專利名稱：包含新的紫杉烷類化合物的細胞毒劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的細胞毒劑及其治療用途。更具體地說，本發(fā)明涉及新的包含紫杉烷類化合物的細胞毒劑及其治療用途。這些新的細胞毒劑通過紫杉烷與細胞結(jié)合劑的化學連接以靶向方式將紫杉烷類藥物遞送到特定細胞群體而具有治療用途。
背景技術(shù)：
有許多關(guān)于嘗試用單克隆抗體-藥物綴合物特異性靶向腫瘤細胞的報道(Sela等，Immuoconjugates 189-216(C.Vogel編著，1987)；Ghose等，Targeted Drugs1-22(E.Goldberg編著，1983)；Diener等，Antibodymediated delivery systems 1-23(J.Rodwell編著，1988)；Pietersz等，Antibody mediated delivery systems 25-53(J.Rodwell編著，1988)；Bumol等，Antibody mediated delivery systems 55-79(J.Rodwell編著，1988)。所有引用的參考文獻及專利都通過引用結(jié)合到本文中。
甲氨蝶呤、柔紅霉素、多柔比星、長春新堿、長春堿、美法侖、絲裂霉素C和苯丁酸氮芥等細胞毒藥物已經(jīng)成功地與多種鼠單克隆抗體綴合。在某些情況下，藥物分子通過諸如以下的中間載體分子與抗體分子連接血清白蛋白(Garnett等，46 Cancer Res.2407-2412(1986)；Ohkawa等，23 Cancer Immunol.Immunother.81-86(1986)；Endo等，47Cancer Res.1076-1080(1980))、右旋糖酐(Hurwitz等，2 Appl.Biochem.25-35(1980)；Manabi等，34 Biochem.Pharmacol.289-291(1985)；Dillman等，46 Cancer Res.4886-4891(1986)；Shoval等，85 ProcNatl.Acad.Sci.8276-8280(1988))或聚谷氨酸(Tsukada等，73 J.Natl.Canc.Inst.721-729(1984)；Kato等，27 J.Med.Chem.1602-1607(1984)；Tsukada等，52Br.J.Cancer 111-116(1985))。
各種各樣的連接技術(shù)已經(jīng)用于制備這些免疫綴合物，并且對可裂解和不可裂解的連接分子都進行了研究。然而在大多數(shù)情形下，只有在藥物分子能夠在靶點從綴合物中釋放出未修飾形式時，才能觀測到藥物的全部細胞毒潛力。
一種用于制備抗體-藥物綴合物的可裂解連接分子是基于順式烏頭酸的酸不穩(wěn)定連接分子，其利用不同胞內(nèi)隔室的酸性環(huán)境，例如受體介導的內(nèi)吞作用中所遇到的內(nèi)體和溶酶體。Shen和Ryser引入這種方法制備柔紅霉素與大分子載體的綴合物(102 Biochem.Biophys.Res.Commun.1048-1054(1981))。Yang和Reisfeld使用相同的方法使柔紅霉素與抗黑素瘤抗體綴合(80 J.Natl.Canc.Inst.1154-1159(1988))。Dillman等也以類似方式使用酸不穩(wěn)定連接分子制備柔紅霉素與抗T細胞抗體的綴合物(48 Cancer Res. 6097-6102(1988))。
Trouet等人開發(fā)出另一種方法，涉及經(jīng)肽間隔臂連接柔紅霉素與抗體(79 Proc.Natl.Acad.Sci.626-629(1982))。使用這種方法的前提是游離藥物可通過溶酶體肽酶作用從這樣的綴合物釋放出來。
然而體外細胞毒性測試顯示，抗體-藥物綴合物很難達到與游離非綴合藥物相同的細胞毒功效。這表明從抗體釋放藥物分子的機理是非常低效的。在免疫毒素領(lǐng)域，單克隆抗體和催化活性蛋白毒素經(jīng)二硫橋連接形成的綴合物比含其它連接分子的綴合物具有更大的細胞毒性。參見Lambert等，260 J. Biol.Chem.12035-12041(1985)；Lambert等，Immunotoxins 175-209(A.Frankel編著，1988)；Ghetie等，48Cancer Res.2610-2617(1988)。這歸因于高濃度的細胞內(nèi)谷胱甘肽，其促使抗體分子和毒素之間的二硫鍵有效裂解。盡管如此，很少報道使用二硫橋制備藥物與大分子的綴合物。Shen等人(260 J.Biol.Chem.10905-10908(1985))介紹了使甲氨蝶呤轉(zhuǎn)化為巰基乙酰胺衍生物，然后經(jīng)二硫鍵與多聚-D-賴氨酸綴合。另一報道介紹了制備包含毒性藥物刺孢霉素(calicheamycin)與抗體的三硫化物綴合物(Hinman等，53 Cancer Res.3336-3342(1993))。
二硫鍵連接的抗體-藥物綴合物缺乏的一個原因是，沒有可利用的細胞毒藥物，其中含有容易用于經(jīng)二硫橋連接藥物與抗體的含硫原子的基團。此外，化學修飾現(xiàn)有藥物卻不降低其細胞毒作用是困難的。
現(xiàn)有抗體-藥物綴合物的另一個主要缺點是它們無力遞送足夠濃度的藥物到靶位，因為靶抗原的數(shù)目有限以及抗癌藥物如甲氨蝶呤、柔紅霉素和長春新堿的細胞毒性相對溫和。為了達到顯著的細胞毒性，必須將大量藥物分子與抗體直接連接或通過高分子載體連接。然而，這樣大幅度修飾的抗體常常表現(xiàn)出與靶抗原的結(jié)合減弱并且在體內(nèi)快速從血流清除。
盡管存在上述困難，但據(jù)報道，稱為美登木素生物堿的有效細胞毒劑包含細胞結(jié)合部分和細胞毒藥物基團(USP 5,208,020、USP5,416,064，以及R.V.J.Chari，31 Advanced Drug Delivery Reviews89-104(1998))。同樣地，對包含細胞結(jié)合部分和有效抗腫瘤抗體CC-1065的類似物和衍生物的有效細胞毒劑也有報道(USP 5,475,092和USP 5,585,499)。
紫杉醇(paclitaxel，商品名Taxol(泰素))——天然細胞毒性產(chǎn)物和多西他賽(docetaxel，亦稱紫杉特爾，商品名Taxotere(泰索帝)，紫杉萜類抗腫瘤藥)--半合成衍生物，這兩種藥物均被廣泛用于治療癌癥。這些化合物均屬于紫杉烷類(taxanes)化合物家族。紫杉烷類化合物是有絲分裂紡錘體毒物，抑制微管蛋白解聚作用，從而導致微管裝配速度提高，最終導致細胞死亡。盡管多西他賽和紫杉醇是有效的癌癥治療藥物，但是由于它們對異常細胞的非特異毒性，所以它們的抗腫瘤活性受到限制。
此外，紫杉醇和多西他賽等化合物的自身功效不足以用于細胞結(jié)合劑的綴合物。最近，報道了一些要比多西他賽或紫杉醇功效好的新的多西他賽類似物(Ojima等，39，J.Med. Chem.3889-3896(1996))。然而，這些化合物缺乏允許經(jīng)可裂解鍵與細胞結(jié)合劑連接的合適官能團。
因此，非常需要一種用紫杉烷類藥物治療疾病而副作用降低且不損害它們的細胞毒性的方法。
US 6,436,931、US 6,372,738和US 6,340,701介紹了經(jīng)二硫橋與單克隆抗體連接的紫杉烷類化合物。上述紫杉烷類化合物的使用功效似乎還不夠。
發(fā)明概述同第一個實施方案所公開的一樣，本發(fā)明目的之一是提供高毒性且還可有效用于治療多種疾病的紫杉烷類化合物。
本發(fā)明另一目的是提供新的紫杉烷類化合物。
上述和其它目的已經(jīng)通過獲得包含一種或多種連接有細胞結(jié)合劑的紫杉烷類化合物的細胞毒劑而實現(xiàn)。
在第二個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療組合物，其包含(A)有效量的一種或多種連接有細胞結(jié)合劑的紫杉烷類化合物，和(B)藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
在第三個實施方案中，本發(fā)明提供一種選擇性殺死細胞群體的方法，該方法包括使靶細胞或含靶細胞的組織與細胞毒性量的包含一種或多種連接有細胞結(jié)合劑的紫杉烷類化合物的細胞毒劑接觸。
發(fā)明詳述本發(fā)明基于新的紫杉烷類化合物的合成方法，該紫杉烷類化合物既保留了高細胞毒性又可與細胞結(jié)合劑有效連接。已經(jīng)證實，用可裂解鍵例如二硫鍵連接高細胞毒藥物與抗體可確保全部活性藥物在細胞內(nèi)釋放，并且這類綴合物是抗原特異性方式的細胞毒素(US6,340,701、US 6,372,738、US 6,436,931)。然而，現(xiàn)有技術(shù)披露修飾現(xiàn)有藥物卻不降低其細胞毒潛力是非常困難的。本公開發(fā)明用化學基團修飾已公開的紫杉烷類化合物而解決了這一難題。結(jié)果，本發(fā)明公開的新的紫杉烷類化合物保持并且在某種情形下甚至可以增強已知的紫杉烷類化合物的細胞毒功效。細胞結(jié)合劑-紫杉烷復合物僅允許針對不需要的細胞以靶向方式發(fā)揮紫杉烷類化合物的全部細胞毒性作用，從而避免了因損害非靶向健康細胞而產(chǎn)生的副作用。因此，本發(fā)明提供消除要被殺死或裂解的患病細胞或異常細胞(例如腫瘤細胞(尤其是實體瘤細胞))的有效藥物。
本發(fā)明細胞毒劑包含一種或多種通過連接基連接細胞結(jié)合劑的紫杉烷類化合物。所述連接基為通過常規(guī)方法與紫杉烷共價結(jié)合的化學基團部分。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述化學基團可經(jīng)酯鍵與紫杉烷共價結(jié)合。
本發(fā)明所用紫杉烷類化合物具有以下式(I)結(jié)構(gòu) Z＝H或式II基團；R1為連接基或任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、-OR2、或者任何所述1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基或者任選取代的芳基或雜環(huán)基所形成的氨基甲酸酯基。優(yōu)選R1為-OR2或任選取代的芳基或雜環(huán)基；R2為1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、任選取代的芳基或雜環(huán)基。優(yōu)選R2為烷基，更優(yōu)選取代的烷基，例如叔丁基。
R3為連接基或任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基R4為連接基、H、羥基、烷氧基、烯氧基、任選取代的烷?；趸?、芳?；趸?、烯?；趸⑷蝉；趸h(huán)烷?；趸?、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲?；趸㈦s環(huán)型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基或烯基的酯基或醚基或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X為含氮雜環(huán)基例如未取代或取代的哌啶子基、嗎啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且為H、1-10個原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、或者1-10個碳原子的未取代或取代的芳基。優(yōu)選R4為連接基或烷?；趸?。
R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基；本發(fā)明將用下面三個主要實施方案作出更全面的說明。
實施方案1R4為連接基；Z＝H或式II基團；R1為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、-OR2、或者任何所述1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基或者任選取代的芳基或雜環(huán)基所形成的氨基甲酸酯基；R2為1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、任選取代的芳基或雜環(huán)基；優(yōu)選R1為叔丁氧基、巴豆基、二甲基丙烯?；?、異丁烯基、己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、呋喃基、吡咯基(pyrollyl)、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
更優(yōu)選R1為叔丁氧基、異丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯?；?、噻吩基、噻唑基或呋喃基；R3為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基；優(yōu)選R3為巴豆基、二甲基丙烯?；?、丙烯基、異丁烯基、己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
