專利名稱：治療活性的α-MSH類似物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及a-促黑素細胞激素(a-MSH)的肽類似物，所述肽類似物與 天然a -MSH肽相比具有提高的功效。與a -MSH相比，a -MSH類似物表現(xiàn) 出提高的抗炎效果以及提高的治療或預防與局部缺血或后面是血管再灌注的 局部缺血相關的全身損傷、器官損傷或細胞損傷的能力。
背景技術：
天然肽ot-促黑素細胞激素(cc-MSH)作為1型、3型、4型和5型黑皮 質(zhì)素(MC)受體的天然激動劑已經(jīng)為人們熟知。MC受體屬于G-蛋白偶聯(lián)受 體的類型。所有的受體亞型都被偶聯(lián)到激活型G-刺激蛋白(G-stimulatory protein),這意味著受體激活涉及到提高的cAMP含量。ACTH是2型受體 (MC2)的天然配基。
在許多組織中關于MC受體已經(jīng)進行了大量的研究。已經(jīng)知道，a-MSH 以極大的親和力結(jié)合到其上的1型受體(MC1 )在一些組織和細胞例如腦中表 達，包括星形細胞、睪丸、卵巢、巨噬細胞和嗜中性粒細胞。然而，MCI可 能能在更寬范圍的組織中表達，盡管這還需要去建立。MC受體結(jié)合不同MSH 肽的選擇性是變化的。MCI以極大的親和力結(jié)合a-MSH，也以較低的親和力 結(jié)合e-MSH、 y-MSH和ACTH。據(jù)報導，MC2僅結(jié)合ACTH，而不結(jié)合任 何一種MSH肽。對其他受體的配基的最高親和力包括Y-MSH (MC3-受體) 和I3-MSH (MC4-受體)。相反，MC5以與MC1相同的方式以非常低的親和 力結(jié)合MSH肽(即對a-MSH最高的親和力)。
通過激活MC-受體起作用的MSH-肽具有各種功能，包括免疫、抗炎、體 溫調(diào)節(jié)、痛感、醛固酮合成、血壓調(diào)節(jié)、心率、血管緊張度、腦血流量、神經(jīng) 生長、胎盤發(fā)育、許多激素(例如醛固酮、曱狀腺素、催乳激素、FSH)的合 成/釋放。ACTH在激活類固酮生成(steroidoneogenesis )上具有主要作用。a -MSH也誘導皮膚色素形成。需要重點強調(diào)的是，MSH肽，特別是cc-MSH的關于哪些受體被涉及的 許多作用還沒有完全建立起來。據(jù)推測cc-MSH的抗炎作用涉及各種過程包括 干擾NO生產(chǎn)、內(nèi)皮素-l作用、白介素10形成，這又關Jf關到巨噬細胞和單核 細胞中表達的MC1受體。
已經(jīng)證實MC受體對ot-MSH的激活作用在各種炎癥過程中是重要的 (Lipton和Catania 1997 ): 1 )抑制嗜中性粒細胞的趨藥性遷移(Catania 1996 )。 2) oc-MSH包括其類似物抑制對LPS處理響應的細胞因子(IL-l, TNF-oc) 的釋放(Goninard 1996 )。 3 )抑制對細菌內(nèi)毒素響應的TNF- a ( Wong, K.Y. 等，1997)。 4) ICV或IP給藥ot-MSH抑制通過局部給予LPS而引起的中樞 系統(tǒng)的TNF-a生產(chǎn)。5)已經(jīng)證實a-MSH減輕實驗性炎癥性腸病(Rajora， N.等，1997)和局部缺血誘導的急性腎衰竭(Star, R.A.等，1995)的炎癥。6) 通過抑制接觸性過敏的誘導和激發(fā)，a -MSH還具有一定的預防效果以及誘導 半抗原耐受性，并且人們推測a-MSH可能介導皮膚炎癥和高增生皮膚病的重 要的負調(diào)節(jié)(Luger，T.A.， 1997)。最后，a-MSH導致來自皮膚微維管結(jié)構(gòu)的 內(nèi)皮細胞的提高的IL-8釋放(Hartmeyer， M., 1997 )。
低氧癥(局部缺血)和再灌注損傷兩者在人病理生理學中都是重要的因素。 組織低氧癥的實例(在再灌注過程中預先處理為損傷)包括循環(huán)系統(tǒng)休克、心 肌局部缺血、中風、 一過性腎局部缺血、大外科手術和器官移植。因為歸因于 局部缺血的疾病是極其常見的發(fā)病率和死亡率原因，并且因為器官移植越來越 頻繁，為了改善公眾的健康水平，非常需要具有限制再灌注損傷能力的治療策 略。局部缺血再灌注損傷的基礎病理生理學是復雜的，不僅涉及到對嗜中性粒 細胞-浸潤的典型的炎癥再灌注反應，而且涉及到再灌注組織/器官內(nèi)細胞因子 的基因表達，所述細胞因子包括腫瘤壞死因子-cc (TNF-cx)、白介素(IL)-l P、 IL-6、 IL-8、干擾素-y和胞間粘附分子-l (ICAM-1)。此外，人們認為， 通過直4妻抑制收縮性和誘導細胞凋亡，局部產(chǎn)生的TNF-oc促成如在梗死后心 臟中引起局部缺血后器官機能障礙。由于局部缺血和/或再灌注復雜的性質(zhì)， 已經(jīng)證實簡單的抗炎治療概念是無效的因此，大多數(shù)實驗研究指向這樣的事 實，即為了保護避免再灌注損傷，需要有與一個以上激活通路的伴行的相互作 用。已經(jīng)證實，a-MSH同時具有抗炎的、抗氧化的和抗細胞凋亡的能力，這對于該化合物為了保護避免再灌注損傷的效力給出了很好的解釋。
已知OC-MSH氨基酸序列的氨基酸殘基的特定修飾可導致肽提高的受體
親和力(對例如MC4受體)、延長的生物活性或更多的受體特異性結(jié)合分布型 (receptor-specific binding profile ) ( Schi6th等，1997; Hruby等,1995; Sawyer 等，1980; Hiltz等1991; Scardenings等，2000)。然而，當旨在生產(chǎn)肽藥物 時，這些肽還具有對酶降解低穩(wěn)定性的問題。
如上所述，開發(fā)肽治療活性的藥物的問題是肽快速并且非常高效地被酶降 解，通常具有在幾分鐘范圍內(nèi)的半衰期。蛋白酶和其他蛋白水解酶是無所不在 的，特別是在胃腸道中更是如此，因此在口服時肽常常在多個位點對降解敏感， 并且在血、肝、腎和血管內(nèi)皮中在某種程度上也對降解敏感。此外，特定肽常 常在主鏈內(nèi)的一個以上鍵上對降解敏感；每一個水解位置由特定蛋白酶介導。 即使克服了這些障礙，特別是對于神經(jīng)肽，已經(jīng)遇到了在它們跨越血-腦屏障 運輸方面的困難。
為了提高肽的代謝穩(wěn)定性，Larsen等1999 ( WO 99/46283 )已經(jīng)開發(fā)出了 一種被稱為SIP (結(jié)構(gòu)誘導探針)的技術。SIP技術基于結(jié)構(gòu)誘導探針的使用， 該結(jié)構(gòu)誘導探針以短肽序列為代表，即附加到親本肽的C-端或N-端或者同時 附加到C-端和N-端的(Lys)6?；诜肿觾?nèi)的氫鍵，結(jié)構(gòu)誘導探針強迫親本肽成 為更有序的構(gòu)象，借此，與處于無規(guī)巻曲構(gòu)象的肽相反，肽嵌合體(連接到才罙 針的肽)對蛋白酶敏感度低。作為結(jié)構(gòu)化的結(jié)果，肽嵌合體更難于被蛋白酶降 解。附加SIP到生物活性肽常常導致肽的酶穩(wěn)定性的提高而同時生物活性保持 不變(Rizzi等2002 )。 發(fā)明概述
令人意外的是，本發(fā)明已經(jīng)證實，與天然a-MSH肽相比，a-MSH和a -MSH類似物在肽的N-端的SIP-修飾提高了肽的最大功效。與天然a -MSH肽 相比，本發(fā)明的肽顯示出了提高的抗炎效果和提高的預防局部缺血癥狀的能 力。
因此，本發(fā)明涉及特定的肽，所述肽包括在肽的N-端部分的SIP修飾和 在肽的C-端部分的cc -MSH或a -MSH變體的氨基酸序列。
第一方面，本發(fā)明提供了總計為12 19個氨基酸殘基的肽，所述肽包括如下氨基酸序列X-Aai-Aa2-Aa3-Aa4-Aa5-Y-Aa6-Aa7-Z其中X包括6個氨基酸殘基R1-R2-R3-R4-R5-R6，其中Rl、 R2、 R3、 R4、 R5和R6可以獨立地是Lys或Glu,和其中Y包括選自His-Phe-Arg、 His- (D-Phe) -Arg、 His-Nal-Arg和His-(D-Nal) -Arg的氨基酸序列，和其中Z包括選自Lys-Pro-Val和Lys-Pro-(D-Val)的氨基酸序列，和其中A&、 Aa2、 Aa3、 Aa4、 Aa5、 Aa6和Aa7可以獨立地是任何一種天然 存在的或非天然存在的氨基酸殘基或者缺失，和其中所述肽的羧基端是-C(O)-Bl，其中Bl選自OH、 NH2、 NHB2、 N(B2)(B3)、 0B2和B2，其中B2和B3獨立地選自可以祐:取代的d.6烷基、 可以被取代的Ci6鏈烯基、可以被取代的Cwo芳基、可以被取代的(:7.16芳烷 基和可以被取代的(^7.16烷基芳基；和其中所述肽的氨基端是(B4)HN-、 (B4)(B5)N-或(B6)HN-,其中B4和B5獨立地選自H、可以被取代的Cl6坑基、可以被取代的C2-6鏈烯基、可以被取代的(^6.1()芳基、可以被取代的Cw6芳烷基和可以被取代的0>.16烷基芳基；B6 是B4-C(0)畫。官的組織的病況的藥物組合物的用途。此外，本發(fā)明涉及組合物例如藥物組合物，4艮據(jù)本發(fā)明的肽在醫(yī)學上的用途以及用于治療哺乳動物的一個或多個器官的組織的病況的方法，其中所述藥物組合物包括一種或多種根據(jù)本發(fā)明的肽和藥學上可接受的載體，所述方法包括給予有效劑量的根據(jù)本發(fā)明的肽。具體地，本發(fā)明關注于用于治療由局部缺血、炎癥和/或中毒或者藥物治療的毒性效應引起的病況的方法。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及治療活性的肽，所述肽具有減輕或防止由局部缺血、炎癥和/ 或毒中毒或者藥物治療的毒性效應引起的器官機能障礙的效果。如本文所定義的，如果它能夠用于治療、緩解或減弱疾病狀態(tài)、生理病況、 癥狀或病原學指示或評價或其診斷，那么肽序列是"治療活性的"。如果它能夠用于防止疾病狀態(tài)、生理病況、癥狀或病原學指示，那么肽序列是"預防活 性的"。藥理學活性的制劑也是生理和/或生物活性的。藥理學活性測量在離體、 體內(nèi)或體外的生理系統(tǒng)或生物系統(tǒng)中物質(zhì)(肽)的效果，并且可以使用本領域 熟知的、用于特定肽或者具有相似生理功能的肽的、標準的離體、體內(nèi)或體外 分析法進行分析。 本發(fā)'效彥本發(fā)明涉及一種肽，所述肽包括包括在肽的C-端部分的ot-MSH或oc -MSH變體的氨基酸序列和在肽的N-端部分的結(jié)構(gòu)誘導探針(SIP )。本發(fā)明的 肽被稱為cc-MSH類似物。在本說明書和權(quán)利要求中，這些術語被同義使用。cc-MSH變體被定義為一種氨基酸序列，所述氨基酸序列與天然a-MSH (Ser-Tyr-Ser-Met-Glu國His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val, SEQIDNO: 101 )相 比，被修飾為在序列中具有至少一個氨基酸殘基缺失、取代、疊加或修飾。a -MSH變體優(yōu)選具有如下結(jié)構(gòu)Aa廣Aa2-Aa;rAa4-Aa5-Y-Aa6-Aa7-Z，其中Y包 括選自His-Phe-Arg、 His-(D-Phe)-Arg、 His-Nal-Arg和His-(D-Nal)-Arg的氨基 酸序列，和其中Z包括選自Lys-Pro-Val和Lys-Pro-(D-Val),和其中Aa,、 Aa2、 Aa3、 Aa4、 Aa5、 Aa。和Aa7可以獨立地是任何一種天然存在的或非天然存在的 氨基酸殘基或者缺失。在本文中，術語"氨基酸殘基"是指任何一種天然存在的氨基酸殘基(天 然的氨基酸殘基)或者非天然存在的氨基酸殘基(非天然的氨基酸殘基)。天然的氨基酸殘基被定義為在自然界出現(xiàn)的氨基酸殘基，例如Ala、 Arg、 Asn、 Asp、 Cys、 Gln、 Glu、 Gly、 His、 Ile、 Leu、 Lys、 Met、 Phe、 Pro、 Ser、 Tyr、 Thr、 Trp、 Val。至于oc-MSH變體結(jié)構(gòu)，優(yōu)選的天然的氨基酸殘基的實例是Ser、 Tyr、 Met、 Glu、 Ile、 Trp和Gly。非天然的氨基酸殘基被定義為不在自然界出現(xiàn)的而是實驗創(chuàng)造的氨基酸 殘基。非天然的氨基酸殘基包括合成的ct 、 P或Y -氨基酸殘基(不管L-構(gòu)型 還是D-構(gòu)型)以及側(cè)鏈修飾的氨基酸，例如修飾的酪氨酸，其中芳環(huán)還取代 有例如一個或多個卣素、磺酸基、硝基等，和/或苯酚基被轉(zhuǎn)變?yōu)轷セ?，?述非天然的氨基酸殘基包括側(cè)鏈保護的氨基酸，其中根據(jù)肽化學領域的普通技術人員熟知的方法對氨基酸側(cè)鏈進行保護，例如記載于例如Bodanszky等1994 與J.Jones和Jones 1991的方法。優(yōu)選的非天然的氨基酸殘基的實例是正亮氨 酸(Me)、 Nal ( (3-2-萘基-丙氨酸)、D-Nal ( (3-2-萘基-D-丙氨酸),D-苯丙氨 酸(D-Phe )和D-纈氨酸(D-Val )。在最寬的方面，本發(fā)明涉及總計為12~ 19個氨基酸殘基的肽，所述肽包 括如下氨基酸序列X-Aai-Aa2-Aa3-Aa4-Aa5-Y-Aa6-Aa7-Z其中X包括6個氨基酸殘基R1-R2-R3-R4-R5-R6，其中Rl、 R2、 R3、 R4、 R5和R6可以獨立地是Lys或Glu，和其中Y包括選自 His-Phe-Arg 、 His-(D-Phe)-Arg 、 His-Nal-Arg和 His-(D-Nal)-Arg的氨基酸序列，和其中Z包括選自Lys-Pro-Val和Lys-Pro-(D-Val)的氨基酸序列，和其中Aa,、 Aa2、 Aa3、 Aa4、 Aa5、 Aa6和Aa7可以獨立地是任何一種天然 存在的或非天然存在的氨基酸殘基或者缺失，和其中所述肽的羧基端是-C(二O)-Bl，其中Bl選自.OH、 NH2、 NHB2、 N(B2)(B3)、 OB2和B2,其中B2和B3獨立地選自可以被取代的C^烷基、可以被取代的C2-6鏈烯基、可以被取代的Cwo芳基、可以被取代的Cw6芳烷基和可以被取代的Cw6烷基芳基；和其中所述肽的氨基端是(B4)HN-、 (B4)(B5)N-或(B6)HN-，其中B4和B5 獨立地選自H、可以被取代的C^烷基、可以被取代的CV6鏈烯基、可以被取 代的C^o芳基、可以被取代的(:7.16芳烷基和可以被取代的C謁烷基芳基；B6 是B4-C(=0)-。在本發(fā)明的上下文中，術語"可以被取代的，，是用來指所述的基團可以被 一個或多個選自d.s烷基、C,.s烷氧基、氧代(可以表示為異構(gòu)的烯醇式)、 羧基、氨基、羥基(當存在于烯醇系統(tǒng)時可表示為異構(gòu)的酮式)、硝基、氰基、二卣代-d-8烷基、三鹵代-C,-s烷基、鹵素的基團取代一次或幾次，例如1~5次，優(yōu)選1 ~ 3次，更優(yōu)選1 ~ 2次。通常，上述取代可進行另外的任選取代。 在本文中，術語"d-6烷基，，是用來指直鏈的或支鏈的飽和烴鏈，其中最 長的鏈具有1 6個碳原子，例如曱基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。支鏈烴 鏈是用來指在任何一個碳原子被烴鏈取代的d.6烷基。在本文中，術語"C2—6鏈烯基"是用來指有2~6個碳原子并且含有一個 或多個雙鍵的直鏈或支鏈烴基。C2—6鏈烯基的示例性實例包括烯丙基、高烯丙 基、乙烯基、巴豆基、丁烯基、戊烯基和己烯基。具有一個以上雙鍵的C2-6 鏈烯基的示例性實例包括丁二烯基、戊二烯基、己二烯基和己三烯基以及它們 的支化形式。不飽和鍵(雙鍵)的位置可以是在碳鏈的任何一個位置。在本文中術語"C3-r環(huán)烷基"是用來覆蓋只含碳原子的三、四、五、六、 七和八元環(huán)，而術語"雜環(huán)".是用來指碳原子與1 ~3個雜原子一起構(gòu)成的三、 四、五、六、七和八元環(huán)。雜原子獨立地選自氧、辟L和氮。C3-r環(huán)烷基和雜環(huán)可以任選地含有一個或多個不飽和鍵，但是所述不飽和 鍵處于不形成芳族71 -電子體系的情形。優(yōu)選的"(33.8-環(huán)烷基"的示例性實例是環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)戊二 烯、環(huán)己烷、環(huán)己烯、1，3-環(huán)己二烯，1，4-環(huán)己二烯、環(huán)庚烷、環(huán)庚烯、1,2-環(huán)庚二烯、1,3-環(huán)庚二烯、1,4-環(huán)庚二烯和1,3,5-環(huán)庚三烯。"雜環(huán)"的示例性實例是2//-噻喃、3//-噻喃、4//-噻喃、四氫p塞喃、2//-吡喃、四氫吡喃、p泉啶、1，2-二硫雜環(huán)己烯、1,2-二硫雜環(huán)己烷、1,3-二硫雜環(huán) 己烯、1,3-二硫雜環(huán)己烷、1，4-二硫雜環(huán)己烯、1,4-二硫雜環(huán)己烷、1,2-二氧雜 環(huán)己烯，1,2-二氧雜環(huán)己烷、1,3-二氧雜環(huán)己烯、1,3-二氧雜環(huán)己烷、1,4-二氧 雜環(huán)己烯、1,4-二氧雜環(huán)己烷、派，秦、1,2-氧硫雜環(huán)己烯、1,2-氧^L雜環(huán)己烷、 4//"-l，3-氧硫雜環(huán)己烯、1，3-氧>5克雜環(huán)己烷、1，4-氧硫雜環(huán)己烯、1,4-氧硫雜環(huán)己 烷、2//-1,2-噻。秦、四氫-l,2-噻嗪、2//-1，3-噻嗪、4//-1,3-噻。秦、5，6-二氫-4//-噻嗪、4樂l,4-噻溱、四氬-l,4-p塞。秦、2//-1，2-0惡。秦、4//-1,2-。惡.嗪、6//-1，2-。惡.嗪、 2//-1,3-。惡.。秦、4/f-l，3-嗜、嗪、4//-1,4-。惡.嗪、馬來酰亞胺、琥珀酰亞胺、咪唑、 吡唑、吡咯、。惡.峻、吹咱、巴比妥酸、石危代巴比妥酸、二氧代。底溱、異嗜.唑、 乙內(nèi)酰脲、二氫尿嘧啶、嗎啉、三氧雜環(huán)己烷、4//-1,2,3-三硫雜環(huán)己烯、1,2，3-三硫雜環(huán)己烷、1，3，5-三硫雜環(huán)己烷、六氬-l,3,5-三溱、四氫謹:吩、四氫呋喃、 p比咯啉、p比略烷、吡咯烷酮、吡咯烷二酮、口比峻啉、他峻烷、咪唑啉、咪唑烷、 1,2-二氧雜環(huán)戊烯、1，2-二氧雜環(huán)戊烷、i,3-二氧雜環(huán)戊烯、1，3-二氧雜環(huán)戊烷、3//-1,2-二硫雜環(huán)戊烯、1，2-二硫雜環(huán)戊烷、1,3-二辟u雜環(huán)戊烯、1,3-二硫雜環(huán)戊 烷、異噁唑啉、異噁唑烷、。惡.哇啉、口惡.唑烷、p塞唑啉、p塞唑烷、3//-1,2-氧硫 雜環(huán)戊烯、1,2-氧硫雜環(huán)戊烷、5//-1，2-氧硫雜環(huán)戊烯、1,3-氧硫雜環(huán)戊烯、1,3-氧硫雜環(huán)戊烷、1,2,3-三石危雜環(huán)戊烯、1，2，3-三硫雜環(huán)戊烷、1,2,4-三硫雜環(huán)戊烷、 1,2,3-三氧雜環(huán)戊烯、1，2,3-三氧雜環(huán)戊烷、1,2,4-三氧雜環(huán)戊烷、1,2,3-三唑啉 和1,2,3-三唑烷。對雜環(huán)的結(jié)合可以是在雜原子的位置或者通過雜環(huán)的碳原子。 在本文中術語"芳基"是用來指芳香碳環(huán)或環(huán)體系。此外，術語"芳基"包括稠環(huán)體系其中至少兩個芳環(huán)，或者至少 一個芳基和至少 一個C3—8-環(huán)烷基，或者至少一個芳基和至少一個雜環(huán)共用至少一個化學4建。"芳基"環(huán)的示例性 實例包括可以被取代的苯基、萘基、菲基、蒽基、苊基、1，2,3,4-四氫化萘基、 芴基、茚基、。引哚基、苯并二氫呋喃基、香豆素基、苯并二氫吡喃基、異苯并 二氫吡喃基蓋基(azulenyl)。優(yōu)選的芳基是苯基。在本文中術語"Cw6芳烷基"是用來指以Cw烷基取代的Cwo芳基。在本文中術語"Cw6烷基芳基"是用來指以C6-,o芳基取代的C,-6烷基。在一個實施方式中，本發(fā)明涉及總計為12~ 19個氨基酸殘基的肽，所述 肽包括選自由以下物質(zhì)所組成的組中的氨基酸序列 X-Y-Z， X-Aa,國Y-Z，X-Aa X-Aa X-Aa X-Aa X畫Aa X-Aa X-Aa X-Aa X-Aa X-Aa X-Aa-Aa2-Y-Z,-Aa2-Aa3-Y-Z，-Aa2-Aa3-Aa4-Y-Z,-Aa2-Aa3-Aa4-Aa5-Y-Z ，-Y-Aa6-Z，-AarY-Aa6-Z,-Aa2-Aa3-Y-Aa6-Z,-Aa2-Aa3-Aa4-Y-Aa6-Z,-Aa2-Aa3-Aa4-Aa5-Y-Aa6-Z,-Y-Aa6-Aa7-Z,-Aa2-Y-Aa6-Aa7-Z ，X-Aa, - Aa2-Aa3-Y-Aa6-Aa7-Z,X-Aa廣Aa2-Aa3陽Aa4-Y-Aa6-Aa7-Z ，禾口X-Aa! - Aa2-Aa3 - Aa4-Aa5-Y-Aa6-Aa7-Z 。其中X包括6個氨基酸殘基R1-R2-R3-R4-R5-R6，其中Rl、 R2、 R3、 R4、 R5和R6可以獨立地是Lys或Glu，和其中 Y包括選自 His-Phe匿Arg 、 His-(D-Phe)-Arg 、 His-Nal-Arg和 His-(D-Na1)-Arg的氨基酸序列，和其中Z包括選自Lys-Pro-Val和Lys-Pro-(D-Val)的氨基酸序列，和其中Aa,、 Aa2、 Aa3、 Aa4、 Aa5、 Aa6和Aa7可以獨立地是任何一種天然 的或者非天然的氨基酸殘基或者缺失，和其中所述肽的羧基端是-C(O)-Bl，其中Bl選自OH、 NH2、 NHB2、 N(B2)(B3)、 OB2和B2，其中B2和B3獨立地選自可以被取代的d-6烷基、可以被取代的C2-6鏈烯基、可以被取代的Cwo芳基、可以被取代的C;,6芳烷基和可以被取代的(:7.16烷基芳基；和其中所述肽的氨基端是(B4)HN-、 (B4)(B5)N-或(B6)HN-，其中B4和B5獨立地選自H、可以被取代的CL6烷基、可以被取代的C2—6鏈烯基、可以被取代的C6-u)芳基、可以被取代的C^6芳烷基和可以被取代的Cw6烷基芳基；B6 是B4-C(喝-。