專利名稱：一種葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及醫(yī)藥，特別是一種葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽。
背景技術(shù)：
還原型葉酸(FH4)是嘌呤類生物合成和脫氧尿苷酸(dUMP)轉(zhuǎn)化成胸苷酸(dTMP)過(guò)程中必需的一碳單位轉(zhuǎn)運(yùn)體。在這些生化反應(yīng)中，還原型葉酸被氧化，經(jīng)二氫葉酸還原酶(DHFR)再生為活性的還原型葉酸。
甲氨蝶呤(MTX)和類似化合物是公知的強(qiáng)烈地結(jié)合DHFR的藥物，這些藥物能抑制二氫葉酸還原成四氫葉酸，導(dǎo)致dTMP和/或嘌呤類缺陷，DNA合成中斷，進(jìn)而產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這些藥物已被研制成抗癌藥物，而且目前作為臨床藥物占據(jù)了很重要的位置。Pemetrexed(MTA)是新近研究開(kāi)發(fā)的多靶點(diǎn)的抗葉酸藥物，通過(guò)抑制至少3種與葉酸代謝、嘌呤和嘧啶合成有關(guān)的酶包括DHFR胸苷酸合酶(TS)，甘氨酰胺核苷酸甲酰轉(zhuǎn)移酶(GARFT)，對(duì)多種實(shí)體瘤有抗癌作用。
由美國(guó)普林斯頓大學(xué)E.C.Taylor教授研究小組與禮萊(Eli Lily)公司合作開(kāi)發(fā)了多個(gè)抗癌藥物，Lometrexol(DDATHF)它具有蝶啶環(huán)的基本骨架。但其作用機(jī)理與這類結(jié)構(gòu)的藥物不同，對(duì)二氫葉酸還原酶(DHFR)沒(méi)有抑制活性，而主要是通過(guò)在嘌呤生物合成途徑的初始步驟中抑制甘氨酰胺核苷酸甲酰轉(zhuǎn)移酶(GARFT)的機(jī)理完成(醫(yī)藥化學(xué)雜志28，9149(1985))。
MTX主要通過(guò)葉酸拮抗作用抗癌，有較強(qiáng)的毒性，對(duì)實(shí)體瘤作用不大，還存在著腫瘤細(xì)胞對(duì)這種藥的抗藥性，因此不能獲得滿意的治療效果。因此特別期望開(kāi)發(fā)出新的作用機(jī)理對(duì)癌細(xì)胞顯示出選擇性毒性的抗癌藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽，所述的這種葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽要解決現(xiàn)有技術(shù)中抗癌藥物有較強(qiáng)毒性、對(duì)實(shí)體瘤作用有限、腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物產(chǎn)生抗藥性的技術(shù)問(wèn)題。
本發(fā)明的這種葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽是下列通式(I)表示的化合物， 通式(I)其中R＝OH、或NH2、或OCH3。
當(dāng)R＝OH時(shí)，即N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)]-乙基-苯甲?；鶀-L-谷氨酸。
當(dāng)R＝NH2時(shí)，即N-{4-[2(2-氨基-4-羥基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)]-乙基-苯甲酰基}-L-谷氨酸。
當(dāng)R＝OCH3時(shí)，即N-{4-[2-(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)]-乙基-苯甲?；鶀-L-谷氨酸。
進(jìn)一步，R還可以是或Cl或OCH2CH3進(jìn)一步的，所述的鹽為鈉鹽、或者鉀鹽、或者其他適用的金屬離子鹽、或者銨鹽、或者二乙胺鹽、或者乙二胺鹽、或者其他適用的有機(jī)胺鹽。
本發(fā)明還提供了上述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了一種制備上述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽的中間體，所述的中間體是具下列通式(II)表示的化合物， 通式(II)其中R＝OH、或Cl、或NH2、或OCH3、或OCH2CH3；R’為低級(jí)烷氧基、或芐氧基、或谷氨酸酯。
進(jìn)一步的，低級(jí)烷氧基選自甲氧基、或者乙氧基。
進(jìn)一步的，谷氨酸酯選自二甲酯、或者二乙酯。
本發(fā)明還提供了一種制備上述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽的中間體，所述的中間體是通式(III)表示的化合物，