更優(yōu)選R3為異丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯?；⑧绶曰?、噻唑基、吡啶基、叔丁基或呋喃基。
R4為連接基。
合適的連接基為本領(lǐng)域眾所周知的，包括二硫基、硫醚基、酸不穩(wěn)定基、光不穩(wěn)定基、肽酶不穩(wěn)定基和酯酶不穩(wěn)定基。優(yōu)選二硫基和硫醚基。
當連接基為含巰基或二硫基的基團時，含巰基或二硫基的側(cè)鏈可以為直鏈、支鏈、芳族或雜環(huán)基團。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員很容易確定合適的側(cè)鏈。
含巰基或二硫基的取代基的具體實例包括-O(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-OCO(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-OCO-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-OCONR12(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-OCO-苯基-X′SZ′、-OCO-呋喃基-X′SZ′、-OCO-唑基-X′SZ′、-OCO-噻唑基-X′SZ′、-OCO-噻吩基-X′SZ′、-OCO-咪唑基-X′SZ′、-OCO-嗎啉代-X′SZ′、-OCO-哌嗪子基-X′SZ′、-OCO-哌啶子基-X′SZ′、和-OCO-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′或-OCO-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′，其中
Z′為H、巰基保護基或SR′，其中X′為化學鍵、1-10個碳原子的直鏈或支鏈烷基、或者具有2-20個重復乙烯氧基單元的聚乙二醇間隔基；R′和R12相同或不同，并且為1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，或者未取代或取代的芳基或雜環(huán)基，R12還可以為H，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且為H或1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R17和R18都為H或烷基，n為1-10的整數(shù)，m為1-10的整數(shù)并且還可以為0，y為1-20的整數(shù)并且還可以為0。
R5或R7為H，R6為H，R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)，R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基，優(yōu)選R8為3-甲氧基苯基、3-氯苯基、2，5-二甲氧基苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、吲哚基、唑基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
實施方案2R1為連接基；Z為式II基團；R1為連接基。
合適的連接基為本領(lǐng)域眾所周知的，包括二硫基、硫醚基、酸不穩(wěn)定基、光不穩(wěn)定基、肽酶不穩(wěn)定基和酯酶不穩(wěn)定基。優(yōu)選二硫基和硫醚基。
當連接基為含巰基或二硫基的基團時，含巰基或二硫基的側(cè)鏈可以為直鏈、支鏈、芳族或雜環(huán)基團。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員很容易確定合適的側(cè)鏈。
含巰基或二硫基的取代基的具體實例包括-(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-NR12(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、苯基-X′SZ′、呋喃基-XSZ′、唑基-X′SZ′、噻唑基-X′SZ′、噻吩基-X′SZ′、咪唑基-X′SZ′、嗎啉代-X′SZ′、-哌嗪子基-X′SZ′、哌啶子基-XSZ′、-呋喃基-X′SZ′、-噻吩基-X′SZ′、-噻唑基-X′SZ′以及-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′、-嗎啉代-X′SZ′、-哌嗪子基-X′SZ′、-哌啶子基-X′SZ′或-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′，其中Z′為H、巰基保護基或SR′，其中X′為化學鍵、1-10個碳原子的直鏈或支鏈烷基、或者具有2-20個重復乙烯氧基單元的聚乙二醇間隔基；R′和R12相同或不同，并且為1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，或者未取代或取代的芳基或雜環(huán)基，R12還可以為H，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且為H或1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R17和R18都為H或烷基，n為1-10的整數(shù)，m為1-10的整數(shù)并且還可以為0，y為1-20的整數(shù)并且還可以為0。
R3為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基；優(yōu)選R3為巴豆基、二甲基丙烯?；?、丙烯基、異丁烯基、己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
更優(yōu)選R3為異丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯?；⑧绶曰?、噻唑基、吡啶基、叔丁基或呋喃基。
R4為H、羥基、烷氧基、烯氧基、任選取代的烷?；趸?、芳?；趸?、烯?；趸?、炔?；趸?、環(huán)烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲?；趸?、或二烷基氨基甲酰基氧基、雜環(huán)型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X為含氮雜環(huán)基例如未取代或取代的哌啶子基、嗎啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且為H、1-10個原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、或者5-10個碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基；優(yōu)選R8為3-甲氧基苯基、3-氯苯基、2，5-二甲氧基苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、唑基、咪唑基、吡啶基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
實施方案3R3為連接基；Z為式II基團；R1為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、-OR2、或者任何所述1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基或者任選取代的芳基或雜環(huán)基所形成的氨基甲酸酯基；R2為1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、任選取代的芳基或雜環(huán)基；優(yōu)選R1為叔丁氧基、巴豆基、二甲基丙烯?；惗∠┗?、己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
更優(yōu)選R1為叔丁氧基、異丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯?；?、噻吩基、噻唑基或呋喃基；R3為連接基。
合適的連接基為本領(lǐng)域眾所周知的，包括二硫基、硫醚基、酸不穩(wěn)定基、光不穩(wěn)定基、肽酶不穩(wěn)定基和酯酶不穩(wěn)定基。優(yōu)選二硫基和硫醚基。
當連接基為含巰基或二硫基的基團時，含巰基或二硫基的側(cè)鏈可以為直鏈、支鏈、芳族或雜環(huán)基團。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員很容易確定合適的側(cè)鏈。
含巰基或二硫基的取代基的具體實例包括-(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、苯基-X′SZ′、呋喃基-X′SZ′、唑基-X′SZ′、噻唑基-X′SZ′、噻吩基-X′SZ′、咪唑基-X′SZ′，其中Z′為H、巰基保護基或SR′，其中X′為化學鍵、1-10個碳原子的直鏈或支鏈烷基、或者具有2-20個重復乙烯氧基單元的聚乙二醇間隔基；R′為1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，或者未取代或取代的芳基或雜環(huán)基，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且為H或1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R17和R18都為H或烷基，n為1-10的整數(shù)，m為1-10的整數(shù)并且還可以為0，y為1-20的整數(shù)并且還可以為0。
R4為H、羥基、烷氧基、烯氧基、任選取代的烷?；趸⒎减；趸?、烯酰基氧基、炔酰基氧基、環(huán)烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、氨基甲?；趸?、烷基氨基甲?；趸?、或二烷基氨基甲?；趸㈦s環(huán)型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X為含氮雜環(huán)基例如未取代或取代的哌啶子基、嗎啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且為H、1-10個原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、或者5-10個碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基；優(yōu)選R8為3-甲氧基苯基、3-氯苯基、2，5-二甲氧基苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
本發(fā)明已經(jīng)合成下列化合物
3′-異丁烯基系列
2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。邊攪拌邊向10-乙酰氧基-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽(1.30g，1.25mmol)的乙醇(25ml)的溶液中加入肼一水合物(10.5ml)。15分鐘后，反應物用乙酸乙酯(50ml)稀釋，有機層用氯化銨(50ml)、水(50ml)和鹽水(50ml)萃取。然后，有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。殘余物在硅膠柱上用40％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑進行純化。合并含所需產(chǎn)物流分后濃縮，得到1.1g白色固體2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ 1.08(s，24H)，1.23(s，3H)，1.36(s，9H)，1.67(s，3H)，1.70(s，3H)，1.76(s，3H)，1.82(m，1H)，1.88(s，3H)，2.16(s，3H)，2.31(m，1H)，2.50(m，2H)，3.17(br s，1H)，3.79(s，3H)，3.85(d，J＝6.4Hz，1H)，3.95(s，1H)，4.18(m，2 H)，4.29(d，J＝8.4Hz，1H)，4.37(d，J＝2Hz，1H)，4.41(d，J＝8.4Hz，1H)，4.74(t，J＝9Hz，1H)，4.90(t，J＝9.8Hz，2H)，5.17(d，J＝1.6Hz，1H)，5.32(d，J＝9.2Hz，1H)，5.65(d，J＝6.8Hz，1H)，6.10(t，J＝8.8Hz，1H)，6.93(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝9.2，3.0Hz，1H)，7.28(d，J＝3.0Hz，1H).