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及一種肽，其中肽包括下述氨基酸序列 X-Aa廣Aa2-Aa3-Aa4-Aa5隱Y-Aa6-Aa7-Z。其中Aa!、 Aa2、 Aa3、 Aa4、 Aa5、 Aa6和Aa7可以獨立地是任何一種天然 或非天然氨基酸。因而，Aa,、 Aa2、 Aa3、 Aa4、 Aa5、 Aa6和Aa7均存在于本發(fā) 明的肽中。在一個實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，其中氨基端是(B4) HN-, 其中B4 = H。在另一實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，其中所述肽的羧基端是 -C(O)畫Bl,其中Bl =OH。有幾種方法能夠用來穩(wěn)定肽使其抗降解以及降低肽與其他化合物、試劑和 /或肽/蛋白質(zhì)(例如在血漿中)進行反應的能力。本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明被那些本領域熟知的方法修飾的肽。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā) 明的肽，其中肽的氨基端被乙?；揎棥Ｒ虼?，在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，其中氨基端是(B6) HN-,其中B6 = B4-C(=0)-，和 B4 = CH3。在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，其中肽的 羧基端被酰胺化修飾。因此，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，其中所述肽的羧基 端是-C(K))-Bl，其中B1-NH2。在本發(fā)明最寬的方面，X選自Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys (序列表序列37(SEQ ID No : 37 ) ) 、 Glu-Lys畫Lys-Lys-Lys隱Lys (序列表序列38 )、 Lys-Glu陽Lys-Lys-Lys-Lys (序列表序列39)、 Lys-Lys-Glu-Lys-Lys-Lys (序列表 序列40)、 Lys-Lys-Lys-Glu-Lys-Lys (序列表序列41 )、 Lys-Lys-Lys-Lys-Glu-Lys(序列表序歹'J 42 ) 、 Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Glu (序列表序歹'J 43 )、 Glu-Glu-Lys-Lys-Lys-Lys (序列表序列44)、 Glu-Lys-Glu-Lys-Lys-Lys (序列表 序列45)、 Glu-Lys-Lys-Glu-Lys-Lys(序列表序列46)、 Glu-Lys-Lys-Lys-Glu-Lys(序列表序歹'J 47 ) 、 Glu-Lys-Lys誦Lys-Lys-Glu (序列表序歹'J 48 )、 Lys-Glu-Glu-Lys-Lys-Lys (序列表序列49)、 Lys-Glu畫Lys陽Glu-Lys-Lys (序列表 序列50)、 Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Lys(序列表序列51 )、 Lys-Glu-Lys-Lys-Lys-Glu(序列表序歹'J 52 ) 、 Lys-Lys-Glu-Glu-Lys-Lys (序列表序歹'J 53 )、 Lys-Lys-Glu-Lys-Glu-Lys (序列表序列54)、 Lys-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu (序列表 序列55)、 Lys-Lys-Lys-Glu-Glu-Lys(序列表序列56)、 Lys-Lys-Lys-Glu-Lys-Glu(序列表序歹'J 57 ) 、 Lys-Lys-Lys-Lys隱Glu-Glu (序列表序歹寸58 )、 Glu-Glu-Glu-Lys-Lys-Lys (序列表序列59)、 Glu-Glu-Lys-Glu-Lys-Lys (序列表 序列60)、 Glu-Glu國Lys-Lys-Glu-Lys(序列表序列61 )、 Glu-Glu-Lys-Lys-Lys-Glu(序列表序列62 ) 、 Glu-Lys-Glu-Glu-Lys-Lys (序列表序列63 )、 Glu-Lys-Glu隱Lys-Glu-Lys (序列表序列64)、 Glu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu (序列表 序列65)、 Glu-Lys-Lys-Glu-Glu-Lys(序列表序列66)、 Glu-Lys-Lys-Glu-Lys-Glu(序列表序歹'J 67 ) 、 Glu-Lys匿Lys-Lys陽Glu-Glu (序列表序歹'J 68 )、 Lys-Lys-Lys隱Glu-Glu-Glu (序列表序列69)、 Lys畫Lys-Glu-Lys-Glu-Glu (序列表 序列70)、 Lys陽Lys-Glu隱Glu-Lys-Glu(序列表序列71 )、 Lys-Lys-Glu-Glu-Glu-Lys(序列表序歹'J 72 ) 、 Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Glu (序列表序歹'J 73 )、Lys-Glu-Lys-Glu-Lys-Glu (序列表序列74)、 Lys-Glu-Lys-Glu-Glu-Lys (序列表 序列75 )、 Lys-Glu-Glu-Lys-Lys-Glu(序列表序列76)、 Lys-Glu-Glu-Lys-Glu-Lys(序歹'J表序歹'J 77 ) 、 Lys-Glu-Glu-Glu-Lys-Lys (序歹'J表序歹'J 78 )、 Lys畫Lys-Glu-Glu-Glu-Glu (序列表序列79)、 Lys-Glu-Lys-Glu-Glu-Glu (序列表 序列80)、 Lys-Glu-Glu-Lys-Glu-Glu(序列表序列81 )、 Lys-Glu-Glu-Glu-Lys-Glu(序列表序列82 ) 、 Lys畫Glu-Glu-Glu-Glu-Lys (序列表序列83 )、 Glu-Lys-Lys-Glu-Glu-Glu (序列表序列84)、 Glu-Lys-Glu-Lys-Glu-Glu (序列表 序列85 )、 Glu-Lys-Glu-Glu-Lys-Glu(序列表序列86)、 Glu-Lys-Glu陽Glu-Glu-Lys(序歹'J表序歹'J 87 ) 、 Glu-Glu-Lys-Lys-Glu畫Glu (序列表序歹'J 88 )、 Glu-Glu-Lys-Glu-Lys-Glu (序列表序列89)、 Glu畫Glu-Lys-Glu-Glu-Lys (序列表 序列90)、 Glu-Glu-Glu-Lys匿Lys-Glu(序列表序列91 )、 Glu-Glu-Glu-Lys-Glu-Lys(序列表序歹'J 92 ) 、 Glu-Glu-Glu-Glu-Lys-Lys (序列表序歹'J 93 )、 Lys-Glu畫Glu匿Glu-Glu-Glu (序列表序列94)、 Lys-Glu-Glu-Glu隱Glu隱Glu (序列表 序列94 )、 Glu-Lys-Glu-Glu-Glu-Glu(序列表序列95 )、 Glu畫Glu-Lys-Glu-Glu-Glu(序列表序列96 ) 、 Glu-Glu-Glu-Lys-Glu-Glu (序列表序列97 )、 Glu-Glu-Glu-Glu-Lys-Glu (序列表序列98)、 Glu-Glu畫Glu-Glu-Glu-Lys (序列表 序列99)、 Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu (序列表序列100)。 目前本發(fā)明優(yōu)選的肽是如下肽序列的穩(wěn)定化合物Lys-Lys-Lys-Lys陽Lys-Lys-Ser畫Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -Val (序列表序列1 )Glu-Glu誦Glu-Glu-Glu國Glu-Ser國Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys隱Pro -Val (序列表序列2)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列3)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列4)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser國Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys -Pro-Val (序列表序列5)Glu-Glu-Glu畫Glu-Glu國Glu-Ser國Tyr-Ser隱Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列6)Lys-Lys-Lys-Lys誦Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys -Pro-(D-Val)(序列表序列7)Glu畫Glu-Glu畫Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr畫Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列8)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Me-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列9)Glu-Glu-Glu誦Glu-Glu陽Glu畫Ser-Tyr-Ser-Nle畫Glu-His-D-Nal-Arg-Trp陽Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列10)Lys-Lys-Lys-Lys陽Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser隱Nle-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列11 )Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly響Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列12)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列13)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Ser畫Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg隱Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列14)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His畫Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列15)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu畫Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp畫Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列16)Lys-Lys-Lys畫Lys-Lys畫Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser畫His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列17)Glu畫Glu-Glu-Glu-Glu-Glu陽Ser-Ser畫Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列18)Lys—Lys-Lys—Lys-Lys—Lys—Ser-Ser誦Ik-Ik哩Ser—His-(D-Phe)誦Arg-IYp國Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列19)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu隱Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列20)Lys-Lys匿Lys-Lys-Lys-Lys隱Ser匿Ser-Ile-Ile-Ser-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -Val (序列表序列21 )Glu隱Glu-Glu-Glu畫Glu-Glu-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -Val (序列表序列22)Lys-Lys匿Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列23)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu陽Glu-Ser-Ser畫Ile-Ile-Ser-His-D-Nal-Arg-Trp匿Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列24)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys隱Pro-Val (序歹'J 表序列25)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro畫Val (序列 表序列26)Lys-Lys-Lys-Lys隱Lys-Lys-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序 列表序列27)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys畫Pro-(D-Val) (序列表序列28)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp畫Gly-Lys-Pro-Val (序 列表序列29)Glu-Glu-Glu-Glu誦Glu畫Glu-Nle陽Glu-His-(D-Phe)-Arg畫Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列30)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys畫Nle-Glu-His-(D-Phe)畫Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val) (序列表序列31)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu畫Glu-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg國Trp-Gly誦Lys-Pro-(D-Val) (序列表序列32)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Nle-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro陽Val(序列 表序列33)Glu-Glu-Glu畫Glu-Glu-Glu-Nle隱Glu-His-D墨Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列34)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Nle-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列35)和Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Me-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys陽Pro-(D-Val)(序列表序列36)可以通過^f多飾上述肽的N-端和/或C-端進行穩(wěn)定化，例如乙?；景l(fā)明肽 的N-端和/或酰胺化本發(fā)明肽的C-端。對于天然氨基酸，用熟知的三字母密碼給出氨基酸序列。天然氨基酸殘基 的修飾和取代縮寫如下Nle是用于正亮氨酸的縮寫。D-Nal是用于(3-2-萘基 -d-丙氨酸的縮寫。D-Val(D-纈氨酸)是用于D-構(gòu)型纈氨酸的縮寫。D-Phe ( D-苯丙氨酸)是用于D-構(gòu)型苯丙氨酸的縮寫。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及一種肽，所述肽是如下氨基酸序列的 N-端被乙?；⑶褻-端被酰胺化的化合物Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -Val (序列表序列1)。在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及^f艮據(jù)本發(fā)明的肽，所述肽是如下氨 基酸序列的N-端被乙酰化并且C-端被酰胺化的化合物Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys畫Pr o-Val (序列表序歹'J 2)。在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，所述肽是以下氨 基酸序列的N-端乙?；⑶褻-端酰胺化的化合物Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser畫Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe國Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列3)。在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，所述肽是如下氨 基酸序列的N-端被乙酰化并且C-端被酰胺化的化合物Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys -Pro-Val (序列表序列5)。在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，所述肽是如下氨 基酸序列的N-端被乙?；⑶褻-端被酰胺化的化合物Lys-Lys-Lys-Lys-Lys陽Lys-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His- ( D-Nal ) -Arg國Trp-Gly -Lys-Pro-VaI (序列表序列9)。在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，所述肽是如下氨基酸序列的N-端被乙?；⑶褻-端被酰胺化的化合物Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile國Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列13)。在另一優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽，所述肽是如下氨 基酸序列的N-端被乙?；⑶褻-端被酰胺化的化合物Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列17)。如上所述，與天然存在的肽a-MSH相比，本發(fā)明的肽具有提高的治療效 果和/或提高的最大響應和/或4是高的最大功效。發(fā)明人已經(jīng)檢驗過了一些本發(fā)明的肽的生物學效果Ac-(Lys)6-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列 表序列"在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化)，Ac-(Glu)6-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2(序列 表序列2*在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化)，Ac-(Lys)6-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)-NH2 (序列表序列3*在N-端凈皮乙?；⑶以贑-端^皮酰胺化)，Ac-(Lys)6-Ser畫Tyr-Ser國Nle-Glu-His陽(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列表序列5*在N-端被乙酰化并且在C-端被酰胺化)，Ac-(Lys)6-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Nal)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2Ac-(Lys)6-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列表 序列13*在^端被乙?