通式(III)其中R＝OH、或Cl、或NH2、或OCH3、或OCH2CH3；R’為低級(jí)烷氧基、或芐氧基、或谷氨酸酯。
進(jìn)一步的，低級(jí)烷氧基選自甲氧基、或者乙氧基。
進(jìn)一步的，谷氨酸酯選自二甲酯、或者二乙酯。
本發(fā)明在合成過(guò)程可以先制得中間體III(R’＝OCH3，OC2H5，等)再與谷氨酸酯反應(yīng)(路線A)，也可以先引入谷氨酸酯，再引入偶氮結(jié)構(gòu)，然后還原關(guān)環(huán)(路線B)。
以R＝OCH3為例，但不僅限于該官能團(tuán)。
合成路線A以丁二烯和硝基甲烷反應(yīng)得5-乙烯基-4，5-二氫-惡唑，再進(jìn)行還原得3-羥基-4-烯-戊胺，所得的胺與2-氨基-4，6-二氯-嘧啶反應(yīng)得2-氨基-6-(3-羥基-4-烯-1-基)-氨基-4-氯-嘧啶，和甲醇鈉作用后氯被甲氧基取代，所得產(chǎn)物與對(duì)碘苯甲酸甲酯進(jìn)行Heck反應(yīng)得4-[5-(2-氨基-4-甲氧基-嘧啶-6-氨基)-3-氧代-戊基]-苯甲酸甲酯，然后和對(duì)氯苯重氮鹽反應(yīng)生成棕紅色固體4-{5-[2-氨基-4-甲氧基-5-(4-氯苯偶氮基)-6-嘧啶]-氨基-3-氧代-戊基}-苯甲酸甲酯，該化合物在醋酸中還原關(guān)環(huán)得關(guān)鍵中間體4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲酸甲酯。該中間體經(jīng)水解，然后和谷氨酸酯反應(yīng)得N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)]-乙基-苯甲?；鶀-L-谷氨酸二乙酯(7)，化合物(7)再進(jìn)行水解得N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)]-乙基-苯甲?；鶀-L-谷氨酸(8)，化合物(8)用氨水處理得N-{4-[2-(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)]-乙基-苯甲酰基}-L-谷氨酸，化合物(7)用三甲基碘化硅處理得N-{4-[2-(2-氨基-4-羥基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)]-乙基-苯甲?；鶀-L-谷氨酸(9)。
合成路線B用N-(4-碘代苯甲酰)-谷氨酸二乙酯與2-氨基-4-甲氧基-6-(3-羥基-4-烯-1-戊氨基)-嘧啶(2)進(jìn)行Heck反應(yīng)得N-{4-[5-(2-氨基-4-甲氧基-嘧啶-6-基)-氨基-3-氧代-戊基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸(10)，化合物(10)與對(duì)氯苯重氮鹽反應(yīng)得N-{4-[5-(2-氨基-4-甲氧基-5-(4-氯苯偶氮基)-嘧啶-6-基)-氨基-3-氧代-戊基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸二乙酯(11)，然后還原關(guān)環(huán)得化合物(7)，與合成路線A所得化合物一致。
雖然大量的不對(duì)稱碳原子存在于本發(fā)明的化合物及其中間體中，但除了谷氨酸的側(cè)鏈中不對(duì)稱碳原子具有S(L)的絕對(duì)構(gòu)型之外，其它不對(duì)稱中心的絕對(duì)構(gòu)型可以是S或R的混和物。在這種情況下，存在非對(duì)映異構(gòu)體，而且需要時(shí)可通過(guò)常規(guī)分離和純化手段對(duì)其進(jìn)行分離。


本發(fā)明和已有技術(shù)相比，其技術(shù)進(jìn)步是顯而易見(jiàn)的。本發(fā)明的葉酸類似物或其鹽可以對(duì)多個(gè)腫瘤細(xì)胞具有強(qiáng)大的抑制生長(zhǎng)活性。
具體實(shí)施例方式方法A實(shí)施例14-氯-2-氨基-6-(3-羥基-4-烯基-1-戊氨基)-嘧啶(1)的合成50mmol 4，6-二氯-2-氨基-嘧啶和5mmol～60mmol 3-羥基-4-烯-1-戊胺溶于200ml乙醇中加入51mmol三乙胺，N2保護(hù)下回流4h。除去溶劑，殘留固體加CH2Cl2溶劑溶解，過(guò)濾除去不溶物，濾液濃縮，殘留物用硅膠柱層析。洗脫劑MeOH/CH2Cl2＝2/98。得產(chǎn)物8.31g，收率73％。
1H NMR(CDCl3)δ1.65～1.85(2H，dm)，3.30-3.63(m，2H)，4.2(1H，dm)，4.97(2H，sb)，5.03(1H，d)，5.27(1H，d)，5.80(1H，s)，5.91(1H，m)。