m/z LC/MS C52H79NO16SiNa+計算值1024.5；實測值1024.3。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽。將2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(1.1g，1.1mmol)、二氯甲烷(7ml)和吡啶(0.44ml，5.5mmol)的溶液用干冰和丙酮浴冷卻至-30℃。滴加三氟甲磺酸酐(0.37ml，2.2mmol)的二氯甲烷(0.3ml)溶液。邊攪拌邊將所得溶液逐漸升至室溫。1小時后，反應物用乙酸乙酯(25ml)稀釋，有機層用氯化銨(25ml)、水(25ml)和鹽水(25ml)萃取。然后，有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。殘余物在硅膠柱上用20％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑進行純化。合并含所需產(chǎn)物流分后濃縮，得到565mg固體7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，24H)，1.26(s，3H)，1.38(s，9H)，1.68(s，3H)，1.72(s，3H)，1.92(s，3H)，1.95(s，3H)，2.20(s，3H)，2.28(m，1H)，2.31(m，1H)，2.50(m，1H)，2.80(m，1H)，3.80(s，3H)，3.95(d，J＝6.4Hz，1H)，3.98(s，3 H)，4.36(d，J＝8.0Hz，1H)，4.38(d，J＝2.4Hz，1H)，4.44(d，J＝8.0Hz，1H)，4.76(t，J＝9.2Hz，1H)，4.88(m，2H)，5.33(m，2H)，5.38(dd，J＝6.8，10.4Hz，1H)，5.68(d，J＝6.4Hz，1H)，6.13(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.07(dd，J＝3.2，9.2Hz，1H)，7.26(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C53H78F3NO18SSiNa+計算值1156.4；實測值1156.1。
7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-10-氧代-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。向7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽(565mg，0.5mmol)的二氯甲烷(20ml)攪拌溶液中加入4-甲基嗎啉N-氧化物(NMO)(117mg，1.00mmol)，然后加入高釕酸四丙基銨(TPAP)(10mg，0.03mmol)。于室溫攪拌所得混合物并監(jiān)測。8小時后，反應物經(jīng)硅藻土(celite)過濾，用二氯甲烷清洗硅藻土墊。真空濃縮合并的上清液，所得殘余物在硅膠柱上用25％乙酸乙酯/己烷進行純化。合并含產(chǎn)物流分后濃縮，得到325mg固體7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.20(s，3H)，1.30(s，3H)，1.38(s，9H)，1.68(s，3H)，1.72(s，3H)，1.92(s，3H)，1.94(s，3H)，2.18(s，3H)，2.23(m，1H)，2.35(m，1H)，2.63(m，1H)，2.83(m，1H)，3.71(m，2H)，3.81(s，3H)，4.00(s，3H)，4.34(d，J＝8.4Hz，1H)，4.39(d，J＝2.0Hz，1H)，4.45(d，J＝8.4Hz，1H)，4.78(t，J＝9.2Hz，1H)，4.87(m，2H)，5.19(dd，J＝8.0，10.0Hz，1H)，5.34(d，J＝8.8Hz，1H)，5.79(d，J＝6.0Hz，1H)，6.09(t，J＝8.8Hz，1H)，6.98(d，J＝9.2Hz，1H)，7.09(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.25(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C53H76F3NO18SSiNa+計算值1154.4；實測值1154.4。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。向7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-10-氧代-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(323mg，0.286mmol)和乙醇(3.5ml)的充分攪拌混合物中加入硼氫化鈉(58mg，1.5mmol)。10分鐘后，反應物用乙酸乙酯(15ml)稀釋，用鹽水(15ml)萃取兩次。有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用50％乙酸乙酯/己烷作為展開劑)，得到所需產(chǎn)物7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(171mg)以及副產(chǎn)物7α，10α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(78mg)。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽1H NMR(CDCl3)δ 1.09(m，24H)，1.24(s，3H)，1.38(s，9H)，1.68(s，3H)，1.71(s，3H)，1.78(s，3H)，1.97(s，3H)，2.10(s，3H)，2.23-2.33(m，2H)，2.34-2.45(m，2H)，2.50(d，J＝3.2Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.98(s，3H)，4.02(d，J＝6.0Hz，1H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.34(d，J＝7.2Hz，1H)，4.45(d，J＝2.4Hz，1H)，4.73-4.83(m，4 H)，4.98(m，2H)，5.35(d，J＝8.8Hz，1H)，5.67(d，J＝6.4Hz，1H)，5.97(t，J＝8.8Hz，1H)，6.96(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.29.2Hz，1H)，7.29(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C52H79NO15SiNa+計算值1008.5；實測值1008.4。
7α，10α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.19(s，3H)，1.34(s，3H)，1.39(s，9H)，1.66(s，3H)，1.70(s，3H)，1.84(s，3H)，1.88(s，3H)，2.07(s，3H)，2.21(m，1H)，2.29(m，1H)，2.38(m，2H)，3.66(d，J＝7.6Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.96(s，3H)，4.39-4.47(m，4H)，4.74(t，J＝8.4Hz，1H)，4.82(br s，1H)，4.90(m，1H)，5.08(d，J＝4.4Hz，1H)，5.35(d，J＝8.8Hz，1H)，5.42(d，J＝6.0Hz，1H)，6.12(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝8.8Hz，1H)，7.07(dd，J＝3.2，8.8Hz，1H)，7.32(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C52H77NO15SiNa+計算值1006.5；實測值1006.4。
7α，10α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。將7α，10α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(20mg，0.02mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(2ml)中，所得溶液用冰浴冷卻至0℃。向該溶液中加入氟化氫-吡啶(0.2ml)，將所得溶液逐漸升至室溫。16小時后，該反應物用乙酸乙酯(15ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液(15ml)猝滅。有機層用鹽水(20ml)洗滌1次，然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用70％乙酸乙酯/己烷作為展開劑)。收刮含所需產(chǎn)物帶后用乙酸乙酯在過濾器中清洗。合并有機層后真空濃縮，得到12mg白色固體7α，10α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.19(s，3H)，1.32(s，3H)，1.41(s，9H)，1.73(s，6H)，1.85(s，3H)，1.89(s，3H)，2.03(s，3H)，2.28-2.42(m，4H)，3.69(dd，J＝2.0，7.2Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.89(s，3H)，4.25(dd，J＝2.4，4.4，1H)，4.34(d，J＝6.0Hz，1H)，4.36(d，J＝6.0Hz，1H)，4.53(d，J＝7.6Hz，1H)，4.82(m，2 H)，5.00(d，J＝9.2Hz，1H)，5.08(m，1H)，5.25(d，J＝8.8Hz，1H)，5.35(d，J＝6.0Hz，1H)，6.17(t，J＝7.6Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.2，9.2Hz，1H)，7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C43H57NO15Na+計算值850.4；實測值850.3。
7α，9α-環(huán)氧-2′-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。將7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(25mg，0.025mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(2ml)中，所得溶液用冰浴冷卻至0℃。向該溶液中加入氟化氫-吡啶(0.25ml)，將所得溶液溫度逐漸升至室溫。16小時后，該反應物用乙酸乙酯(15ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液(15ml)猝滅。有機層用鹽水(20ml)洗滌1次，然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用70％乙酸乙酯/己烷作為展開劑)。收刮包含所需產(chǎn)物帶，在過濾器中用乙酸乙酯清洗。合并有機層后真空濃縮，得到12mg白色固體7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.12(s，3H).1.23(s，3H)，1.41(s，9H)，1.73(s，6H)，1.80(s，3H)，2.01(s，3H)，2.07(s，3H)，2.15-2.21(m，1H)，2.23-2.28(m，1H)，2.36-2.44(m，1H)，2.43-2.49(m，1H)，2.52(d，J＝6.8Hz，1H)，3.75(br s，1H)，3.80(s，3H)，3.93(s，3H)，4.05(d，J＝6.4Hz，1H)，4.26(d，J＝2.4，4.8Hz，1H)，4.30(d，J＝7.6Hz，1H)，4.32(d，J＝7.6Hz，1H)，4.76-4.83(m，4H)，4.91(t，J＝2.0Hz，1H)，4.98(d，J＝9.6Hz，1H)，5.26(d，J＝8.4Hz，1H)，5.65(d，J＝6.4Hz，1H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C43H59NO15Na+計算值852.4；實測值852.3。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-乙酰氧基-多西他賽。在氮氣氛下，向7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(85mg，0.086mmol)的吡啶(1ml)溶液中加入二甲基氨基吡啶(DMAP)(16mg，0.13mmol)和乙酸酐(0.025ml，0.26mmol)。反應物于室溫攪拌，4小時后用乙酸乙酯(20ml)稀釋，再用鹽水(25ml)洗滌1次。分離有機層，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用50％乙酸乙酯/己烷作為展開劑)。收刮包含所需產(chǎn)物帶，在過濾器中用乙酸乙酯清洗。合并有機層后真空濃縮，得到75mg白色固體7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-1 0-乙酰氧基-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.22(s，6H)，1.38(s，9H)，1.67(s，3H)，1.70(s，3H)，1.73(s，3H)，1.94(s，3H)，2.07(s，3H)，2.10(s，3H)，2.31(m，3H)，2.48(m，1H)，3.78(s，3H)，3.97(s，3H)，3.98(d，J＝6.0Hz，1H)，4.24(d，J＝7.2Hz，1H)，4.32(d，J＝7.2Hz，1H)，4.45(d，J＝2.0Hz，1H)，4.77(m，2H)，4.82(d，J＝6.0Hz，1H)，4.91(s，1H)，4.93(d，J＝9.2Hz，1H)，5.36(d，J＝8.4Hz，1H)，5.68(d，J＝9.2Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，5.89(t，J＝8.8Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.29(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C54H81NO16SiNa+計算值1050.5；實測值1050.5。