；⑶以?端被酰胺化)，Ac-(Lys)6-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序 列表序列17*在N-端被乙酰化并且在C-端被酰胺化)。通常，"Ac-"說明本發(fā)明的肽在N-端被乙?；?-NH2"說明本發(fā)明的肽 在C-端被酰胺化。在人白細胞懸液中(實驗方案1 ),所有七個肽劑量依賴地抑制LPS誘導 的TNF-a累積(實施例1-7)。令人意外的是，我們發(fā)現(xiàn)與天然促黑素cc-MSH相比，所有七個肽是更有效的以及更有效能的，前者由對TNF-a生產(chǎn)的最大 抑制效果所定義，后者由提供最大的TNF-a累積抑制所需的化合物濃度所定 義(實施例1-7 )。在通過靜脈注入LPS在大鼠中誘導全身性炎癥的方案中(實驗方案2)， 發(fā)明人還研究了以上所列的七個肽的效果(序列表序列1*、序列表序列2*、 序列表序列3*、序列表序列5*、序列表序列9*、序列表序列13*、序列表序 列17*，所有*在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化)。我們證實，所述肽極 大地抑制了循環(huán)血中LPS誘導的TNF-a累積。令人意外的是，所有七個肽(序 列表序列1*、序列表序列2*、序列表序列3*、序列表序列5*、序列表序列 9*、序列表序列13*、序列表序列17*，所有t在N-端被乙?；⑶以贑-端被 酰胺化)能抑制循環(huán)血中LPS誘導的TNF-a累積到比天然促黑素細胞激素a -MSH更高的程度(實施例1-7)。在通過大鼠吸入LPS誘導炎癥的方案中(實驗方案3)，發(fā)明人還研究了 如下肽的效果Ac-(Lys)6-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列 表序列P在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化)，Ac-(Lys)6-Ser-Tyr-Ser-NIe-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列表序列5^^在N-端被乙酰化并且在C-端被酰胺化)，已經(jīng)證實這兩個肽(序列表序列1*和5*)極大地抑制肺泡內(nèi)LPS誘導的 嗜酸性細胞累積(實施例1和實施例2)。令人意外的是，肽(序列表序列5*) 除了這種對嗜酸性細胞的作用外，還顯著地抑制嗜中性粒細胞浸潤到比在用天 然促黑素a_MSH處理的大鼠中發(fā)現(xiàn)的程度高很多的程度。腎的一過性局部缺血(temporal ischemia)常常被視為低血壓、血容量不 足、外科手術介入的結(jié)果，所述結(jié)果涉及腎和/或大動脈血流量的降低，或者 與敗血病有關。這導致局部缺血誘導的急性腎衰竭，對于大部分患者來說其將 惡化為慢性腎衰竭。目前還沒有出現(xiàn)有效的治療方法來防止腎衰竭的發(fā)展。在 局部缺血后階,更常見發(fā)現(xiàn)是尿濃縮缺陷的發(fā)展，所述尿濃縮缺陷具有提高的無 ;容質(zhì)尿(solute free urine )產(chǎn)量的形成。人們已經(jīng)知道，由局部缺血和再灌注誘導的大鼠的局部缺血誘導的實驗性急性腎衰竭(ARF)引起與尿濃縮機制的損害相關的腎小管上皮細胞的特征性結(jié)構(gòu)改變。這個局部缺血誘導的ARF模型提供了合適的模型來評價在局部缺 血誘導的損傷中MSH類似物的效果。在由暫時雙向阻塞腎動脈誘導的重癥急 性腎衰竭中，本發(fā)明人已經(jīng)研究了肽Ac-(Lys)6-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列表序列1*在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化)的效果，并且將其與天然肽a-MSH的效果進行了比較(實驗方 案6)。當暫時阻塞腎動脈之后5天進行評價時，以載體處理的大鼠發(fā)展為多 尿癥(由比對照大鼠高101%的多尿量所定義)，所述對照大鼠進行假的腎動脈 阻塞。令人意外的是，服用與天然肽a-MSH相同的摩爾量的所述化合物(序 列表序列1*在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化)完全使多尿量正?；@說 明所述肽具有保護避免局部缺血誘導的ARF的能力，而在該模型中用天然肽 處理不能使尿生產(chǎn)正常化。在發(fā)達國家中急性心肌梗塞(AMI)是最常見的死亡原因之一。由于突然 的冠狀動脈血栓癥，AMI幾乎總是發(fā)生在具有冠狀動脈的患者中。目前，纖 維蛋白溶解療法或初期經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(PTCA )是標準的治療方法， 能夠在50-70%的病人中獲得早期再灌注(自發(fā)的再灌注率小于30%)。再灌注 的目的是減小梗塞的大小，從而降低被損壞的心肌功能的發(fā)展。纖維蛋白溶解 /PTCA的全部效果是短期和長期死亡率下降20%。然而，AMI伴隨有炎癥反 應，這對于愈合和瘢痕形成來說是先決條件。冠狀動脈阻塞嚴重地減小了到心 肌部分的血流量，這顯著地損害了能量代謝。局部缺血持續(xù)相當長的時間 (〉20min)引起梗塞并且導致炎癥反應，當再灌注局部缺血心肌時兩者都會 加速和擴大。心肌缺血/再灌注(MIR)不僅激活對嗜中性粒細胞-浸潤的典型的炎癥再 灌注反應，而且激活心肌細胞因子的基因表達，所述細胞因子包括腫瘤壞死因 子-oc(TNF-a)、白介素(IL) -1(3、 IL-6、 IL-8、干擾素-Y和胞間粘附分子-1 (ICAM-1 )。細胞因子的這種局部心肌過表達不僅在梗塞面積的調(diào)節(jié)上而且在 心肌機能障礙(包括血管壁重作、心力衰竭和心臟肥大)的發(fā)展上起重要作用。 此外，人們認為，通過直接抑制收縮性和誘導細胞凋亡，局部生成的TOF-a 促成缺血后器官機能障礙。越來越多的實驗研究已經(jīng)證實抗炎/抗氧化/抗細胞凋亡策略具有減d、 MIR 動物模型的梗塞面積的能力。然而，沒有臨床研究證實在人類中的顯著效果。在大鼠的心肌缺血/再灌注模型中，在所述模型中左前冠狀動脈被阻塞60分鐘，恰好在去掉冠狀動脈阻塞之前給予用根據(jù)本發(fā)明的肽的處理，然后再跟蹤大鼠3小時。然后評價所述肽減小梗塞面積的能力，并將其與天然肽oc-MSH 的效果進行比較(實驗方案5 )。令人意外的是，所有如下三個肽Ac-(Lys)6-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列 表序列"在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化)，Ac-(Lys)6-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列表序列5*在N-端被乙?；⑶以贑-端^皮酰胺化)，和Ac畫(Lys)6隱Ser-Tyr-Ser陽Nle畫Glu隱His-D畫Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列表序列9*在N-端被乙酰化并且在C-端被酰胺化) 減小梗塞面積到比天然肽a-MSH更高的程度(實施例1、 3-4)。根據(jù)上面以及實施例所描述的肽的功能特性，本發(fā)明涉及具有至少一種如 下特性的肽a) 抑制LPS誘導的TNF- a的產(chǎn)生，其中TNF- oc由人白細胞產(chǎn)生b) 抑制肺中炎癥誘導的嗜酸性細胞浸潤c) 抑制肺中炎癥誘導的嗜中性粒細胞浸潤d) 抑制循環(huán)血中炎癥誘導的TNF- a累積e) 減輕局部缺血誘導的急性腎衰竭f) 減小心肌梗塞面積g) 減輕心肌梗塞后心力衰竭的程度h) 減輕肺血管高血壓i) 減輕順鉑誘導的腎衰竭肽可以具有一個以上這些特性，例如2、 3、 4、 5、 6、 7、 8或者上述所有 特性。這些特性能夠用如實施例中概述的方法進行檢驗。如上所述，本發(fā)明的a-MSH類似物的特征為具有比天然a-MSH提高的 功效。在本說明書和權(quán)利要求中，術語"功效"被定義為化合物可獲得的最大響應。在實施例記載的各種試^r中，本發(fā)明的a-MSH類似物能夠產(chǎn)生比天然a -MSH更高的最大響應。優(yōu)選地，與a -MSH相比，本發(fā)明的a -MSH類似物抑制由人白細胞產(chǎn)生 的LPS誘導的TNF- oc生產(chǎn)最少10%,更優(yōu)選25%以及最優(yōu)選40%。進一步，本發(fā)明的a-MSH類似物可以抑制肺中炎癥誘導的嗜酸性細胞浸 潤，通過降低支氣管肺泡灌洗或者類似方法收集的液體中嗜酸性細胞數(shù)量的能 力測定。當與a-MSH比較時，我們發(fā)現(xiàn)最小預期效果是嗜酸性細胞減少10%, 更優(yōu)選25%以及最優(yōu)選50%。此外，本發(fā)明的a -MSH類似物可以抑制肺中炎癥誘導的嗜中性粒細胞浸 潤，通過降低支氣管肺泡灌洗或類似方法收集的液體中嗜中性粒細胞數(shù)量的能 力測定。當與cc-MSH比較時，發(fā)現(xiàn)最小預期效果是嗜中性粒細胞減少10%, 更優(yōu)選20%以及最優(yōu)選40%。與a-MSH相比，本發(fā)明的oc-MSH類似物還可以抑制循環(huán)血中炎癥誘導 的TNF- ot生產(chǎn)最少10%,更優(yōu)選25%以及最優(yōu)選40% 。此外，本發(fā)明的a-MSH類似物可以減輕局部缺血誘導的急性腎衰竭，這 通過減輕局部缺血后多尿癥程度的能力測定。當與a-MSH比較時，發(fā)現(xiàn)最小 預期效果是多尿癥減少10%，更優(yōu)選30%以及最優(yōu)選50%。進一步，本發(fā)明的a-MSH類似物可以減小心肌梗塞面積，通過降低局部 缺血心肌中壞死面積的大小的能力證明。當與a-MSH比較時，發(fā)現(xiàn)最小預期 效果是梗塞面積減少10%,更優(yōu)選20°/。以及最優(yōu)選30%。在另一方面，本發(fā)明的a-MSH類似物可以減輕心肌梗塞后心力衰竭的程 度，通過直接測量左心室末端舒張壓或類似定量方法評價心臟的表現(xiàn)來證明。 當與oc-MSH比較時，發(fā)現(xiàn)最小預期效果是心力衰竭的程度減少10%，更優(yōu)選 20%以及最優(yōu)選25%。在另一方面，本發(fā)明的oc-MSH類似物可以減輕肺血管高血壓癥。當與a -MSH比較時，發(fā)現(xiàn)最小預期效果是肺血管高血壓癥減少10%，更優(yōu)選20%以 及最優(yōu)選30%。. 在另一方面，本發(fā)明的a-MSH類似物可以減輕順鉑誘導的腎衰竭。當與a-MSH比較時，發(fā)現(xiàn)最小預期效果是低血鎂癥(hypomagnesia )和/或腎小球 浸潤率減少10%,更優(yōu)選20%以及最優(yōu)選30%。如前所述，天然肽cx"足黑素(a-MSH)作為1型、3型、4型和5型黑 皮質(zhì)素(MC )受體的天然激動劑已經(jīng)為人們熟知，而ACTH是2型受體(MC2 ) 的天然配基。因為所述肽包括a-MSH或其類似物的氨基酸序列，所述肽具有 激活一種或多種黑皮質(zhì)素受體(即1型、3型、4型或5型黑皮質(zhì)素受體)的 能力。本復鄉(xiāng)^##才法本發(fā)明的肽可以通過本領域本身熟知的方法進行制備。因而，a-MSH、 cc -MSH變體、a -MSH類似物和X基元(motif)可以通過標準的肽制備技術 (例如溶液合成法或Merrifield型固相合成法)制備。在一個可能的合成策略中，本發(fā)明的肽可以通過固相合成法制備首先使 用公知的標準的保護、偶聯(lián)和脫保護步驟構(gòu)建藥理活性的肽序列(a-MSH、 a-MSH變體、cc-MSH類似物)，此后在活性肽上用與構(gòu)建活性肽類似的方式 繼續(xù)偶聯(lián)基元X的氨基酸序列，最后從載體上切除整個肽。這種策略獲得了 一種肽，其中肽序列X在肽的N-端氮原子上被共價結(jié)合到該藥理活性的肽上。另一可能的策略是通過溶液合成法、固相合成法、重組技術或酶合成法分 別制備ct-MSH肽/類似物和X-基元(或其部分)的序列，接著在溶液中或者 使用固相技術或其組合通過公知的片段縮合步驟偶聯(lián)兩個序列。在一個實施方 式中，cc-MSH肽/類似物可以通過重組DNA方法制備，X基元可以通過固相 合成法制備。oc-MSH肽/類似物與X基元的接合可以通過使用化學接合法進 行。這種技術允許在高特異性方式下組裝完全無保護的肽片段(Liu等，1996)。 還可以通過蛋白酶催化的肽鍵形成進行所述接合，其提供了 一種高度特異的技 術以通過肽鍵接合完全無保護的肽片段(Kullmann, 1987)。合適的固體支持材料(SSM)的實例是例如功能化的樹脂如聚苯乙烯、聚 丙烯酰胺、聚二曱基丙烯酰胺、聚乙二醇、纖維素、聚乙烯、聚乙二醇接枝的 聚苯乙烯、膠乳、戴諾免疫磁珠(dynabeads)等。應當理解的是，將X-基元的肽序列的C-端氨基酸或者cx -MSH、 cc -MSH 變體、cc-MSH類似物的C-端氨基酸通過常用連接子連接到固體支持材料上是必須的或者需要的，常用連接子是例如2,4-二曱氧基-4'-羥基-二苯曱酮、4-(4-羥基-曱基-3-曱氧基苯氧基)-丁酸、4-羥基-曱基苯曱酸、4-羥曱基-苯氧基乙酸、 3-(4_羥基甲基苯氧基)丙酸、和p-[(R,S)-a[l-(^H-芴力-基)曱氧基曱酰胺基]_2,4-二曱氧基苯基]-苯氧基-乙酸。通過酸(例如三氟乙酸、三氟曱磺酸、溴化氫、氯化氫、氟化氬等)任選 地與一種或多種適于該目的的"清除劑"(例如乙二硫醇、三異丙基硅烷、苯 酚、苯硫基曱烷等)組合的方法，可以將本發(fā)明的肽從固體支持材料上切除， 或者，通過堿的方法例如氨、肼、醇鹽例如乙醇鈉、氫氧化物例如氫氧化鈉等， 將本發(fā)明的肽接合物從固體支持材料上切除。本發(fā)明的肽也可以通過重組DNA技術使用本領域技術人員熟知的一般方 法和原理來進行制備。通過已制定的標準方法例如亞磷酰胺方法 (phosphoamidite method),可以合成地制備編碼本發(fā)明的肽的核酸序列。根 據(jù)亞磷酰胺方法，例如在自動DNA合成儀中，在合適載體上合成、純化、退 火、連接以及克隆寡核苷酸。然后將編碼本發(fā)明的肽的核酸序列插入到重組表達載體中，所述重組表達 載體可以是可以方便地進行重組DNA步驟的任何一種載體。載體的選擇通常 依賴于其將要被轉(zhuǎn)入的宿主細胞。因此，所述載體可以是自發(fā)復制的載體，即 作為染色體外個體存在并且其復制不依賴于染色體復制的載體，例如質(zhì)粒。此 外，所述載體可以是一種載體，即當被轉(zhuǎn)入到宿主細胞時，載體被整合到宿主 細胞基因組內(nèi)并且與它所整合進入的染色體一起復制。在載體中，需要將編碼本發(fā)明的肽的核酸序列可操作地連接到適當?shù)膯又骷毎椿蛘弋愒吹牡鞍椎幕蛑袑С龅娜我獾暮薙踏列。用于在哺乳動物 細胞中指導編碼本發(fā)明的肽的核酸序列轉(zhuǎn)錄的、合適的啟動子的實例是SV40 啟動子、MT-1 (金屬硫蛋白基因)啟動子或腺病毒2主要晚期啟動子、勞斯 肉瘤病毒(RSV)啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子和牛乳頭狀瘤病毒(BPV) 啟動子。用在昆蟲細胞的適當?shù)膯幼邮嵌嘟求w蛋白啟動子。合適的啟動子(其用于指導編碼本發(fā)明的肽的核酸序列的轉(zhuǎn)錄，尤其是在 細菌宿主細胞中)的實例是從以下來源獲得的啟動子大腸桿菌乳糖操縱子、天藍色鏈霉菌瓊脂糖酶基因(dagA),枯草芽孢桿菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB )、 地衣芽孢桿菌a-淀粉酶基因5(amyL)、嗜熱脂肪芽孢桿菌麥芽糖淀粉酶基因 (amyM)、解淀粉芽孢桿菌cc-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢桿菌青霉素酶 基因(penP)、枯草芽孢桿菌xylA和xy舊基因、和原核|3 -內(nèi)酰胺酶基因， 以及tac啟動子。更多的啟動子記載于"Useful proteins from recombinant bacteria" Scientific American, 1980,242:74-94;和Sambrook等,1989 (同前)。用于在絲狀真菌宿主細胞中指導編碼本發(fā)明的肽的核酸序列轉(zhuǎn)錄的、合適 的啟動子的實例是從編碼以下酶的基因獲得的啟動子米曲霉TAKA淀粉酶、 米黑根毛霉(i^z'zowwcw脂Wze/)天冬氨酸蛋白酶、黑曲霉中性a-淀粉酶、黑 曲霉耐酸性a-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡糖淀粉酶(glaA)、米黑根毛霉脂 酶、米曲霉堿性蛋白酶、米曲霉磷酸丙糖異構(gòu)酶、構(gòu)巢曲霉乙酰胺酶、尖孢鐮 刀菌(Fwrar/wwoj^jwraw)類胰蛋白酶水解酶(記載于美國專利4,288,627,在 此引入作為參考)，以及它們的雜化物。用于絲狀真菌宿主細胞的、特別優(yōu)選 的啟動子是TAKA淀粉酶、NA2-tpi (來自編碼黑曲霉中性a-淀粉酶和米曲霉 磷酸丙糖異構(gòu)酶的基因的啟動子的雜化物)和glaA啟動子。在酵母宿主中，有用的啟動子可以從以下基因獲得釀酒酵母 (Sacc/^rawycM ce v/w'ae )烯醇化酶(ENO-I)基因、釀酒酵母半乳糖激酶基 因(GAL1)、釀酒酵母乙醇脫氫酶/甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因(ADH2/GAP)和釀 酒酵母3-磷酸甘油激酶基因。用于酵母宿主細胞的其他有用啟動子記載于 Romanos等1992，酵母(Yeast) 8:423-488。編碼本發(fā)明的肽的核酸序列還可以被可操作地連接到合適的終止子例如 人生長激素終止子上。用于絲狀真菌宿主細胞的優(yōu)選的終止子從編碼如下酶的 基因獲得米曲霉TAKA淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、構(gòu)巢曲霉氨基苯曱酸 鹽合成酶、黑曲霉a-葡糖苷酶和尖孢鐮刀菌類胰蛋白酶水解酶。用于酵母宿主細胞的優(yōu)選的終止子從編碼以下酶的基因獲得釀酒酵母)烯醇化酶、釀酒酵母細胞色素C (CYC1)、酉良酒 酵母乙醇脫氫酶/甘油醛-3-磷酸脫氫酶。用于酵母宿主細胞的其他有用終止子 記載于Romanos等1992 (同前)。所述載體還可以包括元件例如聚腺苷酸化信號(例如，來自SV40或腺病毒5Elb區(qū))、轉(zhuǎn)錄增強子序列(例如,SV40增強子)和翻譯增強子(例如, 編碼腺病毒VARNAs的增強子)。此外，用于絲狀真菌宿主細胞的優(yōu)選的聚腺 苷酸化信號從編碼以下酶的基因獲得米曲霉TAKA淀粉酶、黑曲霉葡糖淀 粉酶、構(gòu)巢曲霉氨基苯曱酸鹽合成酶。用于酵母宿主細胞的有用的聚腺苷酸化 信號記載于Guo和Sherman, 1995，分子細胞生物學(Molecular Cellular Biology) 15:5983-5990。重組表達載體還可以包括能夠使所述載體在所述宿主細胞中復制的DNA 序列。這種序列(當宿主細胞是哺乳動物細胞時)的實例是SV40或多瘤病毒 的復制起點。細菌的復制起點的實例是質(zhì)粒pBR322、 pUC19、 pACYC177、 pACYC184、 pUBHO、 pE194、 pTA1060和pAMPl的復制起點。用于酵母宿 主細胞的復制起點的實例是2微米復制起點(2 micron origin of replication )、 CEN6與ARS4的組合、CEN3與ARS1的組合。復制起點可以是具有突變 的復制起點以l吏在宿主細胞中其功能是溫度敏感的(參見Ehrlich, 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 1433 )。所述載體還可以包括選擇性標記，例如其產(chǎn)物補足宿主細胞的缺陷的基 因，例如用于編碼二氬葉酸還原酶(DHFR)的基因或者賦予對藥物抗性的基 因，所述藥物是例如新霉素、遺傳霉素(geneticin)、氨千青霉素、潮霉素 (hygromycin)。用于酵母宿主細胞的合適的標記是ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、 MET3、 TRP1和URA3。用于絲狀真菌宿主細胞的選擇性標記可以選自如下組 以及來源其他物種的等同物，所述組包括但不限于amdS (乙酰胺酶)、argB (鳥氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶)、bar (草丁膦乙酰轉(zhuǎn)移酶)、hygB(潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移 酶)、niaD (硝酸還原酶)、pyrG (乳清酸核苷-5 '-磷酸鹽脫羧酶)、sC (硫酸 鹽腺苷轉(zhuǎn)移酶)、trpC (氨基苯曱酸鹽合成酶)和草銨膦抗性標記。用于曲霉 細胞的優(yōu)選的選擇性標記是構(gòu)巢曲霉或米曲霉的amdS和pyrG標記以及吸水 鏈霉菌的bar標記。此外，選擇性可以通過共轉(zhuǎn)化完成，例如如WO 91/17243 所記載的，選"t奪性標記在單獨的載體上。用于連接分別編碼本發(fā)明的肽、啟動子以及終止子的核酸序列，以及將它 們插入到含有復制必須的信息的合適的載體中的步驟，對于本領域技術人員來 說是公知的(參照，例如Sambrook等，在引文中列舉)。表達載體所轉(zhuǎn)入的宿主細胞可以是能夠生產(chǎn)本發(fā)明的肽的任何細胞，可以 是真核細胞，例如無脊推動物(昆蟲)細胞或者脊推動物細胞(例如爪蟾卵母 細胞或哺乳動物細胞)，尤其是昆蟲細胞和哺乳動物細胞。合適的哺乳動物細胞系的實例是COS (例如，ATCC CRL 1650)、 BHK (例如.，ATCC CRL 1632，ATCCCCL10)或者CHO(e.g"ATCCCCL61)纟田胞系。