有效量完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員能力范圍內(nèi)，尤其是在根據(jù)本文提供的詳細(xì)說明情況下。除了Chkl抑制劑外，本發(fā)明藥物組合物可與包括細(xì)胞因子、淋巴因子、生長(zhǎng)因子、其他造血因子或其混合物調(diào)配，以降低單獨(dú)給予該藥物組合物所產(chǎn)生或與其有關(guān)的不利副作用。在本發(fā)明藥物組合物中尤其有用的細(xì)胞因子、淋巴因子、生長(zhǎng)因子或其他造血因子包括但不限于M隱CSF、GM國(guó)CSF、TNF、IL-1、IL國(guó)2、IL-3、IL-4、IL-5、IL國(guó)6、IL-7、IL畫8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IFN、TNF、G-CSF、Meg-CSF、GM-CSF、血小板生成素、干細(xì)胞因子、紅細(xì)胞生成素、血管生成素(包才舌Ang-l、Ang-2、Ang-4、Ang-Y和/或人血管生成素樣多肽)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、血管生長(zhǎng)素、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-1(BMP-l)、BMP-2、BMP-3、BMP國(guó)4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-8、BMP-9、BMP誦IO、BMP-ll、BMP-12、BMP-13、BMP-14、BMP-15、BMP受體IA、BMP受體IB、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體細(xì)胞因子誘導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞趨化因子1、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞趨化因子2、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞趨化因子2、內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、內(nèi)皮素1、表皮生長(zhǎng)因子、上皮細(xì)胞來源的嗜中性粒細(xì)胞引誘劑、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF8b、FGF8c、FGF9、FGF10、酸性FGF、堿性FGF、膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體1、膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體2、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白、肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體、胰島素樣生長(zhǎng)因子I、胰島素樣生長(zhǎng)因子受體、胰島素樣生長(zhǎng)因子n、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白、角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子、白血病才中制因子、白血病抑制因子受體、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-3、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-4、胎盤生長(zhǎng)因子、胎盤生長(zhǎng)因子2、血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子A鏈、血小板衍生生長(zhǎng)因子AA、血小板衍生生長(zhǎng)因子AB、血小板衍生生長(zhǎng)因子B鏈、血小板衍生生長(zhǎng)因子BB、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體、前B細(xì)胞生長(zhǎng)刺激因子、干細(xì)胞因子、干細(xì)胞因子受體、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)、TGF、TGF1、TGF1.2、TGF2、TGF3、TGF5、潛在TGF1、TGF、結(jié)合蛋白I、TGF結(jié)合蛋白II、TGF結(jié)合蛋白III、腫瘤壞死因子受體I型、腫瘤壞死因子受體II型、尿激酶型纖溶酶原激活劑受體、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和嵌合蛋白和其生物學(xué)或其免疫活性片段。性質(zhì)的輔助部份綴合或連接。此等綴合物可增進(jìn)將該等化合物遞送到特定解剖學(xué)位點(diǎn)或目的區(qū)域(例如腫瘤)，使得在靶細(xì)胞中有持續(xù)的治療濃度化合物，改變?cè)摰然衔锏乃幋鷮W(xué)和藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)，和/或改進(jìn)該等化合物的治療指數(shù)或安全性模式。舉例而言，合適的輔助部分包括氨基酸、寡肽或多肽，例如抗體，例如單克隆抗體和其他工程抗體；和輩巴細(xì)胞或組織受體的天然或人工配體。其他合適的輔助部分包括促進(jìn)該化合物生物分布和/或靶細(xì)胞吸收該化合物的脂肪酸或脂類部分(例如參見Bradley等，Ca"cerRes.(2001)7:3229)。本發(fā)明制劑可以標(biāo)準(zhǔn)方式給予用于治療指出的疾病，例如通過口服、胃腸外、透過粘膜(例如舌下或通過口腔含化給予)、局部、透皮、直腸或吸入(例如鼻腔或肺部深處吸入)給予。胃腸外給予包括但_不限于以靜^I^內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、鞘內(nèi)和關(guān)節(jié)內(nèi)方式給予。胃腸外給予也可用高壓技術(shù)如POWDERJECTtm來完成。對(duì)于口服給藥和口腔含化給藥，組合物可為用常規(guī)方式調(diào)配的片劑形式或錠劑形式。舉例而言，用于口服給藥的片劑和膠嚢劑可含有常規(guī)賦形劑，例如粘合劑(例如糖漿、阿拉伯樹膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、淀粉漿或聚乙烯吡咯烷酮)、填充劑(例如乳糖、蔗糖、糖、微晶纖維素、玉米淀粉、磷酸鈣或山梨醇)、潤(rùn)滑劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、聚乙二醇或硅石)、崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或乙醇酸淀粉鈉)或潤(rùn)濕劑(例如十二烷基硫酸鈉)。片劑可按照本技術(shù)熟知方法包衣?；蛘撸e例而言，本發(fā)明化合物可加入到為口服液體制劑(例如水性或油性混懸劑、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑)中。此外，含有這些化合物的制劑可呈現(xiàn)為干制品，用于在使用前用水或其他合適的溶蟲某重建。此等液體制劑可含有常^見添加劑，例如懸浮劑，例如山梨醇糖漿、甲基纖維素、葡萄糖/糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羥丙基曱基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠和氫化食用脂肪；乳化劑，例如卵^疇脂、山梨坦單油酸酯或阿拉伯樹膠；非水性溶媒(可包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、油性酯、丙二醇和乙醇；和防腐劑，例如對(duì)羥基苯曱酸甲酯或乙酯和山梨酸。此等制劑也可配制為栓劑，例如含有常規(guī)栓劑基質(zhì)，例如可可油或其他甘油酯。用于吸入的組合物通常可以溶液、混懸劑或乳狀液的形式來提供，其可作為干粉或以用常規(guī)拋射劑例如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷的氣霧劑形式來給予。