專(zhuān)利名稱：一種鳶尾甙元的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物領(lǐng)域，涉及鳶尾甙元的制備方法。
背景技術(shù)：
鳶尾甙元，全稱5，7，4′-三羥基-6-甲氧基異黃酮，又名為鳶尾黃素，英文名為T(mén)ectorigenin(本專(zhuān)利簡(jiǎn)稱為T(mén)ec)，其結(jié)構(gòu)式如下，是一類(lèi)多羥基的異黃酮類(lèi)化合物，其廣泛分布于鳶尾科植物中，具有抗氧化及雌激素樣生物活性。
鳶尾甙元(Tectorigenin，5，7，4′-三羥基-6-甲氧基異黃酮)尚未見(jiàn)大量制備鳶尾甙元的方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種鳶尾甙元的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種鳶尾甙元的制備方法，它包括下列步驟步驟1、將干燥的鳶尾根莖粉碎，加入3-15倍質(zhì)量的溶劑回流提取，減壓濃縮提取液得膏狀物，步驟2、在步驟1所得的膏狀物中加入碳酸氫鈉溶液、碳酸鈉溶液或氫氧化鈉溶液，使其pH在7.5-14之間，充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾得澄清的堿性溶液，步驟3、用等體積的氯仿萃取步驟2所得的堿性溶液，棄去氯仿溶液，再用乙酸乙酯萃取堿性溶液，分出乙酸乙酯溶液，步驟4、將乙酸乙酯溶液濃縮得黃色物質(zhì)，即為鳶尾甙元粗品。
上述的制備方法，步驟1所述的溶劑是水、20-100％的甲醇、20-100％的乙醇、氯仿、乙酸乙酯或乙醚。
上述的制備方法，步驟2所述的碳酸氫鈉溶液、碳酸鈉溶液或氫氧化鈉溶液的濃度是質(zhì)量百分濃度2-5％。
上述的制備方法，步驟2后可以增加如下步驟，其它不變步驟2.1.在步驟2所得的堿性溶液中加入酸使其呈酸性，有固體析出，過(guò)濾出固體，為總異黃酮，步驟2.2將步驟2.1所得的固體，用碳酸氫鈉溶液充分溶解，(下接步驟3)，上述的制備方法，步驟2.1所述的加入酸使呈酸性，是加入濃鹽酸或硫酸使其pH為1.5-5。
上述的制備方法，步驟2.2所述的碳酸氫鈉溶液是2-5％的碳酸氫鈉溶液。
上述的制備方法，步驟2.1后可以增加如下步驟，其它不變步驟2.1.1.將步驟2.1所得的固體，加乙酸乙酯充分溶解，濾去不溶物后，用等體積的碳酸氫鈉溶液萃取乙酸乙酯溶液，棄去碳酸氫鈉溶液，步驟2.1.2.再用等體積的碳酸鈉或氫氧化鈉溶液萃取乙酸乙酯溶液，分出碳酸鈉或氫氧化鈉溶液，加入酸使其呈酸性，有固體析出，過(guò)濾出固體，為小極性異黃酮，(下節(jié)步驟2.2)。
上述的制備方法，步驟2.2所述的碳酸氫鈉溶液是2-5％的碳酸氫鈉溶液。
上述的制備方法，所述的鳶尾甙元粗品可用甲醇或乙醇重結(jié)晶，即得高純度的鳶尾甙元。
本發(fā)明的方法步驟簡(jiǎn)單，得率高，鳶尾甙元粗品中鳶尾甙元的含量達(dá)到78％，用甲醇或乙醇重結(jié)晶后鳶尾甙元的含量達(dá)到90％以上。
具體實(shí)施例方式
通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施例的任何限制。
實(shí)施例1將干燥的鳶尾根莖粉碎取100克，加入3倍量(300ml)的20％的甲醇溶液浸泡半小時(shí)后86℃水浴加熱回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液。重復(fù)3次，合并3次所得提取液，濃縮濾液去除溶劑得膏狀物。向膏狀物中加入400ml 5％的碳酸氫鈉溶液使其pH在8.5，充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾得澄清的濾液400ml。先用400ml氯仿萃取該堿性溶液3次，再用400ml乙酸乙酯萃取該堿性溶液3次，合并乙酸乙酯液濃縮干燥得黃色物質(zhì)1.8克。用16ml的甲醇溶解該黃色物質(zhì)，重結(jié)晶即得較高純度的鳶尾甙元1.4克。多次重結(jié)晶后得淡黃色針晶，熔點(diǎn)215-216℃；紫外UV λmax(nm)265、322(甲醇中)；1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ13.06(1H，s，C5-OH)，10.76(1H，s，C7-OH)，9.58(1H，s，C4’-OH)，8.33(1H，s，C2-H)，7.37(2H，d，J＝8.1Hz，C2’-H，C6’-H)，6.82(2H，d，J＝8.1Hz，C3’-H，C5’-H)，6.5(1H，s，C8-H)，3.75(3H，s，C6-OCH3)。