用于轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞以及表達已轉(zhuǎn)入到細胞的DNA序列的方法可以是^壬^f可一種本領域熟知的方法(例如，MANIATIS, T.， E. F. FRITSCH和J.SAMBROOK, 1982 A/o/ecw/w C/om'"g: X^^"wa/.冷泉港實-驗室出版社，冷泉港，紐約州)。宿主細胞還可以是單細胞病原體(例如原核細胞)或者非單細胞病原體(真核細胞)。有用的單細胞細胞是細菌細胞例如革蘭氏陽性菌(包括但不限于芽孢桿菌細胞，例如嗜石咸芽孢桿菌(5ac說w a汰a/o/ /n7^ )、解淀粉芽孢桿菌 (5acf〃附a附y(tǒng)/oh々i^/^c/em: )、 ^豆芽孑包4干菌(5ac!'〃ws 6rev/s )、玉不4犬芽月包4干菌 (5ac/〃ws cz>rw/<3ra )、 凝固芽月包4干菌(5ac/〃ws coagw/ara )、火山爛芽月包牙干菌 (B(3C!f〃船/at^w)、；也衣芽孑包寺干菌(5acz'〃uy //c/^mybnm》)、巨大芽月包4干菌 (j8ac/〃ws wegafen'ww )、 口耆^!月旨肪芽孑包才干菌(5acz7/ws WearaAermqp/n./ws )、才古草芽孑包桿菌(5腦'〃m s由/to )以及蘇云金芽孑包桿菌(5ac/〃m Aw/"g7'era^ ))，或者鏈霉菌細胞(例如，淺青紫鏈霉菌(&^ tow_ycay //vW ra)或鼠灰鏈霉菌 (Streptomyces murinus ))，或者革蘭氏陰性菌(例如大腸桿菌(Co//)和假單胞菌(/^wdowoway))。細菌宿主細胞的轉(zhuǎn)化可以例如通過原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化、通過使用感受態(tài)細胞、通過電穿孔或者通過融合法進行。宿主細胞可以是真菌細胞。這里使用的"真菌"包括子嚢菌門(p /aAsco，coto )、 擔子菌門(5ayWomyc她)、壺菌門(C7z，Wo，cota )和結(jié)合菌門(Zygomycoto)以及卵菌門(O m;;coto)和所有的有絲分裂孢子真菌 (m/tos; w/c/,g/)。子嚢菌門的代表性組包括，如，脈孢菌屬(A^wos^ora)、正青霉菌屬(五w/ ew/cz'〃/wm )(=青霉菌屬(Pe"/c/〃/ww ))、翹孑包霉屬(五wen.ce〃a ) (=曲霉(Apwg"/us))、散嚢菌(五wra"ww )(=曲霉(爿印erg/〃w))以及下面列出的真正酵母。真菌宿主細胞也可以是酵母細胞。這里所用的"酵母"包括產(chǎn)子嚢酵母(asms/ orag^wot _yeost)(內(nèi)孑包霉科(^c/cw^ceta/es ))、擔子孑包子開j成酵母(6asyeosf)以及屬于半知菌門(Fw"g"m/ ^/k^/) (芽孢綱(說oytom;;ceto))的酵母。用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基可以是任何適宜 生長哺乳動物細胞的常規(guī)培養(yǎng)基(例如含有適當?shù)奶砑游锏暮迮囵B(yǎng)基或無 血清培養(yǎng)基)，或者是用于生長昆蟲細胞、酵母細胞或真菌細胞的合適培養(yǎng)基。典型微生物菌種保藏中心的目錄)。然后通過常規(guī)方法從培養(yǎng)基中回收由細胞生產(chǎn)的本發(fā)明的肽，所述方法包 括通過離心或過濾從培養(yǎng)基中分離宿主細胞，用鹽例如硫S臾銨沉淀上清液或濾 液的蛋白組分，通過各種色譜法例如離子交換色譜、親和色譜等純化。因此，本發(fā)明涉及用于制備根據(jù)本發(fā)明的肽的方法，所述方法用重組DNA 技術，其包括如下步驟(a)將編碼所述肽的核酸序列轉(zhuǎn)入到宿主細胞中，和 (b)培養(yǎng)所述宿主細胞，和(c)從所述培養(yǎng)物中分離所述肽；或者，(a)在 允許所述肽生產(chǎn)的條件下，培養(yǎng)含有編碼所述肽的核酸序列的重組宿主細胞， 和(b)從所述培養(yǎng)物中分離所述肽。^途本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的肽在醫(yī)藥領域的用途，特別是與 一種或多種上 面或者下面提到的病況、不適或疾病有關的用途。在一個實施方式中，本發(fā)明涉及一種或多種根據(jù)本發(fā)明的肽用于制備藥物 組合物的用途，所述藥物組合物用于治療或預防哺乳動物的一個或多個器官的 組織的病況。所述器官選自但不限于由下述所組成的組中腎、肝、腦、心臟、 肌肉、骨髓、皮膚、骨骼、肺、呼吸道、脾、外分泌腺、膀胱、內(nèi)分泌腺、包 括輸卵管的生殖器官、眼、耳、血管系統(tǒng)、包括小腸、結(jié)腸、直腸及肛管的胃 腸道和前列腺。如上所述，與a-MSH相比，本發(fā)明的肽顯示出提高的抗炎效果以及提高 的防止局部缺血病況的能力。因此，本發(fā)明涉及一種或多種根據(jù)本發(fā)明的肽用于制備藥物組合物的用 途，所述藥物組合物用于治療或預防哺乳動物的一個或多個器官的組織的病 況，其中所述病況是局部缺血或炎癥病況。所述病況還可以是歸因于毒素或藥 物誘導的細胞、組織或器官的衰竭。在本說明書和權(quán)利要求中，如果上下文沒有特別地排除這種解釋，術語"治 療，，通常包括已有病況的治療以及這種病況的預防(預防性治療)。在最寬的方面，本發(fā)明涉及任何病況其中器官或組織的正常功能由于局部 缺血或炎癥而改變。損傷可以包括急性和/或慢性損傷。慢性損傷包括處于器 官或組織的完全或部分^"炎復期間的重復損傷的情形。在本說明書和權(quán)利要求中，局部缺血定義為對一個或多個器官降低的血流 量，導致組織降低的氧輸送和/或利用。局部缺血可以發(fā)生在一個或多個器官中，所述器官包括(非完全列表(non-listing list)):腦、心臟、四肢、腎、脾、 肝、腸、胃、肺、目艮、皮膚、肌肉、胰、內(nèi)分泌器官以及其他。通過降低的/完全的阻止動脈血供給，局部缺血誘導許多組織反應包括嗜 中性粒細胞累積、其他炎癥反應和細胞死亡。局部缺血涉及許多疾病，其與大 外科(major surgery)相關并且繼發(fā)于其他重癥疾病。鑒定能夠抑制或預防(完 全地或部分地)許多作為局部缺血的結(jié)果而發(fā)生的細胞/組織/器官損傷或破壞 的化合物是非常有益的。進行治療的病況能夠歸因于組織的局部缺血或者由組織的局部缺血所產(chǎn) 生，例如動脈狹窄癥或者任何其他完全的或部分的血供給限制。局部缺血可以 是急性的或者慢性的，這依賴于疾病的嚴重程度，此外，所述病況可以是可逆血壓下降。因此，進行治療的病況可以是任何系統(tǒng)血流量的降低例如低血壓， 其將影響對腸、心臟、腎或任何其他器官的系統(tǒng)血流量。在一個實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽用于制備用于治療局部缺 血的藥物組合物的用途，其中所述病況是由急性、亞急性或慢性的局部缺血引 起的。器官或四肢或組織的急性、亞急性或慢性的局部缺血可以由許多疾病引 起。其包括(非完全列表)具有血栓形成的動脈粥樣化疾病、來自心臟或者來 自血管或者來自任何器官的栓塞、痙攣、其他器官的主動脈瘤或動脈瘤、胸或 腹或壁間動脈瘤、歸因于心臟病的低血壓、歸因于系統(tǒng)性疾病(包括傳染病或 過敏反應)的低血壓、歸因于一個或多個毒性化合物或毒藥或藥物的低血壓。在第二實施方式中，本發(fā)明沙. 血的藥物組合物的用途，其中所述病況是由繼發(fā)性局部缺血引起的。繼發(fā)于疾病或病況的局部缺血能夠在一種或多種選自如下的疾病和病況中觀察到糖尿病、高脂血癥、閉塞性血栓血管炎(伯格氏病)、高安氏綜合征、 一過性動脈炎、皮膚粘膜淋巴結(jié)綜合征(川崎氏病)、心血管梅毒、如雷 諾氏病的結(jié)締組織疾病、藍色靜脈炎、血管創(chuàng)傷(包括醫(yī)源性創(chuàng)傷例如套管插 入術或手術或器官移植)。此外，該列表包括由一個或多個器官手術、 一個或 多個器官移植、手術插入移植、裝置、移植物、假肢或其他生物醫(yī)學化合物或 設備引起的局部缺血。在第三實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽的用途，其中所述病況是 由歸因于敗血癥休克的局部缺血或與系統(tǒng)性低血壓相關的病況引起的。術語"炎癥癥狀，，在本文中是指一種病況，在所述病況中例如特異性T質(zhì)的募集。在一些情況下，器官或組織的正常功能由于血管浸潤性的增加和/ 或內(nèi)臟平滑肌的收縮而改變。這種炎癥病況會產(chǎn)生炎癥疾病。在一個實施方式中，本發(fā)明涉及一種或多種根據(jù)本發(fā)明的肽用于制備藥物 組合物的用途，所述藥物組合物用于治療或預防哺乳動物的一個或多個器官的 組織的病況，其中所述病況是炎癥病況。炎癥病況可以由炎癥疾病引起，其包括(非完全列表)關節(jié)炎(包括與 關節(jié)炎有關的疾病)、骨關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎；脊柱關節(jié)病(例如強直性 脊柱炎)、反應性關節(jié)炎(包括風濕熱之后的關節(jié)炎)、過敏性紫癜和Reiter 病。此外，炎性疾病包括結(jié)締組織疾病例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多肌炎/皮膚肌 炎、系統(tǒng)性硬化、混合型結(jié)締組織病、肉狀瘤病和原發(fā)性舍格倫綜合征(包括 干燥性角膜結(jié)膜炎)、風濕性多肌痛、和其他類型的血管炎、結(jié)晶沉積癥(包 括痛風)、焦磷酸性關節(jié)病、急性鈣化性關節(jié)周圍炎。此外，炎性疾病包括幼 年型關節(jié)炎(斯提耳氏病)、牛皮癬、骨關節(jié)炎、繼發(fā)于過度移動癥的骨關節(jié) 炎、先天性發(fā)育不良、股骨頭骺松脫、派爾特斯病(Perthes'disease )、關節(jié)內(nèi) 骨折、半月板切除術、肥胖癥、復發(fā)性脫位、重復性動作、結(jié)晶沉積癥和軟骨代謝異常癥(包括焦磷酸性關節(jié)病)、褐黃病、血色素沉積癥、缺血性壞死(包 括鐮刀型細胞病)、用腎上腺皮質(zhì)激素或其他藥物的治療法、減壓病、敗血性 或感染性關節(jié)炎(包括結(jié)核性關節(jié)炎、腦膜炎雙球菌性關節(jié)炎、淋菌性關節(jié)炎、 沙門氏菌性關節(jié)炎)、感染性心內(nèi)膜炎(包括由綠色鏈球菌、糞腸球菌、金黃 色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、組織胞漿菌屬、布魯氏菌屬、念珠菌屬、曲霉屬和貝鈉氏考克期體(Coxiella burnetii)引起的心內(nèi)膜炎)、病毒性關節(jié)炎(包 括感染有風疹、流行性腮腺炎、乙型肝炎、HIV或細小病毒)，或再發(fā)性關節(jié) 血腫。此外，炎癥疾病包括血管炎例如歸因于感染有細菌的感染性血管炎，包 括螺旋體疾病如拉姆病、梅毒、立克次氏體和分枝桿菌感染、真菌、病毒或原 蟲感染。此外，炎癥疾病包括非感染性血管炎，包括高安氏病、巨細胞性動脈 炎(一過性動脈炎和風濕性多肌痛)、伯格氏病、結(jié)節(jié)性多動脈炎、顯微鏡下 多動脈炎、韋才各納肉芽腫、變應性肉芽腫性血管炎(Churg-Strauss綜合征)、 繼發(fā)于結(jié)締組織疾病的血管炎包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多肌炎/皮膚肌炎、系統(tǒng) 性硬化、混合型結(jié)締組織病、肉狀瘤病和原發(fā)性舍格倫綜合征。此外，炎癥疾 病包括繼發(fā)于風濕性關節(jié)炎的血管炎。此外，炎癥疾病包括繼發(fā)于過敏癥的非感染性血管炎和白細胞增多性血管 炎包括血清病、過敏性紫癜、藥物誘導的血管炎、特發(fā)性混合性冷球蛋白血癥、 低補體血癥、與其他惡性胂瘤聯(lián)發(fā)的血管炎、炎癥性腸病、原發(fā)性膽汁性肝硬 化、肺出血腎炎綜合;f正(古德帕斯丘綜合4正Goodpasture syndrome )。此外，炎癥疾病包括所有類型的兒童關節(jié)炎，例如幼年型關節(jié)炎包括斯提 耳氏病，幼年型類風濕關節(jié)、幼年型強直性脊柱炎。此外，炎癥疾病包括上氣道病和下氣道病例如慢性阻塞性肺病(COPD)、 變應性氣喘和非變應性氣喘、變應性鼻炎、過敏性和非過敏性結(jié)膜炎。此外， 炎性疾病還包括過敏性或非過敏性皮炎。此外炎癥疾病包括所有類型的沉積病，如痛風、焦磷酸性關節(jié)病、急性鈣 化性關節(jié)周圍炎。此外炎癥疾病所有類型的產(chǎn)生背痛的炎癥病況包括感染、敗血性關節(jié)盤 炎、結(jié)核病、惡性腫瘤(例如轉(zhuǎn)移性肝腫瘤、骨髓瘤以及其他)、脊柱腫瘤、 強直性脊柱炎、急性盤間突出、慢性盤間疾病/骨關節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、軟骨病。它還包括變形性骨炎、曱狀旁腺機能亢進、腎病性骨營養(yǎng)不良、脊推前移、 錐管狹窄癥先天性異常和纖維肌痛。此外炎癥疾病包括所有類型的軟組織風濕病包括滑嚢炎、腱鞘炎或腱膜 炎、肌腱末端炎、神經(jīng)擠壓癥、關節(jié)周炎或嚢炎、肌肉緊張和肌肉功能失調(diào)。此外炎癥疾病包括胃腸道系統(tǒng)的炎癥疾病(包括所有類型的胃炎、天皰瘡、 大皰類天皰疳、良性粘膜性類天皰瘡)、唾液腺疾病(例如肉狀瘤病、唾液管 堵塞和舍格倫綜合征)、食道炎癥(例如胃食管反流性疾病或感染有念珠菌屬 物種、單純性皰滲和巨細胞病毒)、胃的炎癥疾病(包括急性和慢性胃炎、幽 門螺桿菌感染、肥大性胃炎)、小腸的炎癥(包括腹腔病、麩質(zhì)過敏性腸病、 皰瘆樣皮炎、熱帶性腹瀉、惠普爾病、放射性腸炎、系統(tǒng)性淀粉樣變病、結(jié)締 組織疾病包括系統(tǒng)性紅斑狼癡、多肌炎/皮膚肌炎、系統(tǒng)性硬化、混合型結(jié)締 組織病和肉狀瘤病)、嗜酸性胃腸炎、小腸淋巴管擴張癥、炎癥性腸病(包4舌 克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎)、結(jié)腸憩室病、和腸易激綜合征。在優(yōu)選的實施方式，本發(fā)明涉及一種或多種根據(jù)本發(fā)明的肽用于制備藥物 組合物的用途，所述藥物組合物用于治療或預防哺乳動物的一個或多個器官的 組織的病況，其中所述病況是選自肺炎、關節(jié)炎、皮炎、胰腺炎和炎癥性腸病 的炎癥病況。if參謬爭W敘應、逾織斧器 竭在一個實施方式，本發(fā)明涉及一種或多種根據(jù)本發(fā)明的肽用于制備藥物組 合物的用途，所述藥物組合物用于治療或預防毒素或藥物誘導的細胞、組織或 器官衰竭。在本說明書和權(quán)利要求中，"藥物誘導的細胞、組織或器官衰竭"定義為 由藥理學化合物誘導的細胞或組織功能和/或形態(tài)上的變化。所述藥理學化合物包括但不限于癌化療藥包括順鉑、卡鉑、達卡巴嗪(dacarbezine)、丙卡巴 肼、六甲基蜜胺、司莫司汀、洛莫司汀、卡莫司汀、白消安、噻替哌、美法侖、 環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、二氯甲基二乙胺、阿扎胞苷、克拉曲濱、阿糖胞苷、 氟拉達濱、巰嘌呤、曱氨碟呤、硫鳥嘌呤、別噤呤醇、博來霉素、更生霉素、 正定霉素、多烯紫杉醇、阿霉素(亞德里亞酶素)、足葉乙甙、伊達比星、伊 立替康、絲裂霉素、紫杉醇、普卡霉素、拓樸替康、長春花4^、長春新堿、長春瑞賓、阿瑪薩克瑞恩(amasacrine)、天門冬酰胺酶、羥基脲、咪替他恩 (mititane)、米托蒽醌；如氨基糖苷類的抗生素包括鏈霉素、新霉素、卡那霉 素、丁胺卡那霉素、慶大霉素、托普霉素、西索米星、奈替米星；免疫抑制化 合物如環(huán)孢霉素、三環(huán)類抗抑郁藥、鋰鹽、普尼拉明和吩漆。秦類衍生物。其中細胞、組織或器官的正常功能已經(jīng)被改變的病況包括與如下疾病相關 的病況局部缺血、急性和/或慢性炎癥、過敏性反應、風濕病、感染(包括 病毒、真菌、細菌感染)、蛋白感染素和其他微生物和本領域熟知的其他感染 性制劑、所有形式的毒性反應(包括藥物誘導的毒性)、和急性與慢性損傷。 慢性損傷包括隨器官或組織功能的完全或部分復原的時間變化的重復性損傷 的情形。其中細胞、組織或器官的正常功能已改變的病況包括損傷，其與一個 或多個器官或者用于移植的其他裝置的植入相關，并且可以預期本發(fā)明的肽也 將在所述病況的治療或預防中有用。所述器官可以來源于個體自身、動物體自 身或者來源于其他個體或動物。這包括器官移植、骨移植、軟組織植入(硅 酮植入)、金屬和塑料植入，或者其他醫(yī)學上可移植的裝置。所述個體代表人 以及其他哺乳動物。進行治療的病況也可以是由癌癥或者由具有對器官(例如對呼吸系統(tǒng)包括 肺、細支氣管、上氣道，和/或?qū)π呐K和/或?qū)δI和/或?qū)ξ改c系統(tǒng))影響的癌前 病變引起的，包括急性白血病、慢性粒細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、霍 奇金病、淋巴肉瘤、骨髓瘤、任何病原的轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤。可以預期本發(fā)明的 肽也將在所述病況的治療或預防中有用。此外，進行治療的病況也可以是由任何一種選自如下的疾病引起的糖尿 病、具有提高的空腹LDL-膽固醇水平的病況、具有組合提高的空腹LDL-膽固 醇和甘油三酯水平的病況、具有提高的空腹甘油三酯水平的病況、具有提高的空腹HDL-膽固醇水平的病況、腹膜后纖維化、紅斑狼瘡、多結(jié)性動脈炎、硬 皮病、多發(fā)性肌炎、皮肌炎、風濕性關節(jié)炎、過敏癥、血清病、溶血性貧血和 過敏性粒細胞缺乏癥?？梢灶A期本發(fā)明的肽也將在所述病況的治療或預防中有 用。許多導致性能降低的感染可能具有對組織的影響作用并且干擾正常的功 能，其可以通過給予有效劑量的本發(fā)明的肽來進行改善。這些感染包括原生動物、病毒、細菌和真菌感染，以及包括病況例如AIDS、細菌性敗血癥、系統(tǒng) 性真菌感染、立克次體病、中毒性休克綜合征、感染性單核細胞增多癥、沙眼 衣原體、鸚鵝熱衣原體、巨細胞病毒感染、弧形桿菌、沙門氏菌、流感、脊髓 灰質(zhì)炎、弓形蟲病、拉沙熱病、黃熱病、血吸蟲病、大腸桿菌、腸球菌、變形桿菌(preteus)、克雷伯氏菌屬、假單胞菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、 白色念珠菌、結(jié)核病、腮腺炎、感染性單核細胞增多癥、肝炎和柯薩奇病毒。 進行治療的病況可以與涉及一種或多種毒性物質(zhì)和/或藥物的化學外傷有 關。這些藥物包括三環(huán)類抗抑郁藥、鋰鹽、普尼拉明和吩噻嗪類衍生物，癌癥 化療藥包括順鉑、卡鉑、達卡巴嗪(dacarbezine)、丙卡巴肼、六甲基蜜胺、 司莫司汀、洛莫司汀、卡莫司汀、白消安、噻替哌、美法侖、環(huán)磷酰胺、苯丁 酸氮芥、二氯曱基二乙胺、阿扎胞苷、克拉曲濱、阿糖胞苷、氟拉達濱、巰嘌 呤、曱氨碟呤、硫鳥嘌呤、別嘌呤醇、博來霉素、更生霉素、正定霉素、多烯 紫杉醇、阿霉素((亞德里亞酶素)、足葉乙甙、伊達比星、伊立替康、絲裂霉 素、紫杉醇、普卡霉素、拓樸替康、長春花堿、長春新堿、長春瑞賓、amasacrine、 天門冬酰胺酶、羥基脲、mititane、米托蒽醌；如氨基糖苷類的抗生素包括鏈 霉素、新霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、慶大霉素、托普霉素、西索米星、 奈替米星；免疫抑制化合物如環(huán)孢霉素。物理外傷包括電磁輻射也可以引起損 傷，能夠通過施用有效劑量的根據(jù)本發(fā)明的a -MSH類似物使其減輕。紅斑狼癡，或者神經(jīng)肌病，例如杜興(Duchenne)型進行性肌營養(yǎng)不良癥、弗 里德賴希(Friedreich)共濟失調(diào)、肌強直性營養(yǎng)不良。所述病況可以例如涉及 哺乳動物腸的組織。本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽的用途，其中所述病況選自由如下所組成的組 中心肌缺血、心絞痛、心包炎、心肌梗塞、心肌缺血、心肌炎、粘液性水腫 (myxodemia)、心內(nèi)膜炎。在一個實施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽的用途，其中所述病況與 心律失常相關。本發(fā)明還涉及用于治療或預防在其需要的哺乳動物個體的一個或多個器官的組織的病況的方法，所述方法包括給予有效劑量的 一種或多種根據(jù)本發(fā)明 的肽。所述病況可以是局部缺血癥狀或炎癥病況和/或來自中毒或藥物治療的 毒性作用的結(jié)果。對由任何一種器官或脈管移植產(chǎn)生的或與之相關的病況，包括防止移植物 對宿主的反應，本發(fā)明的治療方法是特異有效的。在這些病況中，整個器官對 關于營養(yǎng)、代謝、灌注等的所有變化極度敏感，并且我們相信，根據(jù)本發(fā)明的 治療能穩(wěn)定所述病況并且使所述組織對任何壓迫器官的功能的情形更有抗性。 根據(jù)本發(fā)明的方法還包括在移植到受體的過程中給予器官移植物有效劑量的 本發(fā)明的肽，包括添加有效劑量的本發(fā)明的肽到移植基質(zhì)中。此外，本申請?zhí)峁┝俗C據(jù)，在重度疾病(例如心肌缺血)中用根據(jù)本發(fā)明的a-MSH類似物治療顯著地防止了死亡以及器官功能失調(diào)。最常見的心臟病況之一是間歇性心絞痛或胸痛，其中根據(jù)本發(fā)明的治療是 特異有效的。涉及心絞痛的病況包括不穩(wěn)性心絞痛、穩(wěn)定性心絞痛和Prinzmetal 變異型心絞痛。在另一方面，可以在由心包炎、心肌梗塞、心月幾缺血、心月幾炎、myxodemia、 心內(nèi)膜炎引起的情形中利用所述預防和治療。進行治療的病況可以與心律失常相關，其或者是原發(fā)性疾病或者是繼發(fā)于 個體的另一病況。心律失常的各種原因的實例包括急性感染(特別是那些影響 肺的急性感染)、肺栓塞、低血壓、中風、血液缺氧癥或者能夠加速心肌缺血 并且從而引起心律失常的貧血癥。