典型的局部和透皮制劑，例如滴眼劑、霜?jiǎng)⒏鄤?、洗劑和糊劑，包含常?guī)水性或非水性溶々某或?yàn)榧佑兴幬锏母嗨?、貼劑或膜劑形式。另外，本發(fā)明組合物可配制用于通過注射或連續(xù)輸注胃腸外給予。于注射用制劑可為存于油性或水性溶媒的混懸劑、溶液或乳狀液的形式，可含有調(diào)配劑，例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘?，活性組分可以千粉形式用于在使用前與合適的溶媒(例如無菌、無熱原水)重建。也可將本發(fā)明組合物配制為緩釋制劑?？赏ㄟ^植入(例如皮下或肌內(nèi))或通過肌內(nèi)注射給予此等長(zhǎng)效制劑。因此，本發(fā)明化合物可用合適的聚合材料或疏水材料(例如存于可接受油中的乳狀液)、離子交換樹脂或微溶性衍生物(例如微溶性鹽)調(diào)配。對(duì)于獸醫(yī)應(yīng)用，式(I)化合物或其藥物上可接受鹽、前藥或溶劑化物，可作為與標(biāo)準(zhǔn)獸醫(yī)實(shí)踐一致的合適的可接受制劑來給予。獸醫(yī)可易于確定最適于特定動(dòng)物的給藥方案和給藥途徑?？捎帽景l(fā)明的化合物和方法治療的動(dòng)物包括但不限于寵物、家畜、觀賞動(dòng)物和動(dòng)物園4羊本。合成方法通過下面的合成流程可制備本發(fā)明化合物。原材料可從商業(yè)來源得到，或通過本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所知的已確立的文獻(xiàn)方法來制備。除非下面另外注明，否則X、R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、Rw和R"基團(tuán)如上所定義。『如上所定義，也包括下面合成流程中的c&和雜芳基。流程1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula如流程l所示，可通過用堿例如D正A和二苯基磷酰疊氮處理乂人式6化合物制備式4化合物。該反應(yīng)的典型溶劑為THF,反應(yīng)在防爆屏蔽后于室溫下進(jìn)行1-12小時(shí)。流程2流程2展示式5化合物的可供選擇的合成。用式7化合物處理式3化合物，式7化合物按流程3來制備。有用的非限制性溶劑為DMF,反應(yīng)溫度保持在室溫和60°C之間約1-12小時(shí)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>如流程3所示，可在堿例如吡啶存在下，通過用氯曱酸芳基酯(例如氯曱酸苯酯或氯曱酸對(duì)硝基苯酯)處理，從式8化合物制備式7化合物。用于該反應(yīng)的非限制性溶劑包括CH2C12或吡啶，溫度從0°C到室溫。流程4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>流程4展示得到式3化合物的方法。在堿性水溶液例如碳酸氫鈉、碳酸鉀或磷酸鉀存在下，通過用芳基硼酸和4巴(0)源(例如四(三苯基膦)合釔)處理，將式1化合物轉(zhuǎn)化為式2化合物。用于該反應(yīng)的非限制性溶劑實(shí)例包括THF、二喊烷或乙二醇二甲醚。該反應(yīng)通常在0°C和90。C之間溫度下進(jìn)行約1-12小時(shí)。舉例而言，在披4巴碳、披鉑碳或鋅存在下，將式2化合物轉(zhuǎn)化為式3化合物。用于該反應(yīng)的溶劑實(shí)例包括但不限于曱醇、乙醇或乙酸?；蛘?，用催化劑例如二氯雙三(苯基膦)合鈀或任何其他鈀(O)源，可將式1化合物用于使末端炔11芳基化。反應(yīng)通常在存在堿例如三曱胺時(shí)于室溫到90°C之間的不同溫度下進(jìn)行。此外，可從式9化合物得到的，其中X為三氟甲磺酸(即tf)式1化合物。典型的試劑包括三氟曱磺酸酐或N-苯基triflimide。該反應(yīng)通常在-10。C和室溫之間的溫度下進(jìn)行。非限制性溶劑實(shí)例為二氯甲烷。非限制性堿實(shí)例為三乙胺或二異丙基乙胺。流程5H<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>R10流程5闡明式5化合物的可供選擇的合成。根據(jù)流程2所示程序，可將式3化合物轉(zhuǎn)化為式10化合物。然后才艮據(jù)流程4所示程序，可將式10化合物轉(zhuǎn)化為式5化合物。流程6X—R41<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>如流程6所示，可通過用堿(例如碳酸鉀、三乙胺或氫氧化鈉)處理，接著加入R11X(其中X為卣化物、甲磺酸基或曱苯磺酸基)，將式11化合物轉(zhuǎn)化為式12化合物。用于該反應(yīng)的溶劑實(shí)例包括DMF、THF、CH2Cl2和其混合物。該反應(yīng)在0°C和100°C之間的溫度下進(jìn)行約15分鐘到12小時(shí)?；蛘?，可將式11化合物與式RHX化合物混合，其中X為羥基，用存于溶劑例如THF中的三苯基膦和偶氮二曱酸二異丙酯處理所得到的混合物，得到式12化合物?？稍诖呋瘎?例如氧化鉑物、披4e^友或阮內(nèi)鎳)存在下用氫氣處理式12化合物，或在金屬鋅存在下用酸源(例如飽和氯化銨水溶液或鹽酸水溶液)處理式12化合物，得到式13化合物。用于該反應(yīng)的溶劑實(shí)例包括甲醇、乙醇、乙酸乙酯或其混合物。該反應(yīng)通常在室溫或室溫以下的溫度進(jìn)行1-12小時(shí)。可通過讓式13化合物與式4化合物(如流程1所述制備)化合來制備式15化合物。用于該反應(yīng)的溶劑實(shí)例包括甲苯、苯和二甲苯。該反應(yīng)在60°C-100°C溫度下進(jìn)行5-12小時(shí)。流程7流程7展示了式15化合物的可供選擇的合成。用式7化合物處理式3化合物，式7化合物按流程3制備?？墒褂玫囊环N溶劑為DMF，反應(yīng)溫度保持在室溫和60。C之間，反應(yīng)時(shí)間為1-12小時(shí)。流程8流程8展示了式15化合物的可供選擇的合成方法。在堿例如氪化鈉、雙(三甲基硅烷基傳基鉀或正丁鋰存在下用醇處理，可將式19化合物轉(zhuǎn)化為式12化合物。用于該反應(yīng)的溶劑實(shí)例包括THF或二乙醚。該反應(yīng)通常在-15。C和室溫之間的溫度下進(jìn)行約1-6小時(shí)。按流程6所示程序?qū)⑹?2化合物轉(zhuǎn)化為式15化合物.2223流程9展示化合物21和23的可供選擇的合成?？捎昧鞒?或流程6所示程序合成化合物20,其中R2=Br。在堿性水溶液例如石灰酸氫鈉、碳酸鉀或磷酸鉀存在下，用雜芳基硼酸(HetB(OH)》和釔(0)源(例如四(三苯基膦)合4巴)處理，可將化合物20轉(zhuǎn)化為化合物21。用于該反應(yīng)的非限制性溶劑實(shí)例包括THF、二嗨烷或乙二醇二甲醚。該反應(yīng)通常在0。C和90。C之間的溫度下進(jìn)行約l-12小時(shí)?；蛘?，可用雜芳基錫酸鹽例如(HetSn(Bu)》代替雜芳基硼酸。舉例而言，在石威例如三乙胺或Hunig氏堿存在下，用氰化鋅和4巴(0)源(例如四(三苯基膦)合釔)處理，也可將化合物21轉(zhuǎn)化為22。用于該反應(yīng)的非限制性溶劑實(shí)例為DMF和DME，在80°C反應(yīng)1-12小時(shí)?；蛘撸稍赑d(O)源(例如四(三苯基膦)合釔)和銅源(例如碘化銅)存在下，用氰化鉀從化合物21得到化合物22。該反應(yīng)通常在室溫和200。C之間的溫度下進(jìn)行約30分鐘到5小時(shí)。用于該反應(yīng)的非限制性溶劑實(shí)例包括DMF。最后，在堿例如三乙胺存在下，用例如疊氮鈉，可將化合物22轉(zhuǎn)化為化合物23。用于該反應(yīng)的非限制性溶劑實(shí)例包括DMF或硝基苯。該反應(yīng)通常在80。C和100。C之間的溫度進(jìn)行約1-5小時(shí)。以下提供結(jié)構(gòu)式(I)化合物具體的非限制性實(shí)例，其合成按照下面提出的和共同待審的美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2003-0069284Al(在此引作參考)中所述的方法來實(shí)施。