專利名稱：可用作蛋白激酶抑制劑的三唑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白激酶的抑制劑。本發(fā)明也提供包含本發(fā)明化合物的藥物組合物和使用這些組合物治療各種病癥的方法。
背景技術(shù)：
近年來，通過更好地理解與疾病有關(guān)的酶和其他生物分子的結(jié)構(gòu)，大大有助于尋求新的治療劑。已經(jīng)成為廣泛研究的主題的一類重要的酶是蛋白激酶。
蛋白激酶構(gòu)成一大家族在結(jié)構(gòu)上相關(guān)的酶，它們負責(zé)控制細胞內(nèi)的多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程(參見Hardie，G.and Hanks，S.The ProteinKinase Facts Book，I and II，Academic Press，San Diego，CA1995)。蛋白激酶被認(rèn)為從共同的遺傳基因進化而來，這是由于保存了它們的結(jié)構(gòu)和催化功能。幾乎所有的激酶都含有相似的250-300個氨基酸催化結(jié)構(gòu)功能域。激酶可以根據(jù)它們磷酸化的底物分為若干家族(例如蛋白質(zhì)-酪氨酸、蛋白質(zhì)-絲氨酸/蘇氨酸、脂質(zhì)等)。已經(jīng)鑒別了一般對應(yīng)于每種激酶家族的序列基序(例如參見Hanks，S.K.，Hunter，T.，F(xiàn)ASEB J.1995，9，576-596；Knighton等人，Science1991，253，407-414；Hi1es 等人，Cell 1992，70，419-429；Kunz等人，Cell 1993，73，585-596；Garcia-Bustos等人，EMBO J.1994，13，2352-2361)。
一般而言，蛋白激酶通過影響磷?；鶑娜姿岷塑辙D(zhuǎn)移至參與信號傳遞途徑的蛋白質(zhì)受體而介導(dǎo)細胞內(nèi)信號傳遞。這些磷酸化事件充當(dāng)分子開關(guān)，能夠調(diào)控或調(diào)節(jié)靶物蛋白的生物功能。這些磷酸化事件最終是響應(yīng)于多種細胞外與其他刺激而被激發(fā)的。這類刺激的實例包括環(huán)境與化學(xué)應(yīng)激反應(yīng)信號(例如滲透壓休克、熱激、紫外輻射、細菌內(nèi)毒素和H2O2)、細胞因子(例如白介素-1(IL-1)和腫瘤壞死因子α(TNF-α))和生長因子(例如粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)和成纖維細胞生長因子(FGF))。細胞外刺激可以影響一種或多種細胞應(yīng)答，涉及細胞生長、移行、分化、激素分泌、轉(zhuǎn)錄因子活化、肌肉收縮、糖代謝、蛋白質(zhì)合成控制和細胞周期調(diào)節(jié)。
很多疾病與由上述蛋白激酶介導(dǎo)的事件激發(fā)的異常細胞應(yīng)答有關(guān)。這些疾病包括但不限于自身免疫疾病、炎性疾病、骨疾病、代謝疾病、神經(jīng)病學(xué)與神經(jīng)變性疾病、癌癥、心血管疾病、變態(tài)反應(yīng)與哮喘、阿爾茨海默氏病和激素相關(guān)性疾病。因此，醫(yī)藥化學(xué)界一直努力尋找作為治療劑有效的蛋白激酶抑制劑。
包括Flt3、c-Kit、PDGF-受體和c-Fms在內(nèi)的III型受體酪氨酸激酶家族在造血和非造血細胞的供養(yǎng)、生長和發(fā)育中發(fā)揮重要作用[Scheijen，B，Griffin JD，Oncogene，2002，21，3314-3333 andReilly，JT，British Journal of Haematology，2002，116，744-757]。FLT-3和c-Kit調(diào)節(jié)干細胞/早期祖代匯集細胞的供養(yǎng)以及成熟淋巴樣與髓樣細胞的發(fā)育[Lyman，S，Jacobsen，S，Blood，1998，91，1101-1134]。兩種受體都含有內(nèi)在的激酶功能區(qū)，在配體-介導(dǎo)的受體二聚化之后被活化。一旦活化，該激酶功能區(qū)誘導(dǎo)受體的自主磷酸化以及各種胞質(zhì)蛋白的磷酸化，有助于傳播引起生長、分化和存活的活化信號。FLT-3和c-Kit受體信號發(fā)送的一些下游調(diào)節(jié)物包括PLCγ、PI3-激酶、Grb-2、SHIP和Src相關(guān)性激酶[Scheijen，B，GriffinJD，Oncogene，2002，21，3314-3333]。兩種受體酪氨酸激酶都已經(jīng)顯示在多種造血和非造血惡性腫瘤中發(fā)揮作用。誘導(dǎo)配體獨立性FLT-3和c-Kit活化的突變已經(jīng)在急性骨髓性白血病(AML)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、肥大細胞病和胃腸基質(zhì)腫瘤(GIST)中有牽連。這些突變包括激酶功能區(qū)中的單一氨基酸改變或內(nèi)部串聯(lián)重疊、受體近膜區(qū)的點突變或框架內(nèi)缺失。除了活化性突變以外，過度表達野生型FLT-3或c-Kit的配體依賴性(自分泌或副分泌)刺激也能有助于惡性表型[Scheijen，B，Griffin JD，Oncogene，2002，21，3314-3333]。
c-fms編碼巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSF-1R)，它主要在單核細胞/巨噬細胞系中被表達[Dai，XM等人，Blood，2002，99，111-120]。MCSF-1R和其配體調(diào)節(jié)巨噬細胞系的生長和分化。象其他家族成員一樣，MCSF-1R含有內(nèi)在的激酶功能區(qū)，在配體-誘導(dǎo)的受體二聚化之后被活化。MCSF-1R也在非造血細胞中被表達，包括乳腺上皮細胞和神經(jīng)元。這種受體中的突變與髓樣白血病有潛在聯(lián)系，它的表達與轉(zhuǎn)移性乳腺、卵巢和子宮內(nèi)膜癌有關(guān)聯(lián)[Reilly，JT，BritishJournal of Haematology，2002，116，744-757 and Kacinski，BM，Mol.Reprod and Devel.，1997，46，71-74]。MCSF-1R拮抗劑的另一種可能的適應(yīng)癥是骨質(zhì)疏松[Teitelbaum，S，Science 2000，289，1504-1508。
PDGF-受體(PDGFR)具有兩個亞單元-PDGFR-α和PDGFR-β，它們能夠在配體結(jié)合后生成均或雜二聚物。PDGF配體有若干種AB、BB、CC和DD。PDGFR在早期干細胞、肥大細胞、髓樣細胞、間質(zhì)細胞和平滑肌細胞上被表達[Scheijen，B，Griffin JD，Oncogene，2002，21，3314-3333]。只有PDGFR-β已經(jīng)在髓樣白血病中有牽連，通常與Tel、亨廷頓交互蛋白(HIP1)或Rabaptin5作為易位配偶體。最近顯示，PDGFR-α激酶功能區(qū)中的活化突變見于胃腸基質(zhì)腫瘤(GIST)[Heinrich，MC等人，Sciencexpress，2003]。
細胞周期蛋白-依賴性激酶(CDKs)是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，由β-片狀富集的氨基-末端葉和更大的羧基-末端葉組成，后者主要是α-螺旋狀。CDK顯示有11個被所有蛋白激酶共享的亞功能區(qū)，分子質(zhì)量從33至44kD。這個激酶家族包括CDK1、CDK2、CDK4和CDK6，需要在對應(yīng)于CDK2 Thr160的殘基處磷酸化，目的是成為全活性的[Meijer，L.，Drug Resistance Updates 2000，3，83-88]。
每種CDK復(fù)合物是由調(diào)節(jié)性細胞周期蛋白亞單元(例如細胞周期蛋白A、B1、B2、D1、D2、D3和E)和催化性激酶亞單元(例如CDK1、CDK2、CDK4、CDK5和CDK6)所構(gòu)成的。每一不同的激酶/細胞周期蛋白對發(fā)揮調(diào)節(jié)細胞周期不同特定階段的作用，所述階段被稱為G1、S、G2和M期[Nigg，E.，Nature Reviews 2001，2， 21-32；Flatt，P.，Pietenpol，J.，Drug Metabolism Reviews 2000，32，283-305]。
CDK已經(jīng)在細胞增殖性疾病、特別是癌癥中有牽連。細胞增殖是細胞分化周期直接或間接失調(diào)的結(jié)果，CDK在這種周期不同階段的調(diào)節(jié)中發(fā)揮決定性作用。例如，細胞周期蛋白D1的過度表達普遍與大量人類癌癥有關(guān)，包括乳腺、結(jié)腸、肝細胞癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤[Flatt，P.，Pietenpol，J.，Drug Metabolism Reviews 2000，32，283-305]。CDK2/細胞周期蛋白E復(fù)合物在細胞周期從早期G1期進行到S期中發(fā)揮關(guān)鍵性作用，細胞周期蛋白E的過度表達與各種實體腫瘤有關(guān)。因此，細胞周期蛋白D1、E或與它們有關(guān)的CDK的抑制劑是可用于癌癥療法的靶物[Kaubisch，A.，Schwartz，G.，The Cancer Journal 2000，6，192-212]。
CDK、尤其是CDK2也在細胞程序死亡和T-細胞發(fā)育中發(fā)揮作用。CDK2已被鑒別是胸腺細胞程序死亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑[Williams，O.，等人，European Journal of Immunology 2000，709-713]。CDK2激酶活性的刺激與胸腺細胞響應(yīng)于特定刺激而細胞程序死亡的進展有關(guān)。抑制CDK2激酶活性可阻滯這種細胞程序死亡，從而保護胸腺細胞。
除了調(diào)節(jié)細胞周期和細胞程序死亡以外，CDK還直接參與轉(zhuǎn)錄的過程。大量病毒需要CDK供它們的復(fù)制過程。CDK抑制劑阻止病毒復(fù)制的實例包括人巨細胞病毒、皰疹病毒和水痘-帶狀皰疹病毒[Meijer，L.，Drug Resistance Updates 2000，3，83-88]。
抑制CDK也可用于治療神經(jīng)變性疾病，例如阿爾茨海默氏病。與阿爾茨海默氏病有關(guān)的成對螺旋絲(PHF)的出現(xiàn)是由CDK5/p25對τ蛋白的過度磷酸化作用所導(dǎo)致的[Meijer，L.，Drug ResistanceUpdates，2000 3，83-88]。
另一種特別有關(guān)的蛋白激酶家族是Src家族激酶。這些激酶在癌癥、免疫系統(tǒng)功能障礙和骨再造疾病中都有牽連。關(guān)于一般性評述，參見Thomas and Brugge，Annu.Rev.Cell Dev.Biol.1997，13，513；Lawrence and Niu，Pharmacol.Ther.1998，77，81；Tatosyan andMizenina，Biochemistry(Moscow)2000，65，49；Boschelli 等人，Drugs of the Future 2000，25(7)，717，(2000)。
在哺乳動物中，Src家族成員包括下列八種激酶Src、Fyn、Yes、Fgr、Lyn、Hck、Lck和Blk。它們是非受體蛋白激酶，分子量從52至62kD。全部都是以共有的結(jié)構(gòu)組織化為特征的，它由六種不同的功能區(qū)組成Src同源性功能區(qū)4(SH4)、一種獨特的功能區(qū)、SH3功能區(qū)、SH2功能區(qū)、一種催化性功能區(qū)(SH1)和C-末端調(diào)節(jié)性區(qū)域。Tatosyan 等人Biochemistry(Moscow)2000，65，49-58。
基于已發(fā)表的研究，Src激酶被視為多種人類疾病的潛在治療靶物。缺乏Src的小鼠發(fā)展為骨硬化病或骨形成，因為破骨細胞使骨吸收受抑制。這提示了抑制Src能夠治療由異常高的骨吸收所導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松。Soriano等人，Cell 1992，69，551 and Soriano等人，Cell1991，64，693。
借助CSK在類風(fēng)濕性滑膜細胞和破骨細胞中的過度表達已經(jīng)實現(xiàn)了對關(guān)節(jié)炎性骨破壞的抑制。Takayanagi等人，J.Clin.Invest.1999，104，137。CSK或C-末端Src激酶磷酸化、由此抑制Src的催化活性。這暗示了抑制Src可以防止類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者所特有的關(guān)節(jié)破壞。Boschelli等人，Drugs of the Future 2000，25(7)，717。
Src也在乙型肝炎病毒的復(fù)制中發(fā)揮作用。在病毒繁殖所需的一個步驟中，病毒編碼的轉(zhuǎn)錄因子HBx活化Src。Klein等人，EMBO J.1999，18，5019，and Klein等人，Mol.Cell.Biol.1997，17，6427。
大量研究已經(jīng)把Src表達與癌癥聯(lián)系起來，例如結(jié)腸、乳腺、肝與胰腺癌、某些B-細胞性白血病和淋巴瘤。Talamonti等人，J.Clin.Invest.1993，91，53；Lutz等人，Biochem.Biophys.Res.1998243，503；Rosen等人，J. Biol.Chem.1986，261，13754；Bolen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1987，84，2251；Masaki等人，Hepa tology 1998，27，1257；Biscardi等人，Adv.Cancer Res.1999，76，61；Lynch等人，Leukemia，1993，7，1416。此外，已經(jīng)顯示在卵巢和結(jié)腸腫瘤細胞中表達的反義Src可抑制腫瘤生長。Wiener等人，Clin.Cancer Res.，1999，5，2164；Staley等人，Cell GrowthDiff.，1997，8，269。
其他Src家族激酶也是潛在的治療靶物。Lck在T-細胞信號傳遞中發(fā)揮作用。缺乏Lck基因的小鼠具有較差的胸腺細胞發(fā)育能力。Lck作為T-細胞信號傳遞的正性激活劑的功能提示了Lck抑制劑可以用于治療自體免疫疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。Molina等人，Nature，1992，357，161。Hck、Fgr和Lyn已被鑒別是骨髓白細胞中整聯(lián)蛋白信號傳遞的重要介質(zhì)。Lowel1等人，J.Leukoc.Biol.，1999，65，313。抑制這些激酶介質(zhì)可以因此用于治療炎癥。Boschelli等人，Drugs of the Future 2000，25(7)，717。
Syk是一種酪氨酸激酶，在FcεRI介導(dǎo)的肥大細胞脫粒和嗜曙紅細胞活化中發(fā)揮決定性作用。因此，Syk激酶在多種變應(yīng)性障礙中有牽連，特別是哮喘。已經(jīng)顯示，Syk經(jīng)由N-末端SH2功能區(qū)結(jié)合FcεRI受體的磷酸化γ鏈，是下游信號發(fā)送所必需的[Taylor等人，Mol.Cell.Biol.1995，15，4149]。
嗜曙紅細胞的細胞程序死亡的抑制已被提出是哮喘中血液與組織嗜曙紅細胞增多形成的關(guān)鍵機理。IL-5和GM-CSF在哮喘中被上調(diào)，通過嗜曙紅細胞的細胞程序死亡的抑制導(dǎo)致血液與組織嗜曙紅細胞增多。嗜曙紅細胞的細胞程序死亡的抑制已被提出是哮喘中血液與組織嗜曙紅細胞增多形成的關(guān)鍵機理。已有報導(dǎo)Syk激酶是細胞因子防止嗜曙紅細胞的細胞程序死亡所需要的(使用反義序列)[Yousefi等人，J Exp Med 1996，183，1407]。
已經(jīng)利用受輻射的由來自Syk-/-胚胎的胎肝細胞重新構(gòu)成的小鼠嵌合體，確定了Syk在FcγR依賴性與獨立性骨髓巨噬細胞應(yīng)答中的作用。Syk缺陷性巨噬細胞在由FcγR誘導(dǎo)的吞噬作用中是有缺損的，但是響應(yīng)于補體顯示正常的吞噬作用[Kiefer等人，Nol Cell Biol1998，18，4209]。也有報導(dǎo)氣霧化Syk反義序列抑制Syk表達和介質(zhì)從巨噬細胞中釋放[Stenton等人，J Immunology 2000，164，3790]。
Janus激酶(JAK)是酪氨酸激酶家族，由JAK1、JAK2、JAK3和TYK2組成。JAK在細胞因子信號發(fā)送中發(fā)揮決定性作用。JAK家族激酶的下游底物包括轉(zhuǎn)錄信號傳感與活化(STAT)蛋白。JAK/STAT信號發(fā)送已經(jīng)在很多異常免疫應(yīng)答的介導(dǎo)中有牽連，例如變態(tài)反應(yīng)、哮喘、自體免疫疾病，例如移植排斥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肌萎縮性側(cè)索硬化和多發(fā)性硬化，以及實體與血液惡性腫瘤，例如白血病和淋巴瘤。JAK/STAT途徑的藥物干預(yù)已有評述[Frank Mol.Med.5，432-456(1999)&Seidel，等人，Oncogene 19，2645-2656(2000)]。
JAK1、JAK2和TYK2被普遍表達，而JAK3主要在造血細胞中被表達。JAK3排他性地結(jié)合公共細胞因子受體γ鏈(γc)，被IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15所活化。由IL-4和IL-9誘導(dǎo)的鼠肥大細胞增殖和存活事實上已經(jīng)顯示依賴于JAK3-與γc-信號發(fā)送[Suzuki等人，Blood 96，2172-2180(2000)]。
敏感化肥大細胞的高親和性免疫球蛋白(Ig)E受體的交叉偶聯(lián)引起促炎性介質(zhì)的釋放，包括大量作用于血管的細胞因子，導(dǎo)致急性變應(yīng)性或即時性(I型)過敏反應(yīng)[Gordon等人，Nature 346，274-276(1990)&Galli，N.Engl.J.Med.，328，257-265(1993)]。JAK3在IgE受體-介導(dǎo)的肥大細胞應(yīng)答中的決定性角色已經(jīng)在體外和體內(nèi)得到確定[Malaviya，等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.257，807-813(1999)]。另外，通過抑制JAK3來預(yù)防由肥大細胞活化介導(dǎo)的I型過敏反應(yīng)、包括過敏性也有過報導(dǎo)[Malaviya等人，J.Biol.Chem 274，27028-27038(1999)]。用JAK3抑制劑靶向肥大細胞體外調(diào)控肥大細胞脫粒，體內(nèi)預(yù)防IgE受體/抗原-介導(dǎo)的過敏性反應(yīng)。
最近有研究描述過成功的JAK3靶向，用于免疫抑制和同種移植物接受。該研究證明了在JAK3抑制劑給藥后Buffalo心臟同種移植物在Wistar Furth接受者中的劑量-依賴性存活，表明了在移植物抗宿主疾病中調(diào)節(jié)不希望的免疫應(yīng)答的可能性[Kirken，Transpl.Proc.33，3268-3270(2001)]。
IL-4-介導(dǎo)的STAT-磷酸化已經(jīng)成為參與早期與晚期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的機理。RA滑膜與滑液中促炎性細胞因子的上調(diào)是該疾病所特有的。已經(jīng)證明，IL-4-介導(dǎo)的IL-4/STAT途徑活化是通過Janus激酶(JAK 1&3)介導(dǎo)的，并且與IL-4有關(guān)的JAK激酶在RA滑膜中被表達[Muller-Ladner，等人，J.Immunol.164，3894-3901(2000)]。
家族性肌萎縮性側(cè)索硬化(FALS)是一種致命性神經(jīng)變性疾病，影響大約10％的ALS患者。在用JAK3特異性抑制劑處理后，F(xiàn)ALS小鼠的存活率增加。這提示了JAK3在FALS中發(fā)揮作用[Trieu，等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.267，22-25(2000)]。
轉(zhuǎn)錄信號傳感與活化(STAT)蛋白尤其受JAK家族激酶的活化。來自最近研究的結(jié)果提示了通過用特異性抑制劑靶向JAK家族激酶來干預(yù)JAK/STAT信號發(fā)送途徑的可能性，用于治療白血病[Sudbeck，等人，Clin.Cancer Res.5，1569-1582(1999)]。JAK3特異性化合物抑制JAK3-表達性細胞系DAUDI、RAMOS、LC1-19、NALM-6、MOLT-3和HL-60的克隆生長。
在動物模型中，TEL/JAK2融合蛋白誘導(dǎo)脊髓增殖和造血細胞系障礙，TEL/JAK2的引入導(dǎo)致STAT1、STAT3、STAT5的活化和細胞因子-依賴性生長[Schwaller，等人，EMBO J.17，5321-5333(1998)]。
抑制JAK3和TYK2取消了STAT3的酪氨酸磷酸化，抑制了蕈樣真菌病的細胞生長，后者是皮膚T-細胞淋巴瘤的一種形式。這些結(jié)果暗示了JAK家族激酶在存在于蕈樣真菌病的組成型活化JAK/STAT途徑中有牽連[Nielsen，等人，Proc.Na t.Acad. Sci.U.S.A.94，6764-6769(1997)]。與之相似，STAT3、STAT5、JAK1和JAK2被證明在最初以LCK過度表達為特征的小鼠T-細胞淋巴瘤中組成型活化，從而進一步暗示了JAK/STAT在異常細胞生長中有牽連[Yu，等人，J.Immunol.159，5206-5210(1997)]。另外，IL-6-介導(dǎo)的STAT3活化被JAK抑制劑所阻滯，引起骨髓瘤細胞對細胞程序死亡敏感化[Catlett-Falcone，等人，Immunity10，105-115(1999)]。