心律失常會惡化循環(huán)障礙并且從而建立起錯 誤的、能使自身永久存在的循環(huán)。我們相信，根據(jù)本發(fā)明的治療將增加用于發(fā)展心律失常的閾值，從而防止 心律失常的發(fā)展。通過直接地對輸送系統(tǒng)作用或者間接地通過對引導或者是心 律失常的原因的病況進行作用可以實現(xiàn)所述效果。能夠根據(jù)本發(fā)明方法減輕的綜合癥或者心律失?？梢允窃l(fā)性的或者是 繼發(fā)性的，可以選自室性快速性心律失?；蛏鲜倚钥焖傩孕穆墒С?、房室傳 導阻滯、竇房結(jié)疾病、Wolff-Parkinson-White綜合癥、Len6gres疾病、Lev疾 病以及任何涉及心房和心室之間不正常心肌連接的綜合癥。旨在抑制心律失常的抗心律失常治療法常常伴隨有產(chǎn)生新的心律失常的危險。心律失?？梢宰鳛闅w因于超劑量藥物毒性反應發(fā)生。然而，尤其是在用 被稱為IA類藥物的藥物組治療的過程中，心律失?？梢宰鳛榉莿┝恳蕾嚨母?作用(特異質(zhì)反應-在藥物濃度在有效藥濃度范圍內(nèi)的情況下發(fā)展)發(fā)生。根 據(jù)另一實施方式，病況可以是由一種或多種抗心律失常藥物引起的，包括洋地黃、奎尼丁、丙吡胺、腺苷、阿普林定、氟卡尼、胺碘酮、索他洛爾、美西律、 (3-阻滯劑、維」粒帕米?？梢灶A期用根據(jù)本發(fā)明的a-MSH類似物進行治療將降低發(fā)展心律失常 的危險，心律失常是由于用其他抗心律失常藥物的伴生治療而產(chǎn)生的。在本發(fā)明的另 一方面，病況可以是特征為 一個或多個通過心電圖掃描法 (ECG)測量的異常。ECG上的異?？梢陨婕斑x自一個或多個選自如下構(gòu)型 改變的變化P波、ST片4殳、T波、QRS復合波、Q波、△波和U波?？梢酝ㄟ^給予有效劑量的根據(jù)本發(fā)明的肽減輕的其他病況是器官(例如心 臟)電解質(zhì)混亂以及自身混亂，包括一種離子對另一種離子的相對濃度的異常。 該病況包括一種或多種電解質(zhì)的異常血清濃度，所述電解質(zhì)選自如下所組成的 組中鉀、鉤、鈉和4美。根據(jù)本發(fā)明，可以被影響的組織包括存在于器官的一個或多個細胞類型， 可以選自上皮細胞、巨噬細胞、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)單核細胞、嗜中性粒細胞、嗜 酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、T-細胞、B-細胞、肥大細胞、樹突狀細胞。尤其 是，T-細胞、B-細胞和肥大細胞在這一方面是有特別意義的。本發(fā)明的優(yōu)選的方面涉及預防或治療，其中預防性地給予根據(jù)本發(fā)明的oc -MSH類似物的劑量用于防止病況或者病況的任何征兆的發(fā)展。預防的或預防性的治療可以是在例如手術過程中正在進行的治療或者是 用于防止患冠狀動脈狹窄的患者的心臟病發(fā)作。預防治療還可以用于短時期。 本領域技術人員能夠基于緊急情況評價具體的治療程序。在優(yōu)選的實施方式， 所述治療或預防能夠減小局部缺血冠狀動脈的梗塞面積。與未治療的個體相 比，這種梗塞面積可以減小20%，例如至少30°/。，優(yōu)選地至少50%。因此，預防性地給予根據(jù)本發(fā)明的a -MSH類似物的劑量用于防止病況或 者病況的任何征兆的建立。才艮據(jù)本發(fā)明的a-MSH類似物的劑量可以作為單劑量、規(guī)則的或者連續(xù)的給藥，或者作為順序的給藥而進行^^予。給藥可以是全身性給藥、局部給藥包括藥物靶系統(tǒng)的應用、導管和植入、 口服給藥、腸胃外給藥，例如皮下給藥、肌內(nèi)注射、靜脈注射、腹腔注射、鞘 內(nèi)注射、肺部給藥例如通過吸入、外用、粘膜給藥、經(jīng)皮給藥。因此，給藥包括全身性給藥；注射到組織或者到體腔內(nèi)包括關節(jié)；植入到 組織或者到體腔內(nèi)；外用到皮膚或者到任何胃腸表面，或者到粘膜表面包括體 腔襯里。因為從上面可以很明顯地看出，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的肽用于制備藥物的用途，所述藥物通過任何一種相關的給藥途徑用于治療或預防本文所公開的 ^壬^可一種病況。秀參備賴合參本發(fā)明還涉及包括一種或多種根據(jù)本發(fā)明的肽的藥物組合物。所述藥物組 合物還可以包括一種或多種藥物載體。進一步，所述藥物組合物還可以包括一 種或多種藥學可接受的賦形劑。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以是，但不限于腸胃外組合物、口服組合物、 外用組合物、經(jīng)粘膜組合物或者經(jīng)皮組合物。在以下實施例中，給出了含有一種或多種根據(jù)本發(fā)明的肽的合適的組合 物。對于給個體(動物或人)給藥，物質(zhì)優(yōu)選制成藥物組合物，其含有所述物 質(zhì)以及任選的 一種或多種藥學可接受的賦形劑。組合物可以以例如固態(tài)、半固態(tài)或流體組合物的形式存在比如，例如但不 限于，可生物吸收片、浸濕物、敷料、水凝膠敷料、水狀膠體敷料、薄膜、泡 沫、薄片、繃帶、膏藥、輸送裝置、植入物、粉劑、顆粒、小顆粒、膠嚢、瓊 脂糖或脫乙酰殼多糖珠、片劑、丸劑、小球、微膠嚢、微球、納米顆粒、噴灑 劑、氣霧劑、吸入裝置、凝膠、水凝膠、糊劑、軟膏、乳膏、皂、栓劑、維吉 托瑞(vagitorie)牙膏、溶液、分散液、懸浮液、乳狀液、混合物、洗液、漱 口液、洗發(fā)精、灌腸劑、試劑盒，所述試劑盒包含例如兩個分開的容器，第一 個容器含有根據(jù)本發(fā)明的肽，第二個容器含有適當?shù)慕橘|(zhì)以備在使用前加入到 第一個容器以獲得待用的組合物；以及其他一些合適的形式，例如植入物或植 入物涂層或一種適合于植入和移植條件下使用的形式。組合物可以通過常規(guī)的制藥方法進行制備，參見例如"Remington:藥劑學 的牙牛學和實踐(The science and practice of pharmacy)"第二片反.Mack Publishing, Easton PA, 2000 ISBN 0-912734-04-3"和"制藥技術百科全書(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology ) ", Swarbrick, J. & J. C編輯.Boylan， Marcel Dekker, Inc., New York, 1988 ISBN 0-8247- 2800-9.含有活性物質(zhì)的藥物組合物用作藥物輸送系統(tǒng)。在本文中術語"藥物輸送 系統(tǒng)"表示一種藥物組合物(藥物制劑或劑型)，其在給藥時代表對人體或動 物體的活性物質(zhì)。因此，術語"藥物輸送系統(tǒng)"包含普通的藥物組合物例如乳 膏、軟膏、液體、粉末、片劑等，以及更復雜的劑型例如噴霧劑、膏藥、繃帶、 敷料、裝置等。如上所述，用于根據(jù)本發(fā)明的用途的藥物組合物可以包括藥學或美容學可 接受的賦形劑。在用于根據(jù)本發(fā)明的用途的組合物中，藥學可接受的賦形劑的選擇及其最 佳濃度一般不能預知，需要基于其實驗測定進行確定。 一種藥學可接受的賦形 劑是否適合用于藥物組合物中一般還依賴于所選擇的劑型的類型。然而，制藥 領域的普通技術人員能夠在"Remington: The science and practice of pharmacy" 第二版.Mack Publishing, Easton PA, 2000 ISBN 0-912734-04-3 ，，找到指導。藥學可接受的賦形劑是對組合物將要給予的個體基本無害的物質(zhì)。這種賦 形劑通常要滿足藥品管理部門頒布的要求。官方藥典例如英國藥典、美國藥典 和歐洲藥典都規(guī)定了公知的藥學可接受的賦形劑的標準。以下給出了用于根據(jù)本發(fā)明的用途的相關的藥物組合物的綜述。該綜述是 基于特定的給藥途徑。然而，應理解的是，在那些藥學可接受的賦形劑可以不 同的劑型或組合使用的情形下，特定的藥學可接受的賦形劑的應用并不限于特 定劑型或該賦形劑的特定功能。濕f獨合參對于全身性應用，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以含有常規(guī)的無毒性的藥學可接 受的載體和賦形劑，包括微球和脂質(zhì)體。才艮據(jù)本發(fā)明使用的組合物包括所有形式的固態(tài)、半固態(tài)和流體組合物。特 定相關的組合物是，例如溶液、懸浮夜、乳液、凝膠、植入片以及植入物。藥學可接受的賦形劑可以包括，溶劑、緩沖劑、防腐劑、濕潤劑、鰲合劑、 抗氧化劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、懸浮劑、膠凝劑、稀釋劑、崩解劑、粘合劑、潤 滑劑以及潤濕劑。不同試劑的實例參考如下。^命逾合務、經(jīng);^疑逾^參"及經(jīng)發(fā)遂合務對于對粘膜或皮膚的應用。用于根據(jù)本發(fā)明的用途的組合物可以含有通常 無毒的藥學可接受的載體和賦形劑，包括微球和脂質(zhì)體。用于根據(jù)本發(fā)明的用途的組合物包括所有形式的固態(tài)、半固態(tài)和流體組合 物。特定相關的組合物是，例如，糊劑、軟膏、親水軟膏、乳膏、凝膠、水凝膠、溶液、乳液、懸浮夜、洗劑、擦劑、里索瑞布賴特(resoriblet)、栓劑、 灌腸劑、陰道栓劑、模制陰道栓劑、陰道膠嚢、陰道片劑、洗發(fā)劑、者哩、皂 劑、粘貼物、噴霧劑、粉劑、薄膜、泡沫、墊料、海綿(例如膠原海綿)、墊、 敷料(如，例如吸收性傷口敷料)、浸濕劑、繃帶、膏藥以及經(jīng)皮輸送系統(tǒng)。藥學可接受的賦形劑可以包括溶劑、緩沖劑、防腐劑、濕潤劑、鰲合劑、 抗氧化劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、懸浮劑、膠凝劑、軟膏基質(zhì)、才全劑基質(zhì)、浸潤增 強劑、香料、皮膚保護劑、稀釋劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑以及潤濕劑。不 同試劑的實例參考如下。對于對粘膜或皮膚的應用。用于根據(jù)本發(fā)明的用途的組合物可以含有通常 無毒的藥學可接受的載體和賦形劑，包括微球和脂質(zhì)體。用于根據(jù)本發(fā)明的用途的組合物包括所有類型的固態(tài)、半固態(tài)和液態(tài)組合 物。特定相關的組合物是例如溶液、懸浮液、乳液、棵片、控釋片、腸溶片、 口分散片、泡騰片、咀嚼片、軟膠嚢、硬膠嚢、控釋膠嚢、腸溶膠嚢、棵顆粒、 泡騰顆粒、用于制備口服使用的液體的顆粒、包膜顆粒、腸溶顆粒、控釋顆粒、 用于口服給藥的粉劑以及用于制備口服使用的液體的粉劑。藥學可接受的賦形劑可以包括溶劑、緩沖劑、防腐劑、濕潤劑、鰲合劑、 抗氧化劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、懸浮劑、膠凝劑、稀釋劑、崩解劑、粘合劑、潤 滑劑以及潤濕劑。不同試劑的實例參考如下。冬賴，頻溶劑的實例是但不限于水、酒精、植物油或魚油，(例如，食用油，如杏仁油、蓖麻油、可可油、椰子油、玉米油、棉籽油、亞麻子油、橄欖油、棕櫚 油、花生油、嬰粟籽油、菜籽油、芝麻油、大豆油、向日葵油、以及茶子油)、 礦物油、脂肪油、液體石蠟、聚乙二醇、丙二醇、甘油、液體聚烷基硅氧烷， 和其混合物。緩沖劑的實例是但不限于檸檬酸、乙酸、酒石酸、乳酸、磷酸、二乙胺等。 用于組合物的防腐劑的實例是但不限于對羥基苯曱酸酯類(例如對羥基苯 曱酸曱酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯曱酸丁酯、對羥 基苯曱酸異丁酯、對羥基苯曱酸異丙酯)、山梨酸鉀、山梨酸、苯曱酸、苯曱酸曱酯、苯氧乙醇、溴硝丙二醇、布洛尼道克斯(bronidox )、 MDM海因(MDM hydantoin)、碘代丙炔基丁基氨基曱酸酯、乙二胺四乙酸(EDTA )、苯扎氯銨 和苯曱醇，或者防腐劑混合物。濕潤劑的實例是但不限于甘油、丙二醇、山梨醇、乳酸、脲，和相應的混 合物。鰲合劑的實例是但不限于EDTA鈉鹽和檸檬酸?？寡趸瘎┑膶嵗堑幌抻诙』u基茴香醚(BHA)、抗壞血酸及其衍生 物、生育酴及其衍生物、半胱氨酸，以及其混合物。乳化劑的實例是但不限于天然存在的樹膠，例如阿拉伯樹膠或黃芪膠，天 然存在磷脂例如大豆卵磷脂；山梨糖醇酐單油酸酯衍生物；羊毛脂；羊毛脂醇； 山梨糖酯；單甘油酯；脂肪醇；脂肪酸酯(例如脂肪酸的甘油三酸酯)；及其 混合物。懸浮劑的實例是^f旦不限于纖維素以及纖維素衍生物，例如羧曱基纖維素、 羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基曱基纖維素，角叉菜膠、阿拉伯樹膠、 阿拉伯膠、黃芙膠，以及它們的混合物。凝膠基質(zhì)以及粘性增強劑的實例是但不限于液體石蠟、聚乙烯、脂肪油、 膠體二氧化硅或膠體鋁、鋅皂、甘油、丙二醇、黃芪膠、羧乙烯基聚合物、硅 酸鎂鋁、聚羧乙烯(Carbopol )、親水性聚合物，例如淀粉或纖維素衍生物例 如羧曱基纖維素、羥乙基纖維素，以及其他纖維素衍生物，水溶脹性水解膠體、 角叉菜膠、透明質(zhì)酸鹽(例如任選地含有氯化鈉的透明質(zhì)酸凝膠)，和海藻酸 鹽(包括丙二醇海藻酸鹽)。軟膏基質(zhì)的實例是但不限于蜂蠟、石蠟、鯨蠟醇、鯨蠟醇十六酸酯、植物油、失水山梨糖醇脂肪酸酯(斯潘Span)、聚乙二醇、以及失水山梨糖醇脂肪 酸酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚環(huán)氧乙烷失水山梨醇單油酸酯(吐溫 Tween X疏水性軟膏基質(zhì)的實例是但不限于石蠟、植物油、動物脂肪、合成甘油酯、 蠟、羊毛脂以及液體聚烷基硅氧烷。親水性軟膏基質(zhì)的實例是但不限于固態(tài)macrogols (聚乙二醇)。粉末組分的實例是但不限于海藻酸鹽、膠原、乳糖，當應用到傷口時能夠 形成凝膠的粉末(吸收液體/傷口滲出液)。稀釋劑以及崩解劑的實例是但不限于乳糖、蔗糖、淀粉-糖類復合物 (emdex)、磷酸鉤、碳酸鉀、硫酸4丐、甘露醇、淀粉以及微晶纖維素。粘合劑的實例是但不限于蔗糖、山梨醇、阿拉伯樹膠、海藻酸鈉、明膠、 淀粉、纖維素、羧曱基纖維素鈉、曱基纖維素、羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷 酮和聚乙二醇(Polyetyleneglycol )。潤濕劑的實例是但不限于十二烷基硫酸鈉和聚山梨酯80。潤滑劑的實例是但不限于滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、氧化硅、棕櫚酰硬 脂酰甘油酯(precirol)和聚乙二醇。包膜劑的實例是但不限于羥丙基纖維素、羥丙基曱基纖維素、聚乙烯吡咯 烷酮、乙基纖維素和聚甲基丙烯酸酯。栓劑基質(zhì)的實例是但不限于可可豆油、混合脂肪酸甘油酯以及聚乙二醇。a-MSH類似物可以以藥劑重量的0.001-99%的量存在于藥劑中，優(yōu)選為 0.01-75°/。，更優(yōu)選為0.1-20%,尤其是1-15%例如1-10%。劑量依賴于進行治療的病況。各種藥物可以在本領域熟知的劑量下使用。 可以預期的是， 一種或多種根據(jù)本發(fā)明的肽的劑量在lng-100mg/kg體重的范 圍，優(yōu)選為1 jag-10mg/kg體重，更優(yōu)選為10ng-lmg/kg體重，例如50-500 jag/kg體重。在另一方面，本發(fā)明涉及如上所述的藥物組合物，其包括一種或多種根據(jù) 本發(fā)明的肽以及任選藥學可接受的載體?？梢酝ㄟ^使用本領域熟知的常規(guī)技術和常規(guī)的藥學載體來制備根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物。此外，藥物組合物可以是適于本文所描述的任一用途的任意 形式。圍，因為這些實施方式是用來說明本發(fā)明的幾個方面的。任何等同實施方式都 在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實際上，除了本文已經(jīng)顯示和描述的那些修改之外，從上 述說明書本發(fā)明的各種修改對于本領域技術人員來說將變得顯而易見。這些修 改也落入后附的權(quán)利要求的范圍。本文引用了各種參考文獻，將其公開的內(nèi)容以它們整體的方式并入本文作 為參考。貫穿本說明書，單詞"包括"，或其變形例如"包括"或"包含"應當理 解為指含有指出的元素、整數(shù)或步驟，或者元素、整數(shù)或步驟的組，但并不排 除任何其他的元素、整數(shù)或步驟，或者元素、整數(shù)或步驟的組。理解的是，上述描述或提到的、與本發(fā)明的一個方面和/或一個方面的一個實 施方式相關的任一特征和特性通過類推也適于本發(fā)明所描述的任何或者所有 的其他方面和/或?qū)嵤┓绞?。以下將通過以下無限制作用的附圖和實施例來描述本發(fā)明。實施例以下概括描述了用于試驗本發(fā)明的肽的方法。試^驗過的肽的結(jié)果在實施例局部缺血、炎癥或藥物的毒性作用的結(jié)果而發(fā)生的細胞/組織/器官損傷或破壞 的能力。炎癥反應或者慢性炎癥的惡化的特征是細胞源性介質(zhì)(例如腫瘤壞死因子-a (TNF-cc )、白介素(IL-1 (3 、 IL-8 )、氧化氮(NO)和氧自由基)的生產(chǎn)， 這最終會誘導出分布廣泛的內(nèi)皮損傷，所述內(nèi)皮損傷具有全身脈管的動脈張力 損失、提高的毛細管浸潤性、持續(xù)的低血壓以及器官功能失調(diào)，其在肺中伴隨 有在肺泡腔內(nèi)的白細胞累積(包括嗜中性粒細胞和嗜酸性粒細胞)。通過誘導 包括TNF-oc的炎癥介質(zhì)，從感染物釋放出來的脂多糖(LPS)在對感染的炎 癥反應方面起重要作用。因此，具有抑制TNF-a生產(chǎn)能力的治療方法相信具有顯著的抗炎效果。發(fā)明人在許多方案中使用LPS刺激來產(chǎn)生炎癥反應(參見實驗方案1-3)，用于根據(jù)本發(fā)明的肽的抗炎效果的主要標記是抑制TNF-oc 生產(chǎn)的能力。通過降低的/完全的動脈血供給阻止誘導的局部缺血誘導許多組織反應， 包括嗜中性粒細胞累積、其他炎癥反應和細胞死亡。鑒定能夠抑制或預防(完 全地或部分地)作為局部缺血的結(jié)果而發(fā)生的多數(shù)細胞/組織/器官損傷或破壞 的化合物是非常有益的。發(fā)明人使用兩個一過性局部缺血模型l)大鼠的心 肌缺血再灌注模型，其模擬了后面是血供給恢復的急性心肌梗塞的發(fā)展，因為 它是通過纖維蛋白溶解療法或者冠狀血管成形術獲得的(實驗方案4); 2)雙 向腎動脈阻塞，其誘導急性腎衰竭(ARF)，其類似于在進行大外科介入治療 的患者中所見到的、由腎血液供給的瞬時減小誘導的ARF(由于腹主動脈瘤 實施例能夠進行手術介入治療)(實驗方案5 )。中毒性腎損害是順鉑治療的公知的副作用。盡管限制腎毒性的劑量不一定 仍然影響大多數(shù)患者，但是治療過程中觀察到腎小球浸潤率的明顯降低。順柏 的腎毒性可以看作對外髓層(尤其是近端小管的S3片段)和Henle環(huán)的升支 粗段的腎單位直接的細胞毒素損傷。因此，順鉑治療常常導致腎小管的重吸收 缺陷，包括損壞的稀釋尿的能力。在大約50%的以順鉑治療過的患者中觀察到 低血鎂癥，其很可能是由于腎的鎂(Mg)重吸收的缺陷。最近的研究表明補 充Mg是保護免于環(huán)孢菌素A的腎毒性作用的重要因素，并且最近已指出了 Mg損失和順鉑誘導的腎中毒之間的可能的關系。因此，旨在防止低血鎂癥的 治療具有有益的效果，不僅為了降低補充Mg的需要而且為了降低順鉑的腎毒 性。根據(jù)本發(fā)明的肽對于順鉑誘導的腎毒性在實驗方案6中檢驗。方法與材料在下面描述的方法中本發(fā)明的肽是實驗化合物。 實驗方案1抑制體外由人白細胞產(chǎn)生的LPS誘導的TNF-oc的產(chǎn)生 在含有EDTA的真空血液收集管(vacutainer tube)中收集20mL人血。 使用安瑪西亞說明書(Amersham， s Instruction ) 71-7167-00 AD, 2002-06的 菲科帕克+ (Ficoll-Paque Plus)來分離外周血單核細胞(PBMC)。使用臺盼蘭溶液(西格瑪(Sigma))對PBMC計數(shù)，并且以5 x 105細胞/mL的濃度將PBMC 溫育在RPMI 1640 (艾普力化學產(chǎn)品(Applichem))中，RPMI 1640添加有10 mM羥乙基膝。秦乙磺酸(Hepes) (Sigma)、 2 mM L-谷氨酰胺(Sigma)、 0.1% 牛血清白蛋白(BSA) (Sigma)和50 U/50 |a g/mL青霉素/鏈霉素(Sigma )。 在5。/。C02、 95%空氣的氣氛中，在37。C下，將分離出來的PBMC溫育在具有 培養(yǎng)基、10 ng LPS/mL( Sigma )和實驗化合物的24孔平底板(康寧公司(Corning Incorporated))中。18小時后，將樣品離心，使用來自人類百垂克(Human Biotrak )酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA )系統(tǒng)(Amersham)的肺瘤壞死因子cc (Tumour Necrosis Factor Alpha) [(h)TNF- a ]檢測上清液的TNF- a 。每個供體采用如下的方式將樣品溫育PBMC在RPMI (時間對照)PBMC在10 ng LPS/mL (載體)PBMC在10 ng LPS/mL, 10"7M a-MSH或a-MSH類似物 PBMC在10ngLPS/mL， 10"5M cc-MSH或a-MSH類似物 PBMC在10 ng LPS/mL, 10"3 M a -MSH或a -MSH類似物 PBMC在10 ng LPS/mL, 10"1 M cx -MSH或ct隱MSH類似物 PBMC在10 ng LPS/mL, 10'9M oc誦MSH或a -MSH類似物 PBMC在10ngLPS/mL， 10'7M ct畫MSH或a-MSH類似物 將所有的樣品從初始儲液稀釋到1.4 x 10-4 M和1.8 x 1(T3M之間。 