實(shí)施例2將干燥的鳶尾根莖粉碎取100克，加入15倍量(1500ml)的90％的甲醇溶液浸泡半小時(shí)后86℃水浴加熱回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液。濃縮濾液去除溶劑得膏狀物。向膏狀物中加入400ml 2％的碳酸氫鈉溶液使其pH在7.8，充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾得澄清的濾液400ml。先用400ml氯仿萃取該堿性溶液4次，再用400ml乙酸乙酯萃取該堿性溶液4次，合并乙酸乙酯液濃縮干燥得黃色物質(zhì)1.9克。用38ml的甲醇溶解該黃色物質(zhì)，重結(jié)晶即得較高純度的鳶尾甙元1.2克，與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。鳶尾甙元含量在80％以上。鳶尾甙元的含量檢測(cè)方法(下同)高效液相色譜(HPLC)定量方法為面積歸一法檢測(cè)波長(zhǎng)為266nmHPLC條件Apollo C18反相柱(4.6×250mm)流速0.5ml/min進(jìn)樣量5μl流動(dòng)相為甲醇∶水∶醋酸＝60∶40∶1。
(鳶尾甙元含量在80％以上)。與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。
實(shí)施例3將干燥的鳶尾根莖粉碎取100克，加入3倍量(300ml)的水，浸泡后100℃水浴加熱回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣，將濾渣再用3倍量(300ml)的水，100℃水浴加熱回流提取6小時(shí)，合并兩次的濾液并濃縮得膏狀物。向膏狀物中加入400ml2％碳酸鈉、溶液使其pH在10.5，充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾得澄清的濾液。在該濾液中加入濃鹽酸使濾液呈酸性(pH2.5)即有物質(zhì)析出，過(guò)濾得析出物即為總異黃酮(干重為6.7g)。用400ml2％的碳酸氫鈉溶液充分溶解上述總異黃酮析出物，先用等體積(400ml)的氯仿萃取該碳酸氫鈉溶液4次，再用等體積(400ml)的乙酸乙酯萃取該碳酸氫鈉溶液2次，合并乙酸乙酯液回收乙酸乙酯即得黃色粉末狀物質(zhì)(干重1.3g，鳶尾黃素含量在78％左右)。
用甲醇20ml加熱溶解上述所得到的黃色粉末狀物質(zhì)，趁熱過(guò)濾，濾液重結(jié)晶即得高純度的鳶尾甙元(干重1.1g，鳶尾甙元含量在86％以上)。與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。
實(shí)施例4將干燥的鳶尾根莖粉碎取100克，加入15倍量(1500ml)的甲醇，浸泡后86℃水浴加熱回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣，濃縮濾液去除溶劑得膏狀物。向膏狀物中加入600ml4％碳酸鈉、溶液使其pH在11，充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾得澄清的濾液。在該濾液中加入濃硫酸使濾液呈酸性(pH1.5)即有物質(zhì)析出，過(guò)濾得析出物即為總異黃酮(干重為8.3g)。
用600ml2％的碳酸氫鈉溶液充分溶解上述總異黃酮析出物，先用等體積(600ml)的氯仿萃取該碳酸氫鈉溶液3次，再用等體積(600ml)的乙酸乙酯萃取該碳酸氫鈉溶液3次，合并乙酸乙酯液回收乙酸乙酯即得黃色粉末狀物質(zhì)(干重1.5g，鳶尾黃素含量在76％左右)。
用乙醇15ml加熱溶解上述所得到的黃色粉末狀物質(zhì)，趁熱過(guò)濾，濾液重結(jié)晶即得高純度的鳶尾甙元(干重1.2g，鳶尾甙元含量在86％以上)。與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。