7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-乙酰氧基-多西他賽。將7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-乙酰氧基-多西他賽(75mg，0.073mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(3ml)中，所得溶液用冰浴冷卻至0℃。向該溶液中加入氟化氫-吡啶(0.5ml)，將所得溶液溫度逐漸升至室溫。16小時后，該反應物用乙酸乙酯(25ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液(25ml)猝滅。有機層用鹽水(30ml)洗滌1次，然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用70％乙酸乙酯/己烷作為展開劑)。收刮包含所需產(chǎn)物帶，在過濾器中用乙酸乙酯清洗。合并有機層后真空濃縮，得到52mg 7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-乙酰氧基-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.26(s，3H)，1.28(s，3H)，1.41(s，9H)，1.74(s，6H)，1.76(s，3H)，1.99(s，3H)，2.09(s，3H)，2.11(s，3H)，2.18(m，1H)，2.27(m，1H)，2.36(m，1H)，2.49(m，1H)，3.81(s，3H)，3.91(s，1H)，3.94(s，3H)，4.02(d，J＝6.0Hz，1H)，4.28(m，2H)，4.33(d，J＝7.2Hz，1H)，4.80(m，2H)，4.86(d，J＝6.4Hz，1H)，4.91(s，1H)，5.00(d，J＝9.2Hz，1H)，5.29(d，J＝8.4Hz，1H)，5.67(d，J＝6.4Hz，1H)，5.71(d，J＝6.4Hz，1H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.96(d，J＝9.2Hz，1 H)，7.07(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C45H61NO16Na+計算值894.4；實測值894.5。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-甲氧基羰基氧基-多西他賽。在氮氣氛下，將7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(28mg，0.029mmol)溶于無水四氫呋喃(0.65ml)中，所得溶液用干冰和丙酮浴冷卻至-40℃。向該溶液中加入1.0M LiHMDS(0.04ml，0.039mmol)后攪拌15分鐘。向該溶液中加入氯甲酸甲酯(0.003ml，0.036mmol)，于-40℃監(jiān)測反應。1小時后，該反應物用乙酸乙酯(15ml)稀釋，用水(15ml)萃取，再用鹽水(15ml)洗滌有機層。有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用5％甲醇/二氯甲烷作為展開劑)。收刮包含所需產(chǎn)物帶，在過濾器中用乙酸乙酯清洗。合并有機層后真空濃縮，得到9mg白色固體7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-甲氧基羰基氧基-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ 1.10(m，21H)，1.22(s，3H)，1.24(s，3H)，1.39(s，9H)，1.68(s，3H)，1.71(s，3H)，1.75(s，3H)，1.96(s，3H)，2.08(s，3H)，2.30(m，3H)，2.50(m，1H)，3.78(s，3H)，3.80(s，3H)，3.98(d，J＝6.0Hz，1H)，3.99(s，3H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.34(d，J＝7.2Hz，1H)，4.46(d，J＝2.0Hz，1H)，4.78(m，2H)，4.91(m，3H)，5.37(d，J＝8.4Hz，1H)，5.57(d，J＝6.4Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，5.93(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.29.2Hz，1H)，7.30(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C45H81NO17SiNa+計算值1066.5；實測值1066.3。
7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-甲氧基羰基氧基-多西他賽。將7α，19α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基-10-甲氧基羰基氧基-多西他賽(9mg，0.008mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(1.2ml)中，所得溶液用冰浴冷卻至0℃。向該溶液中加入氟化氫-吡啶(0.15ml)，將所得溶液溫度逐漸升至室溫。16小時后，該反應物用乙酸乙酯(15ml)稀釋，再用飽和碳酸氫鈉溶液(15ml)猝滅。有機層用鹽水(15ml)洗滌1次，然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用60％乙酸乙酯/己烷作為展開劑)。收刮包含所需產(chǎn)物帶，在過濾器中用乙酸乙酯清洗。合并有機層后真空濃縮，得到4mg 7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-甲氧基羰基氧基-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.25(s，3H)，1.27(s，3H)，1.40(s，9H)，1.73(s，6H)，1.76(s，3H)，1.99(s，3H)，2.07(s，3H)，2.18(m，1H)，2.25(m，1H)，2.34(m，1H)，2.48(m，1H)，3.78(s，3H)，3.80(s，3H)，3.83(s，1H)，3.93(s，3H)，4.01(d，J＝6.0Hz，1H)，4.28(m，2H)，4.31(d，J＝7.6Hz，1H)，4.80(m，2H)，4.90(s，1H)，4.94(d，J＝7.6Hz，1H)，4.97(d，J＝9.6Hz，1H)，5.27(d，J＝7.6Hz，1H)，5.55(d，J＝6.0Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，6.03(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C45H61NO17Na+計算值910.4；實測值910.4。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-二甲基氨基羰基氧基-多西他賽。在氮氣氛下，將7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(28mg，0.029mmol)溶于無水四氫呋喃(0.65ml)中，所得溶液用干冰和丙酮浴冷卻至-40℃。向該溶液中加入1.0M LiHMDS(0.04ml，0.039mmol)并攪拌15分鐘。向該溶液中加入二甲基氨基甲酰氟(0.003mg，0.031mmol)后于-40℃監(jiān)測反應。1小時后，該反應物用乙酸乙酯(15ml)稀釋，用水(15ml)萃取，然后用鹽水(15ml)洗滌有機層。有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用5％甲醇/二氯甲烷作為展開劑)。收刮包含所需產(chǎn)物帶，在過濾器中用乙酸乙酯清洗。合并有機層后真空濃縮，得到20mg白色固體7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-二甲基氨基羰基氧基-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.23(s，6H)，1.39(s，9H)，1.68(s，3H)，1.71(s，3H)，1.73(s，3H)，1.98(s，3H)，2.09(s，3H)，2.31(m，3H)，2.49(m，1H)，2.93m(s，6H)，3.80(s，3H)，3.98(s，3H)，3.96(d，J＝6.0Hz，1H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.33(d，J＝7.2Hz，1H)，4.46(d，J＝2.0Hz，1H)，4.77(m，2H)，4.88(d，J＝6.4Hz，1H)，4.92(m，2H)，5.36(d，J＝8.4Hz，1H)，5.68(d，J＝6.0Hz，1H)，5.71(d，J＝6.4Hz，1H)，5.93(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝32 9.2Hz，1H)，7.30(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C55H84N2O16SiNa+計算值1079.6；實測值1079.5。
7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-二甲基氨基羰基氧基-多西他賽。將7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-1 0-二甲基氨基羰基氧基-多西他賽(20mg，0.016mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(1.2ml)中，所得溶液用冰浴冷卻至0℃。向該溶液中加入氟化氫-吡啶(0.25ml)，將所得溶液溫度逐漸升至室溫。16小時后，該反應物用乙酸乙酯(15ml)稀釋，再用飽和碳酸氫鈉溶液(15ml)猝滅。有機層用鹽水(15ml)洗滌1次，然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用70％乙酸乙酯/己烷作為展開劑)。收刮包含所需產(chǎn)物帶，在過濾器中用乙酸乙酯清洗。合并有機層后真空濃縮，得到12mg 7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-二甲基氨基羰基氧基-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.24(s，3H)，1.26(s，3H)，1.40(s，9H)，1.73(s，6H)，1.74(s，3H)，2.00(s，3H)，2.07(s，3H)，2.17(m，1H)，2.25(m，1H)，2.36(m，1H)，2.48(m，1H)，2.93(s，3H)，2.94(s，3H)，3.79(s，3H)，3.86(s，1H)，3.92(s，3H)，4.02(d，J＝6.0Hz，1H)，4.28(m，2H)，4.31(d，J＝7.6Hz，1H)，4.80(m，2H)，4.89(d，J＝6.0Hz，1H)，4.90(s，1H)，4.97(d，J＝9.6Hz，1H)，5.28(d，J＝8.4Hz，1H)，5.67(d，J＝6.0Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，6.02(t，J＝8.4Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.29(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C46H64N2O16Na+計算值923.4；實測值923.4。
3′-(2-呋喃基)系列
10-乙酰氧基-7-(三乙基甲硅烷基)-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。將(3R，4S)-1-叔丁氧基羰基)-3-三異丙基甲硅烷氧基-4-(2-呋喃基)-2-吖丁啶酮(1.27g，3.11mmol)和7-(三乙基甲硅烷基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-漿果赤霉素III(1.9g，2.5mmol)的混合物溶于無水THF(20ml)中。將混合物冷卻至-40℃，滴加1.0M LiHMDS(3.5ml，3.5mmol)。反應物在-40℃至-20℃之間攪拌1小時后反應完成。該反應物用飽和氯化銨水溶液猝滅，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取。合并的有機層用水(30ml×1)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥后真空濃縮。粗制殘余物在硅膠柱上用30％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑進行純化，得到白色固體10-乙酰氧基-7-(三乙基甲硅烷基)-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(2.88g，98％)1H NMR(CDCl3)δ 0.53(m，6 H)，0.89(m，30H)，1.18(s，6H)，1.36(s，9H)，1.69(s，3H)，1.85(m，1H)，1.96(s，3H)，2.11(s，3H)，2.25(s，3H)，2.35(m，2H)，2.46(m，1H)，3.33(s，1H)，3.71(s，3H)，3.72(d，J＝6.8Hz，1H)，3.87(s，3H)，4.22(d，J＝8.0Hz，1H)，4.40(m，2H)，4.84(d，J＝8.0，1H)，4.89(d，J＝1.2Hz，1H)，5.24(m，2H)，5.61(d，J＝6.8Hz，1H)，6.12(t，J＝8.4Hz，1H)，6.1 8(d，J＝3.2Hz，1H)，6.27(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.41(s，1H)，6.88(d，J＝9.2Hz，1H)，6.97(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.20(d，J＝3.2Hz，1H)，7.28(br s，1H).
m/z LC/MS C60H91NO18Si2Na+計算值1192.6；實測值1192.3。
10-乙酰氧基-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。將10-乙酰氧基-7-(三乙基甲硅烷基)-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(670mg，0.57mmol)溶于乙醇(2.5ml)中。滴加5％鹽酸/乙醇溶液(5.0ml)。反應物于室溫攪拌5小時后反應完成。反應物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，產(chǎn)物用乙酸乙酯(75ml×2)萃取。合并的乙酸乙酯層用水(25ml×1)和鹽水(25ml×1)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥后真空濃縮。粗制的10-乙酰氧基-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽無需純化就可直接使用1H NMR(CDCl3)δ0.92(m，21H)，1.12(s，3H)，1.25(s，3H)，1.39(s，9H)，1.70(s，3H)，1.85(m，4H)，2.19(s，3H)，2.27(s，3H)，2.37(m，2H)，2.51(m，1H)，3.33(s，1H)，3.74(m，4H)，3.89(s，3H)，4.26(d，J＝8.4，1H)，4.38(m，2H)，4.90(m，2H)，5.24(m，2H)，5.62(d，J＝6.8Hz，1H)，6.19(m，2H)，6.30(m，2H)，6.88(d，J＝9.2，1H)，7.00(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.21(d，J＝3.2Hz，1H)，7.30(br s，1H).
m/z LC/MS C54H77NO18SiNa+計算值1078.5；實測值1078.3。
2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽。將10-乙酰氧基-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽(605mg，0.573mmol)溶于乙醇(12.0ml)中。5分鐘內(nèi)滴加肼一水合物(5.0ml)后反應完成。該反應物用乙酸乙酯稀釋，用飽和氯化銨水溶液猝滅。產(chǎn)物用乙酸乙酯(75ml×2)萃取，用水(25ml×1)和鹽水(25ml×1)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后真空濃縮。粗制殘余物在硅膠柱上用40％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑進行純化，得到白色固體2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽(507.6mg，87％，兩步)1H NMR(CDCl3)δ 0.95(m，21H)，1.11(s，3H)，1.24(s，3H)，1.40(s，9H)，1.79(s，3H)，1.86(m，1H)，1.91(s，3H)，2.29(s，3H)，2.36(m，2H)，2.57(m，1H)，3.29(br s，1H)，3.76(s，3H)，3.88(d，J＝6.8Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.19(m，2H)，4.43(d，J＝8.4Hz，1H)，4.45(d，J＝8.4Hz，1H)，4.91(m.2H)，5.24(m，3H)，5.65(d，J＝6.8Hz，1H)，6.21(m，2H)，6.31(dd，J＝3.2，1.6，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.02(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.23(d，J＝3.2Hz，1H)，7.30(br s，1H).