本文所述合成中所用的縮寫為小時(shí)(h)、水@20)、硫酸鎂(MgS04)、鹽酸(HC1)、二曱亞砜(DMSO)、偶氮二曱酸二異丙酯(DIAD)、二氯甲烷(012(:12)、氯仿(CHCl3)、甲醇(MeOH)、氫氧化銨(NH4OH)、氘代氯仿(CDCl3)、四氫呋喃(THF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸(AcOH)、氫氧化鈉(NaOH)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)、二曱亞砜(DMSO)、二乙醚(Et20)、碳酸鈉(Na2C03)、碳酸氫鈉(NaHC03)、硝酸(HN03)、氯化鈉(NaCl)、硫酸鈉(忖3^04)、二曱基甲酰胺(DMF)、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)和N,N-二異-丙基乙胺(DIEA)。中間體1:在室溫下于氮?dú)庵袑IEA(31.7mL,181mmol)加入到存于5405-曱基-吡#~2-羰基疊氮mLTHF的攪拌的5-曱基-吡"秦-2-曱酸(25g,181mmol)懸浮液中，得到棕色溶液。然后在防爆屏蔽后經(jīng)1小時(shí)逐滴加入存于50mLTHF的二苯基磷?；B氮(39.2mL,181mmol)溶液。將該反應(yīng)物攪拌過夜。然后在室溫下將該反應(yīng)物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)到小體積，在Et20(1L)和H20(1L)之間分配。用2x250mLEtp反萃取H20層，用2x1L飽和碳酸氬鈉洗滌合并的有機(jī)物。干燥(MgSOJ該有機(jī)物，過濾，濃縮為固體塊，用Et20研磨，得到產(chǎn)物，為黃色固體(15g,50%)?？赏ㄟ^將xg粗產(chǎn)物溶于20xmLEt20中并用l-2xg脫色炭在室溫處理幾分鐘，分離得到較純的化合物。過濾和濃縮后，將該物質(zhì)在EtOAc中用TLC表明為均質(zhì)，為純白色?；厥章释ǔ?5。/。?；衔?:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>1-[2-(哌啶-3-基曱氧基)-5-三氟甲基-苯基]-3-(5-三氟甲基-吡嗪-2-基)-脲鹽酸鹽步驟1:3-[2-(4-硝基-苯M^羰基氨基)-4-三氟甲基-苯氧基曱基]-哌啶-l-曱酸叔丁酯。在氮?dú)庵杏?。C將吡啶(57uL，0.71mmol)加入到存于2mLCH2C12的攪拌的3-(2-氨基-4-三氟曱基-苯氧基甲基)-哌p定-l-曱酸叔丁酯(240mg,0.64mmol)溶液中，接著加入對(duì)氯甲酸對(duì)硝基苯酯(130mg,0.64mmol)。在0。C1小時(shí)后，用012(:12將該反應(yīng)混合物稀釋到30mL，然后用2x30mL2NHC1洗滌，用1x30mL水洗滌，用1x30mL鹽水洗滌。干燥(MgS04)該有機(jī)物，過濾，濃縮為灰白色泡沫狀物。步驟2:3-{4-三氟曱基-2-[3-(5-三氟甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯氧基曱基卜哌啶-l-甲酸叔丁酯。將3-[2-(4-硝基-苯氧基羰基M)-4-三氟甲基-苯氧基曱基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(217mg,0.4mmol)和5-三氟曱基-吡"秦-2-基胺(66mg,0.4mmol)(按美國(guó)專利第4,293,552號(hào)的方法制備)在5mL反應(yīng)瓶中作為固體混合，用400uLNMP稀釋，蓋上蓋子，作為暗黃色溶液攪拌，然后浸入85°C油浴中攪拌6小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻到室溫，攪拌過夜。然后于80。C在0.5mm壓力下通過Kugelrohr蒸餾除去NMP。用CH2C12將棕色殘留物稀釋到30mL，然后用3x30mL1MNasCC^洗滌以除去對(duì)硝基酚。干燥(MgS04)有機(jī)物，過濾，濃縮為粗制固體，用EtOAc研磨，過濾，得到所期需的產(chǎn)物，為白色固體。步驟3:于室溫將存于二嚼烷(2mL)的2NHC1加入到有蓋燒瓶中存于2mL二嗨烷的攪拌的3-[2-(4-硝基-苯氧基^J^氨基)-4-三氟甲基-苯氧基曱基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(60mg,0.11mmol)溶液中，將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和高真空濃縮所得到的懸浮液，:得到對(duì)應(yīng)于終產(chǎn)物的黃色固體(57mg,99%)。！H-NMR(400MHz,d6-DMSO)5:11.18(brs,1H),9.91(s，1H),9.13(s,1H),8.79(s，1H),8.62(brs,1H),8.57(s,1H)，7.43(d，1H)，7.25(d,1H)，4.18(m,2H),3.44(m,1H),3.23(m，1H),2.86(m,2H),2.36(m,1H),1.96(m,1H),1.83(m，1H),1.67(m,1H),1.42(m,1H)。L腹S(apci，陽離子才莫式)m/e464.3(M+l)。化合物2:l-[5-曱基-2-(哌啶-3-基曱氧基)-苯基]-3-(5-三氟曱基-吡嗪-2-基)-脲鹽酸鹽步驟l:按化合物1的步驟2程序，從3-[4-甲基-2-(4-硝基-苯氧基羰基M)-苯氧基甲基]-哌啶小曱酸叔丁酉旨(WO02/070494)制備3-{4-甲基-2-[3-(5-三氟甲基-吡嗪-2-基)-脲基]-苯M^曱基}-哌"定-1-曱酸^k丁酯。分離該產(chǎn)物，為白色固體。步驟2:按化合物1的步驟3程序，從3-{4-曱基-2-[3-(5-三氟甲基-吡溱-2-基)-脲基]-苯氧基甲基}-哌啶-1-曱酸叔丁酯制備化合物2。分離該終產(chǎn)物，為黃色固體(30mg,99%)。'H-NMR(400MHz,d6-DMSO)5:10.86(s,1H),9.61(s,1H)，9.05(s,1H),8.77(s,1H),8.58(brs,1H),7.98(s,1H),6.98(d,1H),6.83(d,1H),3.99(m,2H),3.40(m,1H)，3.23(m,1H),2.81(m，2H),2.23(m,1H),2.22(s,3H),1.91(m，1H),1.80(m,1H)，1.62(m,1H),1.39(m,1H)。LRMS(apci,陽離子模式)m/e410.4(M+l)?；衔?:1-[5-曱基-2-(1-曱基-哌啶-3-基曱氧基)-苯基]-3-(5-三氟曱基-他嗪-2-基)-脲按化合物1的步驟2程序，從[5-甲基-2-(l-甲基-哌啶-3-基曱氧基)-苯基]-氨基甲酸4-硝基-苯酯(WO02/070494)制備化合物3,為白色固體。'H醫(yī)NMR(400MHz,CDC13)5:11.01(brs,1H)，8.87(brs,1H),8.82(s,1H),8.44(s,1H),8.17(s,1H),6.84(d,1H),6.76(d,1H),3.84(m,2H),3.16(m，1H),2.81(m,1H),2.37(s,3H),2.29(m,1H)，2.20(s,3H),1.99(m,1H),1.87-1.62(m,4H),1.11(m,1H)。LRMS(apci,陽離子模式)m/e424.3(M+l)。另外的本發(fā)明非限制性化合物闡明如下?；衔?<formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula>化合物5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula>化合物6<formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula>化合物7化合物8治療方法可將本發(fā)明化合物用于加強(qiáng)輻射和/或化療劑的治療效果，這些輻射和/或化療劑用于治療癌癥和其他涉及真核細(xì)胞的細(xì)胞增生適應(yīng)癥，包括人類和其他動(dòng)物中的適應(yīng)癥。舉例而言，可將本發(fā)明化合物用于增強(qiáng)通常用抗代謝物例如甲氨蝶呤或5-氟尿嘧啶(5-FU)治療的腫瘤的治療。一般而言，本發(fā)明化合物抑制癌性和非癌性兩種情況的異常增生細(xì)胞。使用本發(fā)明化合物可導(dǎo)致異常增生細(xì)胞部分或完全消退，即此等細(xì)胞從細(xì)胞群部分或完全消失。