實(shí)施例5將干燥的鳶尾根莖粉碎取100克，加入15倍量(1500ml)的乙醇，浸泡后84℃水浴加熱回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣，濃縮濾液去除溶劑得膏狀物。向膏狀物中加入500ml4％碳酸氫鈉、溶液使其pH在8.7，充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾得澄清的濾液。在該濾液中加入濃鹽酸使濾液呈酸性(pH2.0)即有物質(zhì)析出，過(guò)濾得析出物即為總異黃酮(干重為8.0g)。
用500ml 5％的碳酸氫鈉溶液充分溶解上述總異黃酮析出物，先用等體積(500ml)的氯仿萃取該碳酸氫鈉溶液3次，再用等體積(500ml)的乙酸乙酯萃取該碳酸氫鈉溶液3次，合并乙酸乙酯液回收乙酸乙酯即得黃色粉末狀物質(zhì)(干重1.4g，鳶尾黃素含量在75％)。
用乙醇20ml加熱溶解上述所得到的黃色粉末狀物質(zhì)，趁熱過(guò)濾，濾液重結(jié)晶即得高純度的鳶尾甙元(干重1.0g，鳶尾甙元含量在88％以上)。與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。
實(shí)施例6將干燥的鳶尾根莖粉碎取100克，加入10倍量(1000ml)的氯仿，浸泡后76℃水浴加熱回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣，濃縮濾液去除溶劑得膏狀物。向膏狀物中加入500ml 4％碳酸氫鈉、溶液使其pH在8.7，充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾得澄清的濾液。在該濾液中加入濃鹽酸使濾液呈酸性(pH2.0)即有物質(zhì)析出，過(guò)濾得析出物即為總異黃酮(干重為6.4g)。
用500ml 5％的碳酸氫鈉溶液充分溶解上述總異黃酮析出物，先用等體積(500ml)的氯仿萃取該碳酸氫鈉溶液3次，再用等體積(500ml)的乙酸乙酯萃取該碳酸氫鈉溶液3次，合并乙酸乙酯液回收乙酸乙酯即得黃色粉末狀物質(zhì)(干重0.8g，鳶尾黃素含量在72％)。
用乙醇20ml加熱溶解上述所得到的黃色粉末狀物質(zhì)，趁熱過(guò)濾，濾液重結(jié)晶即得高純度的鳶尾甙元(干重0.6g，鳶尾甙元含量在86％以上)。與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。
實(shí)施例7取100克干燥的鳶尾根莖粉末，先用1.5倍(150ml)90％的乙醇溶脹半小時(shí)，再加入8倍(800ml)90％的乙醇84℃水浴回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣；將濾渣再用6倍(600ml)90％的乙醇回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣；將濾渣再用6倍(600ml)90％的乙醇回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣；合并3次的提取液減壓濃縮后得醇提膏狀物。
向醇提膏狀物中加入600ml 5％的碳酸氫鈉溶液，于80℃水浴中充分?jǐn)嚢璋胄r(shí)后過(guò)濾得澄清的濾液。在該濾液中加入濃鹽酸使濾液的pH值為2-3即有物質(zhì)析出，過(guò)濾得析出物(總異黃酮，干重為8.7g)。
用800ml乙酸乙酯于60℃水浴條件下充分溶解上述所得總異黃酮，濾去不溶物即得澄清的乙酸乙酯液。先用等體積(800ml)的5％的碳酸氫鈉溶液萃取乙酸乙酯液兩次，棄去碳酸氫鈉溶液，再用等體積(800ml)的2％的碳酸鈉溶液萃取乙酸乙酯液一次得碳酸鈉的萃取液。在碳酸鈉萃取液中加入濃鹽酸使溶液pH值為2-3即有物質(zhì)析出(低極性異黃酮，干重3.1g)。
用600ml 1％的碳酸氫鈉溶液于80℃水浴中充分溶解上述所得到的低極性異黃酮，先用等體積(600ml)的氯仿萃取該碳酸氫鈉溶液兩次，再用等體積(600ml)的乙酸乙酯萃取該碳酸氫鈉溶液一次，回收乙酸乙酯液濃即得黃色粉末狀物質(zhì)(干重1.2g，鳶尾甙元含量在78％左右)。
用甲醇10ml加熱溶解上述所得到的黃色粉末狀物質(zhì)，趁熱過(guò)濾，濾液重結(jié)晶即得高純度的鳶尾甙元(干重1.0g，鳶尾甙元含量在90％以上)。與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。