m/z LC/MS C52H75NO17SiNa+計算值1036.5；實測值1036.3。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。將2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(1.7g，1.68mmol)溶于二氯甲烷(10.0ml)并冷卻至-30℃。加入吡啶(0.68ml，8.4mmol)，然后加入三氟甲磺酸酐(0.57ml，3.4mmol)的二氯甲烷(0.5ml)溶液，使反應變黃色。在1小時內(nèi)將反應物緩慢升至0℃，此時反應完成。產(chǎn)物用乙酸乙酯(150ml×1)萃取，用水(50ml×1)和鹽水(50ml×1)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥后真空濃縮。粗制的殘余物在硅膠柱上用25％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑進行純化，得到白色固體7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(1.44g，75％)
1H NMR(CDCl3)δ0.94(m，21H)，1.09(s，3H)，1.22(s，3H)，1.39(s，9H)1.92(m，6H)，2.30(m，5H)，2.40(m，1H)，2.79(m，1H)，3.44(s，1H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.95(d，J＝6.4Hz，1H)，4.01(d，J＝1.6Hz，1H)，4.30(d，J＝8.4Hz，1H)，4.42(d，J＝8.4Hz，1H)，4.89(m，2H)，5.24(m，2H)，5.36(m，2H)，5.64(d，J＝6.4Hz，1H)，6.21(m，2H)，6.30(dd，J＝3.2，1.6Hz，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.02(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.19(d，J＝3.2Hz，1H)，7.30(br s，1H).
m/z LC/MS C53H74F3NO19SSiNa+計算值1168.4；實測值1168.4。
7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-10-氧代-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。向7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(1.44g，1.26mmol)和二氯甲烷(30ml)的攪拌溶液中加入4-甲基嗎啉N-氧化物(NMO)(590mg，5mmol)，然后加入高釕酸四丙基銨(TPAP)(62mg，0.18mmol)。于室溫攪拌所得混合物并監(jiān)測。8小時后反應物經(jīng)硅藻土過濾，用二氯甲烷清洗硅藻土墊。真空濃縮合并的上清液，所得殘余物在硅膠柱上用10％乙酸乙酯/己烷進行純化。合并含產(chǎn)物流分后濃縮，得到619mg固體7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ 0.91(m，21H)，1.15(s，3H)，1.25(s，3H)，1.37(s，9H)，1.89(s，6H)，2.14(m，1H)，2.27(s，3H)，2.32(m，1H)2.51，(m，1H)，2.79(m，1H)，3.67(d，J＝6.4Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.85(s，1H)，3.91(s，3H)，4.38(d，J＝8.4Hz，1H)，4.40(d，J＝8.4Hz，1H)，4.81(d，J＝8.8z，1H)，4.89(d，J＝1.2Hz，1H)，5.17(m，1H)，5.24(m，2H)，5.72(d，J＝6.0Hz，1H)，6.14(t，J＝8.8Hz，1H)，6.20(d，J＝3.2Hz，1H)，6.28(d，J＝3.2，1.6Hz，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.01(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.15(d，J＝3.2Hz，1H)，7.29(brs，1H).
m/z LC/MSC53H72F3NO19SSiNa+計算值1166.4；實測值1166.1。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽和7α，10α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
將硼氫化鈉(102mg，2.7mmol)加入到7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-10-氧代-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(618mg，0.54mmol)的乙醇(7.0ml)溶液中。5分鐘后該反應完成，用乙酸乙酯稀釋。產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取(100ml×1)，用飽和氯化鈉水溶液(50ml×1)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后真空濃縮。粗制殘余物在硅膠柱上用50％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑進行純化，得到7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽(258mg，48％)和7α，10α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(231mg，43％)。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽1H NMR(CDCl3)δ 0.92(m，21H)，1.08(s，3H)，1.23(s，3H)，1.41(s，9H)，1.77(s，3H)，1.99(s，3H)，2.15(s，3H)，2.33(m，4H)，2.56(d，J＝6.8Hz，1H)，3.55(s，1H)，3.76(s，3H)，3.93(s，3H)，4.01(d，J＝6.0Hz，1，H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.32(d，J＝7.2Hz，1H)，4.77(m，3H)，4.92(br s，1H)，4.95(br s，1H)，5.27(m，2H)，5.64(d，J＝6.4Hz，1H)，6.06(t，J＝8.8Hz，1H)，6.20(d，J＝2.8Hz，1H)，6.29(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.00(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.23(d，J＝3.2Hz，1H)，7.31(s，1H).
m/z LC/MS C52H75NO16SiNa+計算值1020.5；實測值1020.4。
7α，10α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽1H NMR(CDCl3)δ 0.95(m，21H)，1.15(s，3H)，1.31(s，3H)，1.39(s，9H)，1.83(m，6H)，2.11(s，3H)，2.20-2.36(m，4H)，3.62(m，2H)，3.75(s，3H)，3.89(s，3H)，4.40(m，3H)，4.78(br s，1H)，4.92(br s，1H)，5.06(d，J＝4.0Hz，1H)，5.25(m，2H)，5.36(d，J＝6.0Hz，1H)，6.18(m，2H)，6.27(dd，J＝2.8，1.6Hz，1H)，6.88(d，J＝9.2Hz，1H)，6.99(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.22(d，J＝3.2Hz，1H)，7.29(br s，1H).
m/z LC/MSC52H73NO16SiNa+計算值1018.5；實測值1018.4。
7α，10α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽。將7α，10α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(49.1mg，0.049mmol)溶于吡啶-乙腈(1/1，2.0ml)并冷卻至0℃。加入HF/吡啶(70∶30，0.5ml)，將該反應溫度緩慢升至室溫過夜。該反應物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，用乙酸乙酯稀釋。乙酸乙酯層再用飽和碳酸氫鈉水溶液(15ml×2)洗滌，合并的水層用乙酸乙酯(40ml×2)洗滌。合并的乙酸乙酯層用水(15ml×2)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠進行純化(用50％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑)，得到7α，10α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(33.5mg，81％)1H NMR(CDCl3)δ 1.16(s，3H)，1.30(s，3H)，1.40(s，9H)，1.79(s，3H)，1.87(s，3H)，2.03(s，3H)，2.06(m，1H)，2.34(m，3H)，3.58(s，1H)，3.66(dd，J＝7.2，2.8Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.88(s，3H)，3.93(d，J＝4.0Hz，1H)，4.34(m，2H)，4.49(d，J＝7.6Hz，1H)，4.67(d，J＝2.0Hz，1H)，4.81(br s，1H)，5.04(d，J＝2.0Hz，1H)，5.34(m，3H)，6.18(br s，1H)，6.26(d，J＝3.2Hz，1H)，6.31(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.92(d，J＝9.2Hz，1H)，7.03(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.24(d，J＝3.2z，1H)，7.34(d，J＝1.2Hz，1H).
m/z LC/MS C43H53NO16Na+計算值862.3；實測值862.3。
7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。將7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽溶于吡啶-乙腈(1/1，1.5ml)并冷卻至0℃。加入HF/吡啶(70∶30，0.2ml)，將該反應溫度緩慢升至室溫過夜。該反應物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，用乙酸乙酯稀釋。乙酸乙酯層再用飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml×2)洗滌。合并的水層用乙酸乙酯(20ml×2)洗滌。然后，合并的乙酸乙酯層用水(10ml×2)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠進行純化(用75％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑)，得到白色固體7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(10.26mg，70％)1H NMR(CDCl3)δ1.09(s，3H)，1.23(s，3H)，1.40(s，9H)，1.77(s，3H)，1.95(s，3H)，2.07(s，3H)，2.21(m，2H)，2.37(m，2H)，2.50(d，J＝6.0Hz，1H)，3.51(s，1H)，3.71(d，J＝4.0Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.91(s，3H)，4.02(d，J＝6.4Hz，1H)，4.26(d，J＝7.2Hz，1H)，4.29(d，J＝7.2Hz，1H)，4.68(d，J＝2.8Hz，1H)，4.78(m，3H)，4.88(br s，1H)，5.32(m 2H)，5.63(d，J＝6.4Hz，1H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.27(d，J＝3.2Hz，1H)，6.31(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.92(d，J＝9.2Hz，1H)，7.20(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.24(d，J＝3.2Hz，1H)，7.34(d，J＝0.8Hz，1H).
m/z LC/MS C43H55NO16Na+計算值864.5；實測值864.3。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-乙酰氧基-多西他賽。將乙酸酐(8.1μL，0.858mmol)和DMAP(5mg，0.043mmol)加入到7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽(28.5mg，0.0286mmol)的吡啶(0.5ml)溶液中。該反應物于室溫攪拌3小時后完成反應。產(chǎn)物用乙酸乙酯(30ml×1)萃取，用水(15ml×1)和鹽水(15ml×1)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠進行純化(用50％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑)，得到白色固體7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-乙酰氧基-多西他賽(25mg，85％)。
1HNMR(CDCl3)δ 0.95(m，21H)，1.26(m，6H)，1.44(s，9H)，1.76(s，3H)，1.99(s，3H)，2.13(s，3H)，2.18(s，3H)，2.40(m，4H)，3.66(s，1H)，3.80(s，3H)，3.97(s，3H)，4.02(d，J＝6.4Hz，1H)，4.27(d，J＝7.2Hz，1H)，4.35(d，J＝7.2Hz，1H)，4.82(dd，J＝8.4，6.0Hz，1H)，4.86(d，J＝6.0Hz，1H)，4.95(br s，1H)，5.01(s，1H)，5.31(s，2H)，5.72(m，2H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.24(d，J＝3.2，1H)，6.32(dd，J＝3.2，1.6Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.27(d，J＝3.2，1H)，7.34(d，J＝0.8Hz，1H).