因此，舉例而言，當(dāng)異常增生細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞時(shí)，可將本發(fā)明方法用于減慢胂瘤生長(zhǎng)速度，縮小腫瘤大小或減少其數(shù)量，或誘導(dǎo)腫瘤部分或完全消退。在所有實(shí)施方案中，本發(fā)明可在沒有識(shí)別出異常細(xì)胞增生或沒有正在發(fā)生異常細(xì)胞增生、分別懷疑或預(yù)期有異常細(xì)胞增生時(shí)在體內(nèi)或離體使用。此外，本發(fā)明也可在從前已治療過的異常細(xì)胞增生的任何地方使用，以防止或抑制異常細(xì)胞增生復(fù)發(fā)。在這些和有關(guān)的實(shí)施方案中，"包含異常增生細(xì)胞的細(xì)胞群"是指其中尚未鑒定出或正在發(fā)生異常細(xì)胞增生，但分別懷疑或預(yù)期其有異常細(xì)胞增生的任一細(xì)胞群，和/或從前治療過異常細(xì)胞增生以防止或抑制異常細(xì)胞增生復(fù)發(fā)的任一細(xì)胞群。本發(fā)明的一種方法包括聯(lián)合給予治療有效量的本發(fā)明Chkl抑制劑化合物與化療劑，該化療劑可實(shí)現(xiàn)單鏈或雙鏈DNA斷裂，或可阻止DNA復(fù)制或細(xì)胞增生。或者，本發(fā)明方法包括聯(lián)合給予治療有效量的至少一種本發(fā)明Chkl抑制劑化合物與包括使用具有抑制癌癥細(xì)胞增殖活性的抗體例如曲妥單抗的療法。因此，癌癥(例如結(jié)腸直腸癌、頭頸癌、胰腺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、外陰癌、白血病、淋巴瘤、黑素瘤、腎細(xì)胞癌、卵巢癌、腦瘤、骨肉瘤和肺癌)對(duì)通過聯(lián)合給予本發(fā)明Chkl抑制劑與化療劑或抗體的增強(qiáng)治療敏感。癌癥包括腫瘤或贅生物，它們是其中細(xì)胞繁殖不受控制和連續(xù)不斷的組織細(xì)胞的生長(zhǎng)。某些此等生長(zhǎng)為良性，但其他的被稱為"惡.性，，，可引起有機(jī)體死亡。惡性腫瘤或"癌癥"不同于良性生長(zhǎng)，因?yàn)槌憩F(xiàn)出進(jìn)攻性的細(xì)胞增殖外，還可侵入周圍組織并轉(zhuǎn)移。此外，惡性腫瘤特征為表現(xiàn)出丟失較多的細(xì)胞分化(更多"去分化")和彼此相關(guān)的結(jié)構(gòu)和周圍組織。這種性質(zhì)被稱為"退行發(fā)育。"本發(fā)明可治療的癌癥也包括實(shí)體瘤，即癌和肉瘤。癌包括源自上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，其浸潤(rùn)(即侵入)周圍組織，并產(chǎn)生轉(zhuǎn)移。腺癌為源自腺組織或形成可識(shí)別的腺結(jié)構(gòu)之組織的癌。另一種大類的癌癥包括肉瘤，這是其細(xì)胞埋入纖維狀物質(zhì)或同種物質(zhì)(例如胚胎結(jié)締組織)的腫瘤。本發(fā)明也能治療骨髓或淋巴同種物質(zhì)系統(tǒng)的癌癥，包括白血病、淋巴瘤和通常不以腫瘤實(shí)塊存在而是分布在脈管系統(tǒng)或淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)的其他癌癥。Chkl活性例如在以下方面與各種癌癥形式有關(guān)成人和兒童腫瘤學(xué)、實(shí)體瘤/惡性腫瘤的生長(zhǎng)、粘液樣圓細(xì)胞癌癥、局部晚期腫瘤、轉(zhuǎn)移性癌癥、人軟組織肉瘤(包括Ewing氏肉瘤)、癌癥轉(zhuǎn)移(包括淋巴細(xì)胞性轉(zhuǎn)移)、鱗狀上皮細(xì)胞癌(尤其是頭頸癌、食管鱗狀細(xì)胞癌、口腔癌)、血細(xì)胞惡性病變(包括多發(fā)性骨髓瘤、白血病(包括急性淋巴細(xì)胞白血病、急性非淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、十曼性骨髓性白血病和毛細(xì)胞白血病))、滲出性淋巴瘤(以體腔為主的淋巴瘤)、胸腺淋巴肺癌(包括小細(xì)胞癌、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、腎上腺皮質(zhì)癌、產(chǎn)生ACTH的腫瘤、非小細(xì)胞癌、乳腺癌、包括小細(xì)胞癌和導(dǎo)管癌)、胃腸癌(包括胃癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌和與結(jié)直腸瘤形成相關(guān)的息肉)、胰腺癌、肝癌、泌尿系統(tǒng)癌(包括膀胱癌，例如原發(fā)性淺表性膀胱瘤、侵襲性膀胱移行細(xì)胞癌和肌侵襲性膀胱癌)、前列腺癌、女性生殖道惡性腫瘤(包括卵巢癌、原發(fā)性腹膜上皮瘤、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、陰道癌、外陰癌、子宮癌和卵泡實(shí)體瘤)、男性生殖道惡性病變(包括睪丸癌和陰莖癌)、腎癌(包括腎細(xì)胞癌)、腦癌(包括內(nèi)部腦瘤(intrisicbraintumor)、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞腦瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和侵襲到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞)、骨癌(包括骨瘤和骨肉瘤)、皮膚癌(包括惡性黑素瘤、人類皮膚角質(zhì)細(xì)胞的腫瘤進(jìn)展和鱗狀上皮細(xì)胞癌)、曱狀腺癌、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、腹水、惡性胸腹水、間皮瘤、Wilms氏腫瘤、膽嚢癌、滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤、血管外皮細(xì)胞瘤和卡波西肉瘤。因此>預(yù)期給予本發(fā)明Chkl抑制劑可提高治療計(jì)劃的效果。本發(fā)明化合物也可加強(qiáng)藥物治療炎性疾病的功效?？蓮呐c適于本發(fā)明方法的化合物聯(lián)合治療得到益處的疾病實(shí)例為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、白癜風(fēng)、Wegener肉芽腫病和系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)。關(guān)節(jié)炎、Wegener肉芽腫病和SLE的治療通常涉及使用免疫抑制療法，例如電離輻射、曱氨蝶呤和環(huán)磷酰胺。此等治療通常直接或間接誘導(dǎo)DNA損傷。對(duì)損壞了的免疫細(xì)胞中Chkl活性的抑制使得該等細(xì)胞對(duì)這些標(biāo)準(zhǔn)治療的控制更敏感。通常用紫外輻射(UV)與補(bǔ)骨脂素聯(lián)合治療牛皮癬和白癜風(fēng)。本發(fā)明DNA損傷劑誘導(dǎo)UV和補(bǔ)骨脂素的殺傷作用，提高該治療方案的治療指數(shù)。一般而言，當(dāng)用于本發(fā)明方法的化合物與目前使用的免疫抑制藥物聯(lián)合時(shí)，可加強(qiáng)對(duì)炎性疾病細(xì)胞的控制。除了上面揭示的癌癥外，本發(fā)明也可用于治療非癌性增生細(xì)胞的方法中。此等病癥包括但不限于動(dòng)脈粥樣硬化癥、再狹窄、脈管炎、腎炎、視網(wǎng)膜病、腎病、增生性皮膚病、牛皮癬、瘢痕形成、光化性角化病、Stevens-Johnson綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、系統(tǒng)發(fā)作型青少年慢性關(guān)節(jié)炎(JCA)、骨質(zhì)疏松癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、眼過度增生病(包括上皮向根端遷徙、增生性玻璃體視網(wǎng)膜病(PVR))、糖尿病性視網(wǎng)膜病(diabeticretropathy)、Hemangio增生病、魚鱗病或乳頭狀瘤。一種給予本發(fā)明Chkl抑制劑的優(yōu)選方法闡述于Keegan等，美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第60/503,925號(hào)(于2003年9月17日提出申請(qǐng)，其整體內(nèi)容在此引作參考)中。