實(shí)施例8取100克干燥的鳶尾根莖粉末，先用1.5倍(150ml)20％的乙醇溶脹半小時(shí)，再加入15倍(1500ml)20％的乙醇84℃水浴回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣；濃縮濾液得醇提膏狀物。
向醇提膏狀物加入600ml 2％碳酸氫鈉溶液，于80℃水浴中充分?jǐn)嚢璋胄r(shí)后過(guò)濾得澄清的濾液。在該濾液中加入濃鹽酸使濾液的pH值為2-3即有物質(zhì)析出，過(guò)濾得析出物(總異黃酮，干重為7.8g)。
用500ml乙酸乙酯于60℃水浴條件下充分溶解上述所得總異黃酮，濾去不溶物即得澄清的乙酸乙酯液。先用等體積(500ml)的5％的碳酸氫鈉溶液萃取乙酸乙酯液兩次，棄去碳酸氫鈉溶液，再用等體積(500ml)的2％的碳酸鈉溶液萃取乙酸乙酯液一次得碳酸鈉的萃取液。在碳酸鈉萃取液中加入濃鹽酸使溶液pH值為2-3即有物質(zhì)析出(低極性異黃酮，干重2.2g)。
用400ml 1％的碳酸氫鈉溶液于80℃水浴中充分溶解上述所得到的低極性異黃酮，先用等體積(400ml)的氯仿萃取該碳酸氫鈉溶液3次，再用等體積(400ml)的乙酸乙酯萃取該碳酸氫鈉溶液3次，回收乙酸乙酯即得黃色粉末狀物質(zhì)(干重1.2g，鳶尾甙元含量在80％左右)。
用甲醇10ml加熱溶解上述所得到的黃色粉末狀物質(zhì)，趁熱過(guò)濾，濾液重結(jié)晶即得高純度的鳶尾甙元(干重1.0g，鳶尾甙元含量在90％以上)。與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。
實(shí)施例9取100克干燥的鳶尾根莖粉末，先用1.5倍(150ml)的乙酸乙酯溶脹半小時(shí)，再加入15倍(1500ml)乙酸乙酯80℃水浴回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣；濃縮濾液得醇提膏狀物。
向醇提膏狀物加入800ml 2％碳酸氫鈉溶液，于80℃水浴中充分?jǐn)嚢璋胄r(shí)后過(guò)濾得澄清的濾液。在該濾液中加入濃鹽酸使濾液的pH值為2-3即有物質(zhì)析出，過(guò)濾得析出物(總異黃酮，干重為7.9g)。
用500ml乙酸乙酯于60℃水浴條件下充分溶解上述所得總異黃酮，濾去不溶物即得澄清的乙酸乙酯液。先用等體積(500ml)的5％的碳酸氫鈉溶液萃取乙酸乙酯液兩次，棄去碳酸氫鈉溶液，再用等體積(500ml)的2％的碳酸鈉溶液萃取乙酸乙酯液一次得碳酸鈉的萃取液。在碳酸鈉萃取液中加入濃鹽酸使溶液pH值為2-3即有物質(zhì)析出(低極性異黃酮，干重2.2g)。
用500ml 1％的碳酸氫鈉溶液于80℃水浴中充分溶解上述所得到的低極性異黃酮，先用等體積(500ml)的氯仿萃取該碳酸氫鈉溶液3次，再用等體積(500ml)的乙酸乙酯萃取該碳酸氫鈉溶液3次，回收乙酸乙酯即得黃色粉末狀物質(zhì)(干重1.3g，鳶尾甙元含量在80％左右)。
用乙醇10ml加熱溶解上述所得到的黃色粉末狀物質(zhì)，趁熱過(guò)濾，濾液重結(jié)晶即得高純度的鳶尾甙元(干重1.1g，鳶尾甙元含量在90％以上)。與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。
實(shí)施例10取100克干燥的鳶尾根莖粉末，先用1.5倍(150ml)的乙酸乙酯溶脹半小時(shí)，再加入15倍(1500ml)乙醚36℃水浴回流提取6小時(shí)，6小時(shí)后過(guò)濾得濾液和濾渣；濃縮濾液得醇提膏狀物。
向醇提膏狀物加入400ml 2％碳酸氫鈉溶液，于80℃水浴中充分?jǐn)嚢璋胄r(shí)后過(guò)濾得澄清的濾液。在該濾液中加入濃鹽酸使濾液的pH值為2-3即有物質(zhì)析出，過(guò)濾得析出物(總異黃酮，干重為3.9g)。
用200ml乙酸乙酯于60℃水浴條件下充分溶解上述所得總異黃酮，濾去不溶物即得澄清的乙酸乙酯液。先用等體積(200ml)的5％的碳酸氫鈉溶液萃取乙酸乙酯液兩次，棄去碳酸氫鈉溶液，再用等體積(200ml)的2％的碳酸鈉溶液萃取乙酸乙酯液一次得碳酸鈉的萃取液。在碳酸鈉萃取液中加入濃鹽酸使溶液pH值為2-3即有物質(zhì)析出(低極性異黃酮，干重1.2g)。