令人感興趣的一個激酶家族是Rho-相關(guān)的螺旋形螺旋形成蛋白質(zhì)絲氨酸-蘇氨酸激酶(ROCK)，它被認(rèn)為是與Ras相關(guān)的小型GTP酶Rho的效應(yīng)物。ROCK家族包括p160ROCK(ROCK-1)(Ishizaki等人，EMBO J.1996，15，1885-1893)和ROKα/Rho-激酶/ROCK-II(Leung等人，J.Biol.Chem.1995，270，29051-29054；Matsui等人，EMBOJ.1996，15，2208-2216；Nakagawa等人，F(xiàn)EBS Lett.1996，392，189-193)、蛋白激酶PKN(Amano等人，Science 1996，271，648-650；Watanabe等人，Science 1996，271，645-648)和枸櫞與枸櫞激酶(Madaule等人Nature，1998，394，491-494；Madaule等人，F(xiàn)EBSLett.1995，377，243-248)。ROCK家族激酶已經(jīng)被證明涉及到許多功能，包括Rho-誘發(fā)的肌動蛋白應(yīng)力纖維和粘著斑的形成(Leung等人，Mol.Cell Biol.1996，16，5313-5327；Amano等人，Science，1997，275，1308-1311；Ishizaki等人，F(xiàn)EBS Lett.1997，404，118-124)與肌球蛋白磷酸酶的下調(diào)(Kimura等人，Science，1996，273，245-248)、血小板活化(Klages等人，J.Cell.Biol.，1999，144，745-754)、由各種刺激物引起的主動脈平滑肌的收縮(Fu等人，F(xiàn)EBS Lett.，1998，440，183-187)、凝血酶誘發(fā)的主動脈平滑肌細胞的應(yīng)答(Seasholtz等人，Cir.Res.，1999，84，1186-1193)、心肌細胞肥大(Kuwahara等人，F(xiàn)EBS Lett.，1999，452，314-318)、支氣管平滑肌收縮(Yoshii等人，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.，1999，20，1190-1200)、非肌細胞的平滑肌收縮和細胞骨架重構(gòu)(Fukata等人，Trends in Pharm.Sci 2001，22，32-39)、容量調(diào)節(jié)的陰離子通道的活化(Nilius等人，J.Physiol.，1999，516，67-74)、軸突縮進(Hirose等人，J.Cell.Biol.，1998，141，1625-1636)、嗜中性白細胞趨化性(Niggli，F(xiàn)EBS Lett.，1999，445，69-72)、傷口愈合(Nobes and Hall，J.Cell.Biol.，1999，144，1235-1244)、腫瘤發(fā)病(Itoh等人，Na t.Med.，1999，5，221-225)和細胞轉(zhuǎn)化(Sahai等人，Curr.Biol.，1999，9，136-145)。更具體地說，ROCK已經(jīng)和各種疾病和病癥有牽連，包括高血壓(Satoh等人，J.Clin.Invest.1994，94，1397-1403；Mukai等人，F(xiàn)ASEB J.2001，15，1062-1064；Uehata等人，Nature 1997，389，990-994；Masumoto等人，Hypertension，2001，38，1307-1310)、腦血管痙攣(Sato等人，Circ.Res.2000，87，195-200；Miyagi等人，J.Neurosurg.2000，93，471-476；Tachibana等人，Acta Neurochir(Wien)1999，141，13-19)、冠狀動脈痙攣(Shimokawa等人，Jpn.Cir.J.2000，64，1-12；Kandabashi等人，Circulation2000，101，1319-1323；Katsumata等人，Circulation1997，96，4357-4363；Shimokawa等人，Cardiovasc.Res.2001，51，169-177；Utsunomiya等人，J.Pharmacol.2001，134，1724-1730；Masumoto等人，Circulation2002，105，1545-1547)、支氣管性哮喘(Chiba等人，Comp.Biochem.Physiol.C Pharmacol.Toxicol.Endocrinol.1995，11，351-357；Chiba 等人，Br.J.Pharmacol.1999，127，597-600；Chiba 等人，Br.J.Pharmacol.2001，133，886-890；Iizuka等人，Bur.J.Pharmacol.2000，406，273-279)、提前分娩(Niro等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.1997，230，356-359；Tahara等人，Endocrinology 2002，143，920-929；Kupittayanant等人，Pflugers Arch.2001，443，112-114)、勃起功能障礙(Chitaley等人，Nat.Med.2001，7，119-122；Mills等人，J.Appl.Physiol.2001，91，1269-1273)、青光眼(Honjo等人，Arch.Ophthalmol.2001，1171-1178；Rao等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.2001，42，1029-1037)、血管平滑肌細胞增殖(Shimokawa等人，Cardiovasc.Res.2001，51，169-177；Morishige 等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2001，21，548-554；Eto 等人，Am.J.Physiol.HeartCirc.Physiol.2000，278，H1744-H1750；Sawada 等人，Circulation2000，101，2030-2023；Shibata等人，Circulation2001，103，284-289)、心肌肥大(Hoshijima等人，J.Biol.Chem.1998，273，7725-77230；Sah 等人，J.Biol.Chem.1996，271，31185-31190；Kuwahara等人，F(xiàn)EBS Lett.1999，452，314-318；Yanazume等人，J.Biol.Chem.2002，277，8618-8625)，malignoma(Itoh等人，Nat.Med.1999，5，221-225；Genda等人，Hepatology 1999，30，1027-1036；Somlyo 等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.2000，269，652-659)、局部缺血/再灌注誘發(fā)的損傷(Ikeda等人，J.ofSurgical Res.2003，109，155-160；Miznuma等人Transplantation2003，75，579-586)、內(nèi)皮功能障礙(Hernandez-Perera等人，Circ.Res.2000，87，616-622；Laufs等人，J.Biol.Chem.1998，273，24266-24271；Eto等人，Circ.Res.2001，89，583-590)、克羅恩氏病與結(jié)腸炎(Segain等人Gastroenterology 2003，124(5)，1180-1187)、軸突突起(Fournier等人J.Neurosci.2003，23，1416-1423、雷諾氏病(Shimokawa等人J.Cardiovasc.Pharmacol.2002，39，319-327)和動脈粥樣硬化(Retzer等人FEBS Lett.2000，466，70-74；Ishibashi等人Biochim.Biophys.Acta 2002，1590，123-130)。因此，ROCK激酶抑制劑的開發(fā)將可用作治療與ROCK激酶途徑有牽連的病癥的治療劑。
ERK2(胞外信號調(diào)節(jié)激酶)是哺乳動物促分裂原活化蛋白(MAP)1激酶家族的一員。(MAP)1激酶是介導(dǎo)細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的絲氨酸/蘇氨酸激酶(Cobb and Goldsmi th，J Biol.Chem.，1995，270，14843；Davis，Mol.Reprod.Dev.1995，42，459)，并且被促細胞分裂劑和生長因子所活化(Bokemeyer等人.Kidney Int.1996，49，1187)。MAP激酶家族的成員擁有共同的序列相似性和保存功能區(qū)，而且，除了ERK2之外，還包括JNK(Jun N-末端激酶)和p38激酶。JNK和p38激酶響應(yīng)促炎細胞因子TNF-α和白細胞介素-1，并通過細胞應(yīng)力如熱激、高摩爾滲透壓濃度、紫外線照射、脂多糖和蛋白質(zhì)合成抑制劑而活化(Derijard等人，Cell1994，76，1025；Han等人，Science1994，265，808；Raingeaud等人，JBiol.Chem.1995，270，7420；Shapiroand Dinarello，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1995，92，12230。相反，ERK被促細胞分裂劑和生長因子所活化(Bokemeyer等人，Kidney Int.1996，49，1187)。
ERK2是一種廣泛分布的蛋白激酶，當(dāng)Thr183和Tyr185被上游MAP激酶MEK1磷酸化時，它達到最大活性(Anderson等人，Nature1990，343，651；Crews等人，Science 1992，258，478)。一旦活化，ERK2使許多調(diào)節(jié)蛋白磷酸化，包括蛋白質(zhì)激酶Rsk90(Bjorbaek等人，J.Biol.Chem.1995，270，18848)和MAPKAP2(Rouse等人，Cell 1994，78，1027)，以及轉(zhuǎn)錄因子如ATF2(Raingeaud等人，Mol.Cell Biol.1996，16，1247)、Elk-1(Raingeaud等人，Mol.CellBiol.1996，16，1247)、c-Fos(Chen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1993，90，10952)和c-Myc(Oliver等人，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.1995，210，162)。ERK2也是Ras/Raf依賴途徑的下游靶物(Moodie等人，Science 1993，260，1658)，并且可以輔助分程傳遞來自這些可能的致癌蛋白質(zhì)的信號。ERK2已經(jīng)顯示在乳腺癌細胞的負生長控制中發(fā)揮作用(Frey and Mulder，Cancer Res.1993，57，628)，并且已經(jīng)報導(dǎo)了ERK2在人乳腺癌中的過表達(Sivaraman等人，JClin.Invest.1997，99，1478)。活化的ERK2還與內(nèi)皮縮血管肽刺激的呼吸道平滑肌細胞的增殖有關(guān)，從而提示了這種激酶在哮喘中的作用(Whelchel等人，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.1997，16，589)。
糖原合酶激酶-3(GSK-3)是由各自被不同基因編碼的α和β同種型組成的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶[Coghlan等人，Chemistry&Biology 2000，7，793-803；and Kim and Kimmel，Curr.OpinionGenetics Dev.，2000 10，508-514]。GSK-3涉及不同的疾病，包括糖尿病、阿爾茨海默氏病、諸如嚴(yán)重的抑郁癥和神經(jīng)變性疾病這樣的CNS疾病和心肌細胞肥大[PCT申請Nos.WO99/65897和WO00/38675；和Haq等人，J.Cell Biol.2000，151，117-130]。這些疾病與GSK-3起作用的某些細胞信號傳導(dǎo)途徑的異常操作相關(guān)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)GSK-3使許多調(diào)節(jié)蛋白磷酸化并調(diào)節(jié)其活性。這些蛋白質(zhì)包括屬于對糖原合成必不可少的限速酶的糖原合酶、微管相關(guān)蛋白Tau、基因轉(zhuǎn)錄因子β-連還蛋白、翻譯起始因子e1F2B和ATP檸檬酸裂合酶、蟲漆脂、熱激因子-1、c-Jun、c-Myc、c-Myb、CREB和CEPBα。這些不同蛋白靶物與細胞代謝、增殖、分化和發(fā)育的許多方面中的GSK-3相關(guān)。
在涉及II型糖尿病治療的GSK-3介導(dǎo)的途徑中，胰島素誘導(dǎo)的信號傳導(dǎo)導(dǎo)致細胞葡萄糖攝取和糖原合成。沿著這種途徑，GSK-3是胰島素誘導(dǎo)的信號的負調(diào)節(jié)物。一般而言，胰島素的存在導(dǎo)致GSK-3介導(dǎo)的磷酸化受到抑制和糖原合酶失活。GSK-3的抑制導(dǎo)致糖原合成和葡萄糖攝取增加[Klein等人，PNAS1996，93，8455-8459；Cross等人，Biochem.J.1994，303，21-26)；Cohen，Biochem.Soc.Trans.1993，21，555-567；and Massillon等人，Biochem J.1994，299，123-128]。不過，在胰島素反應(yīng)低下的糖尿病患者中，盡管存在的胰島素血液水平相對較高，但是糖原合成和葡萄糖攝取卻未能增加。這一結(jié)果導(dǎo)致異常高的血糖水平，同時伴有可以最終導(dǎo)致心血管疾病、腎衰和失明的急性和長期作用。在這類患者中，正常胰島素誘導(dǎo)的GSK-3抑制作用未能發(fā)生。還報導(dǎo)了在患有II型糖尿病的患者中，GSK-3過表達[參見PCT申請WO00/38675]。因此，GSK-3的治療抑制劑對于治療患對胰島素反應(yīng)低下的糖尿病患者可能是有用的。
GSK-3活性還與阿爾茨海默氏病有關(guān)。這種疾病的特征在于眾所周知的β-淀粉樣肽和形成胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)。Aβ肽是由淀粉樣前體蛋白(APP)通過順序進行蛋白水解、天冬氨?；鞍酌窧ACE2的催化，接著進行presenilin-依賴的β-腸促胰液肽酶切割衍生得到的。已經(jīng)證明，抗β-淀粉樣蛋白斑的抗體可以減緩阿爾茨海默氏病患者認(rèn)知能力的降低速度(Hock等人，Neuron，2003，38，547-554)，因此，其他的β-淀粉樣蛋白降低策略(例如，能夠抑制β-淀粉樣肽的藥劑的開發(fā))將可用于治療阿爾茨海默氏病及其他精神和神經(jīng)變性病癥。另外，這些神經(jīng)纖維纏結(jié)含有過度磷酸化的τ蛋白，其中τ在異常位點上被磷酸化，因此這種能夠抑制τ蛋白過度磷酸化的藥劑將可用于治療阿爾茨海默氏病及其他精神和神經(jīng)變性病癥。
GSK-3已知可使細胞和動物模型中的這些異常位點磷酸化。此外，GSK-3的抑制已經(jīng)顯示防止細胞中的τ過度磷酸化[Lovestone等人，Current Biology 1994，4，1077-86；and Brownlees 等人，Neuroreport 1997，8，3251-55]。因此，GSK-3活性可以促進神經(jīng)纖維纏結(jié)生成和阿爾茨海默氏病的進展。也已經(jīng)證實，GSK-3有助于APP的加工，而且，GSK-3抑制劑(鋰)會通過抑制GSK-3而抑制Aβ肽的生成(Phiel等人Na ture 2003，423，435-439)。因此，GSK-3抑制劑的開發(fā)將可用于降低淀粉樣蛋白斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)(阿爾茨海默氏病的病理標(biāo)志)的形成，并還將可用于治療其他的精神和神經(jīng)變性病癥。
GSK-3的另一種底物是在通過GSK-3磷酸化后降解的β-連環(huán)蛋白。已經(jīng)在精神分裂癥患者中報導(dǎo)了β-連環(huán)蛋白水平下降且這種下降還與涉及神經(jīng)細胞死亡增加的其它疾病相關(guān)[Zhong等人，Nature1998，395，698-702；Takashima等人，PNAS1993，90，7789-93；and Pei等人，J.Neuropa thol.Exp1997，56，70-78]。
GSK-3活性也與中風(fēng)有關(guān)[Wang等人，Brain Res 2000，859，381-5；Sasaki等人，Neurol Res 2001，23，588-92；Hashimoto等人，J.Biol.Chem 2002，277，32985-32991]。
AGC亞族激酶在絲氨酸和蘇氨酸殘基處將其底物磷酸化，并參與許多公知的信號傳導(dǎo)過程，包括但不限于環(huán)AMP信號傳導(dǎo)，對胰島素的應(yīng)答，細胞程序死亡保護，二酰甘油信號傳導(dǎo)，和蛋白質(zhì)翻譯控制(Peterson等人，Curr.Biol.1999，9，R521)。這種亞族包括PKA、PKB(c-Akt)、PKC、PRK1、2、p70S6K和PDK。
AKT(亦稱PKB或Rac-PKβ)，一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，已經(jīng)表明在幾種類型癌癥中過表達，是正常細胞功能的介質(zhì)[(Khwaja，A.，Nature1999，401，33-34)；(Yuan，Z.Q.，等人，Oncogene 2000，19，2324-2330)；(Namikawa，K.，等人，J Neurosci.2000，20，2875-2886)]。AKT包括N-末端血小板-白細胞C激酶底物同源性(PH)功能區(qū)，激酶功能區(qū)和C末端″尾部″區(qū)域。到目前為止，已經(jīng)報道了3種人體AKT激酶同種型(AKT-1、-2和-3)[(Cheng，J.Q.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1992，89，9267-9271)；(Brodbeck，D.等人，J.Biol.Chem.1999，274，9133-9136)]。PH功能區(qū)與3-磷酸肌醇結(jié)合，后者是在被生長因子如血小板衍生的生長因子(PDGF)、神經(jīng)生長因子(NGF)及胰島素樣生長因子(IGF-1)刺激時由磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)合成的[(Kulik 等人，Mol.Cell.Biol.，1997，1997，1595-1606，)；(Hemmings，B.A.，Science，1997，275，628-630)]。結(jié)合到PH功能區(qū)的脂質(zhì)促進AKT易位到質(zhì)膜上，并便于被另一種包含PH-功能區(qū)的蛋白質(zhì)激酶、PDK1在分別用于AKT同種型1、2和3的Thr308、Thr309和Thr305處磷酸化。為了產(chǎn)生完全活化的AKT酶，需要第二種到目前為止還未知的激酶來分別在AKT-1、-2和-3的C末端進行Ser473、Ser474或Ser472的磷酸化。
一旦定域到膜上，AKT便在細胞內(nèi)介導(dǎo)若干功能，包括胰島素的代謝效應(yīng)(Calera，M.R.等人，J.Biol.Chem.1998，273，7201-7204)，誘發(fā)分化和/或增殖，蛋白質(zhì)合成和應(yīng)力應(yīng)答(Alessi，D.R.等人，Curr.Opin.Genet.Dev.1998，8，55-62)。
在損傷和疾病兩種狀態(tài)中都會出現(xiàn)AKT調(diào)節(jié)的改變，其最重要的作用是在癌癥中。AKT的首要價值是與人的卵巢癌關(guān)聯(lián)，其中在15％的病例中都發(fā)現(xiàn)有AKT表達放大的跡象(Cheng，J.Q.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1992，89，9267-9271)。還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在12％的胰腺癌中有過表達現(xiàn)象(Cheng，J.Q.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1996，93，3636-3641)。據(jù)證實，在12％的卵巢癌中存在AKT-2的過表達，并且在50％未分化的腫瘤中，AKT的擴增尤其頻繁，這表明，AKT也可能與腫瘤攻擊性有關(guān)(Bellacosa，等人，Int.J.Cancer 1995，64，280-285)。
PKA(亦稱依賴于cAMP的蛋白激酶)已經(jīng)表明能調(diào)節(jié)許多生命機能，包括能量代謝、基因轉(zhuǎn)錄、增殖、分化、生殖功能、分泌、神經(jīng)元活性、記憶、收縮性和能動性(Beebe，S.J.，Semin.Cancer Biol.1994，5，285-294)。PKA是四聚全酶，其包含兩個結(jié)合到均二聚調(diào)節(jié)亞單元上的催化亞單元(用于抑制催化亞單元)。在cAMP的結(jié)合(酶激活)方面，催化亞單元與調(diào)節(jié)亞單元分離，產(chǎn)生活性絲氨酸/蘇氨酸激酶(McKnight，G.S.等人，Recent Prog.Horm.Res.1988，44，pp.307)。迄今已經(jīng)報道了3種催化亞單元的同種型(C-α、C-β和C-()(Beebe，S.J.等人，J.Biol.Chem.1992，267，25505-25512)，其中對C-(亞單元進行了最廣泛的研究，這主要是因為它在原發(fā)和轉(zhuǎn)移性的黑素瘤中有增加的表達(Becker，D.等人，Oncogene 1990，5，1133)。迄今，用于調(diào)節(jié)C-(亞單元活性的策略包括使用抗體，它們是通過定靶調(diào)節(jié)的二聚物和反義寡核苷酸表達而阻斷PKA活性的分子。
核糖體蛋白激酶p70S6K-1和-2也是蛋白質(zhì)激酶的AGC亞族中的成員，它們催化核糖體蛋白S6的磷酸化和隨后的活化，這些已經(jīng)牽連到了用于編碼蛋白質(zhì)合成機構(gòu)組分的信使核糖核酸的翻譯上調(diào)。這些信使核糖核酸包含處于其5′轉(zhuǎn)錄起始位點上的寡嘧啶束(稱作5′TOP)，后者已經(jīng)顯示是其在翻譯水平上的調(diào)節(jié)所必需的(Volarevic，S.等人，Prog.Nucleic Acid Res.Mol.Biol.2001，65，101-186)。在對許多激素和生長因子作出應(yīng)答時，依賴于p70S6K的S6磷酸化作用主要通過PI3K途徑而受到刺激(Coffer，P.J.等人，Biochem.Biophys.Res.Commun，1994 198，780-786)，這可以是在調(diào)節(jié)mTOR的情況下，因為雷帕霉素起到抑制p70S6K活性和阻斷蛋白質(zhì)合成的作用，具體地說是由于這些信使核糖核酸的編碼核醣體蛋白質(zhì)的翻譯下調(diào)造成的(Kuo，C.J.等人，Nature 1992，358，70-73)。
體外PDK1在p70催化功能區(qū)的活化回路中催化Thr252的磷酸化作用，這對p70活性而言是不可缺少的(Alessi，D.R.，Curr.Biol.，1998，8，69-81)。通過使用雷帕霉素以及對來自果蠅的dp70S6K和來自小鼠的p70S6K1進行基因缺乏研究，發(fā)現(xiàn)在細胞生長和增殖信號傳導(dǎo)兩種情形下，p70都發(fā)揮重要的作用。
依賴于3-磷酸肌醇的蛋白激酶-1(PDK1)在調(diào)節(jié)很多屬于AGC亞族蛋白質(zhì)激酶的激酶活性中發(fā)揮關(guān)鍵的作用(Alessi，D.等人，Biochem.Soc.Trans 2001，29，1)。這些包括蛋白激酶B的同種型(PKB，亦稱為AKT)，p70核醣體的S6激酶(S6K)(Avruch，J.等人，Prog.Nol.Subcell.Biol.2001，26，115)和p90核醣體的S6激酶(Frdin，M.等人，EMBO J.2000，19，2924-2934)。PDK1介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)是在對胰島素和生長因子作出響應(yīng)時被活化的，并且是由于細胞附著到細胞外基質(zhì)上而造成的(整聯(lián)蛋白信號傳導(dǎo))。一旦被活化，這些酶就會通過使在控制過程(如細胞存活、生長、增殖和葡萄糖調(diào)節(jié))中發(fā)揮重要作用的關(guān)鍵的調(diào)節(jié)性蛋白質(zhì)磷酸化而介導(dǎo)許多完全不同的細胞事件[(Lawlor，M.A.等人，J.Cell Sci.2001，114，2903-2910)，(Lawlor，M.A.等人，EMBOJ.2002，21，3728-3738)]。PDK1是一種556氨基酸蛋白質(zhì)，具有N-末端的催化功能區(qū)和C末端血小板-白細胞C激酶底物同源性(PH)功能區(qū)，它通過在其活化回路中將這些激酶磷酸化而使其底物活化(Belham，C.等人，Curr.Biol.1999，9，R93-R96)。許多人體癌癥，包括前列腺癌和NSCL具有增加的由很多截然不同的遺傳事件，如PTEN突變或某些關(guān)鍵的調(diào)節(jié)性蛋白質(zhì)的過表達所產(chǎn)生的PDK1信號傳導(dǎo)途徑功能[(Graff，J.R.，Expert Opin.Ther.Targets 2002，6，103-113)，(Brognard，J.，等人，Cancer Res.2001，61，3986-3997)]。PDK1的抑制，作為潛在的用于治療癌癥的機理，是通過用針對PDK1的反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染PTEN負性的人體癌細胞系(U87MG)來證實的。所得的PDK1蛋白含量的降低導(dǎo)致細胞增殖和存活率下降(Flynn，P.，等人，Curr.Biol.2000，10，1439-1442)。所以，就PDK1的ATP結(jié)合位點抑制劑的設(shè)計，將會在其他治療中為癌癥化學(xué)療法提供有吸引力的靶點。
各種不同范圍的癌細胞基因型已經(jīng)被認(rèn)為是由于在細胞生理學(xué)中顯示出以下6種主要的變化而造成的生長信號傳導(dǎo)自足，逃避細胞程序死亡，對生長抑制信號傳導(dǎo)不敏感，具有無限重復(fù)可能的、持續(xù)的血管生成，以及導(dǎo)致轉(zhuǎn)移性病灶的組織侵襲(Hanahan，D.等人，Cell 2000，100，57-70)。PDK1是PI3K信號傳導(dǎo)途徑的關(guān)鍵介質(zhì)，其調(diào)節(jié)著大量的細胞功能，包括生長、增殖和存活。因此，這一途徑的抑制可能會影響癌癥進展的六種明確需要中的四種或更多。因此，可以預(yù)料，PDK1抑制劑將會對非常寬范圍的人類癌癥的生長造成影響。