用于抑制異常細(xì)胞增生的此等方法涉及給予Chkl激活劑(例如化療劑)和本發(fā)明Chkl抑制劑的方案。在該方法中，至少一種Chkl激活劑以在增生細(xì)胞中足以誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯基本同步的劑量和時(shí)間來給予。一旦達(dá)到細(xì)胞周期基本同步，則給予至少一種Chkl抑制劑以消除細(xì)胞周期停滯，誘導(dǎo)治療性細(xì)胞死亡。該方法可與任何Chkl激活劑同用，可應(yīng)用于治療或預(yù)防癌性和非癌性異常細(xì)胞增生?？墒巩惓Ｔ錾?xì)胞群與一種Chkl抑制劑接觸，或與超過一種Chkl抑制劑接觸。若使用超過一種Chkl抑制劑，則該等Chkl抑制劑可由主治醫(yī)生或?qū)嶒?yàn)技術(shù)人員決定同時(shí)給予或在不同的時(shí)間給予。也可讓異常增生細(xì)胞群與一種Chkl激活劑接觸，或與超過一種的Chkl激活劑接觸。若使用超過一種Chkl激活劑，則該等Chkl激活劑可由主治醫(yī)生或?qū)嶒?yàn)技術(shù)人員決定同時(shí)給予或在不同的時(shí)間給予。可將本發(fā)明Chkl抑制劑用于研究或改進(jìn)離體細(xì)胞群的行為。舉例而言，可將本發(fā)明化合物離體用于確定最佳給藥方案，和/或確定將Chkl抑制劑給予特定適應(yīng)癥、細(xì)胞類型、患者的劑量，以及確定其他參數(shù)。從此等應(yīng)用中收集的信息可用于實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，或用于在臨床上設(shè)計(jì)體外治療方案。本發(fā)明合適的其他離體的應(yīng)用對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見。本發(fā)明的Chkl抑制劑化合物也可使細(xì)胞對(duì)放射變得敏感。可用電磁輻射治療的疾病包括腫瘤性疾病、良性和惡性腫瘤與癌細(xì)胞。本文未列舉的電磁輻射治療也涵蓋于本發(fā)明。本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案采用的電磁輻射有Y輻射(10氣10"3111)、X-射線輻射(10"M0-19m)，紫外線(IOnm-400nm)、可見光(400nm-700nm)、紅外輻射(700nm-l.Omm)和微波輻射(lmm-30cm)。目前很多癌癥治療方案采用電磁輻射例如X-射線激活的放射敏化劑。X射線激活的放射敏化劑實(shí)例包括但不限于下列曱硝唑、米索硝唑、去曱米索硝唑、哌莫硝唑、依他硝唑、尼莫唑、絲裂霉素C、RSU1069、SR4233、E09、RB6145、煙酰胺、5-溴脫氧尿苷(BUdR)、5-碘脫氧尿苷(IUdR)、溴脫氧胞苷、氟脫氧尿苷(FUdR)、羥基脲、順鉑和以上物質(zhì)治療上有效的類似物和衍生物。劑。光動(dòng)力學(xué)放射敏化劑實(shí)例包括但不限于下列血卟啉衍生物、PHOTOFRIN、苯并卟啉衍生物、NPe6、初卟啉錫(SnET2)、pheoborbide誦a、細(xì)菌葉綠素-a、naphthalocyanines、肽菁、肽菁鋅和以上物質(zhì)治療上有效的類似物和衍生物。除Chkl抑制劑以外，放射敏化劑還可與一種或多種治療有效量的化合物聯(lián)合給予，此等化合物包括但不限于，促進(jìn)放射敏化劑摻入到耙細(xì)胞的化合物，控制治療劑、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和/或氧流入到靶細(xì)胞的化合物，在有或無另外輻射或?qū)χ委煱┌Y或他疾病治療有效的其他化合物時(shí)對(duì)腫瘤起作用的化療劑?？捎糜谂c放射敏化劑組合的另外治療劑實(shí)例包括但不限于5-氟尿嘧啶(5-FU)、亞葉酸、氧、卡波金(carbogen)、紅細(xì)胞輸入、全氟化碳(例如FLUOSOL頃-DA)、2,3-DPG、BW12C、鈣通道阻滯劑、己酮可可堿、抗血管生成化合物、肼屈溱和L-BSO?？墒褂玫幕焺┌ǖ幌抻谕榛瘎?、抗代謝物、激素和其拮抗劑、放射線同位素、抗體以及天然產(chǎn)物和其組合。舉例而言，本發(fā)明抑制劑化合物可與以下物質(zhì)聯(lián)合給予抗生素，例如多柔比星和其他蒽環(huán)霉素類似物；氮芥，例如環(huán)磷酰胺；嘧啶類似物，例如5-氟尿嘧啶；順鉑；羥基脲；泰素和其天然和合成衍生物等等。作為另一實(shí)例，在混合腫瘤(例如乳腺癌，其中腫瘤包括依賴促性腺激素和不依賴促性腺激素的細(xì)胞)情況下，所述化合物可與亮丙立德或戈舍瑞林(人工合成的LH-RH肽類似物)聯(lián)合給予。其他抗肺瘤方案包括抑制劑化合物與其他治療形式聯(lián)合應(yīng)用，例如外科手術(shù)或輻射，本文也稱為"輔助抗肺瘤形式"。用于本發(fā)明的其他化療劑包括激素和其拮抗劑、放射性同位素、抗體、天然產(chǎn)物和其組合。用于本發(fā)明方法的化療劑實(shí)例列入下表中。<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>(<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>抗性激素氟他胺促性腺激素釋放素激素類似物亮丙立德非類固醇抗雄性激素氟他胺光敏劑血p卜啉衍生物Photofrin苯并卟啉衍生物Npe6初卟啉錫(SnET2)pheoboride-a細(xì)菌葉緣素-anaphthalocyanines敞菁酞菁鋅生長(zhǎng)因子受體拮抗劑EGFR拮抗劑HER-2拮抗劑尤其可用于與放射敏化劑聯(lián)合的化療劑實(shí)例包括例如喜樹堿、卡鉑、順鉑、柔紅霉素、多柔比星、干擾素(a、P、力、伊立替康、羥基脲、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲氨蝶呤、2-氯腺苷、氟達(dá)拉濱、氮雜胞苷、吉西他濱、培美曲塞、白介素-2、伊立替康、多西他賽、紫杉醇、托泊替康和以上物質(zhì)治療上有效的類似物和衍生物。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明化合物可用于與吉西他濱聯(lián)合，或與吉西他濱和紫杉醇聯(lián)合。本發(fā)明化合物也可用于與培美曲塞聯(lián)合，或與培美曲塞和順鉑、卡鉑或其他鉑類聯(lián)合。本發(fā)明Chkl抑制劑也可與吉西他濱和培美曲塞聯(lián)合給予。與吉西他濱聯(lián)合給予的本發(fā)明Chkl抑制劑，可用于治療例如胰腺癌、子宮平滑肌肉瘤、骨肉瘤、轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌、四肢和軀干軟組織肉瘤、腎細(xì)胞癌、腺癌和霍奇金病?？蓪⑴c培美曲塞聯(lián)合給予的本發(fā)明Chkl抑制劑可用于治療間皮瘤。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解，本文提及治療時(shí)延伸到預(yù)防以及治療已確定的疾病或綜合癥。提及治療時(shí)也指降低增生速率或減少已治療的適應(yīng)癥的復(fù)發(fā)。應(yīng)進(jìn)一步了解，用于治療所需要的本發(fā)明化合物的量，隨待治療的病癥的特性和患者的年齡和病癥而變化，其最終由主治醫(yī)生或獸醫(yī)決定。然而，一般而言，成人治療用的給藥劑量通常在每天0.001mg/kg到約100mg/kg范圍內(nèi)?？梢詥蝿┝炕蛞院线m的間隔多劑量方便地給予所期需的量，舉例而言，每天給予2次、3次、4次或更多亞劑量。實(shí)踐中由醫(yī)生來決定最適于個(gè)體患者的實(shí)際給藥方案，該劑量隨特定患者的年齡、體重和反應(yīng)來確定。上迷劑量為一般病例的例示性劑量，但個(gè)別情況可存在應(yīng)給較高或較低劑量，此等均在本發(fā)明范圍內(nèi)?？梢杂帽景l(fā)明Chkl抑制劑以足以達(dá)到基本取消細(xì)胞周期檢查點(diǎn)的任意劑量和時(shí)間接觸該等細(xì)胞群。盡管不必要但通常此等時(shí)間包括長(zhǎng)達(dá)約72到約96小時(shí)，其^f見各種因素而定。在某些實(shí)施方案中，如主治醫(yī)生或技術(shù)人員所決定，長(zhǎng)達(dá)約幾周或更長(zhǎng)時(shí)間給予Chkl抑制劑是理想的或必要的。因此，本發(fā)明Chkl抑制劑通?？