實(shí)施例22-氨基-4-甲氧基-6-(3-羥基-4-烯基-1-戊氨基)-嘧啶(2)的合成在100ml甲醇中加入6.48g(120mmol)甲醇鈉和5g(22mmol)4-氯-2-氨基-6-(3-羥基-4-烯基-1-戊氨基)-嘧啶，N2保護(hù)下回流48h，減壓除去大部分溶劑，加入100ml飽和NH4Cl水溶液，用CH2Cl2萃取(100mlx3)，有機(jī)層用無(wú)水Na2SO4干燥。濃縮得淡黃色固體3.13g，產(chǎn)率63.6％。
1H NMR(CDCl3)δ1.61-1.80(2H，dm)，3.21-3.62(2H，dm)，3.80(3H，S)，4.19(1H，d)，4.73(2H，S，NH2)，4.88(1H，S，NH)，5.09(1H，d)，5.25(1H，d)，5.14(1H，s)，5.88(1H，m)。
實(shí)施例34-[5-(2-氨基-4-甲氧基-嘧啶-6-氨基)-3-氧代-戊基]-苯甲酸甲酯(3)560mg(2.5mmol)2-氨基-4-甲氧基-6-(3-羥基-4-烯基-1-戊氨基)-嘧啶，720.5mg(2.75mmol)4-碘苯甲酸甲酯，577.5mg(6.87mmol)NaHCO3，28mg(0.125mmol)Pd(AcO)2，885.5mg(2.75mmol)Bt4NBr和0.5g粉碎的4A分子篩，溶于20ml無(wú)水DMF中，N2保護(hù)下室溫?cái)嚢?2h，過(guò)濾，濾液減壓除去溶劑，得棕紅色固體，硅膠柱層析梯度洗脫1.CH2Cl2，2.CH2Cl2/MeOH(98∶2)得略帶淡棕色固體0.77g，收率86％，mp110-113℃，Rf＝0.489(CH2Cl2/MeOH＝20∶1)。
1H NMR(CDCl3)δ2.66(2H，t)，2.74(2H，t)，2.93(2H，t)，3.46(2H，m)，3.77(3H，s)，3.88(3H，s)，4.67(2H，s，NH2)，4.95(1H，s，NH)，5.09(1H，s)，7.21(2H，d)，7.92(2H，d)。
實(shí)施例44-{5-[2-氨基-4-甲氧基-5-(4-氯苯偶氮基)-6-嘧啶]-氨基-3-氧代-戊基}-苯甲酸甲酯(4)1.4g 4-氯苯胺溶于22.5ml 3N鹽酸中，冷卻至0℃，加入0.75g NaNO2的水溶液(15ml)，制得重氮鹽。10mmol(3.58g)4-[5-(2-氨基-4-甲氧基-嘧啶-6-氨基)-3-氧代-戊基]-苯甲酸甲酯(化合物3)溶于45ml冰醋酸和45ml H2O的混和物中，加入18g CH3CO2Na·3H2O，冷卻到0℃，然后滴加先前制得的重氮鹽溶液，加完后反應(yīng)混和物室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，有黃色固體析出。抽濾固體，用大量水洗，干燥得淡黃色固體3.39g，收率68％，mp63～65℃。
1H NMR(CDCl3)δ2.71～2.78(4H，m)，2.95(2H，t)，3.84(2H，q)，3.89(3H，s)，4.02(3H，s)，5.10(2H，b)，7.19(2H，d)，7.39(2H，d)，7.67(2H，d)，7.89(2H，d)，10.79(1H，b)。
實(shí)施例54-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲酸甲酯(5)1.31g(2.7mmol)4-{5-[2-氨基-4-甲氧基-5-(4-氯苯偶氮基)-6-嘧啶]-氨基-3-氧代-戊基}-苯甲酸甲酯(化合物4)溶于200ml AcOH中，加入81mmol(5.26g)Zn粉，N2保護(hù)下回流2h，冷卻，過(guò)濾，濾液減壓除去溶劑，硅膠柱層析，洗脫劑CH2Cl2/MeOH，得淡黃色固體產(chǎn)物0.573g，收率59.4％，Rf＝0.52(CH2Cl2/MeOH＝15∶1)。
1H NMR(CDCl3)δ1.6～2.1(4H，m)，2.6～3.2(4H，m)，3.50(1H，m)，3.58(1H，b)，3.9(6H，s)，4.66(2H，b)，5.28(1H，b)，7.25(2H，d)，7.96(2H，d)。
實(shí)施例64-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲酸(6)1.6mmol(0.57g)化合物(5)加入30ml MeOH，10ml 0.5N NaOH，N2保護(hù)下回流4h，減壓除去大部分溶劑，剩余約5ml，滴加AcOH至pH＝5～6，有淡黃色固體析出，抽濾，水洗，真空干燥得產(chǎn)物0.438g，收率80％。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.4～1.9(4H，m)，2.49～2.99(4H，m)，3.29(1H，m)，3.75(3H，s)，5.75(2H，b)，5.88(1H，b)，7.29(2H，d)，7.82(2H，d)。