具體而言，PI3K途徑活性水平的增加已經(jīng)直接與很多人類癌癥的發(fā)展、進展到攻擊性的不應(yīng)狀態(tài)(獲得性化學(xué)療法抗病性)以及預(yù)后差相關(guān)。這種增加的活性已經(jīng)認(rèn)為是由一系列關(guān)鍵事件造成的，包括降低的負向途徑調(diào)節(jié)劑，如磷酸酶PTEN的活性，正向途徑調(diào)節(jié)劑如Ras的活化突變，以及途徑組分本身如PKB的過表達，實例包括腦(神經(jīng)膠質(zhì)瘤)，乳房，結(jié)腸，頭和頸，腎，肺，肝臟，黑素瘤，卵巢，胰腺，前列腺，肉瘤，甲狀腺[(Teng，D.H.等人，Cancer Res.，1997 57，5221-5225)，(Brognard，J.等人，Cancer Res.，2001，61，3986-3997)，(Cheng，J.Q.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.1996，93，3636-3641)，(Int.J.Cancer 1995，64，280)，(Graff，J.R.，ExpertOpin.Ther.Targets2002，6，103-113)，(Am.J.Pathol.2001，159，431)]。
另外，通過基因剔除、基因解體、顯性失活研究、和途徑的小分子抑制劑而降低途徑功能，已經(jīng)表明，可在體外逆轉(zhuǎn)許多癌癥表型(某些研究也已經(jīng)表明在體內(nèi)有類似的效果)，如在一系列顯示以下癌癥的細胞系中阻斷增殖、降低存活力和使癌細胞對已知的化學(xué)療法變得敏感胰腺癌[(Cheng，J.Q.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.1996，93，3636-3641)，(Neoplasia 2001，3，278)]、肺癌[(Brognard，J.等人，Cancer Res.2001，61，3986-3997)，(Neoplasia 2001，3，278)]、卵巢癌[(Hayakawa，J.等人，Cancer Res.2000，60，5988-5994)，(Neoplasia2001，3，278)]、乳癌(Mol.Cancer Ther.2002，1，707)、結(jié)腸癌[(Neoplasia 2001，3，278)，(Arico，S.等人，J.Biol.Chem.2002，277，2761 3-27621)]、宮頸癌(Neoplasia2001，3，278)、前列腺癌[(Endocrinology 2001，142，4795)，(Thakkar，H.等人 J.Biol.Chem.2001，276，38361-38369)，(Chen，X.等人，Oncogene 2001，20，6073-6083)]和腦癌(惡性膠質(zhì)瘤)[(Flynn，P.等人，Curr.Biol.2000，10，1439-1442)]。
因此，迫切需要開發(fā)FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK蛋白激酶的抑制劑，它們可用于治療各種與FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK蛋白激酶有關(guān)的疾病或病癥，特別是鑒于目前可用于治療大多數(shù)這些病癥尚不充分。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的組合物作為蛋白激酶的抑制劑是有效的。在某些實施方式中，這些化合物作為FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK蛋白激酶的抑制劑是有效的。在其他實施方式中，這些化合物作為FLT-3和/或c-KIT蛋白激酶的抑制劑是有效的。這些化合物具有通式A 其中R1、R3、R4、R5、R6和R7是如下所述的。
這些化合物及其藥學(xué)上可接受的組合物可用于治療或預(yù)防多種病癥，包括但不限于心臟病、糖尿病、阿爾茨海默氏病、免疫缺陷性疾病、炎性疾病、高血壓、變應(yīng)性疾病、自體免疫疾病、破壞性骨病(例如骨質(zhì)疏松)、增殖性疾病、感染性疾病、免疫學(xué)-介導(dǎo)的疾病和病毒性疾病。組合物也可用在預(yù)防細胞死亡和增生的方法中，因此可以用于治療或預(yù)防中風(fēng)中的再灌注/局部缺血、心臟病發(fā)作和器官缺氧。組合物也可用在預(yù)防凝血酶-誘導(dǎo)的血小板聚集的方法中。組合物尤其可用于如下病癥，例如慢性骨髓性白血病(CML)、急性髓樣白血病(AML)、急性前髓細胞性白血病(APL)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、骨關(guān)節(jié)炎、局部缺血、癌癥(包括但不限于卵巢癌、乳癌和子宮內(nèi)膜癌)、肝臟疾病(包括肝缺血)、心臟疾病(例如心肌梗塞和充血性心力衰竭)、牽涉T細胞活化的病理性免疫條件和神經(jīng)變性病癥。
發(fā)明詳細內(nèi)容本發(fā)明化合物包括如上一般性描述的那些，本文的種類、小類和品種加以進一步闡述。本文應(yīng)當(dāng)適用下列定義，另有說明除外。出于本發(fā)明的目的，化學(xué)元素將根據(jù)元素周期表CAS版Handbook ofChemistry and Physics，75thEd加以鑒別。另外，有機化學(xué)的一般原理描述在“Or ganic Chemistry”，Thomas Sorrell，UniversityScience Books，Sausalito1999，和“March’s Advanced OrganicChemistry”，5thEd.，Ed.Smith，M.B.and March，J.，John Wiley&Sons，New York2001中，其完整內(nèi)容引用在此作為參考。
正如本文所述，本發(fā)明化合物可以可選地被一個或多個取代基取代，例如上面概述所闡述的，或者如本發(fā)明的特定大類、小類和品種所例證的。將被領(lǐng)會的是，措辭“可選被取代的”與措辭“取代或未取代的”是可互換使用的。一般而言，術(shù)語“取代”無論前面有無術(shù)語“可選”，都表示給定結(jié)構(gòu)中的氫原子團被指定取代基的原子團所代替。除非另有指示，可選被取代的基團可以在該基團每個可取代的位置上具有取代基，若任意給定結(jié)構(gòu)中一個以上位置可以被一個以上選自指定組的取代基所取代，則取代基可以在每個位置上是相同或不同的。本發(fā)明所關(guān)注的取代基組合優(yōu)選地是能形成穩(wěn)定的或化學(xué)上可行的化合物的那些。本文所用的術(shù)語“穩(wěn)定的”表示在受到用于它們制備、檢測、優(yōu)選回收、純化的條件和用于一種或多種本文所公開的目的時基本上不變的化合物。在有些實施方式中，穩(wěn)定的化合物或化學(xué)上可行的化合物是在沒有水分或其他化學(xué)反應(yīng)性條件的存在下、在40℃或以下的溫度下保持至少一周而基本上不發(fā)生變化的化合物。
本文所用的術(shù)語“脂族”或“脂族基團”表示直鏈(即未分支)或支鏈的取代或未取代的烴鏈，它是完全飽和的或者含有一個或多個不飽和單元，或者表示單環(huán)烴或二環(huán)烴，它是完全飽和的或者含有一個或多個不飽和單元，但是不是芳族的(本文也稱之為“碳環(huán)”、“環(huán)脂族”或“環(huán)烷基”)，它具有單一的與分子其余部分連接的點。除非另有說明，脂族基團含有1-20個脂族碳原子。在有些實施方式中，脂族基團含有1-10個脂族碳原子。在其他實施方式中，脂族基團含有1-8個脂族碳原子。在其他實施方式中，脂族基團含有1-6個脂族碳原子，在其他實施方式中，脂族基團含有1-4個脂族碳原子。在有些實施方式中，“環(huán)脂族”(或者“碳環(huán)”或“環(huán)烷基”)表示單環(huán)C3-C8烴或二環(huán)C8-C12烴，它是完全飽和的或者含有一個或多個不飽和單元，但不是芳族的，它具有單一的與分子其余部分連接的點，其中所述二環(huán)環(huán)系中任意單一的環(huán)是3-7元環(huán)。適合的脂族基團包括但不限于直鏈或支鏈的取代或未取代的烷基、烯基、炔基及其雜合物，例如(環(huán)烷基)烷基、(環(huán)烯基)烷基或(環(huán)烷基)烯基。
本文所用的術(shù)語“雜脂族”表示其中一個或兩個碳原子獨立地被一個或多個氧、硫、氮、磷或硅代替的脂族基團。雜脂族基團可以是取代或未取代的、直鏈或支鏈的、環(huán)狀或無環(huán)的，包括“雜環(huán)”、“雜環(huán)基”、“雜環(huán)脂族”或“雜環(huán)的”基團。
本文所用的術(shù)語“雜環(huán)”、“雜環(huán)基”、“雜環(huán)脂族”或“雜環(huán)的”表示非芳族的、單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)環(huán)系，其中一個或多個環(huán)成員是獨立選擇的雜原子。在有些實施方式中，“雜環(huán)”、“雜環(huán)基”、“雜環(huán)脂族”或“雜環(huán)的”基團具有三至十四個環(huán)成員，其中一個或多個環(huán)成員是獨立選自氧、硫、氮或磷的雜原子，該系統(tǒng)中每個環(huán)含有3至7個環(huán)成員。
術(shù)語“雜原子”表示一個或多個氧、硫、氮、磷或硅(包括氮、硫、磷或硅的任意氧化形式；任意堿性氮或雜環(huán)可取代氮的季銨化形式，例如N(如在3，4-二氫-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-取代的吡咯烷基中))。
本文所用的術(shù)語“不飽和的”意味著該部分具有一個或多個不飽和單元。
本文所用的術(shù)語“烷氧基”或“硫代烷基”表示如前文所定義的烷基通過氧(“烷氧基”)或硫(“硫代烷基”)原子與主體碳鏈連接。
術(shù)語“鹵代烷基”、“鹵代烯基”和“鹵代烷氧基”表示被一個或多個鹵原子取代的烷基、烯基或烷氧基，視情況而定。術(shù)語“鹵素”表示F、Cl、Br或I。
單獨或者作為更大部分“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”的一部分使用的術(shù)語“芳基”表示具有總計五至十四個環(huán)成員的單環(huán)、二環(huán)和三環(huán)環(huán)系，其中該系統(tǒng)中至少一個環(huán)是芳族的，并且其中該系統(tǒng)中每個環(huán)含有3至7個環(huán)成員。術(shù)語“芳基”可以與術(shù)語“芳基環(huán)”互換使用。術(shù)語“芳基”也表示如下所定義的雜芳基環(huán)系。
單獨或者作為更大部分“雜芳烷基”或“雜芳基烷氧基”的一部分使用的術(shù)語“雜芳基”表示具有總計五至十四個環(huán)成員的單環(huán)、二環(huán)和三環(huán)環(huán)系，其中該系統(tǒng)中至少一個環(huán)是芳族的，該系統(tǒng)中至少一個環(huán)含有一個或多個雜原子，并且其中該系統(tǒng)中每個環(huán)含有3至7個環(huán)成員。術(shù)語“雜芳基”可以與術(shù)語“雜芳基環(huán)”或術(shù)語“雜芳族”互換使用。
芳基(包括芳烷基、芳烷氧基、芳氧基烷基等)或雜芳基(包括雜芳烷基和雜芳烷氧基等)可以含有一個或多個取代基，因而可以是“可選被取代的”。除非上文和本文另有定義，芳基或雜芳基的不飽和碳原子上適合的取代基一般選自鹵素、-R°、-OR°、-SR°、可選被R°取代的苯基(Ph)、可選被R°取代的-O(Ph)、可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)、可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)、-NO2、-CN、-N(R°)2、-NR°C(O)R°、-NR°C(S)R°、-NR°C(O)N(R°)2、-NR°C(S)N(R°)2、-NR°CO2R°、-NR°NR°C(O)R°、-NR°NR°C(O)N(R°)2、-NR°NR°CO2R°、-C(O)C(O)R°、-C(O)CH2C(O)R°、-CO2R°、-C(O)R°、-C(S)R°、-C(O)N(R°)2、-C(S)N(R°)2、-OC(O)N(R°)2、-OC(O)R°、-C(O)N(OR°)R°、-C(NOR°)R°、-S(O)2R°、-S(O)3R°、-SO2N(R°)2、-S(O)R°、-NR°SO2N(R°)2、-NR°SO2R°、-N(OR°)R°、-C(＝NH)-N(R°)2、-P(O)2R°、-PO(R°)2、-OPO(R°)2、-(CH2)0-2NHC(O)R°、可選被R°取代的苯基(Ph)、可選被R°取代的-O(Ph)、可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)或者可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)；其中每次獨立出現(xiàn)的R°選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)、苯基、-O(Ph)或-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同取代基或不同取代基上的兩次獨立出現(xiàn)的R°與每個R°基團所鍵合的原子一起構(gòu)成可選被取代的3-12元飽和、部分不飽和或完全不飽和的單環(huán)或二環(huán)，具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子。
R°的脂族基團上可選的取代基選自NH2、NH(C1-4脂族基團)、N(C1-4脂族基團)2、鹵素、C1-4脂族基團、OH、O(C1-4脂族基團)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基團)、O(鹵代C1-4脂族基團)或鹵代C1-4脂族基團，其中R°的每個上述C1-4脂族基團是未取代的。
脂族或雜脂族基團或者非芳族雜環(huán)可以含有一個或多個取代基，因而可以是“可選被取代的”。除非上文和本文另有定義，脂族或雜脂族基團或者非芳族雜環(huán)的飽和碳原子上適合的取代基選自上面關(guān)于芳基或雜芳基不飽和碳所列舉的那些，并且另外包括下列基團＝O、＝S、＝NNHR*、＝NN(R*)2、＝NNHC(O)R*、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)或＝NR*，其中每個R*獨立地選自氫或者可選被取代的C1-6脂族基團。
除非上文和本文另有定義，非芳族雜環(huán)氮上可選的取代基選自-R+、-N(R+)2、-C(O)R+、-CO2R+、-C(O)C(O)R+、-C(O)CH2C(O)R+、-SO2R+、-SO2N(R+)2、-C(＝S)N(R+)2、-C(＝NH)-N(R+)2或-NR+SO2R+；其中R+是氫、可選被取代的C1-6脂族基團、可選被取代的苯基、可選被取代的-O(Ph)、可選被取代的-CH2(Ph)、可選被取代的-(CH2)1-2(Ph)、可選被取代的-CH＝CH(Ph)、或者具有一至四個獨立選自氧、氮或硫的雜原子的未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)，或者盡管有如上定義，在相同取代基或不同取代基上的兩次獨立出現(xiàn)的R+與每個R+基團所鍵合的原子一起構(gòu)成可選被取代的3-12元飽和、部分不飽和或完全不飽和的單環(huán)或二環(huán)，具有0-4個獨立選自氮、氧或硫的雜原子。
R+的脂族基團或苯基環(huán)上可選的取代基選自-NH2、-NH(C1-4脂族基團)、-N(C1-4脂族基團)2、鹵素、C1-4脂族基團、-OH、-O(C1-4脂族基團)、-NO2、-CN、-CO2H、-CO2(C1-4脂族基團)、-O(鹵代C1-4脂族基團)或鹵代C1-4脂族基團，其中R+的每個上述C1-4脂族基團是未取代的。
在雜環(huán)基取代的情況下，取代基可以附著于碳原子和雜原子上可取代的位置。例如，如果所述被取代的結(jié)構(gòu)是哌嗪環(huán)，取代基是CH3，那么所述化合物可以是 在一種實施方式中，本發(fā)明涉及式I化合物 其中X是CH或N；Y是CH2、NH、NR、O或S；R1是氫或者C1-6烷基；R2是氫；R3是可選被取代的芳基，選自5-6元單環(huán)或8-12元二環(huán)的環(huán)；所述芳基具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子；R5是氫、-C1-6脂族基、-CN、-OH、-O(C1-6脂族基)、-CO2H、-CO2(C1-6脂族基)、-CON(R)2、-O(鹵代C1-4脂族基)、-鹵代C1-4脂族基、-NO2、-鹵素、-NR°2或者可選被NH2取代的-C1-6脂族基；R4是氫、鹵素；-R°；-OR°；-SR°；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被R°取代的苯基(Ph)；可選被R°取代的-O(Ph)；可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°C(S)R°；-NR°C(O)N(R°)2；-NR°C(S)N(R°)2；-NR°CO2R°；-NR°NR°C(O)R°；-NR°NR°C(O)N(R°)2；-NR°NR°CO2R°；-C(O)C(O)R°；-C(O)CH2C(O)R°；-CO2R°；-C(O)R°；-C(S)R°；-C(O)N(R°)2；-C(S)N(R°)2；-C(＝NH)-N(R°)2、-OC(O)N(R°)2；-OC(O)R°；-C(O)N(OR°)R°；-C(NOR°)R°；-S(O)2R°；-S(O)3R°；-SO2N(R°)2；-S(O)R°；-NR°SO2N(R°)2；-NR°SO2R°；-N(OR°)R°；-C(＝NH)-N(R°)2；-(CH2)0-2NHC(O)R°、＝O、＝S、＝NNHR*、＝NN(R*)2、＝NNHC(O)R*、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)或者＝NR*，其中每次獨立出現(xiàn)的R°選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的R°與每個R°所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；R°的脂族基可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；每個R*獨立地選自氫或者C1-6脂族基，可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；R是氫或者C1-6脂族基，可選地被＝O、＝S、-NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的。
本發(fā)明的另一實施方式涉及式II化合物 其中X是CH或N；Y是CH2、NH、NR、O或S；n是0-4；m是0-4；R1是氫或者-N(H)R2；R2是氫或者C1-6脂族基；R3是芳基，選自5-6元單環(huán)或8-12元二環(huán)的環(huán)；所述芳基具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子，其中R3的每個可取代位置可選地和獨立地被R7代替；R5是氫、-C1-6脂族基、-CN、-OH、-O(C1-6脂族基)、-CO2H、-CO2(C1-6脂族基)、-CON(R°)2、-NO2、-鹵素、-NR°2，其中脂族碳的每個可取代位置可選地和獨立地被鹵素或NH2取代；R7是鹵素；-R°；-OR°；-SR°；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被R°取代的苯基(Ph)；可選被R°取代的-O(Ph)；可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°C(S)R°；-NR°C(O)N(R°)2；-NR°C(S)N(R°)2；-NR°CO2R°；-NR°NR°C(O)R°；-NR°NR°C(O)N(R°)2；-NR°NR°CO2R°；-C(O)C(O)R°；-C(O)CH2C(O)R°；-CO2R°；-C(O)R°；-C(S)R°；-C(O)N(R°)2；-C(S)N(R°)2；-OC(O)N(R°)2；-OC(O)R°；-C(O)N(OR°)R°；-C(NOR°)R°；-S(O)2R°；-S(O)3R°；-SO2N(R°)2；-S(O)R°；-NR°SO2N(R°)2；-NR°SO2R°；-N(OR°)R°；-C(＝NH)-N(R°)2；或者-(CH2)0-2NHC(O)R°；每個R4和R6是氫；鹵素；-R°；-OR°；-SR°；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被R°取代的苯基(Ph)；可選被R°取代的-O(Ph)；可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°C(S)R°；-NR°C(O)N(R°)2；-NR°C(S)N(R°)2；-NR°CO2R°；-NR°NR°C(O)R°；-NR°NR°C(O)N(R°)2；-NR°NR°CO2R°；-C(O)C(O)R°；-C(O)CH2C(O)R°；-CO2R°；-C(O)R°；-C(S)R°；-C(O)N(R°)2；-C(S)N(R°)2；-C(＝NH)-N(R°)2、-OC(O)N(R°)2；-OC(O)R°；-C(O)N(OR°)R°；-C(NOR°)R°；-S(O)2R°；-S(O)3R°；-SO2N(R°)2；-S(O)R°；-NR°SO2N(R°)2；-NR°SO2R°；-N(OR°)R°；-C(＝NH)-N(R°)2；-(CH2)0-2NHC(O)R°、＝O、＝S、＝NNHR*、＝NN(R*)2、＝NNHC(O)R*、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)或者＝NR*；X和Y和它們所附著的原子一起構(gòu)成六元環(huán)，優(yōu)選地具有2個雜原子，更優(yōu)選地具有1個雜原子；R4、R6和R7附著于環(huán)周圍任意可取代的位置，如式II所示。在雜環(huán)基取代的情況下，R4、R6和R7可以附著于碳原子和雜原子上可取代的位置。例如，如果X和Y都是N，R6是CH3，那么式II的第三個單環(huán)可以是 在本發(fā)明的另一種實施方式中，提供如下式(II)化合物，其中X是CH或N；Y是CH2、NH、NR°、O或S；n是0-4；m是0-4；R1是氫或者-N(H)R2；R2是氫或者C1-6烷基；R3是芳基，選自5-6元單環(huán)或8-12元二環(huán)的環(huán)；所述芳基具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子，其中R3的每個可取代位置可選地和獨立地被R7代替；R5是氫、-C1-6脂族基、-CN、-OH、-O(C1-6脂族基)、-CO2H、-CO2(C1-6脂族基)、-CON(R°)2、-鹵素或者-NR°2，其中脂族碳的每個可取代位置可選地和獨立地被鹵素取代；R7是鹵素；-R°；-OR°；-SR°；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被R°取代的苯基(Ph)；可選被R°取代的-O(Ph)；可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被R°取代的CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°C(S)R°；-NR°C(O)N(R°)2；-NR°C(S)N(R°)2；-NR°CO2R°；-NR°NR°C(O)R°；-NR°NR°C(O)N(R°)2；-NR°NR°CO2R°；-C(O)C(O)R°；-C(O)CH2C(O)R°；-CO2R°；-C(O)R°；-C(S)R°；-C(O)N(R°)2；-C(S)N(R°)2；-OC(O)N(R°)2；-OC(O)R°；-C(O)N(OR°)R°；-C(NOR°)R°；-S(O)2R°；-S(O)3R°；-SO2N(R°)2；-S(O)R°；-NR°SO2N(R°)2；-NR°SO2R°；-N(OR°)R°；-C(＝NH)-N(R°)2；或者-(CH2)0-2NHC(O)R°，其中每次獨立出現(xiàn)的R°選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)(其條件是雜環(huán)中的氮原子可選地被-R+或-C(O)R+取代，其中R+是(C1-6烷基)，優(yōu)選(C1-4烷基))、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的R°與每個R°所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；每個R4和R6獨立地是鹵素；-R°；-OR°；-SR°；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被R°取代的苯基(Ph)；可選被R°取代的-O(Ph)；可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°CO2R°；-C(O)CH2C(O)R°；-CO2R°；-C(O)R°；-C(O)N(R°)2；-OC(O)N(R°)2；-OC(O)R°；-S(O)2R°；-SO2N(R°)2；-S(O)R°；-NR°SO2R°；或者＝O；R°的脂族基可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基可選地被鹵素取代；R是氫或者C1-6脂族基，可選地被＝O、＝S、-NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基可選地被鹵素取代。