梢砸韵聲r(shí)間來給予達(dá)到約1小時(shí)，達(dá)到約2小時(shí)，達(dá)到約3小時(shí)，達(dá)到約4小時(shí)，達(dá)到約6小時(shí)，達(dá)到約12小時(shí)，達(dá)到約18小時(shí)，達(dá)到約24小時(shí)，達(dá)到約48小時(shí)，或達(dá)到約72小時(shí)。本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，本文所示時(shí)間范圍僅為例示性，在該等所示以內(nèi)或以外的范圍或子范圍也在本發(fā)明范圍內(nèi)。可以多種劑量給予本發(fā)明Chkl抑制劑。舉例而言，可以以下頻率來給予Chkl抑制劑以4天間隔每天將1劑量分4次遞送(q4dx4);以3天間隔每天將1劑量分4次遞送(q3dx4);以5天間隔每天遞送1劑量(qdx5);3周間每周遞送1劑量(qwk3);5天每天給藥，2天休息，又另外每天給藥5天(5/2/5);或所定的對(duì)情況適合的任何其他給藥方案。實(shí)施例實(shí)施例1測(cè)定Chkl抑制劑的IC工值如先前國(guó)際申請(qǐng)公告第WO99/11795號(hào)(1998年9月4日提出申請(qǐng))中所述來鑒別和克隆人ChklcDNA。將FLAG②標(biāo)記按照全長(zhǎng)Chkl的氨基末段的讀框插入。5'引物含有EcoRI位點(diǎn)、Kozak序列，也編碼用于用M2抗體(Sigma,SaintLouis,IL)親和純化的FLAG⑧才示記。3'引物含有Sail位點(diǎn)。將PCR擴(kuò)增的片段作為EcoRI-SalI片段克隆到pCI-Neo(Invitrogen,Carlsbad,CA),然后以EcoRI-NotI片段亞克隆到pFastBacI(Gibco陽BRL,Bethesda,MD)。如Gibco國(guó)BRLBac國(guó)to-Bac手冊(cè)所述制備重組桿狀病毒，用于感染生長(zhǎng)在CCM3培養(yǎng)基(HyCloneLaboratories,Logan,UT)中的Sf-9細(xì)胞，以表達(dá)FLAG⑧-標(biāo)記的Chkl蛋白。從桿狀病毒感染的SF9細(xì)胞的冷凍沉淀中純化FLAG⑧-標(biāo)記的Chkl。用等體積的2X裂解緩沖液(含有100mMTris-HClpH7.5、200mMNaCl、50mMB誦甘油褲酸、25mMNaF、4mMMgCl2、0.5mMEGTA、0.2%TWEEN-20、2mM釩酸鈉、2mMDTT)和蛋白酶抑制劑混合物(Completemini,BoehringerMannheim2000catalog弁1836170)混合冷凍的細(xì)胞沉淀。然后用杜恩斯勻漿器的松散杵將細(xì)胞勻漿20次，以48，400xg離心1小時(shí)。用10柱體積的50mM甘氨酸pH3.5接著用20mMTrispH7.5、150mMNaCl預(yù)洗滌M2親和基質(zhì)，交替洗3次，用TrisNaCl結(jié)束洗滌。然后用25柱體積的20mMTrispH7.5、150mMNaCl、0.1%TWEEN-20、1mMEGTA、1mMEDTA和IXcompleteminiproteasetablet(蛋白酶片劑)洗、涂該柱。然后讓清澈的裂解液經(jīng)4小時(shí)在4°C分批結(jié)合到M2親合樹脂。然后將樹脂和裂解物的混合物倒入柱中，收集流通液。用10柱體積的20mMTrispH7.5、150mMNaCl和3mMN-辛基葡糖苷洗滌樹脂。然后用6柱體積的含有0.5mg/mLFLAG⑧肽(Sigma,2000Catalog弁F-3290)的冷20mMTrispH7.5、150mMNaCl、3mMN-辛基葡糖苷從該柱洗脫FLAG⑧-標(biāo)記的Chkl。收集3個(gè)流分，分析FLAG-標(biāo)記的Chkl的存在情況。將蛋白激酶用于Chkl激酶活性測(cè)定，該測(cè)定包括100ng純化的FLAG-Chkl(150pmol的ATP/分鐘)、20Cdc25C肽(H國(guó)leu誦tyr畫arg-ser一pro誦ser-met-pro畫glu-asn-leu-asn畫arg-arg國(guó)arg隱arg-OH)(SEQIDNO1)、4pmATP、2pCi[32P]y-ATP、20mMH印espH7.2、5mMMgCl2、0.P/。NP40和1mMDTT。該測(cè)定用于測(cè)定本發(fā)明化合物的IC5。。通過加入含有ATP的反應(yīng)混合物來啟動(dòng)反應(yīng)，在室溫下進(jìn)行10分鐘。通過加入磷酸(150mM終濃度)來終止反應(yīng)，并轉(zhuǎn)移到》壽酸纖維素圓盤。用150mM磷酸洗滌該等磷酸纖維素圓盤5次，風(fēng)干。加入閃爍液，用Wallac閃爍計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)這些圓盤。所測(cè)定的本發(fā)明Chkl抑制劑的ICs。值測(cè)量為約8到約500nM。實(shí)施例2選擇性測(cè)試本發(fā)明Chkl抑制劑對(duì)一種或多種其他蛋白激酶的選擇性，即針對(duì)DNA-PK、Cdc2、酪蛋白激酶I(CKI)、Chk2、p38MAP激酶、ERK激酶、蛋白激酶A(PKA)和/或鈣-鈣調(diào)蛋白蛋白激酶II(CaMKII)的選擇性。除Chk2外，所有這些激酶的測(cè)定程序從前在下列文獻(xiàn)中已有闡述，包括美國(guó)專利公開第2002-016521Al號(hào)和美國(guó)專利申請(qǐng)第08/184,605號(hào)(于1994年1月21日提出申請(qǐng))，這二者都在此引作參考。所述化合物針對(duì)Chk2的活性如下測(cè)定在4mMATP、1mCi[32P]Y醫(yī)ATP、20mMHepespH7.5、5mMMgCl2和0.25%NP40存在,下于室溫中讓128ng純化的His-標(biāo)記的Chk2與高達(dá)100mM的Chkl抑制劑溫育20分鐘。用終濃度為150mM的磷酸終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物的5/8轉(zhuǎn)移到磷酸纖維素圓盤。用150mM磷酸洗滌該等圓盤5次，風(fēng)干。加入閃爍劑，用WallacP計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)放射性。p38MAP激酶、ERK激酶、PKA、CaMKII和Cdc2購(gòu)自NewEnglandBiolabs,按制造商說明書用4-50pMATP實(shí)施測(cè)定，測(cè)試的Chkl抑制劑濃度高達(dá)100一。所測(cè)的所有抑制劑皆表現(xiàn)出對(duì)Chkl的選擇性是其他酶的至少100倍。實(shí)施例3本發(fā)明的Chkl抑制劑在細(xì)胞中抑制Chkl的功能為確定本發(fā)明Chkl抑制劑在細(xì)胞中抑制Chkl的邊藍(lán)，抑制劑可在基于細(xì)胞的分子測(cè)定中試驗(yàn)。因?yàn)闃I(yè)已證明哺乳動(dòng)物Chkl在體外使Cdc25C磷酸化，表明其在對(duì)DNA損傷應(yīng)答而負(fù)調(diào)控細(xì)^^周期蛋白B/cdc2，所以可分析Chkl抑制劑提高細(xì)胞周期蛋白B/cdc2活性的能力。該實(shí)驗(yàn)可設(shè)計(jì)如下用800拉德的光照射HeLa細(xì)月包，在37°C孵育7小時(shí)。因?yàn)檫@些細(xì)胞功能上為p53陰性，所以它們專有地在G2期停滯。然后，加入0.5昭/mL濃度的諾考達(dá)唑，讓細(xì)胞在37°C孵育15小時(shí)。加入諾考達(dá)唑以捕獲任何通過G2停滯到M的細(xì)胞。最后將Chkl抑制劑加入8小時(shí)，收獲細(xì)胞，裂解，按照制造商的提議用細(xì)胞周期蛋白Bl抗體(NewEnglandBiolabs)免疫沉淀等量蛋白質(zhì)。然后通過測(cè)定組蛋白Hl激酶活性來分^f免疫沉淀物中的與細(xì)胞周期蛋白B有關(guān)的cdc2激酶活性(Yu等，/說o/C7^w.，Dec.11,1998;273(50):33455-64)。另外，所述Chkl抑制劑取消電離輻射誘導(dǎo)的G2DNA損傷4全查點(diǎn)的能力，可用有絲分裂指數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)來確定。如上所述處理HeLa細(xì)胞(大約lx106)。