實(shí)施例7N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲酰基}-L-谷氨酸二乙酯(7)1mmol(0.343g)化合物(6)，5.4mmol(0.6ml，0.548g)N-甲基嗎啉，1.7mmol(0.3g)2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪溶于30ml DMF，N2保護(hù)下室溫?cái)嚢?h，再加入2.7mmol(0.3ml，0.274g)N-甲基嗎啉和1.75mmol(420mg)L-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽，反應(yīng)混和物攪拌過(guò)夜。減壓除去溶劑，硅膠柱層析(CH2Cl2/MeOH＝50∶1)洗脫，得產(chǎn)物0.26g，收率49％，Rf＝0.44(CH2Cl2/MeOH＝15∶1)。
1H NMR(CDCl3)δ1.22(3H，t)，1.3(3H，t)，1.67～2.43(6H，m)，2.48(2H，m)，2.75～3.2(4H，m)，3.50(1H，m)，4.0(3H，s)，4.10(2H，q)，4.23(2H，q)，4.82(1H，m)，5.18(2H，b)，5.26(1H，b)，6.05(1H，b)，7.04(1H，t)，7.25(2H，d)，7.74(2H，d)。
HRMSm/z(MH+)calcd for C26H37N6O6529.2775，found 529.2792。13C NMR14.03，27.20，30.43，32.25，35.56，37.79，41.97，52.27，54.14，56.45，60.69，61.61，104.43，127.33，128.43，131.49，145.68，153.84，154.80，162.14，166.14，166.94，171.99，173.12。
實(shí)施例8N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲酰基}-L-谷氨酸(8)0.6mmol(315mg)N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸二乙酯(7)溶于10ml甲醇中，加入3.6ml 1N NaOH水溶液，N2保護(hù)下室溫?cái)嚢?h，減壓除去大部分溶劑，滴加AcOH調(diào)pH＝5～6析出固體，抽濾水洗，干燥得產(chǎn)物。
1H NMR(DMSO-d6)δ1.05～2.11(6H，m)，2.35(2H，t)，2.71(2H，t)，3.21～3.51(3H，m)，3.92(3H，s)，4.41(1H，m)，7.71(1H，s)，7.29(1H，d)，7.33(2H，d)，7.44(1H，b)，7.82(2H，d)，8.52(2H，d)。
HRMSm/z(MH+)calcd for C22H29N6O6473.2149，found 473.2112。
13C NMR26.391，30.930，31.641，32.673，35.496，52.461，55.511，57.823，114.522，128.27，128.923，132.102，145.877，153.250，154.623，165.102，167.492，173.964，174.652。
實(shí)施例9N-{4-[2-(2-氨基-4-羥基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸(9)0.37mmol(196mg)N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸二乙酯(7)溶于20ml無(wú)水CHCl3，加入2.97mmol(CH3)3SiI(594mg，0.424ml)，N2保護(hù)下40～50℃加熱反應(yīng)20h，減壓除去溶劑，用乙醚洗滌得淡黃色固體，所得固體加少量水(2ml)，加入NaOH(1N，2～3ml)，室溫?cái)嚢瑁瑸V去不溶物，濾液滴加AcOH調(diào)pH到5～6，有固體析出，抽濾，水洗，真空干燥。
1H NMR δ1.6～2.11(6H，m)，2.33(2H，t)，2.43(1H，m)，2.67(2H，t)，3.24(1H，m)，3.39(1H，m)，4.40(1H，m)，7.0(1H，b)，7.21(2H，d)，7.79(2H，d)，8.51(2H，d)，8.65(1H，b)，8.96(1H，s)，9.24(1H，s)，10.65(1H，s)。
13C NMR δ26.28，28.19，30.76，32.22，35.01，36.41，48.39，52.27，65.76，128.07，128.67，132.13，145.36，156.64，167.12，169.23，172.77，173.73，174.32，175.65。