按照式I的一種實施方式，R1是氫。
按照式I I的一種實施方式，R1是氫。在式II的另一種實施方式中，R1是N(H)R2。
按照式I或II的另一種實施方式，R2是氫。
按照式I或II的另一種實施方式，如果X是CH，那么Y不是CH2。
按照式I或II的另一種實施方式，X是N。
按照式I或II的另一種實施方式，Y是O。
按照式I或II的另一種實施方式，Y是NR。
在式II的一些實施方式中，m、n和p各自獨立地是1或2。在另一種實施方式中，m是0；在另一種實施方式中，m是1。在一種實施方式中，n是0；在另一種實施方式中，n是1。在另一種實施方式中，p是0；在另一種實施方式中，p是1。在進一步的實施方式中，每個m、n和p是0。
在式I I的一些實施方式中，R4、R6和R7各自獨立地是鹵素；C1-4脂族基；-OR°；可選被R°取代的苯基(Ph)；可選被R°取代的-O(Ph)；可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°CO2R°；-C(O)CH2C(O)R°；-CO2R°；-C(O)R°；-C(O)N(R°)2；-OC(O)N(R°)2；-OC(O)R°；-S(O)2R°；-SO2N(R°)2；-S(O)R°；-NR°SO2R°；或者兩個鍵合于同一碳原子的氫原子被＝O代替。
在其他實施方式中，R4、R6和R7各自獨立地是鹵素；C1-4脂族基，可選地被鹵素取代；-OR°；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°CO2R°；或者兩個鍵合于同一碳原子的氫原子被＝0代替。
在其他實施方式中，R4和R6是C1-6烷基或鹵素，優(yōu)選C1-3烷基、F或Cl。
在另一種實施方式中，R7是鹵素、-CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-N(R)2或C1-4鹵代烷基。
在式I和II的一些實施方式中，R3是芳基，選自具有0-3個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的6-元單環(huán)，其中R3的每個可取代位置可選地被R7代替。
按照一種實施方式，R3是芳基，選自具有0、1或2個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的6-元單環(huán)，其中R3的每個可取代位置可選地被R7代替。
按照另一種實施方式，R3是具有1或2個氮雜原子、優(yōu)選1個氮原子的6-元雜芳基。按照另一種實施方式，R3是2-吡啶基。
在式I或II的一種實施方式中，R5是氫、鹵素、OH、NR°、CN、O-(C1-6脂族基)或者可選被-NR2取代的C1-6烷基。
在另一種實施方式中，R5是可選被-N(R)2取代的C1-6烷基。
在另一種實施方式中，R5是-CN。在另一種實施方式中，R5是氫。
一種實施方式是由式I-a所代表的
另一種實施方式是由式I-b所代表的 另一種實施方式是由式I-c所代表的 其他實施方式是由式I-1和I-2所代表的 其他實施方式是由式I-3和I-4所代表的 本發(fā)明化合物也包括其中含有X和Y的環(huán)附著于分子其余部分的任意原子上的那些，恰恰不是X原子。
在另一實施方式中，本發(fā)明提供式(III)化合物
其中環(huán)A是3-8元飽和碳環(huán)；環(huán)B是3-8元飽和或部分飽和的環(huán)，其中環(huán)B具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子；X是CH或N；Y是CH2、NR、O或S；n是0-4；m是0-4；p是0-4；R1是氫；R2是氫或者C1-6脂族基；R3是芳基，選自5-6元單環(huán)或8-12元二環(huán)的環(huán)；所述芳基具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子，其中R3的每個可取代位置可選地和獨立地被R7代替；R5是氫、-C1-6脂族基、-CN、-OH、-O(C1-6脂族基)、-CO2H、-CO2(C1-6脂族基)、-CON(R°)2、-NO2、-鹵素、-NR°2，其中脂族碳的每個可取代位置可選地和獨立地被鹵素或NH2代替；R7是鹵素；-R°；-OR°；-SR°；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被R°取代的苯基(Ph)；可選被R°取代的-O(Ph)；可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°C(S)R°；-NR°C(O)N(R°)2；-NR°C(S)N(R°)2；-NR°CO2R°；-NR°NR°C(O)R°；-NR°NR°C(O)N(R°)2；-NR°NR°CO2R°；-C(O)C(O)R°；-C(O)CH2C(O)R°；-CO2R°；-C(O)R°；-C(S)R°；-C(O)N(R°)2；-C(S)N(R°)2；-OC(O)N(R°)2；-OC(O)R°；-C(O)N(OR°)R°；-C(NOR°)R°；-S(O)2R°；-S(O)3R°；-SO2N(R°)2；-S(O)R°；-NR°SO2N(R°)2；-NR°SO2R°；-N(OR°)R°；-C(＝NH)-N(R°)2；或者-(CH2)0-2NHC(O)R°，其中每次獨立出現(xiàn)的R°選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)(其條件是雜環(huán)中的氮原子可選地被-R+或-C(O)R+取代，其中R+是(C1-6烷基)，優(yōu)選(C1-4烷基))、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的R°與每個R°所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；每個R4和R6獨立地是氫；鹵素；-R°；-OR°；-SR°；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被R°取代的苯基(Ph)；可選被R°取代的-O(Ph)；可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°C(S)R°；-NR°C(O)N(R°)2；-NR°C(S)N(R°)2；-NR°CO2R°；-NR°NR°C(O)R°；-NR°NR°C(O)N(R°)2；-NR°NR°CO2R°；-C(O)C(O)R°；-C(O)CH2C(O)R°；-CO2R°；-C(O)R°；-C(S)R°；-C(O)N(R°)2；-C(S)N(R°)2；-C(＝NH)-N(R°)2、-OC(O)N(R°)2；-OC(O)R°；-C(O)N(OR°)R°；-C(NOR°)R°；-S(O)2R°；-S(O)3R°；-SO2N(R°)2；-S(O)R°；-NR°SO2N(R°)2；-NR°SO2R°；-N(OR°)R°；-C(＝NH)-N(R°)2；-(CH2)0-2NHC(O)R°、＝O、＝S、＝NNHR*、＝NN(R*)2、＝NNHC(O)R*、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)或者＝NR*，其中每次獨立出現(xiàn)的R°選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的R°與每個R°所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；R°的脂族基可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；
每個R*獨立地選自氫或者C1-6脂族基，可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；R是氫或者C1-6脂族基，可選地被＝O、＝S、-NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的。
在進一步的實施方式中，本發(fā)明提供如下式(III)化合物，其中R2是氫或者C1-6烷基；R5是氫、-C1-6脂族基、-CN、-OH、-O(C1-6脂族基)、-CO2H、-CO2(C1-6脂族基)、-CON(R°)2、-鹵素或者-NR°2，其中脂族碳的每個可取代位置可選地被鹵素代替；每個R4、R6和R7獨立地是鹵素；-R°；-OR°；-SR°；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被R°取代的苯基(Ph)；可選被R°取代的-O(Ph)；可選被R°取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被R°取代的-CH＝CH(Ph)；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°CO2R°；-C(O)CH2C(O)R°；-CO2R°；-C(O)R°；-C(O)N(R°)2；-OC(O)N(R°)2；-OC(O)R°；-S(O)2R°；-SO2N(R°)2；-S(O)R°；或者-NR°SO2R°；或者兩個鍵合于同一碳原子的氫原子被＝O代替；其中每次獨立出現(xiàn)的R°選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的R°與每個R°所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；R°的脂族基可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基可選地被鹵素取代；R是氫或者C1-6脂族基，可選地被＝O、＝S、-NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基可選地被鹵素取代。
按照式III的進一步實施方式，R2是氫。
按照式III的進一步實施方式，任意一個或多個m、n和p是0。按照進一步的實施方式，R4、R6和R7各自獨立地是鹵素；C1-4脂族基，可選地被鹵素取代；-OR°；-CN；-N(R°)2；-NR°C(O)R°；-NR°CO2R°；或者兩個鍵合于同一碳原子的氫原子被＝O代替。在進一步的實施方式中，R4和R6是C1-6烷基或鹵素。在另一種實施方式中，R7是鹵素、-CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-N(R)2或C1-4鹵代烷基。
在式III的另一種實施方式中，R3是芳基，選自具有0-3個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的6-元單環(huán)，其中R3的每個可取代位置可選地被R7代替。在進一步的實施方式中，R3是具有1或2個氮雜原子的6-元雜芳基。在更進一步的實施方式中，R3是2-吡啶基。
按照式III的進一步實施方式，R5是氫，鹵素，OH，NR°，CN，O-(C1-6脂族基)或者可選被-NR2取代的C1-6烷基。在進一步的實施方式中，R5是可選被-N(R)2取代的C1-6烷基。在進一步的實施方式中，R5是-CN或氫。
在式III的另一種實施方式中，環(huán)A是5-7元碳環(huán)。
在式III的另一種實施方式中，環(huán)B是5-7元飽和或部分飽和的環(huán)。在進一步的實施方式中，環(huán)B是5-7元飽和或部分飽和的雜環(huán)。
式I、II和III的其他實施方式是由下列化合物所代表的

正如上文所討論的，本發(fā)明提供蛋白激酶抑制劑化合物，因而這些化合物可用于治療疾病、疾患和病癥，包括但不限于增殖性疾病、心臟病、神經(jīng)變性疾病、精神疾病、自體免疫疾病、與器官移植有關(guān)的病癥、炎性疾病、免疫學(xué)介導(dǎo)的疾病、病毒性疾病或骨疾病。在優(yōu)選的實施方式中，這些化合物可用于治療變態(tài)反應(yīng)、哮喘、阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏病、帕金森氏病、與AIDS有關(guān)的癡呆、肌萎縮性側(cè)索硬化(AML，Lou Gehrig氏病)、多發(fā)性硬化(MS)、精神分裂癥、心肌細胞肥大、再灌注/局部缺血(例如中風(fēng))、脫發(fā)、癌癥、肝腫大、心血管疾病(包括心肥大)、囊性纖維化、病毒性疾病、自體免疫疾病、動脈粥樣硬化、再狹窄、牛皮癬、炎癥、高血壓、心絞痛、腦血管收縮、外周循環(huán)病、早產(chǎn)、動脈硬化、血管痙攣(腦血管痙攣、冠狀血管痙攣)、視網(wǎng)膜病、勃起功能障礙(ED)、AIDS、骨質(zhì)疏松、克羅恩氏病與結(jié)腸炎、軸突突起和雷諾氏病。在優(yōu)選的實施方式中，該疾病、病癥或疾患是動脈粥樣硬化、高血壓、勃起功能障礙(ED)、再灌注/局部缺血(例如中風(fēng))或者血管痙攣(腦血管痙攣和冠狀血管痙攣)。
因此，在本發(fā)明的另一方面提供藥學(xué)上可接受的組合物，其中這些組合物包含如本文所述的任意化合物，并且可選地包含藥學(xué)上可接受的載體、助劑或賦形劑。在某些實施方式中，這些組合物可選地進一步包含一種或多種附加治療劑。
也將被領(lǐng)會的是，某些本發(fā)明化合物能夠以游離形式存在供治療，或者視情況為其藥學(xué)上可接受的衍生物。按照本發(fā)明，藥學(xué)上可接受的衍生物包括但不限于藥學(xué)上可接受的鹽、酯、這類酯的鹽、或者任意其他加合物或衍生物，一旦對有需要的患者給藥即能夠直接或間接提供如本文所述的化合物或者其代謝產(chǎn)物或殘余物。
本文所用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”表示這樣的鹽，在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，它們適合用于與人體和低等動物組織接觸，沒有不適當(dāng)?shù)亩拘?、刺激性、變態(tài)反應(yīng)等，與合理的利益/風(fēng)險比相稱。“藥學(xué)上可接受的鹽”表示本發(fā)明化合物的任意無毒性鹽或酯鹽，一旦對接受者給藥，即能夠直接或間接提供本發(fā)明化合物或者其抑制活性代謝產(chǎn)物或殘余物。本文所用的術(shù)語“其抑制活性代謝產(chǎn)物或殘余物”意味著其代謝產(chǎn)物或殘余物也是FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK的抑制劑。
藥學(xué)上可接受的鹽是本領(lǐng)域熟知的。例如，S.M.Berge等在J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1-19中詳細描述了藥學(xué)上可接受的鹽，引用在此作為參考。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括從適合的無機與有機酸與堿衍生的那些。藥學(xué)上可接受的無毒性酸加成鹽的實例是與無機酸或有機酸生成的氨基鹽，無機酸例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，有機酸例如乙酸、草酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸，或者利用本領(lǐng)域所用的其他方法，例如離子交換形成的鹽。其他藥學(xué)上可接受的鹽包括己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。從適當(dāng)?shù)膲A衍生的鹽包括堿金屬、堿土金屬、銨和N+(C1-4烷基)4鹽。本發(fā)明也涵蓋如本文所公開的化合物的任意堿性含氮基團的季銨化作用。借助這類季銨化作用可以得到可溶于水或油或可分散在水或油中的產(chǎn)物。代表性堿金屬或堿土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等。當(dāng)適當(dāng)?shù)臅r候，其他藥學(xué)上可接受的鹽包括無毒的銨鹽、季銨鹽和胺陽離子鹽，利用抗衡離子生成，例如鹵化物、氫氧化物、羧酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、低級烷基磺酸鹽和芳基磺酸鹽。
如上所述，本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的組合物另外包含藥學(xué)上可接受的載體、助劑或賦形劑，正如本發(fā)明中所述，它們包括適合于所需的特定劑型的任意和所有溶劑、稀釋劑或其他液體賦形劑、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等滲劑、增稠或乳化劑、防腐劑、固體粘合劑、潤滑劑等。Remington′s Pharmaceutical Sciences，SixteenthEdition，E.W.Martin(Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1980)公開了用于配制藥學(xué)上可接受的組合物的各種載體和用于其制備的已知技術(shù)。除了任何常規(guī)載體介質(zhì)與本發(fā)明化合物不相容以外，例如產(chǎn)生任何不可取的生物學(xué)效應(yīng)或者以有害方式相互作用于藥學(xué)上可接受的組合物的任何其他組分，它的使用涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。能夠充當(dāng)藥學(xué)上可接受的載體的材料的一些實例包括但不限于離子交換劑；氧化鋁；硬脂酸鋁；卵磷脂；血清蛋白質(zhì)，例如血清白蛋白；緩沖物質(zhì)，例如磷酸鹽；甘氨酸；山梨酸或山梨酸鉀；飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；鹽或電解質(zhì)，例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽；膠體二氧化硅；三硅酸鎂；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蠟類；聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段聚合物；羊毛脂；糖類，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；粉碎的黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，例如可可脂和栓劑用蠟；油類，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；藻酸；無熱原的水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇；磷酸鹽緩沖溶液；以及其他無毒的可相容的潤滑劑，例如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂；根據(jù)制劑人員的判斷，在組合物中也可以存在著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和香料、防腐劑和抗氧化劑。
另一方面，本發(fā)明提供了治療增殖性疾病、心臟病、神經(jīng)變性疾病、精神疾病、自體免疫疾病、與器官移植有關(guān)的病癥、炎性疾病、免疫學(xué)介導(dǎo)的疾病、病毒性疾病或骨疾病或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對有需要的受治療者給予有效量的化合物或者包含化合物的藥學(xué)上可接受的組合物。在本發(fā)明的某些實施方式中，化合物或藥學(xué)上可接受的組合物的“有效量”是就治療增殖性疾病、心臟病、神經(jīng)變性疾病、精神疾病、自體免疫疾病、與器官移植有關(guān)的病癥、炎性疾病、免疫學(xué)介導(dǎo)的疾病、病毒性疾病或骨疾病或者減輕其嚴(yán)重性而言有效的量。根據(jù)本發(fā)明方法的化合物和組合物可以利用就治療增殖性疾病、心臟病、神經(jīng)變性疾病、精神疾病、自體免疫疾病、與器官移植有關(guān)的病癥、炎性疾病、免疫學(xué)介導(dǎo)的疾病、病毒性疾病或骨疾病或者減輕其嚴(yán)重性而言有效的任意量和任意給藥途徑加以給藥。所需確切的量將因受治療者而異，取決于受治療者的種類、年齡與一般狀態(tài)、感染的嚴(yán)重性、特定藥物、其給藥的方式等。本發(fā)明化合物優(yōu)選地被配制成劑量單元形式，有易于給藥和劑量的一致性。本文所用的表達方式“劑量單元形式”表示物理上離散的藥物單元，對所治療的患者而言是適當(dāng)?shù)?。不過將被理解的是，本發(fā)明化合物和組合物的總每日用量將由主治醫(yī)師在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)決定。任意特定患者或生物體的具體有效劑量水平將依賴于多種因素，包括所治療的病癥和病癥的嚴(yán)重性；所采用的具體化合物的活性；所采用的具體組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；給藥的時間、給藥的途徑和所采用的具體化合物的排泄速率；治療的持續(xù)時間；與所采用的具體化合物聯(lián)合或同時使用的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域熟知的其他因素。本文所用的術(shù)語“患者”表示動物，優(yōu)選哺乳動物，最優(yōu)選人。
本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的組合物可以對人和其他動物口服、直腸、腸胃外、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(以粉劑、軟膏劑或滴劑)、頰、以口用或鼻用噴霧劑等方式給藥，這依賴于所治療感染的嚴(yán)重性。在某些實施方式中，本發(fā)明化合物可以被口服或腸胃外給藥，劑量水平為每天約0.01mg/kg至約50mg/kg、優(yōu)選約1mg/kg至約25mg/kg受治療者體重，一天一次或多次，以獲得所需的治療效果。
口服給藥的液體劑型包括但不限于藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳劑、溶液、懸液、糖漿劑和酏劑。除了活性化合物以外，液體劑型可以含有本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑，增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特別是棉籽油、花生油、玉米油、麥胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和脫水山梨醇的脂肪酸酯，和它們的混合物。除了惰性稀釋劑以外，口服組合物還可以包括助劑，例如濕潤劑、乳化與懸浮劑、甜味劑、調(diào)味劑和香料。
使用適合的分散或濕潤劑和懸浮劑，可以按照已知技術(shù)配制可注射制劑，例如無菌可注射的水性或油性懸液。無菌可注射制劑也可以是在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液、懸液或乳液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的載體和溶劑有水、林格氏溶液、U.S.P.和等滲氯化鈉溶液。另外，常規(guī)上采用無菌的不揮發(fā)油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以采用任何溫和的不揮發(fā)油，包括合成的單-或二-甘油酯。另外，在注射劑的制備中也可以使用脂肪酸，例如油酸。
可注射制劑可以這樣進行滅菌，例如通過細菌截留性濾器過濾，或者摻入無菌固體組合物形式的滅菌劑，可以在使用前將其溶解或分散在無菌的水或其他無菌可注射介質(zhì)中。