將所有的溶液在BSA包被過的小瓶中處理以保護避免化合物鍵合到小瓶 的表面上。數(shù)據(jù)以平均數(shù)土SE表示。實驗化合物對LPS誘導的TNF-a釋放的影響 表示為LPS-載體組中TNF-a累積的百分數(shù)。用學生不成對t-檢驗分析所有的 對比。在0.05的置信水平(p)下認為差異是顯著的。實驗方案2抑制大鼠體內(nèi)的LPS誘導的TNF- a生產(chǎn)實驗動物雌性Wistar大鼠(220-240g )來自查理河(Charles River )， Sulzfeld， 德國，并使其居住在溫度(22-24°C)以及濕度(40-70%)控制的、具有12小時明-暗循環(huán)(從6:00 A.M.到6:00 P.M.進行光照)的房間內(nèi)。使大鼠保持標 準的嚙齒類飼料(具有140 mmol/kg鈉、275 mmol/kg鉀和23%蛋白質(zhì)，阿爾 托敏國際公司(Altromin International) ， Lage,德國),并且具有接近水源的自 由。動物準備在異氟烷-氧化亞氮麻醉的狀態(tài)下，分別經(jīng)由股動脈和靜脈， 將耐久的醫(yī)用聚乙烯(Tygon)導管植入到腹主動脈和下腔靜脈中。在植入之 后，將動物單獨圈養(yǎng)7-10天直到實驗曰。實驗程序在實驗之前，通過訓練所有大鼠兩個周期(每次兩個小時)， 使它們適應用于實驗的限制籠。在實驗日，將動物轉(zhuǎn)移到限制籠中，并且開始 進行靜脈注射含有150 mM葡萄糖的載體溶液。整個實驗過程中注射速率是 0.5 ml/h。在短暫的適應周期之后，開始注射脂多^f唐(LPS)。以4mg/kg體重 的劑量給予LPS (大腸桿菌血清型0127 B8， L 3129， Sigma, St. Louis, USA )， 靜脈注射超過1小時進行輸送。在LPS注射開始之后的60、 90和120分鐘取 0.3 ml動脈血樣品，并且立即用肝素化的來自正常供體大鼠的血替代。實驗組除了 LPS注射外所有大鼠用快速注射(bolus injection)處理 載體(0.5mL等滲鹽水)；處于如下劑量之一的oc-MSH:50 jag/kg體重；200 |a g/kg體重或1000 |li g/kg體重；處于如下劑量之一的實驗化合物50 yg/kg體重；200 g/kg體重或1000 lug/kg體重。血漿TNF- cx的測定在具有0.5 mM EDTA， pH 7.4,和20 x 106 IU/ml抑 肽酶的預冷實驗管中收集血液樣品。經(jīng)過4。C離心之后，將血漿樣品轉(zhuǎn)移到預 冷實驗管中并在-20。C貯藏用于后面的TNF-a測定。通過ELISA ( Biotrak, Amersham,英國)測定血漿的TNF-a。統(tǒng)計分析結(jié)果以平均數(shù)土SE表示。使用用于重復測量的兩因素方差分 析(two-wayANOVA)檢驗組間差異。在p〈0.05的情況下，通過具有置信水 平的邦費羅尼(Bonferroni)校正的不成對t-檢驗，來評價相應期之間的差異。實驗方案3抑制大鼠吸入LPS之后嗜中性粒細胞和嗜酸性粒細胞的浸潤使用來自M&B A/S, DK-8680 Ry,丹麥的雄性Sprague-Dawley大鼠用于所有實驗。將大鼠關在3型標準籠中，使其居住在溫度(22-24°C)以及濕度 (40-70%)控制的、具有12小時明-暗循環(huán)(從6:00 A.M.到6:00 P.M.進行光照)的房間內(nèi)。飼料是高壓釜處理過的Altromin 1324特殊配方，該配方由Altromin Denmark (Chr. Pedersen A/S, 4100 Ringsted,丹麥)生產(chǎn)。無限制地給予飼料和水。馴化之后將大鼠隨機分派到實驗組，在LPS誘導開始時靜脈注射劑量給 予實驗化合物以及LPS誘導之后8小時再次靜脈注射劑量給予實驗化合物。用0.1 ml芬太尼/多美康/100g將組3的大鼠麻醉，并且靜脈注射劑量給予 實驗化合物。在劑量給藥之后立即將它們放置到呼吸室中，其中使它們噴霧 LPS溶液。LPS的濃度為lmg/ml。劑量給藥時間為15分鐘。在以實驗物質(zhì)劑 量給藥之后24小時處死大鼠。最后用C(V02處死大鼠。通過注入以及抽出6x2.5mlPBS到右肺中進行支氣管肺泡灌洗。以在去 掉胸骨和肋骨之后使肺仍然保持在胸中的狀態(tài)進行灌洗。在該過程中將到左肺 的連接管打結(jié)。在4。C、 1000rpm下離心支氣管肺泡灌洗液(BALF) 10分鐘。 去掉上清液后將細胞重懸浮在0.5 mlPBS中并進行總細胞計數(shù)。對來自每一個 大鼠的、用姬姆薩(May-Grii wald Giemsa)染料染色過的BALF,制備兩個 涂片。對來自每一個大鼠的BALF進行總細胞計數(shù)和白細胞分類計數(shù)。實驗組載體(0.5mL等滲鹽水)；a畫MSH: 200 pg/kg體重；oc-MSH類似物200 jag/kg體重。 最后用載體處理沒有吸入LPS的時間對照組。 統(tǒng)計數(shù)據(jù)以平均數(shù)士SE表示。通過后面是費舍最小顯著性差異法的單因素變 量分析進行組間對比。在0.05水平認為差異是顯著的。試驗方案4抑制豬體內(nèi)的LPS誘導的細胞因子的釋放和肺高血壓將雌性長白豬(Landracepig) ( ~30kg)禁食過夜但允許自由接近水源。 然后肌肉注射氯胺酮(10 mg/kg)和咪唑達侖(0.25 mg/kg)對豬進行術前用 藥。靜脈注射氯胺酮(5 mg/kg)引起麻醉。將豬從口腔插入管子，并且用連 續(xù)的靜脈注射芬太尼(60 iu g/kg/h)和咪唑達侖(6mg/kg/h)來保持麻醉。以 5 cm H20的呼氣末正壓用體積控制的通風管(Servo 900通風機(ventilator); 西門子(Siemens) Elema， Solna,瑞典)對動物通氣。呼吸容量保持在10-15 ml/kg,并且調(diào)整呼吸速率(20-25次/min)以保持血碳酸不變(動脈二氧化石灰 [PaC02]在34-45mmHg )。用混合空氣的氧氣進行通氣旨在使動脈氧壓力(Pa02) 高于105mmHg。將一個動脈鞘和兩個靜脈鞘設置在頸動脈和相應靜脈中，所 述靜脈用于灌注、通過充滿流體的導管測量血壓、耳又血、和用于引入導管。經(jīng)由右上腔靜脈在肺動脈中插入肺動脈漂浮導管(Swan-Ganz)(愛德華生 物公司(Edwards Lifescience Corp.) , Irvine,加利福尼亞州)。因為它是通過心 臟的右側(cè)進入到肺動脈中的，可以通過觀察監(jiān)測器上的特征壓力曲線以及通過 X-射線來確定氣嚢導管的位置。在左頸動脈插入另一導管(5 French; St. Jude Medical Company, St. Paul,明尼蘇達州)用于連續(xù)血壓監(jiān)測以及血液取樣。插 入尿?qū)Ч苡糜谑占?。當評估心臟表現(xiàn)時，將臨時起博導管通過靜脈鞘插入到 右心房(X-射線指導)用來使心率標準化。血液動力學監(jiān)測進行連續(xù)觀測動脈血壓、心率(從心電圖)以及肺動脈 壓力(PAP)。脂多糖注入在每一實驗之前120min將大腸桿菌脂多糖內(nèi)毒素(E co// 026 :—6, Bacto月旨多糖；迪夫可實驗室(Difco Laboratories ), Detroit,密歇根州) 溶解在鹽水中以溶解任何沉淀物。經(jīng)過一段穩(wěn)定時間后，在基線為2.5|ag/kg/h 的速度并且在30分鐘內(nèi)逐步增加到15 iu g/kg/h的條件下開始注射脂多糖。之 后，在150分鐘內(nèi)將注射速度保持在2.5 ng/kg/h，此后停止注射。介入組在LPS注射開始前立即給予對照組與介入組相等體積的載體。 將a-MSH類似物(劑量為200|ig/kg)作為單靜脈快速注射給予到介入組。細胞因子通過根據(jù)產(chǎn)品說明書使用商品酶聯(lián)免疫分析，使用從EDTA穩(wěn)定了的血獲得的新鮮冷凍血漿樣品來測量TNF- a ,統(tǒng)計數(shù)據(jù)以平均數(shù)士SE表示。通過后面是費舍最小顯著性差異法的單 因素變量分析進行組間對比。在0.05水平認為差異是顯著的。實驗方案5抑制通過阻塞大鼠左前降支冠狀動脈60min誘導的心肌梗塞面積 隔離喂養(yǎng)的以及無特定病原體的雌性Wistar大鼠(250g )來自Charles River， Hannover,德國。使動物居住在溫度(22-24°C )以及濕度(40-70%)控制的、 具有12小時明-暗循環(huán)(從6:00 A.M.到6:00 P.M.進行光照)的房間內(nèi)。所有 動物允許自由接觸自來水和丸狀大鼠祠料，其大約含有140mmol/kg鈉、275 mmol/kg 4甲和23%蛋白(Altromin catalogue no. 1310， Altromin International, Lage，德國)。經(jīng)由股動脈和靜脈，將耐久的醫(yī)用Tygon導管植入到下腔靜脈和腹主動脈 中。 一周后在呼吸腔內(nèi)用含有4%異氟烷的02使大鼠麻醉。在插入氣管導管之 后，使用如下Hugo Basile Rodent通氣機用含有1.0%異氟烷的02對動物進行 人工通氣。呼吸容量是8-10 ml/kg體重，呼吸速率是75min-'，保持動脈pH在 7.35-7.45之間。手術過程中，將動物放置在可保持直腸溫度在37-38。C的加熱 的手術臺上。使用Hugo Sachs ECG儀測量標準ECG (第二導線)，并且在 PowerLab上在4，000Hz的線上收集標準ECG。在胸骨旁切開以及打開心包膜 之后，目視固定左前降支冠狀動脈(LAD)。圍繞LAD四周在肺動脈干和左耳 廓的右下端之間設置具有允許縫線再開口的咬合器的無害6-0絲線。10分鐘 后，使左前降支冠狀動脈(LAD)咬合。通過ECG的變化(ST-片段上升并且 R-波放大增加)以及MAP的下降來確認咬合成功。60分鐘后通過打開咬合器 進行再灌注。對照大鼠進行假手術。將大鼠進行以下靜脈注射處理的 一種載體0.5ml 150mMNaCl。oc隱MSH:溶于0.5 ml 150mM NaCl的200 n g或1000 ju g a -促黑素/kg體重。實驗化合物溶于0.5 ml 150mM NaCl的200 |a g或1000 ja g實驗化合物/kg體重c在再灌注之前5分鐘給予上述處理。 如下確定局部缺血以及壞死的心"幾的大小在局部缺血/再灌注之后使大鼠保持在麻醉狀態(tài)，在三小時再灌注后進4亍LAD的重咬合。在這個時期，連續(xù)測量ECG和MAP。然后靜脈注射伊文思 藍染料用來確定局部缺血面積的大小。將心臟切除并將其切成水平分層用來確 定局部缺血面積的大小和將缺血的心肌從壞死的心肌中分開出來。將局部缺血 的面積分離，將其在37。C下在0.5%2，3，5-三苯基氯化四氮唑溶液中溫育10分 鐘。然后使用計算機成像程序測定壞死的組織的大小。為了評價對充血性心臟 衰竭的醫(yī)學治療效果，將另一方案的動物術后用丁丙諾啡處理，然后返回到籠 子中用于兩周后測量左室舒張末壓(LVEDP)。使用經(jīng)由右頸動脈插入到左心 室的2F微頂導管測量LVEDP。調(diào)節(jié)異氟烷濃度使平均動脈壓力(MAP)穩(wěn) 定在85-90mmHg。 統(tǒng)計數(shù)據(jù)以平均數(shù)士SE表示。用學生成對t檢驗分析組內(nèi)對比。通過后面是 費舍最小顯著性差異法的單因素變量分析進行組間對比。在0.05水平認為差 異是顯著的。實驗方案6抑制通過雙向堵塞大鼠腎動脈40分鐘誘導的腎衰竭隔離喂養(yǎng)以及無特定病原體的雌性Wistar大鼠(250g)來自Charles River， Hannover,德國。使動物居住在溫度(22-24°C)以及濕度(40-70%)控制的、 具有12小時明-暗循環(huán)(從6:00 A.M.到6:00 P.M.進行光照)的房間內(nèi)。所有 動物允許自由接觸自來水和丸狀大鼠飼料，其大約含有140mmol/kg鈉、275 mmol/kg 4甲和23%蛋白(Altromin catalogue no. 1310, Altromin International, Lage，德國)。將預先植入有長期腎導管的大鼠放置于代謝籠中，經(jīng)過代謝籠的兩天適應 期之后，通過堵塞腎動脈的兩端60 min誘導實驗性ARF。在手術過程中，用異氟烷-一氧化氮麻醉大鼠，將其放置在加熱的手術臺上以保持直腸溫度在37 。C。通過肋腹切開使兩個腎暴露，通過將其從腎周圍脂肪上切除使其松動，然 后從靜脈上輕輕地切下一小部分腎動脈。用表面光滑的血管夾(60 g壓力； World Precision Instruments,英國)堵塞腎動月永40 min。通過觀察整個腎表面 的變白現(xiàn)象確認完全局部缺血。在局部缺血期間，暫時縫合傷口以保持體溫。 在去掉夾子之后，再觀察腎2-5 min以確保指示血回流的顏色變化。然后用3-0 絲線縫合傷口。將大鼠放回代謝籠中，每天測定24h的尿排出量和水攝取量， 共5天。作為對照組，大鼠進行與用于ARF相同的假手術而不堵塞腎動脈。 平行監(jiān)測^假手術的大鼠與具有ARF的大鼠。使大鼠進行如下靜脈注射處理的 一種載體組0.5 ml 150mMNaCl。oc -MSH組溶于0.5 ml 150mM NaCl的200 ju g a -促黑素/kg體重。 實驗化合物組溶于0.5 ml 150mMNaCl的200 ju g實驗化合物/kg體重。 在腎的再灌注之前的5分鐘，接著在6小時和24小時后給予上述處理。 統(tǒng)計數(shù)據(jù)以平均數(shù)土SE表示。用學生成對t檢驗分析組內(nèi)對比。通過后面是 費舍最小顯著性差異法的單因素變量分析進行組間對比。在0.05水平認為差 異是顯著的。實驗方案7抑制順鉑誘導的腎衰竭將預先植入有長期腎導管的大鼠放置于代謝籠中，經(jīng)過對代謝籠的適應期 之后，用腹腔注射溶于0.5 ml 150mMNaCI的順鉑5.0mg/kg體重或載體(0.5 mll50mMNaCI)來處理大鼠。然后，5天后將大鼠放回代謝籠，每天測定并 收集接下來5天內(nèi)24h尿排出量和水攝取量。然后在氟烷/N20中將所有的大 鼠麻醉，在預冷的EDTA包被的小瓶中收集動脈血樣品。將血液樣品收集在含 有0.5 mM EDTA, pH 7.4,以及20 x 106 IU/ml抑肽酶的預冷實驗管中。經(jīng)過4 。C離心后，將血漿樣品轉(zhuǎn)移到預冷實驗管，并且保存在-20。C用于以后測定肌 酸酑和鎂(Mg)。除此之外，還測定在血液收集之前的最近24小時期間收集的尿中的肌酸酐。用作腎小球浸潤率指數(shù)的肌酸酐清除率(Ccr)可以計算如下Cer= Vu x Ucr/Pcr，這里Vu是24小時尿產(chǎn)量；11 是尿中肌酸酐濃度，Pcr 是血漿中肌酸酐濃度。使用臨床化學系統(tǒng)VITEOS 950 (校正臨床診斷公司 (Ortho-Clinical Diagnostics Inc.) ， Johnson & Johnson,殺斤、澤西州)以及羅氏日 立模塊(Roche Hitachi Modular)(羅氏i貪斷(Roche Diagnostics),曼海姆 (Mannheim)，德國)進行尿和血漿中肌酸酐的測定。 使大鼠進行如下靜脈注射處理的 一種 載體組0.5 mll50mMNaCl。a -MSH組溶于0.5 ml 150mM NaCI的200 |u g cc -促黑素/kg體重。 實驗化合物組溶于0.5 ml 150mM NaCI的200 ju g實驗化合物/kg體重。 在腎的再灌注之前的5分鐘，接著在6h和24h后給予上述處理。 統(tǒng)計數(shù)據(jù)以平均數(shù)士SE表示。用學生成對t檢-瞼分析組內(nèi)對比。通過后面是 費舍最小顯著性差異法的單因素變量分析進行組間對比。在0.05水平認為差 異是顯著的。結(jié)果實施例1實驗化合物是a -MSH類似物#1 :Ac-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys畫Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe曙Arg-Trp-Gly-Lys -Pro-Val-NH2 (序列表序列1*在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化) 將該化合物在實驗方案1-7進行實驗。 抑制體外由人白細胞產(chǎn)生的LPS誘導的TNF- ex的產(chǎn)生 oc-MSH和oc-MSH類似物M (序列表序列1*)兩者都劑量依賴地降低人 白細胞懸液中LPS誘導的TNF-a累積。令人意外的是，oc-MSH類似物#1 (序 列表序列1*)的抑制效果比天然肽oc-MSH的抗炎效果更顯著。a-MSH抑制 TNF-cc累積到最大反應(LPS-載體)的73±9%。與此相反，a-MSH類似物 #1 (序列表序列1*)能降低TNF-a累積到載體的47 ±2% (對a-MSH組 p<0.01)(見圖1)抑制大鼠體內(nèi)的LPS誘導的TNF- a生產(chǎn)在靜脈注射LPS的過程中，cx -MSH和a -MSH類似物#1 (序列表序列1 * ) 兩者都降低了大鼠中TNF- a累積。在200 ju g /kg體重的劑量下獲得了 a -MSH 以及cx-MSH類似物M (序列表序列1*)的最大抑制效果，并且在LPS注射 開始之后120分鐘顯示出對TNF-oc生產(chǎn)的最大抑制效果。令人意外的是，oc -MSH類似物弁1 (序列表序列1*)的抑制效果比天然肽cc-MSH的抗炎效果更 顯著。盡管cc-MSH抑制大鼠血漿中的TNF-oc濃度到最大反應(LPS-載體) 的17±3%，但是oc-MSH類似物tfl (序列表序列1*)能降低TNF-oc累積到載 體的9± 1% (對ot-MSH組p = 0.05)(見圖2)。抑制大鼠吸入LPS之后嗜中性粒細胞和嗜酸性粒細胞的浸潤 如LPS吸入之后24小時收集的BALF中嗜酸性粒細胞的顯著降低所顯示 的那樣，(x-MSH和a-MSH類似物W (序列表序列1*)兩者都降低在肺泡腔 內(nèi)的對LPS吸入的炎癥反應。與BALF內(nèi)的嗜酸性粒細胞的數(shù)量是164.6 ± 42.2 xl()S個細胞的、載體處理的大鼠相比，a-MSH處理減小BALF內(nèi)的嗜酸性 粒細胞的數(shù)量到26.7 ± 4.3 x 105個細胞(對載體組，p<0.05 ), a -MSH類似物 #1 (序列表序列1*)減小BALF內(nèi)的嗜酸性粒細胞的數(shù)量到49.0 ± 10.5 x io5 個細胞(對載體組，p<0.05)(見圖3)。與上相同，對于a-MSH和a-MSH類 似物#1 (序列表序列1*)來說，BALF內(nèi)的嗜中性粒細胞的數(shù)量的效果是相似 的。抑制豬體內(nèi)LPS誘導的細胞因子的釋放和肺高血壓如在用a-MSH類似物#1 (序列表序列1*)處理的豬中在LPS注射之后 顯著降低的TNF-cc的血漿濃度所顯示的那樣，a-MSH類似物#1 (序列表序 列1*)具有顯著的抗炎效果。除了這種抗炎效果之夕卜，令人意外的是，a-MSH 類似物#1 (序列表序列1*)還具有保護避免肺高血壓發(fā)展的能力，這可以通 過在用a-MSH類似物#1 (序列表序列1*)處理的大鼠中發(fā)現(xiàn)的、顯著減弱 LPS誘導的PAP增幅來證實(最大PAP增幅載體組22土4mmHg, a-MSH 類4以物#1 (序列表序列1*)纟且8士2mmHg; p = 0.05 )(見圖4)。抑制通過阻塞大鼠左前降支冠狀動脈60min誘導的心肌梗塞面積與a-MSH相反，令人意外的是，a-MSH類似物W (序列表序列1*)降 低了心肌梗塞面積，心肌梗塞面積以壞死面積/梗死危險面積表示，并且在LAD再灌注之后3小時測定。在200pg/kg體重的劑量下獲得了 oc-MSH類似物存l (序列表序列1*)的最大抑制效果，其中與載體處理的大鼠相比，梗塞面積 的降低是~ 30% (載體組危險面積的50.6 ± 2.6%, a -MSH類似物#1 (序列 表序列1*)組危險面積的35.7 ±5.6%; p-O.Ol)。在1000 ju g/kg體重的劑 量下，與載體處理的大鼠相比，梗塞面積的降低還是~30% ( a-MSH類似物 #1 (序列表序列1*)組危險面積的35.0 ±4.4%,對載體組p<0.01 )(見圖 5)。在堵塞LAD 60分鐘之后14天測量另一方案動物的左室舒張末壓 (LVEDP),結(jié)果顯示a-MSH類似物^1 (序列表序列1*)對梗塞面積的有益 效果伴隨有LVEDP以及梗死后充血型心臟衰竭發(fā)展的顯著降低(LVEDP: oc -MSH類似物存l (序列表序列1* )組10.4 ± 2.9 mmHg;對載體組20.2 ±2.2 mmHg; p〈0.01;對時間對照7.5土2.3mmHg;無顯著性)(見圖6)。
抑制通過雙向堵塞大鼠腎動脈40分鐘誘導的腎衰竭
60分鐘雙向腎局部缺血(RIR)誘導明顯的缺血后多尿癥。RIR大鼠具有 相同的多尿癥，與假手術的對照大鼠相比，在局部缺血損害之后的第5天多尿 量增加101% (RIR畫載體組34.8 ±3.3 ml/24小時,時間對照17.3 ± 2.1 ml/24 小時，p〈0.01 )。 a-MSH處理不能減輕多尿癥(RIR-a-MSH組29.0土2.9ml/24 小時；對RIR-載體無顯著性)。令人意外的是，a-MSH類似物弁l (序列表序 列1*)能夠誘導尿流量的完全正?；?RIR-a-MSH類似物#1 (序列表序列 1*)組18.8 ±3.6 ml/24小時；對時間對照無顯著性；對RIR-載體組p<0.01 ) (見圖7)。
抑制順鉑誘導的腎衰竭
如GFR下降所證實的那樣，順鉑處理誘導明顯的低血鎂癥和腎中毒。根 據(jù)這一點，用順鉑和載體處理大鼠誘導出低血鎂癥(血漿Mg: 0.61 ±0.04 mM, 對照大鼠0.77 ± 0.05 mM， p<0.05 )以及明顯的GFR下降。在用順柏和a -MSH 處理過的大鼠中血漿Mg同樣降低(0.37 ±0.04 mM，對對照大鼠p<0.05 )。令 人意外的是，用a-MSH類似物弁l (序列表序列1*)處理防止了順鉑誘導的低 血鎂癥(0.84 ±0.04 mM,相對于對照大鼠無顯著性)以及防止了順鉑誘導的 GFR下降。實施例2