m/z LC/MS C54H77NO17SiNa+計算值1062.5；實測值1062.5。
7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-1 0-乙酰氧基-多西他賽。將7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-乙酰氧基-多西他賽(25mg，0.025mmol)溶于吡啶-乙腈(1/1，1.5ml)并冷卻至0℃。加入HF/吡啶(70∶30，0.25ml)，將該反應溫度緩慢升至室溫過夜。該反應物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，用乙酸乙酯稀釋。乙酸乙酯層再用飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml×2)洗滌。合并的水層用乙酸乙酯(25ml×2)洗滌。然后，合并的乙酸乙酯層用水(10ml×2)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠進行純化(用80％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑)，得到最終產(chǎn)物7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-乙酰氧基-多西他賽(17.2mg，78％)1H NMR(CDCl3)δ1.24(s，6,H)，1.41(s，9H)，174(s，3H)，1.94(s，3H)，2.10(s，6H)，2.27(m，2H)，2.33(m，1H)，2.46(m，1H)，3.62(s，1H)，3.79(s，4H)，3.93(s，3H)，4.01(d，J＝6.0Hz，1H)，4.26(d，J＝7.2Hz，1H)，4.30(d，J＝7.2Hz，1H)，4.72(d，J＝3.6Hz，1H)，4.80(dd，J＝5.6，8.8Hz，1H)，4.85(d，J＝6.0Hz，1H)，4.89(br s，1H)，5.34(m，2H)，5.65(d，J＝6.0Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，6.02(t，J＝8.8Hz，1H)，6.29(d，J＝3.2Hz，1H)，6.33(m，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.26(d，J＝3.2Hz，1H)，7.36(d，J＝1.2Hz，1H).
m/z LC/MS C45H57NO17Na+計算值906.4；實測值906.4。
具有SS連接基的3′-異丁烯基系列
前面已經(jīng)介紹下列中間體2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁?；?-多西他賽。在氮氣氛下，向7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽(28mg，0.029mmol)和二氯甲烷(1.5ml)的溶液中加入DMAP(3.5mg，0.028mmol)和4-甲基二硫丁酸(50mg，0.28mmol)。向該混合物中加入二異丙基碳二亞胺(0.045ml，0.28mmol)，所得混合物于室溫攪拌過夜。然后，反應物用氯化銨(15ml)猝滅，用二氯甲烷(20ml)萃取。然后，有機層用鹽水(15ml)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用40％乙酸乙酯/己烷作為展開劑)。收刮包含所需產(chǎn)物帶，在過濾器中用乙酸乙酯清洗。合并有機層后真空濃縮，得到23mg白色固體7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁?；?-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.21(s，3H)，1.23(s，3H)，1.39(s，9H)，1.68(s，3H)，1.71(s，3H)，1.74(s，3H)，1.95(s，3H)，2.06(dt，J＝2.0，7.2Hz，2H)，2.08(s，3H)，2.31(m，3H)，2.40(s，3H)，2.49(m，3H)，2.74(dt，J＝2.0，7.2Hz，2H)，3.80(s，3H)，3.98(s，4H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.33(d，J＝7.2Hz，1H)，4.46(d，J＝2.0Hz，1H)，4.77(m，2H)，4.84(d，J＝6.4Hz，1H)，4.92(s，1H)，4.92(d，J＝7.2Hz，1H)，5.36(d，J＝8.4Hz，1H)，5.71(overlapping d，J＝6.4Hz，2H)，5.90(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.30(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C57H87NO16S2SiNa+計算值1156.5；實測值1156.2。
7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-(4-甲基二硫基丁?；?-多西他賽。將7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-1 0-(4-甲基二硫基丁?；?-多西他賽(23mg，0.02mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(1.6ml)中，所得溶液用冰浴冷卻至0℃。向該溶液中加入氟化氫-吡啶(0.25ml)，將所得溶液溫度逐漸升至室溫。16小時后，該反應物用乙酸乙酯(15ml)稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液(15ml)猝滅。有機層用鹽水(15ml)洗滌1次，然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠制備型薄層色譜法純化(用65％乙酸乙酯/己烷作為展開劑)。收刮包含所需產(chǎn)物帶，在過濾器中用乙酸乙酯清洗。合并有機層后真空濃縮，得到16mg 7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(異丁烯基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他賽。
1H NMR(CDCl3)δ1.25(s，3H)，1.29(s，3H)，1.40(s，9H)，1.73(s，6H)，1.74(s，3H)，1.97(s，3H)，2.04(m，2H)，2.07(s，3H)，2.17(m，1H)，2.25(m，1H)，2.33(m，1H)，2.39(s，3H)，2.51(m，1H)，2.73(t，J＝7.2Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.83(s，1H)，3.93(s，3H)，4.00(d，J＝6.0Hz，1H)，4.26(m，2H)，4.31(d，J＝7.6Hz，1H)，4.78(m，2H)，4.84(d，J＝6.0Hz，1H)，4.90(s，1H)，4.96(d，J＝9.2Hz，1H)，5.27(d，J＝8.4Hz，1H)，5.68(d，J＝6.4Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，6.00(t，J＝8.4Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C48H67NO16S2Na+計算值1000.4；實測值1000.2。
具有SS連接基的3′-2-呋喃基系列
前面已經(jīng)介紹下列中間體2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽。
7-(三氟甲磺?；趸?-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-10-氧代-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-多西他賽。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽。
7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-(4-甲基二硫基丁?；?-多西他賽。將DMAP(4.6mg，0.0374mmol)、4-甲基二硫丁酸(62mg，0.374mmol)和DIC(58.5μL，.0374mmol)加入到7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他賽(37.3mg，0.0374mmol)的二氯甲烷(0.5ml)溶液中。反應物于室溫攪拌過夜后完成反應，該反應物用飽和氯化銨水溶液猝滅。產(chǎn)物用乙酸乙酯(25ml×2)萃取，用水(15ml×1)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠進行純化(用50％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑)，得到7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁?；?-多西他賽(48.2mg，100+％)1H NMR(CDCl3)δ0.92(m，21H)，1.24(m，6H)，1.41(s，9H)，1.73(s，3H)，1.95(s，3H)，2.05(m，2H)，2.15(s，3H)，2.32(m，3H)，2.38(s，3H)，2.44-2.56(m 3H)，2.72(m，2H)，3.65(s，1H)，3.77(s，3H)，3.94(s，3H)，3.98(m，1H)，4.26(m，2H)，4.77(dd，J＝8.4，6.0Hz，1H)，4.83(d，J＝6.4Hz，1H)，4.92(br s，1H)，4.97(s，1H)，5.28(s，2H)5.68(m，2H)，5.98(t，J＝8.8Hz，1H)，6.20(d，J＝3.2 Hz，1H)，6.29(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.01(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.24(d，J＝3.2Hz，1H)，7.31(d，J＝1.2，1H).
m/z LC/MS C57H83NO17S2SiNa+計算值1168.5；實測值1168.4 7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-1 0-(4-甲基二硫基丁?；?-多西他賽。將7α，9α-環(huán)氧-2′-(三異丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁?；?-多西他賽(42.8mg，0.0374mmol)溶于吡啶-乙腈(1/1，3.0ml)并冷卻至0℃。加入HF/吡啶(70∶30，0.5ml)后，將該反應溫度緩慢升至室溫過夜。該反應物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，用乙酸乙酯稀釋。乙酸乙酯層再用飽和碳酸氫鈉水溶液(15ml×2)洗滌，然后合并的水層用乙酸乙酯(40ml×2)洗滌。合并的乙酸乙酯層用水(15ml×2)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后真空濃縮。粗制殘余物用硅膠進行純化(用50％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑)，得到7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲?；?2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他賽(22.9mg，62％，兩步)1H NMR(CDCl3)δ 1.24(m，6H)，1.41(s，9H)，1.74(s，3H)，1.93(s，3H)，2.04(m，2H)，2.09(s，3H)，2.24(m，2H)，2.33(m，1H)，2.37(s，3H)，2.42-2.56(m，3H)，2.72(t，J＝6.8Hz，2H)，3.62(s，1H)，3.75(d，J＝8.4Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.93(s，3H)，3.99(d，J＝6.0Hz，1H)，4.26(d，J＝7.2Hz，1H)，4.30(d，J＝7.2Hz，1H)，4.70(d，J＝3.6Hz，1H)，4.77(dd，J＝8.8，5.6Hz，1H)，4.83(d，J＝6.0Hz，1H)，4.88(br s，1H)，5.33(br s，2H)，5.67(m，2H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.28(d，J＝3.2，1H)，6.32(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.92(d，J＝9.2Hz，1H)，7.03(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.25(d，J＝3.2，1H)，7.35(m，1H).