為了延長本發(fā)明化合物的作用，經(jīng)常需要延緩化合物在皮下或肌內(nèi)注射后的吸收。這可以利用水溶性差的結(jié)晶性或無定形物質(zhì)的液體懸液來實現(xiàn)。化合物的吸收速率取決于它的溶解速率，后者反過來又可能取決于晶體大小和晶型。作為替代選擇，將化合物溶解或懸浮在油類載體中，實現(xiàn)腸胃外給藥化合物形式的延遲吸收?？勺⑸涞膬煨问绞沁@樣制備的，在生物可降解的聚合物中，例如聚交酯-聚乙醇酸交酯，生成化合物的微囊包封基質(zhì)。根據(jù)化合物與聚合物的比例和所采用特定聚合物的屬性，可以控制化合物的釋放速率。其他生物可降解聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。儲庫型可注射制劑也可以將化合物包合在與機體組織相容的脂質(zhì)體或微乳中來制備。
直腸或陰道給藥組合物優(yōu)選地是栓劑，它們可以這樣制備，將本發(fā)明化合物與適合的無刺激性賦形劑或載體混合，例如可可脂、聚乙二醇或栓劑用蠟，它們在環(huán)境溫度下是固體，但是在體溫下是液體，因此在直腸或陰道腔中融化，釋放出活性化合物。
口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、粉劑和顆粒劑。在這類固體劑型中，將活性化合物與至少一種惰性的藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體混合，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，和/或a)填充劑或增容劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠，c)潤濕劑，例如甘油，d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉，e)溶解遲延劑，例如石蠟，f)吸收促進劑，例如季銨化合物，g)濕潤劑，例如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯，h)吸收劑，例如高嶺土和膨潤土，和i)潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物。在膠囊劑、片劑和丸劑的情況下，該劑型還可以包含緩沖劑。
也可以采用相似類型的固體組合物作為軟或硬的填充的明膠膠囊劑中的填充劑，膠囊所用賦形劑例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。片劑、錠劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑等固體劑型可以帶有包衣和外殼，例如腸溶衣和藥物配制領(lǐng)域熟知的其他包衣。它們可以可選地含有遮光劑，也可以是僅僅或優(yōu)先在腸道某一部分釋放活性成分的組合物，可選地為延遲的方式?？梢允褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟類。也可以采用相似類型的固體組合物作為軟與硬的填充的明膠膠囊劑中的填充劑，膠囊所用賦形劑例如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇等。
活性化合物也可以是微囊包封的形式，其中含有一種或多種上述賦形劑。片劑、錠劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑等固體劑型可以帶有包衣和外殼，例如腸溶衣、釋放控制性包衣和藥物配制領(lǐng)域熟知的其他包衣。在這類固體劑型中，可以將活性化合物與至少一種惰性稀釋劑混合，例如蔗糖、乳糖或淀粉。在正常情況下，這類劑型還可以包含除惰性稀釋劑以外的其他物質(zhì)，例如壓片潤滑劑和其他壓片助劑，例如硬脂酸鎂和微晶纖維素。在膠囊劑、片劑和丸劑的情況下，劑型還可以包含緩沖劑。它們可以可選地含有遮光劑，也可以是僅僅或優(yōu)先在腸道某一部分釋放活性成分的組合物，可選地為延遲的方式?？梢允褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟類。
本發(fā)明化合物的局部或透皮給藥劑型包括軟膏劑、糊劑、霜劑、洗劑、凝膠劑、粉劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或貼劑。將活性組分在無菌條件下與藥學(xué)上可接受的載體和任何必需的防腐劑或緩沖劑混合，根據(jù)需要而定。眼科制劑、滴耳劑和滴眼劑也被涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明涵蓋透皮貼劑的使用，它們具有控制化合物向機體遞送的附加優(yōu)點。這類劑型可以通過將化合物溶解或分散在恰當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中來制備。還可以使用吸收增強劑以增加化合物穿過皮膚的通量?？梢酝ㄟ^提供速率控制膜或者將化合物分散在聚合物基質(zhì)或凝膠中來控制速率。
正如上文一般性描述的，本發(fā)明化合物可用作蛋白激酶的抑制劑。在一種實施方式中，本發(fā)明化合物和組合物是一種或多種FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK的抑制劑，因而不希望受任意特定理論所限，化合物和組合物特別可用于治療這樣一種疾病、病癥或疾患或者減輕其嚴(yán)重性，其中一種或多種FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK的活化在該疾病、病癥或疾患中有牽連。當(dāng)FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK的活化在特定疾病、病癥或疾患中有牽連時，該疾病、病癥或疾患也可以被稱為“FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK-介導(dǎo)的疾病”或疾病癥狀。因此，在另一方面，本發(fā)明提供治療這樣一種疾病、病癥或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，其中一種或多種FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK的活化在該疾病狀態(tài)中有牽連。
在本發(fā)明中用作FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK抑制劑的化合物的活性可以在體外、體內(nèi)或細胞系中加以測定。體外測定法包括測定對活化FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK的磷酸化活性或ATP酶活性的抑制作用。選擇性的體外測定法可定量測定抑制劑與FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK結(jié)合的能力。抑制劑的結(jié)合可以這樣測量，在結(jié)合之前放射性標(biāo)記抑制劑，分離抑制劑/FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK復(fù)合物，再測定所結(jié)合的放射性標(biāo)記的量。作為替代選擇，抑制劑的結(jié)合可以這樣測定，在競爭實驗中，將新抑制劑和與已知放射性配體結(jié)合的FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK一起溫育。
在一種實施方式中，本發(fā)明提供選擇性抑制FLT-3和/或c-KIT的式I、II或III化合物。在進一步的實施方式中，本發(fā)明提供選擇性抑制FLT-3和/或c-KIT的式I化合物。本文所用的術(shù)語“選擇性抑制”意味著化合物抑制FLT-3和/或c-KIT的Ki或IC50至少兩倍低于一種或多種其他激酶，例如Aurora-2、FMS、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK-3、JNK、KDR、MET、Src、ROCK和/或SYK。在進一步的實施方式中，選擇性抑制FLT-3和/或c-KIT的化合物是抑制FLT-3和/或c-KIT的Ki或IC50至少五倍或至少十倍低于一種或多種其他激酶，例如Aurora-2、FMS、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK-3、JNK、KDR、MET、Src、ROCK和/或SYK。
本文所用的術(shù)語“可測量地抑制”表示在包含所述組合物和FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK的樣品與包含F(xiàn)LT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK而沒有所述組合物存在的等同樣品之間FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK活性有可測量的改變。
本文所用的術(shù)語“FLT-3-介導(dǎo)的疾病”表示已知FLT-3家族激酶在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。這類病癥非限制性地包括造血疾病，特別是急性骨髓性白血病(AML)、急性前髓細胞性白血病(APL)和急性淋巴細胞性白血病(ALL)。
按照另一種實施方式，本發(fā)明提供治療患者FMS-介導(dǎo)的疾病或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對所述患者給予根據(jù)本發(fā)明的組合物的步驟。
本文所用的術(shù)語“FMS-介導(dǎo)的疾病”表示已知FMS家族激酶在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。這類病癥非限制性地包括癌癥(包括但不限于卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌和乳癌)、炎性疾病和高血壓。
按照另一種實施方式，本發(fā)明提供治療患者c-KIT-介導(dǎo)的疾病或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對所述患者給予根據(jù)本發(fā)明的組合物的步驟。
本文所用的術(shù)語“c-KIT-介導(dǎo)的疾病”表示已知c-KIT家族激酶在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。這類病癥非限制性地包括AML、慢性骨髓性白血病(cML)、肥大細胞病、退行性大細胞淋巴瘤、ALL、胃腸基質(zhì)腫瘤(GIST)、T-細胞淋巴瘤、腺樣囊性癌、血管肉瘤、子宮內(nèi)膜癌、小細胞肺癌、前列腺癌、卵巢癌、乳癌、甲狀腺癌、惡性黑素瘤、結(jié)腸癌和成膠質(zhì)細胞瘤。
按照另一種實施方式，本發(fā)明提供治療患者CDK-2-介導(dǎo)的疾病或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對所述患者給予根據(jù)本發(fā)明的組合物的步驟。
本文所用的術(shù)語“CDK-2-介導(dǎo)的疾病”表示已知CDK-2在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。因此，這些化合物可用于治療已知受CDK-2激酶活性影響的疾病或病癥。這類疾病或病癥包括癌癥、阿爾茨海默氏病、再狹窄、血管生成、腎小球性腎炎、巨細胞病毒、HIV、皰疹、牛皮癬、動脈粥樣硬化、脫發(fā)和自體免疫疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、病毒感染、神經(jīng)變性疾病、與胸腺細胞程序死亡有關(guān)的疾病或者由細胞周期失調(diào)所致增殖性疾病，尤其從G1進展到S期。
按照另一種實施方式，本發(fā)明提供治療患者GSK-3-介導(dǎo)的疾病或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對所述患者給予根據(jù)本發(fā)明的組合物的步驟。
按照另一種實施方式，本發(fā)明提供治療患者Src-介導(dǎo)的疾病或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對所述患者給予根據(jù)本發(fā)明的組合物的步驟。
本文所用的術(shù)語“Src-介導(dǎo)的疾病”表示已知Src在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。這類疾病或病癥非限制性地包括癌癥，例如結(jié)腸癌、乳癌、肝癌和胰腺癌，自體免疫疾病，例如移植排斥、變態(tài)反應(yīng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，白血病，骨再造疾病，例如骨質(zhì)疏松，和病毒性疾病，例如乙型肝炎感染。
按照另一種實施方式，本發(fā)明提供治療患者Syk-介導(dǎo)的疾病或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對所述患者給予根據(jù)本發(fā)明的組合物的步驟。
本文所用的術(shù)語“Syk-介導(dǎo)的疾病”或“Syk-介導(dǎo)的病癥”表示已知Syk蛋白激酶在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。這類病癥非限制性地包括變應(yīng)性疾病，尤其哮喘。
本文所用的術(shù)語“JAK-介導(dǎo)的疾病”表示已知JAK家族激酶在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。這類病癥非限制性地包括免疫應(yīng)答，例如變應(yīng)性或I型過敏反應(yīng)、哮喘，自體免疫疾病，例如移植排斥、移植物抗宿主疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肌萎縮性側(cè)索硬化和多發(fā)性硬化，神經(jīng)變性疾病，例如家族性肌萎縮性側(cè)索硬化(FALS)，以及實體和血液惡性腫瘤，例如白血病和淋巴瘤。
本文所用的術(shù)語“PDK1-介導(dǎo)的病癥”或“疾病”表示已知PDK1在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。術(shù)語“PDK1-介導(dǎo)的病癥”或“疾病”也表示用PDK1抑制劑治療得以減輕的那些疾病或病癥。PDKl-介導(dǎo)的疾病或病癥包括但不限于增殖性疾病和癌癥。優(yōu)選地，所述癌癥選自胰腺癌、前列腺癌或卵巢癌。
本文所用的術(shù)語“PKA-介導(dǎo)的病癥”或“疾病”表示已知PKA在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。術(shù)語“PKA-介導(dǎo)的病癥”或“疾病”也表示用PKA抑制劑治療得以減輕的那些疾病或病癥。PKA-介導(dǎo)的疾病或病癥包括但不限于增殖性疾病和癌癥。
本文所用的術(shù)語“p70S6K-介導(dǎo)的病癥”或“疾病”表示已知p70S6K在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。術(shù)語“p70S6K-介導(dǎo)的病癥”或“疾病”也表示用p70S6K抑制劑治療得以減輕的那些疾病或病癥。p70S6K-介導(dǎo)的疾病或病癥包括但不限于增殖性疾病，例如癌癥和結(jié)節(jié)性硬化。
本文所用的術(shù)語“GSK-3-介導(dǎo)的疾病”表示已知GSK-3在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。這類疾病或病癥非限制性地包括自體免疫疾病、炎性疾病、代謝、神經(jīng)病學(xué)與神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏病、帕金森氏病與基底神經(jīng)節(jié)運動障礙、舞蹈病、張力障礙、威爾遜氏病、皮克氏病、額葉變性、進行性核上麻痹(PSP)、克-雅二氏病、τ病變和皮質(zhì)基底變性(CBD))、精神障礙(例如精神分裂癥、與AIDS有關(guān)的癡呆、抑郁、雙相性精神障礙和焦慮癥)、心血管疾病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、糖尿病、肌萎縮性側(cè)索硬化(AML、盧格里克氏病)、多發(fā)性硬化(MS)、心肌肥大、再灌注/局部缺血、中風(fēng)和脫發(fā)。
本文所用的術(shù)語“ROCK-介導(dǎo)的病癥”或“疾病”表示ROCK已知在其中發(fā)揮作用的任意疾病或其他有害病癥。術(shù)語“ROCK-介導(dǎo)的病癥”或“疾病”也表示用ROCK抑制劑治療得以減輕的那些疾病或病癥。這類病癥非限制性地包括高血壓、心絞痛、腦血管收縮、哮喘、外周循環(huán)病、早產(chǎn)、癌癥、勃起功能障礙、動脈硬化、痙攣(腦血管痙攣和冠狀血管痙攣)、視網(wǎng)膜病(例如青光眼)、炎性疾病、自體免疫疾病、AIDS、骨質(zhì)疏松、心肌肥大、局部缺血/再灌注-誘發(fā)的損傷和內(nèi)皮功能障礙。
在其他實施方式中，本發(fā)明涉及在有需要的患者中增強糖原合成和/或降低血液葡萄糖水平的方法，包括對所述患者給予治療有效量的包含式I、II或III化合物的組合物。這種方法尤其可用于糖尿病患者。
在另一實施方式中，本發(fā)明涉及在需要的患者中抑制過度磷酸化τ蛋白產(chǎn)生的方法，包括對所述患者給予治療有效量的包含式I、II或III化合物的組合物。這種方法尤其可用于終止或延緩阿爾茨海默氏病的進展。
在另一種實施方式中，本發(fā)明涉及在需要的患者中抑制β-連環(huán)蛋白磷酸化的方法，包括對所述患者給予治療有效量的包含式I、II或III化合物的組合物。這種方法尤其可用于治療精神分裂癥。
也將被領(lǐng)會的是，本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的組合物可以用在聯(lián)合療法中，也就是說，化合物和藥學(xué)上可接受的組合物可以在一種或多種其他所需治療劑或醫(yī)藥程序同時、之前或隨后給藥。用在聯(lián)合方案中的特定療法組合(治療劑或程序)將考慮所需治療劑和/或程序與所要達到的所需治療效果的可相容性。也將被領(lǐng)會的是，所用療法可以對同一病癥達到所需效果(例如，本發(fā)明化合物可以與另一種用于治療同一病癥的藥物同時給藥)，或者它們可以達到不同的效果(例如控制任何副作用)。正如本文所用的，在正常情況下給藥以治療或預(yù)防特定疾病或病癥的另外的治療劑被稱為“就所治療的疾病或病癥而言是適當(dāng)?shù)摹薄?br> 例如，化療劑或其他抗增殖劑可以與本發(fā)明化合物相聯(lián)合治療增殖性疾病和癌癥。其他可以用于與本發(fā)明抗癌劑組合的療法或抗癌劑包括手術(shù)、放射療法(一些實例有γ-照射、中子束放射療法、電子束放射療法、質(zhì)子療法、近程療法和系統(tǒng)性放射性同位素，僅舉數(shù)例)、內(nèi)分泌療法、生物應(yīng)答改性劑(干擾素、白介素和腫瘤壞死因子(TNF)，僅舉數(shù)例)、高溫與冷凍療法、減弱任何副作用的藥物(例如止吐劑)和其他經(jīng)過批準(zhǔn)的化療藥，包括但不限于烷基化藥(氮芥、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、美法侖、異環(huán)磷酰胺)、抗代謝產(chǎn)物(甲氨蝶呤)、嘌呤拮抗劑與嘧啶拮抗劑(6-巰基嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱)、紡錘體抑制劑(長春花堿、長春新堿、長春瑞濱、紫杉醇)、鬼臼毒素(依托泊苷、伊立替康、托泊替康)、抗生素(阿霉素、博萊霉素、絲裂霉素)、亞硝基脲(亞硝脲氮芥、環(huán)己亞硝脲)、無機離子(順鉑、卡鉑)、酶(天冬酰胺酶)、激素(他莫昔芬、醋酸亮丙瑞林、氟他胺和甲地孕酮)、GleevecTM、阿霉素、地塞米松和環(huán)磷酰胺。關(guān)于最新癌癥療法的更全面討論，參見The Merck Manual，Seventeenth Ed.1999，其完整內(nèi)容引用在此作為參考。
其他也可以與本發(fā)明抑制劑聯(lián)合的藥物實例非限制性地包括阿爾茨海默式病的治療劑，例如Aricept和Excelon；帕金森氏病的治療劑，例如左旋多巴/卡比多巴、恩他卡朋、羅匹尼羅、普拉克索、溴隱亭、培高利特、苯海索和金剛烷胺；治療多發(fā)性硬化(MS)的藥物，例如β-干擾素(例如Avonex和Rebif)、Copaxone和米托蒽醌；哮喘的治療劑，例如沙丁胺醇和Singulair；治療精神分裂癥的藥物，例如再普樂、維思通、思瑞康和氟哌啶醇；抗炎劑，例如皮質(zhì)甾類、TNF阻滯劑、IL-1RA、硫唑嘌呤、環(huán)磷酰胺和柳氮磺胺吡啶；免疫調(diào)控與免疫抑制劑，例如環(huán)孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸嗎乙基麥考酚酯、干擾素、皮質(zhì)甾類、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神經(jīng)營養(yǎng)因子，例如乙酰膽堿酯酶抑制劑、MAO抑制劑、干擾素、抗驚厥劑、離子通道阻滯劑、利魯唑和抗帕金森劑；治療心血管疾病的藥物，例如β-阻滯劑、ACE抑制劑、利尿劑、硝酸酯、鈣通道阻滯劑和他汀類；治療肝疾病的藥物，例如皮質(zhì)類固醇、考來烯胺、干擾素和抗病毒劑；治療血液病的藥物，例如皮質(zhì)類固醇、抗白血病劑和生長因子；和治療免疫缺陷性疾病的藥物，例如γ-球蛋白。
附加治療劑在本發(fā)明組合物中的含量將不超過在包含該治療劑作為唯一活性成分的組合物中通常的給藥量。優(yōu)選地，附加治療劑在目前所公開的組合物中的量將是通常的包含該藥物作為唯一治療活性成分的組合物中的含量的約50％至100％。
本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的組合物也可以引入到涂覆可植入醫(yī)藥裝置的組合物中，例如假肢、人工瓣膜、脈管移植物、支架和導(dǎo)管。因此，本發(fā)明在另一方面包括涂覆可植入裝置的組合物，其包含如上一般性描述和在本文的大類與小類中所述的本發(fā)明化合物，和適合于涂覆所述可植入裝置的載體。在另一方面，本發(fā)明包括涂有組合物的可植入裝置，所述組合物包含如上一般性描述和在本文大類與小類中所述的本發(fā)明化合物，和適合于涂覆所述可植入裝置的載體。
脈管支架例如已經(jīng)用于克服再狹窄(損傷后血管壁的再狹窄)。不過，使用斯坦特氏印?；蚱渌芍踩胙b置的患者面臨凝塊生成或血小板活化的危險。通過將該裝置預(yù)先涂覆包含激酶抑制劑的藥學(xué)上可接受的組合物，可以防止或減輕這些所不希望的效果。適合的涂料和涂覆可植入裝置的一般制備方法描述在美國專利6,099,562、5,886,026和5,304,121中。涂料通常是生物可相容的聚合材料，例如水凝膠聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己內(nèi)酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物和它們的混合物。涂料可以可選地進一步被適合的氟硅酮、多糖、聚乙二醇、磷脂或其組合的表層所覆蓋，以賦予組合物的控釋特征。
本發(fā)明的另一方面涉及在生物樣品或患者中抑制FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK活性，該方法包括對患者給予或者使所述生物樣品接觸式I、II或III化合物或者包含所述化合物的組合物。本文所用的術(shù)語“生物樣品”非限制性地包括細胞培養(yǎng)物及其提取物；從哺乳動物或其提取物獲得的活組織檢查材料；和血液、唾液、尿、糞便、精液、淚液或其他體液或其提取物。
在生物樣品中抑制FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK激酶活性可用于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種目的。這類目的的實例包括但不限于輸血、器官移植、生物樣本貯存和生物學(xué)測定。
具體實施例方式
按照下列實施例1和2的通用工藝制備通式I化合物實施例1N3-[4-(4-嗎啉-4-基-環(huán)己基)-苯基]-1-吡啶-2-基-1h-[1，2，4]三唑-3，5-二胺
HPLC方法AC1mLighting 3um，2.1×50mm梯度100％B(0.1％TFA/1.0％MeCN/水)至100％D(0.1％TFA/MeCN)歷經(jīng)4min.保持@100％D至5.6min，變?yōu)?00％B歷經(jīng)0.4min，保持1min.