實驗化合物是a -MSH類似物#2:
Ac-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列表序列5*在N-端被乙?；⑶以贑-端^皮酰胺化)
通過在位點10用Me取代Met以及通過在位點13用(D-Phe )立體化學 取代Phe,使a-MSH類似物弁2 (序列表序列5)區(qū)別于cx-MSH類似物#1 (序 列表序列1*)。
在實—驗方案1-3和5-7中試驗該化合物。
抑制體外人白細胞產(chǎn)生的LPS誘導的TNF- cc生產(chǎn)
a-MSH和oc-MSH類似物弁2 (序列表序列5*)兩者都劑量依賴地降低人 白細胞懸液中LPS誘導的TNF- a累積。令人意外的是，cc -MSH類似物#2 (序 列表序列5*)的抑制效果比天然肽a-MSH的抗炎效果更顯著。oc-MSH抑制 TNF-a累積到最大反應(LPS-載體)的73±9%。與此相反，a-MSH類似物 #2 (序列表序列5*)能降低TNF-a累積到載體的42±11% (對cc-MSH組 p<0.01 )(見圖8)。
抑制大鼠體內(nèi)LPS誘導的TNF- oc生產(chǎn)
在靜脈注射LPS的過程中，cc -MSH和a -MSH類似物#2(序列表序列5* ) 兩者都降低了大鼠的TNF-a累積。在200 lag/kg體重的劑量下獲得了 a-MSH 以及a-MSH類似物弁2 (序列表序列5*)的最大抑制效果。令人意外的是，a -1^811類似物#2 (序列表序列5*)的抑制效果比天然肽cx-MSH的抗炎效果更 顯著。盡管a-MSH抑制大鼠血漿中的TNF-a濃度到最大反應(LPS-載體) 的17±3%，但是cc-MSH類似物弁2 (序列表序列5* )能降低TNF-a累積到載 體的9 ± 1% (對a -MSH組p<0.05 )(見圖9 )。
抑制大鼠吸入LPS之后嗜中性粒細胞和嗜酸性粒細胞的浸潤 如LPS吸入之后24小時收集的BALF中嗜酸性粒細胞的顯著降低所顯示 的那樣，oc -MSH和a -MSH類似物#2 (序列表序列5* )兩者都降低肺泡腔內(nèi) 的對LPS吸入的炎癥反應。與BALF內(nèi)的嗜酸性粒細胞的數(shù)量是164.6±42.2 ><105個細>^包的、載體處理的大鼠相比，a-MSH處理減小BALF內(nèi)的嗜酸性 粒細胞的數(shù)量到26.7 ± 4.3 x 105個細胞(對載體組，p<0.05 ), a -MSH類似物#2 (序列表序列5*)減小BALF內(nèi)的嗜酸性粒細胞的數(shù)量到34.0 ± 8.6 x io5 個細胞(對載體組，p<0.05)(見圖10)。令人意外的是，a-MSH類似物弁2(序 列表序列5* )具有比a -MSH更明顯的對BALF內(nèi)的嗜中性粒細胞的抑制效果 (a -MSH類似物#2 (序列表序列5* )組9.1 ± 2.4 x 105個細胞，oc -MSH組 20.1 ± 2.5 x 105個細胞；p<0.05 )(見圖11)。
抑制通過阻塞大鼠左前降支冠狀動脈60分鐘誘導的心肌梗塞面積
與a-MSH相反，令人意外的是，a-MSH類似物弁2 (序列表序列5*)降 低了心肌梗塞面積，心肌梗塞面積以壞死面積/梗死危險面積表示，并且在LAD 再灌注之后3小時測定。在200pg/kg體重的劑量下獲得了 a-MSH類似物弁2 (序列表序列5*)的最大抑制效果，其中與載體處理的大鼠相比，梗塞面積 的降低是~ 27% (載體組危險面積的51.4 ± 2.1%, cc -MSH類似物#2 (序列表 序列5承)組危險面積的37.4±5.1%; p-0.01)(見圖12)。在堵塞LAD 60 分鐘之后14天測量另 一方案動物的左室舒張末壓(LVEDP )，結(jié)果顯示a -MSH 類似物#2 (序列表序列5* )對梗塞面積的有益效果伴隨有LVEDP以及梗死后 充血型心臟衰竭發(fā)展的顯著降低。
抑制通過雙向堵塞大鼠腎動脈40分鐘誘導的腎衰竭
60分鐘雙向腎局部缺血(RIR)誘導明顯的缺血后多尿癥。RIR大鼠具有 相同的多尿癥，與假手術的對照大鼠相比，在局部缺血損害之后的第5天多尿 量增加101% (RIR-載體組34.8 ±3.3 ml/24小時，時間對照17.3 ± 2.1 ml/24 小時，p<0.01 )。 oc -MSH處理不能減輕多尿癥(RIR- oc -MSH組29.0 ± 2.9 ml/24 小時；對RIR-載體組無顯著性)。與此相反，用oc-MSH類似物存2 (序列表序 列5*)處理顯著降低了在RIR之后發(fā)現(xiàn)的多尿癥程度。
抑制順鉑誘導的腎衰竭
如GFR下降所證實的那樣，順鉑處理誘導明顯的低血鎂癥和腎中毒。根 據(jù)這一點，用順鉑和載體處理大鼠誘導出低血鎂癥(血漿Mg: 0.61 ± 0.04 mM， 對照大鼠0.77 ± 0.05 mM，pO.05)以及明顯的GFR下降。在用順鉑和a-MSH 處理過的大鼠中血漿Mg同樣降低(0.37 ±0.04 mM,對對照大鼠p<0.05 )。與 此相反，a-MSH類似物弁2 (序列表序列5*)防止了順鉑誘導的低血鎂癥以及 順鉑誘導的GFR下降。實施例3
實驗化合物是a -MSH類似物#3:
Ac-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列表序列9*在N-端被乙酰化并且在C-端被酰胺 化)
通過在位點10用Nle取代Met以及通過在位點13用D-Nal取代Phe,使 a -MSH類似物#3 (序列表序歹'j 9 )區(qū)別于a -MSH類似物# 1 (序列表序列1 * )。 在實驗方案1、 2和5中試驗該化合物。
抑制體外LPS誘導的TNF-a產(chǎn)生，其中TNF-a由人白細胞產(chǎn)生。 oc-MSH和a-MSH類似物弁3 (序列表序列9*)兩者都劑量依賴地降低人 白細胞懸液中LPS誘導的TNF-oc累積。令人意外的是，oc-MSH類似物弁3(序 列表序列9*)的抑制效果比天然肽a-MSH的抗炎效果更顯著。a-MSH抑制 TNF-a累積到最大反應(LPS-載體)的73±9%。與此相反，a-MSH類似物 #3 (序列表序列9*)能降低TNF-a累積到載體的53 ± 13% (對a-MSH組 p<0.05)(見圖13)。
抑制大鼠體內(nèi)LPS誘導的TNF-a生產(chǎn)
在靜脈注射LPS的過程中，a -MSH和a -MSH類似物#3(序列表序列9* ) 兩者都降j氐了大鼠的TNF- a累積。在200 |i g /kg體重的劑量下獲得了 a -MSH 以及a-MSH類似物弁3 (序列表序列9*)的最大抑制效果。令人意外的是，a -MSH類似物弁3 (序列表序列9*)的抑制效果比天然肽a-MSH的抗炎效果更 顯著。盡管a-MSH抑制大鼠血漿中的TNF-oc濃度到最大反應(LPS-載體) 的17±3%,但是a-MSH類似物弁3 (序列表序列9*)能降低TNF-oc累積到載 體的11 ± 3% (對a -MSH組p<0.05 )(見圖14 )。
抑制通過阻塞大鼠左前降支冠狀動脈60min誘導的心力幾梗塞面積 與a-MSH相反，令人意外的是，oc-MSH類似物^3 (序列表序列9*)降 低了心肌梗塞面積，心肌梗塞面積以壞死面積/梗死危險面積表示，并且在LAD 再灌注之后3小時測定。在200jag/kg體重的劑量下獲得了 oc-MSH類似物弁2 (序列表序列5*)的最大抑制效果，其中與載體處理的大鼠相比，梗塞面積的降低是~ 24% (載體組危險面積的51.3 ± 2.1 %, cc -MSH類似物#3 (序列表 序列9*)組危險面積的39.0 ±3.4%; p-0.05)(見圖15)。在堵塞LAD 60 分鐘之后14天測量另 一方案動物的左室舒張末壓(LVEDP )，結(jié)果顯示a -MSH 類似物#3 (序列表序列9* )對梗塞面積的有益效果伴隨有LVEDP以及梗死后 充血型心臟衰竭發(fā)展的顯著降低。實施例4實驗化合物是ct誦MSH類似物#4:Ac-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (序列表序列13*在N-端被乙酰化并且在C-端被酰胺化)通過在位點8用Ser取代Tyr，在位點9用lie取代Ser,在位點10用lie取代Met以及通過在位點11用Ser取代Glu，使oc -MSH類似物#4 (序列表序列13)區(qū)別于cc-MSH類似物弁l (序列表序列1*)。 在實驗方案1和2中試驗該化合物。 抑制體外由人白細胞產(chǎn)生的LPS誘導的TNF- a的產(chǎn)生 a-MSH和a-MSH類似物#4 (序列表序列13*)兩者都劑量依賴地降低人白細胞懸液中LPS誘導的TNF-oc累積。令人意外的是，a-MSH類似物#4 (序列表序列13*)的抑制效果比天然肽oc-MSH的抗炎效果更顯著。 抑制大鼠體內(nèi)LPS誘導的TNF-a生產(chǎn)在靜脈注射LPS的過程中，a-MSH和a-MSH類似物弁4(序列表序列13*) 兩者都降低了大鼠的TNF-cc累積。在200jag/kg體重的劑量下獲得了 oc-MSH 以及a-MSH類似物弁4 (序列表序列13*)的最大抑制效果。令人意外的是， (x-MSH類似物#4 (序列表序列13*)的抑制效果比天然肽a-MSH的抗炎效 果更顯著。盡管a-MSH抑制大鼠血漿中的TNF-a濃度到最大反應(LPS-載 體)的17±3%,但是a-MSH類似物糾(序列表序列13*)能降低TNF-oc累 積到載體的12 ±2% (對a-MSH組p<0.05 )(見圖16)。實施例5實-險化合物是a -MSH類似物#5:Ac-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys國Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser畫His-(D-Phe)-Arg-Trp-GIy-L ys-Pro-Val-NH2 (序列表序列17*在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化)通過在位點8用Ser取代Tyr,在位點9用lie取代Ser,在位點10用lie 取代Met，通過在位點11用Ser取代Glu以及通過在位點13用(D-Phe )立 體化學取代Phe，使cc -MSH類似物#5 (序列表序列17 )區(qū)別于oc -MSH類似 物#1 (序列表序列1*)。在實—驗方案1和2中試驗該化合物。 抑制體外由人白細胞產(chǎn)生的LPS誘導的TNF- ot的產(chǎn)生 ct-MSH和oc-MSH類似物#5 (序列表序列17*)兩者都劑量依賴地降4氐 人白細胞懸液中LPS誘導的TNF-cc累積。令人意外的是，a-MSH類似物#5 (序列表序列17*)的抑制效果比天然肽a-MSH的抗炎效果更顯著。 抑制大鼠體內(nèi)LPS誘導的TNF- oc生產(chǎn)在靜脈注射LPS的過程中，a-MSH和a-MSH類似物弁5(序列表序列17*) 兩者都降低了大鼠的TNF- oc累積。在200 ja g /kg體重的劑量下獲得了 a -MSH 以及oc-MSH類似物tf5 (序列表序列17*)的最大抑制效果。令人意外的是， a-MSH類似物#5 (序列表序列17*)的抑制效果比天然肽oc-MSH的抗炎效 果更顯著。實施例6實驗化合物是cc -MSH類似物#6:Ac-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp畫Gly-Ly s-Pro-Val-NH2 (序列表序列2*在N-端被乙酰化并且在C-端被酰胺化)通過在位點l-6用(Glu)6取代(Lys)6，使ot-MSH類似物弁6 (序列表序列2) 區(qū)別于a-MSH類似物弁l (序列表序列1*)。 在實驗方案1和2中實驗該化合物。 抑制體外由人白細胞產(chǎn)生的LPS誘導的TNF-a的產(chǎn)生 a-MSH和a-MSH類似物tf6 (序列表序列2*)兩者都劑量依賴地降低人 白細胞懸液中LPS誘導的TNF- a累積。令人意外的是，a -MSH類似物#6 (序 列表序列2*)的抑制效果比天然肽a-MSH的抗炎效果更顯著。抑制大鼠體內(nèi)LPS誘導的TNF- cc生產(chǎn)在靜脈注射LPS的過程中，oc -MSH和oc -MSH類似物#6(序列表序列2* ) 兩者都降低了大鼠的TNF-ot累積。在200ug/kg體重的劑量下獲得了 oc-MSH 以及a-MSH類似物弁6 (序列表序列2*)的最大抑制效果。令人意外的是，a -MSH類似物弁6 (序列表序列2*)的抑制效果比天然肽oc-MSH的抗炎效果更 顯著。實施例7實-驗化合物是a -MSH類似物#7:Ac-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser隱Met陽Glu-His-Phe隱Arg-Trp-Gly-Lys -Pro-(D-Val)-NH2 (序列表序列3*在N-端被乙?；⑶以贑-端被酰胺化)通過在位點19用(D-Val)化學立體取代Val，使a-MSH類似物#7 (序列表 序列3)區(qū)別于oc-MSH類似物弁l (序列表序列1*)。 在實驗方案1和2中實驗該化合物。 抑制體外由人白細胞產(chǎn)生的LPS誘導的TNF- cc的產(chǎn)生 a-MSH和a-MSH類似物弁7 (序列表序列3*)兩者都劑量依賴地降低人 白細胞懸液中LPS誘導的TNF-a累積。令人意外的是，oc-MSH類似物#7 (序 列表序列3*)的抑制效果比天然肽a-MSH的抗炎效果更顯著。 抑制大鼠體內(nèi)LPS誘導的TNF-ct生產(chǎn)在靜脈注射LPS的過程中，a -MSH和a -MSH類似物#7(序列表序歹'j 3* ) 兩者都降低了大鼠的TNF-a累積。在200lag/kg體重的劑量下獲得了 a-MSH 以及a-MSH類似物弁7 (序列表序列3*)的最大抑制效果。令人意外的是，a -MSH類似物弁7 (序列表序列3*)的抑制效果比天然肽a-MSH的抗炎效果更 顯著。


圖1人白細胞懸液中LPS誘導的TNF-a累積該圖顯示了在實驗方案1中oc-MSH類似物#1(序列表序列1*)(MCA#1) 的最大抗炎效果。對于a-MSH和MCA#1在1(T7M情況下獲得對LPS誘導的TNF-a生產(chǎn)的最大抑制效果。平均值土SE(每組中N - 6-9 )。 *:對載體組 p<0.05, #:對oc-MSH組p<0.05。圖2血漿中LPS誘導的TNF- oc累積該圖顯示了在實^驗方案2中a-MSH類似物存l(序列表序列1*) (MCA#1 ) 的最大抗炎效果。對于a -MSH和MCA#1在靜脈注射200 m g/kg體重情況下 獲得對大鼠LPS誘導的TNF- ct生產(chǎn)的最大抑制效果。平均數(shù)± SE (每組中N =4-6)。 *:對載體組p0.05， #:對oc-MSH組p<0.05。圖3嗜酸性粒細胞該圖顯示了在實^全方案3中a-MSH和oc-MSH類似物弁l(序列表序列1*) (MCA弁1 )對肺泡內(nèi)嗜酸性粒細胞累積的作用。兩個化合物在200 |a g/kg體重 的劑量下靜脈推注給藥。平均數(shù)士SE (每組中N = 6-9)。 *:與載體不同。 圖4肺動l永壓該圖顯示了 cc-MSH類似物W (序列表序列1*) (MCA#1 )對LPS誘導的 豬肺動脈壓變化的作用。平均數(shù)土SE (每組中N = 6-9)。 *:與載體不同。 圖5再灌注之后3小時的梗塞面積該圖顯示了在實驗方案4中a-MSH類似物弁l(序列表序列1*) (MCA#1) 對心肌梗塞面積的保護作用。通過靜脈注射給予200 u g/kg體重獲得MCA弁l 的最大效果。平均數(shù)土SE (每組中N = 5-10)。 *:與載體不同。圖6在60 min LAD堵塞之后兩周的LVEDP該圖顯示了在實驗方案4中a-MSH類似物弁l(序列表序列1*) (MCA#1) 對梗死后充血性心力衰竭的保護作用。通過200 jit g/kg體重獲得MCA^的效 果。平均數(shù)± SE(每組中N == 6-9 )。 *:對假手術組p<0.05， #:對載體組p<0.05。圖7多尿量該圖顯示了在實驗方案5中a-MSH類似物^l(序列表序列1*) (MCA#1 ) 對缺血后多尿癥發(fā)展的保護作用。通過靜脈注射給予200/a g/kg體重獲得 MCA#1的效果。平均^:士SE (每組中N = 5-7)。 *:與載體不同。圖8人白細胞懸液中LPS誘導的TNF- a累積該圖顯示了在實驗方案1中oc-MSH類似物存2(序列表序列5*) (MCA#2) 的最大抗炎效果。對于a -MSH和MCA弁2在1(T7M情況下獲得對LPS誘導的TNF-a生產(chǎn)的最大抑制效果。平均數(shù)士SE(每組中N = 6-9 )。 *:對載體組 p<0.05, #:對cc-MSH組p<0.05。圖9血漿中LPS誘導的TNF- a累積該圖顯示了在實驗方案2中a -MSH類似物#2(序列表序列5* ) ( MCA#2 ) 的最大抗炎效果。對于a -MSH和MCA#2在靜脈注射200 n g/kg體重情況下 獲得對大鼠LPS誘導的TNF-ct生產(chǎn)的最大抑制效果。平均數(shù)士SE (每組中N =4-6)。 *: 3十載體組p〈0.05, #:對cc-MSH組p<0.05。圖10嗜酸性粒細胞該圖顯示了在實驗方案3中a-MSH和cc-MSH類似物弁2(序列表序列5*) (MCA#2 )對肺泡內(nèi)嗜酸性粒細胞累積的作用。兩個化合物在200 M g/kg體重 的劑量下靜脈推注給藥。平均數(shù)士SE (每組中N = 6-9)。 *:與載體不同。 圖11嗜中性粒細胞該圖顯示了在實驗方案3中a-MSH和ot-MSH類似物存2(序列表序列5*) (MCA#2 )對肺泡內(nèi)嗜中性粒細胞累積的作用。兩個化合物在200 |a g/kg體重 的劑量下靜脈推注給藥。平均數(shù)土SE (每組中N = 6-9)。 *:與載體不同。 圖12再灌注之后3小時的梗塞面積該圖顯示了在實驗方案4中a-MSH類似物弁2(序列表序列5*) ( MCA#2 ) 對心肌梗塞面積的保護作用。通過靜脈注射給予200 ju g/kg體重獲得MCA#1 的最大效果。平均數(shù)土SE (每組中N = 5-10)。 *:與載體不同。圖13人白細胞懸液中LPS誘導的TNF-oc累積該圖顯示了在實驗方案1中cc-MSH類似物存3(序列表序列9*) (MCA#3) 的最大抗炎效果。對于a-MSH和MCA#3在1(T7M情況下獲得對LPS誘導的 TNF-a生產(chǎn)的最大抑制效果。平均數(shù)土SE(每組中N = 6-9)。 *:對載體組 p<0.05, #:對a-MSH組p<0.05。圖14血漿中LPS謗導的TNF-a累積該圖顯示了在實驗方案2中a -MSH類似物#3(序列表序列9* ) ( MCA#3 ) 的最大抗炎效果。對于a -MSH和MCA#3在靜脈注射200 y g/kg體重情況下 獲得對大鼠LPS誘導的TNF-a生產(chǎn)的最大抑制效果。平均數(shù)± SE (每組中N =4-6)。 *:對載體組p0.05， 對a-MSH組p<0.05。圖15再灌注之后3小時的梗塞面積該圖顯示了在實驗方案4中cx -MSH類似物#3(序列表序列9* ) ( MCA#3 ) 對心肌梗塞面積的保護作用。通過靜脈注射給予200 |a g/kg體重獲得MCA#3 的最大效果。平均數(shù)士SE (每組中N = 5-10)。 *:與載體不同。圖16血漿中LPS誘導的TNF-a累積該圖顯示了在實—險方案2中a-MSH類似物#4 (序列表序列13*) (MCA#4 )的最大抗炎效果。對于a -MSH和MCA#4在靜脈注射200 |i g/kg 體重情況下獲得對大鼠LPS誘導的TNF-oc生產(chǎn)的最大抑制效果。平均數(shù)± SE (每組中N-4-6)。 *:對載體組p〈0.05， #:對a-MSH組p<0.05。參考文獻美國專利第4,288,627號 WO 91/17243 WO 99/46283Beaucage, S. L. Caruthers, M. H. Tetrahedron Letters 22， 1981， pp. 1859-1869 Bodanszky, M.和Bodanszky， A.,"肽合成實踐(The Practice of Peptide Synthesis)"，第二版，Springer-Verlag， 1994.Catania, A.， Rajora， F., Capsoni， F., Minonzio， R.A.， Star,和Upton, J. M.肽 (Peptides) 17: 675-679, 1996.Ehrlich, 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 1433).Guo和Sherman, 1995，分子細胞生物學(Molecular Cellular Biology) 15:5983-5990.Hartmeyer, M.， Scholzen T" Becher E., Bhardwaj R. S.， Schwarz T.和Luger T.A., J.Immunol., 159: 1930-1937, 1997.HiltzM. E. et al. (1991), Peptides, 12， 767-771.Hruby VJ. et al. (1995)， J. Med. Chem.， 38, 3454-3461.Jones, J."肽化學合成(The Chemical Synthesis of Peptides) ", Clarendon Press, 1991.Kullmann, W. 1987,酶促多肽合成(Enzymatic Peptide Synthesis) , CRCPress, Boca Raton, Florida, pp. 41- 59.Lipton， J. M和Catania, A.今日免疫學(Immunol. Today) 18: 140-145.1997Liu et al" 1996, J. Am. Chem. Soc. 118:307-312和Dawson et al., 1996, 226:776.Luger， T.A.， Scholzen T.和Grabbe S.， J. Investig. Dermatol. Symp. Proc， 2: 87-93， 1997.Matthes et al., EMBO Journal 3, 1984, pp. 801-805.MANIATIS, T., E. R FRITSCH和J. SAMBROOK, 1982分子克隆實驗手 冊(Mo/ecw/<3r C7om'"g.'爿丄a60rato7 M"ww"/) . Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY-Remington: "制藥一牛學與實踐(The science和practice of pharmacy )"第 20版.Mack Publishing, Easton PA, 2000 ISBN 0-912734-04-3和"制藥技術百科 全書(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology) "， Swarbrick編輯,J. & J. C. Boylan, Marcel Dekker， Inc., New York, 1988 ISBN 0-8247-2800-9.Rajora， N., Boccoli, G" Catania和Lipton J. M., P印tides, 18: 381-385， 1997.Remington:制藥牙牛學與實踐(The science和practice of pharmacy )"第20 版.Mack Publishing, Easton PA, 2000 ISBN 0-912734-04-3.Rizzi A. et al. (2002)，藥理學不列顛雜志(British Journal of Pharmacology ), 137, 369-374.Romanosetal., 1992,酵母(Yeast) 8:423-488.Sawyer T.K. (1980), Proc. Nat. Acad. Sd.， 10, 5754-5758.Schi6th H. B. et al. (1998)， Eur. J. Pharm.， 349, 359-366.Star, R.A.,Rajora N.， Huang J., Stock R.C., Catania A.和Upton J. M.; Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A， 92: 8016-8020, 1995.Wong， K.Y., Rojora, G.， Boccoli， A.， Catania, A.,和Upton J. M.,神經(jīng)免疫調(diào) 節(jié)j乍用(Neuroimmunomodulation) ，4:37-41,1997.來自重組纟曰菌的有用蛋白質(zhì)(UsefUl proteins from recombinant bacteria)" 科學美國(in Scientific American) , 1980, 242:74-9權(quán)利要求
