專利名稱：一種三萜類化合物的提取、制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種三萜類化合物Colosolicacid(CRA)的提取、制備方法。
背景技術(shù)：
Colosolic acid(CRA)是一種天然產(chǎn)物，其主要存在于植物L(fēng)agerstroemiaspeciosa的葉子中。在東南亞，該種植物的葉子一直被作為草藥治療糖尿病、控制肥胖而廣泛使用。菲律賓的塔加路族人稱此植物為Banaba，因而得名“巴拿巴”。經(jīng)研究表明CRA是Banaba的主要活性成分，相關(guān)報道證明CRA可以降低試驗白鼠的血糖并對患有遺傳糖尿病的試驗白鼠有降血糖作用，CRA可以活化葡萄糖的傳輸，因此可以降低血糖，具有治療糖尿病、減肥的作用，譽有為植物胰島素一稱，可應(yīng)用于藥品、食品、保健食品等領(lǐng)域。因此研究開發(fā)CRA的提取制備方法具有重要的現(xiàn)實意義。
關(guān)于CRA的制備提取目前報道很少，Banaba植物在東南亞作為當(dāng)?shù)夭菟幱兴鶓?yīng)用，但在國際學(xué)術(shù)研究中，沒有對CRA的藥代動力學(xué)研究，也沒有報道相關(guān)對人體作用試驗。CRA作為純天然的植物提取物，已在東南亞人民長期應(yīng)用中證實其藥用價值，但是對CRA的制備提取尚無有效的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于研究一種從Banaba提取CRA產(chǎn)品的生產(chǎn)方法，并且環(huán)保安全、周期短、操作簡單、能工業(yè)化生產(chǎn)的工藝。
本發(fā)明提供了一種三萜類化合物Colosolic acid(CRA)的提取制備方法。
本發(fā)明方法將Banaba葉經(jīng)水提、醇提，最大限度提取CRA，提取液經(jīng)1-0.45微米膜過濾器過濾，除去未溶解的雜質(zhì)。采用大孔型非極性或弱極性樹脂作為填充料裝柱，在20～60℃下，對提取液中的CRA進行吸附，并用梯度區(qū)間在40％～95％的低級醇溶液解吸，收集含CRA的餾分，將收集得到的餾分真空濃縮至含固量為25％時進行冷凍干燥，將濃縮液進行冷凍干燥后制得成品，該成品經(jīng)HPLC檢測，CRA產(chǎn)品含量在20～60％。
本發(fā)明的方法具體包括下列步驟(1)將Banaba葉子浸沒于8-10倍量的無毒的低級(C2-C3)醇中提取提取3次，每次2-3小時；(2)將提取液用0.1-0.5μ微濾膜過濾，濾液合并通過大孔吸附樹脂；(3)將吸附飽和的大孔吸附樹脂用梯度的無毒低級醇沖洗，控制流量4-5BV/h，將CRA解吸出來，解吸液通過HPLC檢測，收集富含CRA部分；(4)解吸液經(jīng)80℃真空濃縮、冷凍干燥，得到CRA產(chǎn)品，用HPLC檢測，含量在20～60％。
本方法采用的是采用大孔型非極性或弱極性吸附樹脂對CRA進行吸附分離，利用大孔非極性或弱極性樹脂隊CRA的吸附和在合適濃度的低級醇條件下能夠洗脫出CRA的原理。有效地富集了CRA，可以將所得產(chǎn)品中的CRA含量提升到20～60％，理論收率在80％～90％。
本發(fā)明方法具有工藝簡單、產(chǎn)物純度高、生產(chǎn)周期短、成本低的優(yōu)點。采用本發(fā)明方法提取制備的CRA產(chǎn)品經(jīng)HPL檢測純度為20％～60％。


圖1CRA產(chǎn)品的HPLC檢測，圖中保留時間為12.146min的峰為CRA信號。
具體實施例實施例一.