用200ml 1％的碳酸氫鈉溶液于80℃水浴中充分溶解上述所得到的低極性異黃酮，先用等體積(200ml)的氯仿萃取該碳酸氫鈉溶液3次，再用等體積(200ml)的乙酸乙酯萃取該碳酸氫鈉溶液3次，回收乙酸乙酯即得黃色粉末狀物質(zhì)(干重0.6g，鳶尾黃素含量在80％左右)。
用乙醇6ml加熱溶解上述所得到的黃色粉末狀物質(zhì)，趁熱過(guò)濾，濾液重結(jié)晶即得高純度的鳶尾甙元(干重0.5g，鳶尾甙元含量在90％以上)。與實(shí)施例1的鳶尾甙元為同一物質(zhì)。
權(quán)利要求
1.一種鳶尾甙元的制備方法，其特征是它包括下列步驟步驟1、將干燥的鳶尾根莖粉碎，加入3-15倍質(zhì)量的溶劑回流提取，減壓濃縮提取液得膏狀物，步驟2、在步驟1所得的膏狀物中加入碳酸氫鈉溶液、碳酸鈉溶液或氫氧化鈉溶液，使其pH在7.5-14之間，充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾得澄清的堿性溶液，步驟3、用等體積的氯仿萃取步驟2所得的堿性溶液，棄去氯仿溶液，再用乙酸乙酯萃取堿性溶液，分出乙酸乙酯溶液，步驟4、將乙酸乙酯溶液濃縮得黃色物質(zhì)，即為鳶尾甙元粗品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是步驟1所述的溶劑是水、20-100％的甲醇、20-100％的乙醇、氯仿、乙酸乙酯或乙醚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是步驟2所述的碳酸氫鈉溶液、碳酸鈉溶液或氫氧化鈉溶液的濃度是質(zhì)量百分濃度2-5％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征是步驟2后可以增加如下步驟，其它不變步驟2.1.在步驟2所得的堿性溶液中加入酸使其呈酸性，有固體析出，過(guò)濾出固體，為總異黃酮，步驟2.2將步驟2.1所得的固體，用碳酸氫鈉溶液充分溶解，(下接步驟3)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征是步驟2.1所述的加入酸使呈酸性，是加入濃鹽酸或硫酸使其pH為1.5-5。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征是步驟2.2所述的碳酸氫鈉溶液是2-5％的碳酸氫鈉溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，步驟2.1后可以增加如下步驟，其它不變步驟2.1.1.將步驟2.1所得的固體，加乙酸乙酯充分溶解，濾去不溶物后，用等體積的碳酸氫鈉溶液萃取乙酸乙酯溶液，棄去碳酸氫鈉溶液，步驟2.1.2.再用等體積的碳酸鈉或氫氧化鈉溶液萃取乙酸乙酯溶液，分出碳酸鈉或氫氧化鈉溶液，加入酸使其呈酸性，有固體析出，過(guò)濾出固體，為小極性異黃酮，(下接步驟2.2)。
8.根據(jù)權(quán)利要求上述的制備方法，其特征是步驟2.2所述的碳酸氫鈉溶液改用1％的碳酸氫鈉溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、4或7所述的制備方法，所述的鳶尾甙元粗品可用甲醇或乙醇重結(jié)晶，即得高純度的鳶尾甙元。
全文摘要
一種鳶尾甙元的制備方法，它是將干燥的鳶尾根莖粉碎，加入3－15倍質(zhì)量的溶劑回流提取，減壓濃縮提取液得膏狀物，在膏狀物中加入碳酸氫鈉溶液、碳酸鈉溶液或氫氧化鈉溶液，使其pH在7.5－14之間，充分?jǐn)嚢韬筮^(guò)濾得澄清的堿性溶液，用等體積的氯仿萃取所得的堿性溶液，棄去氯仿溶液，再用乙酸乙酯萃取堿性溶液，分出乙酸乙酯溶液，乙酸乙酯溶液濃縮得黃色物質(zhì)，即為鳶尾甙元粗品。鳶尾甙元粗品用甲醇或乙醇重結(jié)晶得高純度鳶尾甙元。本發(fā)明的方法步驟簡(jiǎn)單，得率高，鳶尾甙元粗品中鳶尾甙元的含量達(dá)到78％，乙醇重結(jié)晶后鳶尾甙元的含量達(dá)到90％以上。
文檔編號(hào)C07D311/36GK1844115SQ20061004033
公開(kāi)日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2006年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月16日
發(fā)明者譚仁祥, 吳俊華, 朱海亮 申請(qǐng)人:南京大學(xué)