方法B實(shí)施例10N-{4-[5-(2-氨基-4-甲氧基-嘧啶-6-基)-氨基-3-氧代-戊基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸二乙酯(10)10mmol(4.31g)N-(4-碘代苯甲酰)-谷氨酸二乙酯，2.75mmol(2.32g)NaHCO3，0.5mmol(112mg)醋酸鈀，11mmol(3.54g)四丁基溴化銨，2g 4A分子篩和9mmol(2.02g)2-氨基-4-甲氧基-6-(3-羥基-4-烯基-1-戊氨基)-密啶(2)溶于80ml DMF中，N2保護(hù)下攪拌72h，過(guò)濾，濾液減壓除去溶劑，殘留物硅膠柱層析(CH2Cl2/MeOH＝15∶1)得微紅色膠狀物3.211g，產(chǎn)率67％。
1H NMR(CDCl3)δ1.23(3H，t，J＝7HZ)，1.32(3H，t，J＝7HZ)，2.15～2.55(4H，m)，2.73(2H，t，J＝7HZ)，2.81(2H，t，J＝7HZ)，2.96(2H，t，J＝7HZ)，3.54(2H，m)，3.90(3H，s)，4.12(2H，m)，4.24(2H，m)，4.78(1H，m)，4.85(2H，s)，5.07(1H，s)，5.15(1H，t)，7.23(2H，d，J＝8HZ)，7.24(1H，d)，7.72(2H，d，J＝8HZ)。
元素分析(C26H35N5O7)計(jì)算值C58.97％，H6.16％，N13.22％；實(shí)測(cè)值C58.71％，H6.53％，N13.17％。
實(shí)施例11N-{4-[5-(2-氨基-4-甲氧基-5-(4-氯苯偶氮基)-嘧啶-6-基)-氨基-3-氧代-戊基]-苯甲酰基}-L-谷氨酸二乙酯(11)4mmol(510mg)對(duì)氯苯胺溶于8ml 3N鹽酸中，冷卻到0℃加入4mmol(276mg)NaNO2，得重氮鹽，將所得的重氮鹽在0℃滴加到3.75mmol(1.98g)N-{4-[5-(2-氨基-4-甲氧基-嘧啶-6-基)-氨基-3-氧代-戊基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸二乙酯(10)的冰醋酸加水(20ml+18ml)及7.2gCH3CO2Na·3H2O的混和溶劑中，然后將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，抽濾，所得固體產(chǎn)物，用水洗滌，然后真空干燥。得(11)2.21g，收率88％。
1H NMR(CDCl3)δ1.24(3H，t，J＝7HZ)，1.32(3H，t，J＝7HZ)，2.15～2.45(4H，m)，2.79(4H，m)，2.96(2H，t，J＝7.2HZ)，3.95(2H，m)，4.10(3H，m)，4.12(2H，m)，4.24(2H，m)，4.77(1H，m)，5.11(2H，s)，6.96(1H，d)，7.18(2H，d，J＝7.4HZ)，7.44(2H，d，J＝8HZ)，7.64(2H，d，J＝8HZ)，7.79(2H，d，J＝7.4HZ)。元素分析(C32H38N7O7Cl·0.25H2O)計(jì)算值C57.14％，H5.77％，N14.58％；實(shí)測(cè)值C56.94％，H5.74％，N14.33％。
實(shí)施例12N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸二乙酯(7)的制備方法二1.5mmol(1.0g)化合物(11)，30mmol(1.96g)Zn粉加入到乙酸(5ml)，水(20ml)和甲醇(20ml)的混和溶劑中，N2保護(hù)下回流6h。抽濾，濾液減壓除去溶劑，殘留物用硅膠柱層析得(7)0.43g，54％。
1H NMR顯示與前一種方法所得產(chǎn)物一致。
實(shí)施例13N-{4-[2-(2，4-二氨基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸(12)4mmol N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸，加入5ml濃氨水，室溫?cái)嚢?0h，減壓除去大部分氨，HPLC分離。
實(shí)施例14N-{4-[2-(2-氨基-4-羥基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸二鈉鹽(13)化合物9(23.0mg，50.2μmol)加入到一燒瓶中，再加入蒸餾水(1.5ml)，1N NaOH溶液(0.1ml)，室溫下攪拌反應(yīng)0.5小時(shí)，減壓下蒸去溶劑，用水-乙醇重結(jié)晶，得到固體(14.2mg，56％)。