稱取Banaba葉子500g，用8倍量40％乙醇4升，回流提取4次，每次用乙醇4L，各提取60分鐘，合并提取液，將提取液用0.1μ微濾膜過濾。取清洗干凈的D101樹脂300g裝柱，將提取液通過該樹脂，流速3BV/h。首先用1L的40％乙醇，沖洗樹脂；然后用1.5L的80％乙醇以3BV/h的流速洗脫CRA，收集該流份。將洗脫液在60□下真空濃縮至約500ml，然后將濃縮液冷凍干燥。得到CRA粉末，稱重為9.72g，經(jīng)HPLC外標(biāo)法檢測，CRA含量為21.06％，回收率為81.9％.
實施例二.
稱取Banaba葉子300g，用6倍量60％正丙醇3L，回流提取3次，每次用正丙醇3L，各提取80分鐘，合并提取液，將提取液用0.2μ膜真空過濾。取清洗干凈的ADS-5樹脂300g裝柱，將提取液通過該樹脂，流速為3BV/h。首先用1L60％的正丙醇沖洗樹脂；然后用1.5L的80％正丙醇以2BV/h的流速洗脫CRA，收集該流分。將洗脫液在70□下真空濃縮至500ml，然后將濃縮液冷凍干燥。得到的CRA粉末稱重為2.72g，經(jīng)HPLC外標(biāo)法檢測，CRA含量為29.58％，回收率為53.7％.
實施例三.
稱取Banaba葉子200g，用6倍量70％異丙醇4L，回流提取3次，每次用異丙醇4L，各提取80分鐘，合并提取液，將提取液用離心機8000轉(zhuǎn)/分處理。取清洗干凈的HP20樹脂100g裝柱，將離心所得提取液通過該樹脂，流速為3BV/h。首先用600ml 70％異丙醇沖洗樹脂；然后用800ml 90％的異丙醇以2BV/h的流速洗脫CRA，收集該流分。將洗脫液在70□下真空濃縮至300ml，然后將濃縮液冷凍干燥。得到CRA粉末，稱重為0.654g，經(jīng)HPLC外標(biāo)法檢測，CRA含量為51.38％，回收率33.6％。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明公開一種三萜類化合物Colosolic acid的提取、制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)將Banaba葉子浸沒于8-10倍原料重量的C2-C3醇中提取，提取3次，每次2-3小時；(2)將提取液用0.1-0.5μ微濾膜過濾，濾液合并通過大孔吸附樹脂；(3)將吸附飽和的大孔吸附樹脂用梯度的C2-C3醇沖洗，控制流量4-5BV/h，解吸Colosolic acid，解吸液通過HPLC外表法檢測，收集富含Colosolic acid部分；(4)將解吸液經(jīng)80℃真空濃縮至固體含量為20～25％時，冷凍干燥得到Colosolic acid產(chǎn)品，用HPLC外表法檢測，含量在20～60％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三萜類化合物Colosolic acid的提取、制備方法，其特征在于其中所述原料須選用Colosolic acid含量在0.5％以上的植物Banaba葉子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三萜類化合物Colosolic acid的提取、制備方法，其特征在于其中所述大孔吸附樹脂為苯乙烯型大孔非極性或弱極性樹脂大孔樹脂D系列、ADS系列、HP系列或Amberlite XAD。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種三萜類化合物Colosolic acid的提取、制備方法，其特征在于所述親水性的有機溶劑為C2-C3伯醇或仲醇類乙醇或丙醇。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種三萜類化合物Colosolic acid(CRA)的提取、制備方法。CRA具有控制血糖的作用，可用于治療糖尿、減肥等。將Banaba葉子經(jīng)過無毒的低級醇提取，提取液經(jīng)過濾，濾液通過大孔型吸附樹脂，用親水溶劑解吸，收集CRA解吸部位，經(jīng)真空濃縮，冷凍干燥后得到產(chǎn)品，由高效液相色譜檢測CRA產(chǎn)品純度為20％～60％。本發(fā)明方法具有工藝簡單、產(chǎn)物純度高、生產(chǎn)周期短、成本相對低廉的優(yōu)點，符合環(huán)保和安全的要求，宜于規(guī)模型工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07J53/00GK101058596SQ20061002579
公開日2007年10月24日 申請日期2006年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月18日
發(fā)明者范小兵, 殷夢龍, 杭曉敏, 林濤 申請人:上海諾德生物實業(yè)有限公司