流速0.8mL/min二甲基4-氰基-4-(4-硝基苯基)庚二酸酯(2)的合成 在RT和N2下，向2-(4-硝基苯基)乙腈(1)(50.12g，0.31mol)的CH3CN(1L)溶液加入Triton-B/40％MeOH(14.5mL，0.03mol)，得到深紫色溶液。將混合物加熱至回流，然后(歷經(jīng)～2.5h)加入丙烯酸甲酯(160mL，1.78mol)，繼續(xù)回流4h。將反應(yīng)冷卻，蒸發(fā)，然后用EtOAc稀釋，用2NHCl酸化。分離各層，水層用EtOAc反萃取，合并有機層，用飽和NaCl溶液洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)。經(jīng)過硅膠快速色譜純化(1L)，用1∶2 EtOAc∶己烷洗脫，得到2，為黃色的油(88.96g，86％)。
1H-NMR(500MHz，dmso-d6)8.31(d，2H)，7.78(d，2H)，3.52(s，6H)，2.4(m，6H)，2.05(m，2H)ppm.
MS-FIA333.1(M-H).
HPLC(方法A)3.484min.
甲基5-氰基-5-(4-硝基苯基)-2-氧代環(huán)己烷羧酸酯(3)的合成
在RT和N2下，向2(88.96g，0.27mol)的DME(1L)溶液加入(小心)NaH(60％礦物油分散體，31.92g，0.80mol)，得到深紫色溶液。將反應(yīng)在回流下加熱4h，冷卻，用H2O小心地淬滅，用2NHCl酸化，用2xEtOAc萃取。合并有機層，用飽和NaCl溶液洗滌，經(jīng)活性炭與Na2SO4的混合物干燥，通過C鹽過濾，蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物3，為褐色固體(83.42g，＞100％)。
1H-NMR(500MHz，dmso-d6)12.1(s，1H)，8.31(d，2H)，7.88(d，2H)，3.75(s，3H)，2.86(AB quartet，2H)，2.65(m.1H)，2.6(m，1H)，2.4(m，1H)，2.35(m，1H)ppm.
MS-FIA301.1(M-H).
HPLC(方法A)3.729min.
1-(4-硝基苯基)-4-氧代環(huán)己烷甲腈的合成 將粗產(chǎn)物3(0.27mol)、NaCl(80g，1.37mol)和水(80mL)在150-160℃DMSO(1.2L)中加熱3h。蒸餾除去溶劑，將殘余物用H2O稀釋，用3xEtOAc萃取。合并有機層，用2NHCl、3xH2O、NaCl溶液洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)。經(jīng)過快速色譜純化(1LSiO2)，用1∶3、再用1∶2 EtOAc∶己烷洗脫，得到純產(chǎn)物4，為灰白色固體(36.47g，56％收率)，以及非常輕微不純的產(chǎn)物4，為微綠色固體(14.33g，22％收率)。
1H-NMR(500MHz，dmso-d6)8.31(d，2H)，7.92(d，2H)，2.74(m，2H)，2.5(m，6H)ppm.
MS-FIA243.2(M-H).
HPLC(方法A)3.121min.
4-嗎啉代-1-(4-硝基苯基)環(huán)己烷甲腈(5a)的合成 在RT下，向1-(4-硝基苯基)-4-氧代環(huán)己烷甲腈(45.8g，187mmol)的無水THF(560mL)溶液加入嗎啉(17.2mL，197mmol)。將溶液攪拌45min，然后放置在RT水浴中。歷經(jīng)10min逐份加入三乙酰氧基硼氫化鈉(55.5g，260mmol)。2.5h后在真空中除去溶劑，將混合物溶于EtOAc(400mL)，用2N NaOH萃取(3×75mL)。然后向有機相通入HCl氣體，得到沉淀，過濾，用EtOAc(2x)和Et2O(3x)洗滌。將固體在40℃真空下干燥18h，得到異構(gòu)體的混合物(5a和5c，54.9g，84％收率)。
異構(gòu)體5a的純化(是實施例2的制備所必需的；不是實施例1的制備所必需的)將5a與5b的混合物(79.4g)溶于CH2Cl2(200mL)，裝上SiO2(2L)，后者已經(jīng)裝載到3L燒結(jié)玻璃漏斗中。用13L1∶1乙酸乙酯∶己烷洗脫至1L燒瓶中，得到5a與5b的混合物(19.77g，25％回收率)，為淡黃色固體。進一步用5∶95甲醇8L∶CH2Cl2洗脫得到純的異構(gòu)體5a(57g，72％回收率)。
5a1H-NMR(500MHz，dmso-d6)8.28(d，2H)，7.84(d，2H)，3.59(m，4H)，2.52(m，4H)，2.40(tt，1H)，2.18(d，2H)，2.02(m，4H)，1.60(m，2H)ppm. MS-FIA 316.1(M+H).HPLC(方法B)2.537min(100％).
5b1H-NMR(500MHz，dmso-d6)8.30(d，2H)，7.82(d，2H)，3.59(m，4H)，2.38(m，4H)，2.28(d，2H)，2.26(m，1H)，1.94(m，4H)，1.74(m，2H)ppm.MS-FIA316.1(M+H).HPLC2.449min(100％).
反式-與順式-4-(4-嗎啉-4-基-環(huán)己基)-苯基胺(6a與6b)的合成 (參考文獻S.B.Christensen等人，J.Med.Chem.，1998，41，821-835；and J.A.Marshall，等人，J.Org.Chem.，1977，42，3309-3311)將裝配有液上機械攪拌器、帶有加液漏斗(1L)的克萊森適配器和干冰冷凝器的2L3頸圓底燒瓶在氮下火焰干燥，冷卻。向冷凝器裝入干冰/2-丙醇，將燒瓶在正氮壓下用干冰/2-丙醇冷卻至-78℃。在氮下冷凝氨氣(1L)。然后向溶液裝入26.6g(1.16mol)鈉金屬。30min后歷經(jīng)10分鐘經(jīng)由加液漏斗滴加30g(0.0951mol)4-嗎啉代-1-(4-硝基苯基)環(huán)己烷甲腈的無水THF(300mL)溶液。完全加入后，使用50mLTHF沖洗漏斗上的任何殘留的4-嗎啉代-1-(4-硝基苯基)環(huán)己烷甲腈，使反應(yīng)升溫至-33℃，攪拌5小時。在正氮壓下滴加NH4Cl/NH4OH(9/1，100mL)淬滅反應(yīng)。加入水(200mL)，再加入EtOAc(350mL)，使氨蒸發(fā)，同時攪拌過夜。將所得懸液通過C鹽過濾，水層用EtOAc萃取(3×200mL)。合并有機層，經(jīng)MgSO4干燥，過濾，在減壓下(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器)濃縮，在RT下真空干燥后得到6a∶6b～5∶1的混合物，為淡黃色固體(23.87g，96.4％收率)。
1H-NMR(500MHz，dmso-d6)對于6a6.84(d，2H)，6.46(d，2H)，3.55(m，4H)，2.48(m，4H)，2.25(tt，1H)，2.22(tt，1H)，1.88(d，2H)，1.78(d，2H)，1.34(m，4H)ppm；對于6b的可辨別峰6.86(d，2H)，6.49(d，2H)，3.60(m，4H)，2.37(m，4H)ppm.
MS-FIA261.2(M+H).
(Z)-3-(4-(4-嗎啉代環(huán)己基)苯基)-2-苯基異脲的合成 將順式-與反式-4-(4-嗎啉-4-基-環(huán)己基)-苯基胺6b與6a(20.28g，77.9mmol)和二苯基氰基亞氨基碳酸酯(carbonimidate)(20.44g，85.6mmol)在二烷(350mL)中的混合物在N2下攪拌4天。蒸發(fā)反應(yīng)，然后用水稀釋，用5份(200mL)CH2Cl2萃取。合并有機相，用NaHCO3洗滌，蒸發(fā)至干，得到深褐色粘性的油。用Et2O(300mL)研制，得到黃褐色固體，進一步用2份Et2O(150mL)洗滌，得到產(chǎn)物7a，為黃褐色固體(21.70g，69％)。
1H-NMR(500MHz，dmso-d6)10.7(brs，1H)，7.44(t，2H)，7.35(d，2H)，7.25(m，5H)，3.57(m，4H)，2.51(m，4H)，2.44(tt，1H)，2.30(m，1H)，1.92(d，2H)，1.85(d，2H)，1.45(m，2H)，1.34(m，2H)ppm.
LC/MS(5-45％CH3CN)405.1(M+H)，403.2(M-H)，tR＝3.4min.
HPLC2.798min.
N3-[4-(4-嗎啉-4-基-環(huán)己基)-苯基]-1-吡啶-2-基-1H-[1，2，4]三唑-3，5-二胺的合成 將(Z)-3-(4-(4-嗎啉代環(huán)己基)苯基)-2-苯基異脲7a(7.00g，17.3mmol)與2-吡啶基肼(2.27g，20.8mmol)在異丙醇(100mL)中回流2天。將反應(yīng)冷卻，過濾，所得固體用乙醇洗滌。使沉淀從二烷中重結(jié)晶，過濾晶體，懸浮在甲醇中，同時攪拌1h，蒸發(fā)，在60℃高真空下干燥3天。得到純的I-3(4.88g，67％收率)，為白色固體。
1H-NMR(500MHz，dmso-d6)8.92(s，1H)，8.40(m，1H)，7.97(m，1H)，7.68(d，1H)，7.63(s，2H)，7.51(d，2H)，7.20(m，1H)，7.09(d，2H)，3.57(m，4H)，2.50(m，4H)，2.37(tt，1H)，2.26(tt，2H)，1.91(d，2H)，1.84(d，2H)，1.43(m，2H)，1.33(m，2H)ppm.
LC/MS(5-95％CH3CN)420.0(M+H)，tR＝3.1min.
HPLC2.602min.
N3-[4-(4-嗎啉-4-基-環(huán)己基)-苯基]-1-吡啶-2-基-1H-[1，2，4]三唑-3，5-二胺，甲磺酸鹽的合成 將實施例1(128.0g，0.305mol)懸浮在二烷(1.5L)中，在60-70℃下加熱。歷經(jīng)10min滴加甲磺酸(19.8mL，0.305mol)。繼續(xù)在60-70℃下攪拌1h，在室溫下攪拌3h。過濾固體，用Et2O洗滌，然后懸浮在甲醇中4次，蒸發(fā)，然后在50-60℃高真空下干燥20h。這種懸浮/蒸發(fā)/干燥工藝用甲醇重復(fù)一次，然后用乙醇重復(fù)一次(如果除去鹽中痕量二烷的努力不成功)。將固體懸浮在水(1L)中，回流15min，然后利用離心分離固體和水。離心重復(fù)兩次。將濕的固體用乙醇稀釋，蒸發(fā)，在45-50℃高真空下干燥，得到I-3，甲磺酸鹽(129.95g)，為白色固體。終產(chǎn)物含有0.3％二烷(根據(jù)NMR)。
1H-NMR(500MHZ，dmso-d6)9.51(brs，1H)，8.98(s，1H)，8.41(m，1H)，7.99(m，1H)，7.69(d，1H)，7.64(s，2H)，7.54(d，2H)，7.21(m，1H)，7.11(d，2H)，4.02(d，2H)，3.72(t，2H)，3.44(d，2H)，3.28(m，1H)，3.14(m，2H)，2.46(m，1H)，2.34(s，3H)，2.19(m，2H)，1.95(m，2H)，1.53(m，4H)ppm.
LC/MS(5-95％CH3CN)420.1(M+H)，tR＝3.2min.
HPLC2.593min.
實施例21-(4-(5-氨基-1-(吡啶-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基氨基)苯基-4-嗎啉代環(huán)己烷甲腈 (Z)-1-氰基-3-(4-((1 s，4 s)-1-氰基-4-嗎啉代環(huán)己基)苯基)-2-苯基異脲(6)的合成 如實施例1所述制備中間體5a。將反式-4-嗎啉代-1-(4-硝基苯基)環(huán)己烷甲腈(20g，63.5mmol)與10％Pd-C催化劑(750mg)在250mL乙醇中的混合物放置在Parr振蕩器中氫(38psi)下達2小時。加入200mL二氯甲烷以溶解產(chǎn)物，濾出催化劑。蒸發(fā)溶劑，得到反式-1-(4-氨基-苯基)-4-嗎啉-4-基-環(huán)己烷甲腈(18.1g，63.5mmol)，為純的黃褐色固體，無需進一步純化即可使用。
NMRCDCl37.25(m，2H)，6.70(m，2H)，3.7(m，6H)，2.65(m，4H)，2.35(m，1H)，2.25(m，2H)，2.05(m，2H)，1.85(m，4H)，F(xiàn)IA MSm+1，286.0HPLC方法10-90％CH3CN2.488min100％在RT下，將所得反式-1-(4-氨基-苯基)-4-嗎啉-4-基-環(huán)己烷甲腈(18.1g，63.5mmol)和二苯基氰基亞氨基碳酸酯(18.1g，76.2mmol)在1，4-二烷(140mL)中攪拌24h。加入蒸餾水(200mL)，得到白色沉淀，過濾，用水(100mL)、飽和碳酸氫鈉溶液(150mL)和水(200mL)洗滌。將固體在真空干燥器中干燥過夜，得到標(biāo)題化合物6(21.1g，78％收率)。
1H-NMR(DMSO，500MHz)7.55(m，4H)，7.45(m，2H)，7.3(m，3H)，3.6(m，4H)，2.45(m，4H)，2.37(t，1H)，2.15(d，2H)，2.0(d，2H)，1.9(t，2H)，1.6(m，2H)]MS+430.18，MS-428.13，HPLC Rt＝4.652min(條件10-90％乙腈歷經(jīng)7.5min)1-(4-(5-氨基-1-(吡啶-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基氨基)苯基-4-嗎啉代環(huán)己烷甲腈的合成 將1-(4-(5-氨基-1-(吡啶-2-基)-1H-1，2，4-三唑-3-基氨基)苯基-4-嗎啉代環(huán)己烷甲腈(73g，0.164mol)加入到二烷(1L)中，使混合物升溫至60-70℃。歷經(jīng)10min滴加甲磺酸(15.8g，0.164mol)。除去加熱浴，將懸液攪拌3小時。加入異丙醇(200mL)，過濾混合物。用異丙醇(50mL)繼之以二乙醚(200mL)洗滌鹽。將固體懸浮在10％甲醇-二氯甲烷(500mL)中，攪拌18小時。加入異丙醇(100mL)，過濾固體，然后用乙醚洗滌，得到純的甲磺酸鹽(I-4，甲磺酸鹽)，為白色固體(81g，91％收率)。
NMRDMSO-d69.70(bs，1H)，9.25(s，1H)，8.40(s，1H)，7.95(m，1H)，7.65(m，3H)，7.40(m，2H)，7.20(m，1H)，4.06(m，2H)，3.75(m，2H)，3.55(m，2H)，3.50(bs，1H)，3.35(m，1H)，3.15(m，2H)，2.32(m，7H)，1.90(m，2H)，1.80(m，2H).