ESI-MSm/z 228.1(Neg)實(shí)施例15N-{4-[2-(2-氨基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氫-9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮卓-6-基)-乙基]-苯甲?；鶀-L-谷氨酸二二乙胺鹽(14)化合物8(33.0mg，70μmol)加入到一燒瓶中，再加入蒸餾水(2ml)，二乙胺鹽(11mg，140μl)，室溫下攪拌反應(yīng)0.5小時(shí)，減壓下蒸去溶劑，用水-甲醇重結(jié)晶，得到固體(23.8mg，55％)。
ESI-MSm/z 235.2(Neg)。
實(shí)施例16化合物8，9的抗腫瘤生物活性測(cè)試選用了四氮唑鹽(microculturetetrozolium，MTT)還原法，分別對(duì)人白血病細(xì)胞株(CCRF-CEM)，人肺癌細(xì)胞株(A549)和小鼠白血病細(xì)胞株(L1210)三種細(xì)胞株的抑制活性進(jìn)行了試驗(yàn)。
化合物8，9的抗腫瘤生物活性

從藥物濃度與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率關(guān)系以及根據(jù)正規(guī)Bliss法計(jì)算出的EC50，可以推測(cè)出如下結(jié)論1.化合物8對(duì)CCRF-CEM和A549腫瘤細(xì)胞顯示抑制作用。
2.化合物9對(duì)CCRF-CEM、L1210和A549腫瘤細(xì)胞均有抑制作用。
化合物8、9顯示對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞有抑制活性，有應(yīng)用于臨床治療的前景。
權(quán)利要求
1.一種葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽，其特征在于所述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽是下列通式(I)所表示的化合物， 通式(I)在通式(I)中，R＝OH、或Cl、或NH2、或OCH3、或OCH2CH3。
2.如權(quán)利要求1所述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽，其特征在于所述的鹽是金屬離子鹽、或者有機(jī)胺鹽。
3.如權(quán)利要求1所述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽，其特征在于所述的鹽是鈉鹽、或者鉀鹽。
4.如權(quán)利要求1所述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽，其特征在于所述的鹽是銨鹽、或者二乙胺鹽、或者乙二胺鹽。
5.如權(quán)利要求1所述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
6.一種制備如權(quán)利要求1所述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽的中間體，其特征在于所述的中間體是下列通式(II)表示的化合物， 通式(II)
7.如權(quán)利要求6所述的中間體，其特征在于在所述的通式(II)中，R＝OH、或Cl、或NH2、或OCH3、或OCH2CH3，R’為低級(jí)烷氧基、或芐氧基、或谷氨酸酯。
8.如權(quán)利要求7所述的中間體，其特征在于所述的谷氨酸酯是二甲酯、或者二乙酯。
9.一種制備如權(quán)利要求1所述的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽的中間體，其特征在于所述的中間體是下列通式(III)表示的化合物， 通式(III)其中R＝OH、或Cl、或NH2、或OCH3、或OCH2CH3；R’為低級(jí)烷氧基、或芐氧基、或谷氨酸酯。
10.如權(quán)利要求9所述的中間體，其特征在于所述的低級(jí)烷氧基選自甲氧基、或者乙氧基，所述的谷氨酸酯選自二甲酯、或者二乙酯。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種下列通式(I)表示的葉酸類似物及用于醫(yī)療的葉酸類似物的鹽，其中R＝OH、或Cl、或NH
文檔編號(hào)C07D243/00GK101092417SQ20061002784
公開(kāi)日2007年12月26日 申請(qǐng)日期2006年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月19日
發(fā)明者毛振民, 劉增路, 朱高軍 申請(qǐng)人:上海金色醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司, 上海交通大學(xué)