1. 總計為12～19個氨基酸殘基的肽，所述肽包括如下氨基酸序列X-Aa1-Aa2-Aa3-Aa4-Aa5-Y-Aa6-Aa7-Z其中X包括6個氨基酸殘基R1-R2-R3-R4-R5-R6，其中R1、R2、R3、R4、R5和R6可以獨立地是Lys或Glu，和其中Y包括選自His-Phe-Arg、His-(D-Phe)-Arg、His-Nal-Arg和His-(D-Nal)-Arg的氨基酸序列，和其中Z包括選自Lys-Pro-Val和Lys-Pro-(D-Val)的氨基酸序列，和其中Aa1、Aa2、Aa3、Aa4、Aa5、Aa6和Aa7可以獨立地是任何一種天然或非天然氨基酸殘基或者缺失，和其中所述肽的羧基端是-C(＝O)-B1，其中B1選自OH、NH2、NHB2、N(B2)(B3)、OB2和B2，其中B2和B3獨立地選自可以被取代的C1-6烷基、可以被取代的C2-6鏈烯基、可以被取代的C6-10芳基、可以被取代的C7-16芳烷基和可以被取代的C7-16烷基芳基；和其中所述肽的氨基端是(B4)HN-、(B4)(B5)N-或(B6)HN-，其中B4和B5獨立地選自H、可以被取代的C1-6烷基、可以被取代的C2-6鏈烯基、可以被取代的C6-10芳基、可以被取代的C7-16芳烷基和可以被取代的C7-16烷基芳基；B6是B4-C(＝O)-。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中，所述肽包括如下氨基酸序列 X-Aa廣Aa2-Aa3-Aa4-Aa5畫Y-Aa6-Aa7-Z其中Aa卜Aa2、 Aa3、 Aa4、 Aa5、 Aag和Aa 可以獨立地是任何一種天然 或非天然氨基酸殘基。
3. 根據(jù)前述一又利要求中任何一項所述的肽，其中，所述肽選自由下述序 列所組成的組中Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -Val (序列表序列1 )Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys誦Pro -Val (序列表序列2)Lys-Lys畫Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Met畫Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列3)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列4)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly隱Lys -Pro-Val (序列表序列5)Glu畫Glu陽Glu-Glu畫GIu國Glu隱Ser-Tyr-Ser-Nle-GIu-His-(D-Phe^Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列6)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys -Pro-(D-Val)(序列表序列7)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列8)Lys-Lys畫Lys-Lys-Lys-Lys國Ser畫Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列9)Glu-Glu-GIu-Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr-Ser畫Me畫Glu-His-D-Nal-Arg國Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列10)Lys-Lys—Lys-Lys-Lys—Lys—Ser—Tyr—Ser—Nk-Glu-His—D-Nal—Arg-TYp-Gly-Lys— Pro-(D-Val)(序列表序列11 )Glu-Glu-Glu-Glu-Glu畫Glu-Ser-Tyr-Ser-Nle畫Glu-His-D-Nal-Arg畫Trp陽Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列12)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys一Ser-Ser-Ile-Ile-Ser一His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列13)Glu-Glu-Glu-Glu陽GIu-Glu-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly陽Lys-Pro-Val (序列表序列14)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列15)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu隱Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列16)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys畫Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列17)Glu-GIu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Ser-Ile-Ile畫Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列18)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列19)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Ser隱Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列20)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys隱Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-D-Nal一Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -Val (序列表序列21 )Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Ser-Ile-Ile隱Ser-His-D-Nal畫Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -Val (序列表序列22)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列23)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu畫Glu-Ser-Ser醒Ile-Ile畫Ser-His畫D-Nal畫Arg-Trp-Gly畫Lys隱Pro -(D-Val)(序列表序列24)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys陽Met-Glu-His-Phe陽Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序歹寸 表序列25)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp隱Gly-Lys-Pro-Val (序列 表序列26)Lys-Lys陽Lys-Lys-Lys-Lys隱Met畫Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys陽Pro-(D-Val)(序 列表序列27)Glu-Glu-GIu畫Glu-Glu-Glu-Met-Glu誦His-Phe-Arg畫Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val)(序列表序列28)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys誦Pro-Val (序列表序列29)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu扁Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列30)Lys-Lys陽Lys-Lys-Lys畫Lys-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val) (序列表序列31)Glu-Glu-Glu-Glu隱Glu-Glu-Me-Glu-His-(D響Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro國(D-Val)(序列表序列32)Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Nle-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val(序列 表序列33)Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Nle-Glu-His-D匿Nal-Arg-Trp國Gly隱Lys-Pro-Val (序列表序列34)Lys一Lys隱Lys一Lys陽Lys-Lys一Nle-Glu-His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val) (序列表序列35)和Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu隱Nle-Glu畫His-D-Nal-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-(D-Val) (序列表序列36)。
4. 根據(jù)前迷權(quán)利要求中任何一項所述的肽，其中，所述肽由下述序列組成Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr國Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -Val (序列表序列1 )。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中的任何一項所述的肽，其中，所述肽由下述序列 組成Lys-Lys一Lys畫Lys隱Lys一Lys一Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys -Pro-Val (序列表序列5)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項所述的肽，其中，所述肽由下述序列組成Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-(D畫Nal)-Arg-Trp-Gly-Lys -Pro-Val (序列表序列9)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項所述的肽，其中，所述肽由下述序列組成Lys-Lys-Lys-Lys畫Lys-Lys-Ser畫Ser-Ile-Ile-Ser-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列13)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項所述的肽，其中，所述肽由下述序列組成Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Ser-Ser-Ile-Ile-Ser-His-(D-Phe)-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val (序列表序列17)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項所述的肽，其中，所述肽由下述序列組成Glu漏Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe陽Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -Val (序列表序列2)。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任何一項所述的肽，其中，所述肽由下述序列組成Lys-Lys-Lys國Lys-Lys-Lys-Ser-Tyr-Ser-Met畫Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro -(D-Val)(序列表序列3)。
11. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項所述的肽，其中，所述肽的羧基端是 -C(K))-B 1 ，并且其中B1是OH。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1-10中任何一項所述的肽，其中，所述肽的羧基端是 -C(=0)-B1，并且其中B1是NH2。
13. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項所述的肽，其中，所述肽的氨基端是 (B4)HN-，并且其中B4是H。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1-12中任何一項所述的肽，其中，所述肽的氨基端是 (B6)HN-，并且其中B6 = B4畫C(-0)-且B4 = CH3。
15. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項所述的肽，其中，所述肽具有激活選自 1、 3、 4和5型黑皮質(zhì)素受體的一種或多種黑皮質(zhì)素受體的能力。
16. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項所述的肽，其中所述肽具有至少一種如 妙.a) 抑制LPS誘導的由人白細胞產(chǎn)生的TNF-cc的產(chǎn)生b) 抑制肺中炎癥誘導的嗜酸性細胞浸潤c) 抑制肺中炎癥誘導的嗜中性粒細胞浸潤d) 抑制循環(huán)血中炎癥誘導的TNF- a累積e) 減輕局部缺血誘導的急性腎衰竭f) 減小心肌梗塞面積g) 減輕心l幾梗塞后心力衰竭的程度h) 減輕肺血管高血壓下性^i)減輕順4自誘導的腎衰竭。
17. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項所述的肽，所述肽用于醫(yī)藥中。
18. 根據(jù)權(quán)利要求1-17中任何一項所述的肽在制備用于治療或預防哺乳 動物的 一 個或多個器官的組織內(nèi)病況的藥物組合物中的用途。
19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的肽的用途，其中，所述器官選自由下述所組 成的組中腎、肝、腦、心臟、肌肉、骨髓、皮膚、骨骼、肺、呼吸道、脾、 外分泌腺、膀胱、內(nèi)分泌腺、包括輸卵管的生殖器官、眼、耳、血管系統(tǒng)、包 括小腸、結(jié)腸及直腸和肛管的胃腸道和前列腺。
20. 根據(jù)權(quán)利要求18-19中任何一項所述的肽的用途，其中，所述病況包 括局部缺血病況或炎癥病況。
21. 根據(jù)權(quán)利要求18-20中任何一項所述的肽的用途，其中，所述病況是 由于毒素或藥物誘導的細胞、組織或器官的衰竭。
22. 根據(jù)權(quán)利要求18-21中任何一項所述的肽的用途，其中，所述病況是 急性、亞急性或慢性的局部缺血。
23. 根據(jù)權(quán)利要求18-21中任何一項所述的肽的用途，其中，所述病況是 繼發(fā)性局部缺血。
24. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的肽的用途，其中，所述繼發(fā)性局部缺血是由 于膿毒性休克或者與全身性高血壓相關的病況。
25. 根據(jù)權(quán)利要求18-21中任何一項所述的肽的用途，其中，所述病況是 心肌缺血。
26. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的肽的用途，其中，所述病況是心絞痛或心肌 梗塞。
27. 根據(jù)權(quán)利要求18-21中任何一項所述的肽的用途，其中，所述病況是 炎癥病況。
28. 根據(jù)權(quán)利要求27所述的肽的用途，其中，所述炎癥病況選自肺部炎 癥、關節(jié)炎、皮炎、胰腺炎、炎癥性腸病、心包炎、心肌炎和心內(nèi)膜炎。
29. 根據(jù)權(quán)利要求18-21中任何一項所述的肽的用途，其中，所述病況與 心律失常相關。
30. —種藥物組合物，其包括權(quán)利要求1-17中任何一項所定義的肽。
31. 根據(jù)權(quán)利要求30所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物還包括 一種或多種藥物載體。
32. 根據(jù)權(quán)利要求30或31所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物還 包括一種或多種藥學可接受的賦形劑。
33. 根據(jù)權(quán)利要求30-32中任何一項所述的藥物組合物，其中，所述組合 物是腸胃外組合物、口服組合物、局部組合物、經(jīng)粘膜組合物或經(jīng)皮組合物。
34. —種用于治療或預防哺乳動物的一個或多個器官的組織的病況的方 法，其包括給予有效劑量的權(quán)利要求1-17中任何一項所定義的肽。
35. 根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述病況是由局部缺血、炎癥 和/或中毒或者藥物治療的毒性作用引起的。
全文摘要
本發(fā)明描述了α-促黑素細胞激素(α-MSH)的肽類似物，所述肽類似物與天然α-MSH肽相比具有提高的功效。與α-MSH相比，α-MSH類似物表現(xiàn)出提高的抗炎效果以及提高的防止局部缺血情況的能力。本發(fā)明進一步公開了該肽用于制備藥物組合物的用途，和藥物組合物，所述藥物組合物用于治療或預防哺乳動物的一個或多個器官的組織的病況。
文檔編號C07K14/685GK101273059SQ200580051680
公開日2008年9月24日 申請日期2005年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月26日
發(fā)明者托馬斯·恩格爾布雷希特·諾克爾德·約納森, 比亞內(nèi)迪尤·拉爾森, 瑟倫·尼爾森, 約爾延·弗洛基爾 申請人:阿克申制藥公司