FIA MS m+1 445.2LC-MS m+1445.31.88min方法10-90％CH3CN
HPLC方法10-90％CH3CN4.2min100％本領(lǐng)域普通技術(shù)人員借助與本文所述基本上相似的方法，可以制備式I、II和III化合物。
實施例3分析數(shù)據(jù)已經(jīng)借助與本文所述基本上相似的方法制備多種其他式I化合物。這些化合物的代表性鑒別數(shù)據(jù)總結(jié)在下表1中，包括HPLC、LC/MS(觀測)、保留時間(RT)和1H NMR數(shù)據(jù)?；衔锞幪枌?yīng)于本文提供的化合物編號。
表1



實施例4FLT-3的抑制利用放射濾器-結(jié)合測定法針對其抑制FLT-3活性的能力篩選化合物。本測定法監(jiān)測33P向底物poly(Glu，Tyr)4∶1(pE4Y)的結(jié)合。反應(yīng)是在含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、1mMDTT、0.01％BSA和2.5％DMSO的溶液中進行的。測定中的最終底物濃度為90μMATP和0.5mg/mL pE4Y(二者均來自Sigma Chemicals，StLouis，MO)?；衔锏淖罱K濃度一般在0.01與5μM之間。通常，從10mM供試化合物的DMSO儲備溶液制備系列稀釋液，進行12點滴定。反應(yīng)是在室溫下進行的。
制備兩種測定溶液。溶液1含有100mM HEPES(pH7.5)、10mMMgCl2、25mM NaCl、1mg/mL pE4Y和180μMATP(每一反應(yīng)含有0.3μCi[γ-33P]ATP)。溶液2含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mMNaCl、2mM DTT、0.02％BSA和3nM FLT-3。在96孔平板中混合50μL的溶液1和2.5mL供試化合物。用溶液2引發(fā)反應(yīng)。在室溫下溫育20分鐘后，用含有0.4mM ATP的50μL20％TCA終止反應(yīng)。然后借助來自TOMTEC(Hamden，CT)的Harvester 9600將全部反應(yīng)體積轉(zhuǎn)移至過濾平板，用5％TCA洗滌。借助Packard TopCount Microplate閃爍計數(shù)器(Meriden，CT)分析向pE4y結(jié)合的33P量。利用Prism軟件分析數(shù)據(jù)，得到IC50或Ki。
本發(fā)明化合物就FLT-3的抑制而言是有效的。
實施例5c-KIT的抑制利用放射濾器-結(jié)合測定法針對其抑制c-KIT活性的能力篩選化合物。本測定法監(jiān)測33P向底物poly(Glu，Tyr)4∶1(pE4Y)的結(jié)合。反應(yīng)是在含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、1mMDTT、0.01％BSA和2.5％DMSO的溶液中進行的。測定中的最終底物濃度為700μMATP和0.5mg/mL pE4Y(二者均來自Sigma Chemicals，StLouis，MO)?；衔锏淖罱K濃度一般在0.01與5μM之間。通常，從10mM供試化合物的DMSO儲備溶液制備系列稀釋液，進行12點滴定。反應(yīng)是在室溫下進行的。
制備兩種測定溶液。溶液1含有100mM HEPES(pH7.5)、10mMMgCl2、25mM NaCl、1mg/mL pE4Y和1.4mM ATP(每一反應(yīng)含有0.5μCi[γ-33P]ATP)。溶液2含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mMNaCl、2mM DTT、0.02％BSA和25nM c-KIT。在96孔平板中混合33μL溶液1和1.65μL供試化合物。用33μL溶液2引發(fā)反應(yīng)。在室溫下溫育20分鐘后，用含有0.2mM ATP的50μL 10％TCA終止反應(yīng)。然后借助來自TOMTEC(Hamden，CT)的Harvester 9600將全部反應(yīng)體積轉(zhuǎn)移至過濾平板，用5％TCA洗滌。借助Packard TopCount Microplate閃爍計數(shù)器(Meriden，CT)分析向pE4y結(jié)合的33P量。利用Prism軟件分析數(shù)據(jù)，得到IC50或Ki。
本發(fā)明化合物就c-KIT的抑制而言是有效的。
實施例6GSK-3的抑制利用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)酶測定法(Fox等人(1998)Protein Sci.7，2249)針對其抑制GSK-3β(AA1-420)的能力篩選化合物。反應(yīng)是在含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、300μM NADH、1mMDTT和1.5％DMSO的溶液中進行的。測定中的最終底物濃度為20μMATP(Sigma Chemicals，St Louis，MO)和300μM肽(American Peptide，Sunnyvale，CA)。反應(yīng)是在30℃下、在20nM GSK-3β的存在下進行的。偶聯(lián)酶系統(tǒng)組分的最終濃度為2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、300μMNADH、30μg/mL丙酮酸激酶和10μg/mL乳酸脫氫酶。
制備測定儲備緩沖溶液，其中含有全部上列試劑，ATP和有關(guān)供試化合物除外。將測定儲備緩沖溶液(175μl)在96孔平板中與最終濃度從0.002μM至30μM不等的5μl有關(guān)供試化合物在30℃下培育10分鐘。通常，在子板中用供試化合物的DMSO制備系列稀釋液(從10mM化合物儲備溶液開始)，進行12點滴定。加入20μl ATP引發(fā)反應(yīng)(最終濃度20μM)。利用Molecular Devices Spectramax平板讀數(shù)器(Sunnyvale，CA)獲得反應(yīng)速率，在30℃下讀取10min。從速率數(shù)據(jù)測定Ki值，作為抑制劑濃度的函數(shù)。
本發(fā)明化合物就GSK-3的抑制而言是有效的。
實施例7CDK-2的抑制利用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)酶測定法(Fox等人(1998)Protein Sci.7，2249)針對其抑制CDK-2/細胞周期蛋白A的能力篩選化合物。反應(yīng)是在含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、1mM DTT和1.5％DMSO的溶液中進行的。測定中的最終底物濃度為100μMATP(SigmaChemicals)和100μM肽(American Peptide，Sunnyvale，CA)。測定是在30℃下、在25nM CDK-2/細胞周期蛋白A的存在下進行的。偶聯(lián)酶系統(tǒng)組分的最終濃度為2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、350μM NADH、30μg/mL丙酮酸激酶和10μg/mL乳酸脫氫酶。
制備測定儲備緩沖溶液，其中含有全部上列試劑，CDK-2/細胞周期蛋白A、DTT和有關(guān)供試化合物除外。將56μL供試反應(yīng)放置在384孔平板中，繼之以加入1μL 2mM DMSO儲備液，其中含有供試化合物(最終化合物濃度30μM)。將平板在30℃下預(yù)溫育～10分鐘，加入10μL酶引發(fā)反應(yīng)(最終濃度25nM)。利用BioRad Ultramark平板讀數(shù)器(Hercules，CA)獲得反應(yīng)速率，在30℃下讀取5分鐘。按照標(biāo)準(zhǔn)方法測定Ki值。
本發(fā)明化合物就CDK-2的抑制而言是有效的。
實施例8Src的抑制利用基于放射性的測定法或分光光度測定法評價化合物是否為人Src激酶抑制劑。
Src抑制作用測定法A基于放射性的測定法測定化合物是在桿狀病毒細胞中表達和純化的全長重組人Src激酶(來自Upstate Biotechnology，cat.no.14-117)的抑制劑。在33P從ATP結(jié)合到組合物的隨機聚Glu-Tyr聚合物底物Glu∶Tyr＝4∶1(Sigma，cat.no.P-0275)的酪氨酸之后，監(jiān)測Src激酶活性。下面是測定組分的最終濃度0.05M HEPES，pH7.6，10mM MgCl2，2mM DTT，0.25mg/ml BSA，10μMATP(1-2μCi33P-ATP每次反應(yīng))，5mg/ml聚Glu-Tyr和1-2單位重組人Src激酶。在典型的測定法中，將除ATP以外的全部反應(yīng)組分預(yù)混合，等量分配到測定平板小孔中。向小孔加入抑制劑的DMSO溶液，得到最終DMSO濃度為2.5％。將測定平板在30℃下培育10分鐘，然后用33P-ATP引發(fā)反應(yīng)。反應(yīng)20分鐘后，用含有20mM Na3PO4的150μl10％三氯乙酸(TCA)猝滅反應(yīng)。然后將經(jīng)過猝滅的樣品轉(zhuǎn)移至96孔過濾平板(Whatman，UNI-Filter GF/F Glass FiberFilter，cat no.7700-3310)中，后者安裝在過濾平板真空支架上。將過濾平板用含有20mM Na3PO4的10％TCA洗滌四次，然后用甲醇洗滌四次。然后向每孔加入200μl閃爍流體。將平板密封，在TopCount閃爍計數(shù)器上量化與濾器締合的放射性量。將所結(jié)合的放射性對抑制劑濃度作圖。將數(shù)據(jù)帶入競爭性抑制作用動力學(xué)模型中，得到化合物的Ki。
Src抑制作用測定法B分光光度測定法利用偶聯(lián)酶測定法量化由人重組Src激酶-催化的聚Glu-Tyr底物磷酸化作用而從ATP產(chǎn)生的ADP(Fox等人(1998)ProteinSci.7，2249)。在本測定法中，就在激酶反應(yīng)中所生成的每分子ADP而言，一分子NADH被氧化為NAD。NADH的消失適宜在340nm下觀測。
下面是測定組分的最終濃度0.025M HEPES，pH7.6，10mM MgCl2，2mM DTT，0.25mg/ml聚Glu-Tyr和25nM重組人Src激酶。偶聯(lián)酶系統(tǒng)的最終組分濃度為2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、200(M NADH、30(g/ml丙酮酸激酶和10(g/ml乳酸脫氫酶。
在典型的測定法中，將除ATP以外的全部反應(yīng)組分預(yù)混合，等量分配在測定平板小孔中。向小孔加入抑制劑的DMSO溶液，得到最終DMSO濃度為2.5％。將測定平板在30(C下培育10分鐘，然后用100(M ATP引發(fā)反應(yīng)。在分子裝置平板讀數(shù)器上監(jiān)測340nm下吸光度隨時間的變化，即反應(yīng)的速率。將速率數(shù)據(jù)作為抑制劑濃度的函數(shù)帶入競爭性抑制作用動力學(xué)模型中，得到化合物的Ki。
本發(fā)明化合物就Src的抑制而言是有效的。
實施例9SYK的抑制利用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)酶測定法(Fox等人(1998)Protein Sci.7，2249)針對其抑制Syk的能力篩選化合物。反應(yīng)是在含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、1mM DTT和1.5％DMSO的溶液中進行的。測定中的最終底物濃度為200μMATP(Sigma Chemicals Co.)和4μMpoly Gly-Tyr肽(SigmaChemical Co.)。測定是在30℃下、在200nM Syk的存在下進行的。偶聯(lián)酶系統(tǒng)組分的最終濃度為2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、300μmNADH、30μg/mL丙酮酸激酶和10(g/mL乳酸脫氫酶。
制備測定儲備緩沖溶液，其中含有全部上列試劑，Syk、DTT和有關(guān)供試化合物除外。將56(L供試反應(yīng)放置在964孔平板中，繼之以加入1(L2mM DMSO儲備液，其中含有供試化合物(最終化合物濃度30(M)。將平板在3 0℃下預(yù)溫育～10分鐘，加入10(L酶引發(fā)反應(yīng)(最終濃度25nM)。利用BioRad Ultramark平板讀數(shù)器(Hercules，CA)獲得反應(yīng)速率，在30℃下讀取5分鐘。按照標(biāo)準(zhǔn)方法測定Ki值。
本發(fā)明化合物就Syk的抑制而言是有效的。
實施例10FMS的抑制利用放射濾器-結(jié)合測定法針對其抑制FMS活性的能力篩選化合物。本測定法監(jiān)測33P向底物poly(Glu，Tyr)4∶1(pE4Y)的結(jié)合。反應(yīng)是在含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、1mM DTT、0.01％BSA和2.5％DMSO的溶液中進行的。測定中的最終底物濃度為9 0μMATP和0.5mg/mL pE4Y(二者均來自Sigma Chemicals，St Louis，MO)?；衔锏淖罱K濃度一般在0.01與5μM之間。通常，從10mM供試化合物的DMSO儲備溶液制備系列稀釋液，進行12點滴定。反應(yīng)是在室溫下進行的。
制備兩種測定溶液。溶液1含有100mM HEPES(pH7.5)、10mMMgCl2、25mM NaCl、1mg/mL pE4Y和180μMATP(每一反應(yīng)含有0.3μCi[γ-33P]ATP)。溶液2含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mMNaCl、2mM DTT、0.02％BSA和3nM FMS。在96孔平板中混合50μL的溶液1和2.5mL供試化合物。用溶液2引發(fā)反應(yīng)。在室溫下溫育20分鐘后，用含有0.4mM ATP的50μL20％TCA終止反應(yīng)。然后借助來自TOMTEC(Hamden，CT)的Harvester 9600將全部反應(yīng)體積轉(zhuǎn)移至過濾平板，用5％TCA洗滌。借助Packard TopCount Microplate閃爍計數(shù)器(Meriden，CT)分析向pE4y結(jié)合的33P量。利用Prism軟件分析數(shù)據(jù)，得到IC50或Ki。
本發(fā)明化合物就FMS的抑制而言是有效的。
實施例11Rock抑制作用測定法利用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)酶測定法(Fox等人(1998)Protein Sci.7，2249)針對其抑制ROCK I(AA6-553)的能力篩選化合物。反應(yīng)是在含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、2mM DTT和1.5％DMSO的溶液中進行的。測定中的最終底物濃度為45μM ATP(SigmaChemicals，StLouis，MO)和200μM肽(American Peptide，Sunnyvale，CA)。反應(yīng)是在30℃下、在45nM ROCK I的存在下進行的。偶聯(lián)酶系統(tǒng)組分的最終濃度為2.5mM磷酸烯醇丙酮酸、350μMNADH、30μg/mL丙酮酸激酶和10μg/mL乳酸脫氫酶。
發(fā)現(xiàn)某些本發(fā)明化合物抑制ROCK。
實施例12JAK3抑制作用測定法按照下列方式，利用G.R.Brown等人，Bioorg.Med.Chem.Lett2000，10，575-579所述方法，針對其抑制JAK活性的能力篩選本發(fā)明化合物。向先在4℃下涂以Poly(Glu，Ala，Tyr)6∶3∶1、再用磷酸鹽緩沖鹽水0.05％和吐溫(PBST)洗滌的Maxisorb平板中，加入2μMATP、5mM MgCl2和本發(fā)明化合物的DMSO溶液。用JAK酶開始反應(yīng)，將平板在30℃下溫育60分鐘。然后將平板用PBST洗滌，加入100μl HRP-綴合4G10抗體，將平板在30℃下溫育90分鐘。將平板再次用PBST洗滌，加入100μl TMB溶液，將平板在30℃下溫育另外30分鐘。加入硫酸(100μl1M溶液)以終止反應(yīng)，在450nm下讀取平板，獲得分析光密度，以測定IC50值和Ki值。
本發(fā)明化合物就JAK-3的抑制而言是有效的。
實施例13PDK-1抑制作用測定法利用放射性-磷酸鹽結(jié)合測定法針對其抑制PDK-1的能力篩選化合物(Pitt and Lee，J.Biomol.Screen.，(1996)1，47)。測定是在100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、2mM DTT的混合物中進行的。測定中的最終底物濃度為40μMATP(Sigma Chemicals)和65μM肽(PDKtide，Upstate，Lake Placid，NY)。測定是在30℃下、在255nM PDK-1和～27.5nCi/μL[γ-32P]ATP(Amersham PharmaciaBiotech，Amersham，UK)的存在下進行的。制備測定儲備緩沖溶液，其中含有全部上列試劑，ATP和有關(guān)供試化合物除外。將15μL儲備溶液放置在96孔平板中，繼之以加入含有供試化合物的1μL0.5μMDMSO儲備液(最終化合物濃度25μM，最終DMSO濃度5％)。將平板在30℃下預(yù)溫育10分鐘，加入4μLATP引發(fā)反應(yīng)(最終濃度40μM)。
10分鐘后加入100μL100mM磷酸、0.01％吐溫-20終止反應(yīng)。將磷酸纖維素96孔平板(Millipore，Cat no.MAPHNOB50)用100μL100mM磷酸、0.01％吐溫-20預(yù)處理，然后加入反應(yīng)混合物(100μL)。使斑點浸泡至少5分鐘，然后洗滌(4×200μL100mM磷酸，0.01％吐溫-20)。干燥后，向小孔加入20μL Opt iphase‘SuperMix’液體閃爍雞尾酒試劑(Perkin Elmer)，然后閃爍計數(shù)(1450 Microbeta液體閃爍計數(shù)器，Wallac)。
相對于含有測定混合物和DMSO而無供試化合物的標(biāo)準(zhǔn)小孔而言，滴定顯示大于50％抑制的化合物，以測定IC50值。
本發(fā)明化合物就PDK-1的抑制而言是有效的。
盡管我們已經(jīng)描述了本發(fā)明的大量實施方式，不過顯然可以改變我們的基本實例，以提供其他利用本發(fā)明化合物和方法的實施方式。因此，將被領(lǐng)會的是，本發(fā)明的范圍受權(quán)利要求而非由上述實施例代表的具體實施方式
的限制。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物 X是CH或N；Y是CH2、NH、NR、O或S；R1是氫或者C1-6烷基；R2是氫；R3是可選被取代的芳基，選自5-6元單環(huán)或8-12元二環(huán)的環(huán)；所述芳基具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子；R5是氫、-C1-6脂族基、-CN、-OH、-O(C1-6脂族基)、-CO2H、-CO2(C1-6脂族基)、-CON(R)2、-O(鹵代C1-4脂族基)、-鹵代C1-4脂族基、-NO2、-鹵素、-NRo2、或者可選地被NH2取代的-C1-6脂族基；R4是氫、鹵素；-Ro；-ORo；-SRo；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被Ro取代的苯基(Ph)；可選被Ro取代的-O(Ph)；可選被Ro取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被Ro取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(Ro)2；-NRoC(O)Ro；-NRoC(S)Ro；-NRoC(O)N(Ro)2；-NRoC(S)N(Ro)2；-NRoCO2Ro；-NRoNRoC(O)Ro；-NRoNRoC(O)N(Ro)2；-NRoNRoCO2Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-CO2Ro；-C(O)Ro；-C(S)Ro；-C(O)N(Ro)2；-C(S)N(Ro)2；-C(＝NH)-N(Ro)2、-OC(O)N(Ro)2；-OC(O)Ro；-C(O)N(ORo)Ro；-C(NORo)Ro；-S(O)2Ro；-S(O)3Ro；-SO2N(Ro)2；-S(O)Ro；-NRoSO2N(Ro)2；-NRoSO2Ro；-N(ORo)Ro；-C(＝NH)-N(Ro)2；-(CH2)0-2NHC(O)Ro、＝O、＝S、＝NNHR*、＝NN(R*)2、＝NNHC(O)R*、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)或者＝NR*，其中每次獨立出現(xiàn)的Ro選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的Ro與每個Ro所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；Ro的脂族基團可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；每個R*獨立地選自氫或者C1-6脂族基，可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；R是氫或者C1-6脂族基，可選地被＝O、＝S、-NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的。