通過離心收獲細(xì)胞，用PBS洗滌一次，然后重懸于2.5mL的75mMKC1中，再次離心。然后將細(xì)胞于3mL新鮮制備的冷乙酸:甲醇(1:3)中固定，在冰上孵育20分鐘。沉淀細(xì)胞，吸出固定液，將細(xì)胞重懸于0.5mLPBS中。通過移取100固定的細(xì)胞到顯微鏡載玻片上并用1mL固定液蓋住樣品來制備有絲分裂涂片。然后風(fēng)干玻片，用Wright氏染色液(Sigma)染色1分鐘，接著用水洗滌一次，用50%曱醇洗滌一次。存在濃縮染色體并缺乏核膜則確定為有絲分裂細(xì)胞。實(shí)施例4本發(fā)明Chkl抑制劑提高通過癌癥治療殺傷細(xì)胞的能力為證明本發(fā)明化合物對(duì)Chkl的抑制使靶細(xì)胞變得對(duì)DNA損傷劑的殺傷作用更加敏感，可在本發(fā)明Chkl抑制劑存在下孵育該等細(xì)胞，并與輻射或化學(xué)DNA損傷劑接觸。細(xì)胞以每孔1000-2000個(gè)的密度在96孔微滴板中鋪板，于37°C潮濕含5%C02的培養(yǎng)箱中在含有10%FBS、100U/mL青霉素和100嗎/mL鏈霉素的RMPI1640中生長(zhǎng)18小時(shí)。所測(cè)試細(xì)胞可包括任何目的細(xì)胞或細(xì)胞系，例如HeLa、ACHN、786-0、HCT116、SW620、HT29、Colo205、SK德L國(guó)5、SK-MEL-28、A549、H322、OVCAR-3、SK-OV-3、MDA-MB-231、MCF-7、PC-3、HL-60、K562和MOLT4。所有細(xì)胞系代稱是指下面的人類細(xì)胞系<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>PC-3來自轉(zhuǎn)移到骨的前列腺癌HL-60急性早幼粒細(xì)胞白血病K562慢性骨髓性白血病MOUT4急性成淋巴細(xì)胞性白血??；T成淋巴細(xì)胞用單含化療藥或含化療藥和Chkl抑制劑的培養(yǎng)基處理細(xì)胞。在通過測(cè)定3H-胸苷攝入水平來測(cè)量生長(zhǎng)之前，將細(xì)胞孵育大約5天?；熕幇ㄒ劳胁窜?、多柔比星、順鉑、苯丁酸氮芥、5-氟尿嘧啶(5-FU)。將細(xì)胞生長(zhǎng)抑制到未處理對(duì)照細(xì)胞的90%所需的藥物濃度定義為GI9。?？捎昧硗獾目勾x物，包括甲氨蝶呤、羥基脲、2-氯腺苷、氟達(dá)拉濱、氮雜胞苷和吉西他濱，來試驗(yàn)本發(fā)明化合物，以評(píng)估所述化合物增強(qiáng)上述抗代謝物殺傷作用的能力?？赏ㄟ^評(píng)估與吉西他濱聯(lián)合增強(qiáng)對(duì)HT29結(jié)腸直腸癌殺傷作用來彼此比較本發(fā)明化合物。另外，可測(cè)定本發(fā)明Chkl抑制劑增強(qiáng)輻射殺傷作用的能力。實(shí)施例5動(dòng)物腫瘤模型為試驗(yàn)本發(fā)明Chkl抑制劑在小鼠中增強(qiáng)DNA損傷劑殺傷的腫瘤的能力，用結(jié)腸腫瘤細(xì)胞系建立異種移植腫瘤模型?？蓪?-氟尿嘧啶(5-FU)或吉西他濱用作DNA損傷劑?？捎肏T29和Cob205(人類結(jié)腸癌)和H460和Calu-6(非小細(xì)胞癌)細(xì)胞在6-8周齡的雌性胸腺Balb/c(nu/nu)小鼠中繁殖異種移植腫瘤。將小鼠飼養(yǎng)在無病原條件的層流櫥內(nèi)，隨意喂食無菌食物和水。讓細(xì)胞系在補(bǔ)充有10%FBS、100U/mL青霉素、100(ig/mL鏈霉素和1.5mML-谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基中于5%C02的潮濕環(huán)境中生長(zhǎng)到亞融合。用CMF-PBS制備單細(xì)胞懸浮液，將細(xì)胞濃度調(diào)整為lx108細(xì)胞/mL。在小鼠右側(cè)腹部或右腿皮下(s.c.)接種總量為lxl0的細(xì)胞(100pL)。將小鼠隨機(jī)分為(5-15只小鼠/組)4個(gè)治療組，當(dāng)腫瘤達(dá)到75-100cr^體積(通常在接種后7-11天)時(shí)使用。用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤，用源自經(jīng)驗(yàn)的公式估量腫瘤體積腫瘤體積(cms)-腫瘤長(zhǎng)度(cm)x腫瘤寬度(cm)x腫瘤厚度(cm)/3.3。治療由腹膜內(nèi)(i.p)注射100pL的160mg/kg吉西他濱組成。在用吉西他濱治療的小鼠中觀察到腫瘤生長(zhǎng)遲滯。用160mg/kg吉西他濱與口服給予Chkl抑制劑二者聯(lián)合治療小鼠，預(yù)期可縮小腫瘤體積和延長(zhǎng)生命。在實(shí)驗(yàn)期間每隔一天監(jiān)測(cè)一次腫瘤大小。很顯然，可如上文所述對(duì)本發(fā)明進(jìn)行很多不偏離其精神和范圍的修正和改變，因此，如附加權(quán)利要求所指出的，僅此等限制應(yīng)包括在內(nèi)。權(quán)利要求1.一種具有下式的化合物和其藥物上可接受鹽或前藥或溶劑化物其中X1為不存在、-O-、-S-、-CH2-或-N(R1)-；X2為-O-、-S-或-N(R1)-；Y為O或S；或＝Y(jié)代表2個(gè)連接到共用碳原子的氫原子；W選自雜芳基、芳基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基和被雜芳基或芳基取代的C1-6烷基，其中(a)所述W基團(tuán)的芳基或雜芳基被CF3和雜芳基中的至少一個(gè)取代；(b)所述W基團(tuán)的芳基任選被1-3個(gè)由R2代表的取代基取代；和(c)所述W基團(tuán)的雜芳基任選被1-3個(gè)由R5代表的取代基取代；R1選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和芳基；R2選自雜芳基、鹵素、任選取代的C1-6烷基、C2-6烯基、OCF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亞烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1-6亞烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亞烷基OR3、N(R1)C(O)C1-6亞烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亞烷基SO2NR3、C1-6亞烷基OR3和SR3；R3選自氫、鹵素、C1-6烷基、C2-6烯基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、CO2R4、SO2R4；被鹵素、羥基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基、N(R4)2和SO2R4中的一個(gè)或多個(gè)取代的C1-6烷基；C1-6亞烷基芳基、C1-6亞烷基雜芳基、C1-6亞烷基C3-8雜環(huán)烷基、C1-6亞烷基SO2芳基、任選取代的C1-6亞烷基N(R4)2、OCF3、C1-6亞烷基N(R4)3+、C3-8雜環(huán)烷基和CH(C1-6亞烷基N(R4)2)2，或2個(gè)R3基共同形成任選取代的3-6元脂肪族環(huán)；R4選自氫、C1-6烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、C1-6亞烷基芳基和SO2C1-6烷基，或2個(gè)R4基共同形成任選取代的3-6元環(huán)；R5選自C1-6烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)烷基、N(R3)2、OR3、鹵素、N3、CN、C1-6亞烷基芳基、C1-6亞烷基N(R3)2、C(O)R3、C(O)OR3、C(O)N(R3)2、N(R1)C(O)R3、N(R1)C(O)OR3、CF3和R6選自O(shè)R11、-C≡C-R7和雜芳基；R7選自氫、C1-6烷基、芳基、C1-6亞烷基芳基、雜芳基、C1-6亞烷基雜芳基和烷氧基；R8、R9和R10獨(dú)立選自氫、鹵素、任選取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、OCF3、CF3、NO2、CN、NC、N(R3)2、OR3、CO2R3、C(O)N(R3)2、C(O)R3、N(R1)COR3、N(R1)C(O)OR3、N(R8)C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亞烷基C(O)R3、N(R1)C(O)C1-6亞烷基C(O)OR3、N(R1)C(O)C1-3亞烷基OR3、N(R1)C(O)C1-6亞烷基NHC(O)OR3、N(R1)C(O)C1-6亞烷基SO2NR3、C1-6亞烷基OR3和SR3；R11選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、SO2R4；被鹵素、羥基、芳基、雜芳基、N(R4)2和SO2R4中的一個(gè)或多個(gè)取代的C1-6烷基；C1-6亞烷基芳基、C1-6亞烷基雜芳基、C1-6亞烷基C3-8雜環(huán)烷基、C1-6亞烷基SO2芳基、任選取代的C1-6亞烷基N(R4)2、OCF3、C1-6亞烷基N(R4)3+、C3-8雜環(huán)烷基和CH(C1-6亞烷基-N(R4)2)2。