m/z LC/MS C48H63NO17S2Na+計算值1012.3；實測值1012.3。
根據(jù)Riou，Naudin和Lavelle，Biochemical and BiophysicalResearch Communications；第187卷，第1期，1992，第164-170頁所述的方法，對本發(fā)明化合物的活性進行測定。

本發(fā)明紫杉烷類化合物和細胞結(jié)合劑的綴合物可使用目前已知的或下文介紹的任何方法制得。多種綴合方法參見USP 5,416,064和USP 5,475,092。對紫杉烷酯進行修飾可產(chǎn)生游離氨基，然后通過酸不穩(wěn)定連接分子或光不穩(wěn)定連接分子與抗體或其它細胞結(jié)合劑相連接。紫杉烷酯可與肽縮合，然后與細胞結(jié)合劑連接，產(chǎn)生肽酶不穩(wěn)定連接分子。紫杉烷酯上的羥基可琥珀?；?，然后與細胞結(jié)合劑連接，從而得到綴合物，這種綴合物可被細胞內(nèi)酯酶裂解后釋放游離藥物。最優(yōu)選處理紫杉烷的醚、酯或氨基甲酸酯產(chǎn)生游離巰基或保護的巰基，然后含二硫基或巰基的紫杉烷通過二硫鍵與細胞結(jié)合劑連接。
本發(fā)明的代表性綴合物為抗體-紫杉烷、抗體片段-紫杉烷表皮生長因子(EGF)-紫杉烷、促黑素細胞激素(MSH)-紫杉烷、促甲狀腺激素(TSH)-紫杉烷、雌激素-紫杉烷、雌激素類似物-紫杉烷、雄激素-紫杉烷、雄激素類似物-紫杉烷以及葉酸-紫杉烷。
抗體、抗體片段、蛋白或肽激素、蛋白或肽生長因子以及其它蛋白的紫杉烷綴合物通過已知方法以相同的方式形成。例如，肽和抗體可通過已知方法用交聯(lián)劑修飾，例如3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-琥珀酰亞胺酯、4-(2-吡啶基二硫基)戊酸N-琥珀酰亞胺酯(SPP)、4-琥珀酰亞胺基-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)-甲苯(SMPT)、3-(2-吡啶基二硫基)丁酸N-琥珀酰亞胺酯(SDPB)、3-(2-(5-硝基-吡啶基二硫基)丁酸N-磺基琥珀酰亞胺酯(SSNPB)、2-亞氨基硫雜戊烷或者S-乙?；晁狒?。參見Carlsson等，173 Biochem.J.723-737(1978)；Blattler等，24 Biochem.1517-1524(1985)；Lambert等，22 Biochem.3913-3920(1983)；Klotz等，96 Arch.Biochem.Biophys.605(1962)；Liu等，18 Biochem.690(1979)，Blakey和Thorpe，1 Antibody，lmmunoconjugates&Radiopharmaceuticals，1-16(1988)，Worrell等，1Anti-Cancer Drug Design 179-184(1986)。然后，使如此衍生的游離或保護的含巰基細胞結(jié)合劑與含二硫基或巰基的紫杉烷反應生成綴合物。該綴合物可通過HPLC或凝膠過濾法純化。
優(yōu)選單克隆抗體-紫杉烷或細胞結(jié)合劑-紫杉烷綴合物經(jīng)二硫鍵結(jié)合在一起，如上所述，它們能夠遞送紫杉烷分子。這樣的細胞結(jié)合綴合物通過已知方法制備，例如用吡啶基二硫基丙酸琥珀酰亞胺酯(SPDP)修飾單克隆抗體(Carlsson等，173 Biochem.J.723-737(1978))。然后，將所得的硫吡啶基經(jīng)含巰基的紫杉烷處理置換產(chǎn)生二硫鍵連接的綴合物?；蛘撸诜蓟蜃仙纪榈那闆r下，細胞結(jié)合綴合物的形成通過先前引入抗體分子的巰基直接置換紫杉烷的芳基-巰基來實現(xiàn)。通過任何一種方法經(jīng)二硫鍵橋很容易制備含有1-10個紫杉烷藥物分子的綴合物。
更具體地說，將二硫-硝基吡啶基修飾的抗體(在0.05M磷酸鉀緩沖液(pH 7.5，含有2mM EDTA)中，濃度2.5mg/ml)用含巰基的紫杉烷(1.3摩爾當量/二硫吡啶基)處理。從修飾抗體中釋放硫-硝基吡啶用分光光度法于325nm監(jiān)測，約16小時完成?？贵w-紫杉烷綴合物通過Sephadex G-25或Sephacryl S300柱凝膠過濾進行純化，使其不含未反應藥物和其它低分子量物質(zhì)。每個抗體分子結(jié)合紫杉烷基團的數(shù)量可通過測量于230nm和275nm時吸光度的比率來測定。平均1-10個紫杉烷分子/抗體分子可用這種方法經(jīng)二硫鍵連接。
抗原表達細胞的結(jié)合親合力的綴合效應可用前面介紹的Liu等，93 Proc.Natl.Acad.Sci 8618-8623(1996)所述的方法測定。紫杉烷及其抗體綴合物對非貼壁細胞系例如Namalwa和HL-60的細胞毒性可通過細胞增殖曲線后插法(back-extrapolation)測定，參見Goldmacher等，135 J.Immunol.3648-3651(1985)。這些化合物對貼壁細胞系例如COLO 205和A-375的細胞毒性可用產(chǎn)克隆測定法測定，參見Goldmacher等，102 J.Cell Biol.1312-1319(1986)。
實施例綴合用IGT-15-075-SH的合成 7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(N-2，2-二甲基-2-巰基-乙基氨基甲酰基)-多西他賽(IGT-15-075-SH)。在一個小瓶中，將7α，9α-環(huán)氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲?；?-1 0-(N-2，2-二甲基-2-甲基二硫基-乙基氨基甲?；?-多西他賽(36mg，0.0353mmol)溶于甲醇(1.0ml)和乙酸乙酯(0.73ml)的混合物中。在另外一個小瓶中，將DTT(55mg，0.343mmol)溶于50mM KP緩沖液pH7.5(0.73ml)中，然后將其加入紫杉烷類化合物溶液中。用高效液相色譜法監(jiān)測該反應直到反應完成(約19小時)。該反應物用50mM KP緩沖液pH6.5(6ml)猝滅，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。合并的有機層用水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后濃縮。殘余物用二醇柱通過高效液相色譜法純化，得到所需產(chǎn)物(27mg，79％)，將其立即等分后貯存供綴合時使用。m/zLC/MS C48H64N2O17SNa+計算值995.4；實測值995.5。
紫杉烷類化合物與單克隆抗體綴合。CanAg抗原在人結(jié)腸腫瘤細胞和其它實體瘤的表面優(yōu)先表達，選取可結(jié)合該抗原的HuC242抗體，用于綴合紫杉烷類化合物。
在第一個步驟中，使抗體與改性劑5-硝基-2-吡啶基二硫丁酸N-磺基琥珀酰亞胺酯(SSNPB)反應以引入硝基吡啶基二硫基。將濃度為8mg/ml的huC242抗體(525mg，0.0036mmol)和水性緩沖液(含有0.05M磷酸鉀、0.05M氯化鈉和2mM乙二胺四乙酸(EDTA)，pH 6.5)(65.6ml)的溶液用8倍摩爾過量的SSNPB(0.0288mmol，13.62mg)的二甲基乙酰胺(DMA)(3.28ml)溶液處理。反應混合物于室溫攪拌90分鐘，然后將其加到已經(jīng)用含有0.05M磷酸鉀、0.05M氯化鈉和2mM EDTA，水性緩沖液(pH7.5，65.6ml)平衡的Sephadex G25凝膠過濾柱(50mm×35.5mm，柱容積＝700ml)上。收集含修飾抗體的流分，然后合并得到產(chǎn)物502.4mg(95.7％)。一小等份修飾抗體用二硫蘇糖醇處理以裂解硝基-吡啶基二硫化物，用分光光度法測定所釋放的硝基-吡啶-2-硫酮(硝基-吡啶-2-硫酮ε325nm＝10,964M-1cm-1和ε280nm＝3,344M-1cm-1，抗體ε280nm＝217,560M-1cm-1)。每分子抗體平均連接有4.53個硝基吡啶基二硫化物分子。
將修飾抗體(502.0mg，0.0034mmol)用上述緩沖液(pH 7.5)稀釋至2.5mg/ml，然后用紫杉烷類IGT-15-075(0.020mmol，19.5mg)的DMA溶液處理，這樣緩沖液的DMA最終濃度為20％。綴合混合物于室溫攪拌16小時。使反應混合物通過已經(jīng)用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)pH 6.5平衡的Sephacryl S300凝膠過濾柱(50mm×42cm，柱容積＝825ml)而純化。合并含有單體抗體-紫杉烷類綴合物的流分，針對PBS緩沖液透析。最終的綴合物(251mg)用下列消光系數(shù)進行分光光度測定(紫杉烷類化合物ε323nm＝4,299M-1cm-1，ε280nm＝565M-1cm-1，抗體ε280nm＝217,560M-1cm-1)。綴合物平均含有4.16個紫杉烷類化合物分子。
結(jié)合測定。采用基于熒光的測定法，來測定huC242抗體及其紫杉烷類綴合物對表達抗原的HT-29人結(jié)腸腫瘤細胞的相對結(jié)合親和力。將抗體-紫杉烷類綴合物和無保護抗體以初始濃度1×10-7M加入到96孔圓底板，用3倍系列稀釋液滴定，每種濃度都有兩份。將HT-29細胞以50,000細胞/孔加入到包含不同濃度抗體或綴合物的各孔以及對照孔中。將板在冰上孵育3小時。孵育期后，洗滌各板上的細胞，加入熒光標記的結(jié)合人源化IgG(如huC242)的第二抗體，各板在冰上孵育1小時。孵育期后再次洗滌各板，用1％甲醛/PBS溶液固定細胞。用Becton Dickinson FACSCalibur熒光分析儀讀取培養(yǎng)板各孔的熒光數(shù)據(jù)。將數(shù)據(jù)以相對最高濃度抗體或綴合物時獲得的最大熒光強度的百分率作圖(

圖1)。
上述結(jié)果表明，紫杉烷類化合物與抗體的綴合沒有改變對靶細胞的結(jié)合親和力。
huC242-紫杉烷類綴合物的體外功效和特異性將游離紫杉烷類huC242-紫杉烷類綴合物的樣品加入到96孔平底組織培養(yǎng)板國，然后用1×10-12M至3×10-7M的系列稀釋液滴定。向各孔中加入人結(jié)腸腫瘤細胞COLO 205或人黑素瘤細胞A-375。每個細胞系每種藥物濃度都一式三份。各板于37℃、5％CO2氣氛下孵育4天。
孵育期結(jié)束時，向各孔中加入20μl四唑試劑WST-8(2-(2-甲氧基-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺基苯基)-2-四唑，一鈉鹽))，然后將各板放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2小時。然后，用Molecular Devices讀板儀于450nm測量培養(yǎng)板各孔的吸光度。將紫杉烷類化合物或綴合物各個濃度下的細胞存活分數(shù)繪制為圖2a，b。
上述結(jié)果表明，與抗體的綴合使紫杉烷類化合物表現(xiàn)出高靶向特異性。因此，huC242-紫杉烷類化合物對殺死靶細胞--人結(jié)腸腫瘤COLO 205細胞非常有效，其IC50值為8×10-11M。相比之下，抗原陰性細胞敏感性約為它的1/150，其IC50值為1.2×10-8M，表明細胞毒效應的抗原特異性(圖2x)。另一方面，游離紫杉烷類化合物對這兩種細胞系具有同等功效(IC50約為1×10-10M)(圖2b)。
權(quán)利要求
1.具有下式(I)結(jié)構(gòu)的紫杉烷類化合物 其中Z＝H或式II基團；R1為連接基或任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、-OR2、或者任何所述1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基或者任選取代的芳基或雜環(huán)基所形成的氨基甲酸酯基；R2為1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、任選取代的芳基或雜環(huán)基；R3為連接基或任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基；R4為連接基、H、羥基、烷氧基、烯氧基、任選取代的烷?；趸⒎减；趸⑾；趸?、炔酰基氧基、環(huán)烷?；趸⑼檠趸阴；?、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、氨基甲?；趸?、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲?；趸?、雜環(huán)型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基或烯基的酯基或醚基或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X為含氮雜環(huán)基例如未取代或取代的哌啶子基、嗎啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且為H、1-10個原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、或者1-10個碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基。
2.式(I)化合物，其中R1為-OR2或者任選取代的芳基或雜環(huán)基。
3.式(I)化合物，其中R2為烷基，更優(yōu)選取代的烷基，例如叔丁基。
4.式(I)化合物，其中R4為連接基或烷?；趸?。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R1選自以下取代基叔丁氧基、巴豆基、二甲基丙烯?；?、異丁烯基、己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中R1為叔丁氧基、異丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯?；⑧绶曰?、噻唑基或呋喃基。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中R3選自以下取代基巴豆基、二甲基丙烯?；?、丙烯基、異丁烯基、己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中R3為異丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯?；?、噻吩基、噻唑基、吡啶基、叔丁基或呋喃基。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中所述連接基包括下列基團二硫基、硫醚基、酸不穩(wěn)定基、光不穩(wěn)定基、肽酶不穩(wěn)定基和酯酶不穩(wěn)定基。
10.權(quán)利要求9的化合物，其中所述連接基包括二硫基和硫醚基。