2.式(II)化合物 其中X是CH或N；Y是CH2、NRo、O或S；n是0-4；m是0-4；p是0-4；R1是氫或者-N(H)R2；R2是氫或者C1-6脂族基；R3是芳基，選自5-6元單環(huán)或8-12元二環(huán)的環(huán)；所述芳基具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子，其中R3的每個可取代位置可選地和獨立地被R7代替；R5是氫、-C1-6脂族基、-CN、-OH、-O(C1-6脂族基)、-CO2H、-CO2(C1-6脂族基)、-CON(Ro)2、-NO2、-鹵素、-NRo2，其中脂族碳的每個可取代位置可選地和獨立地被鹵素或NH2取代；R7是鹵素；-Ro；-ORo；-SRo；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被Ro取代的苯基(Ph)；可選被Ro取代的-O(Ph)；可選被Ro取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被Ro取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(Ro)2；-NRoC(O)Ro；-NRoC(S)Ro；-NRoC(O)N(Ro)2；-NRoC(S)N(Ro)2；-NRoCO2Ro；-NRoNRoC(O)Ro；-NRoNRoC(O)N(Ro)2；-NRoNRoCO2Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-CO2Ro；-C(O)Ro；-C(S)Ro；-C(O)N(Ro)2；-C(S)N(Ro)2；-OC(O)N(Ro)2；-OC(O)Ro；-C(O)N(ORo)Ro；-C(NORo)Ro；-S(O)2Ro；-S(O)3Ro；-SO2N(Ro)2；-S(O)Ro；-NRoSO2N(Ro)2；-NRoSO2Ro；-N(ORo)Ro；-C(＝NH)-N(Ro)2；或者-(CH2)0-2NHC(O)Ro，其中每次獨立出現(xiàn)的Ro選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)(其條件是雜環(huán)中的氮原子可選地被-R+或-C(O)R+取代，其中R+是(C1-6烷基)，優(yōu)選(C1-4烷基))、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的Ro與每個Ro所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；每個R4和R6獨立地是氫；鹵素；-Ro；-ORo；-SRo；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被Ro取代的苯基(Ph)；可選被Ro取代的-O(Ph)；可選被Ro取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被Ro取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(Ro)2；-NRoC(O)Ro；-NRoC(S)Ro；-NRoC(O)N(Ro)2；-NRoC(S)N(Ro)2；-NRoCO2Ro；-NRoNRoC(O)Ro；-NRoNRoC(O)N(Ro)2；-NRoNRoCO2Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-CO2Ro；-C(O)Ro；-C(S)Ro；-C(O)N(Ro)2；-C(S)N(Ro)2；-C(＝NH)-N(Ro)2、-OC(O)N(Ro)2；-OC(O)Ro；-C(O)N(ORo)Ro；-C(NORo)Ro；-S(O)2Ro；-S(O)3Ro；-SO2N(Ro)2；-S(O)Ro；-NRoSO2N(Ro)2；-NRoSO2Ro；-N(ORo)Ro；-C(＝NH)-N(Ro)2；-(CH2)0-2NHC(O)Ro、＝O、＝S、＝NNHR*、＝NN(R*)2、＝NNHC(O)R*、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)或者＝NR*，其中每次獨立出現(xiàn)的Ro選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的Ro與每個Ro所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；Ro的脂族基可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；每個R*獨立地選自氫或者C1-6脂族基，可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；R是氫或者C1-6脂族基，可選地被＝O、＝S、-NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中Y是CH2、NR、O或S；R2是氫或者C1-6烷基；R5是氫、-C1-6脂族基、-CN、-OH、-O(C1-6脂族基)、-CO2H、-CO2(C1-6脂族基)、-CON(Ro)2、-鹵素或者-NRo2，其中脂族碳的每個可取代位置可選地被鹵素代替；每個R4、R6和R7獨立地是鹵素；-Ro；-ORo；-SRo；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被Ro取代的苯基(Ph)；可選被Ro取代的-O(Ph)；可選被Ro取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被Ro取代的-CH＝CH(Ph)；-CN；-N(Ro)2；-NRoC(O)Ro；-NRoCO2Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-CO2Ro；-C(O)Ro；-C(O)N(Ro)2；-OC(O)N(Ro)2；-OC(O)Ro；-S(O)2Ro；-SO2N(Ro)2；-S(O)Ro；或者-NRoSO2Ro；或者兩個鍵合于同一碳原子的氫原子被＝O代替；其中每次獨立出現(xiàn)的Ro選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的Ro與每個Ro所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；Ro的脂族基可選地被NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基可選地被鹵素取代；R氫或者C1-6脂族基，可選地被＝O、＝S、-NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、鹵素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基可選地被鹵素取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項的化合物，其中R1是氫。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或權(quán)利要求3的化合物，其中R1是N(H)R2。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中R2是氫。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項的化合物，其中如果X是CH，那么Y不是CH2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項的化合物，其中X是N。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任意一項的化合物，其中Y是O。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-8任意一項的化合物，其中Y是NR。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10任意一項的化合物，其中m是0。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-10任意一項的化合物，其中n是0。
13.根據(jù)權(quán)利要求2-10任意一項的化合物，其中p是0。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-10任意一項的化合物，其中R4、R6和R7各自獨立地是鹵素；C1-4脂族基，可選地被鹵素取代；-ORo；-CN；-N(Ro)2；-NRoC(O)Ro；-NRoCO2Ro；或者兩個鍵合于同一碳原子的氫原子被＝O代替。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中R4和R6是C1-6烷基或鹵素。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的化合物，其中R7是鹵素、-CN、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-N(R)2或者C1-4鹵代烷基。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-16任意一項的化合物，其中R3是芳基，選自具有0-3個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的6-元單環(huán)，其中R3的每個可取代位置可選地被R7代替。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的化合物，其中R3是具有1或2個氮雜原子的6-元雜芳基。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的化合物，其中R3是2-吡啶基。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-19任意一項的化合物，其中R5是氫、鹵素、OH、NRo、CN、O-(C1-6脂族基)或者可選被-NR2取代的C1-6烷基。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的化合物，其中R5是可選被-N(R)2取代的C1-6烷基。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的化合物，其中R5是-CN或H。
23.根據(jù)權(quán)利要求2或3的化合物，具有式(I-a)
24.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，具有式(I-b)或(I-c)
25.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自下組
26.藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1-25任意一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和藥學(xué)上可接受的載體、助劑或賦形劑。
27.權(quán)利要求26的組合物，進一步包含附加治療劑，選自化學(xué)治療或抗增殖劑、治療阿爾茨海默氏病的藥物、治療帕金森氏病的藥物、治療多發(fā)性硬化(MS)的藥物、治療哮喘的藥物、治療精神分裂癥的藥物、抗炎劑、免疫調(diào)控或免疫抑制劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、治療心血管疾病的藥物、治療破壞性骨病的藥物、治療肝疾病的藥物、治療血液病的藥物或者治療免疫缺陷病的藥物。
28.抑制生物樣品或患者中FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK激酶活性的方法，包括使所述生物樣品或所述患者與a)根據(jù)權(quán)利要求26的組合物；或者b)根據(jù)權(quán)利要求1-25任意一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽接觸的步驟。
29.權(quán)利要求28的方法，其中該方法包括抑制FLT-3活性。
30.權(quán)利要求28的方法，其中該方法包括抑制c-KIT活性。
31.權(quán)利要求28的方法，其中該方法包括抑制FLT-3和c-KIT活性。
32.權(quán)利要求28的方法，其中該方法包括抑制JAK-3活性。
33.治療選自變應(yīng)性疾病、增殖性疾病、自體免疫疾病、與器官移植有關(guān)的病癥、炎性疾病、免疫學(xué)介導(dǎo)的疾病或者破壞性骨病的疾病或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對所述患者給予a)根據(jù)權(quán)利要求26的組合物，或者b)根據(jù)權(quán)利要求1-25任意一項的化合物的步驟。
34.權(quán)利要求33的方法，包括進一步對所述患者給予附加治療劑的步驟，所述治療劑選自化學(xué)治療或抗增殖劑、治療阿爾茨海默氏病的藥物、治療帕金森氏病的藥物、治療多發(fā)性硬化(MS)的藥物、治療哮喘的藥物、治療精神分裂癥的藥物、抗炎劑、免疫調(diào)控或免疫抑制劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、治療心血管疾病的藥物、治療破壞性骨病的藥物、治療肝疾病的藥物、治療血液病的藥物或者治療免疫缺陷病的藥物，其中所述附加治療劑對所治療的疾病而言是適當(dāng)?shù)?；所述附加治療劑與所述組合物一起以單一劑型給藥或者作為多劑型的一部分與所述組合物分開給藥。
35.權(quán)利要求34的方法，其中該疾病選自癌癥、阿爾茨海默氏病、再狹窄、血管生成、腎小球性腎炎、巨細胞病毒、HIV、皰疹、牛皮癬、動脈粥樣硬化、脫發(fā)、自體免疫疾病、病毒感染、神經(jīng)變性疾病、與胸腺細胞程序死亡有關(guān)的疾病或者增殖性疾病。
36.權(quán)利要求34的方法，其中該疾病選自造血疾病，特別是急性骨髓性白血病(AML)、急性前髓細胞性白血病(APL)和急性淋巴細胞性白血病(ALL)。
37.權(quán)利要求34的方法，其中該疾病選自免疫應(yīng)答，例如變應(yīng)性或I型過敏反應(yīng)、哮喘，自體免疫疾病，例如移植排斥、移植物抗宿主疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肌萎縮性側(cè)索硬化和多發(fā)性硬化，神經(jīng)變性疾病，例如家族性肌萎縮性側(cè)索硬化(FALS)，以及實體和血液惡性腫瘤，例如白血病和淋巴瘤。
38.權(quán)利要求34的方法，其中該疾病是增殖性疾病或癌癥。
39.權(quán)利要求38的方法，其中該癌癥是胰腺癌、前列腺癌或卵巢癌。
40.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自下組
41.式(III)化合物 其中環(huán)A是3-8元飽和碳環(huán)；環(huán)B是3-8元飽和或部分飽和的環(huán)，其中環(huán)B具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子；X是CH或N；Y是CH2，NR，O或S；n是0-4；m是0-4；p是0-4；R1是氫；R2是氫或者C1-6脂族基；R3是芳基，選自5-8元單環(huán)或8-12元二環(huán)的環(huán)；所述芳基具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子，其中R3的每個可取代位置可選地和獨立地被R7代替；R5是氫，-C1-6脂族基，-CN，-OH，-O(C1-6脂族基)，-CO2H，-CO2(C1-6脂族基)，-CON(Ro)2，-NO2，-鹵素，-NRo2，其中脂族碳的每個可取代位置可選地和獨立地被鹵素或NH2代替；R7是鹵素；-Ro；-ORo；-SRo；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被Ro取代的苯基(Ph)；可選被Ro取代的-O(Ph)；可選被Ro取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被Ro取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(Ro)2；-NRoC(O)Ro；-NRoC(S)Ro；-NRoC(O)N(Ro)2；-NRoC(S)N(Ro)2；-NRoCO2Ro；-NRoNRoC(O)Ro；-NRoNRoC(O)N(Ro)2；-NRoNRoCO2Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-CO2Ro；-C(O)Ro；-C(S)Ro；-C(O)N(Ro)2；-C(S)N(Ro)2；-OC(O)N(Ro)2；-OC(O)Ro；-C(O)N(ORo)Ro；-C(NORo)Ro；-S(O)2Ro；-S(O)3Ro；-SO2N(Ro)2；-S(O)Ro；-NRoSO2N(Ro)2；-NRoSO2Ro；-N(ORo)Ro；-C(＝NH)-N(Ro)2；或者-(CH2)0-2NHC(O)Ro，其中每次獨立出現(xiàn)的Ro選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)(其條件是雜環(huán)中的氮原子可選地被-R+或-C(O)R+取代，其中R+是(C1-6烷基)，優(yōu)選(C1-4烷基))、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的Ro與每個Ro所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；每個R4和R6獨立地是氫；鹵素；-Ro；-ORo；-SRo；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被Ro取代的苯基(Ph)；可選被Ro取代的-O(Ph)；可選被Ro取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被Ro取代的-CH＝CH(Ph)；-NO2；-CN；-N(Ro)2；-NRoC(O)Ro；-NRoC(S)Ro；-NRoC(O)N(Ro)2；-NRoC(S)N(Ro)2；-NRoCO2Ro；-NRoNRoC(O)Ro；-NRoNRoC(O)N(Ro)2；-NRoNRoCO2Ro；-C(O)C(O)Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-CO2Ro；-C(O)Ro；-C(S)Ro；-C(O)N(Ro)2；-C(S)N(Ro)2；-C(＝NH)-N(Ro)2，-OC(O)N(Ro)2；-OC(O)Ro；-C(O)N(ORo)Ro；-C(NORo)Ro；-S(O)2Ro；-S(O)3Ro；-SO2N(Ro)2；-S(O)Ro；-NRoSO2N(Ro)2；-NRoSO2Ro；-N(ORo)Ro；-C(＝NH)-N(Ro)2；-(CH2)0-2NHC(O)Ro，＝O，＝S，＝NNHR*，＝NN(R*)2，＝NNHC(O)R*，＝NNHCO2(烷基)，＝NNHSO2(烷基)或者＝NR*，其中每次獨立出現(xiàn)的Ro選自氫、可選被取代的C1-6脂族基、未取代的5-8元芳基、雜芳基或雜環(huán)的環(huán)、苯基、-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的Ro與每個Ro所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基、芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；Ro的脂族基可選地被NH2，NH(C1-4脂族基)，N(C1-4脂族基)2，鹵素，C1-4脂族基，OH，O(C1-4脂族基)，NO2，CN，CO2H，CO2(C1-4脂族基)，O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；每個R*獨立地選自氫或者C1-6脂族基，可選地被NH2，NH(C1-4脂族基)，N(C1-4脂族基)2，鹵素，C1-4脂族基，OH，O(C1-4脂族基)，NO2，CN，CO2H，CO2(C1-4脂族基)，O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的；R是氫或者C1-6脂族基，可選地被＝O，＝S，-NH2，NH(C1-4脂族基)，N(C1-4脂族基)2，鹵素，C1-4脂族基，OH，O(C1-4脂族基)，NO2，CN，CO2H，CO2(C1-4脂族基)，O(鹵代C1-4脂族基)或者鹵代(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基是未取代的。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的化合物，其中R2是氫或者C1-6烷基；R5是氫，-C1-6脂族基，-CN，-OH，-O(C1-6脂族基)，-CO2H，-CO2(C1-6脂族基)，-CON(Ro)2，-鹵素或者-NRo2，其中脂族碳的每個可取代位置可選地被鹵素代替；每個R4，R6和R7獨立地是鹵素；-Ro；-ORo；-SRo；1，2-亞甲二氧基；1，2-亞乙二氧基；可選被Ro取代的苯基(Ph)；可選被Ro取代的-O(Ph)；可選被Ro取代的-(CH2)1-2(Ph)；可選被Ro取代的-CH＝CH(Ph)；-CN；-N(Ro)2；-NRoC(O)Ro；-NRoCO2Ro；-C(O)CH2C(O)Ro；-CO2Ro；-C(O)Ro；-C(O)N(Ro)2；-OC(O)N(Ro)2；-OC(O)Ro；-S(O)2Ro；-SO2N(Ro)2；-S(O)Ro；或者-NRoSO2Ro；或者兩個鍵合于同一碳原子的氫原子被＝O代替；其中每次獨立出現(xiàn)的Ro選自氫，可選被取代的C1-6脂族基，未取代的5-6元雜芳基或雜環(huán)的環(huán)，苯基，-O(Ph)或者-CH2(Ph)，或者盡管有如上定義，在相同或不同的取代基上兩次獨立出現(xiàn)的Ro與每個Ro所鍵合的原子一起構(gòu)成5-8元雜環(huán)基，芳基或雜芳基環(huán)或者具有0-3個獨立選自氮、氧或硫的雜原子的3-8元環(huán)烷基環(huán)；Ro的脂族基可選地被NH2，NH(C1-4脂族基)，N(C1-4脂族基)2，鹵素，C1-4脂族基，OH，O(C1-4脂族基)，NO2，CN，CO2H，CO2(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基可選地被鹵素取代；R是氫或者C1-6脂族基，可選地被＝O，＝S，-NH2，NH(C1-4脂族基)，N(C1-4脂族基)2，鹵素，C1-4脂族基，OH，O(C1-4脂族基)，NO2，CN，CO2H，CO2(C1-4脂族基)取代，其中每個這些上述C1-4脂族基可選地被鹵素取代。
43.根據(jù)權(quán)利要求41或42的化合物，其中R2是氫。
44.根據(jù)權(quán)利要求41-43任意一項的化合物，其中m是0或1。
45.根據(jù)權(quán)利要求41-44任意一項的化合物，其中n是0或1。
46.根據(jù)權(quán)利要求41-45任意一項的化合物，其中p是0或1。
47.根據(jù)權(quán)利要求41-43任意一項的化合物，其中R4，R6和R7各自獨立地是鹵素；C1-4脂族基，可選地被鹵素取代；-ORo；-CN；-N(Ro)2；-NRoC(O)Ro；-NRoCO2Ro；或者兩個鍵合于同一碳原子的氫原子被＝O代替。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的化合物，其中R4和R6是C1-6烷基或鹵素。
49.根據(jù)權(quán)利要求42的化合物，其中R7是鹵素，-CN，C1-6烷基，C1-6烷氧基，-N(R)2或者C1-4鹵代烷基。
50.根據(jù)權(quán)利要求41-49任意一項的化合物，其中R3是芳基，選自具有0-3個獨立選自氮、氧和硫的雜原子的6-元單環(huán)，其中R3的每個可取代位置可選地被R7代替。
51.根據(jù)權(quán)利要求50的化合物，其中R3是具有1或2個氮雜原子的6-元雜芳基。
52.根據(jù)權(quán)利要求51的化合物，其中R3是2-吡啶基或4-嘧啶基。
53.根據(jù)權(quán)利要求41-52任意一項的化合物，其中R5是氫、鹵素、OH、NRo、CN、O-(C1-6脂族基)或者可選被-NR2取代的C1-6烷基。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的化合物，其中R5是可選被-N(R)2取代的C1-6烷基。
55.根據(jù)權(quán)利要求54的化合物，其中R5是-CN。
56.根據(jù)權(quán)利要求54的化合物，其中R5是氫。
57.根據(jù)權(quán)利要求41-56任意一項的化合物，其中環(huán)A是5-7元碳環(huán)。
58.根據(jù)權(quán)利要求41-57任意一項的化合物，其中環(huán)B是5-7元飽和或部分飽和的環(huán)。
59.根據(jù)權(quán)利要求58的化合物，其中環(huán)B是5-7元飽和或部分飽和的雜環(huán)。
60.根據(jù)權(quán)利要求41的化合物，其中所述化合物選自下組
61.藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求40-60任意一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和藥學(xué)上可接受的載體、助劑或賦形劑。
62.權(quán)利要求61的組合物，進一步包含附加治療劑，選自化學(xué)治療或抗增殖劑、治療阿爾茨海默氏病的藥物、治療帕金森氏病的藥物、治療多發(fā)性硬化(MS)的藥物、治療哮喘的藥物、治療精神分裂癥的藥物、抗炎劑、免疫調(diào)控或免疫抑制劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、治療心血管疾病的藥物、治療破壞性骨病的藥物、治療肝疾病的藥物、治療血液病的藥物或者治療免疫缺陷病的藥物。
63.抑制生物樣品或患者中FLT-3、FMS、c-KIT、PDGFR、JAK、AGC亞族蛋白激酶(例如PKA、PDK、p70S6K-1與-2和PKB)、CDK、GSK、Src、ROCK和/或SYK激酶活性的方法，包括使所述生物樣品或所述患者與a)根據(jù)權(quán)利要求61的組合物；或者b)根據(jù)權(quán)利要求40-60任意一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽接觸的步驟。
64.權(quán)利要求63的方法，其中該方法包括抑制FLT-3和/或c-KIT活性。
65.權(quán)利要求63的方法，其中該方法包括抑制JAK-3和/或JAK-2活性。
66.治療選自變應(yīng)性疾病、增殖性疾病、自體免疫疾病、與器官移植有關(guān)的病癥、炎性疾病、免疫學(xué)介導(dǎo)的疾病或者破壞性骨病的疾病或病癥或者減輕其嚴(yán)重性的方法，包括對所述患者給予a)根據(jù)權(quán)利要求61的組合物，或者b)根據(jù)權(quán)利要求40-60任意一項的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的步驟。
67.權(quán)利要求66的方法，包括進一步對所述患者給予附加治療劑的步驟，所述治療劑選自化學(xué)治療或抗增殖劑、治療阿爾茨海默氏病的藥物、治療帕金森氏病的藥物、治療多發(fā)性硬化(MS)的藥物、治療哮喘的藥物、治療精神分裂癥的藥物、抗炎劑、免疫調(diào)控或免疫抑制劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、治療心血管疾病的藥物、治療破壞性骨病的藥物、治療肝疾病的藥物、治療血液病的藥物或者治療免疫缺陷病的藥物，其中所述附加治療劑對所治療的疾病而言是適當(dāng)?shù)?；所述附加治療劑與所述組合物一起以單一劑型給藥或者作為多劑型的一部分與所述組合物分開給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及蛋白激酶的抑制劑。本發(fā)明也提供包含本發(fā)明化合物的藥物組合物和使用這些組合物治療各種病癥的方法。
文檔編號C07D249/14GK101072556SQ200580042088
公開日2007年11月14日 申請日期2005年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月21日
發(fā)明者R·J·戴維斯, C·J·福斯特, M·J·阿諾斯特, 王堅 申請人:沃泰克斯藥物股份有限公司