2.權(quán)利要求1的化合物，其中X"和X2為-N(H)-;Y為O或S;W為含有至少2個(gè)選自N、0和S的雜原子的雜芳基，所述環(huán)任選被一或兩個(gè)選自C^烷基、芳基、雜芳基、N(R3)2、OR3、C(0)N(R3)2、C02R3、CN、CFs和鹵素的取代基取代。3.權(quán)利要求2的化合物，其中W選自噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基和三溱基，其任選被一或兩個(gè)選自任選取代的C^烷基、芳基、雜芳基、N(R3)2、OR3、C(O)OR3、C(0)N(R3)2和卣素的取代基取代。4.權(quán)利要求2的化合物，其中W選自5.權(quán)利要求2的化合物，其中W選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>6.權(quán)利要求2的化合物，其中W為吡嗪基。7.權(quán)利要求l的化合物，其中W為OR11。8.權(quán)利要求l的化合物，其中W為雜芳基。9.權(quán)利要求1的化合物，其中W上的雜芳基取代基和W的雜芳基獨(dú)立選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>10.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>11.組合物，其包舍權(quán)利要求1的化合物和藥物上可接受載體。12.抑制細(xì)胞中檢查點(diǎn)激酶1的方法，該方法包括使所述細(xì)胞與有效量的權(quán)利要求1的化合物接觸的步驟。13.使正經(jīng)歷醫(yī)學(xué)病癥化療或^L療的個(gè)體的細(xì)胞敏化的方法，該方法包括將有效量的權(quán)利要求1的化合物與化療劑、放療劑或其混合物聯(lián)合給予所述個(gè)體。14.權(quán)利要求13的方法，該方法進(jìn)一步包括給予一種或多種細(xì)胞因子、淋巴因子、生長(zhǎng)因子或其他造血因子。15.權(quán)利要求12的方法，其中所述化療劑選自烷化劑、抗代謝物、激素或其拮抗物、放射性同位素、抗體和其混合物。16.權(quán)利要求13的方法，其中所1改療劑選自Y-輻射、X-射線輻射、紫外線、可見光、紅外輻射和微波輻射。17.權(quán)利要求13的方法，其中所述病癥為選自結(jié)腸直腸癌、頭頸癌、胰腺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、外陰癌、白血病、淋巴瘤、黑素瘤、腎細(xì)胞癌、卵巢癌、腦瘤、骨肉瘤和肺癌的癌癥。18.權(quán)利要求13的方法，其中所述病癥為選自下列的癌癥粘液才羊圓細(xì)胞癌、局部晚期肺瘤、轉(zhuǎn)移性癌、Ewing氏肉瘤、癌癥轉(zhuǎn)移、淋巴細(xì)胞性轉(zhuǎn)移、鱗狀上皮細(xì)胞癌、食管鱗狀細(xì)胞癌、口腔癌、多發(fā)性骨髓瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性非淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性骨髓性白血病、毛細(xì)胞白血病、滲出性淋巴瘤(以體腔為主的淋巴瘤)、胸腺淋巴肺癌、小細(xì)胞癌、皮力夫T細(xì)胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、腎上腺皮質(zhì)癌、產(chǎn)生ACTH的腫瘤、非小細(xì)胞癌、乳腺癌、小細(xì)胞癌、導(dǎo)管癌、胃癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、與結(jié)直腸瘤形成相關(guān)的息肉、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、原發(fā)性淺表性膀胱瘤、侵襲性膀胱移行細(xì)胞癌、肌侵襲性膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、原發(fā)性腹膜上皮瘤、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、陰道癌、外陰癌、子宮癌和卵泡實(shí)體瘤、睪丸癌、陰莖癌、腎細(xì)胞癌、內(nèi)部腦瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞腦瘤、神經(jīng)月交質(zhì)瘤、4曼襲到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞、骨瘤和骨肉瘤、惡性黑素瘤、人皮膚角質(zhì)細(xì)胞的腫瘤進(jìn)展、鱗狀上皮細(xì)胞癌、甲狀腺癌、成視網(wǎng)膜細(xì)胞癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、腹水、惡性胸膜積液、間皮瘤、Wilms氏腫瘤、膽嚢癌、滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤、血管外皮細(xì)胞瘤和卡波西肉瘤。19.權(quán)利要求12的方法，其中所述治療給予選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、白癜風(fēng)、Wegener肉芽腫病和系統(tǒng)性紅斑狼瘡的炎性病癥。20.權(quán)利要求13的方法，其中所述權(quán)利要求1的化合物在抑制Chkl方面的選擇性是蛋白激酶A、蛋白激酶C、cdc2和pp60v-src的至少2(H咅。21.權(quán)利要求13的方法，其中所述權(quán)利要求1的化合物在抑制Chkl方面的選擇性是蛋白激酶A、蛋白激酶C、cdc2和pp60v-src75的至少倍。22.權(quán)利要求13的方法，其中所述權(quán)利要求1的化合物在抑制Chkl方面的選擇性是蛋白激酶A、蛋白激酶C、cdc2、pp60v-src100的至少倍。23.權(quán)利要求13的方法，其中所述化療劑包括吉西他濱、培美曲塞、順柏、卡鉑、紫杉醇或其混合物。24.抑制異常細(xì)胞增生的方法，該方法包括用Chkl激活劑與包含異常增生細(xì)胞的細(xì)胞群接觸，以使所述異常增生細(xì)胞的細(xì)胞周期停滯基本上同步，隨后用權(quán)利要求1的化合物與所述細(xì)胞群接觸，以基本上取消所述細(xì)胞周期停滯。25.權(quán)利要求24的方法，其中所述Chkl激活劑包括至少一種化療劑。26.權(quán)利要求24的方法，其中所述Chkl激活劑包括電離輻射或紫外輻射。27.權(quán)利要求24的方法，其中所述電離輻射與放射敏化劑、光敏劑或其混合物聯(lián)合給予。28.權(quán)利要求24的方法，其中所述異常增生細(xì)胞為非癌性細(xì)胞。全文摘要本發(fā)明揭示用于治療與DNA損傷或DNA復(fù)制損害有關(guān)的疾病和病癥的芳基和雜芳基取代的脲化合物。本發(fā)明也揭示制備該等化合物的方法，和該等化合物作為治療劑用于治療例如癌癥和特征為DNA復(fù)制、染色體分離或細(xì)胞分裂缺陷的其他疾病的用途。文檔編號(hào)C07D401/04GK101115727SQ200580035382公開日2008年1月30日申請(qǐng)日期2005年8月18日優(yōu)先權(quán)日2004年8月19日發(fā)明者E·索爾塞特,F·S·弗魯茲,J·J·高迪諾,R·霍爾坎布申請(qǐng)人:艾科斯有限公司