11.權(quán)利要求10的化合物，其中所述連接基為含巰基或二硫基的基團，帶巰基或二硫基的側(cè)鏈可以為直鏈或支鏈、芳族或雜環(huán)基團。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中所述連接基位于R1時選自以下取代基-(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-O-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-NR12(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、苯基-X′SZ′、呋喃基-XSZ′、唑基-X′SZ′、噻唑基-X′SZ′、噻吩基-X′SZ′、咪唑基-X′SZ′、嗎啉代-X′SZ′、-哌嗪子基-X′SZ′、哌啶子基-XSZ′、-呋喃基-X′SZ′、-噻吩基-X′SZ′、-噻唑基-X′SZ′以及-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′、-嗎啉代-X′SZ′、-哌嗪子基-X′SZ′、-哌啶子基-X′SZ′或-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′，其中Z′為H、巰基保護基或SR′，其中-X′為化學鍵、1-10個碳原子的直鏈或支鏈烷基、或者具有2-20個重復乙烯氧基單元的聚乙二醇間隔基；R′和R12相同或不同，并且為1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，或者未取代或取代的芳基或雜環(huán)基，R12還可以為H，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且為H或1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R17和R18都為H或烷基，n為1-10的整數(shù)，m為1-10的整數(shù)并且還可以為0，y為1-20的整數(shù)并且還可以為0。
13.權(quán)利要求11的化合物，其中所述連接基位于R4時選自以下取代基-O(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-OCO(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-OCO-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、 -OCONR12(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-OCO-苯基-X′SZ′、-OCO-呋喃基-X′SZ′、-OCO-唑基-X′SZ′、-OCO-噻唑基-X′SZ′、-OCO-噻吩基-X′SZ′、-OCO-咪唑基-X′SZ′、-OCO-嗎啉代-X′SZ′、-OCO-哌嗪子基-X′SZ′、-OCO-哌啶子基-X′SZ′和-OCO-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′或-OCO-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′，其中Z′為H、巰基保護基或SR′，其中X′為化學鍵、1-10個碳原子的直鏈或支鏈烷基、或者具有2-20個重復乙烯氧基單元的聚乙二醇間隔基；R′和R12相同或不同，并且為1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，或者未取代或取代的芳基或雜環(huán)基，R12還可以為H，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且為H或1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R17和R18都為H或烷基，n為1-10的整數(shù)，m為1-10的整數(shù)并且還可以為0，y為1-20的整數(shù)并且還可以為0。
14.權(quán)利要求11的化合物，其中所述連接基位于R3時選自以下取代基-(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、苯基-X′SZ′、呋喃基-X′SZ′、唑基-X′SZ′、噻唑基-X′SZ′、噻吩基-X′SZ′、咪唑基-X′SZ′，其中Z′為H、巰基保護基或SR′，其中X′為化學鍵、1-10個碳原子的直鏈或支鏈烷基、或者具有2-20個重復乙烯氧基單元的聚乙二醇間隔基；R′為1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，或者未取代或取代的芳基或雜環(huán)基，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且為H或1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，R17和R18都為H或烷基，n為1-10的整數(shù)，m為1-10的整數(shù)并且還可以為0，y為1-20的整數(shù)并且還可以為0。
15.權(quán)利要求1的化合物，其中R8為3-甲氧基苯基、3-氯苯基、2，5-二甲氧基苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
16.權(quán)利要求1的化合物，其中R5為H，R和R7形成化學鍵。
17.權(quán)利要求1的化合物，其中，在式(I)化合物中，R4為連接基；Z＝H或式II基團；R1為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、-OR2、或者任何所述1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基或者任選取代的芳基或雜環(huán)基所形成的氨基甲酸酯基；R2為1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、任選取代的芳基或雜環(huán)基；R3為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基；R4為連接基；R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基。
18.權(quán)利要求1的化合物，其中Z為式II基團；R1為連接基；R3為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基；R4為H、羥基、烷氧基、烯氧基、任選取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯?；趸⑷蝉；趸?、環(huán)烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、氨基甲?；趸?、烷基氨基甲?；趸?、或二烷基氨基甲?；趸?、雜環(huán)型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X為含氮雜環(huán)基例如未取代或取代的哌啶子基、嗎啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且為H、1-10個原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、或者5-10個碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基。
19.權(quán)利要求1的化合物，其中R3為連接基；Z為式II基團；R1為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、-OR2、或者任何所述1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基或者任選取代的芳基或雜環(huán)基所形成的氨基甲酸酯基；R2為1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、任選取代的芳基或雜環(huán)基；R3為連接基；R4為H、羥基、烷氧基、烯氧基、任選取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯?；趸?、炔?；趸h(huán)烷?；趸⑼檠趸阴；?、烷硫基乙?；⑼檠趸恃趸?、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、氨基甲?；趸?、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲?；趸?、雜環(huán)型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X為含氮雜環(huán)基例如未取代或取代的哌啶子基、嗎啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且為H、1-10個原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、或者5-10個碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基。
20.一種細胞毒劑，其包含一種或多種通過連接基與細胞結(jié)合劑共價結(jié)合的紫杉烷類化合物，其中至少一種所述紫杉烷類化合物為式(III)化合物 其中R1為連接基；R2為1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、任選取代的芳基或雜環(huán)基；R3為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基；R4為H、羥基、烷氧基、烯氧基、任選取代的烷?；趸?、芳?；趸?、烯?；趸?、炔酰基氧基、環(huán)烷酰基氧基、烷氧基乙?；⑼榱蚧阴；⑼檠趸恃趸?、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲?；趸?、或二烷基氨基甲?；趸㈦s環(huán)型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X為含氮雜環(huán)基例如未取代或取代的哌啶子基、嗎啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且為H、1-10個原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基、或者1-10個碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基。
21.一種細胞毒劑，其包含一種或多種通過連接基與細胞結(jié)合劑共價結(jié)合的紫杉烷類化合物，其中至少一種所述紫杉烷類化合物為式(III)化合物 其中R1為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、-OR2、或者任何所述1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基或者任選取代的芳基或雜環(huán)基所形成的氨基甲酸酯基；R2為1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、任選取代的芳基或雜環(huán)基；R3為連接基；R4為H、羥基、烷氧基、烯氧基、任選取代的烷?；趸?、芳?；趸⑾；趸?、炔酰基氧基、環(huán)烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、環(huán)烷氧基、環(huán)烯氧基、氨基甲?；趸?、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲?；趸?、雜環(huán)型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10個碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X為含氮雜環(huán)基例如未取代或取代的哌啶子基、嗎啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且為H、1-10個原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，或者1-10個碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基。
22.一種細胞毒劑，其包含一種或多種通過連接基與細胞結(jié)合劑共價結(jié)合的紫杉烷類化合物，其中至少一種所述紫杉烷類化合物為式(III)化合物 其中R1為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、-OR2、或者任何所述1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基或者任選取代的芳基或雜環(huán)基所形成的氨基甲酸酯基；R2為1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基、任選取代的芳基或雜環(huán)基；R3為任選取代的芳基或雜環(huán)基、1-10個碳原子的烷基、2-10個碳原子的烯基或炔基、3-10個碳原子的環(huán)烷基或環(huán)烯基R4為連接基；R5或R7為H；R6為H；R7或R5與R形成化學鍵(環(huán)醚)；R8為任選取代的芳基或雜環(huán)基。
23.一種治療組合物，其包含(A)治療有效量的權(quán)利要求19、20或21中任一項的細胞毒劑；和(B)藥學上可接受的載體。
24.權(quán)利要求19、20或21中任一項的細胞毒劑，其中所述細胞結(jié)合劑選自抗體、抗體片段、干擾素、淋巴因子、激素、維生素、生長因子、集落刺激因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白。
25.權(quán)利要求19、20或21中任一項的細胞毒劑，其中所述細胞結(jié)合劑為抗體。
26.權(quán)利要求19、20或21中任一項的細胞毒劑，其中所述細胞結(jié)合劑為單克隆抗體。
27.權(quán)利要求19、20或21中任一項的細胞毒劑，其中所述細胞結(jié)合劑為抗原特異性抗體片段。
28.權(quán)利要求19、20或21中任一項的細胞毒劑，其中所述抗體片段為sFV、Fab、Fab′或F(ab′)2。
29.權(quán)利要求19、20或21中任一項的細胞毒劑，其中所述細胞結(jié)合劑為生長因子或集落刺激因子。
30.一種選擇性殺死細胞群體的方法，該方法包括使靶細胞或含靶細胞的組織與有效量的權(quán)利要求20、21或22中任一項的細胞毒劑接觸。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的細胞毒劑及其治療用途。更具體地說，本發(fā)明涉及新的包含紫杉烷類化合物的細胞毒劑及其治療用途。這些新的細胞毒劑通過紫杉烷與細胞結(jié)合劑的化學連接以靶向方式將紫杉烷類藥物遞送到特定細胞群體而具有治療用途。
文檔編號C07K16/30GK101094857SQ200580045888
公開日2007年12月26日 申請日期2005年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月7日
發(fā)明者M·L·米勒, R·V·J·查里, E·巴羅格盧, A·科默康 申請人:艾文蒂斯藥品公司